Determinarea triptofanului din proteine si furaje

Cuprins
Introducere Structura fizico-chimica Determinarea triptofanului prin metoda HPLC Aparatura Prepararea probelor Principiul metodei Calcule si cromatografie Concluzii Bibliografia

Introducere
Determinarea de aminoacizi este importanta n diferite domenii de cercetare, n special n industria alimentar Se adaug, uneori, la produsele alimentare, ca fortifiant alimentar i la retete farmaceutice, n scopul de a corecta deficienele posibile dietetice. O metod cromatografic a fost elaborata pentru a determina coninutul de triptofan din proteine i furaje. Metoda implic separarea cantitativ de triptofan, prin cromatografia schimbului de ioni, urmata de detectie cu fluorescenta.

STRUCTURA FIZICO CHIMICA

Aminoacizii reprezint unitile structurale nehidrolizabile ale poliprotidelor. Triptofanul se afla in proteinele alimentare, de origine animala. Necesitatile zilnice ale unui adult sunt de ordinul a 0,25 grame.

 L (-) Triptofanul (acidul -amino-indolilpropionic, -indolilalanina) intr n compoziia multor proteide naturale. n stare liber se gsete n organele tinere ale plantelor, n fructe, n glutenul de gru, n soia, semine de dovleac, alge (8,8%). Triptofanul este unul dintre aminoacizii eseniali, lipsa sa din organism conduce la grave tulburri

DETERMINAREA TRIPTOFANULUI PRIN METODA HPLC 1. REACTIVI: lizozima ( albuul de ou) soluie standard de L-triptofan i un metil-DLtriptofan, ambele uscate la vacuum cu P2O5 inainte de cantarire, rezultand: 51.06 mg triptofan 54.58 mg de -metil triptofan s-au dizolvat n 50 ml de 0,05 M de NaOH un standard intern a fost pregtit prin dizolvarea 54.58 mg metil-triptofan n 50 ml de 0,05 M NaOH.

APARATURA
Echipament HPLC cu un detector spectrofluorimetric Coloan de lichid cromatografie, 125 mm x 4 mm, C18, n ambalaje de 3 m sau echivalent pH-metru Balon de polipropilen, capacitate 125 ml, cu gt larg i dop cu urub Membran filtrant, 0,45 m Etuv cu vid 110(+2) C,1,4(+ 0,1) bar. Agitator mecanic sau agitator magnetic

Prepararea probelor
Proba trebuie s treac printr-o sit de 0,5 mm. Probele cu umiditate ridicat trebuie s fie uscate n aer, la o temperatur ce nu depete 50 C, sau uscate cu ghea, nainte de mrunire. Probele cu coninut ridicat de grsimi trebuie extrase cu eter de petrol nainte de mrunire.

PRINCIPIUL METODEI
Utilizarea cromatografiei ionice a aprut datorit necesitilor de a analiza amestecurile de anioni, cationi sau compui polari - lucru dificil sau imposibil de realizat eficient prin celelalte variante ale cromatografiei de lichide. Aceast variant a cromatografiei de lichide de nalt presiune se bazeaz pe utilizarea coloanelor cu schimbtori de ioni respectiv a materialelor rezistente la agresivitatea acizilor, bazelor sau srurilor - substane a cror soluii apoase care servesc drept elueni.

Se poate observa c din rezervoarele coninnd unul sau mai muli solveni pompa (sau pompele), alimenteaz coloana cu eluent. Efluentul coloanei intr ntr-un detector de unde componentul, dac este separat complet, poate fi colectat i izolat, cu ajutorul unui colector de fraciuni

n esen, un cromatograf analitic HPLC are structura din fig. 2 unde nu s-a mai prezentat colectorul de fraciuni, interesant doar din punct de vedere preparativ

Calcule si cromatografie
Triptofanul i metil-triptofanul a fost separat prin cromatografie schimbului de ioni. Alicote hidrolizate de sondaj sau amestec de triptofan standard de metil i triptofan au fost injectate pe coloan i eluat, tampon cu citrat de sodiu cu pH 9.3, la un debit de 0,5 ml/min i temperatura coloanei de 65C. In urma analizei a rezultat cromatograma triptofanului.

Concluzii
n urma determinarii s-a observat ca triptofanul a fost prezent in cantitati relative, si metoda prezentata este o aplicatie a cromatografiei cu schimb de ioni care poate determinare triptofanul ntr-o gam larg de produse alimentare i proteine alimentare, fr nici o interferena.

Bibliografia
www.sciencedirect.com Chimie analitica si instrumentala Horea Iustin Nascu, Lorentz Jantschi, Academic Pres & AcademicDirect, 2006