UNIVERSITATEA DIN BACU FACULTATEA DE INGINERIE SPECIALIZAREA: INGINERIE BIOCHIMIC

PROIECT LA STRATEGII N SINTEZ I BIOSINTEZ

Coordonator: Prof. univ. dr. chim. Fnaru Adriana-Luminia

Student:

Ptracu

Cristina

Bacu 2013 UNIVERSITATEA DIN BACU FACULTATEA DE INGINERIE SPECIALIZAREA: INGINERIE BIOCHIMIC

COLESTEROLUL

Coordonator: Prof. univ. dr. chim. Fnaru Adriana-Luminia

Student: Ptracu Cristina

Bacu 2013

Cuprins
Introducere.............................................................................................................3 Formula i structura chimic.................................................................................3 Proprieti fizico-chimice......................................................................................4 Rolul fiziologic al colesterolului...........................................................................5 Metode de obinere ale colesterolului....................................................................5 Metode de caracterizare ale colesterolului............................................................9 Bibliografie..........................................................................................................12

Introducere
Colesterolul este un alcool organic, sterol, identificat n membrana celular i n esuturile organismului i transportat n snge. Termenul provine din grecescul chole (bil) i 3

stereos (solis) plus sufixul ol, fiind identificat n calculii colesterolici n anul 1784. De regul, el nu se absoarbe prin alimentaie, ci se sintetizeaz n oragnismul animal. Se concentreaz la nivelul ficatului, mduvei spinrii, a creierului dar i la nivelul plcii de aterom, conducnd la ateroscleroz. Colesterolul are un rol important n organism, numeroase procese biochimice avndu-l drept precursor. Hiperproducerea de colesterol (cel din lipoproteine de mic densitate) este asociat cu afeciuni vasculare: accidente vasculare cerebrale, cardiace, oculare .a., periclitante pentru via. Termenul de colesterol sanguin se refer de fapt la 2 tipuri de lipide:

LDL (low density lipoproteine) lipoproteine cu densitate mic aa numitul colesterol ru HDL (high density lipoproteine) lipoproteine cu densitate mare

Formul i structur chimic

Cadrul fundamental al steroizilor este unitatea triciclic indicat mai jos:

Figura 1. Structura steroizilor

Colesterolul are scheletul fundamental al steroizilor modificat (Figura 2). Unele pri ale moleculei de colesterol sunt izoprenoid, dar alte pri nu ascult de regula izoprenului. Deasemenea, colesterolul are 27 atomi de carbon, care nu este multiplu de cinci, formula lui chimic fiind C27H46O. Denumirea colesterolului este 10, 13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidru-1H-ciclopenta(a)fenantren-3-ol, cu o mas molecular de 386,65g/mol i are un punct de topire de 146-147 oC.

Figura 2. Structura colesterolului Colesterolul este o substan gras produs n mod natural de ctre ficat i n snge. Putei obine, de asemenea, nivelul colesterolului din unele alimente - acest lucru este numit "colesterol alimentar". Colesterolul alimentar se gsete numai n produsele de origine animal (cum ar fi organe, crnuri grase, produse lactate cu grsime complet i glbenuuri de ou). Colesterolul este folosit pentru multe lucruri diferite din corpul tu, dar devine o problem atunci cnd exist prea mult n snge.

Proprieti fizico-chimice
Este aprope insolubil n ap, din aceast cauz transportul su se realizeaz prin intermediul lipoproteinelor (crui ai colsterolului), care sunt hidrosolubile i transport colesterolul i grsimile n interioriul organismului. Proteinele formate la suprafaa particulelor lipoproteice determin zona de unde colesterolul va fi extras i unde va fi transportat. Prima cale de transport o constituie chilomicronii, nite lipoproteine mari care, ncrcate cu trigliceride i colesterol de la nivelul mucoasei intestinale, se ndreapt ctre ficat. Aici are loc conversia trigliceridelor i a colesterolului n LDL, proteine care transport mai departe trigliceridele i colesterolul ctre alte celule ale corpului. La persoanele sntoase LDL sunt in numr mic, n timp ce numrul crescut al LDL este asociat cu incipien a ateromatozei arteriale. HDL sunt particule de transport al colesterolului napoi la ficat pentru excreie, dar sunt numeroase semne de ntrebare asupra capacitii lor de a efectua acest transport. Numarul lor mare este un semn de sntate a organismului, iar numrul lor sczut indic o accentuare a plcii ateromatoase la nivelul arterelor. De asemenea, concentraia lor nu indic i numrul de HDL aflate n organism, la fel cum se ntmpl i n cazul LDL, acest lucru influennd n mod negativ testele de laborator.

Rolul fiziologic al colesterolului

Colesterol-ul este necesar pentru:

meninerea integritii celulare; de asemenea are rol n reglarea vscozitii fluidelor celulare (snge). Datorit gruprii hidroxil, interacioneaz cu restul fosfat al membranei celulare, iar steroizii cu molecul mare i lanul hidrocarburic sunt introduse n membran. sinteza bilei (acizi biliari) metabolismul vitaminelor liposolubile: A, D, K, E; este precursor major al vitaminei D. precursor al reaciilor de sintez a o hormonilor steroidici (cortisol i aldosteron n glandele suprarenale) o hormonilor sexuali progesteron, estrogen i testosteron. intervine la nivelul sinapselor nervilor; intervine n sistemul imunitar, inclusiv mpotriva cancerului.

Recent colesterolul a facut obiectul unui studiu desfurat n 2001 de Haines, experiment care a scos la iveal faptul c ar reduce permeabilitatea pentru ionii de sodiu i protonilor.

Metode de obinere a colesterolului

1. Izolarea colesterolului din glbenu de ou
Decenii n urm, izolarea i purificarea colesterolului din calculii biliari ai omului era un experiment etalon organic de laborator. Problemele actuale de biosecuritate interzic studenilor manevrarea unor astfel de rmie umane. In contrast, glbenuurile de ou sunt sigure i sunt uor accesibile, iar un glbenu de ou conine aproximativ 200 mg de colesterol. Experiment O procedur simpl pentru izolarea i purificarea prin cromatografie pe coloan a colesterolului la un ou fiert tare este descris. Cheia pentru aceast procedur este o saponificare rapid a lipidelor glbenuului cu methanol/K2CO3, urmat de ndeprtarea azeotrop a metanolului prin evaporare cu ciclohexan.Colesterolul dup cromatografie este suficient de pur pentru a caracteriza prin punctul de topire. Acesta poate fi apoi adus la nalt puritate prin formarea reversibil a complexului acestuia cu acid oxalic. S-a obinut 50- 60 mg de colesterol, dup coloana cromatografic iniial i 15- 30 mg dup purificarea cu acid oxalic. Un protocol rapid a fost, de asemenea, elaborat, folosind reactivul modern DessMartin, pentru oxidarea colesterolului la cetona 5-colesten-3-on, cu transformarea ulterioar a cetonei la enona 4-colesten-3-on.

2. Sinteza colesterolului

Pe ansamblu, reaciile biochimice ale sintezei colesterolului pot fi grupate n 3 etape mari: Etapa 1.

Formarea izopentenil pirofosfatului din acetil coezima A i alte substane intermediare. Biosinteza colesterolului ncepe prin cuplarea a 2 molecule de acetil CoA, care duc la formarea a unei molecule de acetoacetil CoA. Aceasta se combin cu o nou molecul de acetil CoA n prezena enzimei hidroximetilglutaril CoA sintaza i formeaz 3OH 3metil glutaril CoA, compus ce are n molecul 6 atomide carbon(HMG CoA). n continuare acesta se reduce NADPH+H+ i a enzimei hidroximetilglutaril CoA reductaza la acid mevalonic (MVA), care sufer o fosforilare n prezena mevalonat kinazei formnd mevalonat5 fosfat. Acest compus se va transforma sub influena fosfomevalonat kinazei n mevalonat pirofosfat MVA-PP, compus care sufera o decarboxilare sub aciunea difosfomevalonat dicarboxilazei, produsul final fiind IPP (izopentenilpirofosfat), denumit i izopren activ care constituie precursorul colesterolului, dar i a sterolilor, carotenoidelor, terpenelor, chinonelor, etc. 1 este catalizat de hidroximetil glutaril CoA reductaza, 2 este catalizat de hidroximetil CoA

reductaza, 3 de mevalonat kinaza, 4 de fosfomevalonat kinaza i 5 este reacia catalizat de difosfomevalonat dicarboxilaza. Etapa 2.

IPP sub aciunea unei izomeraze se trasform n DMA PP (dimetilalilpirofosfat); prin combinarea acestor izomeri are loc formarea unui alt precursor important n reaciile biochimice GPP( geranilpirofosfatul cu 10 atomi de carbon n molecul). GPP reacioneaz n continuare cu o molecul de IPP formnd farnesil pirofosfat (C15). 2 molecule de farnesil pirofosfat se condenseaz cap-cap formnd scualenul (C30). 1 este catalizat de izopentenil difosfat izomeraza, 2 de dimetilaliltransferaz, 3 este catalizat de geraniltransferaz i 4 de farnesiIPP farnesiltransferaza.

Etapa 3.

Scualenul prin procese de ciclizare i oxidare se transform n lanosterol, iar acesta prin reacii de ciclizare, oxidare formeaz colesterolul.

Metode de caracterizare
1. Spectroscopia Raman
Spectrul Raman al colesterolului purificat, nregistrat cu o excitaie de 792.5 nm, 1,200 g / mm grilaj, i 150 secunde timp de integrare, sunt prezentate n figura 6.

Figura 6. Spectrul Raman al colesterolului Complexitatea mrit a moleculei de colesterol reiese clar din numrul mare de vrfuri Raman n spectrele nregistrate (Figura 6). Toate benzile de vibraie observate sunt prezentate n tabelul 1, unde benzile corespunztoare, n aceast regiune spectral, pentru colesterol i colesterol monohidrat raportate de la Laboratorul de Chimie al Lipidelor de la Universitatea din Gothenburg, Suedia, sunt listate de asemenea. Tabelul 1. Frecvenele Raman observate ale probei de colesterol i cele observate n ref pentru de colesterol i colesterolul monohidrat.

Deplasarea Raman observat a colesterolului (cm-1)

488

Deplasarea Raman a colesterolului (cm-1) 465 496

Deplasarea Raman a colesterolului monohidrat 455 490 545

541

550 10

570
600

570 603 627-640 700

600 620
695

693
734

732 745

798

798 812

803 815 846 885

828 874 915

830

924 950

925 950 975 960 960 990

984 1003 1021

992 1010 1020 1050

1020 1050 1088

1064 1081

1068 1090 1116

1126

1125 1156

1132

1171

1162

1178 1194

11

1200 1235
1253 1276

1220

1252 1280 1300 1328

1258 1272 1300 1326

1350

1358 1364 1390 1448 1456 1580

1444 1468

1444 1468

1669

1668

1673

n mod normal, ntregul spectru al colesterolului este mprit n trei regiuni spectrale diferite. Acestea sunt (1) din regiunea de frecven joas sub 300 cm-1, care ofer informaii de vibraii intramoleculare interand, (2) zona balansoar / deformare de metilen ntre 1400 i 1500 cm-1 dnd informaii despre lanul de ambalare n stare cristalin, i (3) regiunea C-H de ntinde ntre 2700 i 3100 cm-1, care apare pentru a indica faptul c exist o corelaie ntre ramificare n catenele laterale ale colesterolilor. n spectrul nregistrat (Figura 6) se poate observa c regiunea (2) este, evident, reprezentat de o band larg, intens plic cu un vrf principal la 1444 cm-1 i o band slab la 1468 cm-1. Gradul de acoperire spectral nu a fost suficient de mare pentru a nregistra regiunea (1) i (3). Cu toate acestea, se poate observa n tabelul 1 c cele mai multe dintre benzile Raman nregistrate sunt n conformitate cu intervalele raportate n D.L. Pavia, G.M. Lampman, and G.S. Kriz Jr., Introduction to spectroscopy,Saunders Golden Sunburst Series, Philadelphia (1979). Cu toate acestea unele dintre frecvenele msurate sunt n bun concordan cu benzile colesterolului monohidrat. Acest lucru se poate datora oricrei contaminri cu ap n recipientul de prob sau datorit apei din aer.

2. Absorbia n infrarou apropiat

Spectrul nregistrat al colesterolului, cum se arat n Figura 7, prezint benzi de absorbie destul de intense, cea mai puternic fiind cea de la 7225 cm-1.

12

Figura 7. Spectrul de absorbie FT-NIR al colesterolului Frecvenele colesterolului sunt listate n Tabelul 2. Tabelul 2. Banda frecvenelor ale absorbiei n infrarou apropiat de colesterol

Banda frecvenelor observate Colesterol

4823
5494 5712

5827 6313 6812 7225 8394

Bibliografie
1.http://www.betterhealth.vic.gov.au/bhcv2/bhcpdf.nsf/ByPDF/Cholesterol_healthy_eating_ti ps/$File/Cholesterol_healthy_eating_tips.pdf 2. http://ro.wikipedia.org/wiki/Colesterol 3. Journal of Chemicaleducation, Isolation of Cholesterol from an Egg Yolk, Douglass F. Taber,* Rui Li, and Cory M. Anson, 2011 4. Raman and Infrared Absorption Spectroscopy for Tissue Diagnostics, Joakim Bood & Hugo Carlsson, Lund Reports on Atomic Physics, LRAP-168 Lund, March 1995 13

5. http://www.columbia.edu/itc/chemistry/c3045/client_edit/ppt/PDF/26_11_16.pdf

14