Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
-note de curs-
Ce vom studia ?
1. Cromozomii: morfologia cromozomilor, dimensiunea, forma, evidentierea cromozomilor. - reproducerea celulara si ciclul cromozomial. 2. Acizi nucleici: - structura chimica a acizilor nucleici (ADN, ARN) - codul genetic: caracteristici - sinteza proteinelor: etape - functiile materialului genetic 3. Gena: - notiunea de gena - mutatii: sursa primara a variabilitatii organismelor. Clasificare: mutatii genomice, cromozomiale, genice. - factorii mutageni si mecanismul lor de actiune: factori fizici, chimici, biologici. 4. Legile lui Mendel - Monohibridarea (legea puritatii gametilor) - Dihibridarea (segregarea independenta a perechilor de caractere) - Recombinarea intercromozomiala (legea asortarii independente) 5. Teoria cromozomiala a ereditarii Th. Morgan - plasarea liniara a genelor pe cromozomi - transmiterea inlantuita a genelor - recombinarea intracromozomiala (crossing-over)
Remember PK vs. EK !
EK:
animala si vegetala
Diferente intre PK si EK
PK -Reprezint 1% din lumea vie -unicelulare -diametrul mai mic de 10microni -metabolism divers -organite citoplasmatice absente -nu au membran nuclear deci materilul genetic vine in contact cu citoplasma -ADNdccc (histone-like) -au un singur cromozom -citoschelet absent -p.c. alctuit din peptidoglican EK -99% din lumea vie -pluricelulare -diametrul mai mare de 10microni -metabolism exclusiv aerob -organite citoplasmatice prezente cu funcii diverse -este prezent membrana nuclear -ADNdcl (asociat cu proteine histonice) -au mai muli cromozomi -citoschelet ce formeaz o reea alctuit din microtubuli i microfilamente -p.c. alctuit din celuloz sau chitin la plante ori absent la animale -diviziunea celular-mitoz -reproducerea-sexuat (meioza) -suport variaii limitate
-diviziunea celular este fisiune binar -reproducerea-fisiune,nmugurire -toleran crescut la mediu,proliferare rapid i adaptabilitate la variaii crescute ale factorilor de mediu -ARN+proteine=sintez proteic
Cromozomi ...
Cromozomi
Comparaie ntre starea cromatinei n interfaz i a cromatinei compactate n mitoz: a) micrografie electronic prezentnd starea dispersat a cromatinei n interfaz; b) micrografie electronic a unui cromozom mitotic (dup Molecular Cell Biology Lodish H., et. al., 2000) 8
Centromeri/Telomeri
Hibridizarea fluorescent n situ (FISH) i aplicaiile ei: a) utilizarea de sonde fluorescente pentru marcarea regiunii centromerice a cromozomului 16; b) exemplu de cariotip spectral; c) evidenierea prezenei telomerilor la cromozomi de oarece (adaptat dup Molecular Cell Biology Lodish H., et. al., 2000)
9
Schema general a organizrii cromatinei cu evidenierea principalelor nivele cunoscute de organizare (Campbell, et al., Biology 2002).
10
Evidentierea heterocromatinei
Evidenierea heterocromatinei: a) micrografie electronic a unei celule stem din mduva spinrii. Regiunile nchise de la periferia nucleului i din afara nucleolului reprezint heterocromatin; b) prezena cromozomului X inactivat sub forma corpusculului Barr ntr-o celul de femeie
11
ce este mitoza si meioza ? diferente intre mitoza si meioza asemanari intre mitoza si meioza importanta meiozei si a mitozei; dar recombinarea inter/intracromozomiala ?
12
13
Acizii nucleici
Acizii nucleici sunt substane care au fost pentru prima dat izolate din nucleii celulelor. Exist acizi nucleici i n citoplasma celulelor. Dou tipuri de acizi nucleici: ADN (acid deoxiribonucleic) localizat n principal n nucleul celulelor (cnd acesta este individualizat) ca n cazul eucariotelor); ARN (acizi ribonucleici), prezeni n principal n citoplasma celulelor dar i n nucleu. Acizii nucleici ADNi ARN au rol esenial n sinteza proteinelor, compui fundamentali ai celulei, suportul marii majoriti a activitilor biologice. ADN este suportul ereditii; ARN reprezint acidul nucleic care permite sinteza proteic
14
(c)
A, G, T, C n ADN A, G, U, C n ARN
15
Remember ATP
16
17
18
purtat de molecule de ADN foarte lungi, i codificat n secvena linear de nucleotide A, T, C i G ; Molecula de ADN, n form de dubl elice, compus dintr-o pereche de catene complementare formate din nucleotide care sunt meninute mpreun prin legturi de hidrogen care se realizeaz ntre perechile de baze G-C i A-T ;
19
Structura 3D a ADN
21
22
Functiile materialului genetic: Replicarea ADN Transcriptia ADN in ARNm Translatia ARNm in proteine
23
n momentul replicrii unei molecule de ADN, catenele sale sunt deprtate pentru a forma una sau mai multe furci de replicare n form de Y. Enzima ADN polimeraze care se poziioneaz la nivelul fiecrei furci este responsabil de sinteza noii catene de ADN complmentarit cu fiecare din catenele parentale, sintetiznd astfel dou molecule de 25 dublu helix ;
Transcriptia ...
26
STRUCTURA ARNm
Reprezint copii ale genelor ADN. Conceptul de mesager a fost formulat pentru prima dat de Jacob i Monod n 1962. La PK informaia este adesea copiat de pe operoni, ARNm fiind o molecul policistronic, adic codific mai multe gene. La EK, ARNm este monocistronic i conine exoni i introni. n nucleul EK, n urma procesului de transcripie,moleculele de ARNnh (nuclear heterogen) formeaz transcripi pentru numeroase gene nucleare:-transcripi primari,mrimea lor este identic cu cea a genei -molecule parial maturate ce sunt lipsite de un numr variabil de introni. Moleculele de ARNm citiplasmatic sunt produsul precursorilor ce au suferit fenomenul de maturaie. Precursorii ARNm de la EK sunt procesai nainte de transportul ARNm n citoplasm unde urmeaz s fie tradui de ctre ribozomi. Acest proces const n: -adugarea capionului -scindarea i poliadenilarea n 3 -splicing n timp ce genele rmn izolate n nucleu, unde sunt pri integrante ale moleculei de ADN, informaia acestora poate fi comunicat uneu molecule de ARN mobil, mult mai mic, capabil s treac n citoplasm. La acest nivel molecula servete drept model pentru dirijarea i ncorporarea AA ntr-o ordine specific, codificat de secvene nucleotidice n ADN i ARNm. O molecul de ADN poate servi ca model pentru producerea unui numr mare de molecule de ARN care toate vor reprezenta matrie pentru sinteza unui numr i mai mare de catene polipeptidice. Durata de via a moleculei de ARNm este scurt. La bacterii durata de via a ARNm este de numai cteva minute iar la EK poate ajunge la cteva zile. ARNm se nnoiete foarte repede,aceste molecule fiind permanent produse i degradate,cu toate acestea aceeai molecul de ARNm poate fi citit de mai multe ori la nivelul ribozomilor. n timpul transcripiei unui fragment de ADN n molecula de ARN,se formeaz tranzitoriu hibrizi scuri ADN-ARN cu conformaie A la nivelul buclei unde catenele de ADN sunt local desfcute. Etapele de desfurare a mesajului purtat de ARNm de ctre ribozomi,pentru traducerea acestuia n catena polipeptidic,este reglat d motivele n form de ac de pr. Informaia genetic copiat in structura ARNm n urma procesului de transcripie,este tradus n structura priteinelor prin intermediul codului genetic care realizeaz traducerea mesajului dintr-un cod format din nlnuirea repetitiv i aleatorie a 4 nucleotide n altul reprezentat de 20 AA. Fiecare AA este codificat de una sau mai multe secvene de 3 baze, numite codoni,din structura ARNm. Codul genetic este format din 64 de codoni dintre care 61 specific AA i 3 codoni STOP (UAA,UAG,UGA) semnaliznd ncheierea traducerii. AUG este codonul START, codific formil-metionina la PK i metionina la EK. Codul genetic este degenerat deoarece majoritatea AA sunt codificai de mai muli codoni. Codul genetic este standard att la PK ct i la EK.
27
Procesarea ARNm
3 etape:
28
Translatia ...
29
Translatia
30
activarea aa prin combinarea acestora cu ATP aa activati sunt transferati la locul sintezei proteice de catre ARNt sub actiunea enzimei aminoacilsintetaza elongarea catenei polipeptidice sub actiunea enzimei polipeptid polimeraza
31
Subunitatile ribozomale
32
33
ARN t
34
STRUCTURA ARNt
ARNt are rolul de a adapta fiecrui codon prezent n structura ARNm, AA corespunztor. Sunt molecule polinucleotidice mici (70-90 de resturi) a cror funcionalitate se bazeaz pe existena a dou situsuri strict specifice: -captul 3 care asigur fixarea unuia din cei 20 AA ntr-o form activ -captul anticodon, structur complementar codonului care se potrivete foate bine pe structura ARNm prin mperechere comlpementar. O molecul de ARNt are caracteristicile datorate structurii sale primare: -conine nucleotide atipice prin natura bazelor pe care le conine, astfel gsim hipoxantina a crui nucleotid este IMP -prezena T (timina) Deoarece aceste baze nu sunt ncorporate n momentul sintezei ARN, ele sunt obinute prin modificarea secundar a uneia din cele 4 baze ntlnite n ARN (A,U,C,G). Astfel IMP provine din deaminarea A din AMP i TMP provine din metilarea UMP; aceste modificri se numesc modificri post-translaionale. Prima molecul de ARNt secvenializat a fost cea pentru Ala de la drojdii (1965). Frunza de trifoi alctuit din 3 bucle plus bucla variabil: -extremitatea 3 CCA (constituit din 3 nucleotide CMP,CMP,AMP),reprezint bucla ce constituie braul acceptor al AA; aceasta se leag covalent de OH din 3) -braul purttor al anticodonului-structur sub form de agraf, a crei bucl este format din 7 nucleotide ce poart anticodonul. Numim anticodon grup de 3 nucleotide care este situat le nivelul unei bucle a ARNt i are capacitatea de a se mperechea prin legturi slabe cu codonul ntr-o manier antiparalel i complementar. n cazul codonului i anticodonului este absolut necesar precizarea semnului de scriere (astfel, anticodonului 3UAC5 ii corespunde codonul 5CAU3). -buclele D i TYC-deoarece conine baze modificate rare:pentru D dehidrouridina, i pentru TYC pseudouridina poziionat ntre T i C i notat cu Y. -n funcie de bucla variabil avem:-molecule de ARNt de clas 1 (bra scurt de 3 pn la 5 nucleotide) -ARNt de clas 2 (13-21 nucleotide dintre care 5 sunt complementare) mperecherea secundar a bazelor determin formarea de elice constante,mperechere de tip Watson-Crick;conservarea unor poziii invariabile. Numrul crescut de puni de hidrigen care se formeaz ntre baze situate le distan realizeaz replierea moleculei i apariia unei conformaii cu 2 regiuni elicoidale ale cror axe sunt situate n planuri pararele.
35
STRUCTURA ARNr
Moleculele de ARNr sunt constituieni majori ai ribozomilor reprezentnd aproape 65% din structura acestora. Moleculele de ARNr sufer procese de matilare dup sinteza polinucleotidului la nivelul A ( N-dimetil A) sau prin formarea de O-metil riboze. Metilarea -OH din poziia 2 a ribozei protejeaz polimerul de hidroliza punilor fosfodiester i prelungete durata de via a acestuia. S-au evideniat conservarea pe plan evolutiv a anumitor secvene din structura ARNr cu rol: -structural, intrnd n compoziia ribozomilor -faciliteaz fixarea celorlalte specii de ARN (ARNt,ARNm) la nivelul ribozomilor -la PK are rol de recunoatere pe structura ARNm a situsului de iniiere a traducerii (AUG) prin hibridizarea unei secvene situat la captul 3 la ARNr 16 S cu o secven scurt numit Shine-Dalgarno, aflat la cteva nucleotide n amonte de AUG -la EKnu se cunoate nc cu precizie dac una dintre moleculele de ARNr recunoate o secven situat n apropierea AUG dar se tie c este absolut necesar recunoaterea extremitii 5 cap a ARNm nainte de nceperea citirii informaiei acesteia. PK 5
gena1 gena2 gena3
EK 3 5
UTR E I E I E I E I E I
3
E I E I UTR
Interactii codonanticodon
37
38
Codul genetic
39
40
Mutatii ... ?
41
CARIOTIP. CARIOTIPARE
Cariotip = prezentarea ordonata a cromozomilor unei celule diploide, pe perechi si pe grupe alcatuite dupa marime, forma si alte trasaturi reprezentative;
se alcatuieste cu cromozomi metafazici bandati; bandarea evidentiaza, la nivelul cromozomilor, cu ajutorul anumitor compusi chimici, niste modele caracteristice; modelele constau intr-o succesiune de benzi a caror configuratie depinde de compozitia in baze azotate a diferitelor regiuni ale cromozomului, precum si de tehnica de bandare folosita; la cromozomii apartinand aceleiasi perechi, pe langa dimensiunile si forma similare se observa si un model de benzi similar, ceea ce inlesneste recunoasterea perechilor in vederea alcaturii cariotipului.
42
Cariotiparea (alcatuirea cariotipului) respecta urmatoarele reguli: cromozomii sunt asezati in ordinea descrescatoare a marimii; cromozomii omologi formeaza perechi; perechile sunt grupate dupa morfologie.
43
44
cromozomi metacentrici cromozomi submetacentrici cromozomi subtelocentrici cromozomi acrocentrici cromozomi telocentrici
45
GRUPELE DE CROMOZOMI LA OM
Grupa A (mari) = per 1+ per 2+ per 3 per 1 si 3 - metacentrici per 2 submetacentrici Grupa B (submetacentricii mari) = per 4 + per 5 Grupa C (mijlocii) = per 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 + + cromozomul/cromozomii X, metacentric(i) per 6, 7, 8, 11 - metacentrici per 9, 10, 12 - submetacentrici Grupa D (acrocentricii mijlocii, cu sateliti) = per 13, 14, 15 Grupa E (mici) = per 16, 17, 18 per 16 - metacentrici per 17, 18 - submetacentrici Grupa F (metacentricii mici) = per 19, 20 Grupa G (acrocentricii mici, cu sateliti) = per 21, 22 + + cromozomul Y, acrocentric, dar lipsit de satelit
46
Clasificarea mutatiilor:
in functie de cantitatea de ADN afectata: - genomice poliploidia si aneuploidia - cromozomiale deletii, duplicatii, translocatii, inversii - genice punctiforme dupa aparitie - spontane - induse dupa tipul de cromozomi afectati - autozomale - heterozomale dupa modul de manifestare - viabile - semiletale - letale
47
Genotip
Anticorpi plasmatici
Doneaz la
Primete de la
Nu doneaz la
Nu primete de la
A (II)
LALA (homozigot) sau LAl (heterozigot) LBLB (homozigot) sau LBl (heterozigot) LALB (codominant)
A; 0
B; 0
B; AB
B (III)
B; AB
B; 0
A; 0
A; AB
AB (IV)
A; B
AB
0; A; B; AB primitor universal
A; B; 0
48
Fenotip
Genotip
Riscuri
Rh pozitiv Rh negativ
abseni
- n prezen de antigen D (transfuzie sau sarcin cu embrion Rh+) se sintetizeaz anticorpi anti D; risc de accident hemolitic; - n caz de sarcin cu embrion Rh+, hematiile de la ft ptrunse n sistemul circulator al mamei determin sinteza la mam, de anticorpi anti D care distrug hematiile ftului; - anticorpii trec n circulaia ftului, la care determin anemie hemolitic, letal - totui, riscul exist doar n cazul n care mama i ftul sunt compatibili n sistemul ABO; - dac sunt incompatibili, hematiile de la ft vor fi distruse de anticorpii din sistemul ABO prezeni n sngele mamei, nainte ca producerea de anti D s fie iniiat accidentul hemolitic nu se mai produce - de asemenea, dac femeia cu Rh negativ se afl la prima sarcin cu ft Rh pozitiv, anticorpii antiD nu se sintetizeaz, pn la termen, n cantitate suficient pentru a produce anemie hemolitic la ft
49
unul dintre acetia coloreaz stratul posterior al irisului i este prezent la toi indivizii; acesta este pigmentul care d culoarea albastr a ochilor; prezena sa poate fi, ns, mascat de cel de al doilea pigment, care se depoziteaz n stratul anterior al irisului; astfel, persoanele la care i stratul anterior al irisului este pigmentat au ochii de alt culoare dect albastru i anume de culoarea pe care le-o confer aceast pigmentaie suplimentar; Sinteza fiecruia dintre cele dou tipuri de pigmeni este controlat de gene care aparin fiecare unei alte serii polialele;
50
Culoarea prului este dat de dou tipuri de pigmeniunul brun (melanina) i unul rou;
cantitatea de pigmeni din pr este controlat de dou perechi de gene, fiecare aparinnd unei serii polialele; din seria care controleaz producia de melanin fac parte genele Mbd, Mbw, Mbk; acestea determin sinteza, respectiv prezena n firele de pr a unei cantiti de pigment reduse (Mbd), medii (Mbw) sau mari (Mbk); din seria care controleaz producia de pigment rou fac parte genele R+ i R-; indivizii purttori ai genei R+ au pigment rou n pr, n timp ce persoanele care dein gena R- sunt lipsii de acest pigment;
51
Mbd, R+
MbkMbdR+R+ aten ar miu MbwMbkR-R+ aten nchis strlucito r MbwMbkR+R+ aten nchis lucios MbkMbkR-R+ brunet strlucito r MbkMbkR+R+ brunet lucios
Mbw, R-
Mbw, R+
MbwMbdR+Raten rocat
MbwMbwR+Raten
Mbk, R-
MbkMbdR-Raten deschis
MbkMbdR-R+ aten
MbkMbwR-Raten nchis
Mbk, R+
MbkMbkR+R+ aten
MbkMbkR+Rbrunet strlucito r
52
fenotip (simptome)
prezena tirozinei n urin; urina este colorat (brun); ligamente i tendoane alcaptonuric); afectate (artrit
Cretinism guogen
incapacitatea de sintez a hormonilor tiroidieni tulburri de cretere i dezvoltare; napoiere mental; Heterozomal (pe crz X) absena pigmentului melanic din piele i pr; iris albastru pal i pupile roii; defecte de vedere i auz incapacitatea de a distinge ntre rou i verde;
Albinism
timp de coagulare mult mrit (de la 3-6 minute, ct este normal la 22- 40 de minute) risc de hemoragie fatal; afectarea musculaturii dificulti de deplasare; moartea, nainte de 20 de ani, n urma afectrii muchilor respiratori i a muchiului cardiac;
Miopatia Duchenne
53
fenotip (simptome) microcefalie (cap mic); aspect caracteristic al feei: ochi oblici, nas turtit la baz, urechi mici, plasate jos pe craniu; malformaii ale organelor interne; ntrziere mintal indivizii afectai nu depesc vrsta maturitii i nu au urmai; malformaii multiplentrziere mintal; indivizii afectai nu supravieuiesc mai mult de cteva sptmni de la natere; atrofia ovarelor sterilitate; absena transformrilor puberale; caractere sexuale secundare puin evidente; statur mic; malformaii cardiace i renale; n unele cazuri, ntrziere mental
Autozomal (perechea 18) Heterozomal (femei cu un cromozom X, genotip XO) Heterozomal (brbai cu genotip XXY) Afecteaz ntregul genom
Sindrom Klinefelter
slab dezvoltare sau atrofiere a testiculelor sterilitate; caractere sexuale secundare puin evidente; uoar dezvoltare a snilor la pubertate; dezvoltare exagerat a membrelor i a bazinului; atenie i memorie deficitare. n celulele indivizilor afectai se gsete un multiplu diferit de 2n al numrului n de cromozomi (numrul de baz al speciei); embrionii poliploizi sunt avortai spontan
54
Poliploidia
55
culoarea bobului
56
AB Ab aB ab
2 caractere
Codominanta
Fenotip (Grupa de snge) A B AB 0 Genotip posibil LALA sau LAl LBLB sau LBl LALB ll
58
fin ....
59