EDUARDO DE ROBERTIS JOS HIB

FUNDAMENTOS DE
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BIOLOGIA CELULAR YMOLECULAR DE DE ROBERTIS

Fundamentos ha sido concebido como texto para estudiantes de bachilleratos especializados y para quienes desean ingresar a instituciones universitarias o realizan cursos superiores de biologa celular en el campo de las ciencias mdicas, agronmicas, veterinarias, exactas y biotecnolgicas.
Su contenido ha sido organizado de manera didctica e integrada, pasando de las cuestiones ms simples a las ms complejas. Brinda una cobertura completa de los componentes de la clula, abordados con un criterio funcional a fin de facilitar la conexin de sus temas con los de otras materias biolgicas. En lo concerniente a las ciencias mdicas, el texto responde tanto a los programas tradicionales como a los basados en el autoaprendizaje y la resolucin de problemas, ya que los contenidos de sus 23 captulos son presentados de modo tal que el estudiante puede localizarlos, incorporarlos e interrelacionarlos autnomamente.

Fundamentos es un texto de biologa celular conciso, actualizado, muy comprensible y profusamente ilustrado con micrognifas y figuras en colores, concordante con la orientacin seguida por la enseanza de la materia en los principales centros en que se imparte.

Rdiftffial El AtL~eo

Eduardo M. F. De Robertis Es doctor en Medicina y se gradu con Medalla de Oro en la Facultad de Medicina de la Repblica Oriental del Uruguay. Adems es doctor en Bioqumica de la Facultad de Ciencias Exactas de la Universidad de Buenos Aires. Despus de completar su doctorado en la Fundacin Campomar se traslad a Cambridge, Inglaterra, para continuar su entrenamiento con Sir Gurdon en embriologa de anfibios. Desde 1985 es profesor titular de Bioqumica de la Facultad de Medicina de la Universidad de California, Los Angeles, donde ocupa la Norman Sprague Endowed Chair for Molecular Oncology. En 1994 recibi la distincin de ser nombrado Investigador del Howard Hughes Medicallnstitute. Ha sido elegido miembro de la European Molecular Biology (EMBO), de la Organizacin Iberoamericana de Biologa Molecular (IMBO) y es miembro correspondiente de la Socit de Biologie de Paris. Ha recibido distinciones de la Fundacin Konex, del College de France de Paris y de otras entidades. Es miembro de Consejos Asesores de numerosas organizaciones internacionales. Recientemente ha sido elegido miembro de la American Academy of Arts and Sciences.
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Los estudios moleculares de la clula han alcanzado logros tan significativos que convierten a la biologa celular en el basamento de la mayora de las asignaturas de las ciencias biolgicas. Los veintitrs captulos que componen esta nueva edicin han sido revisados, ampliados y actualizados en consonancia con los espectaculares avances registrados en la mayor parte de los temas. Todos han sido presentados en forma concisa y didctica, encabezados por cdigos que agilizan la bsqueda de los contenidos y permiten su integracin. Adems se ha cambiado el formato del libro y se ha recreado su diseo mediante la incorporacin de ilustraciones nuevas y el empleo de colores. En lo que atae a los estudios mdicos, el texto se adecua tanto a los programas tradicionales como al aprendizaje basado en la resolucin de problemas, pues ha sido redactado de modo que el estudiante pueda comprender sus conceptos con razonable facilidad.

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Jos Hib Se gradu en la Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires. Es doctor en Medicina de esa universidad y doctor en Biologa de la Universidad del Salvador. Tempranamente se dedic a la docencia y se traslad --como becario de la Organizacin Mundial de la Saludal Centro latinoamericano de Perinatologa de Montevideo, dirigido por el profesor Roberto Caldeyro-Barcia.AII realiz sus primeros trabajos de investigacin, vinculados con la contractilidad de los rganos del sistema reproductor masculino y su regulacin farm acolgica y hormonal. Luego se radic en Buenos Aires, donde como miembro del CONICET continu con sus investigaciones, que fueron registradas en ms de 30 publicaciones en revistas extranjeras, o comunicadas en congresos nacionales e internacionales de la especialidad. En 1986 fue nombrado profesor adjunto del Departamento de Biologa Celular, Histologa, Embriologa y Gentica de la Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires y desde 1996 es profesor titular de esa asignatura en la Universidad Abierta lnteramericana. Fue miembro del Comit Cientfico del Primer Congreso Panamericano de Androloga y ha sido premiado por el Ministerio de Educacin de la Nacin por su t rabajo Contraailidad de/ epiddimo. Es autor de los libros tnl>rlolo:la Mdica Histologa de Di Fiore - Texto y Atlas-; este 'lt lnu ..11 l:oal q111 lwtlwntlllo~. h:1 sido t raducido al portugus.

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Editorial El At~~~J

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Fundamentos de Biologa Celular y Molecular de De Robertis

Fundamentos de Biologa Celular y Molecular de De Robertis

Eduardo M. F. De Robertis . Jos Hib

e)Editorial El Ateneo

De Robertis, Eduardo Fundamentos de Biologa Celular y Molecular de De Robertis De Robcni s, Eduardo-Hib. Jos 4' ed. - Buenos Aires- El Ateneo, 2004 444 pginas. 16 x 23 cm ISBN 950-02-0414-2 1. Biologa Celular- 2 fl iologa Molecular- l. Jos Hib JI. Ttulo CDD 618.2

Prlogo
Tercera edicin publicada en ponugus con el ttulo De Rober1is - Bases da Biolog ia Celular e Molecular Guanabara-Koogan, Ro de Janciro. 2001 En primer trmino deseamos expresar nuestro reconocimiento por los numerosos mensajes recibidos de colegas complacidos por la aparicin de la tercera edicin de Fundamentos, celebrando la posibilidad de que este texto clsico de biologa celular pueda continuar siendo consultado por los estudiantes. Es que en una poca como la actual, en que importantes descubrimientos sobre la clula se publican casi cotidianamente, los libros que describen las estructuras y funciones celulares persisten en la consideracin de los docentes slo si se los actualiza con cierta periodicidad. Sin embargo, antes de sumar datos nuevos stos deben seleccionarse criteriosamente a fin de que lo novedoso no prevalezca sobre lo esencial e invada el lugar de Jos conocimientos bsicos que los estudiantes tienen que aprender al comienzo de sus carreras, ya que con frecuencia abordan el estudio.de la clula con escasas nociones sobre su funcionamiento. Aadido a Jo anterior, a lo largo del libro hemos tratado de orientar el inters de los estudiantes para que comprendan que en el conocimiento de las estructuras y funciones celulares normales se hallan los cimientos de la mayora de los temas que debern aprender cuando cursen otras asignaturas. Todos los captulos de esta cuarta edicin han sido revisados y puestos al da, en especial las secciones correspondientes a la migracin celular, las cubiertas de las vesculas transportadoras del sistema de endomembranas, la incorporacin de protenas a la mitocondria, la transmisin intracelular de seales, el pasaje de molculas a travs del complejo del poro, la importancia del ARNxist, las propiedades de los rnicroARN, la influencia del enrollamiento de la cromatina sobre la actividad de los genes (cdigo histnico), el ribosoma, la sntesis de la cadena retrasada del ADN, los telmeros, el complejo sinaptonmico, la muerte celular, el anlisis de la funcin de los genes con la ayuda de ARN pequeos de interferencia, etc. Del mismo modo que en la edicin anterior, hemos tratado de presentar los temas razonablemente abreviados a pesar de que, como se dijo, las publicaciones derivadas de la investigacin cientfica son cada da ms numerosas. No obstante, cuidamos de no hacerlo a costa de la claridad didctica, propsito que se vio enor111 m nt fav orecido al contar esta edicin con ilustraciones coloreadas. Al respeclo, l'i 1 wr aprec ian~ que a cada componente de la clula se le asign un color que 111 lllltiiiiiVO u lucias J s fi11ras doacl ' l componente aparece. Asimismo, las sec<'i"n'" t' ll que 11< ' tli v itltn lo': < 'l tdiJilt~s h:111 s ido t'lwnht'l',ndns pm l'digos s 'IH;illos

Diseo Tapa: Cla udia Solari Dise11o i nlcrior: Alejandro Ji. Dcmartini Cuana edicin de Editorial El Ateneo
GRUPO ILHSA S. A .. 2004

l'atagoJJeS 2463 - (C 1282ACA) fluenos Aires - Argentina Tel. : (54 11) 4943 8200- Fax : (54 JI ) 4308 4 199 E-mai 1 : ed itorial @cbtcnco.com Derechos exclusivos de edicin en castellano reservados para lodo el mundo. Queda hecho el depsito que establece la k y 11.72] Impreso en Talleres Verbp S. A. Comandante Spun 65], Avellaneda. Provincia de Buenos Aires. en el mes de abril de 2004.
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FUNDAMENTOS DE BJOLOG!A CELULAR Y MOLEC ULAR

que se repiten cada vez que se hace referencia a cuestiones vinculadas con sus contenidos, lo que facilitar la bsqueda de los temas y agilizar los intentos de integrarlos. Como es natural, la preparacin de una nueva edicin es una tarea compleja que depende del esfuerzo de mu chas personas. Entre los colaboradores ms dedicados se destaca el diseador grfico Alejandro F. Demartini, quien tuvo a su cargo la recreacin de las ilustraciones, la elaboracin de las figuras nuevas y la diagramacin de las pginas. Deseamos resaltar el incalculable aporte que nos brind, no slo por su pericia editorial sino tambin por el empeo con que afront los pro blemas que se presentaron, pues no cej hasta que la esttica y la informacin de las figuras llegaran al nivel que desebamos. Merece un a mencin especial el seor Arnaldo Saita, de qui en dependi la correccin del texto original a fin de alcanzar -y no dudamos que lo consigui- la mayor precisin idiomtica posible. Cabe tambin mencionar a la seorita M arina von der Pahlen y a los seores Amrica Ruocco, Miguel A. Romero y Roque Quinteros por la colaboracin proporcionada en distintas etapas de la preparacin del libro. Finalmente, dejamos sentado nuestro agradecimiento a la Directora Editorial de El Ateneo, seora Luz Henrquez, por su anuencia para que se publique esta nueva edicin de Fund.amentos, y al Editor del Departamento de Medicina, seor Enrique Lohrmann, por su generoso e incondicional apoyo desde que se gest el proyecto.

Indice

l. LA CELULA

Introduccin...... Niveles de Caractersticas general es de las clulas .................................... .............. ................. 3

organizaci~::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: ;

Los A UTORES

2. LOS COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA Introduccin .. .... ........... ................ ................... . .. ....................... .......... 21 Agua y minerales.. ....... .. .. ...... .................................... .. .. ... .. .................. .. .......... .. 22 Acidos nucleicos ................... ..... ..

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3. LAS MEMBRANAS CELULARES. Permeabilidad de las membranas

Actividades de las membranas ..... .... .. . ........... .. ............ .... ..... Estructura de las membranas

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Fluidez de las membranas .. :.::::: :::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: ::::::::::::::::::::: Permeabthdad de las membranas celulares .............. .. .............. ............ ................. 56 La membrana plasmtica y la pared de la clula vegetal. .. .. ....... .. .... .. ....... 68
4. EL CITOSOL Componentes .. .................. .... .... .... .. .. ......... .... ..... ......... ...... ... .. 71 Chaperonas .. ... .. .. .. .. .. .. .. .. .... .............. ...... .... Proteasomas.... .. .. ......... .. ... .. .................. ...... ... ............... ..... .. ............ ..... .. 73
..... ................. ...................... .. ............... ............... . 75

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5. EL CITOESQUELETO. Forma y motilidad Componentes ............... .......... .......................... .. ....... .. ..... ..... ... .... .. .. ...................... 77 Filamentos intermedios . Microtbulos ................. .............................. ................. .............. ...... . ... 78 cntrosoma....... . ........... ..... .... ................ ......... ........ .............. ................... 80 ('']' ...... .......................... ...... .......... ... .................. ... .. ................... 81

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULA R Y MOLEC ULAR

IND!CE

XI

6. LA UNION DE LAS CELULAS ENTRE SI Y CON LA MATRIZ EXTRACELULAR Matriz extracelular ......... .. ...... .. .. ...... ........ . ................. .... .............. ........ ..... .. 109 Uniones de las clulas con la matriz extracelular .............................................. .. 11 2 Uniones transitorias entre las clulas ..... .......... ......................... .... ..................... ... 113 Uniones estables entre las clulas ...... ... ...................... .......................... ... ........... 114 Las conex iones entre las clulas vegetales ...... ............ ... ........ ....... ...... ........... .. . 119 7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS. Digestin y secrecin Componentes ..... ....... ..... .......... ... ...... ... .............. . .......... .............. .... ..... 121 Retculo endoplasmtico .. ....... ...... ....................... ................ .. .. ..... .. ....... ...... ....... 122 Complejo de Golgi .. ........ .... ............. .. ...... ......... ............. ....... ... ................. 123 Punciones del retculo endoplasmtico y del complejo de Golgi..... .... ................. 126 Secrecin celular. Exocitosis .. ....... ...... ...... ............... ...... 139 Endosomas. Endocitosis ....... ........... ............... .................... .... ................. ....... ...... 141 Lisosomas. Digestin celul ar. ........................ ......... .. ....... .. ........ ..... ...... ........ ... ...... 146 Vesculas transportadoras ................................................... .... ..... .. ....... .... ...... ..... 149 El sistema de endomembranas en la cl ula vegetal... ....... ............ ....... ............. ... .. ! 57 8. LAS MITOCONDRIAS. Energa celular I Procesos bioenerglicos...... ............... ... .. . ...... .......... .. ....... ................... 159 Descripcin genera] y estructura de las mi tocondrias ........ .... ................. ........... . 165 .......... ............ ............ 168 Funciones de las milocondri as ...... .... ........ .. ... ........ Mitocondrias de las c lul as de la grasa parda ...... ......... ................... .................. .. 174 ... ... .. 175 Reproduccin de las mitocondrias ...... .... .......... ....... .................... ..... ....... ........... ... ...... .............. 176 ADN mitocondrial ... ............ .... Probable origen de las mitocondrias ............... .... ................ ............ 179 9. LOS CLOROPLASTOS. Energa celular 11 Tipos de plstidos .... ............ ........ ... ...................... .. .. . ... .... ............. .. ..... 181 Estructura de los c loropl astos. .......... ....... ....... ........ .. .. .. . 183 Fotosntesis.... ..... ..... ..... ...... ....... ..... ....... ......... ................. ....... .......... ... 184 Biognesis de los cloroplastos ....... .......................... .. .......................... .... ....... .... 190 10. LOS PEROXISOMAS. Destoxificacin celular Contenido de los peroxisomas .... ............ ...... ........ .................... .................. .... .. 193 Punciones ....... ... ..... .......... ......... ....................... ... ..... ........................ ............ ..... . 194 Reproduccin... . ........... ...... ..... .... .......... ..... .......... .... ..... ...... ... .. ... 195 195 Los peroxisomas en las clulas vegetales ..... .................. .......................... ... 11. LA COMUNICACION INTERCELULAR Y LA TRANSMISION INTRACELULAR DE SEALES Formas de comunicacin entre las clulas ..... 197 Inducciones celulares mediadas por receptores citoslicos ..... 200 Inducciones celulares mediadas por receptores localizados en la membrana plasmtica .......... .. .......... .......... ... ......... .... ....... ........... . 201 Receptores membranosos que adquieren actividad enzimtica ................... ................................. ..... ......... ..... .... 202 o que activan enzimas Receptores membranosos acoplados a proten as G ..... ....... .... ... ..... .. ..... .... .. ......... 207 12. EL NUCLEO Descripcin general........ ........................ .... .... .................. ... ................. ... 21 9 Envoltura nuclear ...... ... ................ ... ......... .. ..... ........................ .. .. ......................... 220 Cromosomas. ............... . ...................... ..................... ............................... 225 Eucrolllat ina y heterocromatina ................................................:......................... ... . 10
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13. LOS GENES Introduccin .... ................. .... ..... .. ... ........................................ .............. ....... ....... .. 237 ... 239 Cdigo gentico ................. . . 241 Composicin de los genes .......... ...... . .. ....... ........................ ........................ 14. LA TRANSCRIPCION DEL ADN Definicin ...... ..... ................................ ........... ....... ......... ............. . 247 Transcripcin de los genes de los ARN mensajeros ... ......... ........ ........... .......... ... 250 Regulacin de los genes que codifican ARN mensajeros .......... .. ........... .............. 251 Transcripcin del gen del ARN ribosmico 455 ............................ ...... .. ....... 26 1 Transcripcin del gen del ARN ribosmico SS. ............... ... ............... . 261 Transcripcin de los genes de los ARN de transferencia ... ....... ......... ........ ......... . 262 Transcripcin de los genes de los ARN pequeos . ... ...... .................. ........... ....... 262 Transcripcin de los genes del ARNxist, del ARNte y de los miARN .. .............. 262 Transcripcin de los genes en las clulas procariotas ...... .............. ... . 263 15. EL PROCESAMIENTO DEL ARN Procesamiento de los ARN mensajeros ........ .......... ......... .............. ...... .......... 269 Regulacin del procesamiento de los ARN mensajeros ................. .... ......... ......... 274 Procesamiento del ARN ribosmico 455 ............. ........ .... ........ ...................... ..... 275 Nuclolo ...... ................. ......... .. ........... ................................................................. . 276 Procesamiento del ARN ribosmico SS .................... ............................ ................ 278 Procesamiento de los ARN de transferencia ......... ... ...................... ................. ... .. 278 .... .. 279 Procesamiento de los ARN pequeos....... ................ ......................... Procesam iento del ARNxist, del ARNte y de los miARN ............... .... ........... ..... 279 16. LA TRADUCCION DEL ARNm. Sntesis de p rotenas Descripcin general y cdigo gentico... .......... ............... ................. .. 281 Tipos de ARN de transferencia .... ..... ......... ...... ......... .. .................. 283 . ................... ....... .......... .................. ............... .. 285 Aminoacil-AR Nt sintetasa... Ribosomas ..... .... ... ....... .... ............... ....... .......... ............................. ..... .... .... ... 286 Las etapas de la sntesis proteica.. .... .............. .... .. .... 288 Regulacin de la traduccin de los ARN mensajeros .......... ...... .. .. ...... ......... 294 y de la degradacin de las protenas .... 17. LA REPLICACION DEL ADN. M utacin y reparacin Replicacin del ADN. Desctipcin general. ............... ..... ... ............... ...... ..... ....... 299 Orgenes de replicacin .... ..... ............ ....... ...... ....... ......... .... ...................... .... .... 302 Replicacin continua y discontinua ........ ................. .... .. ........................ ....... 304 Replicacin del ADN en los tel meros ........... ............ .... . ............ .............. ........ 308 Funciones de las topoisomerasas........... ..... .................. ............. ... 311 .......... ....... ........ ............... ..... . ..... 313 Mutacin del ADN ...... .... Reparacin del ADN ............ .. .......... ............. .... ......................... 316 Transposicin de secuencias de ADN . ......... ....... ....... ................ ............. 318 18. LA MITOSIS. Control del ciclo celular Ciclo celular ..... ........ ......... .......... ...... .......... ............................. ....... ...... .... 321 Descripcin general de la mitosis .......... ..... .. ............................... ......... ............... 322 Fases de la mitosis ......... ............................. ............. .... .... ... ......... ..... ..... ........ .. ..... 323 Centrosomas ............. ........................ ................. ....... ......... ........... ..... .... .. ... .......... 326 .. 327 Cinetocoros .............. : ..... ......... .:. ................ ....... ........ .......... .... ............. Iluso mi ttico .............. ................. .... ............ .......... .................. .. ....................... ... 328 C' itoc incsis ..... ......................................... ..... ....................................... ... 330 1.a tnitosis en las lu las vegetales... .............................. ......... ............. ..... 332 ( 'nnlro l dd ,ir lo n lu lar .. .. ......... .... ... . ... ... .......... ............................. .................... 333
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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

19. LA MEIOSIS. Fecundacin Meiosis y reproduccin sexual ............................ ..... . ......................................... 341 Diferencias entre la mitosis y la meiosis . ........ ......... . ................... ........ . 342 Descripcin general de la meiosis... .. .... .. .. ...... .. .. ....... .......... ......... ....... ...... 344 Fases de la meiosis .... ...... .. ..... .. ..... .......... .. .......................... 344 Consecuencias genticas de la meiosis ............................ 354 Fecundacin .............. ................... ......... 356 Fases de la fecundacin.. . .. .......... ......... . 357 La meiosis en las clulas vegetales y la reproduccin de las plantas .................... 363 20. LAS BASES DE LA CITOGENETIC A Leyes de la herencia mendeliana ........................................................................ 365 Aberraciones cromosmicas.... ..................... .. ................. 370 . ................ 373 Aberraciones cromosmicas en la especie humana .. .................. .. 376 Papel desempeado por los cromosomas en la evolucin ... 21. LA DIFERENCIACION CELULAR Caractersticas generales .............. ............... ................... ...... ............................... 379 Interacciones nucleocitoplasmticas .......... .. ............. .................... ......... ......... . 380 Determinantes citoplasmlicos .................................................. ....... ......... ..... .. .. 382 Valores posicionales de las clulas embrionarias ..................... ...................... .. ... 385 Establecimiento del plan corporal .. .. ...... .. ............ ........ ............. ........ ...... .. .... ....... 386 Fenmenos inductivos ........ ....... ................ .. .. .... .... ......... ............. .. .... 386 El establecimi ento del plan corporal en la Drosophila .. ... ................. .. .. 390 Genes responsables de la formacin del plan corpora l .... .. ... ............ .. ..... 391 22. LA MUE RTE CE LULAR Definicin y caractersticas generales............ .. ........... .. ................................ 393 Apoptosis por supresin de factores trficos .. .. .. ...... ... .. ....... ........... .. ........... 394 Apoptosis por activacin de receptores especficos .. .. ....... ................................ 396 Apoptosis debida a mutaciones en el ADN ..................................... ... 398 23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR Microscopia ptica...................... .................................. .. ................... 401 Microscopia electrnica ......................... ....... .................... ........ .............. ........ ..... 406 Estudio de las clulas vivas............. .......................... ...... .. ............ ................ 411 Citoqumica ........ ................ ......... .. ....... ........................................ ..... 412 Inmunocitoqumica ................ .................................. . ....... ... ... ............ ......... ....... . 414 Radioautografa ...................................................... ... .. ................. ............... ........ 41 S .. .......: .. ........ ................................. 416 Fraccionamiento celular y molecular...... Anlisis molecular del ADN e ingeniera gentica .... .. ....... .............. ... ....... 418 Anlisis de la funcin de los genes. .................... ........ .. ....... ....... 429 INDICE ALFABETICO .............................................. ................ ..... ....................... 435

La clula
INTRODUCCION
1- 1. Las clu las son las un idades co n que se construyen los org an ismos vivos El estudio del universo biolgico nos muestra que la evolucin produjo una inmensa diversidad de formas vivientes. Existen alrededor de cuatro millones de especies de animales, vegetales, protozoos y bacterias, cuyos comportamientos, morfologas y funciones difieren e ntre s. Sin embargo, a nivel 1110lccular y celular estas entidades vivientes presentan un plan maestro de or~ unizacin nico. El campo de la biologa celular y molecular es, precisalllt.:nte, el estudio de ese plan de organizacin unificado; en otras palabras, es l' i anlisis de las molculas y de los componentes celulares con que se conslruyen todas las formas de vida. La clula es la unidad estructural y funcional fundamental de los seres vivos, as como el tomo es la unidad fundamental de las estructuras qumicas. Si por algn medio se destruye la organizacin celular, la funcin de la clu111 tambin se altera. Los estudios bioqumicos demostraron que la materia viviente est com(111 sta por los mismos elementos que constituyen el mundo inorgnico, aunqut.: con diferencias en su organizacin. En el mundo inanimado existe una rndcncia continua hacia el equilib1io termodinmico, en el curso de la cual 1 11r producen transformaciones contingentes entre la energa y la materia. En l'lllllbio, en los organismos vivos existe un manifiesto ordenamiento en las 111nsformaciones qumicas, de modo que las estructuras y las funciones bio1 , .~ i cas no se alteran. l ~n el captulo 23 se describen ordenadamente los mtodos de estudio que u oporcionaron los conocimientos esenciales sobre la estructura ntima de lun c lulas y permitieron descubrir la organizacin subcelular hasta un nivel 111111 ' ular. El presente captulo tiene como objetivos principales ofrecer una introdtt< 'l:i<ln para el estudio de la estructura y las funciones de la clula y presen11 nomenclatura de los componentes celulares. Despus de mencionar los '"' 1 11 v 1s d organizacin concernientes a la biologa, se describir la organiza' J, 11 structural de los procariotas y los eucariotas - los dos tipos principal, 11 d or.~un i s mos vivientes- y se sealarn sus semejanzas y diferencias. ' i'n llthl 11 intmdut.:id al lector en los procesos generales de las divisiones mi'"'11'11 y 111oi 11 u d las t.:6lulns. 11 llll'lll ll 1 '!Jt llm de ~te cupftulo s obt ndrli una perspectivl Mttlluntl 1 l. thll i oh 1 11 1' 111111, ljlll' H \IJ'V ir dL' h11s ' p111'11 oillpl'lllllli1.1 \ll' <iiJ IIIIIICJ'ill l Jll' 1111111 111 1'l.J-!' 1 111Nio 1dt 1 1 1 111,.,

FUNDAM ENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

l. LA CELULA

NIVELES DE ORGANIZACION
1- 2. Niveles de organizacin en biologa celular y poder resolutivo de los instrument os ut ilizados Los modernos estudios de la materia viviente demuestran que las manifestaciones vitales del organismo resultan de una serie de niveles de organizacin integrados. El concepto de nive les de organizacin implica que en el universo entero, tanto en e l mundo inerte como en el viviente, hay diversos niveles de complejidad, de manera que las leyes o reglas que se cumplen en un nivel pueden no manifestarse en otros. La tabla 1-1 muestra los lmites que separan el estudio de los sistemas biolgicos en diferentes ni veles. Los lmites estn impuestos artificialmente por el poder de resolucin de los instrumentos utilizados. El ojo humano s lo puede resolver (discriminar) dos puntos separados por ms de O,1 mm (l 00 J.l.m). La mayora de las clulas son mucho ms pequeas y para estud iarlas se necesita el poder de resolucin del microscopio ptico (0,2 J.l.m). La mayor parte de las subestructuras celulares son ms pequeas an y requieren la resolucin del microscopio electrnico (cap. 23-11 ). Con este instrumento se puede obtener informacin de subestructuras que miden entre 0,4 y 200 nm,
1 mm

Tabla 1-1. Ramas de la morfologa

Dimensin > 0,1 mm
100-1 0 J.m 10-0,2 J.m 200-0,4 nm < l nm

Rama
Anatoma Histologa Citologa Morfologa submicrosc pica Ultraestructura Estructura molecular y atmica

Estructura
Organos Tejidos Clulas Bacterias Componentes celulares Virus Posicin de los tomos

Mtodo
Ojo y lente simple Varios tipos de microscopios pticos Varios tipos de microscopios pticos M icroscopia electrnica Difraccin de rayos X

1 mm equivale a 1.000 .un; 1 .m, a 1.000 nm.

Ondas de radio

Lfmlte del ojo humano ------1~

100 )lm

Infrarrojo

lo cual ampla el campo de observacin hasta el mundo de las macromolculas. Los resultados logrados mediante la aplicacin de la microscopia electrnica han transformado el campo de la citologa en un grado tal que gran parIL! de este libro est dedicado al estudio de los conocimientos obtenidos con esta tcnica. Por otra parte, los estudios de la configuracin molecular de las protenas, los cidos nucleicos y otros complejos moleculares de gran tamano - incluidos algunos virus- se realizan mediante el anlisis de las muesIras por difraccin de rayos X . En la figura 1-1 se indican los tamaos de las clulas eucariotas, las bacIL:rias, los virus y las molculas en escala logartmica, y se los compara con las longitudes de onda de las radiaciones y con los lmites de resolucin del oj o humano, del microscopio ptico y del microscopio electrnico. Puede advertirse que el microscopio ptico permite un aumento de 500 veces con respecto a la resolucin del ojo, y el microscopio electrnico un aumento 500 v ces mayor que el microscopio ptico. En la tabla 1-2 se presentan las relaciones generales entre las dimensiones lineales y los pesos que se manejan en el anlisis qumico de la materia viviente. Es esencial familiarizarse con estas relaciones para el estudio de la biologa molecular de la clula. El peso de los -componentes celulares se expresa en picogramos (1 pg = 1 J.l.J.l.g, es decir, 10- 12 g) y el de las molculas on llalton. Un dalton (Da) es equi valente al peso de un tomo de hidrgeno, p ro a menudo se utiliza el mltiplo kilodalton ( 1 kDa = 1.000 Da). Por l"iL!mplo, una molcula de agua pesa 18 Da y una de hemoglobina 64,5 kDa.

CARACTERISTICAS GENERALES DE LAS CELULAS

- - - - - - - Bacterias

1- 3. Existen clulas procariotas y c lulas eucarotas

Al co mienzo del captulo dij imos que la vida se manifiesta en millones de ('S[lL!l:CS diferentes que poseen comportamientos, formas y funciones propias. 1.ns especies se ordenan en grupos de organismos cada vez ms amplios ncros, familias, rdenes- hasta llegar al ni vel de los reinos clsicos: ve1 hiH 1 2, Relaciones entre las dimensiones lineales
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F ig. 1-1. Escala logartmica de las dimensio nes microscpicas. Cada di visi n princ ipal representa un tamao 1O veces me nor que la precedente. 1\ la izquierda se indica la posicin de las dife rentes longiludes de o nda del espectro electro magntico y los lmites de resoluci n de l ojo humano, de l microscopio ptico y de l 111icroscopio e lectrnico. 1\ la d(-reclw aparece n los lnrn:u os de las e lulas, lm1 llnd ,\d u..
IoN vi rnH, lnt: 111111 ; nlw
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Visible

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y los pesos

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Peso
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Terminologa
Bioqulrnca convencional Micrmulmicu IIIM!oqulrlucu }
( ' lltUitlilllhll

t - - - - - Protenas
1 1111

Rayos y y X 1 f1111to do/ microscopio efoctrntco

1 nm
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l. LA CELULA

getal y animal. Una de las clasificaciones ms usadas propone la divisin en Organismos representativos Clulas Reino cinco reinos: mneras, protistas, hongos, vegetales y animales, con sus coProcariotas Mneras Bacterias rrespondientes subdivisiones (tabla 1-3). Algas azules Este cuadro puede simplificarse si se Protistas Eucariotas Protozoos examinan las distintas formas vivientes Crisofitas a nivel celular. As, es posible clasificar Hongos Mohos a las clulas en dos categoras reconociHongos verdaderos bles: procariotas y eucariotas. En la Vegetales Algas verdes tabla 1-3 se aprecia que nicamente las Algas rojas mneras (es decir, las bacterias y las alAlgas pardas Briofitas gas azules) son clulas procariotas, Traqueofitas mientras que todos los dems reinos esMetazoos Animales tn integrados por organismos compuestos por clulas eucariotas. La principal diferencia entre ambos tipos celulares es que los procariotas no poseen envoltura nuclear. El cromosoma de Jos procariotas ocupa un espacio dentro de la clula denominado nucleoide y se halla en contacto directo con el resto del protoplasma. En cambio, las clulas eucariotas poseen un ncleo verdadero con una complicada envoltura nuclear, a travs de la cual tienen lugar los intercambios nucleocitoplasmticos. En la tabla 1-4 se establece la comparacin de la organizacin estructural en los procariotas y los eucariotas, lo cual ilustra las diferencias y las semejanzas entre los dos tipos celulares. Desde el punto de vista evolutivo, se considera que los procariotas son antecesores de los eucariotas. Los fsiles que datan de tres mil millones de aos se manifiestan nicamente como procariotas, en tanto que los eucariotas aparecieron probablemente hace mil millones de aos. A pesar de las diferencias entre los procariotas y los eucariotas, existen grandes semejanzas en su orgaTabl.a 1-4. Organizacin celular en procariotas y eucariotas nizacin molecular y en sus funciones. Procariotas Eucariotas Por ejemplo, ambos tipos de organismos utilizan un mismo cdigo gentico Envoltura nuClear Ausente Presente y una maquinaria similar para sintetizar ADN Desnudo Combinado protenas.
Tabla 1-3. Clasificacin de las clulas y los organismos
con protenas Cromosomas Nuclolos Divisin Ribosomas Endotnembranas Mitocondrias Cloroplastos Pared celular IZxocitosis y endocitosis ( 'ihJesqueleto Unicos Ausentes Fisin binaria 70S* (50S + 30S) Ausentes Ausentes Ausentes No eelulsica Ausentes Ausente Mltiples Presentes
Mitosis o meosis

metabolismo. Los que petienecen a la primera clase -denominados auttrofos (por ejemplo, los vegetales verdes)- utilizan el proceso de fotosntesis para transformar C0 2 y H 2 0 en hidratos de carbono simples, a partir de los cuales pueden producir molculas ms complejas. Los pertenecientes a la segunda clase -llamados hetertrofos (por ejemplo, los animales)- obtienen la energa de los hidratos de carbono, las grasas y las protenas sintetizados por los organismos auttrofos. La energa contenida en estas molculas orgnicas se 1ibera mediante la combustin del 0 2 atmosfrico (es decir, por oxidacin), por un proceso que se denomina respiracin aerbica. La liberacin por los organismos hetertrofos del H 20 y C0 2 generados por este proceso completa el ciclo energtico (fig. l-2). Estos ciclos energticos se han mantenido relacionados entre s a lo largo de la evolucin. Entre Jos procariotas existen algunas especies auttrofas y otras hetertrofas. Los vegetales (con excepciones) son auttrofos, mientras que los animales y los hongos son hetertrofos. 1- 5. Organizaci n genera l de las clulas procariotas
Bacterias. Si bien este libro est dedicado a las clulas eucariotas de los organismos ms complejos, gran parte del conocimiento sobre la biologa celular proviene de estudios efectuados en virus y bacterias. Una clula bacteriana como la de Escherichia coli presenta la ventaja de su fcil cultivo a 37 oc en soluciones acuosas de iones inorgnicos, glucosa, aminocidos y nucletidos, donde duplica su masa y se divide en aproximadamente 20 minutos. Debe sealarse que la Escherichia coli pertenece a la clase de bacterias que no se colorean con el mtodo de tincin desarrollado por el microbilogo H. C. Gram, de ah que se las conoce como bacterias gramnegativas. Tanto la micrografa como el esquema de la figura l-3 muestran que la membrana plasmtica de esas bacterias est rodeada por una pared celular, la cual sirve de proteccin mecnica, es rgida y consta de dos capas: una interior de peptidoglicano y otra conocida como membrana externa. Obsrvese que ambas estn separadas por el espacio periplasmtico. El peptidoglicano es una macromolcula continua compuesta por carbohidratos inusuales unidos por pptidos cortos. En cambio, la membrana externa es una bicapa de lipoprotenas y lipopolisacridos similar en estructura a la membrana plasmtica. Uno de sus complejos proteicos presentes en la membrana externa lleva el nombre de porina debido a que forma un canal transmembranoso que permite la libre difusin de los solutos. La membrana plasmtica es una estructura lipoproteica que sirve de batTera para Jos elementos presentes en el medio circundante. Esta membrana, al controlar la entrada y salida de los solutos, contribuye al establecimiento de un medi o perfectamente regulado en el protoplasma de la bacteria. Es tlportun o sealar ahora que en los procariotas los complejos proteicos de la ad na n.:spiraloria (cap. 8- 11) y los fotosistemas utilizados en la fotosntesis k ap. l) X) S<' loc ali~. an t.:n la memhrana plasmtica. 1: 11 ,. pml n1 1ln.~mn st; n n n1ra11 parl t.: nlas de 25 nm de di metro, dcnotffiffll<i ft: f l'JhnNHIIIIIN , \' llfffJiffl "S iiiS Jlltf ' (,\itl11 jJ,Clllff t' it'i t tl ( i\J<N) y prof fnas; f HI/11'! 11 ''''' /llll1111 dd nd l' 1 1 111d ~ v cl llll p 'tlll 'l lll llltl Ihnli tHI HI/. ra ludlanli J ''''
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Fig. 1-2. Esquema del ciclo de la energa entre las clulas auttrofas (fotosintticas) y hetertrofas.

1-4. Ex is ten organ is mos auttrofos y organ ismos hete rtrofos

El sol constituye la fuente original de energa para los organismos vi vos. La energa incluida en los fotones es atrapada por el pigmento llamado clorofila -que se encuentra en los cloroplastos de los vegetales verdes- y se acumula en forma de energa qumica en los diferentes alimentos consumidos por otros organismos. Las clulas y los organismos pluricelulares pueden agruparse n dos las s principales segn t: l lll<"<' tlllif,"'" '1'"' 111i
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80S (60S + 40S) Presentes

Presentes
Presentes en clulas vegetales Celulsica en clulas vegetales Presentes Presente

S e~ l; unidad Svedhcrg du sedimentacin. que depende de la densidad

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1 ".
Membrana externa
F ig. 1-3. A. Micrograffa electrnica de una Escherichia coli que muestra, por fu era de la membrana plasmtica, el espacio periplasmtico y la me mbrana externa de la pared celular. El nucleoide aparece como una reg in irregular de poca densidad electrnica. El resto d el protoplasma est ocupado por ribosomas. (Cortesfa de B. Menge, M. Wurtz y E. Kellcnberger.) B. Esquema de la pared celular de una bacteria gramnegativa. Obsrvese el peptidoglicano y la membrana externa, cuya bicapa lipfdica est atravesada por porinas. En el lado inferior de la figura se ve una parte de la me mbrana plasmtica.

protoplasma contiene agua, iones, otros tipos de ARN, protenas estructurales y enzimticas, diversas molculas pequeas, etctera. El cromosoma bacteriano es una molcula circular nica de ADN desnudo, plegado apretadamente dentro del nucleoide, el cul, visto con el microscopio electrnico, se observa como la regin ms clara del protoplasma (fig. 1-3). Es importante advertir que el ADN de la Escherichia coli, que posee una longitud aproximada de 106 nm (1 mm), contiene informacin gentica para codificar entre 2.000 y 3.000 protenas distintas. El cromosoma de los procariotas se halla unido a la membrana plasmtica. Se cree que esta fijacin contribuye a la separacin de los dos cromosomas hijos despus de la replicacin del ADN. Tal separacin se producira al crecer la membrana plasmtica interpuesta entre ambos cromosomas. Adems del cromosoma, algunas bacterias contienen un ADN pequeo -tambin circular- denominado plsmido. E l plsmido puede conferir a la clula bacteriana resistencia a uno o a varios antibiticos. Mediante el uso de tcnicas de ingeniera gentica (cap. 23-34) es posible aislar los plsmidos, insertarles fragmentos especficos de ADN (genes) y luego traspl antarlos a otras bacterias. Micoplasmas. La mayora de las clulas procariotas son pequeas (miden entre l y 10 f..Lm), pero algunas pueden alcanzar un dimetro de hasta 60 f..Lm. E ntre Jos organismos vivos que poseen la masa ms pequea, los que mejor se adaptan para su estudio son las pequeas bacterias llamadas micoplasmas, las cuales producen enfermedades infecc iosas en di ferentes animal es y en el

nor que el tamao promedio de una bacteria y un milln de veces menor que el de una clula eucariota. Virus. Los virus fueron reconocidos por su propiedad de atravesar los poros de un filtro de porcelana (de ah su denominacin original de virus filtrabies) y por los cambios patolgicos que producen en las clulas. El tamao de los virus vara entre 30 y 300 nm y su estructura muestra diferentes grados de complejidad. Muchos presentan simetra icosadrica (fig. 1-4); sta deriva del modo como se combinan entre s ciertas unidades proteicas llamadas capsmeros, que forman la envoltura del virus o cpside. Los virus no son considerados clulas verdaderas. Aunque participan de algunas propiedades celulares -como la autorreproduccin, la herencia y la mutacin gnica-, dependen de clulas huspedes (procariotas o eucariotas) para ponerlas de manifiesto. Fuera de la clula husped los virus son metablicamente inertes y hasta pueden cristalizarse; se activan (es decir, se reproducen) cuando ingresan en una clula. De acuerdo con el tipo de cido nucleico que contienen, existen dos tipos de virus: 1) los que poseen una molcula de ARN como cromosoma (por ejemplo, el virus del sida), y 2) los que tienen una molcula de ADN (por ejemplo, los virus bacterianos o bacteri6fagos). Los virus replican sus genes para reproducirse. Tambin los transcriben (en ARN mensajeros), pero dependen de la maquinaria biosinttica de laclula husped (es decir, ribosomas, ARN de transferencia, enzimas, aminocidos, etc.) para sintetizar sus protenas (por ejemplo, los capsmeros). Los virus son producidos por un proceso de agregacin macromolecular, lo cual significa que sus componentes son sintetizados separadamente en diferentes lugares de la clula husped y luego reunidos de manera coordinada en otra parte de ella. Los bacterifagos son virus que usan como huspedes a clulas bacterianas. El ADN se halla en la cabeza del bacterifago y es inyectado en la bacteria por medio de una cola que se adhiere a la pared de la clula husped y acta como una jeringa. Los procesos ulteriores en la bacteria son muy rpidos y comienzan con la hidrlisis enzimtica de su ADN. Los nucletidos resultantes son utilizados para sintetizar el ADN de los nuevos bacterifagos. A partir de este ADN se sintetizan los ARN mensajeros y las protenas estructurales de los virus. Finalmente, se renen todos estos componentes y se arman los bacterifagos maduros dentro de la bacteria infectada. Como se ve

Fig. 1-4. Micrografa electrnica de virus coloreados negativamente . El dibuj o del re-

h01nbrc y pueden ser cultivadas in vitro como cualquier otra hn 1 'ri ll.

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1-7. Exist e una gran diversidad morfolgica ent re las clu las eucariot as Las clulas de un organismo multicelular tienen formas y estructuras variables y se diferencian de acuerdo con sus funciones especficas en Jos di stintos tejidos. Esta especializacin funcional hace que las clu las adquieran caractersticas singulares, aun cuando en todas ellas persiste un modelo de organizacin comn (fig. 1-8). Algunos tipos celulares, como Jos leucocitos, cambian de forma constantemente. Otros, como las clulas nerviosas y la mayora de las clu las vegetales, poseen una conformacin bastante estable. La forma de una clula depende de sus adaptaciones funcional es, del ci loesqueleto presente en su citoplasma, de la accin mecnica ejercida por las c lulas adyacentes y de la rigidez de la membrana plasmtica. El tamao de las clulas oscila dentro de amplios lmites. Si bien algunas clulas pueden observarse a simple vista, la mayora son visibles nicamen-

Fig. 1-6. Esquema de la ultraestructura de una clula vegetal idealizada, con sus principales componentes.

Fig. 1-5. Escherichia coli infectada por un bacterifago (comprese con la figura 1-3 de control). Se observan algunos residuos del bacterifago adheridos a la pared celular (flechas), despus del ingreso de l ADN. El nucleoide no se ve y laclula aparece repleta de virus. (Cortesa de B. Mcnge, M. Wurtz y E. Kellenberger.)

en la figura 1-5, despus de haber sido infectada por un bacterifago, la Escherichia coli aparece repleta de virus y pronta a romperse para dejar a los nuevos bacterifagos en libertad. Cuando se trata de virus que infectan a clulas eucariotas el proceso es ms complejo. As, el ADN o el ARN del virus se replica en el ncleo de la clula husped y las protenas virales se sintetizan en los ribosomas citoplasmticos. Luego, los nuevos componentes virales se combinan entre s en el interior de la clula. Para concluir el estudio de los virus, comparmoslos con las clulas verdaderas. Estas poseen: 1) un programa gentico especfico que permite la formacin de nuevas clulas similares a las predecesoras; 2) una membrana plasmtica que regula Jos intercambios enue el interior y el exterior de la clula; 3) una esuuctura que atrapa la energa de Jos alimentos, y 4) una maquinaria que sintetiza protenas. Como vimos, los virus poseen slo la primera de estas facultades y carecen de las dems. Por este motivo no son considerados como clulas verdaderas, a pesar de contener los patrones genticos para codificar sus protenas y reproducirse. 1-6. Organizacin general de las clulas euca riotas Una vez estudiada la .organizacin de las clulas procariotas es conveniente volver a observar la tabla 1-4, en la que estn resumidas las principales diferencias con las clulas eucariotas. Si se compara la organizacin de la Escherichia coli (fig. 1-3) con la de una clula vegetal (fig. 1-6) o la de una clula animal (fig. 1-7), llama la atencin la complejidad de estas ltimas. En la clula eucariota en interfase, el ncleo constituye un compartimiento separado, limitado por la envoltura nuclear. Otro compartimiento est representado por el citoplasma, el cual se halla rodeado por la membrana plasmtica, que a menudo muestra diferenciaciones. Cada uno de estos tres componentes principales contiene a su vez varios subcomponentes o subcompartimientos. Se puede utilizar la tabla 1-5 como una gua que resume esta compleja organizacin, ya que n l'llu St' 'ttll-

Membrana plasmtica

Cloroplasto

Pared celular

meran las f'uncion s mis importantes de nda omponl'nf

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Cilio

Microvellosidad

Vescula de pinocitosis

oo
o
Lisosoma

;;o

Membrana plasmtica

La membrana plasmtica slo puede verse con el microscopio electrnico, que revela sus numerosas diferenciaciones y Jos distintos tipos de estructuras que unen a las clulas entre s o que las conectan con ciertos componentes de la matriz extracelular (fig. 1-7). La membrana plasmtica controla de manera selectiva el pasaje de solutos. Adems promueve el ingreso y la salida de macromolculas mediante procesos llamados endocitosis y exocitosis, respectivamente (tabla 1-5). En las clulas animales la membrana plasmtica suele poseer abundantes hidratos de carbono (fig. 3-14), mientras que en las clulas vegetales su superficie est cubierta por una segunda envoltura de grosor relativamente estable, denominada pared celular (fig. 1-6).
1-9. El citoplasma contiene una matriz denominada citosol

El compartimiento citoplasmtico presenta una organizacin estructural muy compleja, ya que su estudio con el microscopio electrnico revela un asombroso contenido de membranas. Este sistema de endomembranas ocupa gran parte del citoplasma -al que divide en numerosas secciones y subsecciones- y es tan polimorfo que resulta sumamente difcil definirlo y describirlo. No obstante, en general se considera que el citoplasma se divide en dos grandes compartimientos: uno contenido dentro del sistema de endomembranas y otro --el citosol o matriz citoplasmtica- que queda fuera de ellas. Muchos componentes importantes del citoplasma estn en el citosol, es decir, por fuera del sistema de endemembranas. El citosol constituye el verdadero medio interno de la clula. Contiene los r ibosomas y los filamentos del citoesqueleto -en los cuales tiene lugar la sntesis proteica- y diversas clases de molculas vinculadas con numerossimas actividades metablicas. Tabla 1-5. Organizacin general de la clula eucariota
Princ!pales componentes Subcomponentes Funcin principal

Membrana celular F'ig. 1-7. Esquema general de la ultraestructura de una clula animal idealizada, con sus principales componentes.

Pared celular Cubierta celular Membra11a plasmtica Cromosomas Nuclolo Enzimas solubles Ribosomas filamentos inte1medios Microtbulos y centrosoma Filamentos de actina Cuerpos basales y cilios Centrfolos Rctlculo cndoplasmtico tomplcjo de Golgi Fndosnmos y Iisosomas
Milo{ ~ uuh ins
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Proteccin Interacciones celulares Permeabilidad, exocitosis y endocitosis Informacin gentica Sfntcsis de ribosomas Gluclisis Sntesis proteica Forma y movilidad de la clula Movilidad ciliar Sntesis y procesamicnlo de lpidos y glcidos Digestin
Slnlcsis de t\:1'1'
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Ncleo

te con el microscopio, puesto que tienen unos pocos micrmetros de dimetro (fig. 1- 1) . El volumen de la clula es bastante constante en los distintos tipos celulares y es independiente del tamao del organismo. Por ejemplo, las clulas del rin o del hgado tienen casi el mismo tamao en el elefante y en la rata. As, la masa de un rgano depende del nmero, no del volumen de las clulas.
1-8. La membrana plasmt ica separa el contenido de la clu la del med io externo

Citosol Citocsqueleto

l'structuras microtubularcs
<h i(unnidcs

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La estructura que separa el contenido de la clula del medio externo es la

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membrana plasmtica. Se trata de una delgada pelcula de a 1O11111 dr ('~

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1-1O. El citoesqueleto est compuesto por tres t ipos de f ilamentos principa les

Tres tipos de filamentos principales -los de actina, los intermedios y los microtbulos- y varias clases de protenas accesorias componen una especie de citoesqueleto distribuido por todo el citosol. El citoesqueleto es responsable de la forma de la clula e interviene en otras importantes funciones. Los filamentos de actina miden 8 nm de dimetro (fig. 1-9). Entre sus funciones ms salientes se halla la de conferir motilidad a las clulas. Los filamentos intermedios, de 10 nm de dimetro, estn fonnados por protenas fibrosas y tienen principalmente un papel mecnico. Los micr otbulos son estructuras tubulares rgidas de unos 25 nm de dimetro (fig. 1-9). Nacen de una estructura ll amada centrosoma, en la que se hallan los centrolos. Junto con los filamentos de acti na tienen a su cargo el desplazamiento de los organoides por el citoplasma. Adems, los mic(Qtbulos componen las fibras del huso mittico durante la divisin celular. Los centrolos son estructuras c ilndricas que miden aproximadamente 0,2 .tm por 0,4 .tm y sus paredes estn formadas por microtbulos. En general son dobles y sus dos unidades estn dispuestas perpendicularmente . Si bie n se encuentran en los centrosomas, no intervienen en la formacin de los microtbulos (las clulas vegetales carecen de centrolos y los microtbulos igualmente se forman). Durante la mitosis los centrolos migran hacia los polos de la clula.
1- 11 . El sistema de en domembranas abarca el complejo de Golgi, el retcu lo endopl asmtco, los endosomas y los lisosomas
Fig. 1-8. Algunos de Jos tipos celulares que se encuentran en los tejidos animales. Obsrvense las di fere ncias de formas y tamaos.

Fig. 1-9. Micrografa electrnica de una clula cultivada. Se observan dos haces de filamentos de acrina (A c) , un gran nmero de microtbulos (Mi) y vescul as llenas de material ( Ve). (Cortesa de K. R. Porter.)

La figura 1-7 ilustra la continuidad y las interconexiones funcionales de los distintos componentes del sistema de endom embranas en el citoplasma. El retcu lo endop lasmtico constituye la parte ms extensa del sistema de endomembranas (figs. 1-7 y 1- 10). Est compuesto por sacos aplanados y tbulos. La superficie externa del retculo endoplasmtico rugoso se halla cu-

Clula epitelial mucosa

Clula epitelial ciliada

Clula mucosa

Ovocito Clulas de J a

bierta por ribosomas, los cuales sintetizan las protenas destinadas al sistema de endomembranas y a la membrana plasmtica. El retculo endoplasmtico liso se contina con el rugoso e interviene en la sntesis de diversas molculas. Del retcuJo endoplasmtico deriva la envoltura nuclear, compuesta por dos membranas concntricas. Estas se unen entre s a nivel de los poros nudeares, que son orificios que permiten el paso de molculas entre el ncleo y el citosol. La membrana nuclear interna se halla en contacto con los cromosomas, mientras que la externa suele estar cubierta por ribosomas. El complejo de Golgi est formado por pilas de sacos aplanados, t bulos y vesculas (figs. 1-7 y 1-10). En l se procesan molculas provenientes del retculo endoplasmtico, las cuales son luego incorporadas a endosomas o son liberadas (secretadas) fuera de la clula por exocitosis. Los endosomas son organoides destinados a recibir enzimas hidrolticas provenientes del complejo de Golgi as como el material ingresado en la clula por endocitosis. C uando suman ambos contenidos se convierten en lisosornas. Los lisosomas son organoides polimorfos (figs. 1-7 y 1-11 ). Contienen las ~.:nzimas hidrolticas responsables de la digestin de las sustancias incorporadas a la clula por endocitosis. Tambin degradan a los organoides obsoletos ( aut.ofagia).
1- 12. Las mitocondrias y los plstidos son organoides fundamenta les pa ra e l funcionamiento celul a r

sangre

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Clula liol hllldo

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1.as mitocondrias se encuentran prcticamente en todas las clulas euca' iotas. Son estructuras cilndricas de alrededor de 3 .tm de largo por 0,5 .tm dt di. utclm que poseen dos membranas. La membrana mitocondrial externa , ,. llllllu stparada d la m<.: u1hrana int erna por e l espacio intermembranoso. La lllt"tlllll illlll iulnua rodta 11 lu 111111ri1. nliltli"OIIdrial y s halla plt:g:id:t. T":il s
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triz (figs. 1-7 y 1- 11). La membrana interna y la matriz mtocondrial contienen numerosas enzimas que intervienen en la extraccin de la energa de los alimentos y en su transferencia al ATP. Las clulas vegetales poseen organoides denominados plstidos, Jos cuales estn ausentes en las clulas animales. Algunos, como los leucoplastos, son incoloros y participan en el almacenamiento del almidn. Otros contienen pigmentos y se denominan cromoplastos; entre los ms importantes se encuentran los cloroplastos, con un pigmento verde llamado clorofila (fig. 1-6). El cloroplasto posee dos membranas, una estroma y un compartimiento singular formado por sacos aplanados denominados tilacoides. En los cloroplastos tiene lugar la fotosntesis, que es el proceso mediante el cual las plantas captan la energa de la luz y, con el aporte de H 20 y C0 2, sintetizan diversos compuestos orgnicos que aprovechan como alimento y que sirven para alimentar a Jos organismos hetertrofos. Tanto las mitocondrias como los cloroplastos contienen cromosomas circulares pequeos, cuyos genes forman ARNt, ribosomas y unos pocos ARNm necesarios para elaborar algunas protenas pertenecientes a los propios organoides.

1-13. los peroxisomas tienen funciones destoxificantes

Los peroxisomas estn rodeados por una sola membrana. Contienen enzimas vinculadas con la degradacin del perxido de hidrgeno (H20 2) y una de sus funciones es proteger a la clula.

1-14. la presencia del ncleo caracteriza a la clula eucariota

Salvo excepciones, todas las clulas eucruiotas poseen ncleo. En general, la forma del ncleo y la de la clula se hallan relacionadas. Por ejemplo, en las clulas esfricas, cbicas y polidricas el ncleo suele ser esfrico, mientras que en las cilndricas y fusiformes suele ser elipsoidal. En las distintas clulas somticas los ncleos tienen tamaos especficos, que dependen de las protenas contenidas en ellos. Dichos tamaos varan levemente con la actividad nuclear. En general existe una proporcin ptima entre el volumen del ncleo y el volumen del citoplasma; esta proporcin se conoce como relacin nucleocitoplasmtica. Casi todas las clulas son mononucleadas, pero existen algunas binucleadas (por ejemplo, las clulas hepticas y las cartilaginosas) y otras polinucleadas. En los plasmodios y los sincicios -que constituyen grandes masas citoplasmticas no divididas en territorios celulares independientes- los ncleos pueden ser extraordinariamente numerosos. Tal es el caso de la clula muscular estriada y del sinciciotrofoblasto placentario, que pueden contener va.Jios centenares de ncleos. El crecimiento y desarrollo de los organismos vivos dependen del crecimiento y la multiplicacin de sus clulas. En los organismos unicelulares, la divisin celular implica su reproduccin; por este proceso, a partir de una clula se originan dos clulas hijas independientes. Por el contrario, los organismos multicelulares derivan de una sola clula -el cigoto- , y la repetida multiplicacin de sta y de sus descendientes determina el desarrollo y el crecimiento corporal del individuo. La clula crece y duplica todas sus molculas y estructuras antes de que , ,. luse produzca su divisin. Este proceso se repite nuevamente <'U l m~ do, las hijas, ele modo que e l volumen total d las <li1las <i<-~ll'<lildi Puh 1 ~ 1' 1111 11'0 V(' T~ lllii Y ili' (111\ ' \'1 d\' la n"lula oi'il'.illlll , !1.';( " 11<'1 ' 1/ I VIIIIII 1111

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l . LA CELULA

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Las clulas pasan por dos perodos en el curso de sus vidas: uno de interfase (no divisin) y otro de divisin (en el cual se producen dos clulas hij as). Este ciclo se repite en cada generacin celular, pero el tiempo vara considerablemente de un tipo celular a otro. La funcin esencial del ncleo es proporcionar a la clula la informacin gentica almacenada en el ADN. Las molculas de ADN se duplican durante un perodo especial de la intetfase denominado fase S (por sntesis de ADN), en preparacin para la divisin celular (fig. 18-2). Durante la interfase la informacin contenida en los genes es transcripta en diferentes clases de molculas de ARN (mensajero, ribosmico y de transferencia), las cuales, despus de pasar al citoplasma, traducen esa informacin y sintetizan protenas especficas. F:n el ncleo interfsico humano se reconocen las siguientes estructuras (fig. 1-7): 1) la envoltura nuclear o ca r ioteca, compuesta por dos membranas perforadas por orificios llamados poros nucleares; 2) la matriz nuclear o nucleoplasma, que ocupa gran parte del espacio nuclear; 3) el nuclolo, que es ms grande en las clulas con sntesis proteica muy activa, por lo general esfrico; puede ser nico o mltiple y en l se sintetizan los ARN ribosmicos, los cuales se asocian con numerosas protenas para formar Jos ribosomas; 4) 46 cromosomas o fibras de cromatina; stas se compnen de ADN y de protenas bsicas llamadas histonas. El ADN y las histonas forman estl1lcturas gran ulares de unos 10 nm de dimetro - conocidas como nucleosomas- , que alternan con tramos de ADN libres de histonas. La cromatina as dispuesta es la ms delgada (fig. 12-10) y es capaz de enrollarse sobre s misma en di stintos grados. En la intelfase pueden verse regiones de eucromatina, donde las fibras se encuentran menos enrolladas, y regiones de heterocromatina, que representan las partes de la cromatina ms condensadas. Durante la divisin celular las fibras de cromatina se enrollan al mx imo, de modo que se las puede observar con el mi croscopio ptico bajo la forma de cromosomas (del griego chr oma, color, y soma, cuerpo) (fig. 12- 14).
1-15. Los ncleos de las clulas somticas contienen dos juegos de cromosomas homlogos

Los organismos plu ricelulares que se reprO d':Jcen sexualmente se desanollan a partir de una sola clula -el cigoto o clula huevo- , que resulta de la unin de un ovocito con un espermatozoide durante la fecundacin. Las clulas somticas descendientes del cigoto contienen dos juegos idnticos de cromosomas. En otras palabras, los cromosomas se presentan de a pares. Un cromosoma de cada par es aportado por el ovocito y el otro por el espermatozoide. Los dos miembros de cada par de cromosomas se denominan homlogos, y para indicar el nmero de cromosomas de una especie se hace referencia a los pares de cromosomas o a los pares de homlogos. Por ejemplo, el ser humano posee 23 pares de cromosomas, 46 en total. Los homlogos de cada par son prcticamente idnticos, pero los distintos pares de homlogos son diferentes entre s. Para hacer referencia a la presencia de los dos juegos de cromosomas homlogos se utiliza la expresin diploide (2n). En las clulas somticas ambos juegos de cromosomas se conservan durante las sucesivas divi siones celulares a lo !arpo d ] desarrollo mbrionario, el '1' .:itn<'III<> ''"IJ"" "I y ,.
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Fl, 1 11 , l T i " perifrica de 1111a ' lula hcp~lica en la que, Clllre otros componentes, se observan Jisosomas (L), el ncleo 1Nl. "" < 'llulll h'ulu hi linr (1 '/1) , ouioocundrin" (M) , 1 rctf u lo udoplasmoico (NJo.') e illclu.,inn< :s de glucgeno (G /). 3 1.000x .
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18

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

l. LA CELULA

19

1- 16. La mitosis mant iene la cont inuidad y el nm ero d iploide de los cromosomas
La estabilidad del nmero cromosmico es mantenida por medio de una clase especial de divisin celular, denominada mitosis. En ella se generan ncleos hijos con el mismo nmero de cromosomas; por consiguiente, en cuanto a su constitucin cromosmica las clulas hijas son idnticas entre s y a sus antecesoras. La mitosis comprende una serie consecutiva de fases, conocidas como profase, prornetafase, rnetafase, anafase y telofase. En la mitosis el ncleo experimenta una serie de cambios complejos. Entre los ms llamativos se encuentran la desaparicin de la envoltura nuclear y una mayor condensacin de las fibras de cromatina, que se convierten en cromosomas detectables. Vimos que en el ncleo inte1fsico los cromosomas no pueden ser individualizados porque en esa etapa del ciclo celular las fibras de cromatina se hallan ms desenrolladas. En la figura 1-12 se representan dos de los 46 pares de cromosomas homlogos presentes normalmente en las clulas somticas humanas. Como se vio, los cromosomas se duplican durante la fase S de la interfase. En la profase temprana cada cromosoma -compuesto por dos fibras de cromatinaaparece como un filamento muy delgado. Al final de la profase se convierte en un bastn corto y compacto, dado que se enrollan sus dos fibras de cromatina, que pasan a llamarse crorntidas. Pasada la metafase, en el transcurso de la anafase ambas cromtidas se separan y cada cromtida hija -es decir, cada cromosoma hijo-- se dirige a uno de los polos de la clula. Finalmente, en la telofase se forman sendos ncleos a partir de los dos conjuntos de cromosomas separados. La divisin celular concluye con la particin del citoplasma, conocida como citocinesis. De esta manera las mitosis mantienen el nmero diploide de cromosomas (2n) en las clulas somticas a lo largo de toda la vida del individuo.

En la anafase cada cromosoma homlogo -con sus dos cromtidas- se dirige haca uno de los polos opuestos. Despus de un corto perodo de interfase, ya en la anafase de la segunda divisin meitica, las dos cromtidas de cada homlogo se separan, de modo que cada cromtida queda localizada en uno de los cuatro gametos resultantes. Como consecuencia, en los gametos el ncleo contiene un nmero simple (o haploide) de cromosomas (fig. 1-12).
MITOSIS MEIOSIS

Interfase

2n

Interfase

Profase (corta)

Profase (larga y compleja)

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Metafase

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Metafase 1

1-17. La meiosis reduce los cromosomas a un nmero ha ploide

Si los gametos (vulo y espermatozoide) fueran diploides, el cigoto resultara con el doble del nmero diploide de cromosomas. Para evitarlo, las clulas sexuales predecesoras de los gametos experimentan un tipo especial de divisin celular denominado rneiosis, en el que el nmero dploide se reduce a un juego nico o haploide (In) en cada gameto forl)lado. El cigoto resultar as nuevamente diploide. La di visin metica se cumple en los animales (cap. 19-1) y los vegetales (cap. 19-20) que se n.:producen sexualmente y tiene lugar en el curso de la gametognesis (fig. 1-12). La meiosis reduce el nmero de cromosomas mediante dos divisiones nucleares sucesivas -la primera y la segunda divisin meitica- , dado que son acompaadas por una sola duplicacin cromosmica. En esencia el proceso es el siguiente. En la profase de la primera divisin los cromosomas homlogos se aparean. Puesto que cada cromosoma se compone de dos cromtidas, forman un bivalente compuesto por cuatro cromtidas (por ello se lo llama tambin ttrada). Adems, partes de las cromtidas apareadas suelen intercambiarse de un homlogo a otro. Este fenmeno recibe el nombre de recornbinacin gentica (en ingls. l"m.,.,ing mll'r). En la nt lafas de la misma di visi(ln los hivalnlt.~ (11 1 11uda) N<' di :1po
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FUNDAMENTOS DE B!OLOGJA CELULAR Y MOLECULAR

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Los componentes qumicos de la clula

INTRODUCCION
2- 1. Los componentes qumi cos de la clula se clasifican e n inorgnicos y orgnicos
La estructura de la clula es la consecuencia de una combinacin de molculas organizadas en un orden muy preciso. Aun cuando queda mucho por aprender, se conocen los principios generales de la organizacin molecular de la mayora de las estructuras celulares, como los cromosomas, las membranas, los ribosomas, las mitocondrias, los cloroplastos, etc. La biologa de la ;lula es inseparable de la de las molculas; de la misma manera que las clulas son los bloques con que se edifican los tejidos y los organismos, las molculas son los bloques con que se construyen las clulas. Al principio el estudio de la composicin qumica de la clula se hizo tnediante el anlisis bioqumico de rganos y tejidos enteros, como el hgado, el cerebro, la piel o el meristema vegetal. Estos estudios slo poseen un valor citolgico relativo porque el material analizado est compuesto generalmente por una mezcla de diferentes tipos celul ares y contiene material exlracelular. En los ltimos aos el desarrollo de diversos mtodos de fracciouamiento celular (caps. 23-28 a 23-32) penniti aislar los elementos subcelulares y recoger una informacin ms precisa sobre la estructura molecular d..: la clula. Los componentes qumicos de la clula se clasifican en inorgnicos (agua minerales) y orgnicos (cidos nucleicos, hidratos de carbono, lpidos y protenas). Del total de los componentes de la clula un 75 a 85% corresponde a IIJ.:Ua , entre el 2 y el 3% son sales inorgnicas y el resto son compuestos or.ft nicos, los cuales representan las molculas de la vida. La mayor parte de l11s estructuras celulares contienen lpidos y molculas muy grandes -denoruinadas macromolculas o poJmeros-, integradas por unidades o monnreros que se enlazan entre s por medio de uniones covalentes. En los organismos existen tres importantes polmeros: 1) los cidos nul'lclcos, conformados por la asociacin de cuatro unidades qumicas diferenlts d nominadas nucletidos; la secuencia lineal de los cuatro tipos de nuk < ilidos en la molcula de ADN es la fuente primaria de la informacin ge11\'I :r; 2) los polisacridos, que pueden ser polmeros de glucosa - con la <' ll i rl s1 l'onna lucgeno, almidn o celulosao comprender la repeticin .,. ptms lltollosa;ridos, con los que se forman polisacridos ms comple.,il, y \) lus Jll'flfcinus (polip <pliclos), que estn constituidas por aminoci..,;r xi:.lnr 20 lipos t't>11rhi11:rdos L' tt dikro111 s propor io11s; l:rs distinl l t ~ l ' h lllitf nd ( ~/l

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22

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

2 . LOS COMPONENTES QUIMJCOS DE LA CELULA

23

J'i~.

2-1. Esquema que mues-

11'11 la distribucin asimtrica

de las cargas en la molcula de agua.

un extraordinario nmero de combinaciones, Jo que determina no sio la especificidad sino tambin la actividad biolgica de las molculas proteicas. Adems de destacar las caractersticas y propiedades de los componentes qumicos de la clula, en este captulo abordaremos el estudio de las enzimas - un tipo especfico de protenas- como instrumentos moleculares capaces de producir transformaciones en muchos de esos componentes. Tambin veremos cmo las macromolculas pueden agregarse y organ izarse en estructuras supramoleculares ms complejas hasta resultar visibles con el microscopio electrnico. Es probable que tales agregaciones moleculares hayan actuado durante el perodo de evolucin qumica y biolgica que dio origen a la primera clula. Por tal motivo, al fi nal del captulo haremos algunas consideraciones especulativas acerca del posible origen de las clulas procariotas y e ucatiotas, es decir, de la aparicin de la vida en nuestro planeta. Los conceptos vertidos en este captulo slo sirven como una introduccin elemental para el conocimiento de la biologa molecular y celular. El estudio ms amplio de sus temas compete a los textos de bioqumica.

AGUA Y MINERALES
2- 2. El ag ua es e l co mpone nte ms abunda nte de los t ejidos Agua. Con unas pocas excepciones -por ejemplo, el hueso y el dientee l agua es el componente que se encuentra en mayor cantidad en Jos tejidos. El contenido de agua del organismo est relacionado con la edad y con la actividad metablica; es mayor en el embrin (90-95%) y disminuye con los aos. El agua acta como solvente natural de los iones y como medio de dispersin coloidal de la mayor parte de las macromolculas. Ms an, es indispensable para la actividad metablica, ya que los procesos fisiolgicos se producen exclusivamente en medios acuosos. En la clula el agua se encuentra en dos fracciones, una libre y otra ligada. El agua libre representa e l 95% del agua total y es la parte usada principalmente como solvente para los sol utos y como medio dispersante del sistema coloidal. El agua ligada representa slo el 5% y es la que est unida laxamente a otras molculas por uniones no cova!entes (seccin 2-10); as, comprende el agua inmovilizada en el seno de las macromolculas. Como resultado de la distribucin asimtrica de sus cargas, una molcula de agua se comporta como un dipolo, segn se ilustra en la figura 2- 1: A causa de esta propiedad, por sus grupos positivos y negativos el agua puede ligarse electrostticamente tanto con aniones y cationes como con molcu las portadoras de ambos tipos de carga (por ejemplo, protenas). Otra propiedad de la molcula de agua es su ionizacin en un anin hidroxilo (OH) y un proc de temperatura se disocian I0-7 M de H tn o ion hidrgeno (H). A 25 o por litro de agua, concentracin que corresponde al pH 7 neutro. El agua interviene en la eliminacin de sustancias de la clula. Adems absorbe calor (gracias a su elevado coeficiente calrico), lo cual evita que se generen cambios drsticos de temperatura en la clula. Sales. La concentracin de iones es distinta en e l interior de la clula y en el medio que la rodea. As, la clula tiene una alta concentracin de cationes K y Mg2+, mientras que el Na y el CI- estn localizados principalmente en el lquido extracelular. Los aniones dominantes en las clulas son el fosfato (HPO/-) y el bicarbonato (HC03-). Las sales disociadas en aniones (por ejemplo, Cl ) y carinuo ,, (N.1 1 y K') son i111porla111 s paramanl<ncr la prcsi<'> n osn161ica ,. tqoollli" , , ,, ,,,.,,.

ele la clula. La retencin ele iones produce un aumento de la presin osmtica y, por lo tanto, la entrada de agua. Algunos iones inorgnicos (como el Mg2) son indispensables como cofactores enzimticos. Otros forman parte de distintas molculas. El fosfato, por ejemplo, se encuentra en los fosfolpidos y en los nucletidos ; uno de stos, la adenosina trifosfato (ATP), es la principal fuente de energa para los procesos vitales de la clula. Los iones de Ca2 que se hallan en las clulas desempean un importante papel como transmisores de seales. Otros iones presentes en las clulas son el sulfato, el carbonato, etctera. Ciertos minerales se e ncuentran en forma no ionizada. As ocmTe con el calcio, que en los huesos y en los clientes se halla unido al fosfato y al carbonato bajo la forma de cristales. Otro ejemplo comprende al hieno, que en la hemoglobina, la ferritina, los citocromos y en varias enzimas se halla ligado por uniones carbono-metal. Para mantener la actividad celular normal son indispensables diminutas cantidades de manganeso, cobre, cobalto, yodo, selenio, nquel, molibdeno y cinc. Casi todos estos elementos vestigiales (u oligoelementos) son necesarios para la actividad de ciertas enzimas. El yodo es un componente de la hormona tiroidea.

ACIDOS NUCLEICOS
2-3. Existen dos clases de cidos nudeicos, el ADN y el ARN Los cidos nucleicos son macromolculas de enorme importancia biolgiTodos los seres vivos contienen dos tipos ele cidos nucleicos, llamados cido desoxirribonucleico (ADN) y cido ribon ucleico (ARN). Los virus contienen un solo tipo de cido nucleico, ADN o ARN. El ADN constituye el depsito de la informaci n gentica. Esta informa~ in es copiada o transcripta en molculas de ARN mensajero, cuyas secuencias de nucletidos contienen el cdigo que establece la secuencia de los aminocidos en las protenas. Es por ello que la sntesis proteica se conoce tambin como traduccin del ARN. A esta serie de fenmenos se le asigna el carcter de dogma central de la biologa molecular, que puede expresruse ele la siguiente manera:
~a.

transcripcin

traduccin

ADN

ARN

-----~

PROTEINA

El papel biolgico de los cidos nucleicos se estudiar detalladamente en los captulos 12 a 17; aqu se considerar slo su estructura qumica, lo que permitir comprender sus funciones. En las clulas superiores el ADN se halla en el ncleo integrando los cromosomas (una pequea cantidad se encuentra en el citoplasma, dentro de las mitocondrias y los cloroplastos). El ARN se localiza tanto en el ncleo (donde se forma) como en el citoplasma, hacia el cual se dirige para regir la sntesis proteica (tabla 2-l ). Los cidos nucleicos contienen hidratos de carbono (pentosas), bases nitrogenadas (purinas y pirimidinas) y cido fosfrico. La hidrlisis del ADN o del ARN genera: ARN ADN
PI !N'I'c)SA

dcsoxirrihosa

ribosa

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adcnina, llllllinn ('iltulhtn, liminn

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ci!osinn, umrilo

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24

FUNDAMENTOS DE BJOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

LOS COMPONENTES QU IMICOS DE LA CEL ULA

25

La molcula de cido nuc!eico es un polmero cuyos monmeros son nucletidos sucesivamente ligados mediante uniones fosfodister (fig. 2-2). En estas uniones los fosfatos ligan el carbono 3' de la pentosa de un nucletido con el carbono 5' de la pentosa del nucletido siADENINA guiente. En consecuencia, el eje del cido nucleico est constituido por las pentosas y los fosfatos, y las bases nitrogenadas surgen de las pentosas. E l extremo de la molcula que contiene la pcn tosa con el C5' libre se llama extremo 5', y el que posee la pentosa con el C3 ' libre, ex tremo 3'. Como ilustra la figura 2-2, el cido fosfrico utiliza dos de sus tres grupos cidos en las uniones 3',5'-dister. CITOSINA El grupo restante confiere al cido nucleico sus propiedades cidas, lo que posibilita la formacin de uniones inicas con protenas bsicas (en e l captulo 1-14 se seal que en las clulas eucariotas e l ADN est asociado con protenas bsicas llamadas histonas, con las que forma el complejo nucleoproteico deno minado cromatina). Adems, dicho grupo cido libre hace que los cidos nucleicos sean basfilos (se colorean con colorantes bsicos). Las pentosas son de dos tipos : desoxirribosa en el ADN y ribosa en el ARN. La diferencia entre estos azcares es que la desoxirribosa tiene un tomo de ox geno menos (fig. 2-2). Para visualizar el ADN con el microscopio ptico se puede utilizar una reaccin citoqumica especfica denominada reaccin de Feulgen (cap. 23-2 1). TI MINA Las bases nitrogenadas que se encuentran en los ci= CH3 dos nucleicos son tambin de dos tipos: pirimidinas y pu rinas. Las pirimidinas poseen un anillo heterocclico, mientras que las purinas tienen dos anillos fusionados URACILO Y= H entre s. En el ADN, las pirimidinas son la timina (T) y la citosina (C), y las purinas, la adenina (A ) y la guanina ( G ) (fig. 2-5). El.ARN contiene uracilo (U) en lugar de timina. Existen tres diferencias fundamentales e ntre el RIBOSA ADN y el ARN. Como acaba de sealarse, el ADN tiene =H desoxirribosa y timina (T) y el ARN posee ribosa y uraDESOXJRRIBOSA cilo (U). Otra diferencia es que la molcula de ADN es >' = H siempre doble (contiene dos cadenas polinucleotdicas), 3' como se ver en la prxima seccin. Fig. 2-2. Sector de una cadLa combinacin de una base con una pentosa (sin el fosfato) constituye un na de cido nucleico que nuclesido. Por ejemplo, la adenosina (adenina + ribosa) es un nuclesido, muestra los distintos tipos de mientras que la adenosina mono fosfato (AMP), la adenosina difosfato (ADP) nucletidos que la componen. y la adenosina trifosfato (ATP) son ejemplos de nucletidos (fig. 2-3). Adems de actuar como bloques para la construccin de los cidos nucleicos, los nucletidos -por ejem plo, el recin citado ATP- son utilizados para depositar y transferir energa qumica. La figura 2-3 muestra que las dos uniones fosfato terminales del ATP contienen gran cantidad de energa. Cuando se produce la hidrlisis de estas uniones, la energa liberada puede ser usada por la clula para realizar sus actividades (fig. 8- 1). La unin - P ele alta energa permite que la clula acumule gran cantidad de ella <'11 1111 <' ~pn <" o r ducido y que la mantenga lista para usarla en <.:1 moiiH:IIIo o 11 q111 "' ' 1'"" in.

Tabl 2:-1. Acidos nucleicos

Acido desoxirribonucleico Acido ribonucleico

Localizacin

. Principalmente en el ncleo (tambin en las mitocondrias y los cloroplastos) Informacin gentica Desoxirribosa Citosina
Timit1a

Principalmente en el citoplasma (tambin en el ncleo, las mito condrias y los oloroplastos) Sntesis de protenas Ribosa Citosina Uracilo Adenina Guanina

. Papel en la clula Pentosa Bases pirimidnicas Bases purnicas

Adenina

Guanin.a

Otros nucletidos, como la citidina trifosfato (CTP), la uridina trifosfato (UTP), la guanosina trifosfato (GTP) y la ti mosina trifosfato (TTP) , tienen tambin uniones de alta energa, pero la fuente principal de energa de laclula es el ATP. El ADN se encuentra e n los organismos vivos bajo la forma de molculas de muy alto peso molecular. Por ejemplo, la Escherichia coli tiene una molcula de ADN circulaJ de 3.400.000 pares de bases con una longitud de 1,4 mm. La cantidad de ADN en los organismos superiores puede ser varios cientos de veces mayor, 1.200 veces en el caso del hombre. As, el ADN completo mente extendido de una clula diploide humana tiene una longitud total de alrededor de 1,70 m. Toda la informacin gentica de un organismo vivo se encuentra acumulada en la secuencia lineal de las cuatro bases de sus cidos nucleicos. La eslructura primaria de todas la protenas (es decir, la cantidad y la secuencia de sus aminocidos) es codificada por un alfabeto de cuatro letras (A, T, G, C). Uno de los descubrimientos ms extraordinarios de la biologa molecular fue 1 hallazgo y la interpretacin de este cdigo gentico (cap. 13-4). Un paso previo a ese descubrimiento -que tuvo una gran influencia en la dil ucidacin de la estructura del ADN- fue conocer que en cada molcula d.; ADN la cantidad de adenina es igual a la de timina (A= T) y la de citosina igual a la de guanina (C = G). En consecuencia, el nmero de purinas es idntico al de pirimidinas (A + G = C + T ). Como es lgico, la relacin 1 \'1'/GC vara entre las especies (por ejemplo, en el hombre la relacin es de 1,52 y en la Escherichia coli es de 0,93).
') 4. El ADN es una do bl e hlice

En 1953, basndose en los datos obtenidos por Wilkins y Franklin mediante difraccin de rayos X, Watson y Crick propusieron un modelo para la

Fig. 2-3. Estructura qumica

IICl ( lll
N udn lldt1

del nuclc6sido adcnosina y

del nudc61ido adcnosina ll'i
ln.lnht CA'f'l'),

26

FUNDAMENTOS DE BIO LOGfA CELULAR Y MOLECULAR

2 LOS CO MPONENTES QU!MlCOS DE LA C ELULA

27

estructura del ADN que contemplaba las propiedades qumicas antedichas, pero tambin las propiedades biolgicas, en especial la capacidad de duplicacin de la molcula. La molcula de ADN se ilustra en la figura 2-4. Est formada por dos cadenas de cidos nucleicos helicoidales con giro a la derecha, que componen una doble hlice en torno de un mismo ej e central. Las dos cadenas son antiparalelas , lo cual significa que sus uniones 3',5'-fosfodister siguen sentidos contrarios. L as bases estn situadas en el lado interior de la doble hlice, casi en ngulo recto con respecto al eje helicoidal. Cada vuelta completa de la doble hlice comprende 10,5 pares de nucletidos y mide 3,4 nm. Ambas cadenas se hallan unidas entre s mediante puentes de hidrgeno establecidos entre los pares de bases (seccin 2- 10). Puesto que entre las pentosas de las cadenas opuestas existe una distancia fija, pueden establecerse dentro de la estructura solamente ciertos pares de bases. Como se advierte en las figuras 2-4 y 2-5 , los nicos pares posibles son A-T , T-A, C-G y G-C. Es importan te observar que entre las A y las T se forman dos puentes de hidrgeno, y entre las C y las G, tres. En consecuencia, el par C-G es ms estable q ue el par A-T. La doble estructura helicoidal se mantiene estabilizada gracias a los puentes de hidrgeno y a las interacciones hidrofbicas existentes entre las bases de cada cadena . Si bien en las distintas molculas de ADN las secuencias de las bases a lo largo de las cadenas varan considerablemente, en una misma molcula de ADN las secuencias de las dos cadenas son complementarias, como se aprecia en el siguiente ejemplo: Cadena J Cadena 2
5' T
1

5'

3'

Fig. 2-5. Los dos pares de bases del ADN. Las bases complementarias son adenina y ti mina (A-T ) y citosina y guanina (C-0). Obsrvese que en el par A-T hay dos puentes de hidrgeno, mi entras que en el

par C-G existen tres. La distancia entre las cadenas de de-

3' A

1 1 G A

G A 1 1

e
1

G T 3'

soxirribosa-fosfato es de aproximadamente 1,1 nm. (De L. Pauling y R. B. Corey.) 11ucletidos A-U y C-G entre varias regiones de la misma molcula. Las figuras 14-20 , 15-4, 15-5, 15- 11 y 16-3 muestran cmo la mol cula de ARN puede aparear algunas de sus pai es. En ellas suele formarse una estructura l1elicoidal semejante a la del ADN. Las estructuras tridimensionales de los /\ RN tienen importantes consecuencias biolgicas.

A 5'

Debido a esta propiedad , al separarse las cadenas durante la duplicacin del ADN, cada cadena individual sirve de molde para la sn5' 3' tesis de una nueva cadena complementaria. De este modo se generan Fig. 2-4. Se muestra la doble dos molculas hij as de ADN con la misma constitucin molecular que posea hlice del ADN . Las cadenas la progenitora (cap . 17-2). desoxirribosa-fosfato se dibu jaron como cintas. Las bases 2-5. Exist en varios tipos de ARN son perpendiculares al eje del ADN, de ah que en esta vista La estructura del ARN es semejante a la del ADN, excepto por la presenlateral aparezcan representa das por barras horizontales. cia de ribosa en lugar de desoxirribosa y de uracilo en lugar de timina (tabla Advirtase que las dos cade 2-1). Adems, la molcula de ARN est formada por una sola cadena de nunas son antiparalelas y que la cletidos. doble hlice da una vuelta completa cada 10 pares de ba Existen tres clases principales de ARN: 1) ARN m ensajero (ARNm); 2) ses (3,4 nm). Obsrvese ade ARN r ib osmico (ARNr), y 3) A RN de transferencia (ARNt). Los tres ms que la doble hlice da luintervienen en la sntesis proteica. El ARNm lleva la informacin gentica gar a dos bendiduras exteriores, el surco mayor y e l surco -copiada del ADN- que establece la secuencia de los aminocidos en la menor del ADN. protena. El ARNr re presenta el 50% de la masa del ribosoma (el otro 50% son protenas), que es la estructura que proporciona el sostn molecular para las reacciones qumicas que dan lugar a la sntesis proteica. Los ARNt identifican y transportan a los aminocidos hasta el ribosoma. Aun cuando cada molcula de ARN tiene una sola cadena de nuc le6tidos, eso no significa que se encuentra siempre como una estru~ tlll'll liut:JI siJllpl . En las molculas de ARN suelen ex istir tramos l:Oll has,... ' '""'I,J, '"' 111111 !IS , lo que cla lu gar a pucnl<'s dt hidr!lg<'ll<>. <'S tk r i1 . 1 1 lu 1~>111 111 11111 d1 1""' 1 ,J,

HIDRATOS DE CARBONO
2-6. Los hidratos de carbono const it uyen la princi pal fuente de energ a de la c lula
Los hidratos de carbono, compuestos por carbono, hidrgeno y ox[geno, re presentan la principal fuente de energa para la clula y son constituyentes structurales importantes de las membranas celulares y de la matriz extracelular. De acuerdo con el nmero de mo nmeros que contienen, se clasifican un monosacridos, disacridos, oligosacridos y polisacridos . Monosacridos. Los monosacridos son azcares simples con una frmub general C 11 (H 2 0 ) 11 Sobre la base del nmero de tomos de carbono que ,<>nti cnen, se clasifican en triosas, tetrosas, pentosas y hexosas. Cnnto vimos, las pcntosas rihosa y desoxirribosa se hallan en los nucl.erid<>s ( f'i g. 2-2). l .a losa 's 1111:1 pentosa presente en algunas glicoprotenas (1 ig. ' 11 ). l .n glrti'II.Wt, qu s una li 'xosa ( fig. 2-6), constituye la fuente prilll!n ill dt l'lll'll' fll pfll lt 111 v lnl:t. t )!las lil' X t~s!l s IIIIIY difnndid;ts q u ' su len , ~JI I u l 'ltlt 1nd .,r. t 'IIIH ,r lt!I Jtl h1lnrn11 clt illi r nnJu'nrldon o pnli ~n, rid l)s .~ tHJ
1

h1 1Jtl ftlt'/tHtl !11 llltlllll\11, 111

fi tu/o,\fl , ltl ( llt' fl,\11 ,

J t lt' /t /o u ftu 't ll

,;,,., V t l titJ

28

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR 2. LOS COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA

CH2 0H H

29

~H
1

---o
HNCOCH3

o - CH - TH 90

NANA - Gal - GlcNAc " Gal- GaiNAc -O- ST Gal - GaiNAc /

GalNAc

S erina

Fig. 2-7. Oligosacrido conectado a una protena por medio de una unin 0-glicosdica. ST, serina o treonina; NANA, cido N-acetilneuramnico; GalNAc, N-acetilgalactosamina; GlcNAc, N-acetilglucosamina; Cal, galactosa.

CH,OH -- - 0

CH,
1

~H
1

o - eH - TH HNCOCH3 ?O

Protena

GaiNAc

Treonina

do idurnico. Algunas poseen un grupo amino y se hallan acetiladas, como la N-acetilglucosamina y la N-acetilgalactosamina. El cido N-acetilneuramnico (o cido silico) resulta de la unin de una aminohexosa con un compuesto de tres carbonos, el cido pirvico. Disacridos. Los disacridos son azcares formados por la combinacin de dos monmeros de hexosa, con la correspondiente prdida de una molcula de agua. Por lo tanto, su frmula es C 12 Hz 201 1 Un disacrido importante en los mamferos es la lactosa (glucosa + galactosa), el azcar de la leche. Oligosacridos. En el organismo los oligosacridos no estn libres sino unidos a lpidos y a protenas, de modo que son parte de glicolpidos y de glicoprotenas. Estos hidratos de carbono son cadenas -a veces ramificadascompuestas por distintas combinaciones de varios tipos de monosacridos. Los oligosacridos correspondientes a los glicolpidos sern analizados junto con los lpidos en la prxima seccin. Los oligosacridos de las glicoprotenas se conectan con la cadena proteica por intermedio del grupo OH (enlace 0-glicosdico o unin 0) de una serina o de una treonina o a travs del grupo amida (enlace N-glicosdico o unin N) de una asparagina. La serina, la treonina y la asparagina son aminocidos (seccin 2-8). Por parte del oligosacrido, en los enlaces 0-glicosdicos suele intervenir una N-acetilgalactosamina, y en los N-glicosdicos, una N-acetilglucosamina (figs. 2-7 y 2-8). Por lo tanto, estos monosacridos son los ms cercanos a la protena. Contrariamente, los cidos silicos a menudo se localizan en la periferia del oligosacrido.

Los oligosacridos enlazados mediante uniones O (es decir, a una serina o a una treonina) suelen poseer una galactosa unida a la primera N-acetilgalactosamina (fig. 2-7). A continuacin, los restantes monosacridos se combinan en forma diferente segn el tipo de oligosacrido. Los oligosacridos enlazados mediante uniones N contienen un ncleo pentasacrido comn, compuesto por dos N-acetilglucosaminas (una de ellas ligada a la asparagina) y tres manosas (fig. 2-8). Los restantes monosacridos se unen a este ncleo en distintas combinaciones, lo cual genera una extensa variedad de oligosacridos y, por ende, una gran diversidad de glicoprotenas. Debe sealarse que el nmero de cadenas oligosacridas que se ligan a una misma protena es muy variable. Polisacridos. Los polisacridos resultan de la combinacin de muchos monmeros de hexosas, con la correspondiente prdida de molculas de agua. Su frmula es (C 6 H 100 5 )n. Al hidrolizarse dan lugar a monosacridos. Los polisacridos como el almidn y el glucgeno representan las sustancias de reserva alimenticia de las clulas vegetales y animales, respectivamente ( fig. 2-9). Otro polisacrido, la celulosa, es el elemento estructural ms importante de la pared de la clula vegetal (fig. 3-30). Los tres polisacridos nombrados son polmeros de glucosa, pero difieren porque exhiben distintos tipos de uniones entre sus monmeros. Por ejemplo, 1 glucgeno es una molcula ramificada en la que las glucosas estn ligadas por uniones al-4 y al-6 (fig. 2-9). Existen polisacridos complejos llamados glicosaminoglicanos (GAG), qu e estn compuestos por una sucesin de una misma unidad disacrida en la qu e uno de los dos monmeros es un cido glucurnico, un cido idurnico " una galactosa y el otro posee un grupo amino, puesto que es una N-acetil.Iucosamina o una N-acetilgalactosamina (fig. 2-10). Los GAG ms difundidos son el cido hialurnico, el condroitinsulfato, ,. dermatansulfato, el heparansulfato y el queratansulfato. En la tabla 6-1

Fig. 2-9. El glucgeno es una molcula ramificada que contiene hasla 30.000 unidades de glucosa. Las uniones glucosdicas se establecen entre los carbonos 1 y 4 de las glucosas, excepto en los puntos de ramificacin ( 1 y 6). La parte superior de la figura muestra la molcula con pequeo aLimento. En la parte inferior se halla representada la composicin qumica del segmento molecular resaltado.

NANA- Gal - Man "Man- GlcNAc - GlcNAc- N NANA - Gal - Man / A

Fig. 2-8. Oligosacrido conectado a una protena por medio d ~..: una uni6n N-)'.lic;osrdi(.;H.

GlcNAc

llnpnrnnlna

Mun, n nulu':r r: A . ll':pnln f irlll

~
'f;ll

HcXH2

HO H2

HO~H 2

11

R
H

11

111

1111

fl

11

)1

1 lH

11

'111

30

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULA R Y MOLECULAR

2. LOS COMPONENTES QUIM!COS DE LA CELULA

31

CH, -O H

+ HOOC-(CH, ln-CH,

CH,- 0 -CO-(CH,In-CH,
1

+ H,O + H,O + H,O

Agua

-- 0

o~
NH

'
0 1
0 :

'

' '

o~ s !-C)'o~
0
1

'

CH O

OH

+ HOOC-(CH,In-CH, + HOOC-(CH21n-CH,
Acidos grasos

CH 2 - 0 -CO - (CH, ln-CH,

1
CH 2 -0-C0-(CH2 ln-CH,

NH

'' ' "n

CH2 -0H

NH

Glicerol

Triacilglicerol

Fig. 2-12. Formacin de un triacilglicerol con el concurso de un glicerol y tres cidos grasos.

Fg. 2-10. Representacin de un pequeo tramo de un glicosaminoglicano (GAG). A , cido glucutnico o cido idur

nico o galactosa; B. N-acelilgalaclosa mina o N-acelilglucosamina.

se mencionan las unidades disacridas repetitivas que los integran; como puede apreciarse, con excepcin del cido hialurnico. se hallan sulfatados. Casi todos los GAG se encuentran ligados a protenas, con las que forman glicoprotenas complejas llamadas proteoglicanos (fig. 2- J 1). Estas molculas prevalecen en el medio extracelular (cap. 6-3). El GAG se une a la protena mediante un tetrasacrido integrado por una xilosa, dos galactosas y un cido glucurnico. La xilosa se conecta con una serina de la protena mediante una unin O, mientras que el cido glucurnico lo hace con la pri mera hexosa del GAG.

Los triacilgliceroles sirven como reserva de energa para el organismo. Sus cidos grasos liberan gran cantidad de energa cuando son oxidados, ms del doble de la que liberan los hidratos de carbono. Fosfolpdos. En las clulas existen dos c lases de fosfolpidos, los glicerofosfolpidos y los esfingofosfolpidos. Los glcerofosfolpidos tienen dos cidos grasos unidos a una molc ula de glicerol, ya que el tercer grupo hidroxilo de este alcohol se halla esterificado ~on un fosfato, unido a su vez con uo segu ndo alcohol (fig. 2-1 4).
CH, - 0 - CO - !CH,l,- CH,
1
/Etanolam~r1a

LIPIDOS
2-7. Los triac:ilg liceroles, los fosfolpidos y los esteroides son los lipidos ms abundantes de la clu la

CH 1

0 - CO - (CH,I, - CH,

Alcohol
1
1

~Colina

Senna

CH 2 -0H

O= P - 0 -

~ l nositol

Los lpidos son un grupo de mo lculas caracterizadas por ser insolubles en agua y solubles en los solventes orgnicos. Tales propiedades se deben a que poseen largas cadenas hidrocarbonadas alifticas o an illos bencnicos, que son estructuras no polares o hidrofbicas. En algunos lp iclos esas cadenas pueden estar ligadas a un grupo polar que les permite unirse al agua. Los lpidos ms comunes de la clula son triacilgli ceroles, fosfolpidos, glicolpidos, esteroides y poliprenoicles. Triacilgliceroles. Los triacilglceroles (o triglicridos) son tristeres de cidos grasos con glicerol. Cada cido graso est constituido por una larga cadena hidrocarbonada , cuya frmula general es: COOH
1

Diacilglicerol

o
1

CH, - - CH - - CH, CH, - 0 - CO - (CH,I,1

CH,

o
1

CH- o-CO - (CH 2 ),- CH 3

1

eH,- o -

_.....oP;:;;:gH

C=O
1 (CH,I..

Acido fosfatdico Fig. 2-13. Frmulas del diacilglicerol (DAG) y del cido fosfatdico (AF).

CH 3

1 C=O 1 (CH 21 ..

CH 3

Fig. 2-14. Estructura qum ica general de los glicerofosfolpidos.

(CH2)n
1

Cl-1 3

La combinacin del glicerol con los dos cidos grasos y el fosfato da lugar a una molcula llamada cido fosfatdico (AF) (fig. 2-1 3), que constituye la estructura bsica de los glicerofosfolpidos. Como se acaba de sealar, .;stos poseen un segundo alcohol, que puede ser la etanolamina, la serina, la olina o el inositol (fig. 2-14). Con ellos se obtienen los fosfolpidos llama' lt" fosfatidiletanolamina (PE), fosfatidilserina (PS), fosfatidilcolina (PC)

Fig. 2-11. Representacin de un proteoglicano. Se muestra el modo como el GAG se une a la protena. AcG/u, <icido

glucurnlco; CaL, galactosa;

Xil, xilosa.

Los grupos carboxi lo de estos cidos reaccionan con los grupos hidroxilo del glicerol de la manera expuesta en la figu ra 2-1 2. Cuando slo dos carbonos del glicerol se hallan li gados a cidos grasos, la molc ula se llama diacilglicerol (DAG) (fig. 2- 13). Los cidos grasos tienen siempre un nmero par de carbonos, ya que se sintetizan a partir de grupos acetilo de dos carbonos. Por ejemplo, el cido palmtico tiene 16 carbonos, mientras que el esterico y el oleico poseen 18. La cadena hidrocarbonada suele exhibir uniones dobles (- C=C-), y en este caso se dice que el cido graso es insaturado. Estas dobles ligaduras son importantes porque producen angulosidades en las cadenas hidrocarbonadas (fig. 2-20).

jsfatidilinositol (PI) (fig. 2- 15).

~ll.l
CH ~
1 11

Fig. 2-15. Representacin de los glicerofosfolpidos fosfatidiletanolami na (PE), fosfati di lserina (PS), fosfatidilcolina (PC) y fosfatidilinositol (PI ).

~HJ

CH, H3C......_. ~ _...CH 1

H- c - coo

CH,
HO

'

' CH,
o
O= ~ - o

o
1)

,
1

o
o
1

' ' ~H~

1

HO

o ~ ~ - o

o
1

"O
o~

OH

OH

o 1

o C:ll '

o
CH 2 - ?H -7H1

P- o l o 1

' o '

Cll

CH1

CH 2 - CH - CH 1

CH1 - CH - CH,

' o '

' o
'

' o
1

o
'

o
1

' o

U! ,

Cll
1

NH 1

'" 1
IHir l l UH fi dd11
1

' 111

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1 q ll!lhlll
t !lhlil

'

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'

lnnfHIIdllh lnl ilol

rr

32

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

2. LOS COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA

33

o
Q;:;~-0 1

a
o =~-oo:. P-o

CH, H 3C....._.~_...CHl
1

o J11 oi ) oH

?.
o
11

i ) l o - ?" P-o

CH,
1

o
HO OH

CH,

HO

OH

o
O = P- 0
1
1 1

O= P- o

o 1
1

O = ~ - o1

6
O
1

OH
1

o
1 1

CH - c:H - JH
o 1 o 1

CH,-c:H -

TH,
o 1

C H,- ?H - ?H
NH
1

OH
1

OH
1

OH
1
1

OH
1

CH, -CH - CH

CH,-CH- CH
"NH,

CH
11

o 1

Fosfalidilinositol fosfato

Foslatidilinositol difosfalo

ff

Fosfatidilinositol trifosfato

ff

Esfingomielina

lf
~H , e
H,C- ~ -CH,

~H

~H

~H

Cera mida

'l f f
Esfingosina

Dado que el nositol del PI suele estar combinado con uno, dos o tres los glicerofosfolpidos fosfatifosfatos, la clula tiene tambin fosfatidilinositol 4-fosfato (PIP), fosfatidilinositol fosfato (PIP). fosdilinositol 4,5-difosfato (PIP2 ) y fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfato (PIP3 ) falidilinosilol difosfa1 o (PIP, ) y fosfatidilinositol trifosfato (fig. 2-16). (PIP,). Por otra parte, en la membrana interna de las mitocondrias existe un glicerofosfolpido doble denominado difosfatidilglicerol, al que comnmente se le da el nombre de cardiolipina (cap. 8-11 ). Lo componen dos cidos fosfatdicos ligados entre s por una tercera molcula de glicerol (fig. 2-1 7). El esfingofosfolpido existente en las clulas es la esjingomielina, que se genera por la combinacin de la fosforilcolin a con la ceramida (fig. 2-18). La fosforilcolina (un fosfato unido a la colina) se halla tambin en la fosfatidilcolina (fig. 2-15), mientras que la ceramida se forma por el agregado de un cido graso a la esjingosina, que como ilustra la fi gura 2- 19 es un aminoalcohol que posee una cadena hidrocarbonada relativamente larga. La figura 2-20 muestra que los fosfolpidos poseen dos largas colas hidrofbicas no polares (dos cidos grasos) y una cabeza hidroflica polar constituida por glicerol (excepto en la esfingomielina), un segundo alcohol y un fosfato. Por lo tanto, los fosfolpidos son molculas anfipticas. Los fosfolpidos son los principales componentes de las membranas celulares y tanto su anfipata como las caractersticas de sus cidos grasos (nmero de carbonos, presencia de dobles ligaduras) les confieren mu?H~-?H - 7H 1 chas de sus propiedades. Ms an, cuando los fosfolpidos se disperO OH O 1 1 O = P - OH HO - P= O san en agua, adoptan espontneamente una organizacin idntica a la 1 1 o o de las membranas celulares, con sus cabezas polares dirigidas hacia 1 1 ?H,- ?H- CH CH - yH - ?H afuera y sus colas no polares enfrentadas entre s en el interior de una o o o o 1 1 1 1 bicapa (cap. 3-2). Glicolpidos. Los glicolpidos presentes en las clulas se clasifican en cerebrsidos y ganglisidos. Los cerebrsidos se forman por la unin de una glucosa o una galactosa con la ceramida (fig. 2-21). As, se trata de esfingomielinas cuyas fosforil colinas se reemplazan por uno de esos monosacridos. La estructura bsica de los ganglisidos es similar a la de los ceCardiolipina rebrsidos, pero el hidrato de carbono no es la glucosa ni lagalactosa sino un oligosacrido integrado por varios monmems, tlltll :1 l rl's d Fig. 2-17. Molcula del difosfatidilgicerol o cardiolipina. r1 do 1'"" los cuales son cidos silicos (fi g. 2-22). Los distintnr. lou o
Fig. 2-16. Representacin de
1 1 1

Fig. 2-18. Representacin del esfingofosfolfpido esfingomielina (EM).

Fig. 2-19. Representacin de las molculas de ceramida y esfingosina.

glisidos difieren entre s tanto por el nmero como por el ordenamiento relativo de sus monmeros. El monosacrido unido a la ceramida es casi siempre una glucosa y a continuacin se ubica una galactosa. Luego suele hacerlo una N-acetilgalactosamina o una N-acetilglucosamina, y luego otra glucosa u otra galactosa. A veces existe una fucosa. Generalmente el o los cidos silicos se localizan en la parte final del oligosacrido.

Colina {

Fosfatot

o o-l -o0 1
0 1

'" 1 '1"

~
H 1 H 1

Cabeza hrdrotflica

Glicerol

"-e--c--e-"
1 1

o
O=C

1 o

o= e

"CHz. Hz.C,
CH,

'
/

"'
H,e
/

eH,

'/ eH,
eH,
/

"'' eH,
H,e
Oleato y palmltato
/

Hz.C,
H,C
/

He H,e

' eH,

' eH,

Colas hidrofbicas

H,e H ,e

---+-"'e H
/

, ' eH
CH,

ff 'ri

,CHa

'

H1 C,

eH, / H,c, . _,eH,

H1C'

"'

' '' "

/

HtC,
CH,

eH,

J<'lu. 2-211. l'osfoiCpido ~"" Nll " 'ho7n hhJrorrlicn y sus do.~ colns hidrof'hicns. El fosfolfpi, "1""'"'"'""" " 111 pnliiiii,JI "lt-11 for.I'nlitllkolllln, Oh:u .\,vcso f!lll" In tmlt.11 doble t\11 d t'ldn uh h 11 prudiH't 1111 lllnhlo d( dlH~l'l i llt~ll In t\IHk nn hidrnt'lllhouudn (//tldllll.

34

FUNDAMENTOS DE BIOLOOIA CELULAR y MOLECULAR

2. LOS COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA

35

HocH,oH o OH
O- CH1 CH-

OH
Glucosa

~H
O= C
1

~H ~H
CH
11

OH

H,c-rNH"t.-c",~" coo~~o"-l ~o"-!

OH
Acido silico

PROTEINAS
?H

~~ 0 ~0-CH, -CH-CH
OH
Galactosa

2-8. Las protenas son cadenas de aminocidos ligados por uniones peptdicas Los monmeros que componen las protenas son los aminocidos. Un aminocido es un cido orgnico en el cual el carbono unido al grupo carboxilo (-COOH) est unido tambin a un grupo amino (-NH2 ) . Adems, dicho carbono se halla ligado a un H y a un residuo lateral (R), que es diferente en cada tipo de aminoc ido.
H
1

OH
Glucosa

~H

~H

o galaclosa

O= ~

~H

Cerebrsido Fig. 2-21. Representacin de un cerebrsido. Ganglisido Fig. 2-22. Representacin de un ganglisido.

H,N -

C1
1{

COOH

Esteroides. Los esteroides son lpidos que derivan de un compuesto denominado cic lopentanoperhidrofenantreno. Uno de los ms difundidos es el colesterol (fig. 2-23), el cual se encuentra en las membranas y en otras partes de la clula y tambin fuera de ella. El hidroxilo de su carbono 3' le confiere propiedades anfipticas. Los esteroides asumen funciones diferentes de acuerdo con los grupos qumicos que se hallan unidos a su estructura bsica. Los principales esteroides del organismo son las hormonas sexuales (estrgenos, progesterona, testosterona), las hormonas suprarrenales (cortisol, aldosterona), la vitamina D y Jos cidos biliares. Polipr enoides. Los poliprenoides son compuestos que derivan del hidrocarburo isopreno (fi g. 2-24). Entre ellos se halla el d olicol fosfato, una molc~la pertenec iente a la membrana del retculo endoplasmtico diseada para mcorporar oligosaciridos a los polipptidos durante la formacin de las glicoprotenas (cap. 7- 16). Se trata de una cadena de 17 a 2 1 isoprenos que COntiene entre 85 y 105 tomos de carbono, esterificada con un fosfato (fig. 2-24). Otro poliprenoide com n en las clulas forma parte de la u biquinona, una molcula de la membrana mitocondrial interna (cap. 8-11) que consta de una cadena de 10 isoprenos y de una be nzoquinona (fig. 2-24).
CH2
11

y - CH3 CH

CH,

CH,

CH-(CH2 ) 3-CH CH,

1-----, ' CH ' : 11 :

: C- CH 3
: CH : CH CH
1
:

CH

11

:tH:----;
1 '

' 1

'
:

' 11

-1 --- --n (15a 19)

2

lsopreno

: CH- CH 3 :
11

?H - CH3

Benzoqulnona

yH,

H,~~~(!~)
' 1

: CH

'

CH2 - 0 - PO,"'
Colesterol Dolicol fosfato

oV

ocH,

OCH3

Ulllqlllll

llfl

Flg. 2-23. Multl uln ele- rok.'ll (rol, dtivudH dt'l oupu sin
tf< 1 / l ' lllfllllltl'l IJ illlllldo tlt ~J.,Jilllll lllltiJinlldthtd t\IIUIIIIt \llll,

1/lllf'll' llnl) V

FIM. 2 24. Molc(\'IIIH dt dollt HI (111111p1u 111 ~~~~~ 1/ 1 '1 dt nh lqn l nun ll ~11111 11 111 1 HJIII q 111 j

Por ejemplo, en la alanina la cadena lateral R Ltcue un solo carbono, mientras gue en la Jeucina tiene cuatro. La figura 2-25 mueslra la estructura de los 20 tipos de aminocidos existentes en las protenas. Dos son cidos (cido asprtico, cido glutmico); tres son bsicos (histidina, lisina, arginina); cinco son neutros polares, es decir, hidroflicos (serina, treonina, tirosina, asparagina, glutamina), y diez son 11eutros no polares, es decir, hidrofbicos (glicina, alaniria, valina, leucina, isoleucina, cistena, prolina, fenilalanina, triptfano, metionina). Los nombres de los aminocidos se abrevian utilizando las tres primeras letras de la nomenclatura inglesa (salvo cinco excepciones) o medi.ante un cdigo que emplea una sola letra. Advirtase gue dos de los aminocidos contienen un tomo de azufre. En el caso de la cistena, dos molculas de ella pueden formar un puente disulf'uro (-S-S- ). Esta unin es de tipo covalente, ya que los tomos de H de ambos gmpos -SH son eliminados (fig. 2-27). La combinacin de los aminocidos para formar una molcula proteica se produce de modo tal que el grupo NH2 de un aminocido se combina con el grupo COOH del aminocido siguiente, con prdida de una molcu la de agua (fig. 2-26). La combinacin -NH-CO- se conoce con el nombre de unin peptdica. La molcula formada mantiene su carcter anfotrico porque siempre contiene un grupo NH2 en un extremo (ami no terminal) y un grupo COOH en el otro extremo (carboxilo terminal), adems de los residuos laterales bsicos y cidos. Una combinacin de dos aminocidos constituye un dipptido; de tres, un tripptido. Cuando se unen entre s unos pocos aminocidos, el compuesto es un oligopptid o (fig. 2-26). Finalmente, un polipptido est formado por muchos aminocidos. La protena ms grande del organismo contiene alrededor de 27.000 aminocidos (cap. 5-33). La distancia entre dos uniones peptdicas es de aproximadamente 0,35 nm. Una protena con un peso molecular de 30 kDa est constituida por 300 aminocidos y, extendida, tiene una longitud de unos 100 nm y un ancho de !11m. El trmino protena (del griego protefon, preeminente) sugiere que todas las funciones bsicas de las clulas dependen de protenas especficas. Se p11 d~,; decir que sin protenas la vida no existira; estn presentes en cada cilil;t y n cada or unoidc. Ade ms, pueden ser estructurales o e nzimticas. 1\x islt'll III'Utcnns cm\ju~udus, unidas a porciones no proteicas (grupos p1t>111l'lirw: ), 1\ r ~ laral corfa p ncncccn las :licopmlef11as (asociadas con hiolt itlooM ,, , t 'l llllllllOI) , l aN ll lll'floolfol 11f11a. \' ( t' OIII I<"d01s IIIW!ciros) . las lipopr o l,,l,llt \
(ttlll f' l ll

tl'l) y l 11 ~

t ' ltiiii iiJI HIItf , t l\' ,

qw lh ' lll ' lt

t ' lllltn

rn u un~.!< tl, ,,

36

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

2. LOS COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA

37

un pigmento. Dos ejemplos de cromoprotenas son la hemoglobina y la mioglobina, en las cuales el grupo prosttico es el hem, un compuesto orgnico que contiene hierro y que se combina con oxgeno.

H- N-e-C-OH 1

H H O

H H

11

+
Unin

H-N-C-C-OH H-C l OH

11

H-~-b-~-~-b-~-OH
CH,

H HO H HO

,~,-

H- C-OH

~O

re) '"
oH
OH H OH H OH H O

Acido asprtico

Acido glutmico

Histidina

Lisina

Arginina

(Asp)(D)

(Giu)(E) H

(His)(H)

(lys) (K)

H,N-c-cooeH, 1 e

1
H,N-e-eOO

H,N-e-eoo-

K
1 H 3 N-C-eOO 1 eH, 1 eH, 1 eH, 1 eH, 1 NH,
+

'

1
eH,

H 3 N-e-eoo-

.~
1

(Arg) (l<)

OH H H
/\mino terminal

OH H

1
CH 1 1 e=eH 1 1 NH HN ~ 1 e

1
eH, 1 eH, 1 eH, N- H

H-N-C-C-N-C-C-N-C-C-N-C-C-N-C-C-OH

11

11

11

11

11

Carboxilo terminal

1
CH 1

1
H C - 0 1-1

1
CH1
1

1
CH 7
CH~

1
CH1

1
CH, 1 e

~\

o-

11

_.,. ...._,

'l

CH

h C 7

1
O

~ .
1

CH -....

H3C

CH 1

~\

Y'

...-)

CH,

Fig. 2-26. Fonnacin de una unin peptdica e ntre dos aminocidos. Se muestra tambin un pentapptido integrado, desde el termi nal ami no al temnal carboxilo, por una tirosina, una treonina, un cido asprtico, una metionina y una leucina.

OH

1
e=NH 1 1 NH 1

2-9. En las protenas existen cuatro niveles de organizacin estructural

En la estructura de las protenas se distinguen cuatro niveles sucesivos de '1rganizacin. La estructura primaria comprende la secuencia de los aminocidos que rorman la cadena proteica (fig. 2-27). Tal secuencia determina los dems nivdes de organizacin de la molcula. Su importancia biolgica encuentra un <.:jemplo en la enfermedad hereditaria llamada anemia falciforme, en la cual se producen profundas alteraciones funcionales por la sustitucin de un solo !llninocido en la molcula de hemoglobina. La estructura secundaria alude a la configuracin espacial de la proteua, que deriva de la posicin de determinados aminocidos en su cadena. As, ulgunas protenas (o partes de ellas) tienen una forma cilndrica denominada hlice a (a, porque fue la primera en ser descubierta); en ella la cadena polipeptdica se enrolla en torno a un cilindro imaginario debido a que se forman puentes de hidrgeno entre los grupos amino de algunos ami.nocidos y los grupos carboxilo de otros situados cuatro posiciones ms adelante (fig. 2-28). Otras protenas (o partes de ellas) exhiben una estructura llamada hoja plegada {3; en ella la molcula adopta la configuracin de una hoja plegada debido a que se unen, mediante puentes de hidrgeno laterales, grupos a mino con grupos carboxiio de la misma cadena polipeptdica (fig. 2-28).

ACIDOS

BASICOS

Serina

Treonina

Tirosina

Asparagin a

Glutamina

(Ser) (S)

(Thr)(T) H H,-e-eoo-

HaN-e-eoo-

(Tyr)(Y)

(Asn)(N) H H,N-e-eoo+

(Gin) (Q) H

H 3 N-e-eoo-

1
1

H,N-e-eooeH,

1
e11,
1

1
H - C-OH
1

1 e H,

1
eH,

OH

eH,

Q
OH
V atina

#\

1
NH 1

1
eH,

~\

NH 1

NEUTROS POLARES

Glicina

Alanina

leucina
(le u) (l)

(Giy)(G)

(Aia)(A)

(Vai)(V)

lsoleucina (lle) (1)

1
1

H,N-c-coo-

H,N-e - eoo-

1
1

eH,

H,N-c-coo1 eH / '\ Cll, CH 3

H,N-C-eoo-

1
eH,

H 1 H,N - c-eoo-

1
eH

/'\
eH, eH,

eH

CH,
Cisterna Prolina

/'\
CH,

1
CH,
Metion ina

(Cys)(C)

(Pro)(P)

Fenilalanina (Phe) (F)

Tript fano

H
+

H,N-c-eoo-

H 1 N-e-Coo-

H
+

1
1

H,N-C-eC><Y CH,

H,N-c-eoo-

(Trp)(W) H

(Met)(M) H H,N-c-coo+

1
eH,
1

1
eH,

1
eH 1

H,e

SH

"-/ CH,

eH,

NEUTROS NO POLARES

()j
N H

1
eH, 1

S
1 CH 1

Fig- 2-27. Estructura primaria de unu protena (ribonuclcusu pnn nlttil;n hovinn). V nnsc lo:. t' llnlw p1wn1t tllmdi111o
f~ lllll '

Fig. 2-25. F.structura qufmica de los

I ,IW cstruc.:tntllll cpw
Nt'l'lll,'llt'IIITIIII

inlc :uninmkidos, lnsi l'ii;lldos '11 niclo.'i, htSiC'OS,

lll.'lii!Oil

polntt'"l V 111 11111 1

1111 poltllt ~ .

11111

d rl lf~fuml ,

(1 ,. 1 ', U

dtlmjn tk IoN ntupur: !llll iuu y 1'/nhox Hu ;Htulur/ I'Hi kiiU /1 lult' t ll lt 11 1

u lln ~ , 11

38

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULA R Y MOLECUL AR 2 . LOS COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA

39

2-1 O. Distintos tipos de un iones qumicas determina n la estructura de las protenas

F ig. 2-28. Estrucrur~s secundarias de las protena~. A. Hlice a. R. Hoja plegad~ ~-

2-29. Estructuras terciade las protefnas. A. Fibrosa. B, C y D. Globul~r.

ria~

Fi~.

. La estructura terciaria es consecuencia de la formacin de nuevos plegamtentos en las estructuras secundarias hlice a. y hoja plegada B. lo que da lugar a la configuracin tridimensional de la protena. Los nuevos plegamientos se producen porque se relacionan qumicamente ciertos aminocidos distantes entre s en la cadena polipeptdica. Segn e l plegamiento que adoptan, se generan protenas fibrosas o globulares (fig. 2-29). Las protenas fibrosas se forman a partir de cadenas polipeptdicas (o de tramos proteicos) con estructura secundaria tipo hlice CY. exclusivamente. En cambio, las protenas globulares se forman tanto a partir de hlices a. como de hojas plegadas B. 0 de una combinacin de ambas. La estructura cuaternaria resulta de la combinacin de dos o ms polipptidos, lo que origina molculas de gran complejidad. Por ejemplo, la hemoglobina es el resultado de la integracin de cuatro cadenas polipeptdicas (fig. 2-30).

La disposicin espacial de una molcula proteica se halla predeterminada por la secuencia de sus aminocidos (estructura primaria). Los restantes niveles de organizacin dependen del es.tablecimiento de diferentes tipos de uniones qumicas entre los tomos de los aminocidos. As, se producen uniones covalentes -por ejemplo, puentes - S-S- entre los grupos --SH de dos cistefnas- y varios tipos de interacciones dbiles, es decir, uniones no covalentes. Entre estas ltimas se encuentran (fig. 2-31 ): 1) Puentes de hidr6geno , que se producen cuando un protn (H+) es compartido entre dos tomos electronegativos (de oxgeno o de nitrgeno) prximos entre s. Ya vimos que los puentes de hidrgeno son esenciales para el apareamiento especfico entre las bases complementarias de los cidos nucleicos, lo cual proporciona la fuerza que mantiene unidas a las dos cadenas del ADN. Las figuras 2-5 y 2-31 muestran Jos puentes de hidrgeno en el ADN y en las protenas, respectivamente. 2) Uniones inicas o electrostticas, que son el resultado de la fuerza de atraccin entre grupos ionizados de carga contraria. 3) Interacciones hidrof6bicas, que dan lugar a la asociacin de grupos no polares en la que se excluye el contacto con el agua. Cabe agregar que en las protenas globulares, las cadenas laterales ms hidrofbicas se localizan en el interior de las molculas, mientras que los grupos hidroflicos se sitan en la superficie. As, los residuos hidrofbicos repelen a las molculas de agua que t'odean a las protenas y determinan que su estructura globular se torne ms compacta. 4) Interacciones de van der Waals, que se producen cuando los tomos stn muy cerca. Esta proximidad induce fluctuaciones en sus cargas, causa de.: atracciones mutuas entre Jos tomos. La diferencia fundamental entre las uniones qumicas covalentes y las no ~ovalentes reside en la cantidad de energa que se necesita para romperlas. l'or ejemplo, un puente de hidrgeno requiere 4,5 kcallmo- 1, cifra bastante tn nor que las 110 kcal/mol- 1 que necesita la unin covalente 0 - H del agua. En general, las uniones covalentes se rompen por la intervencin de enzimas,

Fig. 2-30. Estructur~ ctJaternaria de las protenas. Se representa la hemoglobina,

compuesta por cuatro subunidades, dos a y dos ~- Se indi-

can los sitios donde se ha llan localizados los cuatro gru pos hem, lo mismo que los terminales am ino (N) y carboxilo (C) de las cadenas polipeprdicas.

NH 3

c~- NH2

NH2 +

CH 3

o
1

/ o
C=O
Fig. 2-31. Tipos de uniones no covalentes que estabilizan la estructura de las protefnas: uni n inica (amarillo); interaccin de van dcr Waals (cehsfl) ; puente de hidrgeno ( ro .w ); inhrnc.;ci(HJ hidrof6hi

COOH

COOH

]1

t'll ll'l'rd,l. (lh' ( ', H Aulin

.. ,.)

40

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA C ELULAR Y MOLEC ULAR

2. LOS COMPONENTES QUl M!COS DE LA CEL ULA

41

"t)'~OO=H~"t)'~oo= - ~"t)'""
Fig. 2-32. La ionizacin de las protenas depende del pH del medio.
En medio cido las protenas tienen carga + A pH igual al punto isoelctrico la carga es nula En medio alcalino las protenas tienen carga -

COOH NH

3+

coo-NH

coo- NH

mientras que las no cova!entes se disocian por fuerzas fi sicoqumicas. Aunque individualmente las uniones no covalentes son dbiles, cuando son numerosas hacen que la estructura molecular se vuelva estable, como ocurre con la doble cadena del ADN.

2- 11 . Las protenas tienen cargas positivas y negat ivas,

pero en el punto isoelctrico su carga es igual a cero

La carga real de una molcula proteica es el resultado de la suma de todas sus cargas. Dado que los grupos cidos y bsicos se disocian a distintas concentraciones de iones hidrgeno en el medio, el pH influye en la carga final de la molcula. La figura 2-32 muestra que en medio cido Jos grupos ami no capturan H+ y se comportan como bases (-NH2 + H ~ -NH3), mientras que en un medio alcalino se produce el fenmeno inverso y se disocian los grupos carboxilo (- COOH ~ COO- + W). Existe un pH definido para cada protena en el que la suma de las cargas positivas y negativas es igual a cero (fig. 2-32). Este pH se denomina pu n to isoelct r ico . En l las protenas colocadas en un campo elctrico no migran a ninguno de los polos, mientras que a un pH ms bajo se desplazan hacia el ctodo y a un pH ms alto lo hacen hacia el nodo. El proceso que da lugar a estos movimientos se llama electroforesis (cap. 23-31).

1nos del sustrato (sntesis) o pueden ro mperlas (degradacin). L as enzimas aceleran la reaccin hasta que se alcanza un punto de equilibrio, y pueden ser tan eficientes como para que la velol: idad de la reacci n sea de 108 a 10 11 veces ms rpida q ue en ausencia del catalizador. Una caracterstica muy impo t1ante de la actividad enzimtica es su especificidad, lo cual significa que cada clase de e nzima acta sobre 1111 solo sustrato. L as enzimas suelen ser tan espL:cficas que son incapaces de actuar sobre sus1ancias estrechamente relacionadas ; as, por jcmplo, no ejercen accin sobre un estereoisIIICro del mismo sustrato. En general, las enzimas llevan el nombre del s11strato que modifican o el de la acti vidad que jercen, ms el sufijo "-asa". As, existen nucleasas o endonucleasas (degradan cidos nucleicos), fosfatasas (sus traen fosfatos), quinasas (los agregan), arl fatasas, proteasas, glicosidasas, lipasas, oxidasas, reductasas, deshidroge11;\sas, etc.

Fi!(. 2-33. Los sustratos reaccionan en fonna muy precisa

Es oportuno advertir que en la clula ex isten molculas con actividad enJ irntica q ue no son protenas sino cidos ribonucleicos. Reciben el nombre d ribozimas y catali zan la formacin o la ruptura de las uniones fosfodisl n entre los nucletidos (ver captul os 15-5 y 16-10).

con el sitio acti vo de la enzima. Algunas enzimas tienen un encaje inducido, pues el silio activo es complementario del sustrato slo despus de que ste se une a la enzima.

J- 13. Algunas enzimas requieren cofactores

Algunas enzimas requieren la presencia de sustancias llamadas coenzinms para poder actuar. Por ejemplo, las deshidrogenasas necesitan las coen1i111as nicotinamida adenina dinucletido (NAD+ o N ADP+) o flavina adeni111 1 dinucletido (FAD) (fig. 8-4), ya que stas son las molculas que reciben 1 hidrgeno extrado del sustrato. La reacci n es la siguiente:
E+S(H,) + NAD' ~ E+ S+ NADH + W

ENZIMAS

2-12. Las proteinas enzimaticas catalizan la s reacciones quimicas

La clula puede compararse con un minsculo laboratorio en el que tienen lugar la sntesis y la degradacin de gran nmero de sustancias. Estos procesos son efectuados por enzimas (del griego en, dentro, y zymee, levadura) que actan a la temperatura del organismo y dentro de lmites estrechos de pH. Las enzimas son los catalizadores biolgicos. Un catalizador es una sustanci a que acelera las reacciones q umicas sin modificarse, lo que sig nifica que puede ser utilizado una y otra vez. El conjunto de las enzimas constituye el grupo de protenas ms extenso y ms especializado del organismo, responsable de la direccin de la compleja red de reaccio nes qumicas que se producen e n la clula. Las enzimas (E) son protenas o glicoprotenas que tienen uno o ms lugares denominados sitios activos, a los cuales se une el sustrato (S), es decir, la sustancia sobre la que acta la enzima. El sustrato es modificado qumicamente y co nvertido en uno o ms productos (P). Debido a que esta reaccin es generalmente reversible, puede ser expresada del siguiente modo:
E +S
"'T

P .n algunos casos la coenzima es un metal u otro grupo prosttico que se l11rll u unido en forma covalente a la protena enzimtica. En otros casos las ''" L'IlZimas se asocian a las enzimas de manera laxa. Numerosas coenzimas N <HI vitaminas pertenecientes al gn~po B.

J 14. Los sustratos se unen ai sitio activo de las enzimas

('nmo vimos, las enzimas tienen una gran especificidad para sus sustratos len no aceptar molculas relacionadas o que tengan una form a Iigera" "'111 distinta. Esto puede explicarse considerando que la enzima y el sustra1<, x lri hen una interaccin semejante a la de una cenadura con su llave. En 1, I'ir,11ra 2-33 se observa que la enzima posee un sitio activo, complementa'., :1 11110 de los dominios del sustrato. Aunque la imagen de la llave y la ce11 1 1\frll'll s v~ liua, no significa que enzimas y sustratos sean molculas estrucI<HIIIII wnl<: r1 idas. Asf, e l sitio activo de la enzima se hace complementario 1 11 Hlllll'lllo s Jlo d spus ele habrsele unido; es el llamado enca.ie inducido. 1 , """ :ll' ohN rv11 n la l"i ura 2-33, la uni n con el sustrato induce un ca m," ,! 11 ,." "1""""..' 11 t' ll !11 nzin1:r. y slo nlon s los grupos calalfliC tlS ' 1\l tl tlllll lnlln111 \ ' PIII IIt' I P ' '1111 \'1 /l W l l llllt l ,
y
Nll

[ES]

""

E+P,

donde [ES] es un complejo enzima-sustrato que se fo rnm llmwllod11 111<111te. l.os distintos tipos d nz.imns pn d '11 for111nr nllioii('N ,ov11l1 1 111 1 11111 lo

42

FU NDAMENTOS DE BIOLOG IA CELULAR Y MOLECULAR

2. LOS COMPONENTES QU!Ml COS DE LA CELULA

43

E n la unin del sustrato con el sitio activo de la enzi ma pa rticipan fue rzas qum icas de naturaleza no covalente (uniones inicas, p ue ntes de hidrgeno, fue rzas de van der Waals) , c uyo radio de acci n es muy limitado. Esto ex plica por qu el complejo e nzima-sustrato slo puede formarse si la e nzima tiene un sitio exacta mente compleme ntario al expuesto e n la superficie del sustra to .

mo lculas de la enzima se hallan en el complejo ES y se alcanza la velocidad mx ima (Vmx) de la reaccin . O tras enzimas no obedecen a la cintica antedicha, ya que muestran cooperatividad y estn sujetas a regulaciones alostricas. Por consiguiente, e n lugar de una hiprbola dan lugar a una curva sigmoidea (fig. 2-35).

2-17. Los inhibidores de las enzimas son muy especficos

Las enzimas pueden ser inhi bidas reversible o irreversiblemen te. La inhibicin ir r eversible puede de berse a la desnaturalizacin de la ent.:ima o a la formacin de una uni n covalente e ntre ell a y otra mo lcula. Existe n dos formas de inhibicin reversible : competitiva y no competitiva. En la pri mera, un compuesto de estructura similar a la del sustrato forma un complejo con la enzima, an logo al complejo ES ; este tipo de inhibicin puede revertiese con concentraciones altas del sustrato. E n la inhibicin no competiti va el inhibidor y el sustrato no se rel acionan estructuralmente, pero igual se unen a travs de sendos p untos de sus m olculas.

2-1 5. El comportamiento cintico de muchas enzimas se define por los parmetros Vmh y Km
Las reacciones e nzimticas se reali zan e n d os e tapas. La primera corresponde a la uni n de la e nzima con el sustrato y p uede escribirse de la siguiente mane ra:
K,
E+ S

Concenlracin de sustrato [S] Fig. 2-34. Diagrama de la velocidad de reaccin de una cnzim:1 a concentrac iones de sus-

=o
K,

rES]

lrato cada vez mayores. En el texto se describen la Vm~x y la Km. La curva es una hiprbola

cuya primera parte sigue una cintica de primer orden (es decir. la reaccin es proporcional a la concentracin del sustrato); la segunda parte corresponde a la saturacin. que tiene una cintica de orden cero (ya que no depende de la concenrracin del sustrato).

En la seg unda etapa el compl ej o ES se desdobl a e n el produc to y la enzima, que queda di spo nible para actuar sobre una n ueva molcula de sustrato:

2-1 8. Las enzima s de la clu la est n distribuidas

en mlt iples compartim ient os
Las enzimas catalizan las innumerables reaccio nes qumicas que tie nen lugar e n las clulas . E n algunos casos las enzimas de una va metablica se e ncuentran en el citosol, y el sustrato y los sucesivos productos pasan de una e nzima a la siguiente e n forma e ncadenada. En o tros casos, las enzimas que inte rvienen en una cadena de reacciones se hallan asociadas y actan juntas baj o la forma de un complej o multienzimtico; por ejemplo, las enzimas q ue sintetizan los cidos grasos se e ncuentran ntimame nte vinculadas. Los sistemas multienzimticos facilitan las reacciones sucesivas porque stas se producen a escasa distancia unas de otras. Las enzimas poseen patrones de distr ibucin bastante especficos. Por ~.;j emplo, algunas enzi mas hidrolticas se localizan en los lisosomas, otras e n:r.i mas se e ncuentran en las ciste rnas del comp lej o de Golgi, y otras, como las i\RN polimerasas y las ADN po limerasas, en el ncleo.

K,
[ES]

=o

E+ P

Los valores K 1, K 2 , K 3 y K4 son constantes de velocidad de las reacciones. Como se ilustra en la fig ura 2-34. la velocidad de la reaccin depende de la concentracin de l s ustrato. A bajas concentraciones, la velocidad in icial (Y) de la reaccin describe una hiprbola. No o bstante, a medida q ue aumenta la concentracin del sustrato la reaccin se satura y alcanza una meseta. En este p unto -que cotresponde a la Ym 0x - toda la enzi ma inte rviene en la formaci u del complej o ES. La ecuacin de la c urva es:
V= Vm; x [S ] ' Km+ [S]

EL ORIGEN DE LAS CELULAS

2- 19. Los mecanismos de autoensamblaj e dieron lugar
a las primeras clulas
En la seccin 2-9 vimos que una protena compleja (como la hemoglobilla) se forma como resultado del autoensamblaje de varias unidades protei.;as me nores, y en la seccin 2-7 estudiamos que los fosfolpidos dispersos e n ngua desarrolla n espontneamente una bicapa lipdi ca semejante a la de las 111 1nbranas celulares . O tro eje mplo de autoensambl aje lo e ncontramos en los virus (cap. 1-5), que se forman e n el interior de la clula husped a partir de 11tat ri al ge ntico (ADN o ARN) y protenas (capsmeros). Como puede npr c ia rsc, mediante estos mecanismos de autoensamblaje pueden formarse 1 :11tto 111a -ro mo l ~.;tdas como estructuras subcelulares de variada complejidad. 1.as c;usas por las c uales se forman en las clulas estructuras siguiendo un kll t":td:t v z m(ls co t11p! jo tleh n buscarse e n la in formaci n contenida e n u< ,l i\llN. J :sLI ,.s In qu<" d tl'rttt ilt:t la stru ltlr:t d las pmtefnas. Por otra par'ltlll uil <" do:. " lll:tS l'r"ldll:tS dil"t' l\'lli t"S !"lllrl" pmhfuas t" lt, dt l11 iult"lllt '<
l11dr 1l t1r1 eh

donde Km es la consta nte de Michaelis, que puede definirse como la concentracin del sustrato e n que la m itad de las molculas de la enzima forman complejos ES. Cuanto menor es el valo r de Km, mayor ser la afinidad de la enzi ma por el sustrato. En consecuencia, el comportamiento cintico de una enzima est definido por los valo res de V mx y Km.

2-16. Algun as enzimas est<n sujetas a regu laciones

alostricas
En la secci n anterior se d ijo que si se diagram a la veloci dad de reaccin de una enzima en funcin de la concentraci n creciente del sustrato, se observa que para muchas enzimas la curva dibuja una hiprbola (fig. 2-34). As, a med ida que se agrega ms sustrato aumenta la canlidat.l t.l la u:r.i11 1 u 11 1 <.;Oillpl j o ES y au1n nl n la velo idad di' :tp:tl , ,,., ., 1 1"' .,,,..
1!1, JH ~ ru l ' tlll

Concentracin de s ustrato Fig. 2-35. Cintica de la enzima alostrica ATPasa, que muestra una curv:1 sigmoidea caractcrfsticn en lug:11 de una hi p6rhola. Ohs6rvcnsc
los (' fr
' l ll'l cll' 1111

m:l lvmlor (/\ '/'/ ') y dt>

1111

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2. LOS COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA

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44

FUNDAMENTOS DE BIOLOGJA CELULAR Y MOLECULAR

Un problema fundamental es determinar los mecanismos por los cuales se origin en nuestro planeta la organizacin supramolecular que dio lugar a la formacin de las clulas procariotas y eucariotas. Cualquier explicacin sobre este tema es obviamente especulativa, pues tiene que ver nada menos que con el origen de la vida. Aunque no se sabe cmo se formaron las primeras clulas, es posible establecer, por medio del registro de fsiles, que los organismos procariotas precedieron a los eucariotas y aparecieron hace tres mil millones de aos. Recientes observaciones demostraron que slo despus de mil millones de aos de haberse formado la Tierra aparecieron organismos semejantes a las bacterias actuales. Antes debi haberse producido un largo perodo de evolucin qumica, en el que se originaron molculas provistas de carbono y las unidades precursoras de las futuras macromolculas de los organismos vivientes, como los aminocidos, los monosacridos y las bases de los nucletidos. Luego, por polimerizacin, se formaron molculas cada vez ms complejas. Es posible que durante este perodo entraran en accin los mecanismos de autoensamblaje antes mencionados, hasta que se form la primera estructura supramolecular capaz de autorreproducirse (fig. 2-36).

Formacin del sistema solar hace 4,6 x 10' aos Molculas bigenas, agua, amonio, formaldehdo, cido cianhdrico, acetonitrilo, etc. Aminocidos, azcares, bases de los cidos nucleicos Protenas Polisacridos Acidos nucleicos \ Cdigo gentico Hace 3,5 3,0 x 10' aos Hace 0,9 x 10' aos

Evolucin qufmica

Descargas elCtricas, luz u~ravioleta calor, presin

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"---. Proteinoides Evolucin l)lolgica

Primer procariota Primer eucariota

2-20. La evolucin qumica produjo mo lculas o rgnicas con carbono

En los tiempos prebiticos, es decir, anteriores a la aparicin de la vida, la atmsfera de la Tierra careca de oxgeno, como sucede con los otros planetas del sistema solar. Contena hidrgeno, nitrgeno, amonaco, metano, monxido de carbono y dixido de carbono; tambin contena agua, que en forma de vapor cubra parte de la superficie terrestre. Aunque normalmente estas molculas son poco reactivas, podran haber interactuado gracias a la energa provista por la radiacin ultravioleta, el calor y las descargas elctricas de los rayos. En ese entonces la atmsfera tampoco tena la capa protectora de ozono, de modo que los rayos ultravioletas podan baar la superf icie de la Tierra con una intensidad que resultara nefasta para la vida actual. Ello origin molculas intermedias sumamente reactivas, como acetaldehdo, cianuro, formaldehdo y otras, a partir de las cuales se sintetizaron molculas cada vez ms complejas. En 1920, Oparin y Haldane consideraron que la polimerizacin de estas molculas pudo dar origen a las protenas, los cidos nucleicos y los hidratos de carbono presentes en los organismos vivos. En 1953, Miller hizo un experimento fundamental en el que se imitaron las condiciones de la atmsfera en el perodo prebitico. Produjo descargas elctricas en un recipiente dentro del cual coloc agua, hidrgeno, amonaco y metano. En el agua, que se condens, se formaron aminocidos (glicina, alanina, cido asprtico y cido glutmico). Mediante experimentos similares se han obtenido casi todos los aminocidos presentes en las protenas; tambin se consiguieron varios monosacridos, cidos grasos y las bases de los nucletidos.

Fig. 2-36. Secuencia temporal del origen de las clulas.

Una vez que se form la primera protena pudieron haber actuado los mecanismos de agregacin o autoensamblaje descritos ms arriba. De esta manera podran haberse originado las funciones en:zimticas. Es probable que en 1 "caldo" primordial las macromolculas hayan formado complejos ms grandes, denominados proteinoides o coacervados, que tienen una pared semejante a la de una membrana y un interior lquido. Estos proteinoides prilllitivos pudieron tener actividad enzimtica y permeabilidad, como en el caso de las membranas artificiales que mencionaremos en el captulo 3-2. Empero, la ausencia de cidos nucleicos impidi su continuidad, y es posible que tu vieran una vida muy corta, dado que no podan autorreproducirse.

2-22. La s celu la s proca riot a s precedie ron a las euca ri otas

Slo despus de la aparicin de los cidos nucleicos fue posible que se orig inara un organismo capaz de autoperpetuarse. En ese mo mento habra aparecido la primera clula procariota y, as, la vida en la Tierra. Es probable que el ARN, y no el ADN, haya sido el primer material gen1ico que apareci, de modo que desde el punto de vista cronolgico las ma..:romolculas habran evolucionado de la siguiente manera:
ARN
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PROTEINAS

L - - - -->ADN

2- 21 . Los mecanismos de a g reg acin fo rma ron

los primitivos proteinoides El prximo paso probablemente fue la polimerizacin de los aminocidos para construir protenas, lo cual pudo ser posible por la accin cataltica de las arcillas. Todos estos procesos pudieron haberse producido n mcdi ~Js at:uosos (lagunas), n los cual s las rnoJ <culas orwui as Sl' ''"'"''' nlr lll'"' furnuuulo IIIUit' ~ IH 'l' i t~ d ",nldn"
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I .a replicaci n del ARN e-~ ms sencilla q ue la del ADN, pues requiere un lllc nor nmero de enzimas. Adems, el ARN puede usarse como .material genr li.:o y corno ARN mensajero, y muchos de los pasos de la sntesis proteica dl'pl'nd n d inl craccio ncs ARN-ARN (ARNm-ARNt, ARNm-ARNr, ARNrt\ 1< NI).
Todo~' lo.~ or ~ a u i s n 11 1s

vivos 1i u<Jn 1 rnisrno cdigo gcnlico, lo cual ser11 1:! T ic ; se. inic.: it. a p:utir dl' 1 111 solo orgath In t' v o l u t ' l n ll , lll /li ' ln 't IOII !II 1 :1', ll tiii iH ' inll t' 'i

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FUNDAMENTOS DE B!OLOGfA C ELULAR Y MOLECULAR

favorables en las clulas, llevaron ms tarde a una variedad asombrosa de formas de vida. Es posible que los primeros procariotas fueran hetertrofos (es deci r, se nutrieran con molculas orgnicas). Ms tarde aparecieron los procariotas auttrofos, como las algas azules. Gracias a la fotosntesis se produjo y acumul el oxgeno en la atmsfera, y ello hizo posible el surgimiento de clulas procariotas aerbicas. La clula eucariota pudo haberse originado despus de lu aparicin de una clula eucariota anaerbica. Esta debi ser parasitada por una procariota aerbica, que ms tarde se conv irti en mitocondria (cap. 8-29). De acuerdo con cienos restos fsiles, los organismos eucariotas debieron haber aparecido unos 1.500 millones de aos atrs --al establecerse una atmsfera de oxgeno estable- y, como dijimos, tales organismos pudieron ser primero anaerobios y luego aerobios. Hasta entonces la vida se hallaba solamente en el agua, desde donde las plantas y los animales pasaroll a la tierra. El surgimiento de la reproduccin sexual, millones de aos despus, aceler la evolucin de las formas vivientes, que hasta entonces era relativamente lenta. Los sexos hicieron posible el intercam bio de informacin gentica entre los individuos, mientras que la mutacin y la seleccin produjeron las diferentes formas vivientes que hoy se e ncuentran en nuestro planeta.

Las membranas celulares

Permeabilidad de las membranas

:1-1. Las membranas de la c lula ej ercen diversas actividades

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La clula se halla rodeada por la membrana plasmtica, una delgada capa de 6 a 1.0 nm de espesor compuesta por lpidos, protenas e hidratos de carbono (fig. 3-1 ). Su estructura bsica es similar a la ele las restantes membranas de la clula, las cuales envuelven a Jos organoides del sistema de endo"'embranas -incluida la envoltura nuclear- , a las mitocondri as y a los peroxisomas. Las membranas cel ulares no son simples fronteras inertes que compartiIIJcntan a la clula, sino estructuras que ejercen actividades complejas, como las siguientes: 1) Constituyen verdaderas barreras permeables selectivas que controlan el pasaje de iones y de molculas pequeas, es decir, ele solutos. As, la permeabilidad selectiva de las membranas impide el intercambio indiscriminado de Jos componentes de los organoides entre s y de los componentes extracelul:Jres con los de la clula. 2) Proveen el sopo11e fsico para la actividad ordenada de las enzimas que se asientan en ellas. 3) Mediante la forrnacin ele pequeas vesculas transportadoras hacen posible el desplazamiento de sustancias por el citoplasma (cap. 7-1 ). 4) La membrana plasmtica participa en los procesos de endocitosis y de cxocitosis. Por el primero la clula incorpora sustancias desde el exterior (cap. 7-29); por el segundo, las secreta (cap. 7-22). 5) En la membrana plasmtica existen molculas mediante las cuales las ~ lulas se reconocen y se adhieren entre s y con componentes de la matriz cxtracelular (cap. 6-1 ). 6) La membrana plasmtica posee receptores que interactan especficaIIJCnte con molculas provenientes del exterior, como hormonas, neurotrans-

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FUND,\MENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

3 L AS MEMBRANAS CELULARES

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Aceite

Fig. 3-5. Micrografa electrAgua

nica de cuatro membranas celulares (MC). En cada una se

Fig. 3-2. Esquema que ilustra cmo se ordenan los fosfoHpidos cuando se los coloca en una interfase de aceite y agua.

Fig. 3-3. Liposoma derivado del ordenamiento espontneo de los fosfolpidos cuando se los coloca
en un medio acuoso.

observa la bicapa lipdica. El, espacio intercelular. 240.000x. (De E. D. De.Robertis.)

misores, factores de crecimiento y otros inductores qumicos. A partir de estos receptores se desencadenan seales que se transmiten por el interior de la clula; sus primeros eslabones se sitan cerca del receptor, en general en la propia membrana plasmtica (cap. 11-8).

ESTRUCTURA DE LAS MEMBRANAS CELULARES

3-2. La estructura bsca de las membranas ce lulares corresponde a una bicapa lpdca

puestos a las clulas; para ello se los construye en un medio acuoso al que se le agrega uno o ms compuestos (medicamentos, cosmticos), lo cual asegura su incorporacin al interior vesicular. Cuando se colocan fosfolpidos entre dos soluciones acuosas separadas por uh tabique incompleto, forman una bicapa lipd.ica que completa la separacin (fig. 3-4). Aqu tambin las cabezas polares de los fosfolpidos se dirigen hacia las soluciones acuosas y los cidos grasos se otientan hacia el interior de la bicapa, que por tal motivo resulta altamente hidrofbico. Estas bicapas liplicas artificiales se construyen para estudiar la permeabilidad y las propiedades flsi coq umicas de las membranas biolgicas, dado que exhiben una estmctura bsica y un compot1amiento semejantes.
3-3. Los fosfolpdos son los lpdos ms abunda ntes de las membranas celulares

Los lpidos fundamentales de las membranas biolgicas son fosfolpidos de distinta clase y colesterol. En el captulo 2-7 se seal la naturaleza anfiptica de los primeros; son molculas que poseen una cabeza polar o hidroflica y largas cadenas hidrocarbonadas apolares o hidrofbicas. Esta dualidad tiene suma importancia en la estructuracin de las membranas. Cuando los fosfolpidos se colocan entre un aceite y una solucin acuosa forman una capa de una molcula de espesor (monocapa), e n la que todas las cabezas polares se orientan hacia la solucin acuosa y los cidos grasos se alejan de ella, de modo que los fosfolpidos quedan perpendiculares al plano de la interfase agua/aceite (fig. 3-2). Ms an, si los fosfolpidos y el aceite son "empujados" hacia el intetior de la solucin acuosa se forman pequeas vesculas, con las cabezas de los fosfolpidos en la periferia -en contacto con el medio acuoso- y los cidos grasos orientados hacia el aceite en el interior vesicular (fig. 3-2). En cambio, en las soluciones acuosas puras los fosfolpidos no forman monocapas sino bicapas que se cierran sobre s mismas, lo cual da lugar a vesculas de hasta 1 .tm de dimetro llamadas liposomas (fig. 3-3). Como es de esperar, los cidos grasos hidrofbicos se unen en el interior de la bicapa y las cabezas polares hidroflicas de cada monocapa se orientan hacia las soluciones acuosas. Dado que los liposomas pueden fusionarse con las membranas plasmticas, se los utiliza como vehculos para incorporar diversos com~~ o=

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Fig. 3-4. Bicapa lipfdica m1ificial formnda al colocarse fosfolfpidos t:rlll't' dos !IWdiw:
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Las membranas celulares estn formadas por bicapas lipdicas similares a las descritas en la seccin anterior. En la figura 3-5 se muestran cuatro bicapas lipdicas tal como se observan con el microscopio electrnico. Estas bicapas contienen fosfolpidos y colesterol, pero los primeros suelen ser las molculas lipdicas ms abundantes. Las estructuras de las distintas clases de fosfolpidos presentes en las membranas fueron descritas en el captulo 2-7. Debe recordarse que las cadenas hidrocarbonadas de los cidos grasos pueden estar saturadas o no (fig. 2-20). En las cadenas saturadas los enlaces simples entre los carbonos les confieren a los cidos grasos una configuracin extendida, lo que hace que stos se hallen perpendicu lares respecto del plano de la bicapa lipdica y que en cada monocapa los fosfolpidos queden agrupados en conjuntos bastante compactos. En cambio, los enlaces dobles de las cadenas no saturadas producen angulosidades en los cidos grasos, lo cual separa a los fosfolpidos y le da a la bicapa una configuracin menos compacta (fig. 3-6). El fosfolpido que predomina en las membranas celulares es la fosfatidilcolina. Le siguen, en este orden, la fosfatidiletanolamina, la fosfatidilserina, la esfingomielina y el fosfatidilinositol. Un derivado de este ltimo, el fosfatidi linositol 4,5-difosfato o PIP 2 (fig. 2-16), cuando es hidrolizado genera diacilglicerol (DAG) e inositol ! ,4,5-trifosfato (IP 3 ), dos pequeas molculas implicadas en la transmisin de seales intracelulares (caps. 11 -14 y 11-17). En cambio, cuando al PIP2 se le aade un fosfato se convierte en fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfato o PIP 3 (caps. 11-14 y 11-20). La membrana interna de la mitocondria contiene un fosfolpido doble llalllado difusfnlidiiJ:Iiccol o cmdiolipinu (cap. 2-7) (tig. 2- 17). I ~ I I"Uk~hii"U]l"S lllll"llllljlOIII"IIIl" t"llillllitnti VII llll: III L' importan!' de las lllCillIII ! IIJII'! t 'l' lllllli ~ 'N ,

Fig. 3-6. Esquemas que ilustran cmo los dobles enlaces

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FUNDAMENTOS DE B!OLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

3. LAS MEMBRANAS CELULARES

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Fig. 3-7. Molculas de colesterol entre los fosfolpidos ele las membranas celulares.

anfiptico, en cada monocapa se dispone entre los fosfolpidos, con el grupo OH del C3' de su ncleo cclico orientado hacia la solucin acuosa (cap. 2-7) (fig. 3-7). En la membrana del retculo endoplasmtico existe un lpido especial llamado dolicol (figs. 2-24 y 7-15), necesario para la incorporacin de los oligosacridos a las molculas proteicas durante la formacin de algunas glicoprotenas (cap. 7-16). Los distintos componentes lipfdicos se mantienen en la bicapa gracias a sus interacciones con el medio acuoso y con los cidos grasos de los fosfolpidos vecinos, sin que se produzcan uniones covalentes entre ellos. Las dos capas de la bicapa lipdica no son idnticas en su composicin, razn por la cual se dice que las membranas son asimtricas. La fosfatidiletanolamina, la fosfatidilserina y el fosfatidilinositol predominan en la capa que est en contacto con el citosol, mientras que la fosfatidilcolina y la esfingomielina predominan en la capa no citoslica (en la membrana plasmtica, la que da al exterior; en un organoide, la que da a su cavidad). La composicin de las membranas celulares presenta diferencias cuantitativas y cualitativas segn se analice la membrana plasmtica o la membrana de algn organoide en particular. Por ejemplo, la membrana mitocondrial interna posee difosfatidilglicerol y la del retculo endoplasmtico contiene dolicol, lpidos que no existen en otras membranas. En cambio, el colesterol abunda en la membrana plasmtica y es muy escaso en la membrana interna de la mitocondria. Tambin existen diferencias entre las membranas cuando se las analiza en los distintos tipos celulares. A temperaturas fisiolgicas la bicapa lipdica se comporta como una estructura fluida. La fluidez aumenta cuando se eleva la proporcin de cidos grasos cortos y no saturados en los fosfolpidos. Vimos que la saturacin de los cidos grasos hace que los fosfolpidos se agrupen en conjuntos ms compactos, lo cual le confiere mayor rigidez a la bicapa. El colesterol produce consecuencias similares. Decir que la bicapa lipdica se comporta como una estructura fluida significa que sus componentes rotan en torno de sus ejes y se desplazan libremente por la superficie membranosa (fig. 3-8). Adems de estos movimientos, los lpidos pueden pasar de una capa a la otra por un tipo de movimiento llamado "flip-flop" (por su semejanza con la conocida cabriola gimnstica). Este ltimo movimiento es poco comn comparado con la rotacin y el desplazamiento lateral. En la seccin 3-7 veremos que algunos lpidos membranosos se hallan asociados con hidratos de carbono bajo la forma de glicolpidos.

Rotacin

tus con soluciones salinas. De la superficie de las protenas emergen los residuos de los aminocidos polares (fig. 2-25), los cuales interactan con grupos qumicos de la propia membrana y de los medios que la baan. Las protenas integrales se hallan empotradas en las membranas, entre los lpidos de la bicapa, por lo que para su extraccin se necesitan procedimientos relativamente drsticos, mediante detergentes o solventes <:speciales. Algunas se extienden desde la zona hidrofbica de la bicapa hasta una de las caras de la membrana, por donde emergen (fig. 3-9). Otras, en cambio, atraviesan la bicapa totalmente, de ah que se las llame transmembranosas (fig. 3-9). El extremo carboxilo de estas protenas suele hallarse en d iado citoslico de la membrana y el extremo amino en el lado no citoslico. Dichos extremos se vinculan con los medios acuosos que baan a ambas sLtperficies de la membrana, por lo que poseen un predominio de aminocidos hidroflicos. En cambio, las partes de las protenas integrales que se hallan entre los cidos grasos de los fosfolpidos presentan una mayor proporcin de aminocidos hidrofbicos. Comnmente la zona intramembranosa exhibe una estructura secundaria en hlice a, con su superficie exterior hidrofbica en contacto con los cidos grasos, tambin hidrofbicos (fig. 3-1 0). Muchas protenas transmembranosas atraviesan la bicapa lipdica ms de una vez -de ah que se llamen multipaso-, por lo que forman una sucesin de asas cuyas curvas emergen por ambas caras de la membrana (fig. 3-10). Algunas protenas transmembranosas se asocian con otras para formar estructuras cilndricas huecas, como las que se muestran en la figura 3-21. Sus aminocidos se distribuyen de tal manera que la pared exterior del cilindro hueco -en contacto con los cidos grasos- resulta apolar, mientras que la superficie interna se halla cubiet1a por grupos polares, los cuales delimi.tan un tnel cuyas bocas se abren en ambos lados de la bicapa. Ms adelante analizaremos las caractersticas de estos tneles y su importancia para el transporte de los solutos a travs de las membranas. Debe agregarse que existen protenas que se comportan como integrales -pues requieren mtodos drsticos para ser removidas- pero que tienen posiciones perifricas. Su estabilidad en la membrana se debe a que se hallan li':adas mediante uniones covalentes a un cido graso o a un fosfatidilinositol, segn estn en el lado citoslico o en el lado no citoslico, respectivamente (fig. 3-10). En la seccin 3-7 se ver que muchas protenas membranosas estn asociadas con hidratos de carbono, es decir, son glicoprotenas. Ms an, en la membrana plasmtica casi todas las protenas pertenecen a esta categora.

Fig. 3-9. Posiciones de las protenas integrales y de las protenas perifricas en las
membranas celulares.

Fig. 3-10. Esquemas de cuatro protenas integrales, dos transmembranosas (una de ellas multipaso) y dos situadas en posiciones perifricas.

3-4. Las protenas de las membranas celu lares se clasifican en integ ra les y perifricas
Las membranas celulares contienen importantes cantidades de protenas. En promedio, la proporcin de lpidos y de protenas es equivalente, aunque vara en los distintos tipos de membranas. Por ejemplo, la membrana de las vainas de mielina posee un 80% de lpidos y un 20% de protenas, mientras que en la membrana interna de las mitocondrias esa relacin se invierte. Las protenas de las membranas celulares exhiben una asimetra mayor que los lpidos y se clasifican en perifricas e integrales (fig. 3-9). Las protenas perifricas se hallan sobre ambas caras de la membrana, li g a rla~ a las cabezas de los fosfolpidos o a protenas in teg r:il cs 1'"' IIII II II .~ n o <"o val uuh.:s. Asf, p 11 d .; 11 s.;r ..:x lrafdas '1 >11 i\;rl:t l'a<" ilidad , ,. ..,, ,,, '"'' '""'{'"

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FUNDAMENTOS DE BlOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

3. LAS MEMBRANAS CELULARES

53

3-5. Las membranas celulares responden al modelo llamado de mosaico fluido

Como los lpidos, las protenas tambin pueden girar en tomo de sus propios ejes y desplazarse lateralmente en el plano de la bicapa. Se las ha comparado con "icebergs" que flotan en la bicapa lipdica. A esta propiedad dinmica de las membranas biolgicas se le da el nombre de mosaico fluido. La capacidad de migrar por la bicapa indicaria que las interrelaciones qumicas entre protenas y lpidos son efmeras. Sin embargo, en la mayora de los casos tienen cierta estabilidad. As, los lpidos que rodean a una protena dada se mantienen asociados a ella, lo cual parece ser importante para asegurar la configuracin de la protena. Comnmente las protenas membranosas muestran propiedades diferentes cuando se encuentran en las membranas y cuando han sido aisladas y purificadas. Ello ha llevado a revalorizar el entorno lipdico en que se hallan y a reconocer la existencia de movimientos combinados de las protenas con los lpidos. Ms an, las actividades de las protenas podran variar por modificaciones en los lpidos anexos. Algunas protenas de la membrana plasmtica tienen restringida su movilidad lateral por hallarse unidas a componentes del citoesqueleto, los cuales las inmovilizan en determinados puntos de la membrana (cap. 5-24) (fig. 5-31). Por otra parte, la unin oclusiva (cap. 6-11) (fig. 6-9) impide que las protenas pasen de un lado al otro del lmite marcado por ella (fig. 3-27).
3-6. La fluidez de las proteinas en la bicapa lipidica ha si do comprobada mediante distintas tcnicas biolgicas

+
Clula humana

Sendai

Virus -----.

Clula de ratn

Heterocarin Fig. 3-12. Obtencin de un heterocarin al unirse dos clulas de especies diferentes mediante el virus Sendai inactivado.

Fig. 3-11. Linfocito tratado

con un anticuerpo fluorescente

que se une a receptores proteicos de la membrana plasmtica. Obsrvese el desplaza miento de los receptores y su agrupamiento en un polo de la clula (el cercano al complejo de Golgi), donde pueden ingresar por endocitosis. (De S. de Pretris y M. C. Raff.)

Vimos que la fluidez de la membrana hace referencia al desplazamiento de los lpidos y de las protenas en el plano de la bicapa. Esa fluidez ha sido comprobada mediante anticuerpos ligados a fluorocromos, que son fciles de detectar con el microscopio de fluorescencia (cap. 23-25). Examinemos los siguientes experimentos: Si se trata a linfocitos con anticuerpos fluorescentes que se unen a receptores (protenas) localizados en sus membranas plasmticas, puede observarse el des<mollo de una especie de capuchn (fig. 3-11). Este se forma porque Jos receptores se desplazan por la membrana y se agrupan en un polo de la clula. Adems, all la membrana plasmtica puede invaginarse hacia el citosol y formar vesculas de endocitosis (cap. 7-29), lo cual se detecta tambin con el microscopio de fluorescencia. Si en un cultivo celular se fusionan dos clulas de especies diferentes (por ejemplo, una humana y otra de ratn) se obtiene una clula con dos ncleos llamada heterocarin, que comparte los citoplasmas, los ncleos y las membranas plasmticas de las clulas participantes (fig. 3-12) (cap. 21-4). La

unin de las clulas se consigue con la ayuda del virus Sendai inactivado o del polietilenglicol, cuyas propiedades fusgenas propician el contacto y la integracin de las membranas plasmticas. Si previamente se marcan las clulas con sendos anticuerpos fluorescentes de colores diferentes (como la fl uorescena, que es verde, y la rodamina, que es roja), luego de la fusin pueden reconocerse en la membrana plasmtica del heterocarin las partes aportadas por cada clula. No obstante, debido a que los receptores marcados se desplazan por la membrana, pronto Jos dos colores se entremezclan en toda la superficie de la clula. En la figura 3-13 se representa el posible mecanismo molecular de fusin de membranas. Cuando se hallan prximas entre s y bajo la influencia de elementos fusgenos (en nuestro caso, el virus Sendai o el polietilenglicol), se suceden los siguientes fenmenos: 1) se despejan las protenas mymbranosas, lo que deja a las bicapas sin otro tipo de molculas que los lpid9s; 2) las bicapas establecen ntimo contacto a travs de sus respectivas monocapas enfrentadas; 3) dichas capas desaparecen y se desarrolla una interfase de estructuras lipdicas hexagonales entre las dos monocapas restantes (esta interfase parece ser esencial en todos los procesos de fusin de membranas); 4) finalmente, la interfase desaparece y se completa la fusin. El mecanismo descrito se produce en todos los procesos fisiolgicos de fusin de membranas y en ellos intervienen agentes fusgenos presentes en el citosol. Se describirn <:uando anal.icemos la dinmica de las vesculas transportadoras en el sistema de endomembranas (cap. 7-41) y la fusin del espermatozoide con el ovocito durante la fecundacin (cap. 19-19). Otro mtodo utilizado para estudiar el desplazamiento lateral de las protenas en el plano de las membranas es la tcnica de recuperacin de la fluorescencia despus del foto blanqueo, conocida con la sigla FRAP (por jluorescence recovery after photobleaching). Aqu ciertas protenas membranosas son marcadas con fluorocromos y un pequeo sector de la membrana es irradiado con rayos lser. Dicho sector se "blanquea", es decir, queda sin fluorescencia. No obstante, pronto es invadido por protenas fluorescentes

Fig. 3-13. Esquema que ilustra el posible mecanismo molecular responsable de la fusin de dos membranas celulares. (De R. Schaier y P. Overalh.)

......

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

3. LAS MEMBRANAS CELULARES

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Fig. 3-14. Presencia de hidratos de carbono (integrantes de glicolpldos y glicoprotefnas) en la cara no citoslica de las membranas celulares.

provenientes de las regiones no irradiadas. La velocidad de recuperacin de la fluorescencia puede calcularse mediante un ndice llamado "coeficiente de difusin".

3-7. Los hidratos de carbono de las membranas celulares forman parte de glicolpidos y de glicoproteinas
Las membranas celulares contienen entre un 2 y un 10% de hidratos de carbono. Estos se hallan unidos covalentemente a lpidos y a protenas de la membrana, es decir, bajo la forma de glicolpidos y glicoprotenas (fig. 3- \4). Los glicolpidos se clasifican en cerebrsidos y ganglisidos (cap. 2-7). Los cerebrsidos se forman por la unin de una galactosa o de una glucosa con la ceramida (fig. 2-21). La estructura de los ganglisidos es similar, pero el hidrato de carbono no es un monosacrido sino un oligosacrido que contiene uno a tres cidos silicos (fig. 2-22). Por su lado, las glicoprotenas membranosas contienen oligosacridos o polisacridos. Los oligosacridos se hallan ligados a las protenas a travs de enlaces N-glicosdicos u 0-glicosdicos (cap. 2-6) (figs. 2-7 y 2-8). Habitualmente los monmeros que se localizan en la periferia de los oligosacridos son cidos silicos. Una protena puede contener una o varias cadenas oligosacridas (fig. 3-14). Los polisacridos ligados a protenas songlicosaminoglicanos (uno o varios por protena), y se forman glicoprotenas llamadas proteoglicanos (cap. 2-6) (figs. 2-10 y 2-11). En los captulos 6-3 y 7-18 se ver que muchos proteoglicanos son transferidos hacia el medio extracelular, donde abundan. No obstante, algunos regresan a la clula y se instalan en la membrana plasmtica como glicoprotenas perifricas. As, puede decirse que estos proteoglicanos son molculas recuperadas por la clula.

mucosa intestinal las protege del contacto con los alimentos y de los efectos destructivos de las enzimas digestivas. 2) Debido a la presencia de cidos silicos en muchos de los oligosacrillos del glicocliz, la carga elctrica en su superficie es negativa. Ello atrae a los cationes del medio extracelular, que quedan retenidos en la cara exterior lle la clula. Esta condicin es importante particularmente en las clulas nerviosas y en las musculares, puesto que necesitan incorporar gran cantidad de Na de fcil disponibilidad durante la despolarizacin de sus membranas. 3) Algunos oligosacridos del glicocliz son necesarios para los procesos lle reconocimiento y de adhesin celular (caps. 6-8 y 6-9). 4) La membrana plasmtica que circunda varias veces el axn de algunas neuronas para formar la vaina de mielina contiene abundantes glicolpidos, los cuales contribuyen al aislamiento elctrico del axn. 5) La especificidad del sistema ABO de grupos sanguneos se halla determinada por ciertos oligosacridos muy cortos y parecidos entre s, presentes en la membrana plasmtica de los glbulos rojos. Estos oligosacridos slo difieren por sus monmeros terminales y estn ligados a una protena transmembranosa o a una ceramida, como muestra la figura 3-15. As, en los eritrocitos pertenecientes al grupo A el monosacrido terminal de la cadena oligosacrida es la N-acetilgalactosamina y en Jos del grupo B es la galactosa; cuando estos monosacridos terminales estn ausentes los eritrocitos pertene~:en al grupo sanguneo O (fig. 3-15). 6) En las clulas tumorales malignas se han observado cambios en algunos oligosacridos membranosos, lo cual ha llevado a postular que influyen n la conducta anmala que ellas asumen. Se cree que alteran la recepcin de las seales que controlan las divisiones celulares. 7) Algunas toxinas, bacterias y virus se unen a oligosacridos especficos presentes en la membrana plasmtica de las clulas que atacan. Por ejemplo, se sabe que algunas bacterias se unen a las manosas de oligosacridos de la membrana plasmtica de las clulas que infectan como paso previo a su invasin. Por otro lado, para iniciar sus acciones patgenas, algunas toxinas - como las que elaboran las bacterias del clera, del ttanos, del botulismo y de la difteria- se unen selectivamente a oligosacridos de ganglisidos presentes en la superficie celular. 8) En algunas clulas, determinadas glicoprotenas del glicocliz tienen propiedades enzimticas. Por ejemplo, diversas glicoprotenas pertenecientes al glicocliz de las clulas que revisten el intestino son peptidasas y glicosidasas que tienen por funcin completar la degradacin de las protenas y de los hidratos de carbono ingeridos, iniciada por otras enzimas digestivas. Glucosa Galactosa N-Acetilglucosamina N-Acelllgalaclosamlna
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3-8. Los hidratos de carbono cumplen funciones relevantes en las membranas celulares
Los hidratos de carbono de los glicolpidos y las glicoprotenas que se localizan en la superficie no citoslica (o luminal) de la membrana de los organoides que integran el sistema de endomembranas cumplen diversas funciones. Los correspondientes a la membrana de los lisosomas, por ejemplo, la protegen de las enzimas hidrolticas presentes en el interior del organoide (cap. 7-33). Los hidratos de carbono de los glicolpidos y las glicoprotenas que se localizan en la cara externa de la membrana plasmtica forman una nbicrla llamada glicocliz (fig. 3-14). Sus funciones son las siguitmll' ~ : 1) l'rol g u a la sup~:rfi i J. la,. lula de a.~t >< <>III ':: ""'' '"''''"11 y qtrlltri 1111 l'o1 kniJ<Iu, .-1 l',lkurlll it. dt hiN,., ltrhlll tllltr tuhPI 1 11 ) "1 " ,, h ,, 111

Fig. 3-15. Oligosacridos de la

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FUND~ENTOS DE BlOLOG!A CELULAR Y MOLECU LAR

PERMEABILIDAD DE LAS MEMBRANAS CELULARES
3-9. Los solutos y las macromolculas atraviesan las membranas celulares mediante meca nismos diferentes

3. LAS MEMBRANAS CELULARES

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Existe un flujo continuo de sustancias que entran y salen de la clula y circulan por su interior. Para ello, los solutos (es decir, los iones y las molculas pequeas) deben pasar a travs de las membranas celulares; tal fenmeno se denomina permeabilidad y ser estudiado en las prximas secciones de este captulo. En lo que respecta a las macromolculas, para atravesar las membranas algunas utilizan canales proteicos especiales llamados translocones, otras pasan por poros de sofisticada composicin y otras se valen de vesculas pequeas. Estas transferencias sern analizadas en los captulos dedicados al sistema de endomembranas (caps. 7-1 y 7- 12), la mitocondria (cap. 8-28), el peroxisoma (cap. 10-5) y la envoltura nuclear (cap. 12-4).
3- 1O. El pasaje de solutos a travs de las membran as celulares puede ser pasivo o activo

...... ----. ~T~

Fig. 3-17. Difusin de una sustancia disuelta en un solvente.

traciones (fig. 3-17). Esta diferencia se denomina gradiente de concentracin. Si el soluto posee carga elctrica, gravita adems el gradiente de voltaje o potencial elctrico que se establece entre los distintos puntos de la solucin. La suma de los gradientes de concentracin y de voltaje se conoce como gradiente electroqumico. La difusin a favor de tales gradientes es un proceso que ocurre espontneamente, sin gasto de energa, de ah que lleve el nombre de transporte pasivo.
3- 12. La difusin simple se produ ce a travs de la bicapa lipidica

El incesante intercambio de solutos entre el medio que rodea a la clula y el citosol y entre ste y el interior de los organoides se realiza a travs de la membrana plasmtica y de las membranas de dichos organoides, respectivamente. Segn los casos, el pasaje se produce sin gasto de energa o por mecanismos que requieren de ella. Cuando no consume energa, el proceso se denomina transporte pasivo; el dependiente de energa, transporte activo. El transporte pasivo se cumple a travs de los componentes de la bicapa lipdica o a travs de estructuras especiales, constituidas por protenas transmembranosas organizadas para el paso de los solutos (fig. 3- 16); estas estructuras son de dos tipos: los canales inicos y las permeasas, llamadas tambin transportadores. El transporte pasivo a travs de la bicapa lipdica se denomina difusin simple, y el que se realiza a travs de los canales inicos y las permeasas lleva el nombre de difusin facilitada. El transporte activo tiene lugar exclusivamente a travs de permeasas (fig. 3-16).
3- 11. El transporte pasivo de los solutos se produce por di fusin
Fig. 3-16. Distintos mecanismos y estructuras membranosas utilizados por los solutos para atravesar las membranas de la clula.

(!)

Cuando se disuelve un soluto en un solvente, las partculas del primero se dispersan en forma progresiva por todo el solvente hasta quedar uniformemente distribuidas. El movimiento del soluto - llamado difusin- se realiza desde los sitios en que se halla ms concentrado hasta los de menor concentracin, con una velocidad proporcional a la diferencia entre las concenCanal inico

Bicapa lipdica

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Permeasa

Permeasa

El transporte pasivo de solutos puede tambin ocurrir entre compartimientos acuosos separados por membranas semi permeables, como lo son las bicapas lipdicas de las membranas celulares. Este tipo de transporte se denomina difusin simple. Dichas membranas se llaman semipermeables porque los solutos estn obligados a sortear el tamiz que representa su doble capa de lpidos. Las sustancias que se disuelven en los lpidos atrav iesan con cierta facilidad la zona hidrofbica de las membranas. Existe una relacin lineal directa entre la solubilidad en Ipidos de una sustancia y su velocidad de difusin a travs de las membranas semi permeables. Tal relacin se expresa mediante el coeficiente de particin aceite/agua, que se mide agitando el soluto en una mezcla de ambos fluidos. Cuando se separan las dos fases, se determina la concentracin de la sustancia disuelta en cada una de ellas. La relacin concentracin del soluto en aceite/concentracin del soluto en agua da el valor del coeficiente de particin. Las molculas no polares pequeas -como el 0 2 , el C02 y el N2 - difunden libremente a travs de las bcapas lipdicas (fig. 3-18). Tambin lo hacen compuestos liposolubles de mayor tamao, por ejemplo, los cidos grasos y los esteroides. A pesar de ser molculas polares, el glicerol y la urea atraviesan fcilmente las membranas celulares porque son pequeas y no poseen carga elctrica . La bicapa lipdica de las membranas celulares permite el paso del agua por difusin simple. Debido a que el agua constituye el solvente en que se haN2 C02 02 H2 0 Urea Esteroides Acidos grasos Glicerol Nucletidos Aminocidos Glucosa lo~

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

3 . LAS MEMBRANAS CELULARES

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- Difusin simple
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-Difusin facilitada

Fig. 3-19. Velocidades de flujo de los solutos al atravesar una membrana por difusin simple y difusin facilitada, segn sus gradientes de concentracin.

Km Concentracin del soluto

funcin de la concentracin del sustrato (fig. 2-34). Tal comportamiento indica que el proceso es saturable. Cuando en un canal inico o en una perrneasa se alcanza la velocidad mxima de flujo, sta ya no aumenta por ms que se incremente la concentracin del soluto. Igual que en el caso de las enzimas, se puede definir la constante Km corno la concentracin de soluto en que se al canza la mitad de la velocidad mxima de flujo. En la mayoa de las circunstancias el valor Km tiene una relacin inversa con la afinidad del transportador por el soluto. ~e/~ ~m. mayor es la afinida~ y v~~sa:.1 En consecuencia, en este tipo desiste ma la velocidad de flujo del soluto puede expresarse mediante una ecuacin similar a la empleada para las enzimas (cap. 2- 15):
l= _ l mx _ [S] _ ,
Km+ [S]

llan disueltos los solutos y dispersas las rnacromolculas, el sentido del movimiento de las molculas acuosas depende del gradiente osmtico entre ambos lados de la membrana. En la seccin 3-16 se analizarn otros aspectos vinculados con el pasaje del agua a travs de las membranas celulares. La difusin de las molculas polares a travs de la bicapa lipdica es tanto menor cuanto mayor es su tamao; las hexosas, los aminocidos y los nucletidos, por ejemplo, prcticamente no difunden. En cuanto a los iones, dada su carga elctrica se unen a varias molculas de agua, lo cual les impide atravesar la bicapa lipdica por ms pequeos que sean (en el captulo 2-2 vimos que el agua se comporta corno un dipolo). La difusin simple se realiza en forma espontnea, con una velocidad directamente proporcional a la diferencia de concentracin (o gradiente) del soluto entre uno y otro lado de la membrana, como se observa en el grfico de la figura 3-19. Debe sealarse que la pendiente de la recta depende del grado de permeabilidad de la membrana al soluto. Como se vio, el sentido de la difusin depende del lado en que se halla ms concentrado el soluto.

donde J es la velocidad de flujo; l mx la velocidad mxima de flujo; [S] la concentracin del soluto, y Km la concentracin del soluto a la cual el flujo es igual a la mitad del mximo. Corno ocurre con las enzimas, existen sustancias que poseen estructura8 moleculares semejantes a la de los solutos y que pueden unirse a Jos canales inicos y a las permeasas y producir inhibiciones competitivas (cap. 2- 17). Tambin se producen inhibiciones de tipo no competitivo. .

3-14. Existen dos clases de canales inicos, los dependientes de liga ndo y los dependientes de voltaje
Los canales inicos son poros o tneles hidroflicos que atraviesan las membranas, formados por protenas integrales transrnembranosas generalmente de tipo multipaso. Existen canales inicos en todas las clulas, tanto en la membrana plasmtica corno en las de los organoides. Son altamente selectivos, de modo que hay canales especficos para cada tipo de ion (Na+, K, Ca2 +, Cl-, etc.). Los ms abundantes en la membrana plasmtica son los canales para el K. El fluj~un ion es impulsado por el gradiente electroqumico, resultante, como vimos, de la suma de los gradientes de concentr;;_c n y de voltaje entre ambos lados de la membrana. En la tabla 3-l se informan las concentraciones de los principales iones dentro y fuera de la clula. Normalmente el lado citoslico de la membrana plasmtica es electronegativo con respecto al lado exterior, lo cual favorece el ingreso --o dificulta el escape- de los iones con carga positiva. Con los iones negativos se da la situacin inversa. Por ejemplo, el gradiente de voltaje se opone a la salida del K de la clula, menTabla 3-1. Concentracin de los iones principales dentro y fuera de la clula
. bttracelular
Na 12 140 0,5
< 0,0005

',l

1 (

,r

3- 13. La difusin facilitada se produce a t ravs de canales inicos y de permeasas

( La mayora de las sustancias que atraviesan las membranas celulares a fadad mayor a la esperable si su pasaje fuera por difusin simple. La diferencia se explica por la presencia de ciertos componentes membranosos proteicos llamados canales inicos y permeasas, a travs de Jos cuales se facilita - aunque tambin se regula- la transferencia de Jos solutos de un lado al otro de la membrana. El sentido de la difusin se realiza siempre a favor de los gradientes de concentracin y voltaje. As, ante una inversin de esos gradientes, el sentido de la difusin tambin se invierte. Como vemos, en la difusin facilitada la fuerza que im ulsa la movilizacin de las partculas del soluto es el gradiente,_y por Jo tanto no consume energa. D~sde es:epu~~ifu sin facilitada es similar a la difusin simple; la diferencia reside en que en la primera participan estructuras proteicas reguladoras y en la segunda no. Durante el transporte pasivo de solutos por difusin facilitada, los complejos soluto-canal inico y soluto-permeasa muestra ;;_ar~sticas de especificidad y saturabilidad similares a las del complejo enzirna-sustra!Qi As, si en un sistema de coordenadas se representa la velocidad del flujo en funcin de la concentracin del soluto, se obtiene una curva hiperbli<:a, lo (' ll i tl n:n a '"'1',. (lig. una notable diferencia con la rclaci6n lineal di r ela de la dilu""" 1 1- I'J). l .a hip hola s S\'IIU'ianl<' 11 11 di vadu d1 In '" li vu lo ul o'" """"' ''' ''"

~ vor de gradientes -es decir, sin gasto de energa- lo hacen a una veloci-

Extracelular
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Mg1'

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1II'Cl ,

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FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR 3. LAS MEMBRANAS CELULARES

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tras que el gradiente de concentracin la favorece. Cuando estas fuerzas opuestas se equilibran, el gradiente electroqumico es igual a cero y el flujo del ion se detiene. El potencial de equilibrio de un ion puede calcularse conociendo su concentracin en el interior de la clula y en el medio extracelular, mediante la ecuacin de Nemst:
RT Ce RT Ce V ~ - - - In--= 2,303 - - - log - - zF Ci zF Ci

Fig. 3-22. A. Pasaje de iones a travs de ionforos transportadores mviles. B. Pasaje de iones a travs de ionforos formadores de canales.

3-15. Los ionforos aumentan la perm ea bilidad de las membranas biolg icas a ciertos iones
Existen sustancias -llamadas ionforos- que tienen la propiedad de incorporarse a las membranas biolgicas y aumentar su permeabilidad a di ver. sos iones. Son molculas de tamao relativamente pequeo, con una superficie hidrofbica que les permite insertarse en la bicapa lipdica. Se conocen dos ti os de.ioilJ oros los transportadores mviles y los formadores de cana_les. Como los canales inicOS," permiten fluj os de iones basados en gradientes electroqumicos. Los transportadores mviles atrapan al ion en un lado de la membrana, lo engloban en el interior de sus molculas, gi ran 180 en la bicapa lipdica y lo liberan del otro lado de la membrana (fig. 3-22A). A este grupo pertenece el antibitico valino icina, un pptido anular que transfiere K. Otro ion. que transfiere Ca2 y Mg2+; es utiforo de esta clase es el llamado~ lizado en experimentos en los que se desea incrementar rpidamente la concentracin intracelular de Ca2 . Los ionforos formadores de canales son conductos hidrofbicos que permiten el pasaje de cationes monovalentes (H, Na, K). A este grupo pertenece la gramicidina A , un antibitico oligopeptdico compuesto por 15 aminocidos. Tiene una configuracin helicoidal y el conducto que se halla en el interior de la hlice constituye el poro. Su corta longitud hace necesaria ) l la participacin de dos molculas consecutivas para construir un poro transmembranoso continuo (fig. 3-22B).

Fig. 3-20. Esquemas que muestran los mecanismos de pasaje de los iones a travs de los canales inicos dependientes de voltaje (arriba) y de ligando (abajo).

donde V es el potencial de equilibrio (en voltios); Res la constante de los gases (1,987 cal mo- 1 K- 1 ); Tes la temperatura absoluta; F, la constante de Faraday (2,3 x 1o-<~ cal v-); z, la carga del ion, y Ce y Ci son las concentraciones extracelular e intracelular del ion. La mayora de los canales inicos no estn abiertos en forma permanente, pues poseen un dispositivo de apertura y cierre semejante al de una "compuerta", accionado por dos clases de factores (fig. 3-20): algunos canales abren su "compuerta" en respuesta a un cambio en el potencial elctrico de la membrana y otros cuando les llega una sustancia inductora (ligando) por el lado citoslico o por el lado no citoslico (caps. 11 -2 y 11 -18). A los primeros se los llama canales dependientes de voltaje; a los segundos, canales dependientes de ligando. Surge de lo expuesto que para que se produzca el pasaje de un soluto a travs de un canal inico no slo es necesaria la existencia de un gradiente electroqumico sino tambin un estmulo apropiado, el cual, segn los casos, corresponde a un cambio en el potencial de membrana o al arribo de una sustancia inductora (ligando). La estructura de un canal inico semeja un cilindro hueco que atraviesa a la membrana. Su conducto central se estrecha y se ensancha de forma semejante a un reloj de arena, de modo que posee amplias bocas de acceso y de salida. En un punto el conducto alcanza un dimetro muy pequeo; esta zona le da la especificidad al canal, puesto que en ella se produce el reconocimiento del ion segn su tamao y su carga. \ La pared del cilindro se forma con varias protenas transmembranosas, 1 cuatro en los canales regulados por cambios de voltaje y cinco en los canales dependientes de ligando (fig. 3-21). Los canales inicos mejor estudiados son los de las clulas nerviosas; incluso se han clonado los genes que codifican sus protenas y analizado la secuencia de sus nucletidos. Ello permiti establecer que son estructuras que se han conservado con pocas modificaciones a travs de la evolucin, ya que existe una notable homologa en dichos canales en especies filogenticamente muy distantes.

3- 16. Las acuaporinas son ca nales especiales que permiten el paso selectivo del agua
Aunque no se trata de canales inicos, resulta oportuno analizar aqu un dispositivo molecular que posibilita el pasaje de agua a travs de algunas membranas celulares. En varias clases de clulas - particularmente los glbulos f()j.Q_y.Jas epiteliales de los _Rlexos coro_ideQ_s~~ biliar_y el tb.ulo proximal de la ~a- la membrana plasmtica es excepcionalmente permeable al agua, mucho ms de lo esperable si su transporte se realizara exclusivamente mediante el mecanismo de difusin simple analizado en la seccin 3-1 2. Ello se debe a la presencia de canales de paso especiales conocidos con el nombre de acuaporinas. L~porinas estn constituidas por cuatro protenas de 28 kDa iguales entre s (ffienos una, que est glicoslada), denominadas CHIP (por channelforming integral protein), cada una de las ~-;~mpone de seis a. hlices transmembranosas. Como muestra la figura 3-23, en la formacin de la pared del canal intervi ncn solamente las dos a hlices intermedias de cada ,ua :1 lravC,s d, l:1s :wu:tporiu:ts .'<" 1 \":JCllll'. Si ,,.11 s s:1IH: q1w , ]p:~oo;: lj , ''-" a
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Jo"ig. 3-21. Esquemas tridilllCnsionales de los canales illicos d pendientes de vnltaj< (A) y tk lij\a11d11 (JI).

Fig. 3-23. Acuaporina. Se ilustra un corte transvcrs;l l que pasa po r e l plano d la mem

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FUNDAMENTOS DE B!OI.-OGIA CELULAR Y MOLECULAR

3. LAS MEMBRAN AS CELULARES

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3-17. Existen distintas clases de permeasas pasivas, involucradas en procesos de monotransporte, cotransporte y co ntratransporte

Monotransporte

Cotransporte Contratransporte Fig. 3-25. Tipos de pcnneasas segn sean atravesadas por uno o por dos solutos y, en el segundo caso, las direcciones en que lo hacen.

Como en los canales inicos, la pared de las permeasas est comnmente integrad por varias prote.nas transmembranosas multipaso. Cada ermeasa p~s~sitios de uninlespecficos para ~ o dos clase.s de solu~os, accesibles desde- una o desde ambas caras de la bicapa. La fijacin de oluto pr.oduce un_ cJ!mbio conf aco al en la e~asa, merced al cual se transfiere el material hacia el otro lado de la membrana (fig. 3-24). En esta seccin slo analizaremos a las permeasas que permiten el traspaso pasivo de solutos, correspondiente al mecanismo de difusin facilitada. La aclaracin se debe a que la clula posee protenas transportadoras similares pero conformadas para el traspaso activo de solutos, con gasto de energa (seccin 3-18). Existen tres clases de permeasas (fig. 3-25): 1) las que transfieren un solo tipo de soluto; esta forma de transferencia se llama monotransporte (en ingls, uniport); 2) las que transportan dos tipos de solutos simultneamente, ambos en el mismo sentido; este mecanismo se denomina cotransporte (symport); 3) las que transfieren dos tipos de solutos en sentidos contrarios; esta clase de transferencia recibe el nombre de contratransporte (antiport). Debe sealarse que en el cotransporte y en el contratransporte las transferencias de Jos dos solutos se hallan acopladas obligadamente, es decir, una no se produce sin la otra. ,... Son ejemplos de difusin facilitada mediante permeasas: 1) el monotransporte de glucosa y el cotransporte de Na y glucosa en la membrana plasmtica de las clulas de la mucosa intestinal (seccin 3-21); 2) el contratransporte de Na y H a travs de la membrana plasmtica de casi todos los tipos de clulas; 3) e_l contratrans orte de Cl- y HC03- por una permeasa de la membrana plasmtica de los eritr2sitos, llan1ada band<:_3 (cap. 5-36); 4) el contratransporte de ADP y ATP por la membrana interna de la mitocondria (cap. 8-16) (fig. 8-10).
3-18. El tran sporte activo requiere energa

3-1 9. La bomba de Na+K+ es un sistema de contratransporte

Cuando el transporte de un soluto se realiza en direccin contraria a su gradiente de concentracin o de voltaje, slo es posible con gasto de energa, de ah que a este tipo de pasaje se lo llame transporte activo. El transporte activo tiene lugar a travs de permeasas ll amadas bombas, y en este caso tambin existen formas de monotransporte, cotransporte y contratransporte. Ms an, el transporte activo de solutos presenta las mismas caractersticas de especificidad y saturabilidad sealadas para la difusin facilitada, aunque difiere de sta por realizarse en contra del gradiente del soluto. Existen innumerables ejemplos de permeasas involucradas en procesos de transporte activo. En las prximas secciones describiremos unas pocas, representativas de la mayora.

Uno de los sistemas de transporte activo ms difu ndidos es el que establece las diferencias en las concentraciones de Na y de K entre el interior de la clula y el lquido extracelular, que por ello es responsable del mantenimiento del potencial elctrico de la membrana plasmtica. Se lo denomina bomba de NaK+ o Na+K+-ATPasa y tiene por funcin expulsar Na al espacio extracelular e introducir K en el citosol (fig. 3-26). Dado que transfiere solutos diferentes en sentidos contrarios, se trata de un sistema de contratransporte. La bomba de NaK es un complejo integrado por cuatro subunidades - dos a y dos~ (<Xz~ 2 )-, que son protenas integrales de la membrana plasmtica. Cada subunidad a posee una masa de alrededor de 100 kDa y atra_es una gliviesa la membrana unas ocho veces. En cambio, cada ~idad p coprotena de unos 45 kDa que posee va~"ias ~ oligosacridas en el.extremo que da a la cara no citoslica de la m_:_~b~a. Los lpidos de la bicapa vecios a las cuatro ca enas polipeptdicas infl uiran en el funcionamiento de la bomba, ya que sta se inactiva cuando se la asla y se ex traen los lpidos que la acompaan. Las subunidades a tienen sitios especficos para la fijacin del Na en sus extre-;;:;;;;ctoslicos y sitiosrese~;;-dos para la unin del K en sus extremos ~os. La~ transferencias de Na hacia el exterior y de K hacia el citosol se hallan acopladas: una no puede realizarse sin la otra. Como consecuencia, el funcionamiento de la bomba provoca el intercambio de Na intracelular por K extracelular; ambos flujos se reali zan en contra de sus respectivos gradientes. El sistema necesita e nerga, que se obtiene de la hidrlisis del ATP. Para ello, la NaK-ATPasa cataliza dicha hidrlisis mediante una reaccin que requiere la presencia no slo de Na y de K sino tambin. de Mg2. El A:TP se une a un siti espec.fiE.2_ d~ la subunidad a en la cara itoslica de- la mem-

Fig. 3-26. NaK-ATPasa o bomba de Na K.

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Fig. 3-24. Esquema que representa a una pcrmcasa y el rlltJclo t on1o lu nii'H v it~: uu lo~;
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LUZ DEL INTESTINO Na' e

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K'

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e

Glucosa

brana y su hidrlisis se halla acoplada al transporte de los iones. Cada ATP que se hidroliza posibilita el transporte de tres Na hacia el espacio extracelular y de dos K hacia el citosol. El resultado del funcionamiento de la bomba puede resumirse mediante esta ecuacin:
3 Na + 2 K, + ATP -> 3 Na, + 2 K; + ADP+ P ,

se debe a que Jos crdiotnicos, al competir con el K+, 1mp1den la hberac1n del fosfato ligado a la subunidad a del transportador. Como consecuencia, el sistema se bloquea y disminuye la salida de Na al medio extracelular. Esto disminuye el rendimiento de un c~tratransportad:>r Jlasivo -el de Na y Ca2_, mediante el cual ingresa Na+ en la clula y sale Ca2'. Dada la menor oferta de Na desde el lquido extracelular, se inhibe su intercambio con el Ca2', que se retiene en el citosol. La mayor concentracin de Ca2 citoslico hace contraer a las clulas musculares cardacas con ms fuerza (caps. 5-33 y 5-34).

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donde los subndices i y e junto a los smbolos Na y K' indican "intracelular" y "extracelular", respectivamente.

3-21. Diversos tra nsportadores pasivos, aunque ajenos . a la bomba de Na+K+, funcionan bajo su dependencta
La dependencia del cont@transQ,Qrtador de Na y Ca2' de la actividad de la bomba de Na K+ es slo un ejemplo de los muchos que existen durante el funcionamiento normal de la clula. En efecto, una amplia variedad de transportadores son impulsados por el gradiente de Na generado por esa bomba, el cual "arrastra" a los dems. En consecuencia, si la bomba de Na K se detiene, los transportadores pasivos que dependen de ella dejan de funcionar. El transportador-de gluco x.&f.otransportador de Na y ;Iucosa, responsables del transporte transcelular del monosacrido a travs del epitelio de la mucosa intestinal, son otros ejemplos representati vos de transporte acoplado al funcionamiento de la bomba de Na K (fig. 3-27). Tambin Jo es el CO.!!.\D!tran..Qorte de Na y H: El Na ingresa en el citosol a favor de su gradiente y se intercambia por H+, que es expulsado de la clula. Este mecanismo tiene gran importancia en la regulacin del pH intracelular y se halla presente en casi todos Jos tipos celulares.

1'

Na' e

Fig. 3-27. Transporte transce-

lular de glucosa en el epitelio intestinal. A raz de la presencia de uniones oclusivas entre

las clulas epiteliales (cap.

6-11 ). la glucosa debe atravesar las clulas para llegar a

El sentido del flujo puede revertirse s i las concentraciones de Na'e y de K; aumentan por encima de ciertos lmites y se agrega ADP y P; en este caso la NaK-ATPasa acta como una ATP sintasa. No obstante, normalmente la bomba acta de acuerdo con la ecuacin antedicha: expele tres Na ~ por cada dos K que ingresan (fig. 3-26). lo crea Glucosa la diferencia de voltaje (o el potencial elctnco) que existe entre ambos lados de la membrana plasmatica, donde el lado citosl.ico es normalmente electronegativo con respecto aliado extracelular (fig. 3-26). A asj_ombas que g~neran o~nciall s elctr~s 9e f(!embrana se las gefjne como electrog11icas. "'

Durante su funcionamiento, la NaK-ATPasa atraviesa ciclos de fosforilos capilares sanguneos siJacin y desfosforilacin que determinan cambios alternados en su forma. De tuados debajo del epitelio. los mecanismos propuestos para explicar cmo acta la bomba, el que ms se Aunque la glucosa ingresa en ajusta a Jos resultados experimentales es el siguiente: la clula en contra de su gradiente, lo hace pasivamente. ( 1) En las subunidades a existen sitios de alta afinidad para tres Na', un 2 Ello se debe a que entra junto ATP y un Mg ', fcilmente accesibles desde la superficie citoslica de la con el Na a travs de una membrana plasmtica. Cuando se produce la hidrlisis del ATP, se libera el permeasa cotransportadora pasiva. Sin embargo, este ADP y el tercer fosfato es transferido a un cido asprtico de uoa de las subtransporte de glucosa insume a, lo cual propicia la fijacin de tres Na en el interior del transunidades energa, ya que el Na debe portador. ser expulsado hacia la matriz extracelular por el lado 2) Pronto se produce un cambio conformacional en la estructura de la peropuesto de la clula mediante measa. Como resultado, los Na quedan expuestos hacia el lado exterior de la una permeasa activa, la bomclula. Adems disminuye su afinidad por las subunidades a, por lo que Jos ba de NaK. Na son liberados en el medio extracelular.
) 3) Entre tanto, dos K+ del lquido extracelular se unen a la permeasa y se fijan en sus sitios en las subunidades a. Esta unin provoca la liberacin del fosfato ligado al transportador.
4) Tal desfosforilacin hace que el transportador recupere su configuracin original, por lo cual los K quedan expuestos hacia el interior de la clula. Dado que adems disminuye su afinidad por las subunidades a, estos iones ingresan en el citosol, lo cual completa el ciclo.

Fig. 3-28. Formacin del HCI 3-22. Una bomba de K+H+ es responsable de la formacin k. j en la cavidad estomacal. Obdel HCI gstrico ~ t''-' \'' ' . srvense las uniones oclusiEn Ja membrana plasmtica de las clulas Q_ariet~ de la mucosa gstnvas. el transporte transcelular de CI- y de qu manera la acca existe una bomba de KH cuya estructura no es bien conocida. Da Jugar tividad de la bomba de KH al contratransporte de K y H+ con gasto de energa. Hace que se incremense combina con las funciones ten los niyi<les de K' en el citosol y permite que se alcancen elevadas caneende los otros transportadores. CAVIDAD DEL ESTOMAGO traciones de H+ en la secrecin gstrica. Secundanamente, el gradiente K' K' w c1 electroqumico del K determina su t salida-pasiva_ des.deja c_ lulaaja ca. _ _ . ~----41 vjgad_estpl!)a~ a_E_ac .. om aa~ ~-' ~

\/

da_p~<ilid.a_de Cl- ~luz deL~.tQm.ago se une al H' y forma

HCl(fig. 3-28). Como puede verse, i a formacin de HCl en el jugo gstrico depende de la actividad de la bomba de KH. El ~1- salen de la clula por sendas permeasas monotrans1 ortadoras. , El CJ- proviene de la sangre e ingresa en la clula por el . a lado opu sto del epitelio gstnco

Unin oclusiva

'? . . J.
w

1
1

el-

~
Hco 3 \
C02 + H2 0

3- 20. Algunos frmacos cardiotnicos inhiben la bomba de Na+K+

La NaK-ATPasa es inhibida por frmacos del tipo de la ouaba11a y la digitoxi11a -ampliamente utilizados como cardiotnicos-, los cuales bloquean el contratransporte de Na y K en concentraciones de 10 ' M . l:slas s11slancias actan en la superficie de las clulas 11nindos :o lotrl 1111"'1 .,. las ::uhu11idad,s rY, f'l'srvado~ pura los K' . l.a irrhihi,i,'m .,. lulu>~ulfl " ' l'l r< ' J' '

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1111 ~ontratran~porlador

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3. LAS MEMBRANAS CELULARES

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3-23. Distintas bombas de Ca 2 + mantienen la concentracin del ion en el citosol en niveles muy bajos La concentracin de Ca2 en el citosol se mantiene en niveles bajsimos (ms de 1.000 veces menores que los existentes en la matriz extracelular) debido a que existe un sistema que lo expulsa. As, tanto en la membrana plasmtica como en la membrana del retculo endoplasmtico (o del retculo sarcoplasmtico, en la clula muscular) existen bombas de Ca2 que transfieren el catin desde el citosol hacia el eseacio extracelular y hacia el ~el cjJ.ado retculo, respectivamen~ La bomba de Ca2 posee sitios especficos de alta afinidad para el Ca2 en la cara citoslica de ambas membranas. Al igual que la bomba de Na K+, la bomba de Ca2:_requiere Mg2 y energa, que toma del ATP. ---.::o..
A

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Na

LUZ DEL CONDUCTO

p-

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ct-

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e-

r
ct-

3-24. Una bomba de H+ disminuye el pH de los lisosomas Una alta concentracin de H en el interior de los lisosomas es crucial para la activacin de sus enzimas hidrolticas, las que se hallan en condiciones de actuar slo cuando el pH en esos organoides se reduce a 5,0 (cap. 7-33). El transporte de H desde el citosol al interior del lisosoma es un proceso activo que depende de una bomba de H heredada de la membrana del endosoma precursor (caps. 7-28 y 7-30) (fig. 7-22). 3-25. Existen dos t ipos de t ra nsporte de H+ en la mtocond ria , uno activo y otro pasivo El traslado de H a travs de la membrana interna de la mitocondria durante el avance de los electrones por la cadena respiratoria es otro ejemplo de transporte ae ti vo, aunque en l la energa no es provista por el ATP sino por el citado recorrido electrnico (cap. 8-1 5). El gradiente electroqumico que se crea entre ambos lados de la membrana mitocondrial interna es utilizado para sintetizar ATP, al retornar los H a la matriz mitocondrial a travs de un transportador pasivo asociado a la ATP sintasa (figs. 8-10 y 8-12). 3-26. Las MDR son transportadores que confieren a las clulas resistencia a ciertas drogas Las protenas MDR (por multidrug resistance) pertenecen a una familia de transportadores activos que se identifican con la sigla ABC (por ATP-binding cassette) porque poseen un par de dominios o "casetes" con actividad ATPasa. Esta hidro liza el ATP que provee la energa necesaria para movilizar a determinados solutos en contra de sus gradientes. Los transportadores ABC se encuentran normalmente en las membranas de muchos tipos celulares. Han sido identificados en la membrana plasmtica, en la del retculo endoplasmtico, en la del peroxisoma y en la membrana mitocondrial interna. Algunos de esos transportadores tienen por funcin eliminar sustancias t~_s deriy1!das. del metabolismo celular normaL En cambio, otros~!:!llitrn el paso de molculas de tamao mayor que el esperado, como polip_ptidos pequeos (caps. 7-14 y 7-24). -, A veces ciertos tipos de transportadores ABC aparecen en gran nmero en la membrana plasmtica de varias clases de clulas cancerosas, n lns que les confieren una indeseada resistem;ia contra alp,unas drogns l'itotox htw. 1~llo es debido a qu~ las MI)J~ homhtmt u s u.~ d1nl~iiN IIH ' I 1 do ! 111 , 1 ( 11 111 111111 1 111 t.IW , l11 cpw h tt 't que ' 'JI IN , ~ V III lvun 14 ,,. h 111 u 111 qn l111 t1j1 11 '1 '1"

Fig. 3-29. A. Transporte de CJ- a travs de la protena CFTR, situada en la membrana plasmtica que da a la luz del conducto. B. Bloqueo del pasaje de Cl- a consecuencia de un defecto en la CFTR .

Por otro lado, se ha observado un aumento similar de protenas MOR en la membrana plasmtica de los linfocitos infectados por el virus tipo 1 de la inmunodeficiencia adquirida (HIV-1), lo que contribuira a su resistencia a drogas antivirales como la AZT. Tambin se produce un incremento de protenas MOR en la membrana plasmtica de las clulas de algunos parsitos, que por tal moti vo se hacen resistentes a las drogas antiparasitarias. Por ejemplo, la Leishmania (agente de la Jeishmaniasis) puede desarrollar resistencia al antimonio y a otros compuestos, mientras que el Plasnwdium falciparum (agente de la malaria) suele hacer lo propio con la cloroquina, la halofantrina, laprimaquina y la mefloquina. Como en los casos anteriores, aqu tambin las MOR bombean las drogas fuera de las clulas, lo que anula su poder teraputico. 3- 27. En la fibrosis quistica se halla a lterado un canal inico para el elLa fibrosis qustica es un grave desorden causado por la produccin de secreciones muy viscosas que obstruyen la luz de los bronquios, los conductos de varias glndulas (como el pncreas), el tubo intestinal, etc. Se manifiesta en individuos homocigotos que poseen mutado el gen codificador de la protena CFTR (por cystic fibrosis transmembrane conductance regulator), que en algunas clulas epiteliales se comporta como una permeasa y en otras como un canal inico dependiente de ligando. La protena CFfR se halla involucrada en el transporte de CJ- a travs de la membrana plasmtica, y cuando es defectuosa el mecanismo que lleva a la fibrosis qustica es el siguiente. Dado que el transporte de CJ- a travs de la CFrR se bloquea, disminuye el unin en la luz de los conductos afectados y, por consecuencia, disminuye tambin el catin Na (fig. 3-29). Finalmente, la menor concentracin de estos iones determina que el agua se retire y ello aumenta la viscosidad de las s creciones. Debido u que la CFrR pertenece a la familia de transportadores ABC, resulta llamativo que en algunas clulas no acte como una permeasa activa si11" L:Ottlo un canal i(mico dependiente de ligando, que como se sabe es pasivo. Eu I'N IIs !' llulus, tlll!l quiuusa a 'livudu por ol AMP cfclico (cap. 11 - 15) , ""''"'" ln np 1lo11 n dol ('1111111 i mil'o , por muh, 1'1 pus o dl'l ('1 a t'nvor el su

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

3. LAS MEMBRANAS CELULARES

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LA MEMBRANA PLASMATICA Y LA PARED DE LA CELULA VEGETAL

3-28. La membrana plasmtica de la clula vegetal se halla rodeada por una especie de exoesqueleto
~-Glucosa

__.,.
Fibrilla elemental (micela) Corte transversal de una microfibrilla Parte de una macrolibrilla

Las clulas de las plantas son similares a las de los animales, aunque presentan algunas diferencias (figs. 1-6 y 1-7). Por ejemplo, la clula vegetal posee una gruesa pared celular que envuelve a la membrana plasmtica, como si se tratara de un exoesqueleto. Adems de darle proteccin y sostn mecnico a la clula y determinar su forma, dicha pared participa en el mantenimiento del balance entre la presin osmtica intracelular y la tendencia del agua a penetrar en el citosol. Tambin el crecimiento y la diferenciacin de las clulas vegetales dependen en gran medida de la organizacin de la pared celular. As, a partir de sta se produce la diferenciacin de las clulas del cmbium, de los vasos cribosos del floema (los cuales sirven para el transporte de material desde las hojas) y de los vasos del xilema (que se lignifican).
3-29. La pared celular contiene un retcu lo microf ibrilar

~
Celulosa

La estructura de la pared celular puede ser comparada con la de un plstico reforzado con fibras de vidrio, ya que est constituida por un retculo microfibrilar incluido en una matriz de molculas unidas entre s. Las microfibri!las de la pared celular estn compuestas principalmente por celulosa, el producto ms abundante en la Tierra. Se trata de cadenas rectas de polisacridos formados por unidades de glucosa, ligadas por enlaces ~1-4 (ftg. 3-30). Estas son las cadenas de glucano, que mediante uniones de hidrgeno intramoleculares e intermoleculares producen la unidad estructural o microfibrilla, la cual tiene 25 nm de dimetro y est compuesta por casi 2.000 cadenas de glucano. Las microfibrillas de celulosa se asocian entre s Y compone n un enrejado semicristalino, que se combina con protenas y con polisacridos no celulsicos para formar la pared celular. La matriz de la pared celular contiene algu nos polisacridos y lignina, el principal componente de la madera. Los polisacridos ms importantes son: 1) sustancias pcticas solubles en agua, que contienen galactosa, arabinosa y cido galacturnico, y 2) hemicelulosas, compuestas por glucosa, xilosa, manosa y cido glucurnico. La lignina se encuentra slo en las paredes de las clulas maduras y est formada por un compuesto aromtico derivado de la polimerizacin de fenoles. Algunas paredes celulares pueden tener sustancias cuticulares (ceras) y depsitos minerales, corno silicatos y carbonatos de sodio y de magnesio. En los _hongos y las levaduras la matriz de la pared celular contiene quitina, un pohmero de la glucosamina. 3-30. La pared celular se compon e de una pared primaria y una secundara La pared celular es complej a y en algunos vegetales se halla muy diferenciada. Suele contener dos componentes -la pared primaria y la pared secundaria-, que se desarrollan secuencialmente y se distinguen por la composi cin de sus matrices y por la disposicin de sus microfibrillas. La pared primar ia comienza a form arse cord divisi6u r <'lular, 11 partir de una estructura llamada placa c~; lular, qttl' ap;trc'l'l' dttr:utlt ' lt ,,., ol tt1t1 , 11 .. 1 plnun <-' l'll:tlorial utrr las f'ullltm: ,. l11lm: ltiju, (t 'ttp. 1~ ' 11 1 11 11111 11 1 t11

compuesta por vesculas del complejo de Golgi que se alinean en el plano ecuatorial de la clula y forman el primer rudimento o capa intermedia de la futura pared celular. Esta capa slo contiene pectina, un compuesto amorfo que posee cido galacturnico. Posteriormente, cada clula hija deposita otras capas, compuestas por pectina, hemicelulosa y un retculo laxo de microfibrillas celulsicas orientadas transversalmente con respecto al eje mayor de la clula, cuyo conjunto constituye la citada pared primaria. Slo cuando la clula alcanza su madurez aparece la pared secundaria, que comprende materiales agregados sobre la superficie interna de la pared primaria, sea como espesarnientos localizados (vasos del xilema) o corno un espesamie nto homogneo (tubos cribosos del floerna). En ambos casos lapared secundaria queda formada por celulosa, hemicelulosa y escasas sustancias pcticas. La diferenciacin ulterior del xilema se produce por la infiltracin de lignina en los espesamientos localizados . En este caso el polmero reemplaza al agua e infiltra a la matriz y a las microfibrillas celulsicas. Cuando la pared se lignifica, la clula vegetal muere.
3-31. Los componentes de la pared celular se origi nan en el complej o de Golgi o en relacin con la membrana plasmtica

Fig. 3-30. Elementos estructurales de la celulosa en sus sucesivos niveles de organizacin. (De D. K. Mhlethaler.)

Se han descrito dos vas principales para la biognesis de la celulosa y de otros componentes de la pared celular. Una comprende al complejo de Golgi (cap. 7-44) y la otra est asociada con la membrana plasmtica. La intervencin del complejo de Golgi es evidente en ciertas algas cuyas paredes estn formadas por escarnas. Estas tienen un material amorfo y un retculo microfibrilar radial asociado con otro espiral. Las membranas del complejo de Golgi polimerizan cadenas de glucosa para formar microfbrillas de celulosa por medio de glucosiltransferasas. Luego las microfibrillas se organizan en escamas y se liberan en la superficie. La membrana plasmtica es el sitio ms frecuente para la sntesis de la celulosa. Ello no descarta las funciones esenciales que desempean el retculo endoplasmtico y el complejo de Golgi, ya que las glucosiltransferasas son sintetizadas en ribosornas asociados a dicho retculo, pasan al complejo de Golgi y de ah a la membrana plasmtica, donde se produce la sntesis de las microfibrillas celulsicas. Antes se seal que en los hongos y en las levaduras la pared celular se w mponc principalme nte de quitina. Este polisacrido es sintetizado por la L:nz.itll:t quitina sint tasa en pn:sencia de UDP-acetilglucosamina. La enzima t ' S nctiv:tda por protl' tlisis y pur la luz. que :tcclc r:t la sntesis ele qui tina. Se ltiit'tll'ontrndo qnilinn llllnsl'l'tilsa en los qnitisomas , unos oranoidt:s vcsil'u1111\',

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El citosol

4-1. Introduccin

En el captulo 1-3 se vio que las clulas eucariotas poseen algunas semejanzas con las procariotas. As, el citosol---{) matriz citoplasmtica- de la clula eucariota contiene muchos de los componentes que se encuentran en el protoplasma de la bacteria, por ejemplo, complejos enzimticos de diverso orden y molculas de ARN ribosmico, mensajero y de transferencia. Las diferencias entre ambos tipos celulares estn dadas por la presencia en la clula eucariota de varias estructuras singulares, como el ncleo, el citoesqueleto, los organoides que integran el sistema de endomembranas, las mitocondrias, Jos cloroplastos (en la clula vegetal) y los peroxisomas. La clula eucariota se halla dividida en numerosos compartimientos, entre los cuales sobresale el ncleo. La parte de la clula que no corresponde al ncleo -es decir, el citoplasma- puede ser subdividida esquemticamente en dos espacios, el correspondiente al citosol y el encerrado en el interior de los organoides. En este esquema, el citosol es considerado como el verdadero medio interno celular, que se extiende desde la envoltura nuclear hasta la membrana plasmtica y que llena el espacio no ocupado por el sistema de endomembranas, las mitocondrias y los peroxisomas (fig. 1-7). En promedio el citosol representa el 50% del volumen del citoplasma, cifra que aumenta en las clulas embrionarias y en las menos diferenciadas. El pH del citosol es de 7,2.
4-2. El citosol contiene compon entes muy variados

Mediante la tcnica del fraccionamiento celular descrita en el captulo 23-28, se obtiene - adems de las fracciones nuclear, mitocondrial y microsrnica- una fraccin fluida sobrenadante que contiene los componentes citoslicos. En ella se detectan los elementos del citoesqueleto -incluido el centrosoma con los centrolos- , un gran nmero de enzimas (por ejemplo, las que intervienen en la gluclisis), la mayora de las molculas que conducen seales dentro de la clula, los elementos que dirigen la sntesis de las protenas celulares y extracelulares (es decir, los ribosomas, los ARN mensajeros y los ARN de transferencia), las chaperonas, los proteasomas, las inclusiones, etctera.
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FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

4. EL CITOSOL

73

ms difundido es la lipofuscina, de color marrn, compuesto por fosfolpidos combinados con protenas. Debido a que aumenta con la edad, se lo conoce como pigmento de desgaste (cap. 7-33). Finalmente, en el citosol de algunas clulas hay cristales de protenas, de significado por lo general desconocido.

4-4. En e l citosol los ri bosomas sint etizan protenas

La sntesis de las protenas celulares tiene lugar en los r ibosomas, de cuyo estudio nos ocuparemos en el captulo 16. Se trata de estructuras ribonucleoproteicas muy complejas, la mayora de las cuales se localizan en el citosol (en los captulos 8-11 y 9-15 se ver que tambin existen ribosomas en las mitocondrias y los cloroplastos). Solamente una parte de las protenas que se si ntetizan en los ribosomas citoslicos permanece en el citosol, ya que las restantes emigran hacia el ncleo, el sistema de endomembranas, las mitocondrias y los peroxisomas (fig. 4-3). Como es lgico, para que las protenas puedan llegar a esos destinos se requiere de un sistema de seales especficas que sean capaces de discriminarlos, a fin de asegurar la llegada de cada protena al lugar que le corresponde. Tales seales se encuentran en las mismas molculas proteicas y consisten en una o varias secuencias de unos pocos aminocidos, denominadas pptidos seal y seales de anclaje (cap. 7- 12). Segn cul sea el destino de la protena que emerge del ribosoma, esas secuencias se localizan en el extremo amino, en el extremo carboxilo, o en uno o ms puntos intermedios de la cadena proteica. La tabla 4-l informa sobre las seales ms comunes halladas en las protenas que se dirigen al ncleo, al sistema de endomembranas, a las mitocondrias y a los peroxisomas. Naturalmente, las protenas que no emigran y se radican en el citosol no necesitan ningn tipo de seal.

Fig. 4-1. Micrografa electrnica de un sector del citoplas""' de la clula heptica. En el dtosoi vecino al retculo endoplasmtico liso (REL) se ohservan numerosos grnulos de glucgeno (GI). Obsrvese 1 retculo endoplasmtico rugoso (RER). 45.000x. (Cortesra de G. E. Palade.)

Fig. 4-2. Esquema de una clula mamaria activa, con numerosas gotas de grasa en el citosol. Obsrvese la salida de las gotas de grasa por secrecin apocri na.

Por ejemplo, tanto en los hepatocitos como en las clulas musculares estriadas es comn la presencia en el citosol de grnulos de glucgeno (figs. 1-11 y 4-1). Se llaman glicosomas, miden entre 50 y 200 nm y estn compuestos por subpartculas de 20 a 30 nm de dimetro. Es preciso sealar que en las imgenes ultramicroscpicas los glicosomas no corresponden directamente al glucgeno; representan a las protenas enzimticas que intervienen en la sntesis y en la degradacin del polisacrido, cuya molcula no toma los colorantes electrnicos de uso corriente. Los grnulos de glucgeno constituyen depsitos de energa para las clulas; ello es claramente visible en laclula muscular, en la que los grnulos desaparecen durante las contracciones debido a la glucogenlisis producida para proveer glucosa. Existen enfermedades congnitas producidas por mutaciones de los genes que codifican a las enzimas que regulan la sntesis y la degradacin del glucgeno, conocidas como glucogenosis . En ellas las clulas muestran una acumulacin excesiva de inclusiones de glucgeno o formas anormales del polisacrido. Diversos tipos de clulas contienen gotitas de grasa (triacilgliceroles) en el citosol, que tambin constituyen reservas de energa. Son muy comunes en los hepatocitos y en las clulas musculares estriadas. En las clulas musculares las inclusiones de grasa se localizan cerca de las mitocondrias, hacia las cuales se dirigen los cidos grasos de los triacilgliceroles para su oxidacin (cap. 8-8). Las clulas llamadas adipocitos contienen una gran gota de grasa - con numerosas gotitas a su alrededor- que ocupa casi todo el citosol (fig. 1-8). En el citosol de las clulas secretoras de la glndula mamaria en actividad se generan gotas de grasa que se convierten en elementos importantes de la leche. Durante la secrecin mamaria cada gota sale de la clula envuelta por una fina capa de citosol rodeada por una fraccin de la membrana plasmtica (secrecin apocrina) (fig. 4-2). En algunos tipos e hilares el citosol contiene pigmentos (sustaudas ou
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4-5. Las chape ronas asisten a las prot enas para su oportuno y adecuado plegamiento
Si bien las protenas adoptan formas tridimensionales que dependen de la secuencia lineal de los aminocidos que las componen (cap. 2-9), no siempre se pliegan correctamente. Para que sus plegamientos sean correctos se necesita, entre otros requisitos, que se produzcan en el lugar adecuado y en el mo-

CITOSOL

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Retculo endoplasmtico
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4. EL CITOSOL

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74

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

Chaperonina

Fig. 4-4. Esquemas de las chaperonas hsp70 y hsp60. El mecanismo de accin de la chaperona hsp90 se ilustra en la figura 11-3.

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hsp70 hsp60

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mento oportuno, lo cual se logra por la intervencin de unas estructuras llamadas chaperon!'\5, que se designan as porque acompaan a las protenas y -sin ejercer acciones directas sobre ellas- previenen sus plegamientos prematuros y cuidan que sean correctos. Existen tres familias de chaperonas, denominadas hsp60, hsp70 y hsp90 (por heat shock protein). La sigla hsp se debe a que en las clulas sometidas a golpes de calor se pierde el plegamiento de las protenas (se desnaturalizan) y aumenta considerablemente el nmero de las chaperonas. las cuales asisten a las protenas desnaturalizadas para que vuelvan a plegarse. El nmero que acompaa a la sigla hsp corresponde al peso molecular de la primera chaperana descubierta en cada grupo. Las chaperonas hsp70 son monomricas y poseen un surco en el que cabe slo una parte de la protena asistida, de manera que se necesitan varias chaperonas hsp70 para cada protena (fig. 4-4). En cambio, las chaperonas hsp60 son polimricas y estn integradas por 14 o 18 polipptidos denominados chaperoninas, los cuales componen una estructura cilndrica en torno a un espacio central, adonde ingresa la protena que va a ser asistida (fig. 4-4). Para ejemplificar cmo actan las chaperonas hsp70 y hsp60 analizaremos sus efectos sobre las protenas del citosol. A medida que emana del ribosoma, cada protena citoslica se asocia con sucesivas chaperonas hsp70, cuya funcin es prevenir el plegamiento prematuro -a menudo errado- de los tramos proteicos que van saliendo del ribosoma. Adems evitan que la protena naciente se combine con molculas inapropiadas. Cuando tennina de sintetizarse y su plegamiento concluye, la protena se desprende del ribosoma y de las chaperonas hsp70 y fija residencia en el citosol. No obstante, si algunas de sus partes no se plegaron o lo hicieron mal, ingresa temporalmente en una chaperona hsp60, dentro de la cual -aislada de los dems componentes citoslicos- termina de plegarse o deshace su plegamiento incorrecto y se pliega de nuevo, tratando de hacerlo sin errores. Tabla 4- 1. Ejemplos de pptidos seal y seales de anclaje

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Ubiquitina Polipptidos reguladores

PROTEASOMA

Las protenas destinadas al sistema de endomembranas, a diferencia de las .t as debi.do a que a medida que salen del ribosoma mgresan en el reCl OSO IC , , d tculo endoplasmtico. se pliegan en la cavidad de este organOI e, que cuenta con chaperonas hsp70 (cap. 7-12). Respecto de las protenas destinadas a las mitocondrias, desde que salen del ribosoma son asistidas por chaperonas hsp70 citoslicas, l~s cuales las mantienen desplegadas hasta que llegan a su paradero. En el capttulo 8-28 se ver que se pliegan despus que se incorporan a las mttocondrias, en cuya matriz hay chaperonas hsp70 Y hsp60. . Opuestamente, las protenas destinadas a los peroxisomas los abord~: despus de haberse plegado en el citosol (cap. 10-5), de lo cual se deduce q se pliegan con la asistencia de chaperonas hsp70 y hsp60 citoshcas Y que los peroxisomas carecen de chaperonas. Lo mismo ocurre con las protenas destinadas al ncleo, que t~poco posee chaperonas. En el captulo 11-6 se analizar cmo estas protemas -plegadas en el citosol- atrav iesan los poros de la envoltura nucleat . Adems se ver que algunas ingresan en el ncleo asociadas a chaperonas de la fam!lta

Fig. 4-5. Degradacin de protenas en el proteasoma .

hsp~~be agregarse que las chaperonas consumen energa derivada del ATP y
que pueden ser reutilizadas apenas concluyen sus funcwnes. 4- 6. En el citosol los proteasomas degradan a las protenas que deben desaparecer En el citosol existen estructuras que desempean funciones opuestas a ~as de los ribosomas ya que destruyen a las protenas. As, cuando una pro;e111a debe desaparece; - porque se ha plegado mal, se ha daado o su funcwn ha concluido- , es degradada por un complejo enzimtico de unos 700 kDa llamado poteasoma. d roteasas l'll prot asoma es de forma cilfndrica y se compone" e vanas. p va dislmestus <l ll tomo 11 1111 a ..;avidad ~:entra!, adonde mgt es.t la p10tema qt~e " . 1 1 ) Su strnl'ltn'n l"S tll, S COIIIJIIllja. Yll q11c .JUIII O il ;,\l (l l f; . 11 111'1 ( 1 l')'l' lll l11111 '. . l ' l' 1 ru~ lwlln 1111 .. ,~n,lt pH'I (~" Hol~ku lnlq'l'!ulu put nlll't ,.
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Pptido seal para el retculo endoplasmtico Seal de anclaje para el retculo cndoplasmtico l'ptido seal para el ncleo

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

Para poder ingresar en el proteasoma, las protenas destinadas a desaparecer deben ser previamente "marcadas" por un conjunto de polipptidos citoslicos iguales entre s, de 76 aminocidos cada uno, llamados ubiquitinas. En la figura 4-5 se resume el ciclo seguido por estas molculas. La plimera ubiquitina es activada por la enzima El, que la transfiere a la enzima E2. A continuacin, con la ayuda de la ligasa E3, el complejo ubiquitina-E2 se une a la protena que debe degradarse. Puesto que el proceso de transferencia entre las enzimas El y E2 se repite varias veces, la protena queda conectada con una corta cadena de ubiquitinas. De inmediato este complejo es reconocido por los polipptidos reguladores de uno de los casquetes, los cuales separan a las ubiquitinas, deshacen el plegamiento de la protena y la introducen en la cavidad del proteasoma, donde es degradada por las proteasas. Se originan oligopptidos cortos, los cuales salen del proteasoma y se vuelcan en el citosol. El proceso descrito consume energa. Esta es cedida por molculas de ATP, de cuya hidrlisis se encargan seis ATPasas situadas en los casquetes del proteasoma. Cuando finaliza la degradacin de la protena, el proteasoma y las ubiquiti nas quedan disponibles para su reutilizacin.
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El citoesqueleto
Forma y motilidad

5-1. El citoesqueleto est compuesto por tres tipos de filam entos y numerosas protenas accesonas
Las clulas eucaliotas poseen un armazn proteico filamentoso desplega: do por todo el citosol, al que se le ha dado el nombre de citoesqueleto. Es~a integrado por tres clases de filamentos - los filamentos mtermedws, los,microtbulos y los filamentos de act.ina (fig. 5-1 )- y un conjunto de protemas accesorias clasificadas como reguladoras, ligadoras y motoras. . Las pro~enas reguladoras controlan el nacimiento,. el. alargamiento, el acortamiento y la desapalicin de los tres filamentos prmcipales del ctoesqueleto. Estos procesos se basan en las propiedades moleculares de Jos filamentos, puesto que son polmeros integrados por umdades monomncas --<lispuestas linealmente- que pueden sumarse o restarse. , Las protenas ligadoras conectan a los filamentos entre SI o con otros componentes de la clula. . Las protenas motoras sirven para trasladar macromolculas y organodes de un punto a otro del citoplasma. Tambin hacen que dos filamentos contiguos y paralelos entre s se deslicen en direcciones op~estas, lo cual const~ tuye la base de la motilidad, la contraccin y los cambws de forma de la celula. Esta propiedad le confiere una funcin adiCIO~al al Citoesqueleto, la de ser el "sistema muscular" de la clula, es decir, la cJtomuscul~tura. El eJemplo ms estructurado de interaccin entre filamentos y protemas motoras se en la encuentra en la miofiblilla de la clula muscular esqueltica, Td d que componen un armazn macromolecular adaptado para la contractJ 1 a . El citoesqueleto da la forma -estable o cambiante- a las clulas, com~ resultado de la interaccin de los tres ti pos de filamentos con distmtas protei. 1 1 nas accesolias. En plimer trmino sern analizados los filamentos mtermedws, uego os microtbulos y finalmente Jos filamentos de actina, cada uno con sus respectivas protenas accesorias.
Filamentos interme dios

Microtbulos

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

5 . EL CITOESQUELETO

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FI LAMENTOS INTERMEDIOS
5- 2. El dimetro de los filament os int erm edios es de 10 nm En el citoesqueleto de la mayora de las clulas existen filamentos de 10 nm de dimetro; se denominan intermedios porque tienen un grosor menor que el de los microtbulos y mayor que el de los filamentos de actina (fig.
5-1).
Fig. S-3. A. Distribucin de los filamentos intennedios en el ncleo y en el ciloplasma. Los nucleares, llamados laminofilamentos, fonnan una malla sobre la cara interna de la envoltura nuclear. B. Micrografa de una clula tratada con anticuerpos antiqueratina fluorescentes. (De R. D. Goldmao.)

La composicin qumica de los filamentos intermedios es diversa. Por esta causa, aunque tambin por su morfologa y su distribucin en las distintas clases de clulas, se los agrupa en seis tipos, llamados: 1) laminofilamentos; 2) filamentos de queratina; 3) filamentos de vimentina; 4) filamentos de desmina; 5) filamentos gliales, y 6) neurofilamentos. Todos los filamentos intermedios muestran la misma organizacin estructural. Se trata de polmeros lineales cuyos monmeros son protenas que presentan una estructura en hlice a fibrosa (fig. 5-2). Esto los diferencia de los microtbulos y los filamentos de actina, que poseen monmeros globulares. Las protenas fibrosas estn integradas por una sucesin de secuencias idnticas de siete aminocidos cada una ( ... abcdefgabcdefgabcdefg ...), lo que les permite combinarse entre s lado con lado y componer dmeros lineales. En virtud de que los dmeros vuelven a combinarse entre s -tambin de a dos, pero en forma desfasada y antipara lela- se generan tetrmeros como los ilustrados en la figura 5-2. A continuacin, los tetrmeros se conectan por sus extremos y dan lugar a estructuras cilndricas alargadas llamadas pro/ofilamentos. Los filamentos intermedios se forman con el concurso de cuatro pares de protofilamentos, los cuales se adosan por sus lados y componen una estructura fibrilar de lO nm de grosor (fig. 5-2). A pesar de las diferencias entre los monmeros de las distintas clases de filamentos intermedios, todos se organizan de la forma en que se acaba de describir. Los monmeros son codificados por multigenes que se expresan de manera diferente en los distintos tipos de clulas. Ms an, a veces en una lnea celular se expresan sucesivamente varios de esos genes conforme avanza su diferenciacin. Los filamentos intermedios forman una red continua tendida entre la membrana plasmtica y la envoltura nuclear, alrededor de la cual componen una malla filamentosa compacta (fig. 5-3A). Otra malla como sta cubre la
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cara interna de la envoltura nuclear, de modo que se trata de filamentos intermedios que no se localizan en el citoplasma sino en el interior del ncleo. La distribucin de los filamentos intermedios puede apreciarse en la figura 5-3B , que muestra a una clula epitelial tratada con anticuerpos antiqueratina fluorescentes. Los filamentos intermedios contribuyen al mantenimiento de la forma celular y establecen las posiciones de los organoides en el interior de la clula. No obstante, su funcin principal es de ndole mecnica, de ah que se encuentren mucho ms desarrollados en las clulas sometidas a grandes tensiones. 5- 3. Diversas propiedades caracterizan a los distintos tipos de filamentos intermedios La siguiente es una breve descripcin de las caractersticas principales de los seis tipos de filamentos intermedios: L aminofilamentos. En todas las clulas, apoyada sobre la cara interna de la envoltura nuclear existe una malla delgada de filamentos intermedios conocida como lmina nuclear, compuesta por filamentos intermedios llamados larninofilamentos, que son los nicos que no se localizan en el citosol (cap. 12-2) (fig. 12- 1). Los laminofilamentos contienen tres clases de manmeros, con pesos moleculares que van de 65 a 75 kDa. Estos monmeros poseen dominios fibrosos ms largos que los de los filamentos intermedios cil.oslicos y su ensamblaje genera una malla aplanada, no una red tridimensional. La lmina nuclear es responsable de la forma y la resistencia de la envoltura nuclear. Filamentos de quer a tina. Los filamentos de queratina - llamados tambin tonofilamentos- se encuentran en las clulas epiteliales, particularmente en la epidermis y sus derivados (pelos, uas, etc.), en las mucosas y en las glndulas. En los captulos 6-7 y 6- 13 veremos que se asocian a los hemidesmosomas y a los desmosomas, con los cuales componen una trama filamentosa continua desplegada por todo el epitelio, al que le confieren gran parte de su resistencia mecnica. Una protena ligadora denominada ftlagrina une a los filamentos de queratina donde se entrecruzan. Los mon meros de los filamentos de queratina se llaman citoqueratinas. Existen alrededor de 30 c itoqueratinas distintas, clasificadas en dos grupos: las de clase /, que son cidas, y las de clase 11, que son neutras o bsicas. l .os dislirrlos tipos tk t:<:lulas epiteliales contienen filamentos de querati1111 cl ikll\llt l".'l ddidn :1q1w r all11 11110 fabrica i1oq11cratinas d distinta calidad. l 'ul t'i 'lllplt,, hu. ('(' lu l:a/. piftlillc. de lll v,! g~t ('tlllli('IH"II 1111!1 n unhin:ui(m

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR 5. EL CITOESQUELETO

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con una pared de 6 nm de espesor y una luz central uniformemente clara

Fig. S-4. A. Distribucin de los microtbulos en el citoplasma. Todos nacen en la matriz centrosmica. que adems contiene el par de cenrrlolos del diplosoma. B. Micrografa de una clula cultivada tratada con anticuerpos antilubulina fluorescentes. (De M. Osbom and K. Weber.)

particular de citoqueratinas, pertenecientes a las clases l y II. Algo similar ocurre en los otros epitelios. Estas combinaciones particulares son aprovechadas para diagnosticar el origen de algunos tumores cancergenos y sus metstasis, ya que las citoqueratinas no se modifican con la transformacin cancerosa y pueden identificarse con la ayuda de anticuerpos especficos (cap. 23-26). Filamentos de vimentina. Los filamentos de vimentina (del latn vimentus, ondulado) presentan un aspecto ondulado y sus monmeros tienen un peso molecular de 54 kDa. Son muy comunes en las clulas embrionarias. En el organismo desarrollado se localizan en las clulas de origen mesodrmico, como fibroblastos, clulas endoteliales, clulas sanguneas, etctera. La protena ligadora que une a los fil amentos de vimentina donde se entrecruzan es la plactina. Dado que los anticuerpos contra los monmeros de vimentina muestran reacciones cmzadas en clulas de mamferos, aves y anfibios, puede afirmarse que son protenas que se han conservado en el curso de la evolucin. Filamentos de desmina. Los filamentos de desmina estn formados por monmeros de 53 kDa y se encuentran en el citoplasma de todas las clulas musculares, sean estriadas (voluntarias y cardacas) o lisas. En las estriadas ligan a las miofibrillas por sus lados (seccin 5-33). En las clulas cardacas tambin se asocian a los desmosomas de los discos intercalares (seccin 5-34 y cap. 6-13). En las clulas musculares lisas se asocian con los filamentos de actina (seccin 5-35). Los filamentos de desmina se unen entre s mediante una protena ligadora especfica, denominada sinamina. Neurofilamentos. Los neurofilamentos son los principales elementos estructurales de las neuronas, incluidas las dendritas y el axn. En ste forman un enrejado tridimensional que convierte al axoplasma (el citosol del axn) en un gel altamente resistente y estructurado. En los neurofilamentos se han reconocido tres clases de monmeros, con pesos que van de 68 a 200 kDa. Filamentos gliales. Los filamentos gliaJes se encuentran en el citosol de los astrocitos y de aJgunas clulas de Schwann. Estn compuestos por manmeros cidos de 50 kDa. Los oligodend.rocitos no contienen esta clase de filamentos intermedios.

(fig. 5-l). . 1) t De acuerdo con su localizacin, los microtbulos se clasifican en: Cl oplasmticos, presentes en la clula en interfase; 2) mitticos, correspondie~ tes a las fibras del huso mittico; 3) ciliares, locahzados en el eJe de l~s C ilios, y 4) centriolares, pertenecientes a los cuerpos basales y los centnolos. Aunque todos tienen las mismas caractersticas morfolgicas, difieren en unas pocas propiedades. Por ejemplo, los Cihares y los centnolares son muy estables comparados con los citoplasmticos y los rrutt1.cos, que cambian permanentemente de longitud. . . . Las protenas accesorias de los mtcrotubulos (reguladoras, hgadoras Y motoras) reciben el nombre de MAP (por microtubule-assoCLaled protetns).
5- 5. Los microtbul os citopl asmt icos nacen en el_centrosoma, que cont iene un par de centrolos y una matnz

Los inicrotbulos citoplasmticos nacen en una estructura contigua al ncleo llamada centrosoma. Desde all se extienden por todo el Citoplasma hasta arribar a la membrana plasmtica, en la que se fijan; en consecuencia, parecen rayos que van del centro a la periferia celular (fig. 5-4A). Esta disposicin de los microtbulos puede apreciarse en la figura 5-4B, que muestra a una clula cultivada tratada con anticuerpos antitubulina fluoresce~tes . , El centrosoma se llama tambin centro organizador de los mJcrotubuJos 0 MTOC (por microtubule-organizing centre). Est co:npuesto por un par de centrolos o diplosoma (del griego diplos, doble, Y som_a, cuerpo) Y ~na sustancia aparentemente amorfa que los circunda, la matnz centrosmica (figs. 5-4A y 5-23). Esta matriz contiene una red de fibras muy delgadas Y un complejo de protenas reguladoras denominadas y-tubulinas. .. Dada la semejanza de Jos centrolos con los cuerpos basales de los cilios, sern descritos junto a stos en la seccin 5- 14.
5- 6. La tubulina es el componente monom rico de los microtbulos
Fig. 5-S. Formacin y organizacin estructu ral de los nucrotbulos. Se ilustra el modo como se combinan las u-tubulinas con las ~-tubulinas para formar la pared tubular, integrada por trece protofil amentos.

Los microtbulos son polmeros compuestos por unidades proteicas llamadas tubulinas. A su vez, cada tubulina es un heterodmero de ~ 10 a 120 kDa, cuyas dos subunidades -denominadas artubulina y ~tubulma- son protenas de tipo globular (fig. 5-5). Existen seis tipos diferentes de a-tubu-

MICROTUBULOS
5-4. El dimetro de los microtbulos es de 25 nm Los microtbulos son fil amentos del citoesqueleto que sc hull a u \ "JI asi lodas las ~:6lulas cucariotas y pos 'en un di{lmctro de 2.5 11111 ( lir 1 'll ;;,, r11 1 u 1c1 i t .llll por s u asw~: lo luhubu y porque son uolahlctuc 111c "e tilhu " il y
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5. EL CITOESQUELETO FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

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Fig. S-6. Polimerizacin (alargamiento} y despolimerizacin (acortamiento} de Jos microtbulos por sus dos extremos.

Fig. 57. Nac imiento de un microtbulo a panir de la matriz centrosmica, mientras otros se alargan, se acortan o desaparecen.

linas y seis de ~-tubulinas, pero siempre se combinan una a-tubulina con una ~-tubulina, nunca dos a-tubulinas ni dos ~-tubulinas entre s. En el captulo 16-21 sern analizados los mecanismos que regulan la produccin de las a-tubulinas y de las ~-tubulinas en los ribosomas. Adems de ser distintas, las dos subunidades de las tubulinas son muy afines, lo cual permite que la subunidad a de cada tubulina pueda combinarse no slo con la subunidad ~ del propio heterodmero sino tambin -por medio de su extremo libre- con la subunidad ~de otra tubulina (fig. 5-5). Adems, los heterodmeros pueden unirse entre s por sus flancos, y lo hacen de un modo tal que se cierran en crculo. Estas particularidades llevan a la formacin de una estructura tubular cuya pared parece estar integrada por varios filamentos que recorren el eje longitudinal del microtbulo, conocidos como protofilamentos. Observado el microtbulo en un corte transversal, puede verse que contiene 13 protofilamentos (fig. 5-5). La figura 5-5 permite comprobar que existe un desfase entre las a-tubulinas y las ~-tubulinas de los protofilamentos contiguos. Es por ello que en los cortes transversales de los microtbulos no se observa una alternancia regular entre las a-tubulinas y las ~-tubulinas sino dos o tres subunidades iguales contiguas (fig. 5-5). Debido a la polaridad de las tubulinas, el propio microtbulo resulta polarizado, ya que en uno de sus extremos quedan expuestas las subunidades a y en el otro las subunidades ~ Los heterodmeros pueden agregarse (polimerizarse) o retirarse (despolimerizarse) por ambos extremos. Como es obvio, durante la polimerizacin el microtbulo se alarga, y durante la despolimerizacin se acorta. Uno de Jos extremos del microtbulo se llama ms (+]; el otro, menos(-] (fig. 5-6). Estas designaciones se deben a que por el extremo(+] el microtbulo se alarga y se acorta ms rpidamente que por el extremo (-] (fig. 5-6).

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Fig. S-9. Intercambio de las tubulinas-GDP y de las tubulinas-GTP entre los microtbulos y el citosol.

El complejo de y-tubulinas tiene forma anular, su dimetro es similar al de los microtbulos y se comporta como un molde a partir del cual se nuclean las primeras 13 tubulinas. Su forma sea como la de la figura 5-8, que permite el desfase existente entre las tubulinas de los protofilamentos conuguos. Adicionalmente, el complejo de y-tubulinas se comporta como un capuchn que bloquea el crecimiento y el acortamiento del microtbulo por su extremo[- ]. Cuando las tubulinas se despolimerizan de Jos microtbulos, pasan a formar parte del depsito de tubulinas libres del citosol. Inicialmente cada tubulina contiene un GDP en su subunidad ~. que no tarda en mtercamb1arse por un GTP en el mismo citosol (fig. 5-9). Luego las tubulinas con GTP son atradas por los extremos [+)de los microtbulos en crecimien:o y se unen a ellos. A diferencia de Jo que ocurre en el citosol, la pohmenzac!On hace que el GTP de las tubulinas se hidrolice en GDP y fosfato. Como se ve, la formacin de los microtbulos es un proceso que consume energa. Llamativamente, las tubulinas con GDP tienden a despolimerizarse del extremo [+] de los protofilamentos (fig. 5-9), lo cual se debe al encorvamiento que experimenta tal extremo por influencia precisamente del GDP
. . .' (fig. 5-l 0). As descrito, el proceso de polimerizacin y despohmenzaciOn de las tubulinas comprendera un crculo vicioso, ya que la polimerizacin ~on la consiguiente formacin de GDP- llevara a la inmediata despoh~enzacin de los monmeros. Esto no ocurre debido a que las tubuhnas rec1en mcorpoCapuchn
~

5- 7. Los microtb ulos citoplasmtcos son estructuras di nmicas

El extremo [-] de los microtbulos se localiza en el centrosoma. All Jos procesos de polimerizacin y de despolimerizacin se encuentran bloqueados por influencia de un componente centrosmico (ms adelante se ver que se trata del complejo proteico de y-tubulinas). Los microtbulos citoplasmticos son estructuras dinmicas, ya que incesantemente se forman microtbulos nuevos a la vez que algunos se alargan y otros se acortan hasta desaparecer (fig. 5-7). Los microtbulos se desarrollan a partir de la matriz centrosmica. Para ello, unas pocas tubulinas (provenientes del depsito de tubulinas libres que se encuentran en el citosol) concurren a ]a matriz centrosmica y se nuclean (se polimerizan). Este ncleo constituye el primer esbozo del microtbulo y se forma por influencia del complejo proteico de y-tubulinas, que promueve el ensamblaje de las primeras 13 tubulinas del extremo f- ]. Los ntr olos no th'stllllpdlan ningn papel en este proceso. De inmediato ul nlil't"IIhnlo ,."
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Fig. 5-10. Formacin del ca puchn de tubulinas-GTP en el extremo del microtbulo. Obsrvese que cunndo el GTP s mvicrl en (il >P y no se 11' 1111\' VU rl l ' lll'llt'l l 11, tlt' lh\ 1''' nd' n luN 1uludln1N
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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

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Fig. 5-11. Utilizacin de los microtbulos como vas sobre las cuales se desplazan las protenas motoras dinena y quinesina para transportar materiales entre distintos puntos del citoplasma.

radas demoran un tiempo en hidrolizar sus GTP y forman un capuchn de tubulinas-GTP en el extremo del microtbulo, el cual impide la salida de las tubulinas arribadas con anterioridad, a pesar de que en ellas el GTP ya se convirti en GDP (fig. 5-l 0). A causa de esta particularidad --denominada inestabilidad dinmica-, cuando un microtbulo alcanza la longitud deseada, para mantenerla debera alternar breves perodos de polimerizacin con otros de despolimerizacin. Dado que en trminos energticos ello sera muy oneroso, se descuenta la existencia de protenas reguladoras que se unen al extremo[+) del microtbulo para evitar esa inestabilidad. La despolimeri zacin del microtbulo es mucho ms rpida que la polimerizacin. La diferencia de velocidad se hace evidente cuando el microtbulo pasa de una fase de alargamiento a otra de acortamiento y viceversa. En el primer caso la despolimerizacin es tan abrupta que se la conoce como "catstrofe". En cambio, cuando el acortamiento cesa y el microtbulo comienza a alargarse, el proceso - por ser relativamente lento-- lleva el nombre de "salvamento". En el citosol existe una protena reguladora -llamada catastrofina- que detiene el crecimiento de los microtbulos y lleva a su despolimerizacin tras la prdida del capuchn de tubulinas-GTP. La colchicina, un medicamento utilizado para el tratamiento de la gota, acta en forma semejante, ya que se une a las tubulinas e impide su polimerizacin, lo que lleva -al no formarse el capuchn- a la desaparicin de los microtbulos. El colcemid es un derivado de la colchicina que posee los mismos efectos.
5-8. Los microtllbulos citoplasmticos son necesarios para el transporte de los organoides y las macromolculas

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ras. Se ha calculado que la quinesina se desplaza unos 8 nm por cada ATP hidro!izado. Un ejemplo de transporte mediante estas protenas se obse~va en los_melanocitos de la piel, cuyos grnulos de melanina, ante determJOados estt~u los, se deslizan a Jo largo de los microtbulos tanto centrpeta comocentnfugamente. Otro ejemplo corresponde a Jos axones, donde las qumesmas conducen molculas y vesculas desde el cuerpo neuronal hasta el termmal axnico, y las dinenas las retornan. . , Las neuronas contienen otra protena motora ligada a Jos mtcrotubulos. Se llama dinamina y, a diferencia de la quinesina y la dinena, posee acttv tdad GTPasa. Adems, como se ver en el captulo 7-37, en todos los tipos celulares la dinamina provoca el desprendimiento de las vesculas transportadoras que se generan mediante cubiertas de clatrina.
5- 9. Los microtbulos citoplasmticos contribuyen < 1 establecer la forma celular

Fig. 5-12. Unin de las vesculas transportadoras a la quinesina y a la dinena mediante las protenas transmembranosas quinec_ tina y dinactina, respecti vamente.

Los microtbulos citoplasmticos constituyen verdaderas vas de transporte por las que se movilizan macromolculas y organoides (mitocondrias, vesculas transportadoras, etc.) de un punto a otro del citoplasma. Esta funcin es realizada con la asistencia de dos protenas motoras, la quinesina y la t:;::na. Cuando se hallan "cargadas" con el material a transportar, la quinesina se desliza hacia el extremo [+] del microtbulo y la dinena hacia el extremo [-) (fig. 5-11 ). Estas protenas motoras estn compuestas por cuatro cadenas polipeptdicas, dos pesadas y dos livianas (fig. 5-12). Cada cadena pesada contiene un dominio globular (o cabeza) y uno fibroso (o cola). El fibroso se conecta con el material a transportar y el globul~ se une al microtbulo. En la membrana de los organoides y de las vesculas transportadoras se han identificado las protenas transmembranosas quinectina y dinactina, con las cuales se unen la quinesina y la dinefna, respectivamente. La energa consumida durante el transporte es aportada por l'l i\TP. lu go ,.. su hidrlisis por ATPasas presentes n las ~;ah za ~ ti!' 1 11 ~1 t""''' 11 ti' lllPio

Los microtbulos contribuyen al establecimiento de las formas que adquieren las clulas. Adems, mediante protenas accesorias, mantienen al retculo endoplasmtico y al complejo de Golgt en sus poscones en el Cttoplasma, 0 que determina la polaridad celular. Se ha comprobado que en la estabilizacin de estos organoides intervienen, respecttvamente, la qumesma y la dinena, dos protenas motoras. . En las neuronas, los microtbulos se hallan tambin en las dendntas Y en el axn (fig. 5-13). Ms an, el crecimiento del axn depende del alargamiento de sus microtbulos. Durante ese alargamiento, a la altura del cono de crecimiento del axn, se ha descubierto entre los microtbulos a la antes mencionada dinamina. Provoca el deslizamiento de algunos microtbulos sobre otros, Jo que se. ra necesario para el proceso de avance del cono por la matnz extracelular (seccin 5-28). En el cuerpo neuronal y en el axn se ha identificado una MAP r~guladora llamada tau (por la letra griega 't) que inhibe la despohmenzacwn de las

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FUNDAM ENTOS DE BIOLOOIA CELULAR Y MOLECULAR

5. EL CITOESQUELETO

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Fig. 5-14. Distribucin de los microtbulos rnitticos (o fi bras del huso mittico) durante la divisin celular.

tubulinas en los extremos de los microtbulos. Ejerce tambin una funcin ligadora, ya que establece puentes entre los microtbulos contiguos y les confiere estabilidad. Otras MAP ligadoras, llamadas MAPl y MAP2, .crean puentes similares entre los microtbulos neuronales. Las tau contienen un nmero determinado de fosfatos, cuyo aumento altera su funcionamiento normal. El aumento de los fosfatos podra producirse por la presencia de quinasas sobreactivas o de fosfatasas hipoactivas. Esto ocutTe en la enfermedad de Alzheimer, caracterizada por un deterioro neuronal progresivo a consecuencia de la inestabilidad de los microtbulos. Como se vio en la seccin anterior, stos son imprescindibles para el transporte intracelular de organoides y de otros materiales vitales para la clula.
5-1 O. Los microtbulos mitticos movilizan < l los cromosomas durante la mitosis y la meiosis

Microtbulo B - - - - - --.

~-----------Microtbulo

,-------Nexina

Doblete

Brazo externo

(',,1-Vl.:- - - Brazo interno

Protelna radial

Las funciones de los microtbulos mitticos sern analizadas detalladamente en el captulo 18-14. La clula en mitosis y en meiosis posee dos centrosomas en lugar de uno; y los microtbulos citoplasmticos que se observan en la intetfase son reemplazados por Jos microtbulos mitticos, llamados tambin fibras del huso mittico (fig. 5-14). A diferencia de los citoplasmticos, en los microtbulos mitticos el extremo [-] no se halla bloqueado por la matriz centrosmica, de modo que los microtbulos pueden polimerizarse y despolimerizarse tambin por ese extremo. Se puede hacer desaparecer a los microtbulos mitticos mediante el uso de la vinblastina y la vincristina. Estas drogas actan de forma semejante a la colchicina (seccin 5-7), aunque lo hacen casi selectivamente sobre las fibras del huso, de ah que se las utilice para bloquear las divisiones de las clulas neoplsicas en el tratamiento del cncer. El taxol es otra droga usada para tratar el cncer, pues impide la despolimerizacin de las fibras del huso e induce su crecimiento descontrolado, incompatible con la divisin celular.
5-11. Los microt bulos ciliares forman el eje de los cilios

central

Vaina interna

Doblete

y los flagelos
Brazo externo

Los cilios son apndices delgados -de 0,25 j..l.m de dimetro y varios micrones de largo- que surgen de la superficie de diversos tipos celulares (fig. 1-7). Los de mayor longitud se llaman flagelos. Cada uno est compuesto por un eje citoslico - la matriz ciliar- envuelto por una prolongacin de la membrana plasmtica. En medio de dicha matriz, siguiendo el eje longitudinal del cilio, se enc uentra un armazn filamentoso regular llamado axonema, integrado por varios microtbulos paralelos entre s asociados con protenas accesorias (figs. 5-15 y 5-16). Ms adelante describiremos su composicin y sus funciones. Cada cilio nace en un cuerpo basal o cinetosoma (del griego kineets, movible, y soma, cuerpo), que es una estructura idntica a un centrolo del dplosoma. Los cuerpos basales y los centrolos sern analizados en la seccin 5-14. '
5-12. Los cilios se mueven

Protelna radial

Brazo interno

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Los cilios son estructuras que se mueven. Segn las clulas en que se hallan, sus movimientos sirven para arrastrar fluidos y partculas (l'""'" <><"lllTC en ul ;\rbol respiratorio), pam desplazar a otras clulas (po1' 'i''"'(iln, i <lf, csP< 'IUIIII<>I.oidts, 1 ovoito o 1 ig oto n la l roll l(lil ult'duu) " 1''"" "'""el'""'
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Fig. 5-16. Arriba. Esquema de un corte transversal del axonema que muestra la configuracin 9 + 2 caructcrlstica de los micronhulos del cilio. L a vista se dirige de la ralz a la punta del cilio. Debe resallars la disposi i6 n de los nlicmt1hulos pt:rifricos, los cuales se hallan asociaclos cn1rc sf de a pares, lla11111tlos tlohl tlr :.. Oh~~t<z vcww In. dl.d nt n.~ (')mH'/1 de pz'otcum: llgadorns y tlmo las fH'otnns II IOitii'HS til'
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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

5. EL CITOESQUELETO

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Fig. 5-17. Disposicin en doblete de un par de microtbulos perifricos del axonema.

El movimiento ciliar puede ser pendular, unciforme, infundibuliforme u ondulante. En el movimiento pendular el cilio parece rgido y se flexiona en su base. En el unciforme (el ms comn en los metazoos) el cilio se dobla y adquiere la forma de un garfio. En el infundibuliforme, rota describiendo una figura cnica. En el ondulante, caracterstico de los flagelos, el movimiento se desplaza desde el extremo proximal al extremo distal del cilio. En las superficies epiteliales cubiertas por cilios puede verse que stos se mueven coordinadamente y dan Jugar a verdaderas ondas que se desplazan por el epitelio en una determinada direccin. Estas ondas se producen porque cada cilio se mueve con un pequeo retraso (o adelanto) con respecto al situado por delante (o por detrs) de l. El paso de la onda de una clula a la vecina derivara del pasaje de ciertos solutos (seales) a travs de las uniones comunicantes que vinculan a las clulas epiteliales entre s (cap. 6-14) (fig. 6-12). El movimiento ciliar es producido por el axonema (figs. 5-15 y 5-16). Observados en un corte transversal, los microtbulos del axonema muestran una configuracin especial, conocida como "9 + 2". Ello obedece a que en la parte perifrica de esta estructura se observan nueve pares de microtbulos -los cuales forman un crculo-, y en la parte central, dos microtbulos ms. Se dice "9 + 2" porque los dos microtbulos de cada par perifrico estn firmemente unidos entre s -forman un doblete- y los del par central estn separados. Uno de Jos microtbulos de cada par perifrico, identificado con la letra A, es completo, es decir, posee 13 protofilamentos; el otro, llamado B, es incompleto, pues posee 10 u 11 protofilamentos (fig. 5-17). Los dobletes se disponen en forma oblicua, de modo que el microtbulo A se halla ms prximo al centro del cilio que el microtbulo B. Adems, los extremos (-]de ambos microtbulos apuntan hacia el cuerpo basal (fig. 5-18). El axonema contiene protenas ligadoras y protenas motoras (fig. 5-16). Las protenas ligadoras unen a los dobletes entre s y los sostienen en sus posiciones en el interior del cilio, lo cual mantiene la integridad del axonema durante el movimiento ciliar. As, las nexinas unen el microtbulo A de un doblete con el microtbulo B del doblete vecino; la vaina interna rodea a los microtbulos centrales, y Las protenas radiales unen a los microtbulos A con esa vaina. Las protenas motoras estn representadas por la dinena ciliar. Esta se diferencia de la dinena citoplasmtica porque es ms grande y tiene tres cadenas pesadas y tres cadenas livianas, en lugar de dos de cada una (seccin 5-8). Las colas de la dinena ciliar estn ancladas en el microtbulo A de un doblete, mientras que las cabezas globulares -con sus respectivas ATPasasestablecen uniones intermitentes con el microtbulo B del doblete vecino. As, las dinenas forman puentes inestables entre Jos dobletes contiguos. Las dinenas tambin se denominan brazos internos y externos del axonema (fig. 5-16), lo cual indica que algunas nacen en el microtbulo A en posiciones ms perifricas respecto de' otras. Si se mira al axonema desde la raz del cilio, dichos brazos se orientan en la direccin de la marcha de las agujas del reloj. El movimiento ciliar se produce porque las cabezas de las dinenas recorren un pequeo tramo del microtbulo B hacia su extremo r- 1(fig. 5- 18) (en la seccin 5-8 sealamos que esta clase de protena motor:t S<' tlltl<' Vl' si mpr \'ll sa dir .: i6u). D hido a qu ~.: los microthuloN d,l II XP III 1111 <:li' illl lla1t
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Fig. 5-18. Origen del movimiento ciliar. Est basado en el desplazamiento de las cabezas de las dinenas ciliares sobre el microtbulo B de los dobletes, en direccin de la raz del cilio.

sus extremos proximales estn anclados en el cuerpo basal, el desplazamiento de las dinenas sobre el microtbulo B hace que ambos dobletes se curven, puesto que no pueden desplazarse linealmente en direcciones contrarias. Como ello ocurre con las dinenas localizadas entre varios de los nueve dobletes, la suma de fuerzas hace que todo el axonema se doble, lo que genera el movimiento ciliar (fig. 5-19). El desplazamiento de las dinenas se produce como consecuencia de la formacin y la mptura alternadas de los puentes transversales de dinena. Este proceso requiere energa, que es tomada del ATP. Durante el movimiento ciliar no todos los dobletes operan a la vez. Ms an, se sospecha que los situados en un lado del axonema flexionan al cilio y Jos del lado opuesto intervienen en el movimiento de retorno.

5- 13. En e l sndrome de Ka rtagener los cilios son inmviles

El sndrome de Kartagener se debe a una o ms mutaciones de los genes que codifican a la dinena ciliar o a otras protenas accesorias del axonema. Por consecuencia, los cilios y los fl agelos son inmviles, lo que provoca cuadros de bronquitis crnicas y esterilidad en la mujer y en el varn (los cilios del rbol respiratorio y de las trompas uterinas y el flagelo de los espermatozoides carecen de movimiento).

1 1

5- 14. La estructura de los cuerpos basa le s es idntica a la de los ce ntrolos

Los microtbulos ciliares nacen en el cuerpo basal. Este se localiza por debajo de la membrana plasmtica, a la altura de la raz del cilio (figs. 5-15 y 5-22). Existen tantos cuerpos basales como cilios. Los cuerpos basales se estudian junto con Jos centrolos del centrosoma porque son estntcturalmente idnticos. Constituyen cilindros huecos abiertos en sus extremos y miden 0,2 fim de dimetro por 0;4 fim de largo. La pared

Fig. 5-19. Movimicnlo ciliar. s~ prouc~ 11111~ lii imposihili

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

5. EL CITOESQUELETO

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Protena ligadora

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B A

Fig. 5-20. Izquierda. Esquema de un centrolo o de un

cuerpo basal, con su caracterstica configuracin 9 + O. Derecha. Se ilustra la triple

asociacin caracterstica de

los microtbulos centriolares,

conocida como triplete.

Fig. 5-21. Izquierda. Esquema de un corte transversal del

ccntrolo en el que se ilustran los nueve tripletes y las protenas ligadoras. Derecha. Micrografa electrnica de un
corte transversal de un cen-

trolo revelado mediante cido tnico. (De V. Kalnins.)

del cuerpo basal o del centrolo est formada por 9 unidades microtubula.res, cada una compuesta por tres microtbulos fusionados entre s, llamados A, B y e (figs. 5-20, 5-21 y 5-22). El microtbulo A es completo, pues posee 13 protofilamentos; en cambio, los microtbulos B y C son incompletos, ya que contienen 11 protofilamentos cada uno (fig. 5-20). Como los dobletes en el axonema, estos tripletes se disponen en forma oblicua, de manera que el microtbulo A se halla ms cerca del centro del centrolo que el microtbulo C (fig. 5-21). Los 9 tripletes del cuerpo basal estn conectados entre s por dos clases de protenas ligadoras. Unas son fibras cortas que enlazan el microtbulo A de un triplete con el microtbttlo C del triplete vecino. Las otras son fibras largas que unen a los tripletes de forma semejante a los rayos de una rueda (fig. 5-21). Vimos que cada cilio nace de un cuerpo basal, el cual, como el cilio, se halla perpendicular a la membrana plasmtica (fig. 5-15). Cabe agregar que los microtbulos A y B de los dobletes del cilio se continan con los microtbulos A y B de los tripletes del cuerpo basal. Se ignora el significado de los microtbulos C de los tripletes y dnde se originan los microtbulos centrales del axonema. A menudo el extremo libre del cuerpo basal muestra una raz fibri lar corta que se interna en el citoplasma y que tiene por funcin sostener al cilio.

Fig. 5-22. Izquierda. Micrografa electrnica de un corte

longitudinal de la raz de un cilio (Ci), con su cuerpo basal o cinetosoma (CB). Derecha. Cortes transversales de cilios y cuerpos basales. 70.000x. (Cortesa de .J. Andr y E. Fauret-Fremiet.)

Los cuerpos basales se diferencian de los centrolos del diplosoma por las siguientes particularidades: 1) los prirceros se localizan cerca de la superficie celular (en la raz de los cilios) y los segundos cerca del ncleo (figs. 5-4A y 5-15); 2) los cuerpos basales no poseen la matriz centrosmica que envuelve a los centrolos (fig. 5-23); 3) los cuerpos basales suelen estar formados por una sola unidad, mientras que los centrolos se presentan de a dos, ambos perpendiculares entre s (fig. 5-23).
5- 15. En la cilognesis los microtbulos del axonema se desarrollan a partir del cuerpo basal

En la ciliognesis los microtbulos A y B del cuerpo basal cumpl en la funcin de la -y-tubulina del centrosoma, es decir, actan como moldes para el nucleamiento (polimerizacin) de las primeras tubulnas de los microtbulos A y B del axonema. Las tubulinas del axonema naciente se unen a los extremos [+] de los microtbulos A y B del cuerpo basal, que apuntan hacia la superficie de la clula. Por lo tanto, los extremos(-] de los microtbulos de los cilios se localizan junto al cuerpo basal. Luego del nucleamiento inicial se agregan nuevas tubulinas, lo cual alarga a los microtbulos del axonema hasta que el cilio alcanza su longitud definitiva.
5-16. Los cuerpos basales derivaran cte los centrolos del centrosoma

Por lo dicho en la seccin anterior se deduce que antes de que los cilios nazcan se forman los respectivos cuerpos basales. Estos apareceran como consecuencia de una reproduccin dicotmica por parte de los centrolos del diploson1a, 111 dia111 1111 prn ' w has: ulo '11 1 d sarrollo de procentrolos sillliliu 11l

centrosmica

Centriolo

Fig. 5-23. Representacin esqucmticn <kl <ocntrosoma,

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92

I'UNIJAM EN'J'OS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR 5 . EL C ITO ESQUELETO

93

FilAMENTOS DE ACTINA
5-17. El dimetro de los filamentos de actina es de 8 nm
Los filamentos de actina o microfilamentos poseen un dimetro de 8 nm Y son ms flexibles que los microtbulos. Suelen asociarse en haces o atados de modo que raramente se los ve aislados (fig. 1-9). ' Sobre la base de su distribucin en la clula, los filamentos de actina se clasifican en: 1) corticales, los cuales se ubican por debajo de la membrana plasmtica, donde constituyen el componente citoslico ms importante (fig. 5-24), y 2) transcelulares, dado que atraviesan el citoplasma en todas las direcciones (fig. 5-25A). De igual fonna que los microtbulos tratados con anticuerpos antitubulina, los filamentos de actina pueden ser localizados con la ayuda de anticuerpos antiactina fluorescentes (fig. 5-25B). Como se describir en la parte final del captulo, los filamentos de actina tambin forman el esqueleto de las microvellosidades e integran el armazn contrctil de las clulas musculares. Los filamentos de actina son polmeros construidos por la suma lineal de monmeros, cuyo ensamblaje les da a los filamentos una configuracin helicoidal caracterstica (figs. 5-1 y 5-26). Los monmeros se encuentran libres en el citosol, donde fonnan un depsito al que la clula recurre cuando Jos necesita. Cada monmero es un polipptido de 375 aminocidos que se halla asoctado a un ADP o a un ATP; su estructura terciaria es globular, de ah que rec1ba el nombre de actina G. Al igual que los microtbulos, los filamentos de actina poseen un extremo [+] Y un extremo [-] (seccin 5-6); por el primero se alargan y se acortan ms rpidamente que por el segundo (fig. 5-26). Esta bipolaridad se debe a que los propios monmeros la poseen. Nucleacin

Actina G
Fig. 5-26. Fonnacin y organizacin estructural del filamento de actina. Se ilustran tambi n la polimerizacin (alargamiento) y despolimerizacin (acortamiento) del filamento por sus dos extremos.

Fig. 5-24. Dislribucin de los

filamentos de actina cortica-

les en una clula epilelial.

bulos (seccin 5-7), derivado de la formacin de un capuchn cuyos manmeros demoran un tiempo en convertir sus ATP en ADP. Puesto que el mantenimiento de esta inestabilidad tiene un alto costo en ATP, cuando el filamen to alcanza la longitud deseada, varias protenas reguladoras se colocan en sus extremos para estabilizarlo. Apare ntemente la polimerizacin de los monmeros de actina depende de una protena reguladora llamada profilina, a pesar de que induce la hidrlisis de los ATP en los monmeros ya polimerizados. En el proceso de despolimerizacin participan varias protenas reguladoras, entre las cuales se destacan la timosina y el ADF (por actin-depolymerizingfactor). La timosina inhibe elnucleamiento del trmero inicial de actinas G y su polimerizacin en el filamento en crecimiento. En cambio, el ADF se une al filamento de actina y lo despolimeriza progresivamente. La droga citocalasina B provoca la despolimerizacin de los filamentos de actina debido a que se une a sus dos extremos y bloquea su crecimiento, con la consiguiente desaparicin de los capuchones de actinas con ATP.

5-1 9. Los fila mentos de actina contribuyen a establecer la fo rma cel ular
Hemos mencionado que existen haces de filamentos de actina que se concentran por debajo de la membrana plasmtica (corticales) (fig. 5-24) y otros que cruzan el citoplasma de lado a lado de la clula (transcelulares) (fig. 5-25). Ambas localizaciones contribuyen, entre otras fu nciones, al establecimiento de la forma celular. Las concentraciones y las funciones de ambos filamentos difieren segn que las clulas sean epiteliales o conectivas. En las primeras prevalecen Jos filamentos corticales, que son los que establecen la f01ma celular. En las segundas, tal prevalencia y funcin les corresponde a las fibras transcelulares. En ambos tipos celulares los filamentos corticales son tambin responsables de la morfologa de la parte perifrica de la clula. Ms an, en la seccin 5-32 veremos que forman el eje de las microvellosidades.

5- 18. Los fil~mentos de actina se forman a partir de trmeros de acti nas G

Cada filamento de actina comienza a formarse a partir de un ncleo de tres monmeros de actina G que se combinan entre s, en cualquier punto del citosol donde la construccin de filamentos de actina sea necesaria (fig. 5-26). El alargamiento del ncleo originario se produce como consecuencia del agregado sucesivo de nuevos monmeros en los extremos [+) y [-) del filamento en ciernes. La polimerizacin requiere que las actinas G contengan un ATP. Poco tiempo despus de la polimerizacin, este ATP se hidroliza en ADP Y P, condicin que induce a los monmeros a despolimerizarse. Sin embargo, ello no ocurre porque en los extremos de los filamentos de actina se produce un fenmeno de inestabilidad dinmica anlogo al descrito para los microt-

5-20. En las clulas epiteliales los fil amentos de actina corticales forman una malla por debajo de la membra na plasmtica
En las clulas epiteliales los haces de filamentos de actina corticales se disponen en las ms variadas direcciones y componen una malla continua por debajo de la membrana plasmtica. Los filamentos se unen entre s y a la membrana plasmtica mediante la protena ligadora fodrina (fig. 5-27). A su vez, sta se conecta con protenas integrales de la membrana -una de las cuales es nada menos que el contratransportador de Na+ y K+ visto en el captulo 3- 19- por intermedio ele otra protena ligadora, la anquirina. La foch in a cs sc111 'jant a la cspcrtrin11 qn sc 'llt:ncntra cn la membrana L cnnin'al clt- ln.ll rni ~ rtlV l'llos idacles (sn ,it'ur ll ) y t'll 1 t'i ltwS(]IIt'lt'lll d.-1 tri lrc wi Cil
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5-25. A. Distribucin de

los lilamentos de actina trans. lulares (fibras tensoras) en

111111

clula conectiva. n. Clula

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5. EL CITOESQUELETO

95

94

FUNDAMENTOS DE BIOLOOIA CELULAR Y MOLECULAR

Fig. S-27. Esquema de los filamentos de actina co rticales en las clulas epiteliales, y de las protenas ligadoras que los suj etan a la membrana plasmtica.

Miosina 1

Miosina 11

Fig. S-29. Represe ntacin esquemtica de la miosina I y la miosina 11.

5- 21 . En los e pite lios una franja de fil amentos de acti na cortical es pa rt icipa en la formacin de l ci nturn adhesivo
El cinturn adhesivo, que ser analizado en el captulo 6-1 2, es una forma de unin intercelular presente cerca de la superficie apical de las clulas epiteliales. Consta de una franja reforzada de filamentos de actina corticales, los cuales componen una especie de anillo que circunda cada clula (fig. 6-10). Estos filamentos se conectan con protenas de la membrana plasmtica llamadas cadherinas por medio de las protenas ligadoras placoglobina, catenina, o:-actinina y vinculina. El cinturn adhesivo est integrado por los filamentos de actina, las cadherinas y las protenas ligadoras.

pendiente de Ca2 situada en la propia cabeza. La miosina I se desplaza aproximadamente 10 nm por cada ATP que consume. La miosina V "camina" sobre elfilamento de actina. y cada "paso" que da la hace avanzar unos 37 nm. Su composicin se analiza en la seccin 5-28.

5-24. En las clulas conectivas los fila me ntos de acti na transeelula res se ll a ma n f ibras tensoras
En las clulas conectivas la distribucin de los fi lamentos de actina transcelulares -denominados fib ras tensoras- es semejante a la indicada en la seccin anterior, aunque componen atados ms gruesos y ms numerosos. En cada atado, la protena Jigadora o:-actinina une a los filamentos de actina entre s. Adems, cada filamento se liga a la membrana plasmtica mediante una estructura conocida con el nombre de contacto focal (fig. 5-31 ). El extremo del filamento se conecta con una protena transmembranosa heterodimrica llamada integrina, por medio de las protenas ligadoras talina, o:-actinina, paxilina y vinculina. El conjunto integrado por el extremo del filamento de actina, las protenas ligadoras y la integrina constituye el contacto focal. En el captulo 6-6 se ver que por su dominio externo la integrina se liga a una protena de la matriz extracelular llamada fibronectina, y sta a una fibra de colgeno.
- - Vescula transportadora

5- 22. En a lg unos epite li os e mbrionarios e l ci ntu rn adhesivo t ie ne f un ciones morfogenticas

En las clulas de algunos epitelios embrionarios, los filamentos de actina del cinturn adhesivo se acortan, por lo que a esa altura las clulas reducen su dimetro. Como consecuencia, las clulas pierden su forma cilndrica y adquieren un aspecto piramidal, lo que lleva a que se genere un surco y luego un tubo separado del epitelio de origen (fig. 5-28):
Cintur n adhesivo

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5-23 . En las clu las e pite lia les los f ila me nt os de actin a transcelulares sirven pa ra t ransportar o rga noides
Como en todas las clulas, en las epiteliales los filamentos de actina transcelulares se hallan tendidos entre puntos opuestos de la membrana plasmtica y entre sta y la envoltura nuclear, de modo que atraviesan el citoplasma en mltiples direcciones (fig. 5-25). Asimismo, cerca de la envoltura nuclear existe una red de filamentos de actina que descansa sobre la malla perinuclear de fil amentos intermedios (seccin 5-2); a esa red se ligan los filamentos de actina que parten de la envoltura. En cambio, a nivel de la membrana plasmtica los filamentos transcelulares se conectan con los filamentos de actina corticales o se unen a protenas membranosas especiales. Los filamentos de actina transct;lulares actan como vas para transportar organoides por el citoplasma. Este transporte es mediado por las protenas motoras miosina I y miosina V. La miosina 1 posee una cabeza y una cola, pues uno de sus extremos es globular y el otro fibroso (fig. 5-29). Cuando esta protena motora funciona, su cola se liga a la membrana del organoide que va a ser trasladado - por lo general una vescula del sistema de endomembranas (cap. 7-1}- y su cabeza se une intermitentemente a un filamento de actina vecino, esto ltimo porque la abeza de la miosina 1 cambia de posicin repetidamente. 1,as rurion s y deIIIIt>ll ' S altt:rnadas hacen que la mOSina J se deslice t:ll dir ci(lll clfl l'X II" N "'" lt 1 clll l"ilalllt"nlo th.; i l tina (l'ig. 5-30).
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Vescula transportadora

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Fig. 5-30. Esquemas que ilusth: lns nl io.lnn. 1, 11 y V uohu lt1,, 11

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96

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR y MOLECULAR

5. EL CITOESQUELETO Colgeno

97

5-25. En las clulas conectivas los filamentos de actina corticales experimentan incesantes modificaciones
En las clulas conectivas rodeadas por matriz extracelular los fil amentos de actina corticales se distribuyen de una manera caracterstica y adems cambiante. Esto ltimo origina modificaciones cclicas en la consistencia de la zona perifrica de las clulas, lo cual, junto con las tensiones en los contactos focales, produce los incesantes movimientos que se ven en la superficie celular. Aqu los filamentos de actina arman una especie de andamio que incrementa la viscosidad del citosol, la que disminuye cuando el andamio se desarma a causa de la despolimerizacin de los fil amentos de actina (fig. 5-32). As, en la zona perifrica de las clulas conectivas se alternan estados de mayor viscosidad (ge{) con otros de menor viscosidad (so{), lo cual provoca cambios continuos en la forma de la superficie celular. En la construccin del andamio interviene -adems de la profilina (seccin 5-18)- una protena ligadora llamada filamina o ABP (por actin-binding protein), que une a los filamentos de actina entre s (fig. 5-32). El andamio se desarma cuando acta -antes de que lo hagan las protenas despolimerizantes timosina y ADF- la gelsolina, una protena dependiente de Ca2+ que fragmenta a los filamentos de actina (fig. 5-32).

~-----

Paxilina

Fig. 5-31. Contacto focal y su conex in con elementos de la

matriz extracelular mediante Ja protena transmembranosa integrina.

CITOSOL

.;ntre los filamentos de actina de las fibras tensoras se hallan numerosas um ades de la protena motora miosina 11, que se compone de dos polip ~dos pesados, ~ada uno combinado con dos polipptidos livianos (fig 5-2~ os seis pohpeptidos generan una molcula fibrosa con dos cabezas .en un~ d~ ~u~ pu~tas, ya que en ella los polipptidos pesados tienen una estructura g o u ar. omo en la mJOsma I, las cabezas de la miosina 1I poseen acti vidad ATPasa y son responsables de las propiedades mecnicas de la molcula. Las m!Osmas U no funciOnan aisladas. Para poder actuar se asocian y forman conJuntos bipolares, con las colas de las molculas fusionadas entre s las cabezas dmgJdas hacia los extremos del conjunto (fig 5-30) L b y establece as ca ezas d n umones mtermitentes con los filamentos de actina adyacentes. Dao que se deshzan sobre ellos en direcciones contrarias - hacia los respecti~os ~x tremos (+]-los tensan y generan fuerzas mecnicas en los contactos oca es, lo cual, adems de producir leves pero continuas deformaciones en 1~ superfiCie celular, contribuye al establecimiento de la forma o-Jobal de la e lula._Es por estas propiedades que en las clulas conectivas filamentos de actma transcelulares llevan el nombre de fibras tensoras El . h mecamsmo molecula . r que ace posible el deslizamiento de las miosinas II sobre los filamentos de actma ser analizado en la seccin 5-33, referida a la co t tt' ldad muscular. n ac 1

5-26. Los filamentos de actina desempean funciones salientes durante la motilidad celular
La migracin celular es un fenmeno muy comn durante el desarrollo embrionario, decisivo no slo para la formacin de los tejidos y los rganos sino tambin para el ordenamiento y la orientacin espacial de la mayora de las estructuras corporales. En el organismo desarrollado la migracin celulru cumple importantsimas funciones vinculadas con su defensa y la reparacin tisular. A diferencia de las clulas musculares, en las cuales los filamentos de actina no se acortan ni se alargan, en las clulas locomotrices el citoesqueleto presenta un gran dinamismo, ya que la motilidad celular se debe a cambios continuos en sus componentes, que incluyen polimerizaciones y despolimerizaciones por parte de los filamentos de actina. La puesta en movimiento de las clulas epiteliales es algo ms complicada que la de las clulas conectivas, pues para adquirir motilidad las primeras deben independizarse del epitelio originario y redistribuir sus filamentos de actina corticales y transcelulares hasta que queden como en las clulas conectivas. Antes de ponerse en marcha, la clula migratoria adquiere un aspecto poligonal. Luego, a consecuencia de rpidas y extensas modificaciones en los filamentos de actina corticales, en el extremo de la clula correspondiente al

lo:

Debe agregarse que las fibras tensoras y los contactos focales se forman . mediante la mduccn de la protena Rho (por la letra . " ) gneba P , que es miembro de una fa T d GTP asas que actan asociadas a las protenas regulad G mi Ia e oras . EF y GAP, de cuyo an~lisis nos ocuparemos en el captulo 7-38. D~ tgual modo que en las celul(ls epiteliales, las fibras tensoras sirven cov~as iara tran~p~rtar organoides por el citoplasma, con intervencin de la mwsma Y la mwsma V (secciones 5-23 y 5-28).

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l'lg. 5-32. Intervencin de las

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98

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

S. EL C ITOESQUELETO

99

Fig. 5-34. Din micn de los filamentos de actina e n los lamclipodios y los filopodios. Los punto' de ramificacin y de polimerizacin han sido marcados con cfrculos verdes y crculos azule.Y, respectiva~ mente. En ambos interviene la protefna reguladora Arp2/3 . que a ni vel de los puntos de ramificacin hace que se formen 11ng ulos de 70 e ntre los fila111 ntos y sus ramas.

futuro movimiento se forman varias lminas citoplasmticas horizontales llamadas lamelipodios, de cuyos bordes libres nacen prolongaciones digitiformes denominadas filopodios (figs. 5-33 y 23-6). Tanto los lamelipodios como los filopodios alternan perodos de alargamiento con perfodos de acortamiento, los cuales, como se ver, son esenciales para la motilidad celular. La fonnacin de los lamelipodios es inducida por la protena Rae (por related to the A and C kinases), que como la Rho (seccin 5-24) es miembro de una familia de GTPasas que son regu ladas por las protenas GEF y GAP (cap. 7-38) Los lamelipodios s urgen y se alargan por obra de la protena reg uladora Arp2/3 (por actin-related protein), que induce la formacin de armazones especiales de actina en la corteza cel ular. Como muestra la figura 5-34, la protena Arp2/3 hace que los filamentos de actina se ram ifiquen y -en colaboracin con la profilina (seccin 5-18)- que nuevas actinas G se agreguen en los extremos de los fi lamentos, tanto en los preexistentes como en sus ramas. La figura 5-34 muestra tambin que los armazones son aplanados y que cada rama de actina compone con el filamento de origen un ngulo de 70. El acortamiento de los lamelipodios se debe al desarme de tales armazones, causado por las protenas reguladoras timosina, ADF y gelsolina (secciones 5-18 y 5-25). Adems de alargarse y acortarse, los lamelipodios se mueven permanentemente, lo cual es posible porque en sus races hay molculas de miosina Il dimricas que hacen deslizar a los filamentos de actina en direcciones opuestas (fig. 5-30). La formacin de los filopodios es inducida por la protena Cdc42 (por cell-division cycle) , que al igual que las protenas Rho y Rae pertenece a una familia de GTPasas reguladas por las protenas GEF y GAP (cap. 7-38). Debe agregarse que durante la migracin celular las protenas Rho, Rae y Cdc42 funcionan coordi nadamente. Lo hacen.tras recibir "rdenes" de receptores localizados en la membrana plasmtica, los cuales se activan cuando son inducidos por molculas extracelulares implicadas en la estimulacin de la motilidad. Puede decirse, entonces, que las protenas Rho, Rae y Cdc42 funcionan como eslabones entre las seales extracelulares y los componentes del citoesqueleto involucrados en la mi gracin. Los alargamientos y acortamientos de los filopodios se explican por la presencia en sus ejes de haces de filamentos de actina que alteman ciclos de polimeri zacin con ciclos de despolimerizacin (fig. 5-34). Los filamentos parten del borde libre de los lamelipodios y terminan en la membrana plasmtica de la punta de los filopodios, en la que se anclan mediante contactos focales. Adems, se unen entre s por medio de una protena ligadora llamada fimbrina, y los ms perifricos se conectan con la membrana plasmtica del filopodio por intermedio de la miosina l. Esta protena motora se une a los filamentos y a la membrana a travs de su cabeza y .le su m la. rcsp<;livam ntc (fig. 5-30). Lu minN inu 1 111ov 'l'fu ni fi i0J)<)diu u n""l'l o 11 '""' !',, l'lc'llt ll'~'llladurn dUI'Illlfl' tl alo11 11111 lnuln " 1'1 a ull tuulc \11111 eh In 1 lnon 111111 .

5-27. Los desplazamientos celu lares son guiados por haptotaxis y quimiotaxis

La migracin celular es consecuencia de los siguientes fenmenos. En primer Jugar los filopodios se alargan. Luego, a travs de sus puntas -pobladas de contactos focales- algunos se anclan en fibras colgenas de la matnz extracelu.lar mediante molculas de fibronectina (caps. 6-4 y 6-5). A continuacin, mientras los filopodios anclados se acortan - lo cual tracciona a laclula hacia los puntos de anclaje-, otros filopodios se alargan y se_anclan en fi bras colgenas situadas ms adelante en la matriz extracelular. Fmalmente, los primeros filopodios se desprenden de las fibras colgenas y los segundos se acortan, de modo que la clula avanza un poco ms. La migradn celular resulta de la reiteracin de estos episodios. Como se ve, el anclaje de los filopodios en los elementos fijos de la matriz extracelular - es decir, en las fibras colgenas- es transitorio, suficiente para que la clula ~ueda ser traccionada. Si el anclaje persistiera, el avance celular se detendna. Lejos de vagar sin rumbo, las clulas se desplazan hasta sus puntos de destino siguiendo itinerarios predetenninados, y no se dehenen antes de alcanzarlos ni avanzan ms all. Los derroteros son marcados por algunos componentes de la matriz extracelular aledaos a la clula en movimiento, por ejemplo, la concentracin y la orientacin de las fibronectinas que se hallan en los lugares de paso. Estas molculas tendran funciones relevantes durante la migracin celular, pues fijaran los itinerarios al orientarse adecuadamente Y concentrarse en proporciones crecientes a lo largo de las rutas. La locomocin celular guiada por gradientes de concentracin de molculas no solubles en el medio extracelular -como ocurre con la fibronectina- se denomma haptotaxis (del griego hptein, enganchar, y taxis, colocacin). Las sutiles seales posicionales emanadas de las f!bronectmas son tanteadas por las clulas en movimiento, para Jo cual sus fi lopodios se extienden Y retraen (crecen y se acortan) como si estuvieran "olfatendolas". Cuando los filopodios "perciben" las seales correctas, se adhieren al colgeno; SI no, . continan "explorando" el medio extracelular hasta dar con ellas. Los desplazamientos de las clulas son tambin dirigidos por sustanc1as solubles emitidas por otras clulas -a veces distantes-, que pueden provocar su atraccin o su repulsin. Si existe atraccin, el fenmeno lleva el nombre de quimiotaxis, que define la conduccin de las clulas mtgratonas hacia el lugar de mayor concentracin de la sustancia sol uble. Se ha comprobado que las sustancias quimiotcticas estimulan - en la membrana pl:smuca de las cl ulas en movimiento- a receptores que ponen en marcha senales JJ~ tracelulares que activan a la protena Arp2/3. El fenmeno op~esto a la ~ut miotaxis, es decir, la quimiorre:-_:>ulsin, depende de una protema denommada semaforina. Los mecanismos por los cuales las clulas migratorias reconocen a otras clulas en sus lugares de destino y se establecen en ellos se anahzan en los ca,ptulos 6-8 y 6-9.
5-28. El avance de los axones presenta algunas semejanzas con la motilidad celular

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Como se sabe, las neuronas se hallan conectadas entre s y con las clulas musculares y secretorias por medio de prolongaciones citoplasmticas llama-

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S. EL CITOESQUELETO

100

1111

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

J'ig. 5-35. Dibujo que ilustra el extremo del axn con su cono de creci miento.

Cualquiera que sea la distancia que las separa, generalmente la neurona no necesita migrar para tomar contacto con la otra clula; slo crece su Vase axn, por lo que su cuerpo permanece en el sitio Fg. 5-34 inicial. Para poder alargarse y avanzar, el axn desarrolla en su extremo distal (que es el rea que toma contacto con la otra clula) una especializacin llamada cono de crecinento, anloga a la regin frontal de las clulas migratorias, pero con flopodios bastante ms largos (fig. 5-35). Las races de stos contienen miosina V, que como se vio en la seccin 5-23 es una protena motora que en el citoplasma transporta organoides. La miosina V es doble como la miosina 11, pero posee doce polipptidos livianos en lugar de cuatro y no forma conjuntos bipolares (fig. 5-30). La semejanza del cono de crecimiento con la clula migratoria alcanza a los factores que rigen su avance por la matriz extracelular. En la seccin 5-9 se analiz la funcin que desempean los microtbulos durante el alargamiento del axn y la participacin de la protena motora dinamina en la migracin del cono de crecimiento.

Fig. 5-37. A. Crecimienlo normal, sobre un sustrato slido, de las clulas en cultivo. Cuando estas clulas toman contacto con sus vecinas pierden su moti lidad, dejan de multiplicarse y forman una monocapa caracterstica. B. En c ircunstancias similares, las clulas cancerosas no se inmovilizan ni dejan de multiplicarse, por lo que forman mullicapas.

5-31. Los fi lamentos de actina intervienen en la citocinesis

La citocinesis tiene lugar en las postrimeras de la mitosis, al formarse un anillo contrctil compuesto por filamentos de actina y miosinas 11 por debajo de la membrana plasmtica en la zona ecuatorial de la clula e_ n divisin (cap. 18-20) (fig. 18-7). Al igual que en las fibra s tensoras, las mwsmas II son dimricas y se hallan entre los filamentos de actina del anillo. La cttocmesls se produce a raz de que cada miosina II se desliza sobre dos filamentos de actina en direcciones contrarias. La suma de estos deslizamientos hace aparecer un surco en la superficie celular, que al profundizarse genera un estrangulamiento que culmina con la particin de la clula (fig. 18-8). . Debe sealarse que la progresiva reduccin del dimetro del amllo contrctil no se acompaa de un aumento de su grosor, lo que indicara que los filamentos de actina se van despolimerizando a medida que la clula se estrangula.

5-29. Durante la histognesis del siste ma nervioso ce ntra l algun<:~s neuronas migran conducidas por las clulas gliales radiales
Durante la histognesis del sistema nervioso central algunas neuronas del tubo neural primitivo deben migrar desde las cercanas de la luz del tubo hasta lugares prximos a su superficie externa. Tales migraciones se producen, por ejemplo, cuando se forman la corteza cerebral y la corteza cerebelosa. Los mecanismos que hacen posible el traslado de estas neuronas difieren de los descritos hasta aqu. Como muestra la figura 5-36, intervienen elementos de la neuroglia - las llamadas clulas gliales radiales-, que transitoriamente forman soportes filamentosos sobre los cuales las Superficie externa del tubo neural neuronas "reptan" hacia sus puntos de destino. Dichos soportes son finas prolongaciones citoplasmticas emitidas por las clulas gliales "'\ radiales, que como rayos recorren la pared del tubo neural primitivo desde su luz central hasta su superficie externa. t t No se conoce el mecanismo migratorio, aunque se ha descubiert t \ to una protena que permite el establecimiento de uniones intermi\ Neurona \ t t tentes entre la membrana plasmtica de la neurona y la membrana plasmtica de la clula glial radial, imprescindibles para la reptacin. \ t La protena se llama astrotactina en virtud de que las clulas radiat \ \ les se convierten en astrocitos una vez terminada la migracin.

5-32. En las microve llosidades existe n filamentos de actina esta bles

Las microvellosidades son proyecciones citoplasmticas nacidas de la superficie celular, rodeadas por membrana plasmtica (figs. 1-7 y 5-38). Se encuentran en muchos tipos celulares, pero estn especialmente desarrolladas en algunos epitelios. Debido a que incrementan la superficie de la membrana plasmtica, permiten una mayor absorcin de agua Yde solutos por parte de la clula. El dimetro de las microvellosidades es de 0,08 11m y su longitud promedio es de 1 11m. El eje citoslico de cada microvellosidad est constituido por una matriz que contiene 20 a 30 filamentos de actina paralelos, cuyos extremos[- ) Y[+) se hallan en la raz y en la punta de la microvellosidad, respectivamente. Dado que no se alargan ni se acortan, se dice que estos filamentos de actina son estables. . La punta de la microvellosidad est ocupada por un flmdo citoslico amorfo en el que se hallan inmersos los extremos [+)de los filamentos de actina. En cambio, en la raz de la microvellosidad los extremos [-) se conectan con los filamentos de actina corticales, que aqu descansan sobre una delgada red de filamentos intermedios (f1g. 5-38). Adems, los filamentos de actina corticales estn conectados entre s Y con la membrana plasmtica mediante molculas de espectrina, equivalentes :t )as i'ndrinas des rilas Cll la SCCCil 5-20. l11s l'il:unnlos inl 'l'lll'dios ) ,liS l'il:tiiiL'IIi<>S tk :wlina
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5-30. En los cul t ivos de t ejidos se prod uce la llamada inhibic:in por contacto
A medida que van ocupando los lugares vacos, las clulas que se reproducen en los cultivos de tejidos migran y establecen contactos con sus vecinas. No obstante, cuando una clula queda rodeada por otras, deja de dividirse y pierde su motilidad. Este fenmeno --denominado inhibicin por contacto-- ocurre en todas las clulas del cultivo, por lo que terminan formando una monocapa celular caracterstica. Debe sealarse que las clulas cancerosa~ cultivadas no cxpcrimentan esta clase de inhibicin y, dado que s siotll'll di viditntlo y lllllvi ndo, se npilun tnuts soiln otras hasla f'otnuu ntu "' tt" ttllt ll"; tlo VIII lt, , (' 11(1111. dt (>ll>ftttllillilltl (1 o , \ /),

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Fig. 5-38. Reprcsenlacin esquemtica de una mic roveJI<lsidad. 1\n (a cortel.a de la clula se ~a 1inlan, l'tiH unn llnvt., los cnmpom nlt~ tk In
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102

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

5. EL CITOESQUIJLL'.'I't 1

1111

Membrana plasmtica

Reticulo sarcoplasmtico

Tbulo T
Disco Z
Jiig. 5-39. Fibras del mscu lo estriado en las que se ilustran las miofibrillas con sus sarctncros (obsrvense las bandas A e [ y los discos Z), el retculo sarcoplasmtico y la membrana plasmtica. Los tbulos '1' son invaginaciones de Ja rnc mbrana plasmtica que se vinculan con el retculo sarcoplas mtico, organizadas para co nducir impulsos desde la s uperficie de la clula al inte' ior de sta, a fin de que todas l:ts miofibrillas se contraigan sincrnicamente.

ca que lleva el nombre de membr ana terminal, desde la cual nacen los filamentos de actina que ingresan en las microvellosidades (fig. 5-38). Es necesario agregar que en las clulas epiteliales el permetro de la membrana terminal se contina con los filamentos de actina del cinturn adhesivo (seccin 5-21 y cap. 6-12) (fig. 6-8). Volviendo al eje de la microvellosidad, sus filamentos de actina se unen entre sf por medio de dos protenas ligadoras, la villina y la fimbrina (fig. 5-38). Adems, los filamentos de actina ms perifricos se conectan con protenas integrales de la membrana plasmtica por intermedio de molculas de miosina l. Se desconoce por qu esta protena motora se localiza en una estructura celular inmvil.
5- 33. En la cont ractilidad de las clulas musculares estriadas intervienen f ilamentos de actina y varias protenas accesorias

El msculo estriado est constituido por clulas (o fibras) cilndricas de 10 a 100 ).lm de dimetro y varios milmetros o centmetros de longitud. Los componentes del citoesqueleto comprometidos en la actividad mecnica de estas clulas forman estructuras regulares y estables, adaptadas para acortarse durante la contraccin y alargarse en los perodos de reposo. El msculo constituye uno de los ejemplos ms claros de asociacin morfofuncional y de cmo, en una clula, la energa qumica puede traducirse en trabajo mecnico. El diseo de las clulas musculares estriadas es tan eficien,. 1 , '; , :, ';,
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l'l11. 5-40. Arriba. Represen' "' 'i(JJt de un corte longitudinal t!t'l snrcmero. Abajo, Cortes II IHISVcrsales en las distintas
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te que son capaces de contraerse y relajarse cien o ms veces por segundo Y de producir un trabajo mil veces superior a su propio peso. La maquinaria contrctil de las clulas musculares est r~prese~tada por unas estructuras regulares derivadas del citoesqueleto, las m10fibnllas (frg. 5-39). Estas son tan largas corno las propias clulas y se disponen paralelamente una al lado de la otra. El grosor de cada miofibrilla es de l a 2 ~tm. Su largo y su nmero dependen de la longitud y del dimetro de la clula muscular, respectivamente. . La miofibrilla est compuesta por una sucesin lineal de umdades contrctiles denominadas sarcmeros (figs. 5-40 y 5-41 ), de 2,2 ..tm de longitud y un ancho equivalente al de la miofibrilla, de 1 a 2 ..tm. Con el mrcroscop10 electrnico se observa que entre los sarcmeros exrste una estructura electrodensa, el disco z, localizada en medio de una regin poco densa, la banda I (por isotrpica) (fig. 5-41). A lo largo de las miofibrillas las bandas I se alternan con otras ms densas, las bandas A (por anisotrpica), y en la parte media de stas se distingue una zona de menor densidad -la banda Hdividida a su vez por la lnea M, ms densa que la H. . ., Las distintas bandas resultan de la variacin peridica en la superposrcwn de las protenas citoesquelticas a lo largo de las miofibrillas. Como cada banda se encuentra a la misma altura en todas las mwfibnllas, en conJunto generan una alternancia de zonas de diferente densidad, que es la que le confiere la designacin de estriado a esta clase de msculo. En Ja figura 5-40 se muestra la estructura bsica de un _sarc6mero, en el que se observa a los filamentos de actina mt~iendo ~e los dtscos Z Y a ftbras gruesas bipolares -de miosina 11- entre dtchos frlamentos. El extremo de los filmnentos ele actina que se une al disco Z es el [+ ]. En los cortes transv rsul 's se ompruehn cu la hundn l contiene nicamente filamentos de ac111111, 11 hunda 11 N t'llu fihr'uNcli ntioN ir111 [.] , y lu hundu 11 mnho~ 'tll:ipt~mml s. 1-J lit /lit illl ll 11 t (/JI!J IJ j.llll 11 tlt ntittlli iiii iiJ'II II ' J'I ll>t/t IIIIIIJ'III lit 1:1 /I! IIIJH' II

Fig. 5-41. Micrograffa electrnica de cuatro miofibrillas en las que se observan los sarcmeros, con los discos Z y las bandas H, A e J. Se aprecia 1ambin el retfculo sarcoplasmtico (RS) entre las miofbrillas. 60.000x. (Cortesfa de

H. Huxley.)

104

5. EL CITOESQUELETO FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

105

Fig. 5-42. Estructura bipolar con forma de vara, integrada por numerosas molculas de miosina 11. Se ilustran tambin las cabezas de las miosinas surgiendo del eje de la vara a intervalos regulares.

tos de actina, y cada uno de stos por tres fibras de miosina; por consiguiente, el nmero de filamentos de actina duplica al de fibras de miosina. Por otro lado, los cortes transversales a nivel de la lnea M revelan la existencia de puentes proteicos entre las fibras de miosina. Es necesario describir cmo se asocian los monmeros de miosina II para formar las fibras gruesas interpuestas entre Jos filamentos de actina. Cada una de estas fibras se halla integrada por numerosas molculas de miosina II, cuya combinacin da lugar a una estructura bipolar con forma de vara (fig. 5-42). Esta exhibe una zona "lisa" -correspondiente a la banda H del msculo contrado-- en medio de dos regiones "rugosas", que se ven as por la presencia de las cabezas de las miosinas II, las cuales se proyectan desde la fibra como si fueran brazos. En la figura 5-42 puede observarse que las cabezas de las miosinas II estn opuestamente orientadas en las dos regiones mgosas, Jo que le da a la fibra gruesa su condicin bipolar. Las cabezas de las miosinas II surgen del eje fibroso a intervalos regulares de 7 nm y con una diferencia angular entre ellas de 60, por Jo que en conjunto describen, a Jo largo de dicho eje. una trayectoria helicoidal (fig. 5-42). Esta es la razn por la que cada fibra de miosina JI interacta con seis filamentos de actina simultneamente (fig. 5-40). Los cambios que ocurren en el sarcmero durante la contraccin de la clula muscular pueden observarse con los microscopios de fase y de interferencia (caps. 23-7 y 23-8). La banda A no se modifica, pero las hemibandas 1 se acortan en forma proporcional al grado de contraccin. El acortamiento de las hemibandas 1 se debe a que los discos Z se acercan mutuamente. Al hacerlo empujan a los filamentos de actina hacia el centro del sarcmero, de manera que las reas de superposicin de los filamentos de actina con las fibras de miosina JI se amplan (fig. 5-43). Si la contraccin se acenta, los extremos libres de los filamentos de actina pueden llegar hasta la lnea M (fig. 5-43). Todos estos fenmenos se revierten durante la relajacin. Los desplazamientos observados durante la contraccin se deben a que las cabezas de las fibras de miosina se deslizan activamente sobre los filamentos de act.ina. Para ello, cada cabeza se flexiona en relacin al tallo fibroso, co-

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Contraccin

mo si entre ella y el tallo hubiera una bisagra (fig. 5-44). En el msculo en reposo las cabezas de las miosinas II estn separadas de los filamentos de actina. Ante la llegada de un estmulo apropiado se produce la contraccin muscular como consecuencia de los siguientes fenmenos moleculares (fig. 5-44): l) cada cabeza de la miosina se adhiere a un fi lamento de actina; 2) al flexionarse avanza un pequeo tramo hacia el extremo (+] de dicho filamen to, el cual se desplaza -arrastrando al disco Z de su lado-- hacia el centro del sarcmero; 3) luego la cabeza de la miosina se desconecta del filamento de actina y recupera su posicin de reposo; 4) a continuacin se une al mismo filamento de actina, pero en un punto ms cercano al disco Z; 5) dado que vuelve a flex ionarse, el fi lamento de actina se corre un poco ms hacia la parte central del sarcmero, tras lo cual vuelve a separarse. Debido a la bipolaridad de la fibra de miosina y a que los episodios antedichos se repiten varias veces, los filamentos de actina de ambas mitades del sarcmero se acercan mutuamente, por Jo que el sarcmero acorta su longitud (fig. 5-43). La contraccin de la clula muscular resulta de la suma de los acortamientos de todos sus sarcmeros. La energa requerida para la actividad mecnica de las cabezas de la miosina II es proporcionada por el ATP, que es hidrolizado por una ATPasa presente en dichas cabezas. Se calcula que la energa apmtada por un ATP es suficiente para desplazar a los filamentos de actina entre 5 y 1O nm. 2 La flexin de las cabezas de la miosina II es desencadenada por el Ca ' , cuya concentracin aumenta en el citosol cuando la clula muscular es inducida a contraerse (cap. 7-26). Dicha flexin es controlada por las protenas reguladoras tropomiosina, troponina 1, troponina C y troponina T, las cuales se hallan junto a los filamentos de actina (fig. 5-45). Las tres tropomnas forman un complejo que se mantiene unido gracias a la troponina T. En el msculo en reposo la tropomiosina se encuentra sobre los filamentos de actina en una posicin tal que impide la unin de las cabezas de la miosina II con dichos filamentos (fig. 5-46). Esa posicin es controlada por la troponina I, as llamada porque inhibe el corrimiento de la tropomiosina. El aumento de Ca2 en el citosol hace que el ion se una a la troponina C (sta es semejante a la protena calmodulina, que analizaremos en el captu-

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Fig. 5-44. Interpretacin es quemtica del deslizamiento de las cabezas de las miosinas II sobre el filamento de actina. A. Durante la re lajacin muscular las cabezas no se hallan unidas al fi lamento. B. Al comienzo de la contraccin las cabezas toman contacto con el filamen to. C. Un cambio de forma en las cabezas hace que el fi lamento de actina se corra hacia el centro del sarcmero. D. Al fin al de este movimiento, las cabezas se desprenden, se enderezan y
nuevamente toman contacto

con el filamento de actina,

ahora con monmeros ms

cercanos al disco z.

Contraccin mxima

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Troponinas

Fig. 5-45. Esquema que muestra la estructura molecular del fi lamento de actina del ~nr (\nu-ro. junio n ulglt!IHN
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106

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

S. EL CITOESQUELETO

107

w-AdiM
5-34. En la contractilidad de las clulas musculares cardacas participan estruct uras similares a las del msculo estnado
Fig. S-46. Desplazamiento de
la tropomiosina antes de la

Fig. 5-48. Citoesqueleto de la clula muscular lisa. Obsrvese de qu manera los filamentos intermedios de desmina. situados entre los filamentos de actina, protegen al ncleo y a los componentes citoplasmticos durante la contraccin.

unin de la cabeza de la miosina II con el filamento de actina (vase fig. 5-448).

lo 11-18). El complejo Ca -troponina C bloquea la accin de la troponina 1, lo que permite que la tropomiosina cambie de posicin con respecto a los filamentos de actina y las cabezas de la miosina II puedan unirse a ellos. La figura 5-46 muestra esa reaccin: obsrvese a la molcula de tropomiosina en sus dos posiciones, correspondientes a Jos estados de relajacin y de contraccin del msculo. En los discos Z se encuentra Ja protena ligadora o:-actinina. En ella seanclan no slo los filamentos de actina sino tambin los de titina, una protena ligadora que se extiende hasta el centro del sarcmero, es decir, hasta la lnea M (fig. 5-47). La ti tina desempea dos funciones: mantiene a la fibra de miosina II en su posicin y, debido a que tiene un segmento que se comporta como un resorte, restablece la longitud de reposo de la clula durante la relajacin muscular. La litina es la protena ms grande detectada en el organismo humano; pesa nada menos que 3.000 kDa y est compuesta por una cadena lineal de casi 27.000 aminocidos. Cada filamento de actina se halla asociado a otra protena gigante llamada nebulina, que tiene por funcin determinar el largo del filamento durante la miogncsis y conferirle rigidez (fig. 5-47). Las miofibrillas se hallan unidas por sus lados mediante filamentos intermedios de desmina (seccin 5-3). Gracias a ellos se evita la prdida del alineamiento de los sarcmeros en el interior de las clulas musculares ante las fuertes tensiones mecnicas a que estn sometidas. Finalmente, por debajo de la membrana plasmtica la clula muscular posee la protena ligadora distrofina. Es semejante a la espectrina (seccin 5-32) y conecta a los filamentos de actina localizados en la periferia de laclula con un complejo de protenas membranosas llamadas distroglicanos y sarcoglicanos. A su vez, este complejo se une a la laminina de la lmina basal que rodea a la clula (cap. 6- 1). Diversas anomalas en la distrofina o en alguna de las protenas asociadas - a consecuencia de alteraciones genticas- dan lugar a enfermedades conocidas como distrofias musculares. Se caracterizan por la degeneracin progresiva de los msculos, lo cual puede hacer daudicar las funciones cardaca y pulmonar y llevar a la muerte.

Una de las diferencias ms notables entre las clulas musculares esquelticas y las clulas musculares cardacas es la presencia en stas de los discos intercalares, encargados de unir a las clulas cardacas por sus extremos. Estos discos se comportan como si fueran discos Z, pues de ellos nacen los filamentos de actina y de titina. Los discos intercalares contienen desmosomas (cap. 6-13); stos se asocian a filamentos intermedios de desmina que derivan -de los que unen a las miofibrillas entre s, mencionados en la seccin anterior. Adems poseen uniones comunicantes (cap. 6-14), necesarias para sincronizar las contracciones de las clulas miocrdicas.

5-35. En las cetulas musculares lisas el aparato cont rctil es relativamente sencillo
El aparato contrctil de las clulas musculares lisas se asemeja al conj unto de fibras tensoras transcelulares presentes en las clulas conectivas (seccin 5-24), con la diferencia de que en las musculares los haces de filamentos de actina son mucho ms gruesos y ms numerosos. Adems, las partes intermedias de los filamentos de actina son reemplazadas por filamentos intermedios de desmina (fig. 5-48), cuya presencia impide que se comprima la zona central de la clula. donde se halla el ncleo y se refugian los componentes citoplasmticos ms delicados para protegerse de la contraccin.

5-36. El citoesqueleto del eritrocito posee caractersticas singula res

La composicin del citoesqueleto del eritrocito presenta diferencias en comparacin con el citoesqueleto de las otras clulas. Como muestra la figura 5-49, inmediatamente por debajo de la membrana plasmtica del eritrocito existe una malla fibrilar integrada principalmente por filamentos de espectrina, que es una protena similar a la fo~nna (seccin 5-20). Se trata de un heterodmero compuesto por dos pohpeptldos lar-

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108

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

gos entrelazados, llamados a y p (o banda 1 y banda 2, respectivamente). Dado que los dmeros se conectan por sus puntas, se forman tetrmeros, cuyos extremos se unen a filamentos de actina cortos (o banda 5). La figura 5-49 permite ver que cada filamento de actina se conecta con varias espectrinas tetramricas; tales conexiones son mediadas por la protena ligadora aducina. Muestra tambin que los filamentos de actina se unen a una glicoprotena transmembranosa llamada glicoforina mediante la protena ligadora banda 4.1. Adems, el filamento de actina se halla asociado a otras dos protenas: la tropomodulina , que determi nara su longitud, y la tropomiosina, cuya funcin se desconoce. Cerca de su parte media cada tetrmero de espectrina se conecta con la protena transmembranosa banda 3, que es el contratranspottador de CJ- y HC03- descrito en el captulo 3- 17. En esta unin interviene la protena ligadora anquirina. Es preciso sealar que el conjunto de este sistema de protenas citoesquelticas y membranosas le confiere al eritrocito su forma bicncava y la flexibilidad necesaria para poder circular por los capilares sanguneos de dimetros menores que el suyo.

La unin de las clulas entre s y con la matriz extracelular

6- 1. Las clulas se unen ent re si y con elementos de la matriz extracelu lar

Los organismos multicelulares estn compuestos no slo por clulas si no tambin por elementos intercelulares. Estos ltimos se agrupan baJO el nombre de matriz extracelular. Los tejidos -y, por extenstn,I os rganos Y los s temas- son el resultado de asociaciones de drstmtos l!pos..de clulas Y s1 matrices extracelulares, de ah que para poder reconocer a un tejtdo deban tenerse en cuenta tanto sus clulas como la calidad y la cant1dad de sus componentes intercelulares. . En los tejidos conectivos las clulas se encuentran dispersas :n medio de abundante matriz extracelular. En cambio, en los ep1telws las celulas suelen estar adosadas sin que las separe prcticamente ningn elemento extracelular. No obstante, en los epitelios de revestimiento ex1ste _ una delgadamatnz extracelular llamada lmina basal, interpuesta entre las celulas Yel tejtdo conectivo sobre el que se apoyan. Lminas basales similares se encuentran en otros tejidos, por ejemplo, en torno de las clulas musculares._ En este captulo se analizarn los componentes de la matn z extracelular, cmo se vinculan las clulas con ellos y las distintas clases de umones que existen entre las clulas.

BIBLIOGRAFIA
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MATRIZ EXTRACELULAR
6-:'. La matriz extracelular contiene ele ment os fluidos y fibrosos

Las funciones ms importantes de la matriz extracelular _son: 1) rellenar los espacios no ocupados por las clulas; 2) conferir a los teJidos reststencta a la compresin y al estiramiento; 3) constituir el med10 por donde llegan los nutrientes y se eliminan los desechos celulares; 4) prov~er a dtversas clases de clulas de puntos fijos donde aferrarse; 5) ser un vehtculo por donde migran las clulas cuando se desplazan de un punto a otro del orgamsmo; 6) ser Tabla 6-1. Principales glicosaminoglicanos ysus unidades disacridas repetitivas
Glicosaminoglicano
Acido hialurnico Condrnitinsult<1to
lklllUIIIIIISUI Iiltn

Unidad disacrida
Acido glucurnico; N-acetilglucosamina Acido glucur6nico; N-acctilgalactosamina sulfato 1\c idn idurnico; N-acctii!Jnlactosamina sulti110

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

. LA UN ION DE LAS CELULAS ENTRE SI Y CON LA MATRIZ EXTR A 'ELULAR

l 11

~--Tropocolgeno

hialu rnico l<'ig. 6-1. Esquema de un agregado molecular compuesto por numerosos proteoglicanos unidos a un cido hialu rnico.

Glicosaminoglicano sulfatado

Colgeno

un medio por el que arriban a !as clulas las sustancias inductoras (seales) proven ientes de otras clulas (cap. 11 -2). Los componentes de la matriz extracelular puede n clasificarse en fluidos y fibrosos. Los fluidos conesponden principalmente a glicosaminoglicanos y proteoglicanos (cap. 2-6), mientras que los fibrosos se dividen en protenas estructurales (colgeno) y protenas adhesivas (fibro nectina, \aminina).
6-3. Los glicosaminoglicanos y los proteoglicanos son componentes fluidos de la matriz extracelular

. 6-2) El tropocolgeno est integrado por tres cadenas polipeptdipesor (ftg. d' d d d 67 cas del mismo tamao trenzadas en forma helicoidal. La peno ICt a e nm en las e striaciones de las fibrillas colgenas se debe a que los tropocolgenos se agregan en paralelo y se superponen en unas tres cuartas partes de

su longitud (fig. 6-2). Existen alrededor de 25 clases de cadenas pol ipeptdicas. En todas, un tercio de los aminocidos son glicinas, otro tercio suelen ser pro! mas e htdroxtprolinas y el tercio restante son aminocidos de distintos ttpos. Estas cadenas polipeptdicas se combinan de dtversas mane~as, lo que da lugar a unos 15 tipos de colgenos. Estos se identifican con numeros ro~a nos, y los principales corresponden a los colgenos de ttpo I, Il, lll, IV, Il, IX y XI. 1 d 1 os El colgeno de tipo I se encuentra en la dermis,_ la capsu a e os organ : el tendn , el hueso, la crnea y Ja dentina; los de ttpo IJ, IX y XI, en el cartlJago; el de tipo III, en Ja dermis fetal, el tej ido conectivo l~xo, la par~d de los vasos sanguneos, el tero, el rin y Jos tejidos hemopoyeuco y lmfatlco, los IV y VII, en la lmina basal y en el tejido conect1vo subyacente. _ d e upo En el captulo 5-27 vimos que las fibras de colgeno desempenan un ?ape! crucial en la migracin de las clulas, dado que proveen los puntos fiJOS de sostn para el anclaje temporano de los filopod tos.

Fig. 6-2. Fibras colgenas. Se compone n de fi brillas, y stas de tropocolgeno. La micrografa electrnica permite ver su estriac in caracte rstica, derivada de disposicin escalonada de las molculas de tropocolgeno en las fibrillas.

La fase lquida de la matriz extracelu!ar contiene una clase especial de po!isacridos llamados glicosaminoglicanos, los cuales suelen hallarse asociados entre s y con protenas, con las que componen grandes complejos glicoproteicos denominados p roteoglicanos (cap. 2-6) (figs. 2-10 y 2-11). Pueden asociarse ms de 100 cadenas de g!icosaminoglicanos a una sola protena y en ocasiones varios de estos proteoglicanos se unen a una molcula de cido hia!urnico - que es el glicosaminoglicano de mayor tamao- , lo cual origina agregados molecu lares de enormes proporciones (fig . 6- 1). Los glicosaminoglicanos son hidratos de carbo no compuestos por una sucesin de unidades disacridas repetidas y alternadas, en las q ue uno de los monosacridos posee un grupo amino, puesto que es una N-acetilglucosamina o una N-acetilgalactosamina, y el segundo es un cido glucur nico, un cido idurnico o una galactosa (cap. 2-6). En la tabla 6- 1 se mencionan los principales glicosaminoglicanos y sus unidades repetitivas. Como puede apreciarse, a excepcin del cido hialurnico, estn sulfatados. A causa de la presencia de los sulfatos y a que poseen numerosos grupos carboxilo, Jos g\icosaminoglicanos son molculas muy cidas, con numerosas cargas negativas que atraen grandes cantidades de Na -y, por lo tanto, de H 20-, lo cual aumenta la turgencia de la matriz extracelular.

6-5. La f ibronectina y la lami nina son prot enas adhesivas

de la matriz extracelular La fibronectina es una glicoprotena fibrosa de 440 kDa, compuesta por dos subunidades polipeptdicas ligadas entre s por un puente d1sulfuro cer.lo Cada subunidad posee dos dommws, como se cano a sus ex tre mos Carboxl ver en la prxima seccin, uno se conecta con una protena de la membrana plasmtica de la clula y el otro con la fibra colgena _(ftg. 5-31). En el captulo 5-27 se seal que las molculas de ftbronectma establecen los itinerarios seguidos por las clulas migratonas y med1an la conex1n tem-

6-4. La s proten as estructurales ms abundantes de la mat riz extracelular son [as f ibras colgenas
En la matriz extracelular, las protenas estructurales ms importantes conesponden a las fibras colgen as, las cuales estn compuestas por fibrillas que presentan una estriacin caracterstica, con una periodicidad de 67 mn (fig. 6-2). La unidad molecular hs i a d\' la J'ihrill:t es e l troporoh~gtnn, qti' ,... 11 1111 111111 ' V Illll pl'ol.:ica J'iluosa d(' uh. d d 111 ,,. lllll 1111 1 d< lo~t i llltl y 1, 11111 ,J, 1 ~

poraria de los filopodios con las fibras colgenas. . La laminina es una glicoprotena fibrosa de unos 900 kDa, mtegrada por tres subunidades polipeptdicas unidas por puentes di sulfuro . Tiene forma de . cruz con un brazo largo y tres brazos cortos. ~a laminina es abundante en las lminas basales, donde se halla asoc1ada al colgeno IV y a un proteoglicano rico en heparansulfato (fig. 6-3). Es la prinl ra prot ena adhesiva que aparece en la matnz extracelular del,e~~nn.' Y " '1 >1\ ' l:t Ita d 'i l' tado t.: ll las postrin,t< :rfas de 1 :1 scgmcntaCJ II de 1<1 Clul,l

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FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR 6. LA UNION DE LAS CELULAS ENTRE SI Y CON LA MATRI Z EXTR A llLULA R

11]

Filamentos intermedios

6-3). Adems, entre las integrinas y los filamentos de queratina se interpone una placa discoidal de 12 a 15 nm de espesor que contiene una protena ligadora similar a las desmoplaquinas del desmosoma (seccin 6-13).

UNIONES TRANSITORIAS ENTRE LAS CELULAS

6-B. En varios procesos biolgicos se producen un iones transitorias entre tipos cel ulares diferentes
lit~. 6-3. Representacin esqucm\tica de un hemidesmo'-ltHIIa.

UNIONES DE LAS CELULAS CON LA MATRIZ EXTRACELULAR

6-6. Los conta ctos foca les unen a las clulas de a lgun os tej idos vos con componentes de la matriz extracelula r conect1
Las clulas de algunos tejidos conectivos, aunque pueden movilizarse, suelen permanecer en sus sitios debido a que establecen uniones ms o menos duraderas con componentes fijos de la matriz extracelular. En esas uniones intervienen, del lado de las clulas, Jos contactos focales (cap. 5-24), mientras que los componentes fijos de la matriz extracelular corresponden a las fibras colgenas. Debe recordarse que cada contacto focal consta de una protena transmembranosa llamada integrina, cuyo dominio interno est unido -mediante varias protenas ligadoras- a haces de filamentos de actina denominados fibras tensoras (cap. 5-24). Es precisamente la integrina -a travs de su dominio externo- el componente del contacto focal que se conecta con la fibra colgena de la matriz extracelular. Como muestra la figura 5-31, lo hace con la ayuda de la protena adhesivafibronectina. En el captulo 5-27 se vio que uniones similares a stas -pero fugacesse establecen durante la migracin celular, cuando Jos contactos focales de los filopodios se adhieren a fibras colgenas presentes en la ruta de la clula que se desplaza por la matriz extracelular. 6-7. Los hemidesmosomas anclan a las clulas epiteliales en la lm ina basal En los epitelios, las clulas basales se vinculan con una parte especializada de la matriz extracelular conocida como lmina basal (seccin 6-l). La conexin entre las clulas y la lmina es bastante firme, ya que se produce mediante unas estructuras llamadas hemidesmosomas (figs. 6-3 y 6-7). Como los contactos focales, los hemidesrnosomas poseen integrinas, pero stas se hallan agrupadas, sus dominios citoslicos se unen a filamentos intermedios de queratina (no a fibras tensoras de actina) y sus dominios externos se conectan a una red de colgeno de tipo IV, que existe slo en la lmina basal. Esta ltima conexin se realiza por medio de la kiminina (fig.

Durante las respuestas inmunitarias, la reparacin de las heridas y la detencin de las hemorragias es necesario que algunos tipos celulares establezcan uniones transitorias con otras clases de clulas. Las uniones se producen gracias a los fenmenos biolgicos llamados reconocimiento y adhesin celular. Ambos tienen lugar cuando determinadas clulas de la sangre (neutrfilos, monocitos, linfocitos, plaq uetas) se conectan fugazmente con las clulas endote!ia!es de ]os capilares sanguneos, lo cual es un prerrequisito para poder salir de la san<>re y pasar a los tejidos (fig. 6-4). La adhesin se produce porque en la me;brana plasmtica de las clulas sanguneas existen, glicolpidos y glicoprotenas que interactan especficamente con ghcoprotemas ~ompl e mentarias -llamadas selectinas- presentes en la membrana plasmauca de las clulas endoteliales. Inversamente, en otras ocasiones los glicolpidos Y las glicoprotenas se localizan en las clulas endoteliales y las selectinas en las clulas sanguneas. Estas interacciones son necesarias para que las clulas sanguneas se detengan en el lugar apropiado y pasen entre dos clulas endoteliales conti~uas , lo cual les permite alcanzar el tejido donde - segn el caso- parttctparan en la respuesta inmunitaria, en la cicatrizacin de la herida o en la detenctn de la hemorragia. La especificidad de la unin es provista de un lado por los oligosacridos de Jos glicolpidos y de las glicoprotenas y del otro por los oligosacridos de las selectinas. Los oligosacridos interactuantes son diferentes entre s, de modo que se establecen conexiones entre molculas de distinta composicin (uniones heteroft1icas) (fig. 6-5). Las selectinas deben su nom~re a las ad~e siones selectivas que median y a que son lectinas, es decir, moleculas que tienen una gran avidez por hidratos de carbono. Otras adhesiones celulares heteroflicas transitorias tienen lugar entre las clulas mieloides (durante su proliferacin), enue los linfocitos By T (durante ]a activacin de los primeros) y entre los oligodendrocitos o las clulas de Schwann y las neuronas (durante la mie!inizacin). En todos estos casos, oligosacridos de una de las dos clulas interactuantes reconocen especficamente a glicoprotenas llamadas sialoadhesinas, presentes en la membrana plasmtica de la clula opuesta. . _. En el curso del desarrollo embrionario se producen adheswnes heterofthcas similares a las descritas, aunque son ms comunes las adhesiones homoflicas que se analizan en la prxima seccin. Finalmente, otro ejemplo de adhesin heteroflica se da durante la fecundacin del ovocito por el espermatozoide (cap. 19-19).

Fig. 6-S. Uniones moleculares heterofflicas y homoflicas. En las uniones homofflicas mediadas por las cadherinas interviene el Ca2\ ilustrado como un rectngulo de color amarillo.

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6 LA UNION DE LAS CELULAS ENT RE SI Y CON LA MATRIZ EXTR ACELULAR

117

116

FUND AMENTOS DE BIOLOGIA C ELULAR Y MOLECULAR

Adems de unir a las clulas y de impedir el pasaje de sustancias a travs de los epitelios, las uniones oclusivas de terminan que las composiciones moleculares de las regio nes apical y basolateral de las membranas plasmticas de las clulas epiteliales sean difere ntes entre s. Esta asimetra se debe a que las uniones oclusivas forman barre ras que impiden la difusi n lateral de las protenas y los lpidos membranosos (caps. 3-3 y 3-5), parte de los cuales quedan confinados de un lado de las uniones y parte del o tro. E l transporte transcelular de solutos ilustrado e n las figuras 3-27 y 3-28 es posible gracias a la segregacin - a ambos lados de las uniones oclusivas- de protena~ m em branosas que funcionan como canales inicos y perrneasas.

Filamentos intermedios

6-1 2. El cinturn adhesivo contie ne glicop rote na s II<Jm adas cadh e.ri nas
El cinturn adhesivo (llamado tam bi n desmosoma en cinturn, desmosoma en banda, banda de adhesin., barra terminal o zonula adherens) es otro tipo de unin que desarroll an las clulas epite liales para mantenerse ligadas entre s. Se localiza por debajo de la uni n oclusiva (fig. 6-7) y en su co mposicin intervienen gli coprotenas transmembranosas de la famili a de las cadherinas (secci n 6-9) y la franja de filame ntos d e actina corticales estudiada en el captulo 5-2 1. All se adelant que las cadhe rinas se conecta n con los filamentos de actina mediante las protenas ligadoras, placoglobina, catenina, 0'.-actinina y vinculin~ .__ Como m uestra n las figuras 6-8 y 6-1 O , las cadherinas dan lugar a una franj a proteica que circunda las paredes late rales de la clula, del mismo ancho que la franja de fil ame ntos de acti na con la que se hallan conectadas. Las figuras 6-8 y 6- 1O muestran tambi n que la uni n intercelular se produce en virtud de que las cadherinas se conectan a travs de sus dominios externos. Segn se vio e n la seccin 6-9, se trata de uniones ho moflicas, pues las molculas que interactan son iguales e ntre s (fig. 6-5). El nombre de cinturn adhesivo hace refere ncia a las dos caractersticas ms no torias de este tipo de uni n: la di sposicin circular de las cadhrinas y los filame ntos de actina y la propiedad de las primeras de adherirse mutuamente. El conjunto de cinturones adhesivos forma un e nrej ado tra nsepitelial, del cual deri va parte de la resistencia lateral de los epitelios.

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Cadherinas

Fig. 6-10. Cinturn adhesivo.

F ig. 6-11. Desmosoma.

dominios citoslicos se asocian con fi lame ntos inte rmed ios de queratina (no con filamentos de actina) . Esta ltim a asociacin es mediada por una placa discoidal que incluye las protenas ligadoras desmoplaq uina 1, desmoplaquina II y pla coglobina. Una cara de la placa se relaciona con las cadhennas y la otra con los filamentos de queratina, los cuales -como horqUillasingresan en el d isco, se c urvan y vuelven al citosol (fi g. 6-11 ). Adems de unir fuertemente a las clulas epiteliales e ntre s, los desmosomas y los filamentos de queratina compone n una red transcelular extendida por todo e l epitelio. al que le confieren una gran resistencw mecmca. Es por ello que en los distintos tejidos el nmero de desmosomas es proporciOnal al grado de tensin o de estiramiento a que son some tidos. Por eJemplo, en el epitelio de la mucosa de la vejiga urinaria los desmosomas son muy abundantes. En el captu lo 5-34 se vio que los d iscos intercalares que ligan a las clulas m usculares cardacas contienen desmosomas asociados con fila mentos de desmina.

6- 13. El desm oso ma es co mpa ra d o con un rem a che y en su formaci n t a m b i n inte rvienen cadhe rinas
Los desmoso mas (del griego desms, vnculo, y soma, cuerpo) (llamados tambin desmosomas puntiformes o maculae adheren.s), a diferencia de la u nin oclusiva y del cinturn adhesivo, constituyen unio nes puntiforrnes e ntre las clulas epiteliales contiguas, por lo que han sido comparados con rem aches (figs. 6-8 y 6-ll). Se hallan por debajo del cinturn adhesivo, distribuidos irregularmente e n las paredes laterales de las clulas. Cada desmosoma ocupa un rea circular de aproximadame nte 0,5 ..tm de dimetro y a su nivel las me mbranas plasmticas se enc uentran separadas por una distancia de 30 a 50 nm. El desmosoma incluye un grupo de g licoprotenas transrn nrhn rnosas dl: la fa mili a de las cadherinas, de nominadas d csmoglcnu 1, clt-Nmcorull nn 1 y

6 -14. La un in comun icant e est for mada por la asociacin d e conexo nes aport ados por las c lulas e pite li a les contigu as
L as uniones comunicantes (llamadas tambi n uniones en hendidura, uniones "gap " o nexus) son canales que comunican los citoplasmas de las clulas epiteliales adyacentes. Cada canal est compuesto por un par de conexones, que son estructuras cilndricas huecas que atraviesan las membranas plasmticas de las clulas e nfrentadas (figs. 6-7 y 6-12). La pared del conexn resulta de la asociacin de seis protenas transmemb ranosas idnticas que delimitan un conducto central (fig. 6-12) . Estas protenas se llaman conexinas y se unen con sus simil ares del conexn de la mcmhrana plasmtica opul:sta, lo q ue d a lugar a un canal que comunica a las dos d loolas . l).;hido a qow las con< :xinas .so hr sal ' 11 '11 l t:spac io inl r lular t\lllll~ 1 y 11111 , lu; lllt~lllhl llllllll pl!l1HHIIi t ' :tfl dt di\'IHI~l 1' 1111111: qnn l1111 1 -ll' p ttl l l
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FUNDAMENTOS DE BTOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR 6. LA UNJON DE LAS CELULAS ENTR E S I Y CON LA MATRIZ EXTRACELULAR

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Fig. 612. Unin comunicn nte. A la derecha se iluslra e l mecanismo de cie rre de l cunexn.

Fig. 6-13. Vista superfic ial ultramicroscpica, con coloracin negativa, de numerosos concxones en la membrana plasmlica de la clul" he pti ca. 425.000x . En el recuadro se observa que cada unidad 1icne la forma ele un anillo he xagonal cuyos lados cones-

ponden a las seis concxinas.

(Cortesa de G. Znmpighi .)

das por una distancia ele 2 a 4 nm . Por este motivo a la unin comun icante se la llama tambi n unin e n he ndi dura (fig. 6- 12). En las clulas epiteliales los conexones se encuentran e ntre Jos desmosomas. No estn uniformemente distribuidos sino agrupados en conjuntos aislados, cada uno compuesto po r unos pocos o por cie ntos de conexones. La figura 6-!3 corresponde a una imagen ultramicroscpica con coloracin negati va de numerosos conexones e n la mem brana plasm tica de un hepatocito. Los conexones aparecen como anillos que forman un enrejado hexagonal con una periodi cidad de 8.5 nm. En el recuadro se obser va una representaci n lograda mediante el procesamiento densitomtrico computarizado de las imgenes electrnicas. El conducto central d el conexn tiene un dimetro de alrededor de 1,5 nm. Po r l pasan li bremente algunos sol u tos (iones, monosacridos, nucletidos, a minocidos, etc.) del citoplasma de una cl ula al citoplasma de la clula veci na, pero no las macromo lculas. Tales pasajes indican que existen acoplamientos me tablicos y elctricos e ntre las clulas contiguas. La estructura de los conexones es comparable a la de los canales inicos vistos en el captulo 3-14 . Debe recordarse q ue los canales dependien tes de voltaj e y de ligando estn compuestos, respectivamente, por c uatro y cinco protenas transmembranosas, en lugar de las seis de los conexones. Estos, como los canales inicos , no son estructuras estticas, ya que tienen la capacidad de abrirse y de cenarse. Comnmente se hallan a biertos, y se cienan cuando aumenta la concentracin de Ca 2 en el citosol. La figura 6-12 muestra que el cien e o bedece a un cambio de inc linacin de las conexinas. Las conexinas contienen c ua tro dominios transmembranosos y sus extremos amino y carboxilo se hallan orientados hacia el citosol. El dominio contiguo al extremo carboxilo tiene una funcin importante de bido a que s u fosforilacin modifica la posicin de la conexina y lleva al cierre del cnnexn. Dado que en una unin comunicante la clausura de un C<>rlo<'> ll se rroduce independienteme nte del o tro, el cie rre del canal pu de Nc'> ' '"'"ll'< 'll(' llc'in ek
la clau sura

les (cap. 22-4). As, en las clul as moribundas se produce un aumento en la concentraci n del Ca 2 ciloslico que provoca el ciene de los conexones para que no pasen a las cl ulas vecinas elementos q ue puedan daa rlas. A travs de las uniones comunicantes ci rculan: 1) nutrientes; 2) desechos metablicos; 3) sustancias que actan como seales, por ejemplo, los morfgenos durante la diferenciacin celular (cap. 21 -12) o las molculas que sincronizan e l movimiento de los cilios en los epitel ios (cap. 5-12); 4) potencJaJes elctricos de accin, como Jos que se transmiten por los d iscos intercalares del mscu lo cardaco para sincronizar las co ntracciones de sus clulas (cap. 5-34), o entre las clul as musculares lisas de algunos rganos tubulares (intestino, epiddimo) a fin de q ue sincronicen sus contracc iones peristlticas.

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LAS CONEXIONES ENTRE LAS CELULAS VEGETALES

6- 15. los plasmodesmos son puentes de com unicacin entre celulas vegeta les
Una caracter[stica de la mayora de las clulas vegetales es la presencia de pue ntes entre sus citoplasmas, lo que las hace continuas. Estos puentes -denominados plasmodesmos- atraviesan la pared celular pectocelulsica descrita en el captulo 3-30 (fig. 1-6). La presencia de plasmodesmos permite la libre circulacin de lquidos y solutos, tan importantes para mantener la tonicidad de la clula vegetal. Es posible que dejen pasar tambin algunas macromolculas. Como vemos, las paredes pectocelulsicas no constituyen tabiques intercelulares completos, de modo que las clul as componen un vasto sincicio sostenido por el esqueleto que forman sus propias paredes. E l desarrollo de los plasmodesmos est relacionado con la formacin de la placa celular (caps. 3-30 y 18-2 1), que es atravesada por componentes del retculo e ndoplasmtico, a la postre los responsables de la formacin Y de la localizaci n de los plasmodesmos (cap. 7-44). Se ha sugerido que los plasmodesmos desempean un papel e n la d iferenc iac i u celular. 1\sr. r1 bs lulas v 'l! 'lalcs que se alarp au, el 111mcro d'
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120

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

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1
El sistema de endomembranas
Digestin y secrecin

1'

7- 1. Los componentes del sistema de endom embranas se comun ican mediante vesculas

En el captulo 4-1 describimos los compartimientos en que se di vide la clula, de los cuales el sistema de endomembranas es uno de los ms voluminosos. Se distribuye por todo el citoplasma y est compuesto por vanos subcompartimientos --cisternas, sacos, t bulos- comunicados entre s (fig. 7-l). En algunos lugares la comunicacin es directa y en otros es medtada por vesculas transportadoras. Estas nacen de un compartimiento Y ~e transfieren a otro en virtud de procesos que comprenden prdtda y ganancta de membranas. Las vesculas transportadoras operan del siguiente modo (fig. 7-2): 1) brotan de la membrana de un compartimiento, llamado donante; 2) viajan por el citosol en busca de otro compartimiento, llamado receptor, con cuya membrana se fusionan. Por consecuencia, una parte de la membrana y una parte del contenido del compartimiento donante se transfieren, respectivamente, a la membrana y al interior del compartimiento receptor. La figura 7-1 permite ver que el compartimiento donante recupera la membrana perdida merced a vesculas recicladoras.
7-2. El sistema de endomembranas est integrado por varios organoides

Fig. 7 -l. Organoides que componen el sistema de endomembranas. Se ilustran tambin las d istintas vesculas transportadoras (flechas llenas) y recicladoras (flechas punteadas) que lo integran.

El sistema de endomembranas est integrado por los siguientes organoides (fig. 7-1 ): 1) el retculo endoplasmtico, que comprende dos sectores, denominados liso y rugoso (debe agregarse adems la envoltura nuclear, que ser analizada en el captulo 12-2); 2) el complejo de Golgi; 3) los endosomas, y 4) los lisosomas. Las membranas de estos organoides y las de las vesculas transportadoras estn constituidas por una bicapa lipdica similar a la de la membrana plasmtica. Como es obvio, una de las caras de estas membranas se relaciona con el citosol y la otra con la cavidad de los organoides. Se denominan, respectivamente, cara citos6lica y cara lumi11al. l .as 111 'lnhrauas pose n gli 'Pifpidos . y g li
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Retfculo endoplasmtico

infrfiHl~'l ' ll ll Y ('l'lil 1h'11, tjlll ' H ' JIIC '

7 . EL SISTEMA DE ENDO MEMBR i\ Ni\ S

12.'

122

FUND AMENTOS DE BIOLOGIA C ELULAR y MOLECULAR

queleto se encarga de mantener a sus componentes en posiciones ms o me-

Jlig. 7-2. Esquemas secuenciales que ilustran la fo rmacin de una vescula en la 111cmbrana de un compani llliento donante y la fusin de la membrana vesicular con la membrana del compartimiento reccplor. Compartimiento donante Formacin de una vesicula transportadora Fusin de membranas (vase Fig. 3-13)

-Compartimiento receptor

nos fijas dentro del citoplasma (cap. 5-9). Este organoide se divide en dos sectores, que se diferencian por la ausenc ia o la presencia de ribosomas sobre su cara citoslica. Se denominan, respectivamente, retculo endoplasmtico liso (REL) y retculo endoplasmtico rugoso (RER) (figs. 1-7, 1-10,7-3, 7-4 y 7-6). Entre ellos hay un sector de transicin, en parte liso y en parle rugoso.
7-4. El REL se halla libre de ribosornas

sentan ms del 80% ele su peso (fig. 3- 14). Los hidratos de carbono se orientan siempre hacia la cavidad de los organoides. El tamao del sistema de endomembranas vara en las distintas clases de clulas. Es muy pequeo en los ovocitos, en las clulas poco difere nciadas y en las que producen protenas para el c itosol exclusivamente, como los reticulocitos.

Como acaba de sealarse, el REL carece de ribosomas. Suele comprender una red de t bulos in terconectados, cuyo volumen y distribucin espacial dil'ieren en las distintas clases de clulas. Esta diversidad depende de sus variadas funciones. Por ejemplo, la clula muscular estriada contiene un REL absolutamente singular - el retculo sarcoplasmtico-, adaptado para desencadenar la contractilidad del citoesqueleto (seccin 7-26).
7-5. El RER est asociado con ribosomas

El RER est muy desarrollado en las clulas que realizan una activa sntesis proteica. En su composicin predominan los sacos aplanados, que cuando son abundantes se encuentran separados por un angosto espacio citoslico repleto de ribosomas (fi g. 7-4). Estos ribosomas se hall an adheridos a la cara citoslica de la membrana del RE (fig . 7-6). Por lo general componen complejos llamados polisomas o polirribosomas , consistentes en grupos de ri bosomas enlazados por una molcula de ARNm (figs. 7-3 y 16-7) (cap. 16- 11 ). La afinidad del RER por los ribosomas se debe a que en su membrana existen receptores especficos (seccin 7-12), de los cuales carece el REL.

RETICULO ENDOPLASMATICO
7-3. Generalidades

. El retculo endoplasm tico (R E) fue descubierto cuando se introdujo la mic roscopia electrnica en el estudio de las clulas. Las primeras microfotografas mostraron un componente reticular que no llegaba a la membrana p l as mtic~ -ele ah los trminos "retculo" y "encloplasmtico"- , hasta que se conoc10 su verdadera forma tridimensional. Finalmente, con el uso ele la radtoautografa y de tcnicas de anlisis citoqumico se identificaron casi todos sus componentes. , El retculo endoplasmtico se distribuye por todo el citoplasma, desde el nucleo hasta la membrana plas mtica. Est compuesto por una red tridi menSional de tbulos y sacos aplanados totalmente interconectados (fig. 7-3). A pesar ele su extensin y de su intrincada morfologa, constituye un organoicle mciJvtso, ya que posee una membrana contin ua y una sola cavidad. El citoes-

COMPLEJO DE GOLGI
7-6. Generalidades En 1898, utilizando un mtodo de coloracin argntica, Camilo Golgi descubri una estructura reticular en las clulas nerviosas que posteriormente llev su nombre. Medio siglo despus, con el advenimiento de la microsco-

1'1 1 1 7-.l Esqu mn triclillll'll

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l'ig. 7-4. M icrografa eleclrnica del retculo endoplasmti co rugoso. Obsrvense los ribosomas unidos a la membrana del organoide (uno aparece marcado con una !lecha). 208.000x . (Cortesa de G. t:. Paladc.) En el r cuadro ~e d is tiugm, u las ~uhun i d adt..'" 111\' llnl (M,) y n1n 111 (Mt J ih' l 1 lhtll,i 1 1111 1. d 1!l , I H III ~ ({ 'nlt '
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124

FUNDAMENTOS DE B!OLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

125

Vesculas destinadas a la membrana plasmtica o a los endosomas ___..----- Red trans ./""- - - Cisterna trans

.....__ _ _ _ _ Red cis

Fig. 7-5. Representacin tridimensional del complejo de Golgi .

Vesculas provenientes del RE

pia electrnica, el fraccionamiento celular y las tcnicas de anlisis citoqurnico, pudo revelarse su estructura y su composicin molecular. En una clula idealizada el complejo de Golgi se halla entre el RE y la membrana plasmtica, con los endosomas y los lisosomas situados entre sta y el complejo (fig. 1-7). Estas relaciones espaciales son el reflejo de otras de ndole funcional, ya que, por medio de vesculas transportadoras, las molculas provenientes del RE alcanzan el complejo de Golgi, lo recorren, se desprenden de l y arriban a la membrana plasmtica o a los endosomas (fig. 7-1). Estos flujos comprenden tanto molculas membranosas como molculas luminales. As, segn la va seguida, se transfieren fragmentos de membrana del RE a la membrana plasmtica o a la membrana de los endosomas, mientras que las molculas provenientes de la cavidad del retculo se vuelcan en el medio extracelular - esto se denomina secrecin- o ingresan en la cavidad de los endosomas. Corno se ver, en ambos casos el complejo de Golgi desempea un papel fundamental, dado que las molculas que lo recorren experimentan modificaciones necesarias para sus actividades biolgicas. Por otro lado, algunas molculas son sintetizadas directamente en el complejo de Golgi, sin la intervencin del retculo endoplasmtico.

Cada dictiosoma est integrado por: 1) Una red cis, formada por numerosos sacos y t bulos interconectados. 2) Una cister na cis, conectada con la red cis. . .. 3) Una 0 ms cisternas medias independientes, lo cual s1gmft~a que no estn conectadas entre s ni con los restantes componentes de l d1ctwsoma. 4) Una cisterna trans, conectada con la red trans. 5) Una red tr a ns, similar a la red cis. . . La cara de entrada del dictiosoma - representada por la red CIS Y la CISterna cis- slo recibe vesculas transportadoras provenientes del RE (f1g. 7 -1) Dado que la red cis y la cistema cis forman un solo compart1m1ento, las molculas incorporadas a la membrana y a la cavidad del organ01de Circulan de la red a la cisterna por simple continuidad. En cambio, para pasar ~e la CISterna c is a las cisternas medias y de stas a la cisterna trans, las moleculas se valen de vesculas transportadoras. Como se aprecia en las figuras 7-l y 7-5 , las vesculas nacen en el borde de la cisterna cis y luego de un corto trnsito por el citosol se incorporan al borde de la cisterna media contigua. Lo mismo ocurre entre las sucesivas c isternas medias y entre la ltima de ellas y la c1sterna trans. El recorrido se compl eta cuando las molculas llegadas a la cisterna trans pasan a la red trans por simple continuidad. A continuacin, las molculas que arriban a la red trans son transferidas - tambin mediante vesculas transportadoras- hacia la membrana plasmtica o ha.:ia los udusOIII:tS ( l"ig. 7 1). .:11 11 111 i 11 w 1 ~ 111 .11, lw~ lllnknd ll ' ,~. ~nl t' ltidu~: n1 r l d~ 11 Vi ' lf 1 11 1t 1 1 VIH h Ull In 11' d, l t1 , 1111 ~ 1 1111111111

Fig. 7-6. Micrografa electrnica de la clula heptica de un animal expuesto a una dieta rica en grasas. Se observan vesculas que transportan lipoprotenas, el retculo endoplasmtico rugoso (RER), el retculo endoplasmtico liso (REL), el complejo de Golgi (C), una mitocondria (M) y un peroxisoma (P). 56.000x. (Cortesa de A . Claude.)

7-7. El complejo d e Go lgi muestra una pola rizacin que se corresponde con s u funcionamiento
El complejo de Golgi est integrado por una o por varias unidades funcionales llamadas dictiosomas (del griego dktyon, red, y soma, cuerpo). En la clula secretoria polarizada el organoide posee un solo dictiosoma grande que ocupa una posicin intermedia entre el ncleo y la superficie celular, donde se libera la secrecin (fig. 1-7). Complejos de Golgi con estas caractersticas se observan, por ejemplo, en clulas de la mucosa intestinal, de la tiroides y del pncreas exocrina. En cambio, otras clulas, como las plasmticas, los hepatocitos y las neuronas, poseen varios dictiosomas pequeos distribuidos por todo el citoplasma (fig. 1-1 0). En el hepatocito existen unos 50 dictiosomas, que representan el 2% del volumen citoplasmtico. Aunque su localizacin y su nmero varan en las distintas clases de clulas. los dict.iosomas presentan caractersticas morfolgicas constantes. Suc l u adoptar moa forma urvada. con la cara conv xa 111raudo al uok loo y lu r "' 'u vu IH 'nlucln lmrin la llll'lllhl'aua plas1nft lit'H, 1.11 p1 inu~1 11 ~~t tll'lltHIIIU!I c nn do 1111 1111111 "1 . y 111 /il'f1111111 1o, <'111'11 oh ulhho " 11'1111 ( 1 /'1 1 , 1 lo y 1 1)

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l'lJN IJAMii NTOS DE B IOLOG IA CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEMA DE ENDOM EMBRANAS

127

--es decir, son secretadas- y las membranosas se integran a la membrana plasmtica. El proceso de secrecin lleva el nombre de exocitosis y se analizar en la seccin 7-22. En el segundo caso, la vescula vuelca s u contenido - consistente en e nzimas hidrolticas- e n la luz de un endosoma. En la seccin 7-30 se ver que ello tra nsformara al endosoma en un lisosoma. En las sig uientes secciones se describirn las funciones de l RE y del complejo de Golgi (algunas se producen por la accin comple me ntaria de Jos dos organoides).

[,2-diacilglicerol + Acil CoA

Diacilglicerol aciltransferasa

Triacilglicerol + CoA

Es necesario advertir que e n las clu las de la mucosa intestinal la mayora de los triac ilgliceroles se sintetizan eludiendo las etapas iniciales, ya que lo hacen a partir de monoacilg liceroles y diacilgliceroles, que son las formas como se absorben las grasas tras su digestin.

CoA

CpA

FUNCIONES DEL RET/CULO ENDOPIASMATICO Y DEL COMPLEJO DE GOLGI

7- 8. En el RE tienen lugar las reacciones centrales de la sntesis de los triacilgliceroles
Los triacilgliceroles (triglicridos) estn compuestos por tres cidos grasos unidos a una molcula de glicerol (cap. 2-7). Su sntesis tiene lugar en e l citosol, donde Jos cidos grasos se unen a la coenzima A (CoA) -mediante una tioquinasa- y se forman molculas de acil CoA (fig. 7-8). Tioquinasa Acido graso + CoA + ATP - - -- --+ Acil CoA + ADP+P Por su lado, el glicerol se fosforila en su C3' mediante una glicerol quinasa, lo cua l genera glicerol 3-fosfato. Glicerol + ATP
Glicerol qujnasa
> Glicerol 3-fosfato + ADP

CoA CoA

~ ~
Acidos grasos
~

l~
\

Acil CoA

CoA CoA 1
CH
U-1
Cl l

OH

1 '

1
UH

CH, - CH - CH,

CoA CoA

Glicerol 3-fosfato

Acido fosfatdico (AF)

AF

Dlacilghcerol (DAG) + p
1 Citosol

A lg unas clulas no poseen la e nzima g licerol quinasa, de modo que en e llas el g licerol 3-fosfato se forma por la reduccin de la dihidroxiacetona fosfato - un producto intermediario de la gluclisis- med iante la glicerol fosfato dcshidrogenasa.
3

rm~nn
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DAG

!Membrana del REI

ITIT*nn

guMUM
+

Dihidroxiacetona fosfato

Glicerol fosfato dcshidrogcnasa

Glicerol 3-fosfato

A continuacin, sendas aci l CoA transfieren sus cidos grasos a l CJ ' y al C2' de l g licerol 3-fosfato, lo c ual produce cido fosfatdico (cap. 2-7) (fig. 2-13). La reacci n es catalizada por una aciltransferasa. Glicerol 3-fosfato + 2 Acil CoA
Aci ltransferasa

> Acido fosfatdico + 2 CoA 4A

~uuu~

niT~niT ~

CpA

rrr + c"
Triacilglicerol (TAG) (se traslada al citosol)

El cido fosfatdico se inserta en la monocapa citoslica de la membra na del RE, donde se completa la sntesis del triacilg licerol (fig. 7-8). En primer trmino, el cido fosfa tdico pierde el fosfato por accin de una fosfatasa y se convierte e n 1,2-diacilgli cerol (fig. 2-1 3) (como se ver en la prxima seccin, esta molcula tambi n es requerida para la sntesis de los glicerofosfolpidos). Fosfatasa Acido fosfatdico - -- - - > l ,2-diaci lglicerol + P
46

DAG + CDP-colina - - - Fosfatidilcolina + CMP

ITITiiTIT

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Jo'iJ'. 7-H.
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Fi n< ilmc nle, mediante la ciiac ilg lic rol aciltran~ l'crasa , lllllllii('Viiii(' I C11i\ ll !ll".f'j,.,l' s11 ;cido g raso al ('V dl'i 1) diiil' I~ I 1'<'1'111. HJin, o"'f'll'i .J 111 .1 11 1 ~~~ d ~ llll l ll 'i iJ Ii, nd . tf lh' JHI'.,I Id 1111 " ' I 'Hp 1 ' '

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7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

129

128

FUNDAMENTOS DE BJOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

7-9. El RE es responsable de la biognesis de las membranas celulares

Serina + CDP-1 ,2-diacilglicerol

_T_r_an_ s_ fe_r_ as _ a__, Fosfatidilserina + CMP

La clula produce membranas nuevas de modo permanente. Lo hace con el fin de cubrir demandas de ndole funcional , reemplazar a las desaparecidas por envejecimiento o para duplicarlas antes de la mitosis. En ocasiones las produce para posibilitar el desarrollo de partes del cuerpo celular (por ejemplo, el axn en las neuronas). La biognesis de las membranas celulares comprende la sntesis de sus lpidos, de sus protenas y de sus hidratos de carbono. Estos tres tipos de molculas no se sintetizan separadamente y luego se integran para formar una membrana nueva, sino que se incorporan a una membrana preexistente, la membrana del RE. Luego, a medida que sta crece, algunas de sus partes se desprenden como vesculas y se transfieren a los dems organoides del sistema de endome mbranas o a la membrana plasmtica. En los captulos 8-24 y 10-5 veremos que el RE tambin provee los fosfolpidos de las membranas de las mitocondrias y de los peroxisornas. En las prximas secciones estudiaremos los mecanismos de incorporacin de los lpidos y de las protenas a la membrana del RE y los procesos de glicosilacin de ambas molculas.
7-1O. Los lpidos de las membranas celulares se sintetizan en la membrana del RE

Fosfatidilinositol. Las reacciones responsables de la sntesis del fosfatidilinositol (PI) son similares a las de la fosfatidilserina, excepto porque se agrega el polialcohol cclico inositol en lugar de la serina. Este fosfolpido se convierte enfosfatlilinositolfosfato (PIP), enfosfatidilinositol difosfato (PJP2) y en josfatlilinositol trifosjato (PIP1) por el agregado sucesivo de fosfatos (fig. 2-16). Estas fosfonlac10nes son catahzadas por quinasas con fosfatos tornados de molculas de ATP.
Quinasa Pl + ATP Quinasa PJP+ ATP Quinasa PIP2 + ATP > PIP + ADP PJP, + ADP PTP, +ADP

Una vez formadas, la mayora de las fosfatidilcolinas pasan por "flip-flop" (cap. 3-3) de la monocapa citoslica a la monocapa luminal de la me~brana del RE. La translocacin es impulsada por una enzima denommada ll1pasa, que hace posible el paso de la cabeza polar del fosfolpido por la regin hidrofbica de la bicapa. . Dado que acta menos eficientemente sobre la fosfatidiletan~l~mma, la fosfatidilserina y el fosfatidilinositol, en su mayora estos fosfo hp1dos quedan retenidos en la monocapa citoslica (cap. 3-3). As, el proceso de translocacin tiene doble consecuencia: hace q ue se empareje la cantidad de fosfolpidos en ambas monocapas y que se distnbuyan asimtricamente. , . Esfingomielina. La esfingomielina es un esfingofosfohp~do compuesto por la ceramida unida a la fosforilcolina (fig. 2- 18). En el capitulo 2-7 se v10 que la ceramida se forma por el agregado de un cido graso a la esfmgosina, que es un aminoalcohol que posee una cadena hidrocarbonada larga (fig. 2-19). La ceramida se forma en la monocapa citoslica de la membrana del RE con el concurso de una transferasa.
Transferasa Esfingosina + Acil CoA - - - - - - > Ceramida + CoA

Fosfatidilcolina. Debe recordarse que los glicerofosfolpidos estn integrados por una molcula de glicerol, dos cidos grasos, un fosfato y un segundo alcohol (caps. 2-7 y 3-3) (figs. 2-14 y 2-20). La fosfatidilcolina se forma en la rnonocapa citoslica del RE por la unin del 1,2-diacilglicerol (seccin 7-8) con la citidina difosfato-colina. La reaccin es catalizada por una fosfotransferasa especfica (fig. 7-8).
Fosfotraosferasa 1,2-diacilglicerol + CDP-colina

> Fosfatidilcolina + CMP

Previamente, la CDP-colina se sintetiza en dos pasos. En el primero, mediante una quinasa, la colina es fosforilada con un fosfato tornado de la adenosina trifosfato.
Quin asa Colina + ATP - -- - - > Fosforilcolina + ADP

En el segundo, la fosforilcolina se combina con la citidina trifosfato mediante una transferasa.

Transferasa Fosforilcoli na + CTP - - - - - - > CDP-colina + PP

La sntesis de la esfin gomielina se completa en la cara luminal del complejo de Golgi, de modo que la ceramida debe translocarse -merced a la fli- abandonar la membrana del RE y transferirse a la membrana del pasa , . 1 complejo. Como se sabe, esta transferencia se realiza mediante ves1cu as transportadoras. . . En su nueva localizacin la ceramida se combina con la fosfonlcohna merced a otra transferasa, lo que la convierte en esfingomielina.
Transferasa Ceramida + Fosforilcolina - - - - --> Esfingomielina

Fosfatidiletanolamina. Las reacciones que llevan a la formacin de la fosfatidiletanolamina son similares a las de la fosfatidilcolina, excepto por el hecho de que se agrega CDP-etanolamina en lugar de CDP-colina. Fosfatidilserina. En la formacin de la fosfatidilserina, el cido fosfatdico (seccin 7-8) no pierde su fosfato y se combina -mediante una transferasa especfica- con la CTP, lo c ual genera CDP-1,2-diacilglicerol.
Acido fosfatdico + CTP - -- ---> CDP-1,2-diacilgliccrol + I'P Transferasa

Colesterol. La membrana del RE incorpora molculas de colesterol ingresadas en la clul a por endocitosis (seccin 7-42) y tamhin las sinleli7.a. Igual qu(' los fosfollpidt ts, l rok~ii'I'Ol sr 1ransfi n: a las r stanl cs .nJ<:lllhr:lllas tk
In

El rmrolpido se

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130

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR y MOLECULAR 7. EL SISTEM A DE ENDOMEMBRANAS

}3 1

7- 11. Los lipidos de las membran as celula res se g licosidan e n e l compleJo de Golg i La sntesis de los glicolpid os tiene lugar en el complejo de Golgi. En la formactn de los galactocerebrsidos (fig. 2-21) interviene una transferasa, que transfiere la galactosa de la uridin a difosfato-ga lactosa al primer hidroxdo de la ceramida.
Ceramida + UDP-galactosa

- - - - -->

Transfcrasa

Galactocerebrsido + UDP

La sntesis de los glucocerebrsidos (fig. 2-21) es si milar, salvo por el hecho de que se transfiere la glucosa de la UDP-glucosa mediante otra transferasa.
Ceramida + UDP-glucosa

- - - -- ->

Transferasa

Glucocerebrsido + UDP

Los ganglisidos (fig. 2-22) se forman cuando a la cera mida se unen -de a ~tno por vez- los monmeros de las cadenas oligosacridas. El primer monomero que se agrega es la glucosa; luego lo hacen -en diferentes cantidades Y ordenamientos seg n el tipo de ganglisido- la galactosa, la N-acetilglucosamma, la N-acetilgalactosam ina, el cido silico o N-acetilneuramnico y la fucosa (cap. 2-7). Igual que la galactosa y la glucosa de los cerebrsidos, los monosacridos ~ue participan en la sntesis de Jos ganglisidos se presentan unidos a nucletidos (por ejemplo, UDP-glucosa, UDP-galactosa, UDP-N-acetilglucosamina, UDP-N-acetdgalactosami na, CMP-cido silico y GDP-glucosa). 7-1 2. Las pt:otenas destinadas a l RE se insert a n en la membrana o se ltbera n e n la cavidad del organoide Las protenas, excepto unas pocas pertenecientes a las mitocondrias se sinte tizan en Jos ribosomas del citosol (cap. 16-9). Si bien todos Jos rib~so mas citoslico~ son iguales, algunos estn dispersos en el citoso l y otros se hallan adosados a la membrana del RER (tig. 16-8). A continuacin veremos por qu y cmo.
l'i~. 7-9. Unin del ribosoma n >ll la membrana del RER.

duc~n en el nbosoma cuando ste a n se enc uentra libre en el citosol. La

unon del rtbosoma a la membrana del RE tiene lugar si la protena que surge delnboso~a ~osee un segmento peptdico con la informacin apropiada, es de~tr, un pepb d o seal especfico para dicha membrana (cap. 4-4). En las protemas destmadas al RER, el pptido seal suele consistir en una secuen-

Los primeros pasos en la sntesis de una protena destinada al RE se pro-

( )hs rvese el receptor de la I'I<S. el receptor del ribosoma y 1 paso de la protena a traV< ' del translocn.

cia de alrededor de 30 aminocidos -5 a 10 altamente hidrofbicossituada en el extremo amino o cerca de l (tabla 4-1). Las protenas que se liberan en la cavidad del RER poseen slo esa seal , localizada en el extremo amino de la molcul a. En cambio, las que se insertan en la membrana del organoide contienen, salvo excepciones, un pptido seal cercano al extremo amino y otras seales, cuyo nmero depende de la cantidad de veces que la protena cruza la bicapa lipdica (fig. 3-1 0). Por ejemplo, si la protena trans membranosa atraviesa la bicapa una sola vez (monopaso), necesita una sola seal adicional, llamada seal de anclaje por motivos que se vern ms adelante. Cuando se trata de una protena multipaso, sta contiene tantas seales como veces cruza la bicapa, consistentes en pptidos seal que se alternan con seales de anclaje. Las seales de anclaje contienen secuencias de aminoc idos de largo semejante al de los pptidos seal (tabla 4-1 ). Cualquiera que sea el nmero y la localizacin de las seales, apenas el primer pptido seal sale del ribosoma es reconocido por la partcula de reconocimiento d e la seal (o PRS) (fig. 7-9), que es un complejo ribonucl eoproteico compuesto por seis protenas diferentes y una molcula de ARN denominada ARNpc (por pequeo citoslico; en ingls seRNA , por small cywsolic) (fig. 7- 10). Las caractersticas y el procesamiento de este ARN se anali zan en Jos captulos 13-2, 14-18 y 15-12. En la figura 7-9 puede observarse cmo, ligada al pptido seal, la PRS se dirige hacia el RER y se une a su membrana mediante un receptor especfico. Esta unin insume energa, la cual es cedida por un GTP hidrolizado por una GTPasa presente en el receptor. La misma figura permite ver cmo la PRS atTastra al ribosoma hacia el RER (en la seccin 7-5 se dij o que la membrana de este organoide posee receptores para los ribosomas) y cumple otra importante funcin: detiene la sntesis de la protena para que sta no salga del ribosoma, ya que fuera de l se plegara y no podra ingresar en el RER. Muestra adems que cuando el ribosoma se une a su receptor, la PRS se separa del suyo. Dado que la PRS se separa tambin del pptido seal, se reanuda la sntesis de la protena, cuyo extremo sale del ribosoma e ingresa en un tnel proteico que cruza la membrana del RER (fig. 7-9). En el captulo 3-9 se dijo que los tneles de esta clase -utilizados por las protenas para atravesar las membranas de los organoides- se denominan translocones. El translocn del RER se diferencia de los translocones de los otros organoides porque se asocia al receptor del ribosoma, con el que forma un complejo unificado (fig. 7-9). Volviendo a la PRS, cuando se separa de su receptor (y del pptido seal) puede ser usada nuevamente. Algo si milar ocurre con el ribosoma al cabo de la sntesis de la protena (fig. 7 -9). 7-13. Las protenas destinadas al RE cont iene n una o ms seales segn te nga n que liberarse en la cavidad del organoide o insert arse e n su membrana Como se dijo en la seccin anterior, las protenas destinadas a la cavidad del RE R poseen un solo pptido seal, localizado en el extremo amino. Por lo tanto, el tramo de la molcula que primero ingresa en el translocn incluye al pptido sct al inevitahlcmcnt , s n s v n la fi gura 7- 11 .
Dthido a 1]11<' ('] p ptido S\'ll:tl ]1\'llll,llll\'t'< ' t'lll'llt:lllslodut , t'llllllllolo:; 11'1 1
IIIC I'l plctf f' h 'll!"' tp lt'

Fig. 7-10. Composicin de la partcula de reco nocimiento de la seal (PRS). Los crculos corresponden a las seis protenas que acompaan al ARNpc.

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J32

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR 7 . EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

133

CITOSOL

Pptido

seal Algunas protenas transmernbranosas monopaso estn orientadas al rev~ , es decir, con el extremo amino hacia el lado citoslico. Esta clase de protetnas posee el pptido seal solamente, y no e n el extremo ami no sino cerca de l. La fi gura 7-128 muestra la conversin del pptido seal en seal de anclaje y los pasos que debe seguir para insertarse en la bicapa lipdic~. El pptido seal no es escindido por la peptidasa seal debtdo a su postc1on mterna en la cadena proteica. La formacin de una protena transmembranosa bipaso requ iere de un pptido seal situado en las cercanas del extremo ami no y de una seal adicional (fig. 7-13). Dada su posicin interna en la cadena protetca, el ppt1do seal tampoco es afectado por la peptidasa seal, por lo que se comporta como una seal de anclaje y queda retenido en la bicapa lipdica. La instalacin de una protena multipaso necesita, adems del pptido seal, de un nmero variable de seales adicionales, tantas (menos una) como sean las veces que la protena debe atravesar la membrana. Como en las protenas bipaso, se trata de seales de anclaje, la mitad de las cuales -alter~a damente- actan como pptidos seal antes de anclarse en la b1capa hpidJca (fig. 7- 14). Las seales adicionales que actan como pptidos seal seran dirigidas hacia la membrana del RER por sucesivas PRS, y todas abordan la membrana por el mismo translocn. Para ello, a medida que las nuevas seales ingresan en el translocn, las precedentes salen por un costado y se ubtcan entre tos fosfolpidos de la bicapa lipdica (fig. 7-14). La salida lateral de las seales es posible porque la pared del translocn es incompleta. En el captulo 3-4 se mencion que Jos tramos de las protenas q~te atraviesan la bicapa lipdica poseen generalmente una estructura en heltce a. Ahora puede agregarse que en su momento actuaron corno pptidos seal o como seales de anclaje. De acuerdo con la naturaleza de la protena, sta permanecer en la membrana del RE o pasar a la membrana de otro organoide del sistema de endomembranas o a la membrana plasmtica. Segn la figura 7-2, cuaiqutera que sea su destino, la protena tendr la misma orientacin que posea cuando se hallaba en la membrana del RE. Algunas protenas pueden quedar retenidas en la membrana plasmtica o ser secretadas. Por ejemplo, la inmunoglobulina producida por el hnfocllo B primero acta como un receptor membranoso y luego se secreta (es decir, se
Fig. 7-13. Mecanismo de insercin de las protenas bipaso en la mem brana del RER.

CAVIDAD DEL RE

Fig. 7-11. Esquema que ilus-

tra el ingreso de las prole nas

en la cavidad del RER.

quilla. Luego, en virtud de que el pptido seal es escindido por una proteasa conocida como peptidasa seal, el pptido se pierde y se genera en la protena un nuevo extremo ami no, que pasa a la cavidad (fig. 7-11). Finalmente, sta recibe a los restantes tramos de la protena, cuya sntesis contina en el ribosoma por el incesante agregado de aminocidos en su extremo carboxilo (cap. 16-13). Al trm.ino de la sntesis, la protena se libera en la cavidad del RER (figs. 7-9 y 7- ll ). Segn de qu protena se trate, pe rmanecer en el RE o se dirigi r, mediante vesculas transportadoras, al complejo de Golgi, donde residin en forma permanente o se transferir, tambin por medio de vesculas transportadoras, a un endosoma o a la membrana plasmtica, en el ltimo caso para su secrecin. En la seccin anterior tambin se dijo que, salvo excepciones, las protenas destinadas a la membrana del RER poseen un pptido seal en el ex tremo amino y una o ms seales adicionales. Tales protenas se insertan en la membrana del RER por alguno de los siguientes mecanismos (figs. 7-12, 7- 13 y 7- 14).

Fi~.

7-12. Esquemas que

lllliCS{ran cmo se incorporan

li~o..; protenas a Ja membrana del RER. El extremo amino de la protena puede quedar e n la cavidad del organoide (A) o en el citosol (B).

Si la protena posee una sola seal adicional, sta se ancla en la bicapa Jipdica - de ah el nombre de seal de anclaje- y el pptido seal es escindido por la peptidasa seal. Como consecuencia, se forma una protena transmernbranosa monopaso (cruza la bicapa una sola vez), con el extremo amino dirigido hacia la cavidad del RE y el extremo carboxi!o en el lado ctoslico (fig. 7-12A).

Fig. 7-14. Mecanismo de insercin de las protenas multipaso en la membrana del RER.

11

134

FUNDAMENTOS DE BIOLOC IA CELULAR y MOLECULAR 7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS CITOSOL

135

~HHMH MMHMMHHHMU . MMHUYUMMHHMM MUHM

Dolicol fosfato CAVIDAD DEL RE

rr~nrr,~rrffrrrr~rrnM ffurr~~ ~rrnrrrrnrrnniTIT,~ITITftiT

"

convierte en un anticuerpo). En ambos pasos la molcula es prcticamente idntica, salvo por el hecho de que en el primero posee un segmento adicional que la mantiene anclada en la membrana. Este segmento corresponde a una seal de anclaje cercana al extremo carboxilo de Ja protena, inexistente en la inmunoglobulina que se secreta (cap. 15-7). 7- 14. Po li pptidos fabricados por ri bosomas libres en e l ctoso l se incorporan a l RE Como excepcin a la regla, existen polipptidos - generalmente de tamao muy pequeo- que ingresan en e l RE a pesar de ser fabricados por ribosomas libres en el citoso l. Se incorporan al RE a travs de tneles constituidos por protenas transportadoras de la familia ABC (cap. 3-26), presentes normalmente en la membrana de ese organoide. 7- 15. Chaperonas hsp70 aseguran el plega miento norma l de la s protenas en l l cavidad del RE En el captulo 4-5 se analizaron las funciones de las chaperonas hsp70 citoslicas. La cavidad del RER posee chaperonas hsp70 similares, pues evitan el plegamiento prematuro o incorrecto de las protenas ingresadas en el organoide. Por aadidura, reconocen en ellas tramos incorrectamente plegados y los asisten para que se plieguen bien. Si las chaperonas no logran su cometido, las protenas mal plegadas pasan del RER al citosol despus de atravesar e l translocn que usaron para ingresar en el organoide. Este fenmeno recibe el nombre de retrotranslocacin. En el citosollas protenas se conj ugan con ubiquitinas y son degradadas por proteasomas (cap. 4-6).

} Nacetilglucosaminas (2)

} "'"""o:
} Glucosas (3)

Fi~. 7-15. Comienzo de la s(ntcsis de los oligosacridos que se ligan a protenas de la '" ,nbrana del RER mediante enlaces N-glicosdicos. Ob ' ,vese la participacin de los ll l"S dolicoles fosfato.

7-16. la sn t~sis y e l procesa mie nto de los o ligosacridos li gados a prote mas med1 a nte en laces N c:,omie nzan en e l RER y term ina n en e l complejo de Golgi La mayora de las protenas que ingresan en el sistema de endomembranas incorporan oligosacridos a sus molculas, de modo que se convierten en glicopr otenas. Como se vio en el captulo 2-6, los oligosacridos se unen a las protenas mediante enlaces N-glicosdicos y 0-glicosdicos (figs. 2-7 y 2-8). La sntesis de los oligosacridos que se unen por enlaces N-glicosdicos comienza en el RER y concluye en el complejo de Golgi. En ella participan enztmas ll amadas glicosiltransferasas, que toman monosacridos de molculas donantes y los transfieren a la cadena oligosacrida en crecinento. Como en los glicolpidos, las molculas donantes son nuclesidos: UDP (para la al ucosa, la galactosa, la N-acetilglucosamina y la N-acetilgalactosamina), (para la manosa Y la fucosa) y CMP (para el cido silico) (seccin 7- lO).

ga al fosfato del dolicol. A continuacin, de a uno por vez, se agregan otros seis monosacridos, primero una nueva N-acetilglucosa mina y luego cinco manosas. Como muestra la figura 7-15, la unin del dolicol fosfato con la primera N-acetilglucosamina se realiza por medio de otro fosfato - cedido por la UDP que dona la hexosa-, por lo que se forma un puente pirofosfato. Mientras tanto, otros dos dolicoles fosfato aceptan, respectivamente, cuatro manosas y tres glucosas, las cuales tambin se incorporan de a una por vez. A continuacin, en e l interior del RER, tras desprenderse de sus respectivos dolicoles, las cadenas de cuatro manosas y de tres glucosas --en ese orden- se suman al heptasacrido del dolicol difosfato, que por lo tanto se convierte en un oligosacrido de 14 unidades, compuesto por dos N-acetilglucosaminas, nueve manosas y tres glucosas (fig. 7- 15). Este oligosacrido se desprende del dolicol difosfato y, mediante una oligosacariltransferasa, se liga a una de las asparaginas de una protena de la membrana del RER (fig. 7-1 6). Por su parte, los tres dolicoles libres pueden ser utilizados de vuelta por el RER para la sntesis de nuevos oligosacridos. La cadena oligosacrida ligada a la protena se procesa, es deci r, experimenta una serie de cambios. Estos comienzan con la remocin de las tres glucosas y de una a cuatro de las nueve manosas. La glucosa distal es removida por la a-glucosidasa !, las otras dos por la a-glucosidasa II, y las manosas por la a-manosidasa. La cadena remanente contina procesndose en el complejo de Golgi, a cuya membrana llega la glicoprotena mediante una vescula transportadora. En el complejo de Golgi la cadena oligosacrida experimenta nuevos agregados y remociones de monosacridos, distintos segn el tipo de glicoproteoa que se requiere formar. No obstante, en todos los casos la cadena conserva las dos N-acetilglucosaminas y las tres manosas proximales del oligosacrido original, y generalmente agrega cidos silicos en los extremos de la molcula ramificada (fig. 7- 17) (cap. 2-6).
Asn -

Fig. 7-16. Esquema que i lustra cmo el oligosac<rido precursor (de catorce hcxosas) se desprende del dolicol y se liga a una protena de la membrana del RER. Asn, asparagina.

Fig. 7-17. Una vez formado, el oligosacrido precursor (de

GDP
11

catorce hexosas) se procesa secuencialmente en el RER y

en Jos sucesivos t:omparti -

Adems interviene el dolicol fosfato (cap. 2-7), un lfrido l" Slll'rial de In llli ' ltlill i iiiH <f 1 fH\R <fU' la :ilravirsa IIII:IS lr~s Vl"lTS (fi )'S. 2 21 y '/ 1'1) 1 :1
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136

7. EL SISTE MA DE ENDOMEMBR ANAS FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

137

l'ig. 7-18. Ejemplos de agregados y remociones de molulrts en un o ligosacrido a 111cdida que pasa por los sucesivos compartimientos del 'co1 nplejo de Golgi.

CARATRANS

J):

Agregado de cidos grasos

~1----- Agregado de galactosas

~ e-

--~Agregado de N-acetilglucosaminas
L
.._ _ ___

Q._r;=:

'-"'e ~) _
CARA GIS

~ _.:)'--- T -A_ g -re _g_a -do y remocin de manosas

~
Fosforilacin de manosas

En los tejidos conectivos los proteoglicanos que se liberan pasan a la matriz extracelular (cap. 6-3), mientras que en algunos epitelios de revestimiento forman parte del moco que protege y lubrica su superficie. Llamativamente, a veces retornan a las clulas y se reintegran al glicocliz, donde quedan adosados como glicoprotenas perifricas.

o
o
2

:
(f)

Preproinsulina

::S D.. o
o
z
w
..J

o
o

::J

7- 19. Algu nas protenas son procesadas en el RE y en e l complejo de Golgi

:::

a:

Pptido seal

En el complejo de Golgi las enzimas responsables del procesamiento de los oligosacridos obran secuencialmente, para Jo cual se hallan distribuidas entre la regin de entrada y la regin de salida del organoide siguiendo el orden e n que actan (fig. 7 -18). No se conocen los mecanismos regulatorios que llevan a las glicoprotenas a expenmentar una clase de procesamiento y no otro.

7- lJ. La s nt esis de

los oligosacrid os ligad os a protenas por e nl aces O tiene lug a r e n e l co mplejo de Golgi

, En el captulo 2-6 se vio que los oligosacridos que se hallan unidos a protemas por enlaces 0-glicosdicos se ligan a una serina o a una treonina. Su sntesis se cumple en la cavidad del complejo de Golgi por el agregado -mediante ghcosiltransferasas especficas- de sucesivos monosacridos. Primero se liga una N-acetilgalactosamina a una protena de la membrana del organoide Y luego -de a uno por vez- se agregan los otros monosacridos. Por lo general la cadena oligosacrida incorpora cidos silicos en su periferia.

7- 18. La sntesis de los gli ~osaminog li canos y de los proteog li ca nos 1 t1e ne luga r e n e l ret1culo e ndo plasmtico
son glicoprotenas formadas por la unin de protenas con ghcosa mmoghcanos (GAG). Corno ya se seal en el captulo 2-6, los GAG son polisacridos complejos constituidos por una sucesin de unidades disacridas (fig. 2-1 0). Se ligan a la protena por intermedio de un tetrasacrido compuesto por una xilosa, dos galactosas y un cido glucurnico (fig. 2-11). La sntesis de los proteoglicanos tiene lugar en la cav idad del retculo endoplasmtico. All, mediante un enlace 0-glicosdico, la xilosa del tetrasacrido se liga a una serina de una protena localizada en la membrana del or<>ano ide. A continuacin, en el extremo del tetrasacrido correspondiente al do glucurnico se incorporan, mediante sendas glicosiltransferasas especficas, los sucestvos rnonosacridos que se alternan en el GAG, de a uno por vez. Aparentemente los grupos sulfato se agregan a los GAG a medida que stos se alargan. Pueden asociarse ms de cien GAG a una sola protena y en ocasiones vanos de estos proteoglicanos se ligan a una molcula de cido hialurnico --que es el GAG de mayor tamao--, Jo cual origina agregados moleculares de enormes proporciones (cap. 6-3) (fig. 6-1 ). Los proteoglicanos pasan a la membrana plasmtica, donde fom1a11 parle del g ltcocltz (cap. 3-8) (fig. 3- 14). O sdc all muchos son lih1'1 11ilo:: ni JI J( dio ~ trae lul;ll', para lo Cual SWI III!III"I 'III HS ddl ' ll I"SI"l lllill ill', VIl IJII> >il ' li ll l ll d1 ill "!llll!lld lli i N i llh"l',l iil< " l (< ' 111> 1 11
Lo~ prote~glica_nos

Antes de ser secretadas, algunas protenas experimentan una serie de modificaciones, imprescindibles para su funcionamiento normal. a ..J Por ejemplo, en las clulas ~ de los islotes del o (.') pncreas se sintetiza la preproinsulina, que es w o la prohormona precursora de la insulina (fig . o -, 7-19). En el RE, al ser removido de su extremo w ..J arnino un segmento de 26 aminocidos -coD.. 2 rrespondiente al pptido seal- , la preproino o sulina se convierte en proinsulina. Esta contiene 81 aminocidos, 51 de los cuales pertenecen a la insulina activa y 30 a un pptido de conex in llamado pptido C. Por medio de vesculas transportadoras, la proinsulina pasa del RE al complej o de Golgi, donde una enzima hidroltica especfica separa la insulina del pptdo C. Luego, mediante otras vesculas transportadoras, ambas molculas son conducidas hacia la membrana plasmtica para su secrecin. En el captulo 16-23 se describir el procesamiento experimentado por otra prohormona, la proopiomelanpcortina (POMC). 7 - 20. En e l sistema de e ndome mbranas las p rotenas son cla sificad as seg n su naturaleza q u mica y su de stino En la seccin 7-13 definimos las distintas vas seguidas por las protenas Juego de su incorporacin al RER . Estas molculas, excepto las que se establecen como residentes permanentes en el RE o en el complejo de Golgi, alcanzan el extremo de salida de este ltimo, donde se clasifican para su ulterior despacho. Segn su naturaleza, tendrn como destino incorporarse a un endosoma o dirigirse a la superficie .celular (fig. 7-1). Los itinerarios seguidos por las protenas dependen de ciertas seales en sus molculas y de receptores especficos en los lugares por donde pasan. La primera seal fue descubierta en las enzimas hidrolticas destinadas a los endosornas. Como se ver en la seccin 7-30, luego de arribar a un sector especfico de la regin .d e salida del complejo de Golgi, estas protenas se transfieren - mediante vescu las transportadoras- a endosomas cargados con sustancias endocitadas en la superficie celular. Por qu las vesculas que transportan enzimas hidrolticas destinadas a los endosornas se fusionan con ellos y no se dirigen a la membrana plasmtica? Tngase en cuenta que en el segundo caso podran ser secretadas hacia el medio extracelular y producir graves consecuencias. La respuesta abarca varios 'p rocesos, pero la causa responsable de la conduccin de las enzimas hnd :1 ,. lugar :u l uadn I'S la u" t'SI"II<"ia d grupos JlliiROSII 6-l'nsfnto ' 11 su s
11 1t t 1 t' ~ ' 11IJ W .

--

Proinsulina

Pptido

Insulina

Fig. 7-19. Formacin de la insulina como producto final del procesamiento de la preproinsulina en el RE y en el complej o de Golgi de las clulas ~ de los islotes del pncreas.

,k.

138

FUNDAMENTOS DE BJOLOGIA CELULAR y MOLECULAR 7. EL SI STEMA DE E NDO MEMBRA NAS

139

\
ENDOS OMA

MEMBRANA PLASMATICA

.--------0. ----- .._---...._./

V. R.

(~~----~n ~ - ---"~ MP
Secrecin constitutiva

Endocitosis

<-----Q-<~---V.R.

7-21 . Vesculas transportadoras surgidas del complejo de Golgi se unen a endosomas En la seccin anterior se seal que ia cara de salida del complejo de Golgi emite vesculas transportadoras destinadas a los endosomas y a la membrana plasmtica (fig. 7 -1). Las vesculas que se unen a los endoso mas integran, dentro del sistema de endomcmbranas, un subsi stema importantsimo para el funcionamiento de la clula, dedicado a la digestin de las sustancias que ingresan por endocitosis. Lo analizaremos a partir de la seccin 7-28. 7-22. Las ves culas t ransportado ras destinadas a la superficie cel u lar descarga n su contenido f uera de la clula mediante un proceso llamado exocitosis Una buena parte de las vescu las transportadoras nacidas en la cara de salida del complejo de Golgi tiene como destino la membrana plasmtica. De acuerdo con lo estudiado en la seccin 7- l, se deduce que las membranas de esta~ vescu las se transfieren a la membrana plasmtica y que las molculas solubles contenidas en sus cavidades salen al exterior (se las llama "molculas de exportacin"). La vescula transportadora expulsa su contenido fuera de la clula por un proceso denominado exocitosis, que consiste en la fu sin de la membrana de la vescula con la membrana plasmtica (fig. 7-2) y la descarga del contenido vesicular en el e xterior (fig. 7-20). En ocasiones la cantidad de membrana transferida a la membrana plasmtica alcanza grandes proporciones. Ello se compensa mediante la formacin simultnea de vescu las transportadoras que operan en sentido contrario, es decir, que nacen de la membrana plasmtica y se transfieren al complejo de Golgi. Estas vesculas de reciclaje se generan por endocitosis, un proceso del que nos ocuparemos en la seccin 7-29 y que es inverso a la exocitosis. Como veremos, la endocitosis se va le de endosomas, que funcionan como verdaderas estaciones de relevo entre la membrana plasmtica y el complejo de Golgi (figs. 7-l y 7-20). Un reciclaje similar ocurre en los terminales de los axones de las neuronas, donde vesculas generadas por endocitosis se incorporan a endosomas con el fin de reciclar la membrana cedida a la membrana plasmtica del terminal axnico durante la exocitosis de las vesculas sinpticas (fig. 7-2 1). Debe sealarse que en este caso los endosomas no actan como intermedia-

- ---- --- --- --- ------.(!)------ - ------------ -~

Rec~P.tOr

---

--- - -- - ----- -----~~~ -----

"""'"" "'"""" ----------

f:\

Seal

fC Inductor

Fig. 7-21. Representacin esquemtica de la exocitosis y de l rec iclaje de me mbranas e n e l tenni na l axnico .

Enzima hidrolitica

MP

Manosa 6-fosfato

Protena de exportacin Protena de exportacin

-( Receptor para la MP Fig. 7-20. Tras lado de las protenas provenientes de l RE a travs de los restantes organoides det sistema de codomembranas, s u c lasi ficacin en el complejo de Golgi y sus lugares de destino. En la prote na (enzimtica) destinada al cndosoma se ilustra tambin la seal (es una manosa ti-fosfato) que determina su il incrari o correcto. Se incluye n los procesos de endoc itosis y de cxocitosis, este lti1110 en sus dos modalidades la secrecin conslitutiva y i..~ secrecin regulada.

V.R. Veslcula recicladora

Estos grupos son las seales que conducen a la~ enzimas hasta la regin del compleJo de Golgi y las colocan en los sectores reservados pade salida _ ra su envl hac1a los endosomas (fig. 7-20). La manosa 6-fosfato se forma apenas la enzima hidroltica -proveniente del RE- amba a la regin de entrada del complejo de Golgi (fig. 7-18). Es generada por la accin de dos enzimas, la N-acetilglucosamina fosfotran sferasa Y la N-acetilglucosamina g licosidasa. La pri mera agrega una N-acetilgl ucosam ina fosfato al C6' de una de las manosas de los oligosacridos de la enz1ma hidroltica (como vemos, sta es una gl icoprotena). La segu nda remueve a la N-acetilglucosamina pero no al fosfato, que queda retenido en el C6' de la manosa. Conviene agregar que durante el procesamiento de las enztmas en el complejo de Golgi las manosas fosforiladas nunca son removidas. Una vez arribada la enzima hidro ltica al lugar correcto de la reain de salida del complejo de Golgi, se liga -a travs de la manosa 6-fosf~to- a un receptor especfico presente en la membrana del organoide, que corresponde a ese lugar. Luego la enzima es despachada hacia el endosoma mediante el mecanismo selectivo que se analizar en la seccin 7-40. La importancia del arribo de las enzimas hidrolticas a los Jugares correctos del complejo de Golgi se confirma por la existencia de una rara enfermedad lisosm~ca que se produce por la falla de dicha funcin. As, en la enfermedad de celulas 1 (por tnclusin), a causa de trastornos genticos los fibroblastos no poseen N-acetilglucosamina fosfotransferasa, de modo que no se forman manosas 6-fosfato en las enzi mas hidrolticas destinadas a Jos endesomas. Por consecuencia, las vesculas que transportan a esas enzimas se dirigen hacia la membrana plasmtica y se secretan en el medio extracelular. La falta de enzimas en los endosomas impide la digestin de las sustancias endoctadas, las cuaJes pasan al citosol y pueden acumularse como inclusiones (cap. 4-3). El hallazgo de la manosa 6-fosfato y de su receptor llt:v al d1 s,uhri mie nto de otras seales in volucradas en l<t distribuci6n y lu 1:u1:1i ir 111 1u 1 1 el las prol dn~ls a tr:1 v s del sist<nm dt < 'llcl<>lllt'lllhr:1111s, S!' 1'" ' 1111 1 11 11 1 111111 1 11 1

Tabla 7-1. Algunas seales involucradas en el t ransporte de protenas por el sistema de endomembranas
Seal
Transporte
Del RE al complejo de Golgi y retomo al RE Del complejo de Golgi a la membrana plasmtica (secrecin). Del complejo de Golgi a los endosomas (enzimas hidrolticas) De la membrana plasmtica a los endosomas (endocitosis)

K.DEL

KKXX
GPI
Manosa 6-fosfato Varias Le Y

YQRL
NI' XY

11, .~ uiP .I'IPHIIII'II: F. ftrulntdnl 'u nh 11. A 11<~111 1, 1, h-uc. inu: N , nM piu:w iuu; /', p1nlnm: (l, Jl ni!IIIIIIIH;
/( lll j1 UIIIIH,) 111 11'111111, \ ,lll d tlllt l lll lllllt 111:, 1 ,/ ' /, h cno,din, jluliluui'IIUI

l ll hl ll 1 1

7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBR AN AS

141

140

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

rios entre la membrana plasmtica y el complejo de Golgi, ya que ste se halla en el cuerpo de la neurona, muy lejos del terminal axnico. Adems de recibir a las vesculas recicladoras, los endosomas de las terminaciones nerviosas generan las vesculas sinpticas que se cargan de neurotransmisores, cuya exocitosis completa el ciclo. 7-23. La clu la produce dos clases de secreciones, una constitutiva y otra regu lad a El proceso que provoca la descarga del contenido de las vesculas transportadoras en el medio ex tracelular se de nomi na secrecin. Esta puede ser constitutiva o regulada (fig. 7-20) En la secrecin constitutiva las molculas se secretan en forma automtica, confo rme el complejo de Golgi emite las vesculas que las transportan. En cambio, en la secrecin regulada las molculas son retenidas en el c itoplasma - dentro de sus respectivas vesculas transportadoras- hasta la llegada de una sustancia inductora u otra seal que orde ne su liberacin. Esta secrecin de molculas "por encargo" supone que la clula las descarga sbilamente, en el momento en que son de mandadas. Las vesculas transportadoras que interv ienen en las secreciones reguladas se denominan vesculas

7-2 7. En a lguna s cl u la s el REL cu mple fun ciones especiales Adems de las actividades mencionadas hasta aqu -comunes a todas las clulas- , en algunos tipos celulares el REL cumple funciones adicionales, como las siguientes: Sntesis de esteroides. En clulas pertenecientes a las gnadas y a las glndulas suprarrenales, el REL contiene varias enzimas que intervienen en la sntesis de esteroides. Este tema es ampliado en el captulo 8-22. Sntesis de lipoprotenas. En la sangre Jos Ipidos circulan unidos a protenas, es decir, son parte de lipoprotenas. Ambas molculas se ligan en el REL de los hepatocitos, donde se hallan las enzimas que catalizan esa unin. Desfosforilacin de la glucosa 6-fosfato. La membrana del REL de los hepatocitos posee la enzima glucosa 6-fosfatasa, que extrae el fosfato de la glucosa 6-fosfato y la convierte en glucosa. A diferencia de la glucosa 6-fosfato, la glucosa puede abandonar la clula y pasar a la circulacin sangunea para llegar a los tej idos, donde se la utiliza como fuente de energa. Debe sealarse que la glucosa 6-fosfato se forma a partir de la glucosa !-fosfato o de la glucosa, y que la primera surge de la degradacin del glucgeno depositado en el citosol en forma de inclusiones (caps. 4-3 y 11-15). Destoxiticacin. En los hepatocitos el REL contiene grupos de e nzimas que intervienen en la neutralizacin de varias sustancias txicas para la clula, algunas deri vadas de su metabolismo normal y otras incorporadas desde el exterior. As, la administracin de barbitricos y de otros txicos produce un aumento de las enzimas de una familia de citocromos presentes en el REL -los citocromos P450-, los cuales, junto con otras enzimas, con vierten a las sustancias txicas en molculas hidrosolubles que salen de la clula con facilidad.

secretoras o grnulos de secrecin.

7-24. Algunos po li pptidos se secretan po r un mecanismo distinto del a nterio r Como excepcin a la regla, existen polipptidos pequeos fabricados en ribosomas libres que son secretados por un mecanismo ajeno a la exocitosis. Cruzan la membrana plasmtica a travs de tneles formados por protenas transportadoras de la familia ABC (cap. 3-26), presentes normalmente en esta membrana. En la seccin 7-14 analizamos un pasaje similar a travs de la membrana del RE. 7-25. La membrana de los a utofagosomas es provista por e l REL Como se ver en la seccin 7-35, los organoides envejecidos se eliminan de la clula medi ante unos organoides especiales llamados autofagosomas, que generan el fenmeno biolgico llamado autofagia (fig. 7-30). La figura 7-30 muestra que durante su desarrollo los autofagosomas se envuelven con una membrana que les apo11a el REL. 7 - 26. El REL es e l principa l depsito de Ca 2 de la c lu la La concentracin de Ca2 en el citosol es muy inferior a la existente en la cavidad del retculo endoplasmtico y en el lquido extracelular. Las diferencias se deben a la actividad de sendas bombas de Ca 2 localizadas en la membrana del REL y en la membrana plasmtica (cap. 3-23). Ambas remueven el Ca2 de l citosol, que pasa al REL o al lquido extracelular. El traslado del ion en sentido inverso es pasivo, pues se produce a travs de canales inicos. En las clulas en general los canales de Ca2 se abren mediante un ligando, el IP3 (cap. 11-18). En cambio, eo las clulas musculares estriadas los canales de Ca2 del retculo sarcoplasmtico (una forma especializada de REL) son dependientes de voltaje, ya que se abren cuando se modifica el poi uc ial d membrana. Jo:u tl apftulo 5-33 sc1 aJarnos <jlll' tl :llllll nto d ! ( al ,., J' ,.,,,.,J d, 111 t T IIIIIl Jllllllt ' llinr lkvn ll la 1111it~HI dt l ,,,, t'nll lu trnpurd11 :1 e' , ,, , 11 11 l t h ll lt 1 dt 111 1 111 t'tlllll . u t 11111

ENDOSO MAS
7-28. El e ndosoma posee una bomba de H+ e n su membf'Jna Los endosomas (del griego ndon, dentro, y soma, cuerpo) son organoides localizados funcionalmente entre el complejo de Golgi y la membrana plasmtica (fig. 7-1 ). Sus formas y dimensiones son variadas, aunque por lo general constituyen vesculas o cisternas rel ativamente pequeas. La membrana del endosoma posee una bomba protnica (cap. 3-24) que cuando se activa transporta H del citosol hacia el interior del organoide, cuyo pH desciende a 6,0 (fig. 7-22). En el capitulo 4-1 se vio que el pH citoslico es de 7,2. Antes de analizar las funciones de los endosomas conviene describir el proceso de endocitosis. 7-29. Existen dos formas de endocitosis, llamadas pinocitosis y fagocitosis En el captulo 3-10 estudiamos la permeabilidad de las membranas celulares y vimos que los solutos atraviesan la membrana plasmtica por transporte pasivo o activo e ingresan en la clula. Las macromolculas y las partculas entran mediante un mecanismo completamente distinto, denominado endocitosis (fig. 7-22). De acuerdo con el tamao y las propiedades fsicas del material que se va a in;mporar, este mecanismo es llamado pinocitosis o fagoc itosis (fi g. 7 2 ). 1.HillnudtusiN(dtl 1 "" 1" ,,,,,,.ll, lwhcr) ompr mk t:l ingrl'Stl de lfquido, ,
iunln t 'IJII l1 /l lll lh ' llllllull t ul ll

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142

FU NDAMENTOS DE B!OLOGfA CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEM A DE ENDOMEMBRANAS

143

ENDOSOMA

________,..
------~

VR.

J
Endocitosis

PINOCITOSIS INESPECIFICA

u
Vesicula pinocittica
~

"'1-------~ <~------ =7,2

----Y-Y4-PINOCITOSIS REGULADA

pH

Vesicula pinocittica

Bomba de H FAGOCITOSIS

Fig. 7-22. Esquema que. iluslra el proceso de cnJocitosis y

la conversin del endosorna

MEMBRANA PLASMATICA - (Receptor Material incorporado Fagosoma

c.n lisosoma.

porque porciones circunscritas del lquido que se halla en contacto con la superficie externa de la clula son atrapadas mediante invaginaciones de la mem brana plasmtica, lo cual da lugar a fositas y finalmente a vesculas que se liberan en el citosol. El proceso de pinocitosis puede demostrarse experimentalmente mediante el uso de una solucin de protenas marcadas con colorantes fluorescentes; a veces es tan rpido que parec iera que la solucin es "bebida" por la cl ula. Segn la calidad de la sustancia que habr de incorporarse a la clula, la pinocitosis puede ser inespec fi ca o regulada (fig. 7-23). En la pinocitosis inespecfica las s ustancias ingresan automticamente, lo cual ocurre en todos los tipos celu lares. En cambio, e n la pinocitosis regulada las sustancias interactan con receptores especficos locali zados en la membrana plasmtica y ello desencadena la formacin de las vescu las pinocitticas. Debido a la selectividad de este mecanismo, una sustancia puede ingresar en algunas clulas pero no en otras, de acuerdo con los receptores presentes en sus membranas plasmticas. La fagocitosis (del griego pflagen, comer) tiene lugar en unos pocos tipos celulares, particularmen te en los macrfagos y en los leucocitos neutrti los. Segn las circunstancias, constituye un medio de defensa o de limpieza, capaz de eliminar parsitos pequeos, bacterias, clulas perjudiciales, daadas o muertas, restos de clulas y todo tipo de partculas extraas al orgamsmo. Como vemos, la fagocitosis permite la incorporacin de partculas relat vamente grandes y estructuradas. Una vez que el material se fija sobre la superficie externa de la clula, la membrana plasmtica emite prolongaciones envolventes que lo rodean hasta dejarlo englobado en el interior del citoplasma, lo cua l forma una vescula mucho ms grande que la pinocittica, llamada fagosomu (i'ig. 7 2. ). l'ar:1poder ser fagocitado, clnl:ll cri;d d h 'OIIi <.: ll<:l o :u lq11 ili , ,u' '''" s i ll dt \ tI H' SOII J'n,.' O IIOl 'ida s p or l't '(' l'plnt\'S fc H'a fi t.: Hiil~ t'll j ltl tllhl tllll t pl.t ,
III II IH 1 tft
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cadas" por anticuerpos llamados opsoninas (de l griego pson, mnnjar), provistos por el sistema inmunitario.

Fig. 7-23. Esquemas que ilustran cmo se incorporan maleri~lcs en la clula mediante distintas formas de endocitosis.

7- 30. Se cree que los endosomas se convierten en lisosomas

El endosoma ejerce sus funcio nes de una manera singular. Tanto recibe el material ingresado por endocitosis - trado por vescu las pinocitticas o por fagosomas- como incorpora enzimas hidrolticas tradas por vesculas provenientes del complejo de Golgi (figs. 7-20 y 7-22). En el primer caso, el endosoma recibe tambin porciones de membrana plasmtica y receptores (los ltimos, si la endocitosis es regulada). Ambos son devueltos por vesculas recicladoras, que al arribar a la membrana plasmtica se integran a ella mediante un p roceso semejante a la exocitosis (fig. 7-22). Una vez en la membrana plasmtica. los receptores se pueden volver a utilizar. Respecto de las enzimas hidrolticas, debe recordarse que se hallaban unidas a la membrana del complej o de Golgi por medio del receptor de la manosa 6-fosfato. Como muestra la figura 7-20, esa unin se mantiene en las vesculas que transportan las enzimas desde el complejo ele Golgi hasta e l endosoma, donde tambin persiste. No obstante, en el endosoma las enzimas se mantienen unidas a la membrana slo transitoriamente, ya que se desprenden del receptor de la manosa 6-fosfato cuando el pH del organoide baja a 6,0, al activarse su bomba protnica (seccin 7-28) (fig. 7-22). Adems, la manosa 6-fosfato pierde el fosfato por accin de una fosfatasa. Aqu tambin se recic l.an las membranas, que junto con los receptores de la manosa 6-fosfato regresan a la regin de salida del complejo de Golgi (fig. 7-20). Este reciclaje hace posible la reutilizacin de los receptores. En sntesis, el endosoma es el lugar de la clula donde convergen tanto los materiales que van a ser digeridos -ingresados por endocitosis- como las enz imas hidrolticas encargadas ele hacerlo (figs. 7-20 y 7-22). Se cree que la ('OIIIhin:J i6n de 'slos le iiH'llills l'llnvicrlc al cnclosoma en li sow11 , d<.: cuyo
!l ll i d b. i ~.
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144

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

145

Pinocitosis

1
\

..,
\
\

;
1
J

@
\

Vescula recicladora

A continuacin el endosoma primario genera dos clases de vesculas transportadoras, una recicladora -que retorna a la membrana plasmtica- y otra que se dirige al endosoma secundario, al que le entrega el material endocitado (fig. 7-24). Para algunos autores existe una sola clase de endosoma que reside, alternadamente, en las cercanas de la membrana plasmtica, donde adquiere el material endocitado, y en las cercanas del complejo de Golgi, donde recibe las enzimas hidrolticas. Esta organizacin requiere que el endesoma realice incesantes traslados de ida y vuelta entre ambos puntos.

CAVIDAD DEL ORGANO

1 1

1
1

G
~
\
\

'
\

\
SANGRE l lnmunoglobulina A (lgA)

7-32. En I<J transcitosis los endosomas cumplen funciones distintas de las descritas En algunos epitelios se produce un proceso llamado transcitosis, mediante el cual materiales ingresados por endocitosis por una cara de la clula atraviesan el citoplasma y salen por exocitosis por la cara opuesta. El cruce a travs del citoplasma lo realizan dentro de la vescula formada durante la endocitosis, aunque en algunos casos emplean un endosoma como estacin de relevo (figs. 7-25 a 7-28). En el captulo 6- 11 se dijo que en los tejidos epiteliales las uniories.oclusivas imponen diferencias en la composicin de la membrana plasmtica en las regiones apical y basolateral de las clulas. Tales diferencias parecen ser necesarias para el proceso de transcitosis. El ejemplo ms difundido de transcitosis corresponde a las clulas endote!iales de Jos capilares sanguneos, ya que son atravesadas por las macromo!cu!as que pasan de la sangre a los tejidos (fig. 7-25). Otros ejemPlos de transcitosis se registran en las clulas secretorias de las glndulas lagrimales y en las mucosas de algunos rganos de los tractos digestivo, respiratorio y urinario (fig. 7-26). A tr<Jvs de ellas, ciertos anticuerpos -las inmunoglobulinas A (lgA)- pasan del tejido conectivo a la luz de los rganos citados, donde ejercen sus funciones defensivas. Durante la lactancia se produce un fenmeno semejante en las clulas secretorias de la glndula mamaria. Aqu las inmunoglobulinas A se transfieren hacia la luz glandular, es decir, a la leche (fig. 7-27). A diferencia de las restantes protenas de la leche, cuando estos anticuerpos arriban al intestino del recin nacido no son degradados inmediatamente para su absorcin. De este modo el lactante -<:u yo sistema inmunolgico an no produce suficientes anticuerpos propios- puede proveerse de ellos para su defensa. Este fenmeno ha sido observado en diversos roedores y rumiantes. En la figura 7-28 se muestra el itinerario seguido por los anticuerpos luego de ingresar en la clula intestinal por endocitosis: se incorporan transitoriamente 11 un ndosmna pri tllario y post riormcni ahandoFiJ~. 7~27. 'l 'run. -:dlil:-ii:l d(.' 111111 l1 t 't lulu po1 t:w.ol'itor.i rl , ( '111111l :1,: Vt ', t'll ,.,. ,,,,s t'il lio II IIUIIl ll i o ,

Fig. 7-26. Transcitosis de la lgA en una clula epitelial secretoria.

l<'ig. 7-24. Dinmica morrofuncional de los endosomas primario y secundario.

~ del complejo de Golgi

MP

Enzima hidroltica proveniente

7-31. Existen dos clases de endosomas, los primarios y los secundarios Es preciso advertir que el anlisis morfofuncional realizado hasta aqu sobre los endosomas elude un paso, premeditadamente excluido para facilitar la descripcin. Es que existen dos clases de endosomas, los primarios (o tempranos) y los secundarios (o tardos) (fig. 7-24). Los endosomas primarios se localizan cerca de la membrana plasmtica Y los endosomas secundarios cerca del complejo de Golgi. En consecuencia, existe un flujo unidireccional de vesculas transportadoras para transferir el material endocitado desde la membrana plasmtica al endosoma primario y desde ste al endosoma secundario. Debe sealarse que esta organizacin morfofuncional corresponde a las vesculas pinocitticas, ya que el fagosoma --en los macrfagos y en los leucocitos neutrfilos- prescinde del endosoma primario y se fusiona directamente con un endosoma secundario, que al recibir enzimas hidrolticas del complejo de Golgi se convierte en un lisosoma de gran tamao llamado fagolisosoma. Adems de servir como estacin de relevo para la canalizacin del material endocitado, el endosoma primario -a travs de las vesculas recicladoras analizadas al comienzo de la seccin anterior- devuelve a la membrana plasmtica las porciones de membrana y los receptores trados por las vesculas pinocitticas. Dado que en el endosoma primario los receptores se hallan unidos al material endocitado, antes del reciclaje deben separarse de l. La separacin se produce a consecuencia del descenso del pH en el endosoma. que t'tllpit;,a 1 1 '11~ 7-2!\. 'l'runsdto.-:i. 'l t'/1 lnt {,ln ln ndHh\llnl clt-1 <.'11 .. a bajm Cllilt1do se a ti va l:t homha protnultll do 1 11 1111 11 1 p l l 11 1 Nllllg llfllt' tl, hntua dl'l ot::uuoidt,

In lpA

t'll 111m r~ l nlu

tltl tpllt

14(,

FUN DAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR y MOLEC ULAR

7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

147

LUZ DEL INTESTINO

Fl~. 7-28. Transcirosis de la

IrA en una clula de l epitelio llllcstinal.

SANGRE

+
1

sos el endosoma primario constituye una estacin de relevo para el transporte transcelular, ajena a la degradacin de sustancias. Debe sefialarse que en la especie humana los anticuerpos que provee la leche materna aparentemente no se absorben en el intestino y por lo tanto no in gresan en el organismo del lactante. Sus funciones defensivas estaran confinadas a la luz intestinal, donde permanecen un tiempo antes de ser degradados por las enzimas hidrolticas encargadas de di gerirlos. Otro ejemplo de transcitosis se halla en la placenta, cuyas clulas son atravesadas por anticuerpos de la familia de las inmunoglobulinas G. Al pasar de la sangre materna a la fetal, estos anticuerpos le confieren inmunidad pasiva al feto -y por un tiempo al recin nacido- contra varias enfermedades infecciosas.

Fig. 7-29. Micrografa electrnica que muestra dos liso-

somas (L), mitocond rias (M ), ribosomas (R) y parte del ncleo (N) . 60.000x. (Cort~sa de F Miller.)

USOSO MAS
7-33. Los lisosomas son organoides polimorfos

Todas las clulas contienen lisosom as (del griego isis, di solucin, y soma, cuerpo), que son los organoides que digieren a los materiales incorporados por endocitosis. Adems, mediante un proceso denominado autofagia (que se analizar en la seccin 7-35) tambin digie ren elementos de la propia clula. Como se seal, se cree que los lisosomas se forman a partir de endosomas que recibieron dos clases de vesculas transportadoras, unas con material endocitado y otras con enzimas hidrolticas (figs. 7-20 y 7-22). La caracterstica ms saliente de los Jisosomas es su polimorfismo, no slo porque poseen aspectos y tamaos dismiles sino tambin por la irregulaIidad de sus componentes (figs. 1-11 y 7-29). La causa del polimorfismo es doble; por un lado se debe a la diversidad del material endocitado y por el otro al hecho de que cada clase de lisosoma posee una combinacin singular de enzimas hidrolticas, de las que existen alrededor de 50 diferentes. Las enzimas lisosrnicas se activan a pH 5,0. Este grado de acidificacin se alcanza gracias a una bomba ele H presente en la membrana del lisosoma, heredada de la membrana del endosoma secundario (cap. 3-2 y se iu 7 2X) ( l'i . 7-22).
1 :1 ltH' IIIhr;u; ti 1 lisosoma st
1 11 111 \ l l't

glicoprotenas (cap. 3-8). Por otro lado, si la membrana del lisosoma se rompiera, las enzimas escapadas no afectaran a los dems componentes celulares debido a que se inacti varan al tomar contacto con el ciloso l, cuyo pH es de 7,2. En el interior de los lisosomas las protenas y los hidratos de carbono endocitaclos son digeridos a dipptidos y monosacriclos, respectivamente. Estos y otros productos de degradacin atravi esan la membrana lisosmica y pasan al citosol, do nde terminan de cligerirse o se aprovechan para construir nuevas molculas. Por su parte, c ulminadas sus funciones, las enzimas lisosmicas tambin pasan al citosol, donde son degradadas por proteasomas (cap. 4-6). Finalmente, libres de las enzimas y del material digerido, los lisosomas se reconvertiran en endosomas. Algunas sustancias endocitadas no termi nan de digerirse y permanecen en los lisosomas, que por ello adquieren el nombre de cuerpos residuales. En ocasiones las sustancias no digeridas son expulsadas de la clula mediante un proceso comparable a la exocitosis. Si esto no ocune, con el tiempo se convierten en pigmentos de desgaste depositados en el citosol (cap. 4-3).
7- 34. Los lisosomas tambin digieren protenas no endoct adas

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1

La clula cuenta con dos dispositivos para degradar a las protenas fabricadas en su propio citoplasma, es decir, no endocitaclas. Uno acta en el citosol e involucra a la ubiquitina y a los proteasomas (cap. 4-6). El otro comprende a los lisosomas, que incorporan protenas citoslicas destinadas a desaparecer y las digieren en su cavidad. Para ello los lisosomas cuentan con receptores membranosos especficos que reconocen a las protenas, las cualc.:s ingresan en e l organo ide por un lranslocn. Este se valdra ele dos chapem uas du la l':nnil ia J.sp71l (ap. 1] 'i). 111 1a cil os61it:a. (jll(' d sc.:mo llarfa :1 las
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148

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

149

RE

RETICULO ENDOPLASMATICO

\::::.J complejo de Golgi

1

~
1

Proveniente del

1 1

. .---0-c-V .R.

--------------- 0-------------
......___Sea....______
MEMBRANA PLASMATI CA

J Cubierta de COPI
Autofagosoma

Cubierta de COPII

: ) Cubierta de clatrina

J Cubierta no conocida
Fig. 7-31. Esquema que ilustra la participacin de las cubiertas de COP y de clatrina en la formacin de las vesculas surgidas de la membrana plasmtica (por endocitosis) y de los organoides del sistema de endomembranas.

Fig. 7-30. Componentes celulares que participan en la formacin del autofagosoma y del fagolisosoma.

7-35. La autofagia es esencial para el fu ncionamiento de la clu la

La clula elimina organoides envejecidos por un mecanismo denomi nado autofagia, que incluye la formacin de autofagosomas. En la seccin 7-25 se mencion que los autofagosomas se forman con la ayuda del REL. Este aporta una porcin de membrana para envolver al organoide obsoleto y formar el autofagosoma (fig. 7-30). A continuacin, el autofagosoma sigue el mismo camino que el fagosoma, es decir, se fusiona con un endosoma secundario, el cual recibe enzimas hidroLticas del complejo de Golgi y se convierte en fagolisosoma . El proceso culmina con la degradacin del organoide por parte de esas enzimas. En las neuronas, en los hepatocitos y en las clulas musculares cardacas, los autofagosomas no terminan de digerir algunos componentes de los organoides y se convierten en cuerpos residuales. Con el avance de la edad estos cuerpos se acumulan en el citosol como pigmentos de desgaste (cap. 4-3). La autofagia se incrementa en ciertas condiciones. Por ejemplo, ante un ayuno prolongado aparecen numerosos autofagosomas en los hepatocitos. Tienen por objeto convertir a componentes de la clula en alimento para prolongar la supervivencia del organismo.
7- 36. Existen enfermedades producidas por alteraciones lisosmicas

nasa, que es la enzima que hidro liza al esfingofosfolpido en ceramida y fosforilcolina. En la seccin 7-20 estudiamos el mecanismo que lleva a la acumulacin de molculas en la enfermedad de clulas l, producida por un defecto en el receptor de la manosa 6-fosfato, no en una enzima lisosmica.

VESICULAS TRANSPORTADORAS
7-37. Durante su formacin, las vescu las transportadoras se envuelven con una cubierta proteica

Diversas enfermedades congnitas se producen por mutaciones de los genes que codifican a las enzimas lisosmicas. Se caracterizan por la acumulacin intracelular de las sustancias que esas enzimas degradan. Por ejemplo, en la enfermedad de Tay-Sachs algunas neuronas aparecen repletas de un ganglisido. El defecto se debe a la ausencia de la enzima hexosaminidasa A, que cataliza la hidrlisis parcial del glicolpido. Por consecuencia, ste se acumula en las neuronas, lo que lleva a graves alteraciones neurolgicas. La enfennedad de Gaucher se caracteriza por la acumulacin de glucocerebrsido en varios tipos celulares debido a la ausencia de la glicosidasa que cata liza la hidrlisis del glicolpido en ceramida y glucosa. 1.11 l'l!fermeliad de Niema1111-Pick muc.:slla una :wunud1 wiou .,. '"illttt udo li11 1 1' 11 varios lipos ~lulu11 ~ 11 ,omll'\'llt'III'n d In lnlln olt ' liliJ'"" tl' 11

Con excepcin de los fagosomas, que suelen ser mucho ms grandes, las vesculas transportadoras tienen un dimetro que flucta entre los 50 y los 250 nm. La medida mayor corresponde a las vesculas secretorias. La figura 7-31 muestra que las vesculas transportadoras se originan en la membrana plasmtica y en las membranas de los organoides del sistema de endomembranas. Lo hacen con el concurso de una cubierta proteica de la que existen varias clases, aunque de algunas no fueron descubiertas todava sus protenas. Las ms estudiadas se conocen con los nombres de cubierta de COP y cubierta de clatrina. La cubierta de COP (por coat protein) se forma mediante la asociacin ordenada de mltiples unidades proteicas. Existen dos clases de cubiertas de COP, las cuales se diferencian no slo porque se componen de unidades proteicas distintas -denominadas COPI y COPII-, sino tambin porque generan vesculas en lugares diferentes del sistema de endomembranas. As, la cubierta de COPII genera las vesculas que se forman en el RE y se dirigen a la cara de entrada del complejo de Golgi, mientras que la cubierta de COPI genera tanto las vesculas que se forman en la cara de entrada del complejo de Golgi y retornan al RE como las que interconectan a las cisternas del complejo de Golgi. Por su parte, la cubierta de clatrina_.(dellatn clathrun o del griego kleter, enrejado de varillas) resulta de l~sociacin de mltiples unidades proteicas llamadas trisqueliones (del griego skelos, pierna). Genera las vesculas que surgen de la membrana plasmtica durante.: la 'tiCiocilosis y las que s I'otuuuo L'JI la anod" salida dtl C'onoplcjo el<' ( :ol:i y ~~ dit i:n u los ndo:M 111. 1fl y 11 1 11 nw rnhr nnu pl!t 'l lll h lt '!l da'u unh~ l1 :lt't' H'\ '"'' H '~'n l uda

150

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

1~ 1

CAVIDAD DEL ORGANOIDE O LADO EXTRACELULAR

o
CITOSOL Depsito de unidades COP o de trisqueliones

Fig. 7-32. Evolucin seguida por la membrana durance la fom1acin de una vescula. Se ilustra tambin la dinmica de las unidades COP y de los trisque! iones.

A pesar de las numerosas investigaciones realizadas, no se conoce la composicin de las cubiertas proteicas de las vesculas que se forman en la cara de salida del complejo de Golgi y se dirigen a la membrana plasmtica durante la secrecin constitutiva, ni la de las vesculas que nacen de los endosomas. La primera cubierta de COPen ser revelada fue la de las vesculas que interconectan a las cisternas del complejo de Golgi, compuesta por unidades COPL Se denomin wcierta de coatmero (por coar protomer) y, puesto que se crey que todas las cubiertas que faltaba descubrir eran iguales a ella, se les dio ese nombre a todas las que no eran de clatrina, la cual haba sido identificada mucho tiempo antes. A partir del descubrimiento de las unidades COPII, retiene el nombre de cubierta de coatmero slo la que se compone de unidades COPI. Las vesculas transportadoras comienzan a formarse cuando las unidades proteicas de la futura cubierta se apoyan sobre el lado citoslico de un rea circunscrita de una membrana celular plana, a la que le proveen la fuerza mecnica para que se curve hacia el citosoL Como muestra la figura 7-32, el progreso de la curvatura desarrolla una fosita, que finalmente se desprende de la membrana convertida en vescula. En el caso de las vesculas cubiertas de clatrina, el desprendimiento se produce cuando varias unidades de la protena motora dinamina rodean el cuello de las fositas y lo estrangulan hasta seccionarlo (cap. 5-8). Estas vesculas tienen forma esfrica, a diferencia de las vesculas cubiertas de COP, que en algunos Jugares suelen ser poliedros irregulares y en otros poseen una apariencia tubular.

Fig. 7-33. Unin de la unidad COP a la membrana. Vase cmo participan la ARF y el receptor del material que va a ser transportado.
CAVIDAD DEL ORGANOIDE

7-38. Las cubiertas de COP se construyen con el concurso de las unidades proteicas COPI o COPII
En la seccin anterior se dijo que existen dos tipos de cubiertas de COP y que se construyen mediante las cubiertas compuestas por las unidades proteicas COPI y COPII. Debe agregarse que cada unidad COPI se compone de siete subMolcula a transportar unidades proteicas, identificadas con las letras griegas a, ~. W, y, 8, E y 1;,. En cambio, cada unidad COPII consta de dos subunidades proteicas heterodimricas, las cuales se identifican con las siglas Sec 13/Scc3 1 y Scc23/Sec24 (por stvrn lrrmslllt'lllhmllt' pmtl'in t'll/llfl/1'1'). En la I'i,ura '/ 1'} sr oh srrv:1 '1111' In:. otttid:ulr-:: ( '()1'1 v ('l ll'll t.r
1111 1/.ltll t ' ll 1 11 11 1 l l l i lf lt " , 1 IHI H 1111 11

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111

membrana y la curvan. Cuando se conectan con la mem1 brana lo hacen a travs de una protena llamada ARF (por adenosine diphosphate ribosylation factor) y del dominio citoslico del receptor de la molcula que va a ser transportada por la vescula en formacin (fig. 7-33). Debe agregarse que la COPI y la COPII se ligan a protenas ARF especficas denominadas ARFl y Sarl (por simil ARF) , respectivamente. Las ARF y las COP desempean funciones complementarias, ya que una vez que las ARF determinan en qu Jugar debe formarse la vescula transportadora, reclutan a las unidades COPI o COPII y stas se asocian y componen la cubierta proteica que provoca la curvatura de la membrana. El proceso por el cual las unidades COPI o COPII se unen a la membrana de la vescula en formacin es el siguiente: 1) en su estancia libre en el citosollas ARF contienen un GDP y un cido graso oculto en sus molculas; 2) una protena reguladora llamada GEF (por guaninenucleolide exchange factor) hace que el GDP de las ARF se intercambie por un GTP; 3) este cambio torna visible al cido graso de las ARF y lo inserta en la membrana, por lo que las ARF quedan unidas a ella; 4) las ARF reclutan a las COP que se hallan en el citosol y las colocan junto a la membrana; 5) las COP se unen a la membrana por medio de las ARF y del dominio citoslico del receptor citado en el prrafo anterior. Debido a que ese dominio es siempre el mismo en todos Jos receptores, las COP se unen a l inespecficamente, a diferencia del dominio no citoslico, que vara y se une de manera especfica a la molcula que va a ser transportada. Si bien se sabe que en la formacin de una vescula transportadora intervienen mltiples unidades COP, se ignora cmo se ensamblan entre s para curvar a la membrana. Despus que la vescula se desprende de la membrana, las ARF y las COP se desligan de sta y quedan libres en el citosol, donde pueden ser reutilizadas (fig. 7-32). La salida de las ARF se debe a que hidrolizan el GTP contenido en sus molculas, lo cual hace replegar el cido graso que las une a la membrana. Las ARF hidrolizan el GTP -a GDP y P- al ser estimuladas por una protena reguladora llamada GAP (por GTPase activating protein). Surge de Jo mencionado que las ARF poseen, alternadamente, un GTP o un GDP. Cuando poseen un GTP se activan y ello las une a una membrana. En cambio, cuando poseen un GDP se inactivan, se separan de la membrana y quedan libres en el citosol. Dado que el GDP deriva de la hidrlisis del GTP que se halla en las propias ARF y a que stas catalizan la reaccin, se las clasifica como GTPasas. Debe advertirse que en la clula existen - ad rn :~s d' las ARF- otras GTPasas que funcionan asociadas a las pmtd tt:1 N 11'1',1tl:ulor:1s ( ;r.F y GAP. Rt'L' II'I'llt'S(' l]ll l' la (;Jr;Jo' IIIC I'C':IIIIhia el (;111 ' 1"" 1111 t l' l'l' V '1'11 ' 1:1 <:AI' rsli rrtttltt lu hirl rolis i.<. rld 1 ;'J'I' ttl ;1ll'' y 1'. l .lt', 1 1 11 ""' '' 1' "1'"1"111 d1 IIPo 1111111'1 1111/1 ( :1' 1 y ( :\(' ,. "" '''' ' "' 1' 11 1 1 1 11 11111 11 '1

Fig. 7-34. Secuencia " " nrl crografas electrnic;as q111' muestra el proceso d forrn 1 cin de una vescula de c.:ntln

citosis en la rnemhnmn pllw

mtica (sta se marc ~:on le rritina). 130.000x. (C'urt<.ll de M. S. Brctchcr.)

152

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEMA DE EN DOMEMBRANAS

J. ~

Las otras GTPasas de esta familia son las protenas Rho (cap. 5-24), Rae (cap. 5-26), Cdc42 (cap. 5-26), Rab (seccin 7-40), Ras (cap. 11-12) y Ran (cap. 12-4). Al igual que las ARF, se activan cuando poseen un GTP y se inactivan cuando lo hidrolizan a GDP y P.
7-39. Las cubiertas de clatrina se construyn a partir de trisqueliones

Fig. 7-35. Esquema tridimensional de una vescula cubierta con clatrina. Se resalta un trisquelin, compuesto por seis polipptidos (tres grandes y tres pequeos).

Fig. 7-36. Izquierda. Micrografa electrnica de numerosas cubiertas de clalrina aisladas y coloreadas negativamente. 67 .500x. (Cottesa de B. M. F. Pearse.) Derecha. Micrografas electrnicas de fragmentos aislados de clatrina coloreados negativa mente. Se observa un campo general y tres de sus partes a mayor aumento. 105.000x y 195.000x, respectivamente. (Cortesa de R. A. Crowther y B. M. F. Pearse.)

La serie de micrografas electrnicas agrupadas en la figura 7-34 muestran cmo la cubierta de clatrina forma una vescula transportadora. En la seccin 7-37 se dijo que la cubierta de clatrioa se compone de mltiples unidades proteicas denominadas trisqueliones. Se calcula que una vescula de 200 o m de dimetro contiene alrededor de 1.000 de esas unidades. El trisquelin est integrado por tres cadenas polipeptdicas grandes y tres pequeas, cuyo peso es de 180 kDa y de 35 kDa, respectivamente. Como muestra la figura 7-35, esas cadenas dan lugar a tres brazos flexibles de 44,5 nm de largo, doblados hacia un mismo lado. Para generar una vescula, los trisqueliones se colocan sobre un rea circunscrita de la cara citoslica de la membrana y se ensamblan entre s hasta formar un poliedro con aspecto de canasta. La pared del poliedro est comos punpuesta por hexgonos y pentgonos, cuyos vrtices corresponden a L tos de convergencia de los brazos de los trisqueliones. En cambio, sus aristas se forman al adosarse dos o ms brazos de otros tantos trisqueliones vecinos (figs. 7-35 y 7-36). La unin de los trisqueliones a la membrana le confiere la fuerza mecnica que provoca su curvatura. Inicialmente forman una fosita, la cual al desprenderse de la membrana se convierte en una vescula que se libera en el citosol. Al igual que las cubiertas de COP, la cubierta de clatrina se desarma inmediatamente y los trisqueliones libres pueden volver a usarse para generar nuevas vesculas (fi g. 7-32). La forma como se asocian los trisqueliones entre s permite que las membranas resulten con curvaturas de distintos radios y que se formen vesculas de diferentes tamaos. No obstante, cuando las vesculas son muy grandes -como en los fagosomas- . no se forman cubiertas completas sino reas aisladas que cubren parcialmente sus superfi cies. La unin de los trisqueliones a la membrana vesicular se produce a travs de una protena ARF semejante a las que se unen a las unidades COPI y COPII (seccin 7-38).

CAVIDAD DEL COMPLEJO DE GOLGI O LADO EXTRACELULAR Por aadidura, en la membrana plasmtica los trisqueliones se unen tamMolcula a transportar bin al dominio citoslico de los receptores de las sustancias que ingresan a la clula por endocitosis regulada (vase el ejemplo que se analiza en la seccin 7-42). Algo similar ocurre en la memTrisquelln brana de la cara de salida del complejo de Golgi - en las zonas formadoras de las vesculas que se dirigen a los endoCITOSOL somas y a la membrana plasmtica durante la secrecin regulada-, donde adems de unirse a la ARF, los trisqueFig. 7-37. Unin del trisque liones se ligan al dominio citoslico de los receptores de las molculas que lin a la membrana. Vase c mo participan la ARF, la adap van a ser transportadas (fig. 7-37) (uno de esos receptores es el de la manosa tina y el receptor del material 6-fosfato, visto en la seccin 7-20). que va a ser transportado. Debido a que los dominios citoslicos de los receptores mencionados varan, para unirse a ellos los trisqueliones se valen de unas protenas intermediarias heterodimricas llamadas adaptinas (fi g. 7-37), las cuales poseen un dominio especfico que interacta con cada tipo de receptor y un dominio comn que se liga a los trisqueliones. Apenas la cubierta de clatrina se desconecta de la membrana vesicular, las ARF y las adaptinas - al igual que los trisqueliones- quedan libres en el citosol para que se puedan volver a usar (fig. 7-32).

7- 40 . Prot enas membranosas llamadas SNARE aseguran la llegada

de las vesculas tra nsportadoras a sus puntos de destino

Cada compartimiento del sistema de endomembranas posee en su membrana y en su interior molculas distintas a las de los otros compartimientos. Como se mencion en las secciones 7-I, 7-2, 7-22 y 7-29, esos compartimientos - junto con la membrana plasmtica y la matriz extracelular- intercambian algunas de sus molculas meMEMBRANAS diante vesculas transportadoras, las cuales se trasladan por 1 el citosol movidas por el citoesqueleto (caps. 5-8 y 5-23). Cuando una vescula transportadora emerge de uno de Jos compartimientos donantes y se dirige hacia el compartmiente receptor con el que habr de fusionarse, debe avanzar por el camino adecuado y no extraviarse en medio de las mltiples membranas que atraviesan el citoplasma. Ello lo logra porque existe un mecanismo diseado para asegurar la llegada de la vescula transportadora al compartimiento correcto. Depende de dos tipos de protenas receptoras mutuamente complementarias, una perteneciente a la membrana del compartimiento donante y otra a la membrana del compartimiento receptor. Se denominan, respectivamente, v-SNARE y t-SNARE (por vesicle- y target-SNAP receptor) (fig. 7-38). Como muestra la figura 7-39, las t-SNARE no abandonan nunca la membrana de los compartimientos receptores. En cambio, las v-SNARE abandonan la membrana de los compartimientos donantes cuando se transfieren a la membrana <lt: las vesculas lr:UISJH>rtadoras .. La fi gura 7- ';, <) 11u1 stra
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154

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

15.

MEMBRANA DONANTE

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Fig. 7-39. Esquema que muestra de qu forma la vescula transportadora es conducida hacia la membrana receptora y cmo la vescula recicladora es devuelta a la membrana donante.

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MEMBRANA RECEPTORA

nes de actuar una vez que las vesculas se desprenden de las cubiertas protei-

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cas de COP o de clatrina. Debido a que este mecanismo requiere especificidad, por cada pareja de compartimientos donante y receptor existe una pareja particular de protenas v-SNARE y t-SNARE complementarias. Ello hace que durante el traslado de una vescula transportadora su v-SNARE deba "tantear" mltiples t-SNARE antes de encontrar a su complementaria. El retomo de una vescula recicladora al compartimiento donante apropiado y no a otro se debe a que su membrana recupera la v-SNARE original Y a que la membrana del compartimiento de origen posee una t-SNARE idntica a la de la membrana del compartimiento receptor (fig. 7-39). Por consecuencia, durante el reciclaje de las vesculas transportadoras los compartimientos invierten sus comportamientos, pues el donante se conduce como reMEMBRANA DONANTE ceptor y ste como donante. La unin entre una v-SNARE y su t-SNARE complementaria depende de una protena llamada Rab (por Ras proteinfrom brain), que acta sobre ambas (fig . 7-38). Se han identificado cerca de 30 Rab di..._~ v-SNARE ferentes, una para cada parej a de v-SNARE/t-SNARE. Las protenas Rab pertenecen a una subfamilia de GTPasas que depende de las protenas GEF y GAP (seccin 7-38). As, cuando son influidas por la GEF reemplazan el GDP de sus molculas por un GTP (fig. 11-9) y se activan, es decir, se unen a la membrana del comCITOSOL partimiento donante y hacen que la v-SNARE y la t-SNARE se conecten entre s. En cambio, cuando son influidas por la G AP hidroli1 zan el GTP (a GDP y P) y se inactivan, lo cual las separa de la mem1

o N-etilmaleimida, es el nombre del compuesto usado para revelar al NSF). As, las tres SNAP y el NSF -que es una ATPasa- son requeridos por el par de membranas para que se concrete la fusin (fig . 7-40). Cualquiera que sea el par de membranas -y por lo tanto, la pareja de v-SNARE/t-SNARE-, siempre se les unen las mismas cuatro protenas fusgenas , pues son inespecficas. Como se ve, la especificidad ele la unin depende nicamente de las SNARE. El proceso ele fusin de membranas consume energa, que es provista por un ATP hidrolizado por la ATPasa del NSF. La energa es requerida para desarmar el complejo fu sgeno luego de la fusin y separar a las SNAP y al NSF de las membranas. Las SNAP y el NSF regresan al citosol y pueden ser reutilizados. Por su parte, la v-SNARE se integra a una vescula recicladora y retorna al compartimiento donante - ahora receptor-, al que identifica porque la membrana de ste posee una t-SNARE complementaria (fig. 7-39). 7-42. El ingreso del colesterol en la clula y su dest ino ulterior se conocen detalladamente

Colesleroi-LDL
1 1

MATRIZ EXTRACELULAil

~ Receptor-LDL

__. . . ;:r.( .,W

7 , )
1 1

Trisquelin

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1

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1
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1 1

Vesfcula recicladora

,/

t
Enzimas hidrolfticas provenientes del compleo de Golgi

fMP\ _ ______._ \!J

Fig. 7-41. Esquema que ilu:> tra el mecanismo de ingrrsn del colesteroi-LDL en la c~ lu la, su paso por los endoso111111. primario y secundario y su

o
1

1 ~SNAP
1

.....::;._ NSF
1

brana del compartimiento donante. 7-41 . En el proceso de fusin de membrana s intervienen cuat ro protenas f usgenas Al ligarse la v-SNARE con la t-SNARE, las membranas interactuantes se colocan a una distancia que hace posible el proceso de fusin descrito en el captulo 3-6 e ilustrado en la figura 3-13. En ese proceso interviene un conjunto de protenas fusgenas que se localizan en el citosol. Se conocen cuatro, tres el las cuales

1-SNARE~~'-----MEMBRANA RECEPTORA

01 : ..-l

Jii)l. 7-40. Intervencin de las tres SNAI' y del NSr en la fusin de la

1\U'IIIhlllllll nrcplom cou In llll'!llhrnna

se iclcnlifican con la sigla SNAl' (pm .\'1!/tiblt NSI'

,ius)

, ,, ., ., .I',I'0/1' J11'r'

En virtud de que son molculas muy hidrofbicas, el colesterol y sus steres circulan por la sangre como lipoprotenas. El ejemplo ms conocido corresponde al colesterol-LDL (por low-de11sity lipoprotein), que es un compuesto lipoproteico originado en el REL de los hepatocitos (seccin 7-27). El colesterol-LDL ingresa en las clulas por endocitosis, previa unin con receptores especficos situados en la membrana plasmtica. Esta unin atrae a trisqueliones libres en el citosol, los cuales -por intermedio de adaptinas especficas- se conectan con los receptores en el lado citoslico de la membrana y generan una cubierta de clatrina (fig. 7-41). Como se sabe, la cubierta se desprende de la membrana de la vescula apenas sta se forma. En la luz vesicular el colesterol-LDL contina unido a los receptores heredados de la membrana plasmtica. La vescula se conecta con un endosoma primario, cuyo pH cido hace que el colesterol-LDL se desprenda de los receptores, los cuales retornan a la membrana plasmtica con una vescula recicladora. El colesterol-LDL pasa del endosoma primario a un endosoma secundario, y ste se convierte en lisosoma al recibir enzimas hidrolticas del complejo de Golgi (fig. 7-41). Las enzimas actan sobre el colesterol-LDL y separan a la LDL del colesterol, que pasa al citosol y se utiliza como materia prima para la sntesis de otras molculas o se incorpora a la membrana del RE (seccin 7-10) . La hipercolesterolemiafamiliar es una enfermedad causada por una mulaci(m del gen que codifica al receptor del colesterol-LDL, que res uha defcclullso o est ausent . ('o11111 ons ueneia, el colesturol no ingr sa en las 11 ,. 111 d1 lulas su I'IIIIL'I'IIII'Iu ' IIII :11 1l vu ~ ~~ la saugn:, lo '1'"' lit- va 11 la ap1
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procesamiento en e1 1isosollln.

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156

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

7. EL SISTEMA DE BNDOMEMBRANAS

157

Fig. 7-42. Disposicin de las caveolas en la membrana plasmtica.

Membrana plasmtica CITOSOL

ion, lo que ha llevado a compararlas con los tbulos T del msculo estriado (fig. 5-39). El mecanismo que interna solutos y sus transportadores mediante caveolas y permite que los primeros ingresen masivamente en la clula se denomina potocitosis (del griego potos, bebida).

7-43. En las mem branas plasmticas de alg unas c lulas

EL SISTEMA DE ENOOMEMBRANAS EN LA CELULA VEGETAL

7-44. En la cl ula vegetal el sistema de endomembranas

existen invaginacio nes llamadas caveolas En la membrana plasmtica de muchos tipos de clulas se desarrollan invaginaciones muy pequeas llamadas caveolas (del latn caveolae, cuevas pequeas) (fig. 7-42), cuya presencia es particularmente abundante en las clulas endoteliales, musculares lisas y adipocitos. Las caveolas se forman a partir de reas circunscritas de membrana plasmtica llamadas balsas lipdicas, que son ricas en colesterol y esfingofosfolpidos. La fuerza mecnica que invagina a estas reas para que se formen las ca veo las no es generada por una cubierta proteica (como ocurre con las vesculas de endocitosis) sino por protenas que se distribuyen entre los fosfolpidos de la propia membrana. As, en cada rea de invaginacin, en la monocapa citoslica de la membrana se ubican mltiples unidades de una protena integral de 21 kDa llamada caveolina, que es la que produce la invaginacin. La caveolina tiene forma de horquilla y sus dos extremos se orientan hacia el citosol (fig. 7-43). Debido a que en sus luces se concentran sustancias inductoras y en sus membranas se instalan los receptores de esas sustancias, las caveolas hacen posible que haya inducciones celulares con mnimas demoras. Las sustancias inductoras ms comunes detectadas en el interior de las caveolas son la insulina, el EGF y el PDGF (cap. 11-12), mientras que en sus membranas se hallaron varios tipos de receptores membranosos, algunos asociados a protenas G (cap. 11 - 14). Las caveolas sirven tambin para internar permeasas y canales inicos hacia el citoplasma y "acorralar" solutos en las cercanas de esos transportadores. Ello hace posible que los solutos - ante estmulos adecuados- ingresen masivamente en la clula. Por ejemplo, en las luces de algunas caveolas se detect Ca2 y en sus membranas se encontraron canales y perrneasas para el

posee vacuolas Consideraremos aqu algunas caractersticas especiales del sistema de endomembranas de las clulas vegetales. En las clulas indiferenciadas del meristema, las membranas del RE son relati vamente escasas y estn enmascaradas por los numerosos ribosomas libres que llenan el citosol. En cambio, en las clulas vegetales diferenciadas el RE es abundante y forma tbulos que ingresan en los plasmodesmos (cap. 6-15). En las clulas cribosas, sobre estos tbulos se forman depsitos de callosa, que es un polisacrido compuesto por molculas de glucosa unidas por enlaces 1- 3~. Igual que en las clulas animales, en las vegetales el complejo de Golgi es esencial para la secrecin. En sus cisternas se procesan y concentran Jos productos secretorios, que finalmente se descargan al exterior. Por ejemplo, en las clulas que sintetizan muclago se observan abundantes vesculas secretorias surgiendo del complejo de Golgi. Adems, componentes del complejo de Golgi sirven para el transporte de ciertas protenas de depsito, como la vinicilina y la Jegumina en los cotiledones de algunas leguminosas, y la zena en el endosperma del maz. Estas protenas se localizan en organoides especiales, denominados cuerpos proteicos o granos de aleurona. En la mayora de las clulas vegetales existe uno o ms compartimientos llamados vacuolas, limitados por membranas (fig. 1-6). Segn el tipo celular, en total representan entre el 10 y el 90% del volumen del citoplasma. Cuando son muy voluminosas el citosol queda reducido a una fina capa por debajo de la membrana plasmtica. Existen dudas sobre su origen; se cree que se forman por la fusin entre s de vesculas surgidas del complejo de Golgi. Las fu nciones de las vacuolas son variadas. Algunas se comportan como lisosomas, ya que contienen enzimas hidrolticas. Otras sirven de depsito para nutrientes y desechos metablicos. Finalmente, otras guardan lquidos y se usan para regular el volumen y la turgencia de la clula. En los captulos 3-30, 3-31 y 18-21 se estudia la participacin del complejo de Golgi en la formacin de la pared de la clula vegetal.

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Caveolina

F i:. 7-43. Representacin csqu m:\ti ca de una cavcolu,

c;on las avcolinas distrihuiclm: r ntH IoN fosl'o lfpitlos eh: 111 lllillll ll 111111 'ltnt/l dku d1 1 In ullllllu ulllum nrllilil

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111 111'1' 11"111 111

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158

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELUL AR Y MOLECULAR

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Las mitocondrias
Energa celular I

8-1. la mayor parte de la energa que usa la rlula es provista por el ATP
Las clulas necesitan energa para realizar casi todas sus actividades, algunas de las cuales se ilustran en la figura 8- 1. La energa es tomada de molculas de ATP. Estas, a pesar del insignificante espacio que ocupan, permiten te ner al alcance una gran cantidad de energa de fcil disponibilidad, de modo que pueda ser utilizada tan pronto y donde se la necesite. La energa se halla depositada en las uniones qumicas entre los fosfatos del ATP - uniones de alta energa-, aunque suele utilizarse solamente la que involucra al fos fato terminal (figs. 2-3 y 8-2). As, cuando el ATP se hidroliza, junto con la liberacin de energa se genera ADP y un fosfato (fig. 8-3). Como vemos, el ADP se comporta como una pequea "batera descargada", que al cargarse por la unin de un fosfato se convierte en ATP, la "batera cargada". Las usinas generadoras de molculas de ATP son las mitocondrias, que toman la energa depositada en las uniones covalentes de las molculas de los alimentos y la transfieren al ADP. Una vez formado, el ATP sale de la mitocondria y se difunde por la clula, de modo que su ene rga puede ser usada para las distintas actividades cel ulares. Al removerse la energa del ATP, se reconstituye el ADP, que reingresa en las mitocondrias para recibir una nueva "carga" de energa. Las clulas poseen una enorme cantidad de mitocondrias, cada una de las cuales produce innumerables molculas de ATP. Estas, como las mitocondrias, se localizan cerca de los sitios de consumo.

Fig. 8-1. Esquema que muestra a la mitocondria como la planta de produccin energtica de la clula. El ATP producido se emplea, e ntre otras, en las funciones indicadas.

8-2. la energa es tomada de los alimentos

Al provenir la energa de los alimentos, en ltima instancia procede del sol. En las plantas, a partir de C0 2 y H 20, la luz solar da lugar a una serie de reacciones que - adems de generar 0 2- convierten la energa lumnica en energa qumica, que queda depositada en las uniones covalentes de las molculas de los vegetales (cap. 9-4) (tabla 8-1). La energa de los alimentos vegetales es tomada por los animales herbvoros, que a su vez sirven de alimento - y fuente de energa- a los animales carnvoros. 1.as sustancias ali menticias se clasifican en hid mtos d carhono, gn 1.~11N, pt'ol fm\s, minerales y 11} ) . 11 los l"tliiiJ s dth "1'" 111 J' l () . !.os :J! iJtll' ll
FUNCIONES DE LA CELULA QUE REQU IEREN ENERGIA MITOSIS - MEIOSIS MOTILIDAD - CONTRACCION BIOSINTESIS DE MATERIALES CELULARES TRANSPORTE ACTIVO TRANSMISION DE SEALES ENDOCITOSIS - EXOCITOSIS

ADP+ P

ATP
MITOCONDRIA _ _ )

HIDRATOS D CARBONO 111'11){'),,

02 ~ ~ --.....

CO: 11:.0

1(,1)

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

8. LAS MITOCONDRIAS

161

o
o
11

o
+

o
H20

o
1 oPi

o
11

o
11

CHz -0-P-O-P-O-P-oo-

11 11 11 R-0-P-0-P-0-P-01 1 1 oooATP

11 11 R-0-P-0-P-0-

1 oADP

o-

o-

Jo'g. 8-2. Estructura qumica

de la molcula de adenosina

lrifosfato (ATP).

tos ingresan en el organismo por el sistema digestivo, salvo el 0 2, que lo hace por el sistema respiratorio. Una vez que la energa ha sido extrada de los alimentos, quedan como productos de desecho C02 y H20 (tabla 8-1 ), a los que deben sumarse algunas sustancias nitrogenadas derivadas del catabolismo de las protenas. No toda la energa depositada en las uniones qumicas de las molculas alimenticias es transferida al ATP, ya que durante las sucesivas reacciones que conducen a su formacin parte de esa energa se convierte en calor. Debe sealarse que desde el punto de vista termodinmico el calor que se genera en el escenario celular corno consecuencia de las reacciones qumicas es tambin un producto de desecho. No obstante, en trminos de aprovechamiento de energa para producir trabajo las clulas son muy eficientes, pues, comparadas con la mayora de los motores, la relacin consumo de combustible/produccin de trabajo da cifras mucho ms favorables para las clulas. As, en las clulas el 40% de la energa liberada sirve para actividades provechosas y el 60% se disipa como calor, mientras que en los motores tales cifras suelen ser del orden del 20% y del 80%, respectivamente. El mejor rendimiento logrado por la clula se debe a que degrada a los alimentos en forma gradual, por medio de enzimas que ella misma sintetiza. Ello permite que la energa liberada de las molculas alimenticias sea transferida al ADP y se forme ATP con mnima generacin de calor.
8-3. La energa de las molculas alimenticias es extrada mediante oxidaciones

]culas y se forma H20 y C02 , respectivamente. La gradualidad arriba mencionada resulta de tales oxidaciones, puesto que stas se cumplen paso a paso y en algunos de esos pasos se liberan pequeas porciones de energa. Si las oxidaciones no fueran graduales, la energa qumica se liberara sbitamente y se disipara como calor. Deber recordarse que una molcula se oxida no solamente cuando gana oxgeno (0) sino tambin cuando pierde hidrgeno (H). Debido a que ste puede disociarse en un electrn (e-) y un protn (H), en un sentido general toda remocin de e- de cualquier tomo o molcula constituye una reaccin de oxidacin. Si el e- removido proviene de un tomo de H, el H resultante puede permanecer en la molcula oxidada (que entonces queda con una carga positiva) o puede ser removido y pasar al medio acuoso. Ulteriormente los e y los H pueden volver a unirse -para componer nuevos tomos de H-, por ejemplo, cuando son transferidos e- y H al 0 2 y se forma H20. Toda oxidacin de un tomo o de una molcula est atada a la reduccin de otro tomo o de otra molcula, que entonces ganan hidrgeno o e-, o pierden oxgeno. Durante el procesamiento de los alimentos, en algunas reacciones de oxidacin y reduccin intervienen dos molculas intermediarias cardinales: las coenzimas nicotinamida adenina dinucletido (NAO) y tlavina adenina dinucletido (FAD) (fig. 8-4). En su forma oxidada la primera se representa con la sigla NAD+, y en su forma reducida con la sigla NADH. La segunda, con las siglas FAD y FADH2 , respectivamente.
8-4. Los alimentos son degradados por enzimas

Fig. 8-3. Hidrlisis y sntesis del ATP.

Apenas los alimentos son ingeridos, los polisacridos, los lpidos y las protenas que los integran comienzan a ser escindidos en molculas cada vez

La mayor parte de la energa contenida en las molculas de los alimentos es extrada mediante una sucesin de oxidaciones, al cabo de las cuales el oxgeno atmosfrico se une al hidrgeno y al carbono liberados por esas mo-

oH N

o 11 c

~H2

-O-~-O-CH2~0~
HO

Tabla 8,-1 . Diferencias ent re fos p. rocesos energticos de las plantas : . (fotosntesis) y de los animales (fosforilacin oxidativa)
Fotosntesis Fosfrilacin oxidaiiva

HWH
OH

En cloropl~stos
Reaccin endergnica: . Energa + C02 + H, ~Alimentos + 0 2 Hidroliza agua
Libera 0 2

En mjtocondrias

Reaccin exergriica:
Alimentos +. 0 2 Forma agua
Libera C02
~

Energa + C02 + H20

Slu l ' ll
l't' llltht

ucs~noia
,1

de luz

lndcpondiunte <k lu lu-.

1 (

Fig. 8-4. Estructura qumica de la nicotinamida adcnina dinuclctido (NAO) y de lu

lln vi nn udcnlnn tlinudr c " 11itlu
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ll'i\11)

11IIIIIIIUI

162

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

8. LAS MITOCONDRIAS

l l1,l

[
[

( PROT~ . f ; Ami~ .cido

Glu~sal

.
:

LIPIDOS

Acidos grasos

2
3[

_ '- :~-r:,.

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NADH !, ATP

l''-- ~
...... Oxalacetato Citrato

ms pequeas por la acci n de una gran variedad de enzimas. Estos procesos se cumplen de forma tal que las molculas transformadas por unas enzimas son modificadas a continuacin por otras, y as consecutivamente. De este modo se establecen verdaderas cadenas metablicas degradativas, que en los primeros pasos son distintas para cada tipo de alimento, pero que en las etapas finales confluyen en una va metablica comn. La escisin enzimtca de los alimentos tiene lugar en tres escenarios orgnicos: el tubo digestivo, el citosol y la mitocondria (fg. 8-5).

(uno por cada piruvato). Ms adelante veremos cmo, en las mitocondrias, la energa contenida en los dos NADH surgidos de la gluclisis es transferida al ATP (seccin 8-18). Volviendo a los piruvatos, dejan el citosol e ingresan en las mitocondrias. 8-7. En las mtocondri as se produce n la descarboxilacin oxidativa, el ciclo de Kre bs y la fosfori lacin oxidativa Por accin de un complejo multienzimtico llamado piruvato deshidrogenasa, presente en las mitocondrias, cada piruvato (3 C) se convierte en un acetilo, que es una molcula que contiene 2 carbonos. El acetilo se liga a una coenzima -la coenzima A (CoA)-, con la que compone la acetil CoA (figs. 8-7 y 8-11 ). El carbono del piruvato es removido junto con dos oxgenos, lo que produce COz (figs. 8-5, 8-1O y 8-11 ). El piruvato cede tambin un hidruro (H-), es decir, un H y dos e-. En conjunto estas reacciones reciben el nombre de descarboxilacin oxidativa, que es la tercera etapa de la degradacin de los hidratos de carbono. Durante la descarboxilacin oxidativa se genera energa suficiente para reducir un NAD (q ue recibe el H- mencionado en el pnafo anterior), lo cual se traduce en la formacin de un NADH por cada acetilo producido (figs. 8-5 y 8-11 ). Oportunamente se ver cmo la energa depositada en este NADH es transferida al ATP. A continuacin -siempre en las mitocondrias - los tomos de carbono e hidrgeno del acetilo (recordemos que se halla unido a la CoA) son oxidados, por lo que se generan C02 y HzO. Las ox idaciones son graduales y en su transcurso se libera la energa depositada en las uniones covalentes entre esos tomos, que pasa al ATP. Ambos procesos -las oxidaciones y la formacin de ATP- ocurren en dos tiempos; en el primero se genera COz y en el segundo HzO (fig. 8-5). El primero de esos tiempos -que representa la cuarta etapa de la degradacin de los glcidos- abarca una sucesin de ox idaciones durante el llamado ciclo de Krebs (figs. 8-5 y 8- 11). De la energa liberada en esta etapa,

8-5. La degra dacin de los alime ntos

comienza e n e l siste ma d igestivo

......
Cisaconitato

lsocitrato

J.. co,

Fumarato

u-)Cetoglutarato

Succina~il CoA
ATP

co 2

NADH

NADH deshidrogenasa

FADHi

L. Ublquinona
r.:
Complejo b-c 1

/ 1 l
l l l

'

Cltocromo e

La primera etapa de la escisin enzimtica de los alimentos tiene lugar en la luz del tubo digestivo, de modo que es extracelular. As, mediante enzimas secretadas por diversas clulas de dicho tubo, los hidratos de carbono se degradan a monosacridos --especialmente glucosa-. los lpidos (en su mayora triacilgliceroles) se convierten en cidos grasos y glicerol, y las protenas son degradadas a aminocidos (fig. 8-5). Tras ser absorbidas por el epitelio intestinal estas molculas ingresan en la sangre y por ella llegan a las clulas. Para asegurarse un abastecimiento continuo de energa, las clulas guardan en el citosol parte de la glucosa y de los cidos grasos bajo la forma de glucgeno y de triacilglceroles, respectivamente. En el captulo 4-3 se vio que los hepatocitos y las clulas musculares estriadas suelen contener importantes reservas de esas molculas en forma de inclusiones, desde donde se movilizan cuando se las necesita. Tambin se seal que los adipocitos sirven como depsito para grandes cantidades de triacilgliceroles.

0
Hexoqwna<:a

ATP
H

7.

OH
Glucosa

lii
o

OH

~
H OH H H OH
Glucosa &-roslato
3 -f osi()(J!!Ce' al o
QUM'10.S8

roslogluco lsomen,'lJil

CH OP01 "

OH

q'"
o
OH OH H
FruC10&<) 6-loslalo
\.l t(}llfollr1ohlclo

r::~SJH,OPOj"

~HbH
OH H
Fructosa 1,6-dilosla\o

Citocromo oxidasa

8-6. La gluclsis tiene lugar e n e l citosol

o 11 e -o1 HCOPOf1 CH,OH
2-Fosloglloera\o (x2)

Jo'ln. K-5. Esquema general de 111 degradacin de los alimenlol una vez incorporados al "' ~ani smo: 1) degradacin tnt im:\tica en el tubo digestivto: 2) gluclisis en el citosol; q d<"scmhoxilac i n oxidativn: 4) ci lo d Krchs: 5 ) ftlsludhli'lou mdclnlivn ,

Mediante una serie de reacciones qumicas agrupadas con el nombre de gluclisis --en las que intervienen 10 enzimas consecutivas localizadas en el citosol- , cada molcula de glucosa, que posee 6 tomos de carbono, da lugar a dos molculas de piruvato, que constan de 3 carbonos cada una (figs. 8-6 y 8-11 ). Al comienzo de este proceso -que constituye la segunda etapa de la degradacin de los glcidos- se invierte la energa de dos ATP. No obstante, debido a que de inmediato se generan cuatro, se ganan dos ATP, uno por cada pimvato. Ad m~s. una parl tic la en r fa lih rada durante la glttd llisis 11e> \ ' N lllttiN 1!1tidu tlil n' liltttnllh' ul ATI' :.ittn IJIII' f'ICllttltt'VI' !11 !l'dtH't intt dt dnN N i\ll'

ATP

Hu;lnltr.Nnmulit!id

e - o
1 HeOH 1 CH 2 0PO~ 3-Foslogl!oeralo
(X2)

11

o
C - OP0}11

H
4

.z ""\
ATP
(x 2)

C=O
1 1

HCOH

lo:;l,tlo

dt~.tmlroyut lm;,

~
rnosatos;tatolsomoraRa

1..

..

1 CH 2 0P0 1-

NA(~
(x2)

5 HCOH

'~=O

CH 2 0Po~ -

'CH1 0POJ
Gllceraldehfdo

1 JCH 2 0H
DihidroJdacetona
foslaro (x 2)

1,3-DloSiogHceralo (x2)

3-loslato (x 2)

'H,0 (>0
o
,., l

e - o
1 (
(t

11

o
I'CIJ All'
)

----

11
! 11,

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1
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11

Fin. Htt. Prnpur dt l11 l' lu~ull

IN v 1 11 1

1111111

lut 1 vJ ulr ul "

164

11 FUNDAMENTOS DE BIOLOGlA CELULAR Y MOLECULAR

8. LAS MITOCONDRIAS 11

J(,,

NH2

8-9. Los primeros productos de la degradacin de los aminocidos

son muy va riados

N~c.._c-"l
CH;:,W..

'

L.~cH N'

CH3 H

b
HO

CH:r-O-P-O-P-O-CH2-C-C-C-N-(CH2} 2 -C-N-(CH2) 2 -S-C-CH3

1111 1

111 1 1 H

11

0-

o-

11

En lo que atae a los aminocidos, cuando no se utilizan para sintetizar protenas u otras molculas y son requeridos para generar energa, se convierten -mediante distintas enzimas especficas- algunos en piruvato, otros en acetilos y otros en molculas intermediarias del ciclo de Krebs (fig. 8-5).

CH3 OH O

ACETILO

O 1 O=P-oOH
1

DESCRIPCION GENERAL Y ESTRUCTURA DE LAS MITOCONDRIAS

8-1 O. Las mitocondrias se encuentran en todos los tipos celulares

Fig. 87. Estructura qufmica de la acetilcoenzima A (acetil CoA).

una pequea fraccin se aprovecha para generar un ATP en forma directa (aunque por va del GTP), pero la mayor parte es utilizada para reducir tres NAD -que entonces se convierten en otros tantos NADH- y un FAD, que pasa a su estado reducido o FADH2 . En el segundo tiempo, contemporneo al del ciclo de Krebs, los NADH y los FADH2 son oxidados en sendos puntos al comienzo de una serie de complejos moleculares que se agrupan con el nombre de cadena transportadora de electrones (o cadena respiratoria), de modo que los NADH y los FADH2 vuelven a convertirse en NAD y FAD, respectivamente. Cuando ambos dinucletidos son oxidados, la energa depositada en sus molculas se libera y es transferida al ADP que se halla en las mitocondrias, el cual, dado que se fosforila, se convierte en ATP. Esta etapa -la quinta y ltima en la degradacin de los glcidos-, porque da lugar a oxidaciones acopladas a fosforilaciones recibe el nombre de fosforilacin oxidativa (fig. 8-5).

Las mitocondrias se hallan en todos los tipos celulares y constituyen uno de los ejemplos de integracin morfofuncional ms admirables, ya que proveen el andamiaje sobre el cual se asientan las innumerables molculas que participan en las reacciones que transfieren la energa depositada en los alimentos a una molcula extraordinariamente verstil como lo es el ATP. Las mitocondrias son cilndricas, aunque experimentan cambios de forma sutiles, derivados de su actividad. En promedio miden 3 .tm de largo y tienen un dimetro de 0,5 .tm. Su nmero vara segn el tipo celular. En las clulas hepticas, por ejemplo, suelen hallarse entre 1.000 y 2.000 mitocondrias (fig. 1- ll). Estn ubicadas en las regiones de las clulas donde la demanda de energa es mayor; as, se desplazan de un lado a otro del citoplasma hacia las zonas necesitadas de energa. Los microtbulos y las protenas motoras asociadas intervienen en tales desplazamientos (cap. 5-8). En algunos tipos ce-

Fig. 8-8. Micrografa clcc111

nica de la rnitocondria. Ohs r vense las crestas (Cr), la 11111 triz (Ma ), el espacio int<o membranoso (E!M), la 111<'111 brana externa (ME) y la num brana interna (M[). 207.01111>< (Cortesa de G. E. Paladt:.)

8-8. Los cidos grasos son degradados en las mitocondrias

A diferencia de la glucosa, los cidos grasos -provenientes de los alimentos o de la movilizacin de las reservas de grasa en las clulas- no se degradan en el citosol. Pasan a las mitocondri<s, donde una serie de enzimas especficas los desdobla hasta generar entre ocho y nueve acetilos cada uno. El proceso degradativo se denomina ~-oxidacin y comprende varios ciclos sucesivos, siete cuando se trata de un cido graso de 16 carbonos y ocho en los de 18 carbonos. Es que el cido graso cede un acetilo por ciclo. Adems, cada ciclo produce un NADH y un FADH2 (fig. 8-10). La P-oxidacin de los cidos grasos es conducida por las enzimas acil CoA deshidrogenasa, enoil CoA hidratasa, hidroxiacil CoA deshidrogenasa y P-cetoacil CoA tiolasa. Igual que los acetilos derivados de la descarboxilacin oxidativa del piruvato, los surgidos de la ~-oxidacin de los cidos grasos son cedidos a la CoA e ingresan en el ciclo de Krebs. Como vemos, las cadenas metablicas que degradan a los glcidos y a las grasas dan lugar a una molcula comn, la acetil CoA. Antes se dijo que en el ciclo de Krebs cada acelil CoA genera un ATP, tres NADH y un FADH2 , y que la energa contenida en los NADH y FADH2 es transferida al ATP al cabo de la fosforilacin oxidativa. Las grasas aportan ms energa que los hidratos de carbono por la cantidad de NADH y FADH2 suplementarios que se encran duranl la ~-oxida
la }'. lu~n~a 1 durnnl(' In }'.lllt't''Hi n i~:

i6n d los (le idos grasos. propor ionalmonf nmyor qn lo:: prodrwi do1 : por y 1' dp,uhux ilur lllll 11 id!III Vll ,

166

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

8. LAS MITOCONDRIAS

1( ,7

C ITOSOL

Membrana

~----------

ADN

~----

ATP

sintasa

~~~~~~~~'-~-. 2~02 -*~~~~

FADH2 Fig. 8-9. Esquema tridi mensio na l de una mitocondria cortada longitudina lme nte. Lns crestas aparecen tapizadas con mo lculas de ATP s in tasa.

CoA

MATRIZ

NAO+ NAD H

FAD

lulares, como los espermatozoides, los adipocitos y las clulas musculares estriadas, las mitocondrias se hallan inmovilizadas en lugares fij os.

8-11 . L as mitocondrias poseen dos membranas y dos compartimientos

Las mitocondrias poseen dos membranas - una externa y otra interna- , que dan lugar a dos compartimientos, el espacio intermembranoso y la matriz mitocondrial (figs. 8-8 y 8-9). Mencionaremos las caractersticas y las molculas de mayor inters de estos cuatro componentes. Matriz mitocondrial. La matriz mitocondria l contiene numerosas molculas, entre ellas: 1) El complejo enzimtico piruvato deshidrogenasa, responsable de la descarboxilacin oxidativa (fig. 8- 11 ). 2) Las enzimas involucradas en la ~-o x idacin de los cidos grasos (fig. 8-10). 3) Las enzimas responsables del ciclo de Krebs, excepto la succinato deshidrogenasa (fig. 8-11 ). 4) La coenzima A (CoA), la coenzima NAD+, ADP, fosfato, 0 2 , etc. 5) Grnulos de distintos tamaos, compuestos principalmente por Ca2+ (fig. 8-9). 6) Varias copias de un ADN circular (seccin 8-26) (figs. 8-9, 8-16 y 8-18). 7) Trece tipos de ARNm, sintetizados a partir de otros tantos genes de ese ADN. 8) Dos tipos de ARNr, los cuales forman ribosomas parecidos a los citoslicos (fig. 8-9). 9) Veintids tipos de ARNt para los veinte aminocidos. Membrana interna. La membrana interna desarrolla plegamientos hacia la matriz que dan lugar a las llamadas crestas ntocondriales, formadas con el objeto de aumentar la supelficie membranosa. El nmero y la forma de las crestas varan en los distintos tipos celulares. La membrana interna de las mitocondrias presenta un alto grado de especializacin y las dos caras de su bicapa lipdica exhiben una marcada asimetrfu. En ella se localizan, entre otros, los siguientes elementos: 1) 1In r onjunl1> d rnol u las que componen la cndcnn trunsportndoru h hhmii'N (o 1'1 1111'1 !11 l<'llj>I IIIori u) (li l 11. H ~. H lO y H 12). l\x i1 .1ru innu

merables copias de estos conjuntos en el plano de la bicapa lipdica. Cada uno se compone de cuatro complejos proteicos relati vamente grandes, llamados NADH deshidrogenasa (1), succinato deshidrogenasa (11), b-c 1 (111) y citocromo oxidasa (IV), entre los cuales se encuentran dos transportadores de electrones pequeos, denominados ubiquinona y citocromo c. Debe sealarse que la succinato deshidrogenasa es una de las enzimas del ciclo de Krebs y que funciona asociada a otra protena de la membrana mitocondrial interna, la coenzima FAD (figs. 8-5 y 8-11 ). Adems, que el citocromo e no es una protena intrnseca de esta membrana sino una protena perifri ca que apunta al espacio intermembranoso (fig. 8-10), y que la ubiquinona es una molcula no proteica que puede aloj arse en la zona apolar de la bicapa lipdica merced a su cadena de 10 isoprenos, que es hidrofbica (caps. 2-7 y 3-2) (fig. 2-24). 2) La ATP sintasa, que es un complejo proteico ubicado en las inmediaciones de la cadena transportadora de electrones (figs. 8-10 y 8-1 2). Presenta dos sectores, uno transmembranoso (porcin F 0 ) , que tiene un tnel para el pasaje de H+, y otro orientado hacia la matriz mitocondrial (porcin F 1 ) (fig. 8-13). Este ltimo cataliza la formacin de ATP a partir de ADP y fosfato, o sea, es el responsable de las fosforilaciones a que hace referencia el trmino "fosforilacin oxidativa". El origen de la energa requerida por la porcin F, de la ATP sintasa para que pueda concretar tales fosforilaciones ser anali zado ms adelante.
;l) tln ro~ fo l fpido dohk J difo~ fat i rlilgliccrol o cardJolipina ilustrado en !11 fiHIII'II ':! 17 . qt w i rnpich- clpiiH II jl dr (' l c:l lquil'i' N oluto' :rlrav l s de la hi<;apic ll p fcl ic lr, < 'X ' '1'' " ( 1,. ( '( 1,. 11,1 1, N ll 1

Fig. 8-10. Representacin grfica de la mitocondria. Se ilustran las reacciones correspondientes a la descarboxilac in oxidati va (verde), al ciclo de Krebs (rojo), a la P-oxidacin de los cidos grasos (ai1Ulrillo) y a la fosfori lacin oxidativa (azu[). L a acetil CoA deriva tanto de la descarboxilacin oxidativa como de la P-oxidac in de los c idos grasos y es e l punto de partida del ciclo de Krebs. / , NADH deshidrogenasa; ll, Succinato deshidrogenasa (y FAD); Ubi, U biquitina; lll, Complejo b-e ,; Cir, C itocromo e; IV, Citocromo oxidasa.

y cw icJ,, 11 1'"1,

168

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

8. LAS MITOCONDRIA S

1l11l

4) Diversos canales inicos y permeasas que permiten el pasaje selectivo de iones y molculas desde el espacio intermembranoso a la matriz mitocondrial y en sentido inverso (fig. 8-1 0). Membrana externa. La membrana externa es permeable a todos Jos solutos existentes en el citosol, pero no a las macromolculas. Ello se debe a que en su bicapa lipdica posee numerosas protenas transmembranosas multipaso llamadas porinas, que forman canales acuosos por los que pasan libremente iones y molculas de hasta 5 kDa. En las porinas los tramos proteicos que cruzan la bicapa lipdica exhiben una estructura en hoja plegada ~Espacio intermembranoso. Dada la presencia de las porinas en la membrana externa, el contenido de solutos en el espacio intermembranoso es similar al del citosol, aunque posee algunos elementos propios y una elevada concentracin de H+ (fig. 8-12).

CH 3 -CO-COOH CoA

Acido pirvico

Piruvato deshidrogenasa

CH 3 -CO-s -

CoA

Acetil CoA+ C0 2

COOH ~
1

COOH
1

C=O COOH
1
1

C H2
1

Citrato sintasa

CH 2 HO-C-COOH
1
1

+ CoA H2 0 COOH
1

. .. HOCH Ac1d0 maiiCO 1

FUNCIONES DE lAS MITOCONDRIAS

8- 12. La funcin princi pa l de las mtocon dr as es generar ATP Vimos que mediante la descarboxilacin oxidativa, el ciclo de Krebs y la fosforilacin oxidativa, la mitocondria traslada al ADP -para formar ATPla energa existente en las uniones qumicas de las molculas alimenticias. Analizaremos estos tres procesos en el escenario biolgico donde tienen lugar, es decir, en el andamiaje estructural provisto por la mitocondria. 8-13. La descarboxl acn oxdativa del piruvato y la ~-oxidacin de los cidos grasos ocurren en la matriz mitocondrial Proveniente del citosol, el piruvato ingresa en la matriz mitocondrial, donde por accin de la piruvato deshidrogenasa pierde un carbono y se convierte en el grupo acetilo de la acetil CoA (figs. 8-5, 8-7, 8-10 y 8-11). Recordemos que en esa conversin, adems de C0 2 , se genera energa suficiente para formar un NADH, de modo que por cada molcula de glucosa se originan dos de estos dinucletidos. A los acetilos generados a partir de los piruvatos deben sumarse los derivados de la ~-oxidacin de los cidos grasos y del metabolismo de algunos aminocidos (figs. 8-5 y 8-10). Cualquiera que sea su origen, el grupo acetilo de cada acetil CoA ingresa en el ciclo de K.rebs. Lo hace al combinarse con una molcula de 4 carbonos -el cido oxalactico-, con la que forma una molcula de 6 carbonos llamada cido ctrico, que da inicio y nombre al ciclo. 8-14. Las reacci ones del ciclo de Krebs se prod ucen en la mat riz mitocondrial Como muestra la figura 8-11, el ciclo de Krebs (llamado tambin ciclo del cido ctrico o ciclo de los cidos tricarboxlicos) comprende una serie de nueve reacciones qumicas mediadas por otras tantas enzimas especficas. Estas actan secuencialmente; lo hacen de forma tal que el ltimo de sus productos vuelve a ser el cido oxalactico, el cual, al combinarse con el grupo acetilo de otra acetil CoA, genera de nuevo cido ctrico. Con esta molcula se inicia otro ciclo de K.rebs, y as sucesivamente mientras haya 0 2 y acetilos disponibles. Al cumplirse cada vuelta del ciclo de Krebs, dos de los seis carbonos del ido lri <.: o se lih ran omo C02 . Adcms se genera '11 rf.fa s11ri ci '111 para
"'"" " " ' 1111

H 0 1 :~H
2

COOH .d A~ o oxalactico

~ conitasa
.

CH 2
1

COOH Acido ctrico

J
1

Fumarasa

CH 2
1

COOH CH Acido fumrico HC

1

C-COOH Acido acon fll\"'

11

HC COOH
1

11

COOH
Succinato deshidrogenasa

COOH
1

P t

H20

COOH
1

CH 2
1

Acido succnico

CH 2
1

HC-COOH Acido isocfll'h:"

co2
a-Cetoglutarato deshidrogenasa

CoA+ CH..,
1

HOCH
1

COOH

COOH 1 CH 2 1 CH 2
1

co2 -po.;,...o.- CH 2
1

e O OH

COOH

1 CH 2 1 C= O

O=C-S-CoA Succinil CoA

COOH Acido a-cetoglutrico Fig. 8-ll. La d scnl'i ll '""

cin oxidati va y d ~_: k lo d, Krebs (o ciclo dC>I rtci do 1'1 1<' co) en las m i to~ o nd l'i n N . .', ll ttu representadas las t'rm\,,,,, 1,1, las enzima:-; intctvin k ttl t1 "1 v los produch'ls de. :ut1holl 11'''

Puesto que se necesitan dos vueltas del ciclo de K.rebs para procesar a los dos acetilos derivados de la gluclisis de una molcula de glucosa, cada uno de estos monosacridos da lugar a dos ATP, seis NADH y dos FADH 2 . Debe advertirse que el ATP se forma a partir de GTP, que es el nuclesido trifosfato surgido del ciclo. Como se aprecia en la figura 8-11, la enzima del ciclo de Krebs encargada de transferir el H2 alFAD es la succinato deshidrogenasa (vimos que la enzima y la coenzima se locali zan en la membrana mitocondrial interna). En la misma fi gu ra puede advertirse que j un to al prim.;ro y al tercer NA DI-1 smgidos d 1 id o d l<n.: hs apar e n sendos 11 , pu s los susl ralos
oxid;ulos, :1 dil'l : n ' lll'i ll ti!- lt l '1'''' l H'ttllf ~ ' t 't' t: ll l:1 g lutt{li .~ i s, l' ll In d t /'lc nr'ho;~i l : ,. 111 o x id nli vu y t ~ll l! t ltiiii i! I\ ' I HI dd ;,q, nncltl N /\li tl l l! h ' i du .,,, k ili dt

cesos.

i\'1'1'. l re .~ Ni\ 1)11 y

1111l

i\llll ; .

K H ' h tl,

P d t, ll

1111

11 ' '

11

111 !1 11

dt

1111

11

170

FUNDAMENTOS DE BIOLOGJA CELULAR Y MOLECULAR

8. LAS MITOCONDR!AS

17 1

MATRIZ MITOCONDRIAL

Pi ADP

MATRIZ MITOCONDRIAL

TI~TITITITITITITITI~TITITITITITITITITI
ESPACIO INTERMEMBRANOSO

~MMMMMMMMMMMMMililMMM \ MMMMMMMMMMMM~ilMil
W W W
WH'H'

TI~TITITITITITITITITITI~TITITI
H+ H+
Fig. 8-13. Representacin th la ATP sintasa en la mcmlmt
na mitocondriaJ interna.

H+

H+ H+ H+

Fig. 8-12. Un sector de la mitocondria que muestra los complejos proteicos integrantes de la cadena transportadora de electrones (o cadena respiratoria) y la ATP sin tasa. 1, NADH deshidrogenasa; JI, Succinato deshidrogenasa (y FAD); 111, Complejo b-e,; IV, Cirocromo oxidasa.

Las molculas de C0 2 formadas durante la descarboxilacin ox idativa y el ciclo de Krebs pasan al citosol, de ste al espacio extracelular y finalmente a la sangre, que las transporta a los pulmones para su eliminacin.

8-15. Las oxida ciones de I<J fosforrl acin oxidativa tie nen lugar e n la membrana interna de la mitocondria
La energa contenida en los NADH y en el FADH2 formados durante el ciclo de Krebs se transfiere al ATP despus de una serie de procesos que comienzan con la oxidacin de ambos dinucletidos. Los tomos de hidrgeno liberados de los NADH y del FADH2 como consecuencia de ambas oxidaciones se disocian en H y e-, del modo expresado en las siguientes ecuaciones:
NADH - > NAD + 1 H' + 2 e

FADH2 -> FAD + 2 H' + 2 e

Es importante sealar que los e- surgidos de estos procesos poseen un elevado potencial de transferencia, es decir, una gran cantidad de energa. As ingresan en la cadena transportadora de electrones, cuyos componentes fueron enumerados cuando se describi la membrana mitocondrial interna (fig. 8-12). Dado que cada componente de la cadena posee por los e- una afinidad mayor que su predecesor, los e- fluyen por ella en el siguiente orden: Para los e- cedidos por el NADH, el punto de entrada es la NADH deshidrogenasa (complejo I). Desde sta pasan a la ubiquinona, que los transfiere al complejo b-c 1 (complejo II). Los e- dejan este complejo e ingresan en el citocromo e, desde el cual pasan al ltimo eslabn de la cadena, la citocromo oxidasa (complejo IV). Durante este recorrido los e- consumen la mayor parte de su energa -ya se ver por qu- y al concluirlo retornan a la matriz. mitocondrial (fig. 8-12). Por su lado, los e- cedidos por el PADH2 tienen como punto de entrada la succinato deshidrogenasa (complejo II), que los transfiere a la ubiquinona, a partir de la cual fluyen por los restantes eslabones de la cadena en el mismo orden en que lo hacen los e- cedidos por el NADH. El potencial de transferencia de los e va disminuyendo en las sucesivas reacciones de oxidorreduccin que se producen a lo largo de la cadena respiratoria, de modo que en cada etapa los e- pasan a un estado <1 tll\'lllll' rnrrfa, la cual es bastante reducida cuando los ,. abandonan ,. nll,n, ,:ilul""'
di' Ju n ultun ,

La energa cedida por los e- es utilizada para transportar a los H (procedentes de los NADH y los FADH2 oxidados) desde la matriz mitocondrial hasta el espacio intermembranoso (fig. 8-12). La energa es requerida a causa de que ese transporte es acti vo, ya que Jos H son transferidos desde un medio en que se hallan menos concentrados a otro en que su concentracin es mayor. El mecanismo que hace posible el pasaje de los H no ha sido determinado. Slo se sabe que los H pasan a travs de los complejos principales de la cadena respiratoria - vase la figura 8-12-, los cuales actuaran como verdaderas bombas de H (cap. 3-25). La existencia de un gradiente de concentracin de H (o gradiente de pH) entre ambos lados de la membrana mitocondrial interna es acompaada por un gradiente de voltaje o potencial elctrico (cap. 3- 11 ), bastante ms positivo en la cara de la membrana que da al espacio intermembranoso. El gradiente electroqumico derivado de la suma de ambas fuerzas se traduce en la energa - llamada protonicomotora- que impulsa a los H a regresar a lamatriz mitocondrial, ahora por transporte pasivo. Los H retornan por el tnel de la ATP sintasa (figs. 8-10, 8-12 y 8-13). En sntesis, a medida que la energa suministrada por los e- es utilizada para transferir los H hacia el espacio intermembranoso, es absorbida por los propiosH+, que la retienen como energa protonicomotora. 8-16. La fosforilacin es mediada por la ATP sintasa En la seccin 8-11 se dijo que la ATP sintasa est integrada por dos unidades que poseen localizaciones y funciones diferentes. Una atraviesa la bicapa lipfdica (porcin transmembranosa o F0) y la otra da hacia la matriz mitocondrial (porcin F 1) (fig. 8-13). La porcin F0 forma un tnel que permite el regreso de los H a la matriz mitocondrial, mientras que la porcin F 1 es responsable de la fosforilacin, es decir, cataliza la sntesis de ATP a partir de ADP y P. Como se ve, el regreso de los H y la sntesis de ATP, si bien son procesos acoplados, se cumplen en dos Jugares diferentes de la ATP sintasa. La energa necesaria para la sntesis del ATP proviene de la energa protonicomotora contenida en los H+, que la van perdiendo a medida que regresan pasivamente a la matriz mitocondrial. En sntesis, la ATP sintasa se comporta como una turbina que convierte una clase de energa (la protonicomotora, derivada del gradiente electroqumico de los H) en otra ms provechosa para la clula, la energa qumica depositada entre el segundo y el tercer fosfato del ATP. Se generan aproximadamente 2,5 ATP por cada NADH procesado y 1,5 por cada FADH2 . 1(1 ATP sale ;1l l:ihlN ol por 1111 contratransportadl\ pasivo localizudo en lu IIH\IIIhr!ln ll tnilooudti ul r111o 11111', In A'I'I'-AUI' tl'nnsi01:11N11 (fig. X JO). l'o!'
1'1\diA'I'I'qlu'I!I IIII II VI.

H !lll l l ~ 1111

lll'l'llllllllllll lt rnl lt u'uwh il d,

172

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

8. L AS MITOCONDRIAS

173

CITOSOL Oihidroxiacetona 3-fosfato ----Fig. 8-14. Modo como acta la lanzadera de glicerol 3-fosfato para transportar a la mitocondria los electrones de los NADH generados durante la gluclisis.
Glicerol 3-fosfato deshidrogenasa

MITOCONDRIA Dihidroxiacetona 3-fosfato

Glicerol 3-fosfato des!Jidrogenasa

NADH W ~ NAO+

v-

Glicerol 3-fosfato -------- - --- Glicerol 3-fosfato La ATP sintasa puede tambin llamarse ATPasa, pues es capaz de hidrolizar ATP (a ADP y P) y con la energa liberada bombear H al espacio ntermembranoso a travs de la porcin F0 . No obstante, recibe el nombre de ATP sintasa porque en la matriz mitocondrial el cociente ATP/ADP normalmente es inferior a la unidad, lo cual lleva a la sntesis y no a la hidrlisis del ATP.
8-17 . Los H+ y los e- se combinan con el oxgeno atmosfrico para form ar agua

Cabe ahora indagar sobre el destino de los e , los cuales, Juego de perder una parte sustancial de su energa, abandonan la cadena respiratoria y regresan a la matriz mitocondrial. Se combinan con los H venidos del espacio intermembranoso y el 0 2 proveniente de la atmsfera, lo que da lugar a la formacin de Hz (figs. 8-10 y 8-12). La atraccin de Jos e por el 0 2 se debe a que poseen una gran afinidad por ste, mayor que la que tienen por la citocromo oxidasa, lugar por donde salen de la cadena respiratoria. Con la formacin del H20 culmina la fosforilacin oxidativa. Se necesitan 4 e y 4 I-f+ por cada 0 2 para que se produzcan 2 molculas de H20 , que es uno de los productos finales del metabolismo (el otro es el C0 2). El Hz pasa de la mitocondria al citosol, donde puede quedar retenida o salir al espacio extracelular.
8-1 8. Los NADH generados durante la gluclisis no ingresan en las mit ocondrias

Para que el NADH citoslico pueda ceder su energa al ATP, ingresan en la mitocondria slo sus e y H+, ya que no el propio NADH. Ello es posible gracias a ciertas molculas citoslicas que actan como " lanzaderas". As, una lanzadera, luego de captar dos e y un H del NADH (ms otro H del medio), los conduce a la mitocondria, donde los transfiere a otra molcula; luego retorna sin ellos al citosol, por lo que queda disponible para una nueva operacin. Una de las lanzaderas es el glicerol 3-fosfato, formado en el citosol al reducirse la dihidroxiacetona 3-fosfato (fig. 8-14). El glicerol 3-fosfato ingresa en el espacio intermembranoso y se pone en contacto con la membrana mitocondrial interna, ms precisamente con el FAD, al que le cede los dos e y los dos H+, es decir, una molcula de hidrgeno (H2 ). Se forma por lo tanto un FADH2 , que como sabemos cede sus e a la ubiquinona. En la seccin 8-1 6 vimos que cuando los e ingresan en la cadena respiratoria por la ubiquinona dan lugar a 1,5 ATP en lugar de 2,5. Existen adems lanzaderas de malato-aspartato (fig. 8-15). En este caso los dos e y el H del NADH citoslico (ms otro H+ del medio) reducen a un oxalacetato, que se convierte en malato. Este ingresa en la matriz mitocondrial y se reoxida a oxalacetato. El H2 salido del malato se usa para reducir un NAD+ a NADH (el H sobrante pasa al medio), que como se sabe produce tres ATP. El oxalacetato mitocondrial, dado que no puede atravesar la membrana interna de la mitocondria, para pasar al citosol se transforma en aspartato, que s la atraviesa. En el citosol el aspartato se reconvierte en oxalacetato, lo cual cierra el ciclo.
8-19. En presencia de 0 2, por cad a molcula de glucosa se generan 30 o 32 ATP

Hasta ahora hemos soslayado el destino de los NADH generados durante la gluclisis (seccin 8-6) (fig. 8-6). A di ferencia de los NADH formados en las mitocondrias, que rinden 2,5 ATP cada uno, los de la gluclisis a veces generan 1,5 ATP y a veces 2,5. El menor rendimiento energtico se debe a que el NADH citoslico no puede ingresar en la mitocondria, puesto que su membrana interna le es impermeable. CITOSOL Malato
Malato des!Jidrogenasa

MITOCONDRIA

y.
~

------- -----
NAO + NADH H+ NAO+ NAOH

Malato

w..--1

Malato deshidrogenasa

Oxalacetato
8-15. Modo como acta In lanzadera de rnalalo-uspar11 1t1 pam lrnnsporl ar a la rnito1'0 111 11 ill
lli~.

Oxalacetato

Aspartato aminotmn ~ r ~a

lo. (he ii'OIIl'S dt loN

f ,(' IU' I :uloj dnt llll l l '

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Para efectuar el clculo de la energa ganada en unidades de ATP al cabo de la oxidacin de una molcula de glucosa se debe sumar la energa producida e n el citosol a la gestada en la mitocondria. La gluclisis genera 4 molculas de ATP. Debido a que gasta 2, en esta etapa hay una ganancia neta de 2 ATP (fig. 8-6). Pero adems genera 2 NADH, que por ser citoslicos producen 1,5 o 2,5 ATP cada uno, 3 o 5 en total. As, el aporte de la gluclisis es de 5 o 7 ATP, 2 generados en el citosol y 3 o 5 en la mitocondria. Los dos piruvatos deri vados de la gluclisis entran en la mitocondria, donde por descarboxilacin oxidativa se convierten en dos acetilos. El proceso genera 2 NADH, uno por cada piruvato. Dado que por cada NADH la fosforilacin oxidativa produce 2,5 ATP, esta etapa rinde 5 ATP. En el ciclo de Krebs cada acetilo genera 1 ATP, 3 NADH y 1 PADH2, por lo que al cabo de las dos vueltas que se necesitan para metabolizar a los dos acetilos surgen 2 ATP, 6 NADH y 2 FADH2 Dado que por cada NADH la fosforilaci n oxidativa genera 2,5 ATP, y por cada FADH 2, 1,5 ATP, a los 2 ATP surgidos de las dos vueltas del ciclo de Krebs deben sumrseles los 15 ATP aportados por los 6 NADH ms los 3 ATP aportados por los 2 FADH2, lo que hace un total de 20 ATP. Sumados a los 5 o 7 ATP de la gluclisis y a los 5 ATP de la descarboxilacin oxidativa, la ganancia de energa por molcula de glucosa es de 30 o 32 ATP. on1 prcsc esta produr in con los exiguos 2 ATP generados en el citosol y Sl ' l eud r~ uua idl'll dt la iutpnrlan: ia de la rnitocomh:l,cn la provisin de
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FUNDAMENTOS DE BTOLOGIA CELULAR Y MOLEC ULAR

8. LAS MJTOCONDRI AS

17.

Respecto de los cidos grasos, si bien en su degradaci n no existen procesos equivalentes a la gluclisis y a la descarboxilacin o xidativa (fig. 8-5), aportan ms energa que la glucosa debido a los NADH y los FADH2 suplementarios producidos durante la ~-ox idacin de sus cadenas.

8-20. En las clulas muscula res el piruvato puede convert irse en lactato
Las clulas musculares, cuando sobrepasan un determinado nivel de actividad, agotan el 0 2 atmosfrico que les llega mediante los glbulos rojos, situacin que es normal. Ante la falta de 0 2 , el piruvato, en lugar de convertirse en el grupo acetilo de la acetil CoA, se transforma en lactato. Este proceso metablico se conoce con el nombre de fermentacin tctica. Como es obvio, el ciclo de Krebs y la fosforilaci n oxidativa se omiten. El lactato producido en las clulas musculares pasa a la sangre y llega al hgado. En los hepatocitos - va piruvato- el lactato se convierte en glucosa, que utilizar la clula muscular si contina demandando energa.

8- 21. En las mitocondrias de las clulas de la grasa parda la energa generada por las oxidaciones se disipa en f orma de ca lor Si la energa protonicomotora de los H situados en el espacio intermembranoso no se rescatara para formar ATP, los H, al volver a la matriz mitocondrial, igual se uniran a los e- y al 0 2 para formar H2 0 , pero la energa protonicomotora, al cabo de la reaccin, se convertira en energa trmica, es decir, se disipara como calor. Esto es lo que ocurre en las clulas adiposas de la denominada grasa p arda, cuyas mitocondrias son incapaces de transferir la energa protonicomotora al ATP. Es que en la membrana interna de estas mitocondrias existe un transportador de H llamado termogenina, el cual, debido a que no posee la porci n F 1 -es decir, la funcin enzimtica de la ATP sintasa-, permite el regreso de los H a la matriz mitocondrial sin que su energa sea aprovechada para formar ATP. En consecuencia, la energa protonicomo tora, al reaccionar los H con los e- y el 0 2 atmosfrico durante la formacin de H 2 0 , se disipa como calor. La grasa parda es un tejido que poseen los recin nacidos en la regin interescapular. Si el nio nace en un medio muy fro, los cidos grasos de los triacilglicero les depositados en las clulas de la grasa parda se degradan y generan calor en lugar de ATP. Como vemos, la grasa parda puede ser vital en el momento del nacimiento, al permitir una rpida adaptacin de los recin nacidos a las bajas te mperatu ras.

calizada en la membrana mitocondrial interna lo convierte enpregnenolona. Esta sale de la mitocondria e ingresa en el RE (cap. 7-27), donde contina su metabolismo mediante diversas enzimas que actan secuencialmente. En el caso de la corteza suprarrenal, dan lugar a desoxicorticosterona, desoxicortisol y al andrgeno androstenodiona. Los dos primeros esteroides, luego de abandonar el RE, regresan a la mitocondria, donde la 11 ~-h idroxi lasa convierte a la desoxicorticosterona en corticosterona y ADN al desoxicortisol en cortisol. Estos glucocorticoides son producidos en las clulas de la zona fasciculada de la corteza suprarrenal. Posteriormente, en el citoplasma de las clulas de la zona glomerulosa, por accin de la 18-hidroxilasa y la 18-hidroxiesteroide oxidasa, la cort.icosterona se convierte en el mineralocorticoide aldosterona. La mayor parte de los pasos metablicos mencionados son oxidaciones, y en su transcurso una familia de citocromos presentes en la mitocondria - los citocromos P450- actan como receptores de e-. Muerte celular. En el captulo 22-4 se analiza la participacin de la mitocondria en la muerte celular programada.

Fig. 8-16. Reproduccin d" las mitocondrias.

REPRODUCCION DE LAS MITOCON DRIAS

8-23. Las mitocondrias se reproduce n para duplica r su nmero antes de cad a divisi n celular y para reemplazar a las que desaparecen
En las clulas que no se multiplican o que poseen interfases prolongadas, las mitocondrias envejecen y son degradadas por fagolisosomas (cap. 7-35); no o bstante, su nmero se mantiene estable debido a que se forman otras mitocondrias. Adems, antes que las clulas se dividan, todos sus componentes se duplican, incluidas las mitocondrias. A continuacin describiremos el mecanismo q ue hace posible que las mitocondras se fabriquen en ambas situaciones de demanda. La reproduccin de las mitocondrias no se produce a consecuencia de un ensamblaje espontneo de Jos componentes q ue las integran sino por la divisin de mitocondrias preexistentes, para lo cual previamente duplican su tamao. Este proceso se denomina fisin binaria. En la figura 8- 16 pueden observarse las etapas de crecimiento y de di visin mitocondrial. L a divisin de las mitocondrias tiene lugar durante todo el ciclo celular, tanto en la interfase como en la mitosis. Adems, no todas las mitocondrias se multiplican, y por ello algunas deben dividirse repetidas veces en el curso de un mismo ciclo para compensar la falta de divisin por parte de otras.

8-22. Las mitocond rias desempean otras f unciones

Remocin de Ca2 del citosol. Normalmente esta fu ncin est a cargo del RE (cap. 7-26). No obstante, cuando la concentracin de Ca 2 aumenta en el citosol a niveles pelig rosos para la clula, se po ne en accin una Ca2 -ATPasa localizada en la membrana interna de las mitocondrias, que al bombear el Ca 2 hacia la matriz mitocondriallo retira del citosol. Sntesis d e aminocidos. A partir de determinadas molculas intermediarias del ciclo de Krebs, en las mitocondrias de los hepatocitos tienen lugar algunos pasos metablicos que llevan a la sntesis de varios aminocidos. Sntesis de ester oid es. En alg unas clulas de la corteza suprarrenal, de los ovarios y de los testculos, la mitocondria participa en la sntesis de d iv rsos si roid s ( l'nn in slcroidognica). P.n prim r 1 nnino, l-'1 colc.~tcml cap1 :1
cl11 fll ll'

8- 24. Los f osfolipidos de las membranas mit oeondriales son provistos por la membrana del RE
La gnesis de nuevas mitocondrias requiere que se d uplique el rea de su membrana interna y su membrana externa, para lo cual deben sumarse nuevos f'o sf'o lfpidos a s11s hi :qms lipfd i;as. Al igual que con las otras membranas di' la d luln, l11s i'o ::J .,I ipi.Jo. ;.o11 provislus por l:i'n,ll' lllhl':nla clvl 1~1\. clon oll ' /.1' fll' i/ 1!111 (1 '1 1( 1/1 1 > 1 l lll

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176

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

8. LAS MITOCONDRI AS

177

Membrana del retculo endoplasmtico

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CITOSOL

Fig. 8-17. Transferencia de fosfolpidos desde la bicapa lipdica del retculo endoplasmtico a la bicapa lipdica de
la membrana mitocondrial extema.

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Protena intercambiadora "descargada'
1

externa

Para tomarlos de l RE, la mitocondria recurre a protenas citoslicas llamadas intercambiadoras, que los sustraen de la membrana del retculo y los descargan en la monocapa citoslica de la membrana mitocondrial externa del modo ilustrado en la figura 8-17. Una parte de los fosfolpidos pasa a la monocapa opuesta gracias a movimientos de "fl ip-flop" (cap. 3-3). Finalmente, el traspaso de fosfolpidos de la membrana ex terna a la me mbrana interna se produce a travs de puntos de contacto que se crean entre ambas membranas para tal fin. Algunos glicerofosfolpidos que llegan a la membrana mitocondrial nterna experimentan modificacio nes. Por ejemplo, se unen de a dos y forman difosfatidilglicerol (seccin 8-1 1).

3) Es muy pequeo, pues posee 37 genes solamente. En casi todos los tipos celulares la suma de los ADN tomados de todas las mitocondrias representa no ms del .1% del ADN nuclear. 4) Posee muy pocas y a la vez muy cortas secuencias no gnicas, es decir, que no se transcriben. 5) Genera 22 tipos de ARNt, en lugar de los 31 que transcribe el ADN del ncleo. 6) Las dos clases de ARNr (12S y 16S) que codifica dan lugar a ribosomas que poseen un coeficiente de sedimentacin de 55S, inferior al de los ribosomas de los procariotas (70S) y del citosol (80S). 7) En su cdigo gentico existen 4 codones cuyas instrucciones difieren de las de sus pares del ADN nuclear (cap. 13-4). Se trata de los codones AGA, AGG, AUA y UGA. En el ADN nuclear los dos primeros corresponden al aminocido arginina, mientras que en el ADN mitocondrial se comportan como codones de terminacin. En el ADN nuclear el codn AUA determina a la isoleucina, y en el ADN m itocondrial a la metionina. En el ADN nuclear el codn UGA es un codn de terminacin y en el ADN mitocondrial determina al triptfano. 8) Se transcriben sus dos cadenas. Los genes de los 2 ARNr, de 14 ARNt y de 12 ARNm se localizan en una de las cadenas del ADN mitocondrial, mientras que los genes restantes, correspondientes a 8 ARNt y a un A RNm, se localizan en la otra cadena. 9) Las molculas de ARN que transcribe el ADN se procesan mientras se sintetizan. El procesamiento comprende la remocin de partes de los ARN. 10) Como se seal, la mitocondria posee varias copias de un mismo ADN y no dos como el ADN nuclear. Debe sealarse que las mitocondrias de cualquier individuo son de origen materno, pues todas provienen del ovocito (cap. 19-19).

Fig. 8-18. A. ADN circular de

la mitocondria humana en el

8-25. Algun as prote n as mitocond riales se fab rican e n la mat riz

La mayor parte de las protenas de la mitocondria provienen del citosol, en tanto unas pocas se producen en el territorio del propio organoide, que cuenta con los recursos para elaborarlas. Efectivamente, la mitocondria posee varias unidades idnticas de un ADN circular, a partir del c ual se transcriben los genes de 13 ARNm (base para la sntesis de otras tantas protenas), de 22 tipos de ARNt y de 2 clases de ARNr (uno correspondiente a la subunidad mayor de los ribosomas mitocondriales y otro a la subunidad menor). Todas estas molculas se encuentran en la matriz mtocondrial; las de los ADN circulares se hallan adosadas a la membrana interna del organoide (figs. 8-9 y 8-1 6). Con aminocidos llegados desde el citosol, en los ribosomas mitocondriales se sintetizan las siguientes 13 protenas, la mayora pertenecientes a la cadena respiratoria: siete subunidades del complejo NADH deshidrogenasa, , tres del complejo citocromo oxidasa y dos subunidauna del complejo b-c 1 des de la ATP sin tasa.

8-27. La s ntesis de la s protenas mtocondrales requiere u na adecuada coordinacin

Aunque la mitocondria posee ADN, ARN m, ARNt y ribosomas propios, las protenas que fa brica son muy pocas, 13 en total. Por consiguiente, lamayor parte de las que necesila para su reproduccin debe importarlas desde el

que se representan los 37 genes presentes en sus dos cadenas. Se sealan los genes de los 22 ARNt (rojo), de los 2 ARNr (marrn) y de los 13 ARNm. Estos ltimos corresponden a dos subunidades de la ATP sintasa (naranja), a siete del complejo NADH deshidrogenasa (verde), a una del complejo b-e , (celeste) y a tres del complejo citocromo oxidasa (viole/a). Puede verse tambin el rea donde se halla el origen de replicacin (grisado). B. ADN mitocondrial de una clula de rata observado con la tcnica de extendido y sombreado metlico. (Cortesa de B. Stevens.)

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8- 26. El ADN m itocondria l es d iferente del ADN nuclear

El ADN mitocondrial presenta las siguientes particularidades que lo diferencian del ADN nuclear (fig. 8-18): 1) Es circular y carece de histonas. 2) Posee un solo origen de replicacin (cap. 17-3), en 1 cual una eh- las Oitticn:r.:t a sinteli:r.ars(' :111IC:s ljtll' la olr:t 111 l ~: u , 11 Jllnlil ,,. , 11 ':tden:ts hijas C 11111110 dilc('lllt' Jl i'II IJ'lt'illlll 11111 i 11 /.l 'j' lllll li l ,

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

8. LAS MITOCONDRIAS

1711

ATP~

. ADP

citosol. Ms an, debido a esa doble procedencia se requiere una perfecta coordinacin entre las actividades de los genomas mitocondrial y nuclear a fin de que todos los componentes de la mitocondria sean producidos en las proporciones adecuadas. Las protenas importadas son sintetizadas en ribosomas citoslicos libres (no asociados al RE). Entre las ms importantes se encuentran las enzimas del complejo piruvato deshidrogenasa, las responsables del ciclo de Krebs y de la P-oxidacin de los cidos grasos, muchas de las protenas que participan en la fosforilacin oxidativa, los canales inicos y las permeasas de la membrana mitocondrial interna, la ADN polimerasa, la ARN polimerasa, las protenas de los ribosomas mitocondriales, etctera. 8-28. La incorporacin de protenas a las membranas y a los compartimi entos mit ocondriales es el resultado de un proceso complejo Conforme surgen de los ribosomas, las protenas mitocondriales producidas en el citosol se asocian con chaperonas de la familia hsp70. Estas mantienen desplegadas a las protenas hasta que aniban a la mitocondria, a cuyo cuerpo no podran incorporarse si llegaran plegadas (cap. 4-5). El pasaje de las protenas a travs de las membranas externa e interna de la mitocondria es un proceso complejo. Cuando una de ellas se pone en contacto con la membrana mitocondrial externa, se desprende de las chaperonas hsp70 citoslicas, atraviesa ambas membranas y se asocia con chaperonas ligadas a la membrana mitocondrial interna. Estas chaperonas, que tambin pertenecen a la familia hsp70, atraen a la protena hacia el interior de la mitocondria por un mecanismo que consume ATP, tal vez de la manera mostrada en la figura 8- J9. Una vez en la matriz mitocondrial, la protena se pliega sin ayuda o con la asistencia de una chaperona de la familia hsp60 (cap. 4-5). Las protenas se incorporan a la mitocondria a travs de los translocones denominados con las siglas TOM y TIM (por translocase of the outer y of the inner mitochondrial membrane), presentes en las membranas mitocondriales externa e intema, respectivamente (cap. 7-12). Como muestran las figuras 8-19 y 8-20, para que la protenas puedan ingresar es necesario que ambos translocones estn juntos y sus luces alineadas, Jo que obliga a las membranas externa e interna a acercarse mutuamente. Todas las protenas importadas desde el citosol incluyen en su extremo amino un pptido seal que las conduce hasta la mitocondria y que es reconocido por un receptor especfico asociado al translocn externo (caps. 4-4 y 16-17) (tabla 4-1 y fig. 8-20). Si el paradero de la protena es la matriz mitocondrial, apenas atraviesa los translocones pierde el pptido seal y se libera en su interior (el pptido seal es escindido por una proteasa de la matriz) (fig. 8-20). En cambio, las protenas destinadas a las membranas externa e interna poseen ~eale~ adicionales, distinta~ entr ~r. las n;tks n1 i 'llrn a ambos lipos tk pro1 d 11as c 11 la lllt' llti>rmta ttlt' < '<111'\'SJH>II<it- .

Trans locacin

Escisin del pptido seal

Plegamiento

8-29. Probablemente las mitocondri as deriven de bact erias aerbicas Vimos que las mitocondrias se reproducen por fisin binaria, como lo hacen las bacterias. Esta no es la nica semejanza con los procariotas; se parecen tambin en sus formas y medidas y porque poseen varios componentes comunes. Tales semejanzas han llevado a sugerir que las mitocondrias son un producto evolutivo de bacterias aerbicas. Sustentan esta teora otros supuestos. As, se cree que las plimeras clulas Testre se hizo rica eucariotas eran anaerbicas y que cuando la atmsfera te1 en oxgeno incorporaron en sus citoplasmas bacterias aerbicas que, tras sucesivos cambios adaptativos, se convirtieron en las actuales mitocondrias. La simbiosis les permiti a las clulas eucariotas aprovechar el oxgeno atmosfrico, por lo que comenzaron a producir una mayor cantidad de energa a partir de la misma cantidad de alimentos. Paralelamente, la membrana plasmtica de la clula eucariota qued eximida de realizar procesos energticos y pudo concentrarse en otras actividades, como controlar la transferencia de solutos, posibilitar la entrada y la salida de macromolculas, recibir y emitir seales, etctera.

Fig. 8-20. Modo como ingrc

sa en la matriz mitocondri:ll

una protena procedente del c itosol.

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Los cloroplastos
Energa celular TI

9-1. Los plstidos son los organoides ms caracteristicos de la clula vegetal

Los plstidos son organoides especiales de las clulas vegetales. Los ms comunes y de mayor importancia biolgica son los cloroplastos (fig. 1-6), que junto con las mitocondrias constituyen las maquinarias bioqumicas que se encargan de producir las transformaciones energticas necesarias para mantener las funciones de las clulas. En el caso de .los cloroplastos, atrapan la energa electromagntica derivada de la luz solar y la convierten en energa qumica mediante un proceso llamado fotosntesis. Luego utilizan esa energa junto con el C02 atmosfrico para sintetizar varias clases de molculas, algunas de las cuales sirven de alimento para las mismas plantas y para Jos organismos hetertrofos herbvoros (cap. 1-4) (fig. l-2). Los cloroplastos se caracterizan por poseer pigmentos (clorofilas, carotenoides) y, como se dijo, en ellos tiene lugar la fotosntesis. Por este proceso producen oxgeno y la mayor parte de la energa qumica utilizada por los organismos vivos. La vida se mantiene gracias a los cloroplastos. Sin ellos no habra plantas ni animales, ya que estos ltimos se alimentan de lo producido por los vegetales; as, puede decirse que cada molcula de oxgeno usada en la respiracin y cada tomo de carbono presente en sus cuerpos pasaron alguna vez por un cloroplasto. Adems de los cloroplastos existen otros plstidos con pigmentos, agrupados bajo la denominacin genrica de cromoplastos. En los ptalos, frutos y races de ciertas plantas superiores hay cromoplastos amarillos o anaranjados. En general, stos tienen menor contenido de clorofila y por Jo tanto menor actividad fotosinttica. El color rojo del tomate maduro se debe a la presencia de cromoplastos cuyo pigmento rojo, llamado licopeno, pertenece al grupo de los carotenoides. En las algas rojas existen cromoplastos que contienen, adems de clorofila a y carotenoides, un pigmento rojo y un pigmento azul, la ficoeritrina y la ficocianina, respectivamente. Otros plstidos son incoloros. Se denominan leucoplastos y se encuentran tanto en las clulas embrionarias como en las clulas de los rganos de las plantas que no reciben luz. Debe sealarse que los plstidos de las clulas de los cotiledones y de los esbozos foliares del tallo inicialmente son incoloros, pero ms tarde comienzan a acumular clorofila y adquieren el color verde caracterstico de los cloroplastos. Sin embargo, las clulas diferenciadas poseen lcucoplastos verdad ros qm nunca se vuelven verdes. Algunos leucoplastos a los que se 1s du ,. """'h11 el nmiloplustos- producen y acumulan grlllll<is dr ahnid6n. ' ll i' ' ' 11 ,, di>IIIIIIIIIIIN, l ila~,.;oidcs y pi ~F(~ ntos y son muy
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182

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOL ECULAR

9 . LOS CLOROPLASTOS

183

9-2. Las caractersticas de los cloroplastos va ra n seg n los tipos celu la res Los cloroplastos se localizan principalmente en las clulas del mesfilo, tejido que se encuentra en las hojas de las plantas superiores y en las algas. Cada clula contiene un nmero considerable de cloroplastos, de forma esfrica, ovoide o discoidal. Su tamao vara considerablemente, pero en promedio tienen un dimetro de 4 a 6 .m. Esta medida suele ser constante para cada tipo celular, aunque es mucho mayor en las clul as poliploides que en las diploides. En general, en las plantas que crecen a la sombra los cloroplastos son ms grandes y ms ricos en clorofila. El nmero de cloroplastos se mantiene relati va mente constante en los diversos vegetales. Las algas poseen a menudo un solo cloroplasto muy voluminoso. En las plantas superiores existen entre 20 y 40 por clula. En las hojas de algunas especies se ha calculado que hay alrededor de 400.000 cloroplastos por mm 2 . Si su nmero es insuficiente, aumentan por divisin; si es excesivo, se reducen por degeneracin. En cloroplastos aislados de espinaca se han verificado cambios de forma y volumen por accin de la luz. El volumen disminuye notablemente cuando son iluminados, aunque este efecto es reversible.

Membrana plasmtica

Pared celular

lntergrana

9 - 3. La estructu ra de los clo roplast os incluye la envolt ura, la estrom a y los t ilacoides E l cloroplasto posee tres componentes principales: la envoltura, la estroma y los tilacoides (fi g. 9-1). La envoltura de los cloroplastos presenta dos membranas -una externa y otra interna- , a travs de las cuales se producen los intercambios moleculares con el citosol. En el cloroplasto maduro - a diferencia de su predecesor- no se observa continuidad entre la membrana interna y los tilacoides. Ambas membranas carecen de clorofila, pero tienen color amarillo por la presencia de pigme ntos carotenoides. Contienen solamente el 2% de las protenas del cloroplasto. La estroma representa la mayor parte del cloroplasto y en ella se encuentran inmersos los tilacoides. Est compuesta principalmente por protenas. Contiene ADN y tambin ARN, que intervienen en la sntesis de algunas de las protenas estructurales y enzimticas del cloroplasto. Es en la estroma donde se produce la fijacin del C02 -es decir, la produccin de hidratos de carbono-, as como la sntesis de algunos cidos grasos y protenas. Los tilacoides constituyen sacos aplanados agmpados como pilas de monedas. Cada pila de tilacoides recibe el nombre de granum (plural, grana), y a los elementos individuales que forman las pil as se los llama tilacoides de los grana o intergrana (figs. 9-1 y 9-2). Adems hay tilacoides que atraviesan la estroma y que conectan entre s a dos grana; se los denomina tilacoides de la estroma (figs. 9-1, 9-2 y 9-3). Empero, la descripcin antedicha es engaosa, pues en rigor existen tilacoides pequeos - que poseen un dimetro promedio de 1 J.m (la mayora de los tilacoides de los grana)- y tilacoides grandes y alargados, compartidos por dos grana. En stos se distinguen tres sectores: dos extremos que aparentan ser tilacoides de los grana, y un segmento intermedio que corresponde al tilacoide de la estroma. La pared de los tilacoides - llamada membrana tilacoide- es una bicapa lipfdi a poblada de pruld nas y ele otras molculas, casi todas involucradas 1' 11 l!is I'I 'Hctioncs qrr r, Ji,n, dr In r.,losfnlcsis. Esta pared,~cpant el comparti"''."'" ,,. 1..:. l il:" '" " l' ' ,,' " , l ~lndo tihuui<l<' tk la tsl rorna. /\1t'~ 'l ll l , ~ v ld ~ 111 111'1 plll 1 1 11 ll~tl h 111 I JI II
1

Fig. 9-2. M icrograffa electr nica del cloroplasto. Trtnse de un corte longitudinal que muestra los g ranu y los ti lacoides de la estroma (intergrana). (Cortesa de M. Cresti y M . Wurtz.)

Membrana externa

Membrana interna

Espacio tilacoide

F 'ig. 9-1. Arrihn. Esqucmntridimcnsionnl d 1

drlr lrl ttill.<l h 1,

loroplmll11, t,:on Nl l '

ui m i pJdt'"'

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

9. LOS CLOROPLASTOS

185

todos los tilacoides estn interconectadas, de modo que existira un solo espacio tilacoide (fig. 9-4). Por lo tanto, el cloroplasto tendra tres compartimientos: el intermembranoso (entre la membrana externa y la membrana interna), la estroma (entre la membrana interna y la membrana tilacoide) y el espacio tilacoide. Se ver que desde el punto de vista funcional el espacio tilacoide equivale a la matriz mitocondrial.

FOTOSINTESIS
9-4. En la fotos ntesis la energa lumnica se convierte en energa qumica La rotosntesis es una de las funciones biolgicas fundamentales de las clulas vegetales. Por medio de la clorofila contenida en los cloroplastos, los vegetales verdes son capaces de absorber la energa que la luz solar emite como fotones y transformarla en energa qumica. Esta se acumula en las uniones qumicas entre los tomos de las molculas alimenticias que se forman con el concurso del C02 atmosfrico. En el captulo 8-15 se analiz la fosforilacin oxidatva que se cumple en la rnitocondria, mediante la cual se procesa la energa contenida en las sustancias alimenticias. La fotosntesis es, en cierta medida, un proceso inverso, de modo que los cloroplastos y las mitocondrias poseen muchas semejanzas estructurales y funcionales. En la fotosntesis la reaccin principal es:
Fig. 9-3. Micrografa electrnica del cloroplasto que muestra dos grana y los tilacoides de la estroma que los conectan. Las flechas sealan la cavidad del compartimiento membranoso de Jos grana, es decir, el espacio tilacoide. 240.000x. (Cortesa de l. Nir y D. C. Pease.) n C02 + n H,O
-7

Fig. 9-4. Esquema que ilustra la continuidad del espacio tilacoide y cmo se halla separado de la estroma.

Es importante sealar que en la reaccin (1) el H20 es el dador de H2 (e y H) y de 0 2 , mientras que el C02 acta como aceptador de H2 . Los hidratos de carbono formados por la fotosntesis son sacridos solubles que circulan por -los distintos tejidos de la planta o se acumulan como granos de almidn en los cloroplastos (fig. 9-2) o, ms frecuentemente, en los amiloplastos. Adns, como corolario de diversas reacciones que involucran la participacin de diferentes sistemas enzimticos, el material surgido de la fotosntesis puede convertirse -por lo general fuera de los plstidosen un polisacrido estructural o en lpidos o protenas de la planta. 9-5. La clorofila es un pigmento capaz de ser excitado por la luz La luz visible conesponde a una pequea porcin del espectro de radiacin electromagntica total y comprende las longitudes de onda de 400 a 700 nm. La energa contenida en esas longitudes es transmitida mediante unidades denominadas fotones. Un fotn contiene un cuanto de energa. Esto se expresa con la ecuacin enunciada por Max Planck en el ao 1900:
he

luz-clorofila

-7

(CH20), + n 0 2

1)

que consiste en la combinacin de C0 2 y H20 para formar hidratos de carbono con liberacin de 0 2 Se ha calculado que cada molcula de C0 2 de la atmsfera se incorpora a un vegetal cada 200 aos, y que el 0 2 del aire es renovado por las plantas cada 2.000 aos. Sin plantas no existira 0 2 en la atmsfera terrestre y la vida sera casi imposible.

E= -

"donde h es la constante de Planck (1,585 x 10 34 cal/seg), e es la velocidad de la luz (3 x 10 10 cm/seg) y le es la longitud de onda de la radiacin. De esta ecuacin se deduce que los fotones con longitudes de onda ms cortas tienen mayor energa. Los pigmentos como la clorofila estn particularmente adaptados para ser excilados por la luz. As, los fotones que absorbe la clorofila excitan a ciertos electrones, que al desplazarse de la rbita de sus tomos adquieren un nivel de energa mayor, es decir, un elevado potencial de transferencia. Esta energa puede disiparse en forma de calor o de radiacin lumnica (fluorescencia), ser transferida de una molcula a otra por resonancia, o convertirse en energa qumica. En la fotosntesis predominan los dos ltimos procesos. 9- 6. La fotos nt esis comprende reacciones fotoq u im icas y reacciones en la oscuridad La fotosntesis comprende una serie compleja de reacciones, algunas de las cuales tienen lugar exclusivamente en presencia de luz y otras se producen en la oscuridad (aunque stas tambin pueden ocurrir en presencia de luz). Se las llama, respectivamente, reacciones lumnicas (o fotoqumicas) y reacciones en la oscuridad. / En las fases finales de las reacciones fotoqumicas se forma NADPH (a parlir <k Ni\DP . e y 11 ') y i\'J'I' (a parlir de ADP y fos(ato). Ambos proce::o :: lt'IIH"cluu a los qtll' t U 'IIII ~n nnlllln lnh'll fl' en las nlitoJondrias. Hn la fofo ..
j( IJI ' 'II'. l.1 lnlll lllt ltlllh

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

9. LOS CLOROPLASTOS

187

Debe recordarse que en la fosforilacin oxidaliva -en las mitocondriasel flujo de electrones viaja desde el NADH (o el FADH2 ) hacia el 0 2 y se genera H 2 0 (cap. 8-17). En la fotosntesis ocurre el fenmeno opuesto, pues los electrones fluyen desde el H2 0 -previamente disociada en 0 2 , H y e-hasta el NADPH. Las reacciones en la oscuridad completan el ciclo fotosinttico. En su transcurso la energa contenida en Jos ATP y en los NADPH es aprovechada por la clula vegetal para elaborar diversas molculas alimenticias con el co2 tomado de la atmsfera. 9-7. Existen varias cl ases de clorof ilas Las reacciones fotoqumicas se producen en la membrana tilacoide, cuya bicapa lipdica contiene una serie de complejos proteicos transmembranosos, algunos asociados a pigmentos. Estos son los encargados de capturar la energa lumnica solar. Existen varios tipos, cada uno de ellos capaz de absorber una gama particular de longitudes de onda del espectro lumnico. Entre los pigmentos se destacan las clorofilas, molculas asimtricas que contienen una cabeza hidroflica integrada por cuatro anillos pirrlicos unidos por un tomo de magnesio, y una cola hidrofl ica (fitol) ligada a uno de los anillos CH,CH, (fig. 9-5). Otros pigmentos presentes en la membrana tilacoide son los car otenoides (xantfilas y carotenos) (fig. 9-5), que quedan ocultos por el color verde de la clorofila. CH, QeH, Cuando en otoo sta disminuye se ponen de manifiesCH 3 to los colores amarillos, anaranjados y rojos de los caCH CH 3 / rotenoides. HC Existen dos clases de clorofila, identificadas con las e-eH, letras a y b. En la clorofila b , un grupo -CHO reempla/ za a un -CH 3 de la clorofila a (marcado con un crculo He" eH en la figura 9-5). Por otra parte, hay varias clases de / clorofila a, caracterizadas por sus composiciones quHe micas, sus espectros de absorcin de la luz y sus funcioe -eH, nes. Se destacan tres: una muy abundante, encargada de He/ captar la energa lumnica, y otras dos especiales -meeH nos numerosas-, llamadas P680 y P700 (P por pigmento; He/ el nmero identifica la longitud de onda que cada pigeH mento absorbe ms eficientemente).

ESTROMA

ATP

ESPACIO TILACOIDE

H,e -eH H,e

CH,

H,e

o-c 1 o
eH, 1 eH 1 e-eH, 1 eH, CH, eH, 1 eH-eH, 1 CH 2 eH, 1 eH, eH- eH, 1 CH 2 1 eH, 1 eH, eH-CH, CH 3
Clorofila a
Fl~~
~(
1

"

hacia la estroma y se encarga de capturar la luz, y el centro de reaccin, que da hacia el espacio tilacoide. La antena ha sido comparada con un embudo y su pared se compone de agregados de protenas y pigmentos, especialmente de clorofila a, clorofila b y carotenoides. Por su parte, el centro de reaccin vontiene varias protenas asociadas a molculas de clorofila de tipo P680 . Complejo b -f. Este complejo contiene una protena de 17 kDa asociada a los citocromos by f, y una protena con un centro Fe-S. Fotosistema l. Es un complejo molecular que, como el fotosistema II, pos e una antena captadora de energa lumnica, integrada por protenas, clo' o rila a, clorofila b y carotenoides, y un centro de reaccin, compuesto por protenas y molculas de clorofila de tipo P700 . NADP reducta sa. Este complejo reduce al NADP tomado de la estroma Y lo convierte en NADPH. Los H necesarios para la reduccin pertenecen a la estroma. Como se observa en la figura 9-6, entre estos complejos se encuentran va' ins molculas intermediarias: 1) la plastoquinona, entre el fotosistema II y ,1complejo b-f (equivale a la ubiquinona de las mitocondrias); 2) una peque\; protena llamada plastocianina, entre el complejo b-f y el fotosistema I, y \) la ferredoxina, entre el fotosistema I y la NA DP reductasa. '1 9. La membra na de los ti lacoides posee ATP sintasa En las inmediaciones de las cadenas responsables de las reacciones fotoqu micas se encuentra la ATP sintasa, la cual -como en la mitocondriaposce una porcin transmembranosa F0, por la que pasan protones, y una por, que genera ATP a partir de ADP y fosfato (cap. 8-16). La porcin F 1 < ' i<II F 1 dn hacia la estroma del cloroplasto (fig. 9-6). '1 10. Los fotones excitan a las clorofilas de los fotosstemas 11 y 1 Cuando un fotn excita a una molcula de clorofila, uno de los electrones k sla ltima es sacado de su rbita molecular para ser transferido a otra de '' 'nyor energa. 1~~~ e l caso de las clorofilas situadas en la antena del fotosistema II, la enerr In del electrn energizado es transferida por resonancia a uno de los electro'"'' d la clorofila P680 , localizada, como vimos, en el centro de reaccin. El "'"'"" ll!clrn energizado abandona el fotosistema II y pasa al siguiente eslll lootlt d la cadena de reacciones fotoqumicas, la plastoquinona. Mientras lltlllto, llln li;utl e una rcac~.:i<ll q11mica no m~y' bien comprendida (en la que lltl< 't vlt'll<'ll fl lo111os dl 111:1111'""'""). dos 111pl culas d 111 situadas '11 el sPHi llllli l hP;ch "lclll l'~~ llul1d 11

Fig. 9-6. Estructura molecular de la membrana ti lacoide. La lnea gruesa marca el flujo de electrones a travs de una cadena de complejos moleculares. La energa lumnica es captada por el fotosistema II. Se produce la fotlisis del H20 en el interior del tilacoide y los electrones son transmitidos a la plastoquinona (PQ). De all pasan al com-

plejo b-f y luego a la plastocianina (PC). Esta los transfiere al fotosistema l, que absorbe luz. Luego los elcctrone~ son transportados a la ferredoxina (/(/) y a la NADP rcducrasa, que reduce el NADP a NADPH. La acumulacin de protones (f/') en el interior del tilacoide crea
un gradiente con respecto a la

estroma, de modo que los H

salen a lravs de la ATP sinta-

"
"
/

sa y se produce A TP. (Cortesa de L. Bogomd; modificado.)

1 1

"
"
"

1
1

eH,-e" CH He/ eH eH -C/

l

9-8. En la membrana de los til aco ides se encuentran los complejos moleculares responsable s de las reacciones fotoqu micas As como en la membrana interna de las mitocondrias hay cadenas transportadoras de electrones que dan Jugar a la fosfori!acin oxidativa, en la membrana tilacoide de los cloroplastos tambin hay cadenas de complejos moleculares, que aqu son responsables de las reacciones fotoqumicas. Cada una de las cadenas est integrada por los siguientes eslabones, los cuales sern mencionados en el orden n que se ac1iva11 (l'i. ') 6). Futusist('mn 11. 1\s 1111 ro111pl<' l" 111"1''""l111 '1'"' 1'" :-.tT du ~ 'lt T1oH '~ t Luutll! ' lll t ' 'lil1111dtl"' 1!1 ,,,,,,,,, qtw d 1 1

eH eH,

He eH, eH,

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~-Ca rote no

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

9. LOS CLOROPLASTOS

189

H,c-o-- HO-tH tooH

3-Fosfoglicerato

c~ o, H~:~:
Ribulos corboxll

Se requieren 8 fotones para liberar 2 molculas de 0 2 (ms 8 e y 8 H+) del H20. La energa de esos fotones, transferida a los e-, al alcanzar stos la NADP reductasa genera 2 NADPH, mientras que el gradiente de H -consecuencia tambin de la energa cedida por los electrones- posibilita la sntesis de 3 ATP.
9-11. Las reacciones en la oscurid ad tie nen lugar en la estroma del cloropl asto
3- Fosfogllceraldehldo

H,t-o-
H,O
En las reacciones fotosintticas que tienen lugar en la oscuridad, las molculas de ATP y NADPH -producidas por las reacciones fotoqumicasproporcionan la energa necesaria para sintetizar hidratos de carbono a partir de C0 2 y H20. Tal sntesis se produce en la estroma del cloroplasto mediante una serie de reacciones qumicas agrupadas bajo el nombre de ciclo de Calvin o ciclo C 3 , en las que intervienen varias enzimas localizadas en la estroma. Como puede observarse en la figura 9-7, la reaccin inicial por la cual ingresan el C02 y el H2 0 al ciclo de Cal vin es catalizada por la enzima ribulosa 1,5-difosfato carboxilasa. Se trata de una enzima de gran tamao (500 kDa) que se calcula que representa aproximadamente la mitad de las protenas de la estroma. Por la accin de esta enzima, 6 ribulosas 1,5-difosfato (son pentosas) se combinan con 6 C02 y se producen 12 molculas de 3-fosfoglicerato. A continuacin, estas 12 triosas son fosforiladas con fosfatos provistos por otros tantos ATP, lo cual genera 12 molculas de 1,3-difosfoglicerato. Cada una de estas molculas, de tres carbonos, pierde un fsforo y tiene la capacidad de aceptar H+ y e- del NADPH, por lo que se convierte en 3-fosfogliceraldehdo. Dos de las 12 molculas de 3-fosfogliceraldehdo abandonan el ciclo y se convierten en la materia primaa partir de la cual-mediante enzimas especficas- se sintetizan los monosacridos, los cidos grasos y los aminocidos que forman las molculas estructurales y alimenticias de la clula vegetal. Por su parte, las restantes 1O molculas de 3-fosfogliceraldehdo son reducidas a 6 molculas de ribulosa 1,5-difosfato. Estas son fosforiladas (con fosfatos aportados por otros tantos ATP) a 6 ri bulosas 1,5-difosfato, con las cuales se inicia - mientras haya C02- otra vuelta del ciclo de Calvin.
9- 12. La fotos ntesis genera agua, oxgeno y hexosas

H,c-o--
Ribulosa 1.5-difosfato

t-o HC-OH
H. -OH
1

H,Lo-

Ciclo que comprende compuestos

e, .~.

",C- 0"

~=O

A
Albulosa S-fosfato

Cs.

e,. e,

hidratos de carbono

"~ . . .

Fig. 9-7. Ciclo de Calvin (o del C3 ) de la fotosntesis, en el que se reduce C02 y se sintetizan hidratos de carbono.

Hl-oH
H-OH

H,Lo--
da uno de estos electrones pasa al centro de reaccin del fotosistema II y reemplaza al salido de la clorofila P680, transferido como vimos a la plastoquinona. A continuacin, el e- pasa de la plastoquinona al complejo b-f, donde parte de su energa es utilizada para transportar un H hacia el espacio tilacoide en contra del gradiente electroqumico (este H se suma a los generados por la escisin del H20). El e, con un potencial energtico menor, pasa del complejo b-f a la plastocianina y de sta al fotosistema l. Para explicar su destino, veamos las reacciones que acontecen en el fotosi stema l. Por accin de la luz ocurren procesos equivalentes a los registrados en el fotosistema JI, con las siguientes particularidades: 1) el e- energizado en el centro de reaccin corresponde a la clorofila P700 (no a la P680); 2) este e es transferido a la ferredoxina (no a la plastoquinona) y es reemplazado por el electrn de bajo potencial energtico proveniente de la plastocianina (no de la escisin del H2 0). El e- transferido a la ferredoxina, que como acabamos de ver se ha revitalizado considerablemente, deja a esa molcula transportadora e ingresa en la NADP reductasa, donde parte de su energa es utilizada para reducir un NADP+ a NADPH en la cara de la membrana tilacoide que da a la estroma. En este proceso se utiliza un H tomado de la estroma. El ltimo paso de las reacciones fotoqumicas corresponde a la formacin de ATP a partir de ADP y fosfato, es decir, a la fotofosforilacin. Esta tiene lugar en la ATP sintasa, que por su porcin F0 permite el traslado pasivo de los H desde el espacio tilacoide hacia la estroma. Durante ese pasaje la energa protonicomotora contenida en los H+ es cedida a la porcin F 1 de la ATP sintasa. Finalmente, la ATP sin tasa utiliza la energa para sintetizar ATP (fig. 9-6). Mediante la fotofosforilacin los vegetales verdes pueden producir una cantidad tic ATP 10 veces mayor que la obt nida u sus 111ilo tmdrias. Por
olrn parh..". las
( 'tllldt lrl/1
t'

El balance qumico de la fotosntesis es:

6 C02 + 12 H,O ~ C6 H 120 6 + 6 0 2 + 6 H20,
luz

que representa una acumulacin de 686.000 caloras por mol. Esta energa es proporcionada por 12 molculas de NADPH y 18 de ATP, que contienen 750.000 caloras. As, la eficiencia alcanzada por el ciclo fotosi nttico llega al 90%. Como hemos visto, los fotones absorbidos por la clorofila y otros pigmentos primero son convertidos en energa qumica bajo la forma de ATP y NADPH. Durante esta fase fotoqumica el H20 pierde su 0 2, el cual se libera hacia la atmsfera como un producto secundario. La reduccin del C02 se produce en la osr;midad (no necesariamente), siempre que haya ATP y NADPII. 1.os prodnr ton di' :Ha ras snn hcxo~<.< a partir de las cuales, n
oiii H:

lulas Vt'' ',daks

poSl'C.' Il

111111'hns rn!~ t'lu11,pl unlc 11 qw rnilu

ln v nll ~

eh-

In cc 111 111 n J' l

lll'II HII

divrrsas llasc.s dl' hidratos tll' {':lf'hunu,

llnd"ti Y1""'' 1111 1 '1

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FUNDAMENTOS DE BTOLOGIA CELULAR Y MOLECUL AR

9. LOS CLOROPLASTOS

191

9-13. En las plantas tropicales tiene lugar un ciclo C4 El ciclo de Cal vin se produce en los vegetales superiores, pero en algunas clulas de plantas tropicales existe un ciclo cuyo producto no es el 3-fosfoglicerato sino una molcula de 4 carbonos, el oxalacetato. Una de las primeras reacciones de este ciclo consiste en la unin del C0 2 con una molcula de tres carbonos, el fosfoenolpiruvato. La enzima actuante es la fosfoenolpiruvato carboxilasa y el producto es el citado oxalacetato. Este se convierte en malato, que se dirige a las clulas de la planta que cuentan con ciclo de Calvin. En ellas el malato pierde un C0 2 -que ingresa en el ciclo de Calviny se transforma en pimvato. Este compuesto de tres carbonos retorna a las primeras clulas, donde se convierte en fosfoenolpiruvato y da inicio a un nuevo ciclo C 4 .

NUCLEO ADN

()

/
CLOROPLASTO ,/ ADN - + ARfN m grande

/- - pequea
- + Subunidad

, Subunidad l

~ RO Casa , )
~

BIOGENESIS DE LOS CLOROPLASTOS

9- 14. Los plstidos se desarrol lan a parti r de proplstidos Los plstidos se desanollan a partir de estructuras precursoras llamadas proplstidos, que se encuentran en las clulas vegetales no diferenciadas. Segn el tipo celular, los proplstidos se convierten en leucoplastos - exentos de pigmentos- o en cromoplastos, entre los cuales se encuentran los cloroplastos. El desarrollo de estos ltimos se ilustra en la figura 9-8. La primera estructura que aparece es el citado proplstido, de forma discoidal, con un dimetro de alrededor de 1 ..t.m y una pared integrada por dos membranas. En presencia de luz, la membrana interna del proplstido crece y emite vesculas -en direccin de la estroma-, que luego se transforman en sacos aplanados. Estos son los futuros tilacoides, que en algunas regiones se apilan apretadamente hasta formar los grana. En el cloroplasto maduro los tilacoicles ya no se hallan conectados a la membrana interna, pero los grana quedan unidos entre s por los tilacoides de la estroma. Si se coloca una planta en un medio poco iluminado se produce un fenmeno denominado etiolacin , en el cual las hojas pierden su color verde y las membranas de los tiFase de lacoides se desorganizan. El agregado de stas da lugar a proplstido los cuerpos prolamelares , en los que las membranas adquieren una disposicin en forma de enrejado. En los bordes de estos cuerpos aparecen adheridas membranas de tilacoides jvenes, que carecen de actividad fotosinttica. El cloroplasto, tras esta conversin de los tilacoides, cambia su nombre por el de etioplasto. Una vez que las plantas etiolaclas son expuestas a la luz, los tilacoides reaparecen y las membranas del material prolamelar son utilizadas para su organizacin. 9-15. El doroplasto se comporta como un organode semiautnomo Del mismo modo que las mitoconclrias , los proplstidos y los cloroplastos se multipl ican por fisin binaria (cap. 8-23), proceso que ex ige el crecimiento de propl stidos y cloropl astos preexistentes. los cual s d hvn dnpli ca r su tanwn. Co1110 !.!S ob v io, l.' Sll" r r n irrr i ~ ttlu 1 1<, 111 i ~:
I IHI l]IW t'll' , X !II'IiliH'III ll d n

CITOSOL

F ig. 9-9. Modelo propuesto para la sntesis de la enzima ribulosa l ,S-di fosfato carboxilasa (RDCasa.). (Oc P. E. Highfield y R . .1. Ell is.)

con vertirse en cloroplastos maduros, requiere que se sinteticen los componentes proteicos normales del organoide. En tal sntesis intervienen dos sistemas genticos, uno propio del cloroplasto y el nuclear. Los cloroplastos contienen ADN, ARN y los dems componentes que intervienen en la sntesis proteica. Sin embargo, la mayora de sus protenas provienen del citosol, de modo que son codificadas por genes nucleares. Como se ve, los cloroplastos son semiautnomos y dependen de la cooperacin de dos sistemas genticos, uno propio y exclusivo del organoide y otro perteneciente a toda la clula. Los cloroplastos poseen un ADN circular ele alrededor de 45 ..t.m de largo y cerca de 135.000 pares de bases (se conoce la secuencia ele la mayora de sus genes). Adems contienen ribosomas pequeos, que representan hasta un 50% de los ribosom as totales de las clulas fotosintti cas. Se estima que alrededor del 10% ele las protenas del cloropl asto se sintetizan en el organoide y que las restantes -es decir, la gran mayora- son tomadas del citosol. Una ele las enzimas que participa en la elaboracin ele sacriclos a partir del C0 2 - la ribulosa 1,5-difo sfato carboxilasa (fig. 9-7)- representa cerca del 50% de las protenas solubles totales que se encuentran en los cloroplastos, por lo que podra ser la protena ms abundante de la naturaleza. Posee dos subunidades, una de alto peso molecular (ele alrededor de 400 kDa) y otra ms pequea (de unos 100 kDa). La subuniclad mayor es codificada por genes del ADN cloroplstico, mientras que la menor es codificada por genes nucleares (fig. 9-9). Esta ltima es sintetizada en el citosol (en ribosomas libres) bajo la forma ele una molcula precursora, la cual ingresa en la estroma del cloroplasto y all es divada hasta alcanzar su tamao definitivo. La envoltura del cloroplasto posee receptores que reconocen a los pptidos seal de las protenas que deben ser incorporadas al organoide. En el caso de la subuniclad menor ele la ribulosa 1,5-di fosfato carboxilasa, luego de ingresar en el cloroplasto su pptido seal es esci ndido por una proteasa presente en la envoltura del organoide y la subunidad es li berada en la estroma. 1,a ri gur:1 ')-9 resu 1 n ~ tlll ntolk lo que ex pl ica la sny::sis de las dos su bunid;ld rs <k ] rihul<>sa l ,~ di i't>l; l'n lo , nrho.~ il s ;l vtl pm(m~ i<lllCs cqu illl o l~.:ul;
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192

FUNDAMENTOS DE BJOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

9-16. El cloroplasto derivara de una simbiosis

El cloroplasto seria el resultado de una simbiosis entre un microorganismo auttrofo (una bacteria) susceptible de capturar energa lumnica y una clula husped hetertrofa (eucariota). Aunque esta hiptesis simbitica es atractiva, vimos que el cloroplasto posee en su ADN una cantidad de informacin gentica que slo le permite codificar el 10% de sus protenas, adems de los ARN ribosmicos, mensajeros y de transferencia utilizados en la sntesis de stas. Igual que en la mitocondria (cap. 8-25), la mayora de los componentes del cloroplasto se elaboran bajo la dependencia de genes nucleares.
!

Los peroxisomas
Destoxificacin celular

10

BI BLIOGRAFIA
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in photosynthetic reaction center: implications for mecha-

10-1. Los peroxisomas contienen enzimas oxidativas

Los peroxisomas son organoides que se encuentran en todas las clulas; su l'o rma es ovoide y estn limitados por una sola membrana (figs. 7-6 y 10-1). Poseen un dimetro medio de 0,6 J.lm, y su nmero varia entre 70 y 100 por clula, aunque en las clulas hepticas y renales suelen ser mucho ms numerosos. Los peroxisomas contienen enzimas oxidativas y cumplen variadas funiones metablicas. Su nombre se debe a que son capaces de formar y des..:omponer perxido de hidrgeno (H 2 0 2 ). En conjunto, las enzimas encontrada:-; en los peroxisomas son alrededor de 40. Existen muchas clases de peroxisomas, los cuales se diferencian entre s por la enzima o el conjunto de enzimas presentes en su interior. Debe c:alarse que cada tipo celular posee peroxisomas que contienen una enzima N dc:terminada o una variedad particular de enzimas. Entre las enzimas ms comunes detectadas en los peroxisomas se encuenlran la catalasa, la D-aminocido oxidasa, la urato oxidasa y las responsables de la ~-oxidacin de los cidos grasos (cap. 8-8). Los peroxisomas que conlic: nen urato oxidasa exhiben un pequeo cuerpo cristalino compuesto por 111t ltiples cristalitos.

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Fig. 10-1. Micrografa electrnica de una clula heptica

coloreada inmunocitoqufmi cam entc para locali 7 ..a r la cata las a e n los pan ,:d so111as (/'). S ohsc.rva n vnrinN nli lor on d d :v.. W,llllll , 1e 'pr h-tl ft r ~~~ ~ 11 P llu hlrr d y; ;, V1d ur rr )

194

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

lO. LOS PEROXJSOMAS

195

Con excepcin de la catalasa - que convierte al H 20 2 en H 20 y 0 2- , las restantes enzimas oxidan a sus sustratos, representados por cidos grasos, aminocidos, purinas (adcnina, guanina) , uratos, cido rico, etctera. :\ diferencia de lo que sucede en las mitocondrias -donde las oxidaciones producen energa qumica (ATP)- , en los peroxisomas las oxidaciones generan energa trmica. No obstante, la ~- o xidacin de los cidos grasos conduce finalmente a la formacin de ATP, ya que los grupos acetilo qu e se producen en los peroxisomas se transfi eren a las mitocondrias e in gresan en el ciclo de Krebs. Es necesario advertir que solamente una pequea proporcin de los cidos grasos celulares es oxidada en los peroxisomas (en el captulo 8-8 se seal que esta funcin se cumple principalmente en las mitocondrias).

Ejemplos de sustancias txicas neutralizadas por este mecanismo son los fen oles, el formaldehdo, el cido frmico y el etanol. Parte del etanol ingerido con las bebidas alcohlicas es neutralizado por la catalasa de los peroxisomas, que lo oxida a acetaldehdo.

10-5. Los peroxisomas se reproducen por fisin binaria

Se cree que los peroxisomas tienen una vida media de 5 a 6 das, al cabo de los cuales son eliminados por autofagosomas. Su nmero se restablece del mis mo modo corno lo hacen las mitocondrias (cap. 8-23), mediante la duplicacin de peroxisomas "jvenes", es decir, por fisin binaria de peroxisomas preexistentes (fig. 10-2). Como es obvio, antes ele la mitosis se produce la duplicacin de todos los peroxisomas de la clula. Para que la fisin binaria se concrete, previamente deben duplicarse las estructuras que integran el peroxisoma. As, la bicapa lipdica de su membrana crece por el agregado de fosfolpidos extrados del RE, los cuales son transferidos de una membrana a otra por protenas intercambiadoras (fig. 8-17). Por su parte, las protenas que se incorporan a la membrana o a la matriz del peroxisoma provienen de ribosomas libres en el citosol, e ingresan en el urganoide una vez que se han plegado (cap. 4-5). Son conducidas selectivamente al peroxisoma porque poseen, cerca del extremo carboxilo, un pptido sea! especfico compuesto por tres aminocidos (serina, lisina, leucina) (eap. 4-4) (tabla 4-1). El pptido seal es reconocido por un receptor protei'o que reside en el citosol, el cual, a su vez, interacta con una protena especfica de la membrana del organoide. Los canales que atraviesan la membrana del peroxisoma para el paso de lns protenas no han sido identificados. La mutacin del gen que codifica la sntesis de una protena pertenecien1 a la membrana de los peroxisomas -involucrada aparentemente en la in,llrporacin de las enzimas oxidativas a la matriz- genera un cuadro llamadu sndrome de Zellweger, caracterizado por la presencia de peroxisomas "vacos". Los pacientes mueren antes del primer ao de vida.

10-2, En los peroxisomas se

po r la catalasa

gt~nera

H2 0 2 , que es neutralizado

La oxidacin de sustratos en los peroxisomas tiene como consecuencia la formacin de H 20 2 , una molcula sumamente txica para la clula. En la seccin anterior dijimos que la enzima encargada de neutralizar al H20 2 es la catalasa , que lo degrada mediante la siguiente reaccin:
cata lasa
2 H 20 2 - - - - - - - - l 2 H 20 + 0 2

Fig. 10-2. Reproduccin de

los peroxisomas.

10-3. La cata lasa tamb in degrada al H20 2 producido fuera

de los peroxisomas

La catalasa no slo degrada al H 20 2 producido en Jos peroxisomas sino tambin al que se genera en otros puntos ele la clula, particularmente las rnitocondrias, el retculo endoplasmtico y el citosol. En estos sitios las oxidaciones dan lugar a pequeas cantidades de a niones superxido (0 2- ) , conocidos comnmente con el nombre de radicales libres. Estos radicales son muy reactivos, y una enzima, la superxido dismutasa, se encarga de eliminarlos mediante la siguiente reaccin:
2 (O,-+ 2 H' superxido dismutasa
-------------l

H 20 2 + 0 2

A su turno, en los peroxisomas este H 20 2 es convertido en H 20 y 0 2 por accin de la catalasa. Se sospecha que el anin superxido produce prdidas de sulhidrilos en las protenas, alteraciones en la bicapa lipdica de las membranas celulares y mutaciones gnicas, lo que podra acelerar el envejecimiento orgnico y facilitar la aparicin de cuadros cancergenos.

lOS PEROXISOMAS EN LAS CELULAS VEGETALES

10- 6. Los glioxisomas son peroxisomas vegeta les re lacionados con el metabolismo de los tria ci lgliceroles

10-4. La cata lasa uti liza al H2 0 2 para neutralizar las sustancias

txicas de la clula

En las clulas hepticas y renales la catalasa acta tambin como una enzi ma destoxificante. Para ello, ante la presencia de ciertos txicos , en lugar de convertir al I;l 2 0 2 en H2 0 y 0 2 uti liza al H2 0 2 para oxidarlos y neutralizar su toxicidad. La reaccin puede expresarse mediante la siguiente ecuacin:
Hz0 2 + TH 2 - - - - - - - - l 2 H 20 + T

La germinacin de las semillas suele necesitar de la degradacin de lpidus acumulados en el endosperma (cap. 19-20). En este proceso intervienen los glioxisomas, que son peroxisomas relacionados con el metabolismo de ,,s triacilgliceroles. El glioxisoma posee enzimas que transforman a los cidos grasos de la sell li ll a en hidratos de carbono por la va del ciclo del glioxilato , que es una WI'S in diferen te del ciclo de Krebs (fig. l0-3). La ecuacin que se verifica 1 d .:; tho de sus reacciones es:
2 acetil CoA - - ----? succinato + 2 H' + 2 CoA

catalasa

La sigla TH 2 simboli za a la sustancia 1 6x ica, y la T a la 1ni sn1 :1 s11s1 :11H'in dl'Si ll <s dl: Sil O X ici al: i(lll.

1,11 di J'c rcncia con el ciclo de Krebs radica en que el ciclo del glioxilato ret ll il'l'< dos 111olcul:1s ti c acclil CoA y util iza dos enzi mas exc lusivas, la iso1 11 1 ''" li t t ~H y 111 lltlll.dtl , i111 1.1-~H. LIISI.,Iras 'Y s n7.im as cit.; csl ' i;lo, l;t awIIIIII NH, In nu d n1t1 d ~ l dd ~t pt\ IIH 11 y 1 11 vi t1 tt h1 NIIIII Nn. r tlllt' NpttiHh:nl lllllhi (' n :d
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1 \ lt ' l< 111

u 111

196

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

0~-S-CoA
COOH

CH,

tH, Ho- t-cooH tH, tooH

Citrato

La comunicacin intercelular y la transmisin intracelular de seales

COOH

11

Oxalacetato

tHOH

Hooc-1-H tH, tooH

H

11-1. En los organismos pluricelulares las clulas son interdependientes

"'-cfp
coH

Malato

Ghoxi!ato

-f
Succinato

lsoc1trato

Jsoctlrato /tasa

CH,-COOH tH,-COOH
Fig. 10-3. Ciclo del glioxilato.
Acetil CoA

10-7. Ciertos peroxisomas vegetales intervienen en el proceso de fotorrespiracin

En los organismos multicelulares complejos tanto la supervivencia de las clulas como las actividades que stas realizan dependen de estmulos externos provenientes de otras clulas. La dependencia recproca entre los distintos tipos celulares responde a la necesidad de adaptar la actividad de cada uno a los requerimientos globales del organismo, que debe ser considerado como una unidad diseada para funcionar integradarnente y no como una suma de clulas individuales. As, en un organismo multicelular cada clula depende de otras y a la vez las influye. Estas interrelaciones celulares se producen desde las primeras etapas del desarrollo embrionario y persisten hasta el fin de la vida posnatal. De acuerdo con la clase de estmulo emitido y el tipo de clula que lo recibe, sta responde, entre otros, con alguno de los siguientes cambios: 1) se mantiene viva o muere; 2) se diferencia; 3) se multiplica; 4) degrada o sintetiza sustancias; 5) las secreta; 6) incorpora solutos o macromolculas; 7) se contrae; 8) se moviliza; 9) conduce estmulos elctricos.
11-2. Las clulas afectan las actividades de otras clulas mediante sustancias inductoras

Las clulas de las hojas verdes poseen un tipo de peroxisorna que mediante una oxidasa especfica cataliza la oxidacin de una molcula de dos carbonos, el glicolato. Este se sintetiza en el cloroplasto en los das secos de sol intenso. La oxidacin del glicolato consume 0 2 y produce H 20 2 y glioxilato. Luego el H20 2 es descompuesto por la catalasa del peroxisoma (en H 20 y 0 2) y -siempre en el peroxisoma- el glioxilato se convierte en glicina, que se metaboliza en la mitocondria y genera C02 . Este proceso, en el que participan tres organoides -el cloroplasto, la mitocondria y el peroxisoma-, se denomina fotorrespiracin, ya que para la sntesis y la oxidacin del glicolato se necesita luz y 0 2 y se libera C02 .

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La accin de estimular a la clula desde el exterior se llama induccin; es mediada por una sustancia inductora, conocida tambin corno ligando. La clula que produce el ligando se denomina clula inductora; la que lo recibe, clula inducida o clula blanco. La sustancia inductora interacta con la clula inducida a travs de un receptor, que es una protena o un complejo proteico localizado en el citosol o en la membrana plasmtica de la clula blanco. Si el receptor se halla en el citosol, la sustancia inductora debe ser pequea e hidrofbica, pues para alcanzarlo debe atravesar la membrana plasmtica de la clula blanco. En cambio, si el receptor es membranoso no interesa el tamao de la sustancia inductora ni que sea hidrofbica.
11-3. Existen distintas clases de inducciones, dependientes de las distancias entre las clul as inductoras y las clulas inducidas

Cuando la clula inductora y la clula blanco se hallan distantes entre s, la sustancia inductora, tras ser secretada por la primera, ingresa en la sangre y a travs de ella alcanza a la clula inducida. Las inducciones de este tipo se llalllall endocrinas (r~c l gri 'f(<J f ndon, dentro, y krfnein, separar) (tig. 11 - 1A). 11 tsta <'al gotfa Jll'Il<\111'< '<' 11 l:unl>i t" n las 'sc n: iolll:s llt'lii'Ut'lliiOt'l'inns, a
qw lu , HJ::lulu ' ill il uhu
h1 11

qn

di' d l' l li'llllinal uxoukn el, Ju llt' lllonu dd w

198

FU NDAMENTOS DE BIOLOG IA C ELULA R Y MOLECULAR

11. LA COMUNICACION INTERCELULAR Y L A TR ANSM ISION INT RACELULAR D E SE ALES

199

o
Sangre

CELULA INDUCTORA

1
1

____-_ -._. . __-!J.-------1

OD

Fig. 11-l . Formas de induccin en los organismos pluricelular es. A. Secrecin endo-

crina. B. Secrecin paracrina. C. Sinapsis nerviosa. D . Secrecin autocri na. E . Por contacto directo.

volcarse en la sangre para poder llegar a la clula inducida. Las sustancias inductoras vehiculi zadas por la sangre se denominan hormonas y son producidas por las clulas de las glndu las de secrecin interna que integran el sistema endocri no. Cuando la clula inductora se hall a cerca de la clula inducida se dice que la induccin es paracrina (del griego par, contiSustancia inductora giiidad). Aqu la sustancia inductora debe recorrer un corto lrecho de la matriz extracelular para alcanzar a la clula bla nco (f ig. 11- 18 ). Un caso especial de cercana entre la clula inductora y la clula inducida se da en las sinapsis nerviosas. En stas el terminal axnico de una neurona (clu la inductora) se halla junto a la membrana plasmtica de otra neurona o de una clula muscular o de una clula secretoria (clu las inducidas). La sustancia liberada por e l terminal axnico de la neurona i nduclora se llama neurotransmisor (fig . 11 - l C). Las si napsis permiten establecer una comunicacin casi instantnea entre la neurona inductora y la clula inducida aun cuando sta se hall e muy lejos del cuerpo de la primera. Existe una clase de induccin en la que la sustancia inductora es secretada y recibida por la propia clula, de modo que sta se induce a s misma. Se llama autocrina (del griego auts, por s mismo) y ocurre durante algunas respuestas inmunolgicas (fi g. 11-!D). En otros casos la sustancia inductora es retenida en la membrana plasmtica de la clula inductora y no se secreta. Por lo tanto, para que la sustancia inductora pueda entrar en contacto con el rece ptor se necesita que la clula inductora se traslade hasta el lugar de la clula inducida (fig . 11 - l E). Este tipo de induccin se da, por ejemplo, durante algunas respuestas inmunolgicas (cap. 22-5) (fig. 22-4), la fecundac in (cap. 19- 19) (fi gs. 19-22 y 19-23) y la reparacin de heridas. Como se ve, pese a las diferencias entre las distintas clases de inducciones, todas actan en forma similar: una clula produce un intermediario qumico que interacta con el receptor de otra clula, en la cual se desencadena una respuesta. El carcter y naturaleza de la respuesta dependen de la identidad de laclula inducida. A veces una mi sma sustancia inductora procl11c r 'S(lll!'slas dif r ntes por parte de dos o m ~s lipos d e lii las hilnwn. l'o1 < ' J<' IIIllll, < '11 lns r(o lui\N IIIIIN l'II IIII ('S !'S IIilld ll ~ 111 lldi<'llll li ll ll <'~li llll il ll 1 11 d1 11 lljlillilll ,l , III<' II

CE LULA INDUCIDA

tras que en las cl ulas adiposas esti mula la liplisis. Otras veces, distintas sustancias inductoras producidos por clulas inductoras diferentes generan una sola clase de respuesta por parle de uno o de varios tipos de clulas blanco. 11-4. Las sustancias inductoras se unen a los

-- - +
Sustancia inductora

] Receptor

receptores con una gran especificidad

Una de las propiedades ms notables de las sustancias inductoras es su especificidad. As, cada sustancia inductora acta slo sobre ciertas clulas, que constituyen su objeti vo o blanco. El caso ms llamati vo es el de las hormonas en las inducciones endocrinas, ya que Juego de volcarse en la sangre llegan a todos los tej idos de l organismo pero accionan nicamente sobre un limitado nmero de clulas. La especificidad de las sustancias inductoras se conespondc con la especificidad de los receptores, que son mol6-culas o asoc iaciones moleculares -generalmente glicoprotenas- a las que las sustancias inductoras se unen selectivamente en virtud de una mutua adaptacin conformacional. Ms a n, la sustancia inductora y el receptor integran un complejo que posee las siguientes caractersticas: 1) Adaptacin inducida. De manera similar a la unin enzima-sustrato, la fij acin de la sustancia inductora al receptor requiere una adaptacin estructural recproca entre ambas molculas (cap. 2- 14). Se cree que se produce la adaptacin conocida como encaje inducido, que sera ms probable que el modelo rgido representado por una llave y su cerradura (fig. 2-33). 2) Saturabilidad. El nmero de receptores ex istente en cada clula es limitado, de modo que si en un sistema de coordenadas se representa la cantidad de sustancia inductora unida a los receptores se obtiene -en funcin de su concentracin- una curva hi perblica que delata la saturabilidad del sistema (fig . 2-34). 3) Reversibilidad. La unin sustancia inductora-receptor es reversible, ya que el complejo se d isocia tie mpo despus de su formacin.
Sntesis de ARNm

Sntesis de protena

Fig. ll-2. Induccin celular a travs de un receptor ciiOslico. Se i luslra el mecanismo de accin de h1s hormonns eslcroidcas y tiro idco.1 S, de Ju vilamina D y del cido rctinoico.

11-5. La interaccin sustancia inductora-receptor es la primera de una cadena de reacciones

La interaccin entre la sustancia inductora y el receptor es el primer eslabn de una cadena de reacciones qum icas que se propagan en el interior de la clula, cuya respuesta es el ltimo eslabn de la serie. La respuesta celular puede producirse segundos u horas despus de la llegada de la su tancia inductora. En el primer caso tiene lugar al cabo de reacciones que ocurren exclusivamente en el citoplasma. E n el segundo, cuando un producto qumico ele la cadena ele reacciones ingresa en el ncleo e indul:C la activacin de un gen. Ello origina una serie de sucesos - a ser estudiados en los captulos 14, 15 y 16- al cabo de los cuales se elabora una prolc na cuya presencia provoca la respuesta celular. En las prximas secciones se analizarn distintas vas de propagacin de sc1ales. Como se ver, el nmero y tipo de reacciones de cada va dependen <k la naturaleza de las clulas inducidas, de sus receptores y de las sustancias < "ll lilidas por las clulas inductoras. l ~s ln s sustancias se ~: l ;~si fi v;n en dos rupos, segn interacten con re' <'JIIull'' loL'1 diz11dos l'll 1 l'lil'"'1 l " 1'11 J: ll K' IIIhran:l plasmtica de l;s c.:! luias llllhll 11111

200

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

11 . LA COMUN!CACION INTERCELULAR Y LA TRANSMISION INTR ACELULAR DE SEALES

201

INDUCCIONES CELULARES MEDIADAS POR RECEPTORES CITOSOLICOS

11-6. Las hormonas esteroideas se unen a receptores citoslicos

o
11

Oxido nftrico

Las hormonas esteroideas, las hormonas tiroideas, la vitamina D y el cido retinoico son sustancias inductoras que se unen con receptores de las clulas inducidas situados en el citosol. Las tres primeras generan inducciones endocrinas, ya que habitualmente se vuelcan en la sangre. En cambio, el cido retinoico -una sustancia que interviene mayormente durante el desarrollo embrionario (cap. 2 1- 16)- da Jugar a inducciones paracrinas. Una vez en el citosol, la sustancia inductora se une a su receptor especfico y ambos forman un complejo que ingresa en el ncleo. All el complejo se combina con la secuencia reguladora de un gen particular, el cual se activa (caps. 13-6 y 14-7). Su transcripcin conduce a la sntesis de una protena cuya presencia provoca la respuesta celular (fig. 11-2). Los receptores citoslicos son protenas que poseen cuatro dominios (fig. 11 -3): 1) uno diseado para unirse al inductor; 2) otro flexible, que se dobla como una bisagra; 3) otro que se une a la secuencia reguladora del gen, y 4) otro que activa al gen. Cuando la sustancia inductora se une al receptor, ste adquiere una forma caracterstica que le pennite ingresar en el ncleo y unirse a la secuencia reguladora del gen. Debe sealarse que en ausencia de la sustancia inductora, el receptor permanece en el citosol unido a la chaperona hsp90 (cap. 4-5), la cual lo encorva. En cambio, cuando la sustancia inductora se une al receptor, ste se libera de la chaperona y adquiere una configuracin extendida debido a que su dominio flexible se endereza. Como consecuencia, el receptor puede ingresar en el ncleo y unirse a la secuencia reguladora del gen (fig. 11-3) (cap. 12-4).
11 -7. El xido ntrico interact a con una enzima citoslica

o JI JI o-P-0 -P l_ 1 _ o o

0 -~- 0-C~
o
HO OH

( : ( :NH N

N~NH2

!/
Guanilato ciclasa

<
N

N : ( :NH
1

ti

GTP

-0 - P--0 OH JI o GMPc

rckd

N~NH2
+

p p

El NO secretado por las clulas endoteliales de los vasos sanguneos tiene como blanco a las clulas musculares lisas de los propios vasos (secrecin paracrina), que se relajan y producen vasodilatacin. En algunos casos el pro~eso se inicia antes, cuando otra sustancia inductora - la acetilcolinamerge de los terminales axnicos que inervan a las clulas endoteliales e inleracta con receptores local izados en sus membranas plasmticas (fig. 11-5). Debido a ello las clulas endoteliales producen xido ntrico sintasa, una en'ima que genera NO a partir del aminocido arginina. Finalmente, el NO sen etado por las clulas endoteliales induce la relajacin de las clulas muscul:lres lisas de los vasos. Un ejempl o de induccin de esta clase corresponde a la dilatacin de los vasos sanguneos del pene durante la ereccin. La vasodilatacin es inducida por el NO que secretan las clulas endoteliales de los vasos penianos ante la li<;gada de estmulos nerviosos espec.iales. Otro ejemplo corresponde a la nilroglicerina, que es un frmaco que se emplea para tratar las crisis de angi"a de pecho. A poco de su administracin, los vasos coronarios obstruidos Ul ' dilatan por perodos relativamente prolongados debido a que la nitroglin rina se convierte en NO en forma lenta y gradual.

Fig. 11-4. Transformacin del GTP en GM Pc al actuar el xido nlrico sobre la guani lato ciclasa.

Fig. 11-3. Esquema que ilustra los cuatro dominios de un receptor citoslico. Obsrvese la interaccin del receptor con la chaperona hsp90.

Cuando es secretado por macrfagos, por las clulas endoteliales de los vasos sanguneos o por algunos tipos de neuronas, el xido ntrico (NO) se comporta como una sustancia inductora. En la clula inducida el NO interacta con una enzima citoslica -ms especficamente con el gmpo hem de la enzima guanilato ciclasa- , cuya activacin convierte al nucletido guanosina trifosfato (GTP) en guanosina monofosfato cclico (GMPc) (fig. 11 -4), que es el desencadenante de la respuesta celular. Debe sealarse que la accin del NO es muy breve, pues se convierte en nitrato o en nitrito en menos de 1O segundos.

INDUCCIONES CELULARES MEDIADAS POR RECEPTORES 1OCALIZADOS EN LA MEMBRANA PLASMATICA

11 - 8. En las inducciones mediadas por receptores membra nosos las seales f luyen por el inte.rior de la clula a travs de distintas clases de molculas

Las sustancias inductoras que se unen a receptores localizados en la mema11a plasmtica ponen en marcha en las c.lulas inducidas una serie de reac, i"11es moleculares hasta que se llega a la respuesta celular. Esas reacciones .!1111 lugar a distintas vas de conduccin, transduccin y amplificacin de se1''

>illlt:s,

algunas de las cuales se analizarn en las prximas secciones.

CELULA ENDOTELIAL MUSCULO LISO Acetilcolina

hsp90

Sustancia inductora

(------------- (---
NH2 c;::::::::::::::::~~~::~~~:J cooH
~

NH2 C:::::::::~~~====~
~

Regin activadora de la transcripcin

'

'" ,., "

NO sintasa

Regin que se asocia al gen

'"

Arqinina

NO ---- NO ------ ----

Guanilato ciclasa Fig. ll-5. Formacin de xido ntrico (NO) en l:rs c61 ul:rs cndordiak s y su a c: i 11 ~ ohn lw. 1' lulu~ IIIIIN<' llll ul " , llww d
lnN \111"111/l 1111 11' 11 111 ' 11''

202
'

FUNDAMENTOS DE BTOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

11

LA CO MUNICACION INTE RCELUL AR Y LA TR ANSM!SlON INTRACELULAR DE SE ALES

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Sustancia inductora

GTP

Fig. 11-6. Receptor membranoso cuyo dominio citoslico posee actividad de gua ni lato
ciclasa.

La llegada de la sustancia inductora -considerada el p r imer mensajer o de la va de seales- produce cambios en el receptor, que se transmiten a la segunda molcula del sistema. A su vez, sta acta sobre la tercera molcula del sistema, y as sucesivamente hasta arribarse a la respuesta celular. Algunas de esas molculas - llamadas comnmente segundos mensajeros- son de tamao pequeo, por lo que difunden con rapidez y son muy efecti vas para propagar las seales dentro de la clula. Debe agregarse que las primeras molculas del sistema suelen localizarse en la membrana plasmtica, cuya fluidez les permite desplazarse e interactuar con GMPc. el receptor y las molculas que les suceden (cap. 3-5). Entre las molculas que intervienen en la mayora de las vas de seales abundan las quinasas (cap. 2-12), ya que muchas de sus reacciones son fosforilaciones catalizadas por ese tipo de enzimas. Existen diversas clases de quinasas, cada una para un sustrato especfico, que puede ser otra quinasa, una enzima diferente o una protena no enzimtica. Cuando se trata de otra quinasa, a menudo sta fosforita a una tercera, y as sucesivamente hasta que se llega al ltimo eslabn de la cadena. Cabe agregar que en algunos casos la fosforilacin activa al sustrato y en otros lo inactiva, lo cual genera distintas clases de consecuencias en el funcionamiento celular. Como se ve, las quinasas son molculas muy difundidas en los procesos de transmisin de seales, que desempean funciones sobresalientes dentro de la clula. Pese a las innumerables sustancias inductoras producidas por el organismo y a la enorme variedad de respuestas que generan, stas se logran a travs de un nmero relativamente pequeo de vas de transmisin de seales. Ello es porque la mayora de las vas se interconectan y componen redes integradas similares a las de las computadoras. Por tal motivo, e l estudio de este tema presenta dificultades que - en un texto sucinto- obligan a anali zar slo las vas de seales ms importantes y a omitir sus eslabones menos representati vos.
11-9. Existen distintas clases de recept ores membranosos que generan seales intracelu lares

11-10. Exist en receptores membranosos que a l ser inducidos adquieren actividad de guanilat o quinasa

Cuando la presin arterial se eleva, las cl ulas musculares de las aurculas cardacas secretan una hormona llamada pptido natriurtico auricular (ANP) , cuyos blancos son las clulas renales que reabsorben Na y las cluLis musculares lisas de los vasos arteriales. El ANP se une a un receptor espl:cfico de la membrana plasmtica de esas clulas, cuyo dominio c itosli,o adquiere actividad de guanila to ciclasa, ya que interacta con molculas de guanosina trifosfato (GTP) presentes en el c itosol y las convierte en guanosina monofosfato cclico (GMPc) (figs. 11 -4 y 11-5). Como muestra la figura 11-6, los GMPc activan a la enzima q uinasa G 1por GMPc), que a su vez fosfori la a una protena ciloslica especfica. Con ,J ia se pone en marcha un a cadena de reacciones qumicas citop lasmt icas l1 asta que se produce la respuesta celular. En nuestro ejemp lo se trata de la excrecin de Na por parte del rin y de la relajacin tlel msculo liso vascular, estados que llevan a la dism inucin de la presin arteriaL
11-11. Existen receptores membranosos que al ser inducidos adqu ieren actividad de serina-treonina qu inasa

Los receptores de la membrana plasmtica que dan origen a vas de seales intracelulares se componen de una o ms protenas. Cada receptor posee un dominio externo, un dominio transmembranoso y un dominio citoslico. Cuando la sustancia inductora se une al primero, el receptor se activa y su dominio citosl ico experimenta uno de los siguientes cambios: 1) Adquiere actividad enzimtica o activa a una enzima independiente del receptor (figs. 11-6 a 11-!2). 2) Activa a una protena localizada en la membrana plasmtica, llamada protena G, la cual activa a una enzima (figs. 11 -1 3, 11-16, 11- 19 y 11-21).

Las sustancias inductoras que interactan con los receptores que poseen acde serina-treonina quinasa pertenecen a una familia de molculas llall laclas TGF-{3 (por tramfonning growthfactor-jJ), cuyos miembros - algunos M ' analizan en el captulo 2 1-1 6- regulan diversas actividades celulares. La figura 11-7 muestra que la llegada de la sustancia inductora a la memlll'a na plasmtica de la clula inducida rene a las cuatro subunidades protei' as que integran el receptor, las cuales se hallan agrupadas de a dos y seran di rerentes entre s. A continuacin, mediante fosfatos tomados de molculas de ATP, los dolllinios citoslicos de dos de las cuatro subunidades fosfori lan a serinas y r 1 oninas de los dominios citoslicos de las otras dos subunidades, que se ac'' van y fosfori tan a serinas especficas de la protena citoslica Smad (por se1 '<'11 mothers against dpp, un gen de la Drosophila de los que hay siete anlo:us en los vertebrados). Luego la Smad se une a otra protena de su misma familia y ambas ingre/.!111 en el ncleo, donde se combinan con factores de transcripcin que acti1i vidad

Sustancia inductora

RECEPTORES MEMBRANOSOS QUE ADQUIEREN ACTIVIDAD ENZIMATICA O QUE ACTIVAN ENZIMAS

Como se acba de mencionar, ex isten receptores membranosos que al ser inducidos adquieren actividad enzimtica o activan a una enzima independiente. La actividad enzimtica que se revela en los primeros puede ser de guanilato ciclasa, de serina-treonina quinasa o de tirosirra quinasa, mientras l os segundos es siempre una tirosi na qu inas;t. que la enzima que activan .
,/
1

Smad 1 1 inactiva

Smad 1 activa

Smad 2

Fig. 11-7. Receptor membranoso cuyo dominio citoslico posee actividad de serinatreonina quinasa. Obs~rvcsc que el receptor se compone de cuatro subunidadcs - anJrcnlcmcnlc difcrcnrcs entre sf , las Cllnlcs se rCI~ Ilcn con In 1 k

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

1 J. LA COMUNICACION INTERCELULAR Y LA TRANSMISION INTRACELULAR DE SEALES

205

Sust

inductora Receptor

van a genes cuyos productos inhiben el crecimiento celular, controlan la diferenciacin o funcionan como sustancias inductoras durante el desarrollo embrionario temprano (caps. 14-5 y 21-16)
11 - 12. Existen receptores membranosos que al ser inducidos adquieren actividad de tirosina qu inasa

Las sustancias inductoras que interactan con los receptores que poseen propiedades de tirosina quinasa pertenecen a una familia de molculas llamadas factores de crecimiento. Estos factores --cuyas funciones se analizan en el captulo 18-28- suelen ser secretados por clulas inductoras cercanas a las clulas inducidas (secrecin paracrina). Los factores de crecimiento ms conocidos son el EGF (por epidermal growth factor), el FGF (fibroblast), el PDGF (plateledderived), el HGF (hepatocyte), el NGF (ner ve), el VEGF (vascular endothelial) y la insulina. Esta ltima estimula el crecimiento de varios tipos celulares, por ejemplo, los fibroblastos. Como muestran las figuras 1!-8, ll-1 O y ll-11, la llegada de las sustancias inductoras rene a las dos subunidades que integran el receptor, lo cual posibilita la fosforilacin cruzada de sus dominios citoslicos mediante la incorporacin de fosfatos procedentes de molculas de ATP. Esta autofosforilacin activa al dominio citoslico del receptor, que origina tres tipos de vas de transmisin de seales: uno en el que interviene la protena Ras, otro en el que ~~ participa la enzima fosfolipasa C-y y otro en el que lo hace la fosfatidilinositol 3-quinasa. D MEK Protena Ras. La figura 11-8 muestra que la protena Ras (por rat sarcome virus) est anclada en el lado citoslico de la membrana ~ ~ Quinasa Quinasa plasmtica mediante dos cidos grasos. Obinactiva activa srvese que cuando se activa se relaciona con el dominio citoslico del receptor a travs de Fig. 11-8. Receptor membranoso una protena adaptadora y de la protena GEF. cuyo dominio c itoslico posee acti Ello es porque la Ras es miembro de la familia de GTPasas que acvidad de tirosina quinasa. El recep tan asocidas a las protenas reguladoras GEF y GAP (cap. 7-38) (fig. tor se compone de dos unidades idnticas, las cuales se renen con la 11-9). Al igual que sus anlogas, cuando es influida por la GEF, la Ras llegada de las dos subunidades de la reemplaza el GDP presente en su molcula por un GTP. En cambio, cuansustancia inductora y forman un do es influida por la GAP, la Ras hidroliza el GTP a GDP y P. Cabe agrecomplejo homodimrico. Obsrvese que el receptor activa a la prote na gar que el GTP activa a la Ras y el GDP la inactiva (figs. 11 -8 y 11 -9). Rus a lravl'!s d tiJUI protcfnu :.ulapla La Ras-GTP activa a la quinasa Ruf (por Ras rts.wwiatNI .fill'tor), la dn111 u:A.l y cl1 lu uoldnu (iEI:

GOP

la quinasa ERK (por extracellular signal-regulated GOPkinase) (figs. 11 -8 y ll-22). Finalmente, la ERK fosforila y activa a otras quinasas citoslicas o ingresa en el ncleo y fosforila a protenas que activan a genes cuyos productos regulan el crecimiento y la diferenciacin celular. Debe sealarse que las protenas Raf, MEK y INACTIVA ERK pertenecen a una familia de quinasas llamadas GOP MAP (por mitogen-activated protein kinases), las cuales --con fosfatos provenientes de molculas de ATP- fosforilan a serinas y treoninas de un grupo amplio de protenas. Como se ve, la Ras-GTP desencadena una serie de reacciones qumicas cuyo ltimo sustrato da Jugar a la respuesta celular. Cuando sta concluye, una fosfatasa especfica remueve los fosfatos del receptor y la GAP induce a la Ras a que hidro] ice su GTP a GDP y P. Fosfolipasa C-y (PLC-y). En la clula existen varias clases de fosfolipasas, una de las cuales es la fosfolipasa C-y (PLC-y), que es la que se une a receptores con actividad de tirosina quinasa (fig. ll- 10). Otra es la fosfolipasa C-P (PLC-p), que como se ver en la seccin 11-14 se activa por medio de receptores acoplados a la protena G (fig. 11-19). Debido a que las vas de seales que nacen de las enzimas citoslicas PLC-y y PLC-P producen efectos similares, se analizan conjuntamente en las secciones 11-14, 11-17, 11-18 y 11-19 (fig. ll-22). Fosfatidilinositol 3-quinasa (PI 3-K). En la clula existen varias clases de fosfatidilinositol 3-quinasas, entre ellas una que se activa mediante receptores con actividad de tirosina quinasa y otras que lo hacen por medio de receptores acoplados a protenas O (figs. ll-11, 11 -21 y 11-22). Debido a que sus efectos son similares - tienen que ver con la muerte celular-, las vas de seales que nacen de estas enzimas se analizan conjuntamente en las secciones 11- 14 y ll-20 y en el captulo 22-4.

GT

r---\ ~ ~ACTIVA
GTP
Fig. 11-9. Activacin e inacti vacin de la pro tena Ras mediante las protenas GEF y GAP. respectivamente.

p~

Sustancia inductora

" NOM j-----,-_,Q~,:K

'

--,~

ATP

ADP

Fig. 11-10. Receptor membranoso cuyo dominio citoslico posee actividad de tirosina quinasa. El receptor se co mpone de dos unidades id6nticas. las cuales se rc(Jncn con la 11 gacln dt lns dos suhunidadcs de la sustaiH' in incltl< 'hnn y l~u ,: un un <'t tffi))ft i<t llomoditut<z lto, ( lh:1 1Vt''t' qw \1 ll' 't1plnl 11'11v' n In l o~:htl i p!uUI t ' yCI'I t ' yl NI/ , l~ th ulu 111l11pl11 1nftl1t o 11:.11

Fig. 11-11. Receptor membranoso cuyo dominio c itoslico posee actividad de tirosina quinasa. E l re ceptor se compone de dos unidades idnticas, las cuales se renen con la llegada de l:1s dos suhunicladcs de la sustauc ia indu tora y fornm n 1111 compkjt
lloiiiCidilll(oljl.-'0, ()h~:C IVt'~il" tllt' el ll'l't pltll M' II IH' 11

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11

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FUN DAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

11. LA COMUNICAClON INTERCELULAR Y LA TRANS M!SLON lNTR ACELULAR DE SE ALES

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S ustancia inductora

'

Sustancia inductora

F ig. 11-12. Receptor membranoso cuyo dominio citos6-

1ico activa a una tirosina quinasa independiente del receptor. Obsrvese que cuando el reccplor est inactivo se compone de dos subunidades separadas idnticas, las c ua les se renen con la llegada de la sustancia inductora y componen un complejo ho modim6rico. En ocros casos se forman receptores heterodimricos o heterotrimricos.

STAT

11 -1 3. Exist en receptores membranosos que al ser inducidos act ivan a una enzima aj ena a sus molculas

'
/)

Dimerizacin

Existen receptores que cuando son inducidos activan a una tirosina quinasa independiente de sus molculas, localizada en el citosol (fig. ll-12). Las sustancias inductoras ms conocidas que se unen a estos receptores son la hormona del crecimiento, la prolactina, la eritropoyetina (cap. 18- 18), algunas citoquinas y los antgenos cuando se unen a los linfocitos B o T. La va de seales que nace en estos receptores comienza cuando la sustancia inductora interacta con las dos o tres subunidades que integran el receptor. En algunos receptores esas subunidades son iguales entre s y en otros son diferentes. Como muestra la figura 11 - 12, la llegada de la sustancia inductora rene a las subunidades, lo cual activa al receptor y origina una va de seales que llega al ncleo muy rpidamente, pues se vale de un escaso nmero de molculas intermediarias. Una de las primeras molculas de esta va de seales es la tirosina quinasa nombrada al comienzo de la seccin. Entre las enzimas ms difundidas de este tipo se encuentra la tirosina quinasa J AK (por Jpnus kinase), que nos servir de ejemplo. As, apenas se activan los dominios citoslicos de las subunidades del receptor, atraen a sendas J AK. las cuales se fosforilan recprocamente y se activan (fig. 11-12). Luego las JAK fosforilan a los dominios citoslicos del receptor, que se vuelven a activar y atraen a unas protenas citoslicas llamadas STAT (por signa! transducer and activators oj transcription), las cuales son fosforiladas por las JAK. Como se ve, las JAK primero se autofosforilan y luego fosforilan a Jos dominios citoslicos del receptor y a las protenas STAT. Una vez fo sforiladas, las STAT se dimerizan e ingresan en el ncleo (fig. 11-12), donde se combinan con protenas especiales y forman complejos que activan a diversos tipos de genes. Estos - y sus productos- varan segn las sustancias inductoras y las clulas inducidas. Por ejemplo, la prolactina hace que las clulas de la glndula mamaria secreten leche, mientra que otras inducciones regul an la proliferacin ele.: algunos ti pos e lul:ir s. ,.1 d sarwllo 1.-' lllhrion:lri n , ctv.

Fig. 11-13. Receptor membranoso acoplado a una protena G. A. En reposo. B. En actividad.

RECEPTORES MEMBRANOSOS ACOPLADOS A PROTEINAS G

Como se dijo en la seccin 11 -9, existen receptores localizados en la membrana plasmtica que al ser inducidos activan a protenas G. En las prximas secciones se ver que las protenas G activan a varias clases de enzimas a partir de las cuales nacen importantes vas de seales intracel u.l ares.
11-14. Existen receptores membranosos que al ser inducidos activan a protenas G y, a travs de ellas, a distintos tipos de enzimas

Los receptores que se acoplan a las protenas G son protenas integrales multipaso que cruzan siete veces la bicapa lipdica de la membrana plasmtica (fig. 11-13). Las pr otenas G (por GTP-binding protein) tambin pertenecen a la membrana plasmtica, pero son heterotrimricas y se hallan adosadas a la cara citoslica de la membrana. Sus tres subunidades se identifican con las letras griegas rx, ~ y"(. Como muestra la figura 11 -13, las subunidades rx y "{ se unen a la membrana por medio de sendos cidos grasos. GDP En cambio, la subunidad ~ se une a la membrana por medio de la subunidad "(, con la que forma un complejo. La subunidad rx se comporta como una GTPasa que posee un GDP o un GTP, lo que la asemeja a la protena Ras (comprense las figuras 11-9 y 11 -14). Cuando la subunidad rx posee un GDP, tanto ella co111n c.:l complejo ~"{ us clc.:cir, la protena G comINACTIVA \v;;2P pl<-ta sv inacli van. l ~ n v:unhio , la pmi C IHI G se '
l l( ' l i Vll t ' ll l lllllll

F ig. 11-14. Activaci n de la subunidad Ct. y del complejo py de las protenas G por medio del GTP.

GTP

, 1 ( ;l l l'

1 ' l t ' t ' IIIJ I I,I/I HIII

1"11

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GTP

tlr 11 l ll

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

11. LA COMUNICAC!ON INTERCELULAR Y LA TRANSMISION INTRACELULAR DE SEALES

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o O O 11 11 11 -0- P- 0- P- 0- P- o-~CO 2 111o o o

HO OH

<(~" N~ ~~
.

NH 2

Protena G,

N:;::?

Adenilato .., ciclasa Mg2+

/, ,.,.-

p
+
p

ATP

AMPc

H,O ~

Foslodiesterasa

HO- P0- C~O 1

2

<=N N N )
AMP

OFig. 11-15. Transformacin del ATP en AMPc al actuar la protena G, sobre la adeni lato ciclasa. Luego la fosfodiesterasa convierte al AMPc en AMP. HO OH

ra del receptor. Es que el retiro de la suslancia inductora induce a la GTPasa de la subunidad a a hidrolizar el GTP a GDP y P, al cabo de lo cual la protena G se inactiva y la subunidad a se rene con ~.: 1 complejo ~y (figs. ll-l3A, 11-14 y 11 - 16). Habitualmente las protenas G ampli1ican las seales. Lo logran porque una sola suele activar a muchas unidades de la enzima, cada una de las cuales, a su vez, da lugar a numerosos segundos mensajeros. Por otra parte, cuando por alguna cirnmstancia los receptores acoplados a las protenas G son estimulados en forma ininterrumpida, intervienen dos tipos de protenas citoslicas desensibilizanles: 11nas quinasas especficas que fosforilan 11 los receptores y los inhiben, y las prold nas denominadas arrestinas, que los !>loquean. 11- 15. La adenilato ciclasa genera AMP cclico, que activa a la quinasa A El nucletido adenosina monofosfaln cclico (AMPc) debe su nombre a que

:ustancia inductora

La activacin de la protena G se produce cuando la sustancia inductora se une al receptor, pues ste se pone en contacto con la subunidad a y hace que su GDP sea reemplazado por un GTP (fig. 11-13B). Opuestamente, cuando la sustancia inductora se desliga del receptor y la transmisin de la seal concluye, la protena G se inactiva debido a que la GTPasa de la subunidad a hidroliza el GTP a GDP y P (fig. 11-13A). Existen varias clases de protenas G, las cuales dan origen a distintas vas de seales intracelulares despus de interactuar con las siguientes enzimas: 1) Adenilato ciclasa (AC), que a partir de adenosina trifosfato (ATP) genera adenosina monofosfato cclico (AMPc) (figs. 11-15, 11 - 16 y 11-22). 2) Fosfolipasa C-~ (PLC- ~), que al igual que la PLC-y catali za la escisin del fosfatidi linositol 4,5-difosfato (PIP2) localizado en la monocapa citoslica de la membrana plasmtica (cap. 3-3) (fig. 2-16) y forma inositol 1,4,5-trifosfato (1P3 ) y diacilglicerol (DAG) (figs. 2-13, 11-10, 11-18, 11-19 y 11-22). 3) Fosfatidilinositol 3-quinasa (PI 3-K), que le aade un fosfato al PIP2 y Jo convierte enfosfatidilinositol 3,4,5-trifosfato (PIP3 ) (figs. 11-20, 11-21 y 11-22). Debe sealarse que el AMPc, el IP 3, el DAG y el PIP3 son catalogados como segundos mensajeros. Volviendo a las protenas G, cuando el receptor las activa - y el GDP de la subunidad a. es intercambiado por un GTP- , la subunidad a y el complejo ~y se separan (figs. ll-13B y 11-14). Luego la subunidad a o el complejo ~y entran en contacto con la adenilato ciclasa, con la fosfolipasa C-~ o con la fosfatidilinositol 3-quinasa, las cuales en algunos casos se activan y en otros se inhiben (figs. 11-16, 11-19 y 11-21). 1\n las prx inws s ..:ciom:s s anali za n las distintw; un:li'\'II<' IH'ias d, sns wfi vn~ itHit"S 11 i11hihicitnws. qllt ' , ., .~: a 11 liJWIIH', l1 1 '"H 111111 111 111dl ll 'l111 11 rw 'll' P 1

fosfato compone un anillo al unirse si""tltneamente con el C3' y el C5' de la oihosa. El AMPc se forma a partir de ATP 111 diante la adenilato ciclasa, una enzilll:t situada en la membrana plasmtica '1" requiere Mg2 para funcionar. La fi'llra 11-15 muestra la reaccin y las frllllllas de las molculas involucradas. ltr bc agregarse que la adenilato ciclasa :: activada por la subunidad a de una l""l dna G especfica, llamada protena ( ;,, (fig.ll-16). 11. su vez, el aumento del AMPc en el o 'olosol activa a la quinasa A (por ,\MI'c), que en su estado inactivo es un lolr:mcro compuesto por dos subunida, hs rcguladoras y dos subunidades catalticas unidas entre s (fig. 11-17). Pa"' q11<.: la quinasa A se active deben conectarse dos AMPc con cada subunioltul r guiadora, de modo que se le unen cuatro AMPc. La unin de los AMPc l'(>: ll'a a las subunidades reguladoras de las catalticas, las cuales se activan, 1 1 ,if,ir, manifiestan sus propiedades enzimticas. 1\ ontin11acin, parte de las subunidades catalticas activadas transfieren ltdllltts I<Hllados de molcnlas d i\TP n scrinas y trconinas de diversas pm
1 11

Fig. 11-16. Reacciones producidas a panir de la unin de una sustancia inductora con un receptor membranoso que activa a la subunidad a de la protena G, . Obsrvese cmo
sta interacta con la adeni lato cicla!-ia.

l t fu iPl l 'ilo.-: ,j\ as , qtll' Nt' .u tiv un

y dnn lugar n 1\'SJUI~s lns lTin larcs r asi inntt

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGJA CELULAR Y MOLECULAR

JI

L A COMUN!CACION INT E RCELULAR Y LA TR ANSMISTON INTRACELULAR DE SEALES

211

datas. Simultneamente, 'otras subunidades catalticas ingresan en el ncleo

y generan respuestas celulares tardas. Ms adelante se describen ejemplos de

A
1)11lnasa A inactiva Quinasa A activa

ambos tipos de respuestas. Debido a que el AMPc es un segundo mensajero muy potente, las clulas poseen dos mecanismos alternativos para regular su concentracin. El ms importante depende de la enzima fosfodiesterasa, que hidroliza la unin entre el fosfato y el hidroxilo del carbono 3' en la ribosa del AMPc. Ello convierte al AMPc en AMP, que es un nucletido inactivo (fig. 11 -1 5). Varias metilxantinas, como la cafena, la teofilina y la aminofilina, inhiben la actividad de la fosfodies terasa y, por lo tanto, la cada del AMPc. El segundo mecanismo que regula la concentracin del AMPc es ms lento que el anterior, ya que depende de la unin de una sustancia inductora a su receptor y de una protena G que produce efectos contralios a los de la protena Gs. Se trata de la protena G;, cuya subunidad a inhibe a la adenilato ciclasa y hace caer la concenuacin del AMPc. A su vez, la cada del AMPc inactiva a la quinasa A -sus subunidades catalticas y reguladoras se renen- y la respuesta celular se detiene. El AMPc es un segundo mensajero pluri valente que provoca respuestas muy distintas segn la clase de clula en que acta, la sustancia que induce a esta ltima y el receptor que se activa. En la tabla 11-1 se dan ejemplos de respuestas inmediatas mediadas por el AMPc cuando se une a quinasas A que actan en el citosol. La degradacin del glucgeno y la detenci n de su sntesis que se producen en las clulas musculares estriadas en situaciones de estrs son dos ejemplos de respuestas inmed.iatas mediadas por las subunidades catalticas de la quinasa A. El proceso comienza en las glndulas suprarrenales, que a

~~ ~~~;;

- ----

/ /

Glucgeno fosforilasa

inactiva

Gl ucgeno fosforilasa quinasa inactiva

Glucgeno fosforilasa quinasa activa

'

'

'

Glucgeno fosforllasa activa

/
/

...
1 1111r.geno

GJ ------Glucgeno s intasa inactiva

'

'~

1 Glucgeno j

1Glucosa 1-P 1

sintasa activa

Tabla 111. Ejemplos de res.puestas celulares mediadas por el AMP cclico

Sustancias Inductoras
Adrenalina Glucagn Adrenalina Adrenalina Adrenalina Glucagn Hormonas folculoestimulante (FSH) y luteinizante (LH) Tirouopina (TSH) Adrenocorticotropina (ACTH) Hormona antidiurtica Parathormona
Odoranlcs

Clulas inducidas
Hepatocitos

Efectos
Degradacin de glucgeno Menor sntesis de glucgeno Degradacin de glucgeno Mayor frecuencia cardaca Degradacin de triacilgliceroles Menor captacin de aminocidos Mayor sntesis de estrgeno y de progcsterona

Musculares estriadas M usculares cardacas Adipocitos

folculos ovricos

Tiroideas Suprarrenales (corteza)

Secrecin de hormona tiroidea Secrecin de cortisol

Renales Oseas
Nltunt pill'lndt"l l n 11 1

Retencin ck agua Rcab"orci11 <k ( '11 '

l kh~\d11 1 dt. u h ll

"'

1" 11sc.:cuencia del estrs liberan adrenalina, una sustancia inductora que se 1 111' k:a en la sangre y llega a las clulas musculares estriadas, a cuyas mem1" II II US plasmticas se une. Se conecta con un receptor membranoso llamado 11 ndrenrgico, que activa a la protena Gs. Dado que sta activa a la enzi11 111 ndenilato ciclasa, se genera AMPc y se activa la quinasa A, cuyas sub" ""llldes catalticas fosforilan a dos enzimas citoslicas: la glucgeno fos1, 11l11sa quinas a y la glucgeno sintasa (fig. 11- 17). 1,11 glucgeno fosfor ilasa quinasa se activa y fosforila a otra enzima, la hu~eno fosforilasa, que degrada al glucgeno mediante la liberacin pro" ' "iva de sus monmeros, representados por molculas de glucosa 1-fosfa1 1 (<'Stimulacin de la glucogenlisis). :n cambio, la glucgeno sintasa se inhibe y deja de sintetizar glucgeno l 11'1 11tir de molculas de glucosa (detencin de la glucogenognesis). t 'u111o se ve, en las clulas musculares estliadas la activacin del recep111 1 1. adrenrgico eleva la concentracin de glucosa ! -fosfato y de glucosa. 1 1 "1" a regar que posteriormente estas dos hexosas se convierten en gluco" , i'nsfato por accin de las enzimas fosfoglucomutasa y hexoquinasa, 11 1''ti va mente. 1ltulo que para generar ATP el organismo consume glucosa 6-fosfato 11 tq 1 1 .. X- y 8-7) (fig. 8-6), en situaciones de estrs recurre a ella en grandes 111 1"lnd..:s a fin de sostener la contraccin muscular (cap. 5-33). Tal deman11 "" l11u'< ' que.: parte de la glucosa 6-fosfato requerida por los msculos sea pral 1 1 111r c.:l hgado. Para ello, a travs tambin del receptor ~z- adrenrgico, 1 11 lilt~ n nli na induce al hepatocito a producir glucosa 6-fosfato mediante las 11 11 11111 '. <<'acciones de las clulas musculares estriadas. Luego, una enzima il1111illl 1 11 l:t membrana del REL, la glucosa 6-fosfatasa, transforma a la d11, 1 1 11 , I'osl'alo en glucosa, que sale del hepatocito, pasa a la circulacin llll f' " ' ll< 'l l (l'ap. 7-27) y llega a las clulas musculares, donde la hexoquina" l11 ", 'HI Vit:t'l un gl11cosa 6-fosfato con el fin de generar ATP (fig. 8-6). 1 11", 1 ll' lll[llo dt.: r ~ puesta inmediata mediada por la adrenali na se da en l 1 11 l11 h1 , ll<ll '.< 'ldlll l'" lisns dl'i 111h11 di rl:sli vu lns lwo11qui os. t:n r~Il' n ~u

F ig. 11-17. Unidades reguladoras (R) y catalfticas (C) de la qu inasa A. Obsrvese la unin del AMPc con las unidades reguladoras y cmo las unidades catalticas fosforil an a las enzimas citoslicas responsables de la gl ucogenlisis (A) y la glucogenognesis (B) e ingresan en e l ncleo para fosforilar a la protena CREB.

212

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

11 . L A COMUNICACJON INTERCELULAR Y LA TR ANSMISION INTRACELULAR DE SEALES

213

PO'~

1 '

-,oP-oooH HO OH

Protefna.Gq
OH
1
1

Po'1 '
1 1 2

o
O= P - O
1 1 -

CH -CH- CH
1

1' Fosfolipasa C-1}

o 1
CH 2 -~H- ~H,

o 1
1

o 1
1

-,op - O o OH
+
HO OH

c:= o c: = o

(CH2).(CH2). CH, CH,

o
IP3

o
1

o
1

~o,-

C=O C=O

PIP2

(9H2).(9H2).

DAG

CH,

CH,

Fig. 11-18. Divisin del PIP2 en IP3 y DAG cuando acta la protefna Gq sobre la fosfolipasa C-~.

la adrenalina se une a un receptor diferente, llamado az-adrenrgico, que activa a la protena G;, la cual funciona de una manera distinta de la esperada, puesto que no interviene su subunidad a -que segn se vio inhibe a la adenilato ciclasa- sino su complejo j3y. Ms an, este complejo no se une a una enzima sino a un canal de K de la membrana plasmtica, que se abre y permite que el K se escape de la clula. Debido a ello la membrana plasmtica se hiperpolariza y su excitabilidad disminuye, con la consiguiente relajacin de las clulas musculares lisas mencionadas. La figura 19-20 muestra un sector de la membrana plasmtica del espermatozoide en el que se ilustra otro ejemplo de respuesta inmediata distinta mediada por una protena G. Obsrvese que aqu la subunidad a se une a la adenilato ciclasa y que el complejo j3y lo hace con un canal de Ca2' localizado en la membrana (cap. 19-18). Los dos ltimos ejemplos aaden un nuevo dato sobre las funciones de las protenas G, dado que en algunos casos sus complejos j3y interactan con canales inicos. A continuacin se analizar la actuacin de las subunidades catalticas de la quinasa A que entran en el ncleo y generan respuestas tardas (fig. 11-17). En el nucleoplasma, mediante un fosfato tomado de un ATP, cada subunidad cataltica fosforita a una serina de una protena llamada CREB (por cAMP response element binding protein), que se activa y se une a otra protena nuclear, denominada CBP (por CREE binding protein). Luego el complejo CREB-CBP se une a la secuencia reguladora de algunos genes, ms precisamente a un segmento llamado CRE (por cAMP response element). Dado que ello estimula la expresin de esos genes, puede decirse que la CREB y la CBP son factores de transcripcin activadores (cap. 14-7). La secuencia CRE se halla en genes relacionados con la proliferacin y la diferenciacin celular. Adems se encuentra en el gen de la somatostatina, una hormona producida por los islotes de Langerhans y la mucosa del tubo digestivo, que inhibe la sntesis de glucosa y la secrecin de gastrina.
11 - 16. En la tos ferina y en el clera se afect a el funcionamiento de protenas G

ciclasa, por Jo que los niveles de AMPc se mantienen ajtos y la qu inasa A permanece activa. Como consecue ncia, los canales de K+ mencionados en la sec~ i n anterior se cierran y la excitabilidad del msculo liso bronquial aumenla, por Jo que el msculo se contrae en forma sostenida y causa la tos que caracteriza a la enfermedad. El clera es una enfermedad producida por la toxina del bacilo Vibrio cho/rae, caracterizada por diarreas profusas, desequilibrios inicos y deshidralacin. Estos trastornos se de ben al aumento de los niveles de AMPc en las clulas de la mucosa intestinal. Es que la toxina bloquea a la GTPasa de la '.ttbunidad a de la protena Gs, lo cual impide que el GTP se hidro! ice a GDP y P. Por consecuencia, la protena G, y la adenilato ciclasa se mantienen acri vas y la enzima produce AMPc en forma sostenida. Dado que en las clulas dl:l epitelio intestinal el AMPc se une a un canal de CJ- de la membrana plastntica, ese canal se abre y el ion pasa a la luz del intestino en forma masiva. 1.a diarrea se debe a que el CJ- arrastra al Na y a que ambos iones provocan In salida de grandes cantidades de agua.

Fig. 11-19. Accin de la subunidad Cl. de la protena Gq sobre la enzima fosfo lipasa C-~
(PLC-/]J.

1t - 17. l a fosfolipasa

C -P gene ra IP3 y DAG a partir de PIP2

La tos ferituz es una enfermedad producida por la toxina del bacilo Bordetel/a pertussis. La toxina acta en las clulas musculares lisas de los bronquios, donde impide que el GTP se acople a la subunidad a de la protcfna G;, hecho que conserva a la subunidad a unida al dmero I~Y u fmma pt"llllanen 1 .Ello iruposihilita In accin inhihih>ria d, la protdn11 (ir 1111h11 lll lldt11il11h

En la membrana plasmtica de diversos tipos de clulas la unin de algunas sustancias inductoras con sus receptores activa a la subunidad a de la troten a G q, que debido a ello reemplaza su GDP por un GTP. A su vez, la pt otena Gq activa a la fosfolipasa C-~ (PLC-3), una enzima que se halla en ,1 itosol cerca de la membrana (fig. 11- 19). Un ejemplo de esta clase de inducciones corresponde a la adrenalina , ttando se une a un receptor distinto de los nombrados hasta aqu, llamado ,-adrenr gico. En el captulo 3-3 se dijo que uno de los fosfolpidos de la bicapa lipdica ,,. las membranas celulares es el fosfatidilinositol (PI). En la membrana plas" t: I ica se localiza en la monocapa citoslica y, aunque es el ms escaso, ti e'"" un enorme significado funcional debido a que interviene en importantes vf:ts de seales intracelulares. Para ello se fosforila en el C4' y en el CS' del ttll>sitol mediante la transferencia de fosfatos tomados de molculas de ATP, 1, ,ttal In convierte primero en fosfatidilinositol 4-fosfato (PIP) y luego en lu~fnlidilinosito14,5-difosfato (PIP2 ) (figs. 2-16 y 11 -18). y,,l vil'lldo a la fosfolipasa C-3, una vez activada cataliza la hidrlisis del 1'11' .. ll"'' rn lllll s dijo en la se cin 11-14 se fracc iona en dos molculas re lll lt VI IItll"nl IW'Irt tta .~. tl hwNIIul 1,4,5-lrifosfulo (11',) 1'1 dint"il littol t lli\(; ltlr". ' 1 l , 11 I H y 11 1'1) l'tt l.. pt ll \ ttlt.t, 'it'o 'l'lllt H "I 1.1 Vt" tl t qt H '

214

FUNDAMENTOS DE BIOLOG IA CELULAR Y MOLECULAR

L1. LA COMUN!CACION INTERCELULAR Y LA TRANSM!SION INTRACELULAR DE SEA LES

215

ambas molculas actan como segundos mensajeros en vas de seales de gran importancia para el funcionamiento celular. Debe sealarse q ue estas vas cesan cuando intervienen dos fosfatasas especficas que catalizan la remocin de dos de los tres fosfatos del PIP2 , lo cual lo convierte nuevamente en PI. En la seccin 11-12 se dijo que la clula posee varias clases de fosfolipasas. Entre las ms comunes se halla la fosfolipasa C-y (PLC-y), que al igual que la PLC- ~ hidroliza el PIP2 y lo fracciona en IP3 y DAG (figs. 11 - 10 y 11-22). Debido a que ambas fosfolipasas generan productos similares, sus efectos se analizan conjuntamente en las prximas dos secciones. Corresponde agregar que a esos efectos deben sumarse los de la protena Ras (cap 11 - 12), ya que las vas de seales nacidas en las dos fosfo lipasas pasan por la protena Raf (fig. 1l-22). Otras dos fosfolipasas relativamente comunes en diversas clases de clulas son la fosfolipasa A (PLA) y la fosfolipasa D (PLD). Se ilustran en la figura 19-22, que muestra partes del espermatozoide y de la membrana pelcida del ovocito al comienzo de la fecund aci n. 11-18. El IP3 abre los ca nales de Ca 2 situados en la membrana del RE, y parte del Ca2 citoslico se une a la calmodulin a, que activa a la quinasa CaM Apenas el PIP2 es fraccionado e n DAG e IP3 por la PLC- ~ o la PLC-y, el

1 11 quinasa CaM da o rigen a varias vas de seales intracelulares. As, en di 11111os tipos celulares inicia una cadena particular de activaciones derivada ,, , rosfori lacin de sucesivas quinasas, hasta que la ltima produce la resl"ll .la celular. Otro ejemplo corresponde al cerebro, en algunas de cuyas neu1 11' ' ~ la quinasa CaM-ll se mantiene activa an despus de la cada del Ca2 , ll"~ lico , de ah que se estima que esa quinasa se relaciona con la memoria 1 1< ' '' procesos de aprendizaje. l>:n el captulo 5-33 se vio que la calmodulina de la clula muscular estriadn " ' ibe el nombre de troponina C . Adems se analiz la intervencin del , ""' piejo Ca2 -troponina C durante la contraccin muscular. Respecto del Ca 2 libre, su presencia en el citosol da lugar a una extensa Vi"' dad de respuestas celulares. Por ejemplo, participa en el desarmado de ,,Nnticrotbulos (cap. 5-7), activa a la enzima glucgeno fosforilasa q uinasa , "lns clulas musculares estriadas y en las clulas hepticas (seccin 11 - 15) 11'1'. 11- 17 A), estimula la exocitosis de insulina en las clulas B de los islo'' . de Langerhans (fig. 7-20) y de neurotransmisores en algunos terminales ~~ ~ onicos (fig . 7-21), etctera. Adems, debido a que se une a la quinasa C, el 1 'u., libre hace posible la va de seales intracelulares descrita en la prxima

'' '< 'c in (figs. 11-10 y 11-1 9). 1.as seales intracelulares mediadas por el Ca 2 concluyen cuando el ion " loma al interior del REL o es extrado hacia la matriz extracelular por me"'" de bombas de Ca2 (caps. 3-23 y 7-26). 11 19. El DAG activa

IP3 abando na la membrana plasmtica y pasa a l citosol. Pronto se une a un

canal de Ca2 dependiente de ligando situado en la membrana del REL, cuya apertura permite que parte del Ca2 que se halla en ese organoide se transfiera al citosol (cap. 7-26) (figs. 11-10, ll- 19, 19-22 y 19-23). Normalmente la concentracin citoslica de Ca2 es muy baja (cerca de I0-7 M), ms de mil veces inferior a la concentraci n e n el REL y en lamatriz extracelular. E stmulos de distinta naturaleza elevan el Ca2 en el citosol, que puede proceder de fuera de la clula o de depsitos citoplasmticos, como lo son el REL y las mitocondrias (caps. 7-26 y 8-22). As, en respuestas que requieren un incremento rpido de la concentraci n de Ca 2 en el citosol, el ion se moviliza desde el exterior o desde los organoides mencionados (no rmalme nte lo hace desde e l REL) debido a la apertura transitoria de canales de Ca 2 situados en la membrana plasmtica o en la membrana de esos organoides. En los captulos 3- 14 y 7-26 se dijo que los canales inicos se abren por medio de un ligando (se acaba de ver que el IP3 lo es) o por un cambio en el potencial elctrico de la membrana (fig. 3-20). Un ejemplo de este ltimo mecanismo se da en las clulas musculares estriadas, en las cuales el Ca2 sale del retculo sarcoplasmtico a travs de un canal inico dependiente de voltaje . E n el citosol el Ca 2 acta como un segundo mensajero en distintas vas de seales intracelulares. Para ello se liga a una protena llamada calmodulina, aunque en otras ocasiones permanece como un ion libre (figs. 11-IO y 11-19). La parte media de la calmodulina es alargada y cada uno de sus dos extremos, que son globulares, posee dos lugares de unin para el Ca2 . Debe sealarse que la calmodulina se activa slo si se le unen los cuatro Ca2 que su molcula es capaz de albergar. Una vez formado, el complejo Ca 2-calmodulina activa a la quinasa CaM (por Ca 2 -cabnodulin), que luego de autofosforilarsc fosfori la a s rinas y treoninas de o tras quinasas citnslicas.

a la quinasa C

Una vez que el PIP2 es fraccionado en DAG e IP3 por la PLC-~ o por la 1'1 .l -y, el DAG permanece en la monocapa citoslica de la membrana plas"'licu, como lo estaba el PIP2 (figs. 11 -10 y ll-19). Si multneamente, parte del Ca 2+ que se libera del REL por accin del IP3 w une a una enzima citoslica llamada quinasa C (por Ca 2 ) . Luego el comdrjo Ca2-quinasa C se dirige a la membrana plasmtica y se coloca junto ni DAGa fi n de que ste active a la quinasa C (figs. 11 - 10, 11 -19, 11-22 y 11 23). omo se ve, el Ca2 citoslico liberado por el IP3 hace posible la activa,., 11 de la quinasa C por medio del DAG, lo que demuestra que el IP3 y el 1 1/\G se relacionan no slo por su origen -el PIP2sino tambin por la nsislencia que el primero le presta al segundo. /\penas se activa, la quinasa C fosforita a serinas o a treoninas de protell iiS citoslicas y nucleares, las cuales varan en los distintos tipos de clulas. U na de las protenas citoslicas es la glucgeno sintasa, que en la clula 1> ptica es fosforilada no slo por la quinasa A sino tambin por la q uinasa t . omo se vio en la seccin 11-15, el fosfato le impide a la g.lucgeno sinlnsa sintetizar glucgeno a partir de molculas de glucosa (fig. 11 -1 7B). Otra protena citoslica que fosforita la quinasa C es la Raf, en cuyo caso lil va de seales deriva en la activacin de genes que inducen el crecimiento y la diferenciacin celular (seccin 11 - 12) (fig . 11-22). Otros dos ejemplos en los que la enzima quinasa C fosforila a protenas itoslicas se dan durante la fecundacin, en las etapas mostradas en las fi1\llras 19-22 y 19-23. l'or su parte. las protenas nuc leares que se fosforilan mediante la quinasa <' .~ <lit fa torcs d lnu ts<.: t ip i()n que a ti van o reprimen a un g rupo de genes
ll ' liii'OIIIIclOS I'CIII
t

ptoliiL'I iH'IIII I'l'illl lll. 1.11 i llltOiillllt'I!I cll'

l!i

IJIIillliSII (' l' ll

1\'lllllrul d\' 1 11 pr11lal t l l llltlll d1 111',

4 1 ~ 111 1 11/. lot~ d t' IIII H, III t 11 1 1\', llldl lll /.\"l!l llt 'l ' lllll

216

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

1 1 LA COMUNICACION INTERCEL ULAR Y LA TRAN SMISION INTRACELULAR DE SE A LES

217

P0 2l '

P0 2l '

-',OP-O O H HO OH

" ' , O P - O u O - Po;-

Protenas G 13 o G 1

HO

OH O= P - O

o
O= P- 0
1
1

o
1

.y
Fosfatidilinositol 3-quinasa

-o 1
o
1 1

CH, - ? H - ?H,

CH,- CH - CH2

Fig. 11-20. Formacin de PIP3 a partir de PIP2 cuando acta la protena Gil o la protena G; sobre la enzima fosfatidilinositol 3-quinasa.

o
1

o
1

o
1

o
1

PIP2

C= O C= O 1 1 (9H,),(9H,),

C= O C= O

(9H,).,(9 H,),

CH, CH,

CH, CH,

tumorgena de los steres de forbol, los cuales poseen estructuras sim ilares a la del DAG y al igual que ste activan a la quinasa C. No obstante, debido a que no se degradan - y, por lo tanto, no se interrumpe la actividad de la quinasa C-, promueven una proliferacin cel ular sostenida, con la consiguiente formacin de tumores. Debe sealarse que en algunas neuronas del cerebro la quinasa C no fosforila a protenas del citosol ni del ncleo sino a canales inicos de la membrana plasmtica, lo cual los abre, con la consiguiente alteracin de la excitabilidad de la membrana. La quinasa C interrumpe su acti vidad cuando el DAG se hidroliza. Uno de los productos de esa hidrlisis es el cido araquidnico, que es un precursor de diversos eicosanoides, entre los que se hallan las prostaglandinas.

11-20. La va de transm isin de seales que origina la enzima PI 3- K se relaciona con la supervivencia celu lar

ATP
A

ADP

En la seccin 1J -12 se dijo que existen varias clases de fosfatidilinositol .1-quinasas (PI 3-K), entre ellas una que se activa mediante receptores con rwtividad de tirosina quinasa y otras que lo hacen mediante receptores acoplados a protenas G (fi gs. 11-11 , 11-2 1 y 11 -22). Debe agregarse que las seo undas se activan a travs de la subunidad a de la protena G 13 o del compl <:jo ~y de la protena G; (figs. 11-20 y 11-21 ). Las PI 3-K se hallan en el citosol y todas producen los mismos efectos: le 1 111aden un fosfato al fosfatidilinositol 4,5-difosfato (PIP2 ) de la membrana pl:1 smtica y lo con vierten enfosfatidilinositol3,4,5-trifosfato (PIP3 ) . As, el 1'1P2 no slo es fuente de IP3 y DAG sino tambin de PIP3 . Como muestran las figuras J 1-20 y 11-2 1, el PIP2 se localiza en la monoapa citoslica de la membrana plasmtica y es fosfmi lado en el sitio 3 del tllt>sitol. El estudio de las vas de seales nacidas en las PI 3-K se completa en el < 'llptulo 22-4 debido a que su interrupcin conduce a la muerte celular.

Fig. 11-22. Algunas integraciones de las vas de seales que nacen de receptores con acti vidad de ti rosina quinasa o de receptores acoplados a prote nas G. PLC-{3, fosfolipasa C-~; PLC-y, fosfolipasa C-y; AC, adenilato ciclasa.

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Fig. 11-21. Accin de la subunidad a. de la protena Gil (A) y del complejo ~y de la protena Ci; ( JI ) sobre la fosfalidil iuosilol \ qninll~lll (/'/ 3 K).

11'1.2'1'1.
lllllc ' V

1 ( M , Blllllll ' l 1\ 1 , 111 1111' V 11 . 11 11d Kthrl .1.11. r f'lltl) lnl uhii iPII cd l l , ....,. 111 11 11 d jl c' d MAl ' ~1 1111 \.jl '

218

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

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El ncleo

12

12- 1. El nucleo es uno de los compartimientos esenciales de la clula eucariota

La presencia del ncleo es la principal caracterstica que distingue a las clulas eucariotas. El ncleo ocupa un 10% del volumen total de la clula y en ,< se halla confinado el ADN, excepto el de las mitocondrias. Lo delimita la l'arioteca o envoltura I'!Uclear, compuesta por dos membranas concntricas que se continan con la membrana del RE (fig. 12~1) . La carioteca posee numerosas perforaciones -llamadas poros-, que colllunican el interior del ncleo con el citosol. Adems se encuentra reforzada por dos mallas de filamentos intermedios, una que se apoya sobre la superfiie interna de la envoltura - la lmina nuclear vista en el captulo 5-3- y otra que lo hace sobre la superficie externa (fig. 12-1). En el compartimiento nuclear se locali zan: 1) Cuarenta y seis cromosomas, cada uno formado por una sola molcula dt.: ADN combinada con numerosas protenas. 2) Varias clases de ARN (mensajero, ribosmicos, de transferencia, pequedos), que se sintetizan en el ncleo al ser transcriptos sus genes. Estos ARN '::den del ncleo por los poros de la envoltura nuclear despus de su procesal! liento (cap. 15). 3) El nuclolo, donde se localizan los genes de los ARNr y los ARNr re'in sintetizados. 4) Diversas protenas, como las que regulan la actividad de los genes, las que promueven el procesamiento de los ARN, las que se combinan con los

Fig. 12-l. Representaci n grfica del ncleo celular. Obsrvese la lmina nuclear (conslituida por ltuninofila
menlos)

y la

flvollura

nm:knr

ouu1 J HH ~t~ lnl !utlt tld

h"IIIU t l 11 111!1 11111"1 11 111 11 11 ( 1'~

:.1...

220

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

12. EL NUCLEO

221

ARNr en el nuclolo, las ADN poli meras as, las ARN polimerasas, etc. Estas protenas son fabricadas en el citosol e ingresan en el ncleo por los poros de la envoltura nuclear. 5) Los elementos mencionados se hallan dispersos en la matriz nuclear o nucleoplasma , cuya composicin es escasamente conocida.

ENVOLTURA NUCLEAR
12- 2. La envoltu ra nuclear est co mpuesta por dos membra nas concn tricas atravesadas por poros
Hemos dicho que la envoltura nuclear o carioteca est compuesta por dos membranas concntricas. Estas se unen a nivel de los poros, los cuales se hallan distribuidos ms o menos regularmente por toda la envoltura (figs. 12-1, 12-2 y 23-5). El espacio entre la membrana externa y la membrana interna -o espacio perinuclear- se comunica con la cavidad del RE. La membrana externa se contina con la membrana del RE y es comn que aparezca tachonada de ribosomas (fig. 12-2). Las protenas que se sintetizan en estos ribosomas se incorporan a las membranas de la envoltura o se vuelcan en el espacio perinuclear.
Fig. 12-3. Esquema de la envoltura nuclear, fonnada por dos membranas que se continan a nivel de los poros nu-

cleares. Los complejos del poro presentan simetra radial octogonal. La lmina uclear cubre la cara interna de la envoltura, salvo en los poros.

1.a membrana nuclear interna est sostenida por la lmina nuclear, que es '' "" delgada malla de laminofilamentos entrecruzados (cap. 5-3). La lmina ' " 11 ! ar se interrumpe slo a la altura de los poros (figs. 12-1 y 12-3). Algu1111 . protenas integrales de la membrana nuclear interna sirven como puntos ti !lltclaje para los laminofilamentos. 1.a lmina nuclear le otorga resistencia a la carioteca y establece su forma, J<t' lll;ralmente esfrica. Como se ver en el captulo 18-18, ambas estructuras ' <h.:sarman al comienzo de la mitosis y reaparecen cuando sta concluye, al '"""arse los ncleos en las clulas hijas.

1' :1 . Los poros de la en voltura nuclea r son estructu ras complejas

1.os 3.000 a 4.000 poros que posee la envoltura nuclear son mucho ms ' 1111 ' simples canales entre el nucleoplasma y el citosol. En ellos existe un con1111\lo de protenas llamadas nucleoporinas, las cuales componen una estruc111 1!1 Jcnominada complejo del poro que consta de los siguientes elementos lli ',S . 12-3 y 12-4): 1) Ocho columnas proteicas que forman una pared cilndrica en torno a I n ''lla lla membrana externa de la carioteca se contina con la membrana in'' 1"" En el lado citoslico los extremos de las columnas proteicas componen " " fi nill o o boca interna del poro nuclear. En el lado externo ocurre algo si., dlar.
.~ ) l'rotenas de anclaje que amarran las columnas proteicas a la envoltu' ,, 1111\;lcar. Cada protena se liga a una de las columnas, atraviesa la membra11 11 d; la envoltura y su extremo sobresale en el espacio perinuclear.

I ,II OSOL
Fig. 12-2. Micrografa electrnica del ncleo de una clula pancretica. Np, nucleoplasma. Parte de la cromatina (C) se encuentra junto al nuclolo (Nu) y parte junto a la cara intema de la envoltura nuclear (EN) , excepto a ni vel de los poros nucleares (flechas). Obs~ r vc sc la cara extern a de la
L' ll vollura mu.:lcar cuhicrta de 1ihc ~. t llll n:; , 2 11.0f)( )X. (( 'clr! tsfa de 1 1\ cidl \ )

Columna proteica

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222

FUNDAMENTOS DE BJOLOGTA CELULAR Y MOLECULAR

12. EL NUCLEO

223

CITOSOL

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NUCLEO

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Fig. 12-5. A. Pasaje de protefnas desde el citosol hasta el ncleo a travs del complejo del poro.

3) Protenas radiales que surgen de las columnas y se orientan hacia el centro del poro. Dado que se acortan y se alargan, convierten al co~plejo del poro en un diafragma. 4) Fibrillas proteicas que nacen de las bocas interna y externa del complejo y se proyectan hacia el nucleoplasma y el citosol, respectivamente. Adems, una fibra circular une entre s extremos distales de las fibrillas que parten de la boca interna. Ms adelante se ver que las fibrillas proteicas intervienen en el pasaje de las protenas a travs del poro (fig . 12-6). El complejo del poro mide alrededor de 30 nm de altura y 100 nm de dimetro. Sin embargo, las protenas radiales reducen su orificio, cuyo dimetro flucta entre 9 y 25 nm. A travs de l pasan iones y molculas pequeas y grandes en ambas direcciones. Generalmente los iones y las molculas pequeas se transfieren en forma pasiva, sin gasto de energa. En cambio, las macromolculas (protenas y molculas de ARN), antes de pasar fuerzan el acortamiento de las protenas radiales, por lo que el complejo del poro se comporta como un diafragma que adapta su abertura a las dimensiones de las molculas que deben atravesarlo.
12-4. El pasaje de macromolcu las a t ravs del complejo del poro es regu lado

1.a entrada de las protenas en el ncleo se realiza mediante un mecanis'"" selectivo que permite el ingreso slo de las apropiadas, las cuales poseen "" pptid o seal especfico que abre el camino para que puedan pasar por el , lltplcjo del poro. l .os pptidos seal ms estudiados se llaman NSL (por nuclear signa/lo' r~li<.ulion) (cap. 4-4). Como muestra la figura 12-5A, no interactan directa""'111 <: con el complejo del poro sino mediante una protena heterodimrica d 'lltll11inada importina. Debido a que existen distintos tipos de NSL para di11 ' r 11tes grupos de protenas destinadas al ncleo, cada tipo de NSL requ iere 111111 importina especial. Por otra parte, existen NSL que se unen a protenas dH .Iilllas de las importinas, entre las que se encuentran unas que se volvern 1 1 111 ncionar ms adelante, ll amadas transportinas. 1:1 pasaje de una protena desde el citosol al ncleo a travs del complejo d1 l poro se produce en varias etapas. Soo las siguientes y se ilustran en la fi12-5A: 1) La protena se une a la importina por medio del NSL y ambas molcul u. s.: colocan cerca del compl ejo del poro. Lo atraviesan previo agranda1111<'1110 de su diafragma, cuyo dimetro puede a.lcanzar los 25 nm. L ) El pasaje requiere que la importina sea guiada por las fibrillas protei' 111: xternas e internas del complejo del poro de la manera ilustrada en la fil"ll:t 12-6. \) Durante el pasaje se gasta un GTP, cuya hidrlisis est a cargo de una 1'"'' f11a llamada Ran (por Ras-related nuclear protein). Como se ve, se tra1 11 d un transporte activo. 11) La Ran pertenece a la familia de GTPasas que actan asociadas a las I'"'I I'11as reguladoras GEF y GAP. En los captulos 7-38 y 11-12 se dijo que 11111 1tdo son influidas por la GEF, estas GTPasas intercambian el GDP inclui"" < '11 sus molculas por un GTP, mientras que cuando son influidas por la 1 ;\p ltidrolizan e l GTP a GDP y P (fig. 11 -9). La GEF y la GAP que se aso' 111 tt la l<an Sl: loraliz,ut n el n leo y en el ;ilnsol. rcspccl ivamcnlc. '>) C'<1111<1 llllll'lll ll In 11 '111 !1 1 1 ~ i\. 1'11:11ulo <'1 ('011tpkjo itupollill:t pmldll!l
lllf11 'UI 1' 11 1'1 11111 ' 1 \11

Fig. 12-5. B. Pasaje de prote nas desde el ncleo hasta el citosol a travs del complejo del poro.

1'"'"

Las macromolculas que ingresan en el ncleo son las protenas reseadas en la seccin 12-1 y unos ARN pequeos que retornan al compartimiento nuclear despus de haberlo abandonado temporalmente (cap. 15-12). En cambio, las macromolculas que salen del ncleo son protenas envejecidas o que dejaron de funcionar - ya que deben dirigirse al citosol a fin de ser destruidas por proteasomas- y diversos tipos de ARN combinados con protenas. Entrada de protenas en el ncleo. A diferencia de las protenas destinadas a las mitocondrias y a los peroxisomas -que como se vio en los captulos 8-28 y 10-5 se pliegan despus que ingresaron a esos organoidcs- , las destinadas al ncleo ingresan estando plegadas, ya que adquieren sus cslm 111ras le r.:iarias y cualcrnarias n 1 ~ ilosol, alli'U:tr; l<'llllill:lll dt sinll'li1a,;, l< 'lll' 1 1 .,,,

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGI A CELULAR Y MOLEC ULAR

12. EL NUCLEO

225

CITOSOL

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1

lolmero

Centrmero

Origen de replicacin

Fig. 12-7. E squema de un cromosoma, con el centrmero, los telmeros y algunos orgenes de replicacin.

Fig. 12-6. Esque ma de 1 complejo de l poro en e l que se ilustra la fu nc in de las ti brillas prote icas que se proyectan hac ia el nucleoplasma y el c itosol.

NUCLEO

6) En el ncleo la GEF promueve el reemplazo del GDP de la Ran por un GTP, tras Jo cual la Ran-GTP se une al complejo importina-protena. 7) Esa unin hace que la importina se independice de la protena, que queda retenida en el ncleo. 8) En cambio, la importina y la Ran-GTP permanecen unidas, atraviesan el complejo del poro y retornan al citosol. 9) En el citosol la GAP induce a la Ran a que hidro! ice el GTP a GDP y P - es aqu donde se gasta e l GTP- , de Jo que resulta una Ran-GDP y su separacin de la importina. JO) Finalmente, la Ran-GDP y la importina libres pueden ser reutilizadas para hacer ingresar nuevas prote na~ en el ncleo. Cabe sealar que ciertas protenas destinadas al ncleo -en particul ar los receptores de las hormonas esteroideas- , despus de sintetizarse permanecen en el citosol hasta la llegada de esas hormonas (fig. 11-2). Como se vio en el captulo 11-6, los receptores son retenidos porque se les unen chaperonas de la familia hsp90 y adquieren formas que les impiden ingresar en el ncleo. Cuando llegan las hormonas esteroideas se separan las chaperonas y cambian de forma los receptores, lo que les permi te atravesar Jos poros de la e nvoltura nuclear (fig. ll -3). Salida de protenas y de molculas de AR N. Las protenas que salen del ncleo dependen tambin de la Ran y de seales especficas para poder atravesar Jos poros de la envoltura nuclear. Los pptidos seal se denominan NES (por nuclear export signa/) y son reconocidos por prote nas equivalentes a las importinas, llamadas exportinas. Adems existen NES que son reconocidos por transportinas. El pasaje de una protena desde el ncleo al cilusul a lra v s del C lllllJlk.iu <kl poro S\" pmdu <;11 varL1s d :q>as. Son las si.,, ..,,, ... y.,,. .,,:lrallt"ll 1:~ li 1 '111:1 1 ) '' ll "

1) La protena se une a la exportina por medio del NES. Simultneamenla GEF remue ve el GDP de una Ran-GDP y lo reemplaza por un GTP, de 1110do que se forma una Ran-GTP. 2) La Ran-GTP se une a la protena por medio de la exportina. 3) Unidas entre s, la Ran-GTP, la protena y la exportina se acercan al po" ' nuclear y lo atraviesan previo agrandamiento de su diafragma, cuyo dilllctro puede alcanzar los 25 nm. 4) Al igua l que la importina, durante el pasaje la exportina es guiada por las fibrillas proteicas del complejo del poro. 5) Al cabo del pasaje, inducida por la GAP, la Ran-GTP hidroliza el GTP 11 C~ DP y P, de lo que resulta una Ran-GDP. 6) Ello hace que la Ran-GDP se independice de la expo rtina, la cual, a su vez, se independiza de la protena. 7) La protena queda retenida en el citosol. En cambio, la Ran-GDP y la xportina retornan al ncleo separadamente. 8) Finalmente, la Ran-GDP y la exportina libres pueden ser reutilizadas ara transferir nuevas pro tenas hacia el citosol. Respecto de las molculas de ARN, salen del ncleo combinadas con prold nas, aunque estn impedidas de hacerlo si no completaron sus procesa'" i ~: ntos (captu lo 15). Su pasaje a travs de los poros nucleares depende de 1 :~ Ran y de transportinas que reconocen seales especficas en las protenas.
l\",

rHOMOSOMAS
1l-5. El material de que estn formados los cromosomas
es la cromatina

Cada cromosoma est constituido por una largusima molcula de ADN con diversas protenas. Segn el cromosoma, el ADN contiene enI> L " 50 y 250 millones de pares de bases. Las protenas asociadas se clasifican , .., dos grandes grupos: las histonas y un conjunto heterogneo de p rotenas nu histnicas. 1 !1 complejo formado por e l ADN, las histonas y las protenas no histni"I> S se llama cromatina. As, la cromatina es el material de que estn comJIIIt:slos los cromosomas.
11 < o~:iada

1l-6. El cromosoma posee un centrmero, dos te lmeros y numerosos orgenes de replicacin

di a~: i n ,

1:n los cromosomas existen estructuras que son imprescindibles para la rees decir, para la duplicacin que experimenta el ADN y sus prote-

""s asociadas antes de la di visin celular. Son las siguientes (fig. 12-7): 1) El centrmer o o constriccin primaria , que participa en el reparto a l.t. r lulas hijas de las dos copias cromosmicas que se generan a consecuen' i.1d la replicacin del ADN (cap. 18-9). .' ) l.os telmeros, que corresponden a los extremos de los cromosomas, ' "Y " /\DN se replica de un modo distinto al resto del ADN. En la prxima '"''" '"'"" y u ~: 1 apftnlo 17 t) se v -r: que el ADN telomrico contiene una sc1

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

12. EL NUCLEO

227

el ADN de otros telmeros o puede ser degradado por una nucleasa. Normalmente estas contingencias no ocurren porque el ADN telomrico se dobla sobre s mismo (adopta la forma de un lazo) y es protegido por un capuchn de protenas llamadas TRF (por telomeric repeat binding facto r) (fig. 17-1 2). 3) En el captulo 17-4 se ver que la enorme longitud del ADN exige que su replicacin se inicie en muchos puntos a la vez a fin de que su duracin sea relativamente breve. Esos puntos se denominan orgenes de replicacin y en ellos el ADN posee secuencias de nucletidos especiales. Ms an, todos los orgenes de replicacin tienen en comn secuencias conservadas de alrededor de una docena de nucletidos llamadas ARS (por autonomous replication sequence), de las que nos volveremos a ocupar en dicho captulo. 12-7. Los cromosomas poseen secuencias de ADN nicas y secuencias de ADN repe tid as En las molculas de ADN se halla depositada la informacin gentica de la clula y todas las clulas poseen conjuntos virtualmente idnticos de molculas de ADN. La totalidad de la informacin gentica depositada en el ADN lleva el nombre de genoma. Puede decirse que esa informacin rige la actividad del organismo desde el primer instante del desarrollo embrionario hasta la muerte del individuo. De ella tambin depende la inmunidad o la predisposicin del organismo a determinadas enfermedades. La capacidad o incapacidad funcional del ADN, es decir, su aptitud o su incompetencia para generar molculas de ARN (proceso conocido con el nombre de transcripcin del ADN), se basa en la secuencia de sus nucletidos. As, en algunos sectores el ADN exhibe secuencias de nucletidos que se transcriben -llamadas genes- y en otros presenta secuencias aparentemente prescindibles, al menos a la luz del conocimiento actual. El 75% del ADN se halla representado por secuencias de nucletidos no repetidas (copias nicas) o que se repiten unas pocas veces. En esta parte se localizan los sectores funcionales del ADN - es decir, los genes- , los cuales abarcan alrededor del 10% del ADN (representan el 13% de ese 75%). Uno de los mayores desafos para los bilogos moleculares es descifrar las funciones del ADN ajeno a los genes. El 25% restante del ADN corresponde a secuencias de nucletidos que se repiten muchas veces, llamado ADN repetitivo. Sus funciones se desconocen, aunque no se descarta que desempeen algn papel en el mantenimiento de la estructura de los cromosomas. Existen dos clases de ADN repetitivo: el dispuesto en tandas (en el cual el inicio de una repeticin se halla inmediatamente despus del final de la otra) y el disperso (cuyas copias no se encuentran agrupadas sino dispersas en distintos puntos de los cromosomas). ADN repetitivo dispuesto en tandas. A esta categora pertenecen los ADN satlites, los microsatlites y los minisatlites. En los ADN satlites el largo de la secuencia repetida, el nmero de veces que se repite en cada tanda y el nmero de tandas varan. El ADN satlite ms destacado se locali za en los centrmeros, y por ello se encuentra en todos los cromosomas (fig. 12-1 7). Incluye una secuencia repetida de 171 pares de bases a la que se le ha dado el nombre de secuencia alfoide, que vara muy poco en los distintos cromosomas. Otros ADN satlites se localizan en el brazo largo del cromosoma Y y en la cromatina aledaa a los centrmeros de los cromosomas 1, 3, 9, 16 y 19 (ms adelante se indican el signifi ;do de la numeracin de los cmulosolnas).

Los ncrosatlites contienen secuencias de ADN repetidas mucho ms ortas que las de Jos ADN satlites, e igual que stos se hallan en todos los rromosornas. Los minisatlites tambin contienen secuencias de ADN cortas. A esta categora pertenece el ADN repetitivo de los telmeros (seccin 12-6 y cap. 17-9) y el ADN hipervariable, llamado as porque es distinto en cada individuo. El ADN hipervariable se localiza principalmente en las proximidades de los centrmeros y, debido a que su herencia responde a las leyes mendeliauas, la medicina forense recurre a l cuando necesita realizar estudios de pat ~midad o de identidad de personas. ADN repetitivo disperso. Existen dos clases de ADN repetitivo disperso, llamadas SINE y UNE (por short y long nterspread nuclear elements). El SINE ms estudiado corresponde a la familia Alu, de la que existen alrededor de 500.000 copias repartidas en todos los cromosomas. Cada copia tiene cerca de 300 nucletidos y un sitio que puede ser cortado por la enzima de restriccin Alu 1 (de all el nombre de este ADN). Debido a que la secuen~ ia Alu posee una extensa homologa con la secuencia del gen del ARNpc, durante mucho tiempo se crey que las secuencias Alu correspondan a las copias de ese gen (caps. 13-2, 13-11 y 14-1 8). El LINE ms comn se conoce con la sigla Ll (por LINE-1). Su secuent:ia repetida es relativamente larga y corresponde al gen de una transcriptasa inversa (cap. 17-24). 12- 8. Las clulas somticas humanas poseen 46 cromosomas Las clulas somticas humanas poseen 46 cromosomas - y por consiguiente, 46 molculas de ADN- , divididos en 22 pares de autosomas ms un par de cromosomas sexuales (fig. 12-15). En la mujer los dos miembros del par sexual son iguales, pero no en el varn. As, con excepcin del par sexual n el varn, puede decirse que en cada clula existen dos juegos idnticos de 23 cromosomas, uno aportado por el espermatozoide y el otro por el ovocito en el momento de la fecundacin (cap. 19- 19). Ello es lo que define a las clulas somticas como clulas diploides y a los espermatozoides y los ovocitos como clulas haploides. Los ADN de los 46 cromosomas contienen en conjunto unos 3 x 109 pares de nucletidos. Por lo tanto, en promedio, una molcula de ADN de un cromosoma humano, si estuviera completamente extendida, medira unos 4 cm de largo. Lgicamente, de hallarse extendidas, 46 molculas de tamaa longitud no podran ser contenidas en el ncleo, no slo por el espacio que demandaran sino por los enredos que acarrearan, lo cual afectara su funcionamiento e incluso su integridad. La clula ha resuelto el problema haciendo que la molcula de ADN se enrolle sobre s misma. Antes de analizar el modo como lo hace, debe sealarse que el grado de enrollamiento vara segn el momento del ciclo en que se halla la clula: es mnimo durante la interfase (cuando la sntesis de ARN es alta) y mximo cuando la clula se apresta a dividirse. As, los cromosomas se muestran corno estructuras altamente variables. En el captulo 18-6 se anali zar el papel del enrollamiento del ADN durante la divisin celular. 12-9. Ex isten cinco clases de histonas comprometidas en el . t nroll am i~ n to dt la cromatina 1,as
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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

l 2. EL NUCLEO

229

Fig. 12-8. Los cuatro pares de histonas que componen el ncleo de l nucleosoma.

H2A

H2B

H3

H4

sinas y argininas, es decir, de aminocidos cargados positivamente (cap. 2-8). Ello contribuye a la unin de las histonas con las molculas de ADN, en las que predominan las cargas negativas. xisten cinco clases de histonas, llamadas Hl , H2A, H2B, H3 y H4. La H 1, de la cual existen seis subclases, contiene unos 220 aminocidos, mientras que 1~ restantes poseen entre 103 y 135 aminocidos cada una. Las cuatro ltimas llevan el nombre de histonas nucleosmicas porque la molcula de ADN se enrolla en torno de ellas para formar los nucleosomas, que constituyen las unidades bsicas del enrollamiento cromatnico. En cada nucleosom.a, las histonas nucleosmicas se asocian y forman una estructura octamrica -el ncleo del nucleosoma-, compuesta por dos H2A, dos H2B, dos H3 y dos H4 (fig. 12-8) Debe agregarse que los extremos amino -o "colas"- de las histonas se proyectan hacia fuera del nucleosoma, lo cual podr valorarse en el captulo 14-12, dedicado al estudio de la regulacin de la actividad de los genes. El octmero de histonas posee la forma de un cilindro bajo de 10 nm de dimetro y se halla envuelto por un pequeo tramo de ADN que recorre su circunferencia casi dos veces (fig. 12-9B). Cada vuelta equivale a 81 pares de nucletidos y en total el segmento de ADN asociado al nucleosoma contiene 146 pares de nucletidos. Como muestra la figura 12-9A, las dos vueltas del ADN se fijan al ncleo del nucleosoma merced a la histona Hl. El complejo formado por el nuc!eosoma ms la hi stona Hl recibe el nombre de cromatosoma (fig. 12-9C) y el segmento de ADN que se le asocia es de 166 pares de nucletidos, veinte ms que el nucleosoma. En la cromatina existen dos protenas accesorias -ambas cidas- que asisten a las histonas para que se liguen entre s. Se denominan protena Nl y nucleoplasmina. La primera asocia a la H3 con la H4; la segunda, a la H2A con la H2B.
ADN espaciador H1

Fig. 12-10. Cromatina exte ndida para microscopia electrnica, con apariencia de collar de c ue ntas y un espesor de 1O nm.

Fig. 12-9. A. Cromatina intacta de !O nm. B. Nucleosoma

liberado despus de la digestin intensa con una nucleasa, con ei ncleo histnico y 146 pares de nucletidos. C. Cromatosoma escindido luego de la digestin mode rada con una nuclcasa, con el ncleo dt"f lltll'lt.'OSOIIIII, )a hiSI()Jta f(J
V 1((,
p!IH",

Ncleo

Los nucleosomas se hallan separados por tramos de ADN espaciadores de longitud variable, que contienen entre 20 y 60 pares de nucletidos. Como muestran las figuras 12-9A y 12-10, la alternancia de los nucleosomas con los segmentos espaciadores le da a la cromatina la apariencia de un collar de cuentas. Puesto que comnmente un gen contiene unos 10.000 pares de nudetidos, posee alrededor de 50 nucleosomas separados por otros tantos ADN espaciadores. El tratamiento de la cromatina con enzimas que digieren el ADN (nucleasas) provoca cortes slo en los ADN espaciadores. Si el tratamiento es moderado, se independizan los cromatosomas, los cuales permanecen ntegros, tanto sus hi stonas como el ADN asociado a ellas (fig. 12-9C). Pero cuando la digestin enzirntica es intensa se obtienen nucleosomas (fig. 12-9B ). Para que pueda ser contenida en el pequeo espacio que el ncleo le ofrece, la cromatina de cada cwmosoma debe experimentar nuevos y sucesivos grados de enrollamiento, cada vez mayores. Estos nuevos enrollamientos son inducidos por un complejo de protenas nucleares llamadas condensinas. En primer trmino, los cromatosomas se enrollan sobre s mismos y dan lugar a una estructura helicoidal llamada solenoide, de 30 nm de dimetro (figs. 12- 11 y 12-12C). Como muestra la figura 12-11, este enrollanento depende de las histonas Hl --dado que se unen entre s - y cada vuelta del solenoide contiene seis nucleosomas. Debe sealarse que a intervalos ms o menos regulares el enrollamiento de las fibras de 30 nm se interrumpe, de modo que se observan --entre sectores de 30 nm- tramos de cromatina ms delgada. En ellos el ADN se enuent ra asociado a protenas no histnicas, en su mayora reguladoras de la avtividad gt nica (nop. J; ( 5).
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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

12. EL NUCLEO

231

12- 11 . La heterocromatina puede ser constitutiva o facu ltativa

Ncleo del nucleosoma

Durante la interfase, recibe el nombre de heterocrornatina constitutiva la cromatina altamente condensada que se encuentra de manera constante en ludos los tipos celulares, es decir, como un componente estable del genoma, no convertible en eucromatina. A esta categora pertenece la cromatina de Jos s<:ctores cromosmicos que poseen ADN repetitivo satlite -como el de los <:ntrmeros, el del brazo largo del cromosoma Y, etctera (seccin 12-7)la mayor parte de la cromatina que forma los brazos cortos de los cromoH umas acrocntricos (seccin 12-12). En cambio, se denomina heterocromatina facultativa a la que se deteclll en localizaciones que varan en los distintos tipos celulares o en las sucerli vas diferenciaciones de una clula dada, de modo que sectores que apare,. n como heterocromatina en un tipo celular o en una etapa de su diferenriacin, en otros tipos celulares y en otras etapas se presentan como eucrolllatina. El ejemplo ms notorio de heterocromatina facultativa corresponde a uno d~; los cromosomas X de la mujer, el cual se halla totalmente compactado (H alvo en algunos sectores) y se conoce como cromatina sexual o cuerpo de llarr. Esta heterocromatina se presenta durante toda la vida de la mujer (mellllS al comienzo del desarrollo embrionario), en todas las clulas del organisIIH> (excepto los ovogonios).
1 '/-

A
Fig. 12:11. A. Cromatina de 30 nm de dimetro. (De F. Thoma. T. Koller y A. Klug.) B. Micrografa electrnica de una fibra de cromatina de 30 nm de dimetro. (Cortesa de J. B. Rattner y B. A. Hamkalo.)

12. En el cariotipo los cromosomas se ordenan de acuerdo con sus t amaos y las posiciones de sus centrmeros

protenas no histnicas (figs. 12-12D y 12-13). Dado que el conjunto de cordones proteicos compone una suerte de andamiaje, en los extremos de cada lazo el ADN asociado al cordn proteico lleva el nombre de SAR (por scaffold associated regions). Los lazos se hallan firmemente unidos al cordn, pero se ignora cmo se sujetan a l las SAR. Se considera que cada lazo constituira una unidad de replicacin del ADN (cap. 17-3) y, probablemente, una unidad de transcripcin, es decir, un gen (cap. 14-12).
12- 1O. La cromatina puede ser eu cromtica o heterocrorntica

omo se describir en los captulos 18 y 19, durante el ciclo celular, ser>i >l que la clula est atravesando la interfase o se est dividiendo -por mi'""is o por meiosis-, los cromosomas pasan de estados de menor a mayor , '1111pactacin. El grado ms alto de enrollamiento se alcanza en la etapa de oh visin llamada metafase, en que la cromatina de los cromosomas muestra 1111 stado de condensacin similar al de la heterocromatina interfsica (fig. 1! 14). Tal grado de compactacin hace que los cromosomas lleguen a verse co"'" <:structuras individuales, las cuales, una vez fijadas y fotografiadas, pue-

Fig. 12-12. Sucesivos grados de enrollamiento que experi

menta la cromatina.

En algunos sectores la cromatina experimenta un grado de enrollamiento an mayor, como se observa en la fi gura 12-12E. Durante la interfase, lacromatina as condensada recibe el nombre de heterocromatina, y se reserva el de eucrornatina para la menos compactada (fig. 12-2). Existe una relacin directa entre el grado de enrollamiento y la actividad transcripcional del ADN. La cromatina menos compactada es la que posee el ADN transcripcionalmente activo, es decir, el ADN que sintetiza molculas de ARN. Este ADN abarca alrededor del 10% del genoma. En cambio, el ADN que corresponde a la cromatina ms condensada es inactivo desde el punto de vista transcripcional. A esta categoa pertenece toda la heterocromatina y el s.ector de la eucromatina donde el enrollamiento se halla en un grado intermedio entre la eucromatina transcripcionalmente activa y la heterocromatina. Las regiones eucromticas experimentan ciclos de contraccin y extensin. En el captulo 14- 12 se analizarn los mecanismos que re;ulan 1 enrollamicnto cte la cromatina y 1 papel que d<'S<"111p< :111 <:11 1 ~:ontml d<" la
l\l'tivid:ul ~~f- ni ca .

11

232

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

12. EL NUCLEO

233

lo se lo identifica con la letra p y al largo con la letra q. Los extremos de los brazos se denominan telmeros. De acuerdo con la posicin del centrmero, los cromosomas se clasifican en tres gmpos (fig. 12-16): 1) Los metacntricos poseen el centrmero en una posicin ms o menos central, de modo que existe poca o ninguna diferencia en el largo de los brazos de las cromtidas. 2) En Jos submetacntricos el centrmero se encuentra alejado del punto central, de modo que las cromtidas poseen un brazo corto y uno largo. 3) En los acrocntricos el centrmero se halla cerca de uno de Jos extremos del cromosoma, de modo que los brazos cortos de las cromtidas son muy pequeos. En la figura 12-15 se muestra un cariotipo humano en el que los cromosomas aparecen ordenados de acuerdo con su tamao y el largo de sus cromtidas. Los miembros de cada par se identifican con nmeros correlativos. Los cromosomas acrocntricos corresponden a los nmeros 13, 14, 15, 21 y 22 (fig. 12- 17). Poseen una pequea masa de cromatina llamada satlite - no debe ser confundida con el ADN satlite- ubicada en el extremo libre del brazo corto. El satlite se halla ligado al resto del brazo corto por un delgado tallo de cromatina denominado constriccin secundaria (para diferenciarlo de la constriccin primaria o centrmero) (fig. 12-16). A excepcin de la cromatina correspondiente a la constriccin secundaria -en la cual se localizan los genes del ARN ribosmico 45S (cap. 13-8)-, el brazo corto de los cromosomas acrocntricos est compuesto por heterocromatina.
Fig. 12-13. Micrografa e lectrnica de un cromosoma humano al que se le extrajeron

Fig. 12-14. Micrografa e lectrnica de un cromo~oma en

metafase. (Cortesa de E. J. Duprnw.)

12-13. Las tcn icas de ba ndeado cromosmico revelan detalles estructurales de los cromosomas
Cuando los cromosomas metafsicos son sometidos a ciertas tcnicas de L incin exhiben bandas claras y oscuras intercaladas a lo largo de sus ejes longitudinales (fig. 12-17). La distribucin de estas bandas es constante en cada cromosoma, lo cual --al analizarse un cariotipo-- facilita su identificacin. Ms an, en los casos en que las ubicaciones no coinciden con los paden ser aisladas, clasificadas y ordenadas con relativa facilidad. El conjunto de cromosomas ordenados segn un criterio preestablecido recibe el nombre de cariotipo (fig. 12-15). Las 46 unidades nonnalmente presentes en las clulas humanas consisten en 23 pares de homlogos. Como vimos, 22 de ellos estn presentes tanto en la mujer como en el varn y reciben el nombre de autosomas. El par restante - que se conoce como par sexual- en la mujer se halla integrado por dos cromosomas idnticos, los cromosomas X, y en el varn por dos cromosomas bastante dismiles, pues uno de ellos es un cromosoma X y el otro es el pequeo cromosoma Y. Los cromosomas metafsicos presentan una morfologa caracterstica. Estn integrados por dos componentes filamentosos - las cromtidas- unidos por el centrmero (o constriccin primaria). Como se ver en el captulo 18-9, el centrmero desempea un papel esencial en la separacin de las cromtidas hermanas durante la anafase, que sigue a la metafase. A consecuencia de tal separacin, una vez segregadas en las respectivas clulas hijas, cada una de las cromtidas se convierte en un cromosoma. La presencia del centr6mcro divide a l<t.' crom:tidas d 1 <:rlllliOSOIIta 111c
l;ll':sito 1'11 dos hra/',llS, pnr lo
J't'lh ' l'lllllllolll:S

las hisronas. Ciertas prote nas

no histnicas forman un ar-

mazn, del que emergen lazos o bucles de ADN de dife rente longitud, como se ilustra en el recuadro supe rior. (Cortesa de U. Laemmli.)

F ig. 12-15. Cariotipos humanos norma les. A. Masculino. B. Femenino. (Cortesa de M . Drets.)

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11

234

FUNDAMENTOS DE B!OLOG!A CELULAR Y MOLECULA R

12. E L NUCLEO

235

Cromtidas

Centr mero

Satlite

. ''

Fig. 12-16. Tipos de cromosomas segn la posicin del

centrmero.

Metacntrico

Submetacntrico

A orocntrico
2
3

trones normales, las bandas constituyen una gua muy valiosa para diagnosticar trastornos genticos, por ejemplo, deleciones, duplicaciones, inversiones y translocaciones cromosmicas (cap. 20-J 0). Las tcnicas de bandeado cromosmico ms utilizadas son las siguie ntes: Bandeado G. Los cromosomas son tratados con tripsina (para desnatura]izar sus protenas) y teidos con el colorante de Giemsa. Las bandas G, que aparecen oscuras, contienen ADN ricos en pares de nucletidos A-T. Bandeado Q. Si los cromosomas son tratados con quinacrina desaiTollan un patrn especfico de bandas oscuras intercaladas con otras brillantes (Q), las cuales se identifican con la ayuda de l microscopio de fluorescencia (cap. 23-25). Las bandas Q coinciden casi exactamente con las bandas G, por lo que tambin son ricas en pares de nucletidos A-T. Bandeado R . En este caso los cromosomas reciben calor antes de ser teidos con el colorante de Giemsa, lo que da un patrn de bandas oscuras (bandas R) y claras inverso al conseguido con los bandeados G y Q. El anlisis molecular de las bandas R muestra una mayor proporcin de pares de nucletidos G-C. Bandeado C. Este mtodo tie de manera especfica los tramos de cromatina que permanecen condensados en la interfase, por ejemplo, la heterocromatina constitutiva de Jos centrmeros.

10

11

12-1 4. Los componentes nucleares se encuentran ordenados

espacia lmente Se desconoce que exista en el ncleo un andamiaje de fi lamentos equi valente al del citoesqueleto, diseado para sostener a los cromosomas. No obstante, durante la intelfase los cromosomas ocupan regiones especiales denominadas territorios cromosm icos, Jos cuales estn separados por espacios llamados dominios in tercromosmicos, donde se encuentran molcu las de ARN en trnsito hacia los poros nucleares o procesndose (cap. 15). Los patrones de distribucin de los telmeros, de los centrmeros y de la heterocromatina varan en las distintas clases de clulas y se modifican a Jo largo del ciclo celular, aunque por Jo general los centrmeros y la mayor parte de la heterocromatina tienden a congregarse cerca de la envoltura nuclear y del nuclolo. La localizacin de los genes que codifican los ARN ribosmicos constitu12
13
.14

15

16

17

p
q

18

19

20

21

22

yen el caso ms llamat ivo de ordenamiento 1111 1ar. p11 s se agrupan 011 1111
" ''' lol' thl 111k lt-o f'(l.: iillll' lltl' itkulit'irahk, ('111111> lo :: ,. llllt ' kolo ( t'!l>IHIII

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236

FU NDAMENTOS DE BlOLOG IA CELULAR Y MOLECULAR

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Los genes
1:3-1 . Los genes son los segmentos fu ncionales del ADN

13

; ,,

,,

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Segn con qu objeti vo se realice su estudio, los genes pueden analizarse dvsde tres ngulos diferentes: el mo lecular, el mendeliano y el poblacional. 1.a biologa celular -que lo estudia desde el punto de vista molecular- del i11t: al gen como " la secuencia de ADN que contiene la informacin requerid!i para fabricar una mo lcul a de ARN y, si sta corresponde a un ARN men~!l j t:ro, a parti r de l construir una protena". Se ha calculado que ex isten unos 30.000 genes distribuidos en los 46 cro"'usomas de las clulas humanas. Cada gen se localiza en un sitio particular kl cromosoma llamado locus. En el captulo 12-9 vimos que cada lazo for'"ado al plegarse la cromatina de 30 nm podra corresponder a un gen. En to111 1 los genes abarcan a lrededor del 10% del ADN nuclear, y se ignora el sig, J.ic;ado de la mayor parte del ADN restante. Los genes no slo dirigen la sntesis de las molculas de ARN. Como el , .. slo del ADN, antes que las clu las somticas se di vidan ellos se replican, es ,bir, sintetizan molculas de ADN complementarias que se reparten en las , !'lulas hijas con el fin de autoperpetuarse. Complementariamente, por la for"'!1 como se replican las mo lcul as de ADN durante la meios is y se distribuyc ll en las clulas germ inativas, los genes constituyen las entidades biolgi' 11s a travs de las c uales se transm iten los caracteres fsicos de padres a hiIIIS. Ms an, las mutaciones que los genes acumulan a lo largo del tiempo ,,, ,den resultar beneficiosas para la evolucin de la especie. Puesto que la informacin gentica depositada en las molculas de ADN ,. lw.:aliza en el ncleo (a excepcin del ADN mitocondrial, descrito en el caoil llio 8-26) y la sntesis proteica -basada en dicha informac in- tiene lu1'' " en el citoplasma, es necesario que esa informacin sea transferida desde ' 1 11cleo al citosol (fig. 13-1). Tal transferencia es un proceso complejo que " 'l"ierc la intervencin de una molcula intermediaria. Trtase del ARN """ "sajero (ARNm), que copia la informacin contenida en el ADN y sale al , 1tosol , donde dirige la sntesis de la proten a. As, en el ncleo el ADN de,,., 111i11a la secuencia de los nucletidos del ARNm y en el citoplasma el i\ I<N111 establece el orden de los aminocidos de la protena (fig. 13-2). 1,; sntesis del ARN, que como acabamos de ver usa como molde al ADN, ' .,. ,olttina transcripcin del ADN, mientras que la sntesis de la protena, ' ' ''"' ldt: es el ARNm, lleva el nombre de traduccin del ARNm. Este flu, '' Y i' ' ,J, inl nnacin es conocido como el "dogma central" de la biologa mole-

' ,, " (li g. I J-3).

1 " llwt :l't~r:ts u l ili~adw : 1' " " d,fi11ir :unhos pasos son hastante j usl as. ya
111 11 lt ,lll'.t' l !uinu ~ iJ' IIIIt 11 u~ t~ fll ll ll ' p!ctclucr (u lilc"n d

clt" 1111 cu 1 in:d ..

( el

238

FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

13. LOS GENES

239

ADN

(5') ATGGTTAAC .. .. . . ; ........ .. ........... .. CTCTAA (3')

(3') TACCAATTG ... ....... ... ..... ............ GAGATT (5')

ADN ~
Transcripto primario~
Procesamiento

l l

Transcripcin

Transcrip cin

~
ARNm
(5') AUGGUUAAC ........ . . ................ .... CUCUAA (3')

t"'-"--_.

~t

(lnlc .)
PR OTEINA

Traduccin

(Term .)

(H2 N) MetVaiAsn .....

~
.. ... ...... .. .. Leu (COOH)

ARNm ~

Fig. 13-2. Transferencia de la informac in ge ntica contenida en la secuencia de nucletidos del ADN, que pasa al ARNm (transcripcin) y de ste a la prote na (lraducci n).

Ribosom : t l j
Traduccin

Fig. 13-l. Flujo de informacin gentica en una clula

Protena

eucariota.

ARN se parece al ADN) y traduccin indica "escritura o expresin en un lenguaje de aquello que anteriormente ha sido escrito o expresado en otro" (es Jo que ocurre entre la protena y el ARNm). Respecto del trmino replicacin del ADN, significa "copia que reproduce con exactitud el original" , que es lo que hace el ADN cuando se duplica (cap. 17- 1). Al definir al gen como una regin del ADN que genera un carcter fsico heredable, se sugiere que cada gen da lugar a una sola clase de protena. Si bien la mayora de los genes que producen ARNm se conduce de esa manera, algunos dan origen a poliprotenas, es decir, productos transitorios que se escinden en varias protenas. cada una determinante de un rasgo singular.

I~NPpn (en ingls snRNP). Como se ver en el captulo 15-5, estas molculns desempean funciones salientes durante el procesamiento de los ARNm. Los ARN pequeos nucleolares o ARNpno (en ingls snoRNA , por \IIIOllnucleolar RNA) , que forman parte de unas ribonucleoprotenas llamaolas RNPpno. Como se ver en el captulo 15-8, estas molculas intervienen n el procesamiento de los ARNr. El ARN de inactivacin del cromosoma X o ARNxist (en ingls xistNNA , por X-inactiva/ion specific transcript RNA ), cuyas funciones se descriltc n en el captulo 14-12. El ARN de la telomerasa o ARNte (en ingls teRNA , por te/amerase /VA), que integra un complejo ribonucleoproteico cuyas funciones se anali/.!111 en el captulo 17-9. Los microARN o miARN (en ingls microRNA o miRNA ), cuyas proba! d s funciones se analizan en el captulo 23-44.

1:l - 3. Los tra nscriptos prim~rios se procesan en el ncleo

Las molculas de ARN surgidas de la transcripcin del ADN se llaman ltunscriptos primarios. Se convierten en ARN funcionales antes de salir del n1c leo, al cabo de varias modificacio nes que se analizarn en el captulo 15, ,onocidas con el nombre de procesamiento del ARN. El procesamiento ms conocido es el de Jos transcriptos primarios de los ARNm, los cuales contienen segmentos no funcionales intercalados con los g mentos que contienen la informacin gentica que codifica a la protena. 1 ,, 1 s primeros se deno minan intrones; Jos seg undos, exones (fig. 15- 1). El procesamiento remueve los intrones y empalma los exones entre s., oln ndo lugar a un ARNm con informaci n gentica continua, apto para dirigir 1, , sntesis de la protena.

13-2. La clula prod uce va rias clases de ARN

Existen tres tipos de ARN principales: los ya mencionados ARN mensajeros o ARNm (en ingls mRNA ), que recogen la informacin de los genes y dirigen la sntesis de las protenas; los ARN ribosmicos o ARNr (rRNA), que son fundamentalmente estructurales, y los ARN de transferencia o ARNt (tRNA), que actan como adaptadores. La sntesis proteica (o traduccin del ARNm) tiene lugar en el interior de unas estructuras citoslicas pequeas llamadas ribosomas, que constan de cuatro ARNr diferentes entre s y numerosas protenas (fig. 16-5). Bajo la direccin de un ARNm, en los ribosomas se producen las reacciones qumicas que ligan a los aminocidos de cada protena. La traduccin necesita de la participacin de los ARNt, de los que existen varios tipos, todos de tamao pequeo. Se encargan de trasladar a los aminocidos hacia el ribosoma siguiendo el orden que marca la informacin gentica del ARNm. Adems de estos tres tipos de ARN, existen los sig uientes, el primero y e l ltimo localizados en el citosol y los restantes en el ncleo: El ARN pequeo citoslico o ARNpc (en ingls seRNA, por .m w/1 l'ytosolic RNA), que como se vio en el captulo 7- 12 perlen ce :t la partf u la PI~ S. Los ARN peq ueos nuciCliJ"CS o A ltNm (en ingl(-s .\'II HN A . p o r .vma/1 1111,.,.,11. NNA) . q11 r 1 111 lll illl p :lllt dr 111111:. di ~e 111111 h-"l""ldll.ll. ll :1111.1dll li

13-4. Cad<l aminocido es codificado por un triplete de nucl etidos

Debido a que un gen es un tramo de ADN que contiene la informacin ne,,saria para generar un ARN o una prote na, se dice que codifica a estas dos ~t u llc ul as . Se emplea el trmino "codifica" porque las instrucciones que se 1111 s ladan del ADN al ARN y - en el caso del ARNm- de ste a la protena, '" " 1ransmitidas en forma de cdigos. l .as caractersticas qumicas de las molculas que encaman los procesos 1'''" li os han sido analizadas en el captulo 2. Recordemos que tanto los ci-

llt~ <llt;

.....__.....

....------..... IC!n ADN

Tmnscrlpc/n ARN

Traduccin

Protefna

lt'iJ~ 1 ~~~.

Flu jo dt iul'o111111

t ' ltlll / 'l'l lli l lt' ll

240

F UND AMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

13. LOS GENES

241

dos nucleicos (ADN, ARN) como las protenas son molculas formadas por secuencias de monmeros (nucletidos en los cidos nucleicos y aminocidos en las protenas) dispuestos en lnea. El sistema de cdigos se basa en la disposicin ordenada de los nucletidos en el ADN, los cuales determinan el ordenamiento de los nucletidos en el ARN. A su turno, los nucletidos del ARNm determinan el ordenamiento de Jos aminocidos en la protena (fig. 13-2). Debido a que en el proceso de transmisin de la informacin gentica cada nucletido est representado por una letra (A, G, e o Ten el ADN; A, G, e o U en el ARN), el alfabeto contenido en las molculas de ADN o de ARN -al poseer cuatro letras solamente- no es suficiente para simbolizar a los 20 tipos de aminocidos que pueden hallarse en una protena. Las clulas resuelven el problema utilizando grupos de tres nucletidos -en distintas combinaciones- para codificar a cada aminocido. Estos tripletes de nucletidos se denominan codones. Dado que hay 4 tipos de nucletidos, el nmero de tripletes posible, es decir, de codones, es de 64 (4 3 = 64). El conjunto de 64 codones lleva el nombre de cdigo gentico (fig. 13-4). 13- 5. Exist en 61 codones para cod ifica r a los 20 t ipos de aminoci dos Dado que se utilizan 61 de los 64 codones para codificar a los 20 tipos de aminocidos, la mayor parte de ellos pueden ser codificados por ms de un codn, condicin que ha llevado a decir que existe una "degeneracin" en el cdigo gentico. Los codones que codifican a un mismo aminocido se llaman "sinnimos". Solamente la metionina y el triptfano, que son los aminocidos menos comunes en las protenas, son especificados por un solo codn. Los tres codones que no codifican aminocidos (UAA, UGA y UAG) tienen por mandato -una vez que la cadena polipeptdica ha incorporado el ltimo aminocido- sealar la conclusin de la sntesis de la molcula proteica; reciben el nombre de codones de terminacin (fig. 13-4). En esencia, las instrucciones del cdigo gentico emanadas del ADN consisten en una retahla de tripletes de nucletidos, cuya secuencia determina la alineacin de los codones en el ARN, que son Jos que especifican el ordenamiento de Jos aminocidos en la protena. Debido a que en la mayor parte de Jos transcriptos primarios existen tramos de nucletidos superfluos que se suprimen, stos -y por extensin los del ADN- no estn representados en el ARN procesado ni en la molcula proteica. Exceptuando a Jos tramos superfluos, de lo mencionado hasta aqu se deduce que en cada serie ADN--7ARNprotena las unidades que integran estas molculas (codones en el ADN y en el ARN, y aminocidos en la protena) son colineales, ya que Jos codones del ADN se corresponden con los del ARN y stos con Jos aminocidos de la protena. 13- 6. El gen posee varias partes funcionales Hasta ahora, al hablar del gen, nos hemos referido exclusivamente a su segmento codificador. Sin embargo, el gen posee otros componentes ajenos a ese segmento. Ellos son: 1) El promotor, que inicia la transcripcin y seala a partir de qu nucletido debe transcribirse el gen. Suele localizarse cerca del extremo .'' de l segmento codificador, dond e comi cn7.a la snt esis del ARN. 2) SccuenciiiS c~u l acl u nl s, qow dtIo moill:uo no : 11do dt'lw Ir:"'-"' ' ihirst ,.
J',l"ll

Pr imera base

Seg unda bas e

u uuu uu e UU A .UUG e uu cuc CUA CUG AUU AUe AUA AUG Phe Phe Le u Le u Le u Le u Le u Le u lle lle lle Met Val Val Val Val u eu uec UeA UeG ccu ccc CCA eeG

e Ser Ser Ser Ser Pro Pro Pro Pro Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Ala UA U UAe UAA UAG

A Tyr Tyr Term. Term. UGU UGC UGA UGG CG (J CGC CGA eGG AGU AGe AGA AGG

G eys eys Term. Trp Arg Arg Arg Arg Ser Ser Arg Arg Gly Gly Gly Gly
1 ~

Tercera. base

u e A G

--

CAU His CAC : His CAA Gln eAG Gln AAU AA e AAA AAG GAU GAe GAA GAG Asn Asn Lys Lys Asp Asp Glu Glu

e
A G u e A G u e A G

-G GUU GUC GUA GUG

AeU Aee. AeA AeG GeU Gee GeA GCG

--

GGU GGe GGA GGG

-=
-

'"' se localizan lejos del codificador. Existen dos tipos de reguladores, los rullplificadores y Jos inhibidores. Los primeros son ms numerosos y, por < !lo. Jos ms estudiados. Cada gen posee una combinacin particular de varios amplificadores y vados inhibidores. Algunas secuencias ampliftcadoras e inhibidoras se repiten ''" genes diferentes, pero nunca dos genes distintos poseen una misma com,.,,acin de esas secuencias reguladoras. Se ha comprobado que cuando se 1li11oina una secuencia amplificadora de un gen, la velocidad de transcripcin do ,:o ninuye. Opuestamente, cuando se elimina una secuencia inhibidora, la ve, "idad aumenta. \) Finalmente, en las cercanas del extremo 3' del segmento codificador, , 1 ~e n posee un tramo de ADN denominado secuencia de terminacin -no ,,.!Jc.: confundirse con el codn de terminacin del ARNm- que marca la , , '"c lusin de la sntesis del ARN. A continuacin analizaremos -separadamente- la composicin de los r< '" s que codifican a Jos distintos tipos de ARN.

Fig. 13-4. Cdigo gentico. El codn AUG marca el comienzo de la sntesis proteica (codn de iniciacin) y codifica a las restantes metioninas de la protena.

I'OMPOSICION DE LOS GENES

1 1 /. Es tructura de los genes que cod ifi can a los ARN mensajeros
1.a fi gura 13-5 muestra los distintos componentes de Jos genes que codifi' "" a los ARNm. 1.1promotor suele poseer dos elementos. La combinacin ms comn in' l11 yo las sec uencias llamadas TATA y C AAT, situadas cerca del codificador. 1 " '!lja TATA se locali;r.a unos 25 nucl etidos "corriente arriba" del primer 111 '' i< 'Pi ido dr l .- odifi r :o. ~o r. l.:o r :oja C' AAT se loca li za en el mism o lado pero 1111 IH II 't l 11 1a,..; kjn.'-1 . , :t 1111 11' 4 / 'l llllt ' lt '!"ll idos, c s dvc.: ir, a 50 lii JC le(llidos de la s ' 111 .,, . , ,,

t ' ll ;i ui :J.;

ve ,: ; dclw lt ; H' I' th 1':11 In lllll \f t~d! t d. !11.

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'l 't\'11 \

242

FUN DAM ENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MO LEC ULAR

13. LOS GENES

243

CAAT

TATA

Exn 1
+

lntrn 1
GT AG

Exn 2
GT CODIFICADO

lntrn 2
AG

18S

5,8S

28S

5' -75
1

3'

5'

3'

REGULADOR

PROMOTOR

'-...

-25'

f(

Fig, 13-5, Estructura general de los genes que codifican ARN mensajeros, con sus distintos componentes.

La secuencia de nucletidos ms comn que se encuentra en la caja TATA es la TATAAAA, aunque a menudo dos T reemplazan a las A en las posiciones quinta y sptima. La secuencia de la caja CAAT suele ser GGCCAATCT. Debe advertirse que muchos promotores con tienen la secuencia TATA pero no la CAAT. A veces estn ausentes las dos, caso en el cual el promotor suele presentar secuencias con una concentracin inusualmente alta de citosinas y guaninas, llamadas regiones CG. Los reguladores -amplificadores e inhibidores- tambin suelen hallarse "corriente arriba" respecto del extremo 5' del segmento codificador, aunque muy lejos, frecuentemente a miles de nucletidos. A diferenci~ del promotor, en los reguladores la secuencia de nuclet1dos - tanto en numero como en calidad- es especfica, es decir, vara en los distintos genes. En el segmento codificador se alternan tramos de ADN utilizables contramos no funcionales. Como en los transcriptos primarios, se llaman exones e intrones, respectivamente (seccin 13-3). La mayora de los genes que codifican ARNm contienen entre uno y 60 intrones y son muy pocos los genes que carecen de esta clase de secuencias. . La secuencia de terminaci6n no ha podido ser identificada. No obstante, en un sector previo a ella es comn la presencia de la secuencia AATAAA, que es necesaria para la conclusin de la sntesis del transcripto primario (cap. 15-4). La inmensa mayora de los genes que codifican ARNm estn representados por copias nicas (ms exactamente por dos copias, dada la condicin di-

1doide de las clulas somticas). Una de las excepciones corresponde a los wnes que codifican a las cinco histonas (cap. 12-9). Los cinco genes se en' 11cntran en el cromosoma ali neados uno tras otro, separados entre s por traII IUs de ADN que no se transcriben, llamados espaciadores (fig. 13-6). De es'" juego de cinco genes existen enlre 20 y 50 copias dispuestas en tndem, sepuradas entre s por nuevos ADN espaciadores.
1.1-8. Estructu ra del gen q ue codifica al ARN ribosmico 4 55

Fig. 13-7. Sucesin de copias del gen del ARNr 45S. Obsrvense los espaciadores q ue se transcriben (/;arras claras) y los que no lo hacen (lneas).

Los ribosomas estn formados por dos subunidades, cada una compues11 por ARN ribosmicos combinados con protenas. Los ARNr se identifi' 1111 teniendo en cuenta sus tamaos, expresados como coeficientes de sedi111ntacin (cap. 16-9). As, ex isten cuatro tipos de ARNr, llamados 288, 188, ~ .I!S y SS (fig. 15-9). Los tres primeros derivan de un transcripto primario coIIIIII denominado ARNr 4SS (fig. 15-9). Existen , por lo tanto, dos genes co.lllicadores de ARNr, el correspondiente al ARNr 45S (fi g. 13-7) y el que codll'ica al ARNr SS. Aqu nos ocuparemos del primero. La clula posee alrededor de 200 copias del gen del ARNr 45S. Se locali/1111 en las constricciones secu ndarias de los cromosomas 13, 14, 15,21 y 22, li 11adas en el nuclolo. En promedio, cada constriccin secundaria posee 111:1s 20 copias del gen. Como se observa en la figura 13-7, las 20 copias del 1 11 '11 se hallan alineadas en tndem, separadas entre s por segmentos de ADN o'"ilmciadores que no se transcriben. En cada uno de estos espaciadores se .lo1 u li ~.an el regulador y la mayor parte del promotor. Veamos los elementos hallutlos en cada copia del gen (fig. 13-8): Igual que los genes de los ARNm, e l promotor del gen del ARNr 45S se '' uentra "corriente arriba" respecto del extremo 5' del segmento codifica, l<~r. Se trata de una secuencia de alrededor de 70 nucletidos, 20 de los cual, .,, son adems los 20 primeros nucletidos del sector codifi cador. Por lo tan'" Id da en direccin 5' ___.3', la ltima parte del promotor es la parte inicial di'! segmento codificador. 1~ 1 regulador, que acta como amplificador, es una secuencia de alrededor .,. 100 nucletidos. Est ubicado a unos 50 nucletidos "corriente arriba" del l""lllotor, es decir, a unos 100 nucletidos del extremo 5' del segmento codiI !!' :Jdor.

H2A

En el segmento codificador , las secuencias de ADN correspondientes a 1 ..:: i\RNr 18S, 5,8S y 28S -en ese orden- se hallan separadas entre s por ,.. 1111ciadores. Estos, a diferencia de los espaciadores intercalados entre las 1 >~pias, se transcriben, de modo que aparecen en el transcripto primario o fN r 45S (fig. 15-9). 1.a , \ecuencia de terminacin, en el extremo 3' de cada copia, aparece deslo s del sector que codifica al ARNr 28S. Se caracteriza por contener varias 1' ,.,guidas.

11111';,/i, l ~::;o:,
:,\ 1/ 11 ,', ,11

)i'ip ~~.. (, Mi(;rograffa eh' trnica de un tramo dc ADN pnr iailncntc

/WIIl'S
,

rH tfin ::cpnt'lulo:. pw ,<!t'J'IIll.' lll o :-. t' :'-I. J ilH'llldt~t t" t kll' cn /\ '1'. 1.11 nud\i\'lll tt lu r dontuln t'llllll pi ,, (( '". r(u dt \ M 1 Hh urHII y 1' Potn11111 , )

ck:-;natm nliznchl qnc l-'tllllittu. loK l'i111o

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244

FUNDAM ENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECUL AR

13 LOS GENES

245

,..---~L PROMOTOR \
Fig. 13-9. Estruc tura general del gen que codifica al ARN ribosmco 5S.

5'
REGULADOR

_ _ _ ___. 3'

PROMOTOR

5'

,(

~
...........CODIFICADOR--!

f-------CODIFICADOR - - --

---1

OCT

PSE

TATA

Fig. 13-11. Estructura general de los genes que codifican a los ARN peq ueos nucleares.

13- 9. Estructura del gen que cod if ica al ARN ribosm ico SS
Del ge n del ARN SS existen - una tras otra- alrededor de 2.000 copias separadas por tramos espacia dores de ADN. Todas las copias se localizan en el extremo distal del brazo largo del cromosoma 1, de modo que no pertenecen al nuclolo. Cada copia del gen posee dos secuencias especiales de nucle tidos que constituyen el promotor, situadas e n el interior del segmento codificador, del que tambin forman parte (fi g. 13-9). Debido a ello, las dos secue ncias del promotor se transcJiben. Adem s posee una sec uencia situada "corrie nte arriba" del codificador - es decir, e n el espaciador precede nte- cuya funcin parece ser reguladora. La secuencia de terminacin , en el ex tremo 3' de cada copia, presenta varias T contiguas, como en el ge n del ARNr 45S.

varias protenas ribosmicas (lo cual desmiente la calificacin de " ADN no f"uncional" que se aplica a todos los intrones). Como es obvio, estos intrones son segmentos de ADN sin promotor ni reguladores y se transcriben cuando lo hace el gen al que pertenecen.

13 - 12. Estructura de los genes que codifican al ARNxist, al ARNte y a los miARN
El gen que codifica al ARNxist posee un tamao relativamente grande y se localiza en el brazo largo del cromosoma X, en una regin cercana al cenlrmero llamada Xic (por X-inactiva/ion cen.ter). Se ha descubierto que con1icne numerosas secuencias repetidas dispuestas en tndem, que consta de por lo menos ocho exones y que presenta otras caractersticas que Jo asemeinn a los genes de los ARNm. Respecto del gen que codifica al ARNte, se localiza en el brazo largo del < TOmosoma 3. Slo se conoce su segmento codificador, que posee alrededor de 4SO nucletidos. Finalmente, los ge nes de los miARN poseen un segmento codificador de 11proximadamente 70 nucletidos que incluye un par de repeticio nes invertidns (cap. 17 -24). Como se ver en el captulo IS-13, stas determinan la forIIIH de horquilla que adquieren los traoscriptos primarios al cabo de la trans' 1 ipcin. Se calcula que existen alrededor de 200 genes que codifican un nIIICro bastante menor de tipos diferentes de miARN -hasta la fech a se idenlil" icaron una veintena de tipos distintos de miARN, pero este nmero crece a 111 di da que aumentan las investigaciones- , lo que indica que para cada tipo ,,. miARN e xisten varias copias igua les de un mismo gen.

13- 1O. Estruct ura de los genes que codifican a los ARN de transfe rencia
Existen entre 10 y 100 copias de cada uno de los genes que codif ican a los distintos ARNt, algunos de los c uales se hallan alineados e n tndem --copia tras copia- como los genes de l ARNr SS. El promotor de estos genes est constitu ido por dos sec ue ncias de nucletidos separadas, ambas en el interior del segmento codificador, del que tambin forman parte (fig. 13-1 0). As, tales secuencias, ade ms de cumplir la funcin de promotor, se transcriben. Al gunos genes de los ARNt presenta n un intrn de 4 a IS nucletidos en med io del segmento codifi cador y, po r consiguie nte, dos exones. No se han descrito secue ncias regu !adoras. La secuencia de terminacin es simi lar a la de las copias de los ge nes de los ARNr 4SS y SS.

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, : H 1 1,

13-11. Est ructura de los genes que cod ifican a los ARN pequeos
Exjsten mltipl es copias del gen del ARNpc, dispersas e n los cromosomas. Cada copia te ndra su propio promotor, apare nte mente en medio del segmento codificador. Como se vio e n el captulo 12-7, el gen del ARNpc posee una extensa homologa con el ADN repetitivo disperso de la familia Al u. La mayora de los ARNpn deri van de genes independientes que poseen un promotor comp uesto por tres secuencias separadas, situadas "corriente arriba" respecto del segm ento codificador (fig. 13-1 1). La secuencia ms prxima al segme nto codificador es una caj a TATA, y las otras dos se identifican con las siglas PSE (por p roximal sequence element) y OCT (por octamer se-

"'"'Yil

"'"'"1

quence).
El resto de.los ARNpn y todos Jos ARNpno no derivan de genes convencionales sino de la informacin contenida en algunos intrones de los genes de
/ PROMOTOR \

"'",..,.

FiJt. IJ- 10.

l ~slnu.: lllra H l'lll 'lil l

de lt 1 . 1'1'11" qnl' ,.ulli Hnn u l11'' AH N ,, ll ll lll ,, ,,, n

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)

~1

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11 111 1! ,1\11( 11 1

246

FUNDAMENTOS DE B!OLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

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La transcripcin del ADN

14-1. Defin icin
Recibe el nombre de transcripcin la sntes. is de molculas de ARN sobre la base de moldes de ADN. La sntesis se produce por la unin entre s de los nucletidos A, U, C y G, que se alinean siguiendo el orden marcado por los nucletidos complementarios del ADN. Esa complementariedad determina que las bases A, U, C y G del ARN se apareen, respectivamente, con las bases T, A, G y C del ADN. Como veremos, el apareamiento se logra medianle el establecimiento de uniones transitorias (no covalentes) de las bases del 1\DN con las bases del ARN en formacin, lo cual permite que se produzcan las verdaderas reacciones sintticas, es decir, la unin de los nucletidos del 1\RN entre s. El enlace entre dos nucletidos consecutivos corresponde a una unin fosfodister (fig. 14-1 ). Dado que en ella un grupo fosfato liga el C5' de la ribosa de un nucletido con el C3' de la ribosa del nucletido contiguo, la 1nolcula de ARN siempre resulta polarizada, con un fosfato en su extremo 5' y un hidroxilo en su extremo 3'. Las uniones fosfodister no se producen espontneamente; son dirigidas y catalizadas por enzimas especficas llamadas ARN polimerasas. 14-2. La molcu la de ARN se sintetiza por el agregado de un nucletido por vez Tericamente, una molcula de ARN podra construirse a parti r de un 11101de de ADN y de ribonucletidos libres siguiendo estos cinco pasos. Prilncro, las dos cadenas del ADN se separaran en toda su extensin. Segundo, los cuatro ribonucletidos se aparearan con los desoxirribonucletidos complementarios del ADN, todos simultneamente. Tercero, cada ribonucletido s<.: unira con sus dos vec inos. Cuarto, los ribonucletidos se separaran de los dcsoxirribonucletidos del ADN y se liberara la molcula de ARN. Quinto, las dos cadenas del ADN volveran a unirse. Dado que en esta hiptesis las dos adenas del ADN son expuestas por igual, ambas podran ser transcriptas. En la clula el ARN se construye de otra manera. En primer lugar, porque ~ copia slo una de las dos cadenas del ADN, la que corre en direccin 1' - > 5'. Esto permite anticipar que el ARN se sintetiza a partir de su extremo '> ' y progresa por su extremo 3' (fig. 14-1). En segundo lugar, porque los rihuuudctidos se agregan de a uno por vez, lo que hace innecesaria la sepa' ll i6u de las dos cadenas del ADN en toda su extensin. Slo se separa un 1111111" ti alrededor d JO 11 11\' ~ 1k uuclctidos, lo cual, como muestra la figu,, 111 . fu1'111a u l' l Al )N 11111 hul'ln~in de tnmscripcin qu se d spla1.a a
I IH ~ d i du qur :.l ' ' ll 'l' lt ..

14

11

11111 h 11l h l11'

248

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

14. LA TRANSCRIPCION DEL ADN

5'

249

,..--

3'

,-A R N

o-~-oTimina
1 -

Adenina~O~H,

IHYH
HO \

o
o
I
+

o
L---o

1 o - P-oGuanina 1 1

HO-P-O-P-0-

n 1

Cltosina~o~H,

o-

IH'HH
1

HO

OH

-o
Adenlna 1 1

o
11

' P-O-P - O- P-0o-

0 <"1 o

o-

Uracilov. 0 ~H,

IH H H
1 HO

OH
3

Fig. 14-2. Sfntesis de ARN. Puede observarse la ARN polimerasa (en rojo) y una "burbuja" de ADN que se desplaza debido a que sus cadenas se van separando en un extremo a medida que se juntan en el otro.
1 ~ 1 promotor se une a la ARN polimerasa y hace que sta interacte con 1 i\ J>N en el sitio en que debe iniciarse la transcripcin (el extremo 5' del 1 1'"' nto codificador del gen), el cual es marcado por el propio promotor. \1 1 la ARN polimerasa forma una "burbuja", pues determina la separacin , ,, 1 di l.ada de las dos cadenas del ADN y deja expuesto - junto con otros po' '"' al primer desoxi rribonucletido que va a ser ledo (fig. 14-2). i\ .:ontinuacin, frente a este desoxirribonucletido se acomoda un ribo"'" id>sido trifosfato complementario -ser el primer nucletido de lamol, ' 111:1 de ARN- y su base establece una unin no covalente con la base del ,, .nxirribonucletido (fig. 14-2). Luego se arrima un segundo ribonuclesi,,, , fosfato --complementario del segundo desoxirribonucletido expuesto ' 11 ,. i\DNy sus bases se unen. Pero lo ms importante es que los dos riil" ""rletidos que concu1rieron a la burbuja quedan juntos, lo cual permite '1'" 'litre ellos se produzca -mediante la ARN polimerasa- una unin fosl> ldistcr y se genere un dinucletido (figs. 14-1 y 14-2). Con l se inicia la 1111'-'is del ARN, que prosigue en direccin 5'~3' a medida que se acercan v , 1111en entre s- los ribonuclesidos trifosfato imlicados por el ADN. 11.1 alargamiento progresivo del ARN es conducido por la misma ARN po11'"''" '-'a. Esta, adems de catalizar las uniones fosfodister, se desliza sobre 1,, 1lN n direccin 5' ~3' y hace avanzar la burbuj a. Lo logra porque sepa111 " , > N 11ut:letidos en el lado frontal de la burbuja, en tanto que los de la re' ''l' " il odia s' vuelven a unir (fig. 14-2). Esto ltimo es posible porque all el 11N w d sliga de los ribiHIUCI tidos. No obstante, el ARN -cada vez ms ''"1'" ,.,1'11\.' 1111ido a ln<'lllkllll "'"""' d ADN por medio d los Iilimos ri1

-o,
Citoslna 1

o
11

0 <" o

P-O - P- O- P-0 o/

o-

r Guanina~ 0 ~H,
Fig. 14-1. Unin fosfodister entre los nuclelidos del ARN duran te la transcripcin del ADN.

IH HH
1 HO
"-

OH
3'

Si bien se transcribe la cadena 3'~5' del gen, convencionalmente se dice que la transcripcin avanza en direccin 5' ~3' porque el ARN sintetizado se corresponde -en su polaridad y en la secuencia de sus nucletidos (sustituyendo el U por la T)- con la cadena no transcripta del ADN. Ms an, la secuencia del gen se define por su cadena 5' ~3' (fig. 14-2).
14-3. Una ARN polfmerasa une a los nucletidos entre s

Los monmeros con los cuales se construyen las molculas de ARN se presentan en .e l nucleoplasma como ribonuclesidos trifosfato (ATP, UTP, CTP y GTP) (fig. 14-1). El comienzo de la transcripcin tiene lugar cuando, a travs de su base, uno de esos ribonuclesidos establece una unin transi toria con la base complementaria del primer nudetido del gen. Rn st pro ceso interviene el promotor cid pen, In :o ck sn artivado pm f: ~t tcucs que
llll'lll 'iOil:ll t' ltiiiN llll'iN

:acltlnlllt",

I IHHII ll1111dnN inr nrpnr

,..,

250

14. LA TRANSCRIPCION DELADN FUNDAMENTOS DE BfOLOGfA CELULAR Y MOLECULAR

251

La transcripcin concluye cuando la ARN polimerasa alcanza la secuencia de terminacin en el extremo 3' del gen. En ese punto la enzima se libera. Tambin lo hace el ARN, que adquiere el nombre de transcripto primario. En el extremo 5', el primer nucletido del ARN retiene los tres fosfatos, mientras que en el extremo 3' el ltimo nucletdo presenta un grupo OH libre (fig. 14-1). En el captulo 17-11 se analizar cmo la enzima topoisomcrasa 1 desenrolla al ADN durante la transcripcin. 14-4. La clu la posee t res cl ases de ARN po limerasa s Existen tres tipos de ARN polimerasas -llamadas I, JI y III- , responsables de la sntesis de las distintas clases de ARN. La ARN polimerasa 11 sintetiza los ARNm y la mayora de los ARNpn; la ARN polimerasa 1, el ARNr 45S; la ARN polim erasa III, el ARNr SS, los ARNt, el ARNpc y unos pocos ARNpn. Estas polimerasas responden de manera distinta a la accin de un veneno producido por el hongo Amanita phalloides, denominado a-amanitina. As, la ARN polimerasa JI es muy sensible al veneno, la ARN polimerasa III es medianamente sensible y la ARN polimerasa 1 es insensible.

Regulador

Promotor

Codificador

Fig. 14-3. A. Factores de transcripcin especficos y basales unidos al regulador y

al promotor de gen, respectivamente. B. El ADN se dobla

ARN polimerasa 11

EaG

lll s

sobre s mismo. para que interacten el regulador y el promotor, lo que estimula la transcripcin del sector codificador del gen por la ARN polimerasa H.

TRANSCRIPCION DE LOS GENES DE LOS ARN MENSAJ EROS

14- 5. Los gene s que codifi can a los AR Nm so n <J ct iva dos
por f actores de tr<Jn scripci n

La sntesis de un ARNm dado se produce cuando el gen respectlvo, mejor dicho, sus secuencias reguladoras y el promotor, se activan por p~htenas especiales, llamadas factores de transcripcin. Estos se clasifican en especficos y basales. Los factores de tr anscripcin especfi cos interactan con el regulador del gen (fig. 14-3) y, segn lo hagan con secuencias amplificadoras o inhibdoras del regulador (cap. 13-7), se dividen en activadores y represores. Las funciones de estos factores de transcripcin se analizan en la seccin 14-7. Los factor es de t ranscripcin basales son requeridos por el promotor, pues se unen a la secuencia TATA para comenzar la sntesis del ARNm (en la seccin 14-7 veremos que antes debe activarse el regulador). Debido a su naturaleza inespecfica, los factores basales son ms conocidos que los especficos. Existen varios -denominados T FIID, TFIIA, TFIIB, TFIIF, TFIIE , TFIIH, etc.-, los cuales actan secuencialmente en el orden en que fueron escritos. El TFIID se halla integrado por varias subunidades, una llamada TBP (por TATA binding protein) y las otras, TAF (por TBP-associated factor). El proceso se inicia al unirse el TFJID al promotor, por medio de la TBP. Esta unin altera la estructura de la cromatina en el promotor, que abandona su forma rectilnea y se pliega hasta formar un ngulo de unos 100. El cambio atrae tanto a los restantes factores de transcripcin basales como a la ARN polimerasa 11, con la cual esos factores se unieron previamente. Una vez q~e se ha unido al promotor, la ARN polimerasa JI es fosforilacla por el TFIIH, que contiene una quinasa. Un ATP dona el f sforo , luego de ser hidrolizado por el TFIIB. A continuacin, la ARN polimerasa Il fosforilada se desprende de los factores de transcripcin y abre la doh k hli t.:' dt.: l /\ DN en el sector d I g 11 onli guo al pr<11nolm s<.: ln na la 1HII'hu ja i< I<:<IIS ., ip
l' l 111 , t' Otl

Para alargar el ARNm, la ARN polimerasa II necesita dos factores adicioll!dcs, los factores de elongacin Sil (o TFIIS) y SIII (o elongina). El fac'' u Sil es una protena monomrica de 38 kDa. El factor SIII es un heterotr"'c;ro compuesto por las elonginas A, B y C, de 110 kDa, 18 kDa y 15 kDa, ,. spectivamente. Se estima que durante la fase de alargamiento la ARN polimerasa II le ur rcga a la molcula ele ARN unos 50 nucletidos por segundo. Como se seal, en los genes que codifican ARNm an no se ha identifi, 11do la secuencia de nucletidos responsable de la terminacin de la trans' 11pcin (cap. 13-7). 1 :1conjunto de transcriptos primarios de los ARNm se conoce como ARN hd crogneo nuclear o ARNhn . Estos transcriptos no se encuentran libres en ' 1 uucleoplasma sino combinados con diversas protenas bsicas, las cuales 1 1 ' 1111en a los ARNm a medida que se sintetizan. El conjunto de transcriptos 1" 1111arios y las protenas asociadas lleva el nombre de r ibonucleoprotena lwlcrognea nuclear o RNPhn . Se considera que las protenas actan como lt npcronas que mantienen a los ARNm desplegados. Ello evita que se for,,,,." - en una misma molcula- apareamientos entre secuencias de nucle,dos complementarios.

lil (;ULACION DE LA ACTIVIDAD DE LOS GENES 1111r CODIFICAN ARN MENSAJEROS

14 6. Los mecan ismo s ms importantes para control ar la acti vidad
de los genes t ienen lugar a nivel de la t ran scripcin

\u

t'll! d . ' /\ ' ini ~, j l t t :lf lll\': .i , ;

ckJ

1\ I ~ N nt ,

1lcsde que se supo que en los organismos pluricelulares todas las clulas mismo genoma, se ha planteado la necesidad de responder a este o tl c 'l'rogante: por qu en cada tipo celular ciertos genes son seleccionados 1 "" a su transcripcin y no otros? La respuesta presenta varias facetas, cuyos 1' "'l enidos se desarrollan en distintos lugares del Libro. As, en el captulo 11 " una li za cmo responden las clulas al ser influidas por otras, y en las siI' ""'III Cs secciones de este captulo se describen los mecanismos moleculares ' 1'" ' ll evan a la diferenciacin celular. Finalmente, en los captulos 15, 16 y ' 1 :.,. agregan datos que completan el panorama. 1.1o s 111ecanismos celulares que determinan qu protena ha de sintetizarse, v 'n qu ca ntidad, operan en varios niveles, aunque los ms importantes son l,r, '1"' <.: ontrolan la actividad transcripcional de los genes. No obstante, pue,; " pmdu t.: irse regulaciones despus de sintetizado el ARN, durante el pro' 1 l1111 ic- 111o del lranscriplo JI' iut:trin. Incluso ms tarde, mediante el control do J , o xpntl:i <"i ,'>ll dcl i\ l' N11 1 11 1 ''"l'I IISIII:I o d(; SU SII J1L;l'V iV"lll;ia cu e! c'illl
1" :< (;en el

252

FU NDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECUL AR 14 . LA TRANSCRIPCION DEL ADN

253

sol (fig. 13-1 ). Finalmente, en algunos casos las regulaciones ocun en durante la traduccin de los ARNm en protenas o a travs de la degradacin de las segundas. El control de la actividad transcripcional de los genes se analizar en las siguientes secciones de este captulo, y las regulaciones postranscripcionales se estudiarn en los captulos 15 y 16. Es oportuno sealar que el ARN de aproximadamente la mitad de los transcriptos primarios no completa su sntesis. Se ignora si esto se debe a la existencia de alteraciones en los procesos de transcripcin o si se trata de un mecanismo generalizado de regulacin de la actividad gnica que opera abortando la transcripcin antes que la polimerasa II anibe a la seal de terminacin. Se conocen muy pocos casos de regulacin gnica derivados de la conclusin prematura de la transcripcin. Como veremos, los mecanismos prevalecientes operan en el comienzo de la sntesis de los ARNm, ya que actan sobre las secuencias reguladoras de los genes. Estas secuencias son influidas por factores de transcripcin especficos, que ingresan en el ncleo para activar o inhibir a los genes.
14-7. Los factores de transcripcin especficos desencadenan o fren an la transcripcin del ADN

Recordemos que la polimerasa 11 por s misma no puede iniciar la transcripcin del segmento codificador del gen, pues tiene que ser activada por los factores de transcripcin basales unidos al promotor. A su vez, esta unin depende de la activacin previa de las secuencias regul adoras por factores de transcripcin especficos. Como los factores de transcripcin basales son los mismos para casi todos los genes, se dice que son constitutivos. En cambio, los fac tores de transcripcin especficos, al ser particulares para cada gen, se califica~ roo facultativos. Aunque los factores de transcripcin especficos se cuentan por millares, son m~cho menos numerosos que las secuencias reguladoras que tienen que controlar. No obstante, logran la especificidad mediante la creacin de mltiples combinaciones entre ellos, lo cual aumenta el nmero de posibilidades en forma extraordinaria. As, cada clase de clula elabora slo una seleccin de esos factores, nada ms que los imprescindibles para crear las combinaciones capaces de regular sus propios genes. Debido a que cada gen suele tener varios amplificadores y varios inhibidores, dos o ms genes distintos pueden poseer algunos reguladores comunes, aunque nunca la misma combinacin. Una vez que los factores especficos se han unido a las secuencias reguladoras, cmo actan sobre el promotor? (recurdese que ambas partes del gen suelen estar muy distanciadas). Simplemente, el gen se curva y forma una horquilla, como muestra la fi gura 14-3. Obsrvese el modo como los factores especficos unidos a las secuencias reguladoras interactan con los factores basales situados en el promotor. Ello es posible porque los factores especficos cuentan con dos dominios, uno que se conecta con el ADN regulador y otro que lo hace con los factores basales, ms precisamente, con las subunidades TAF del factor TFllD. Cuando el complejo queda integrado, los factores basales activan a la ARN polimerasa II y sta inicia la transcripcin de l gen. Por su parte. los factores especficos di sponen el nmero de polinlllntsus q1w una Iras o1r:1 h:u(lu ' llmhajo, locuul rq ula la t"illllidud dt !I I~N 111 'JIIt ' ilt' l"ulll kar{!,

l ~u las secciones 14-20 a 14-26 se analizan los mecanismos reguladores de lu '' ti vidad gnica en las clulas procariotas.

11

n.

La tra nscripcin de los genes de los AR Nm puede visualizarse con la ayuda del microscopio electrn ico

Fig. 14-4. Micrografa electrnica que muestra dos genes transcribindose. 35.000x . (Cortesa de O. L. Miller y B. R. Beatty.)

1.a microscopia electrnica convencional no muestra cmo se transcriben 1"' g~ nes . Empero, cuando se dispersa el contenido del ncleo sobre una gri1 lltl se ponen en evidencia detalles reveladores. As, si un gen se transcribe a 11111i11no acelerado - es decir, se asocia simultneamente con varias ARN po1 111 1 \"l"asas II- , puede ser visto junto con muchas cadenas de ARNm que sur1111 perpendicularmente de su molcula. I:J unj unto se asemeja a un rbol de navidad, cuyo tronco conesponde al 1'1 11 las ramas a los ARNm (fig. 14-4). El alargamiento de las ramas -que ' '" 111f!s largas a medida que se alejan de la punta del rbol- indica la direc1 l 1 1 11k la transcripcin. En el punto en que cada rama se une al tronco se lo11111a ARN polimerasa II (suele verse en las micrografas) y, por lo tanto, 1 nl111 1 ln111111 una "burbuja". Si pudiera realizarse una filmacin se vera a las burIIIIJ IHI dtspllmndose d ' Stk In p11111 11 d 1 (lrbol hacia el "suelo", cada una con su
1
N 111. ljl ll'

. "le (k spun\11- di

111 11111 '' I ' I IIIIHio n i <';III'/,H S il lll i:< IIIll

lo111 ' I11d .

14. LA TRANSCRIPCION DEL ADN

255

254

FUNDAMENTOS DE BlOLOGlA CELULAR Y MOLECULAR

SURCO MAYOR
H

SURCO MAYOR
H

Los genes que producen ARNm a tan alta velocidad no son muchos, pues la mayora se transcribe a un ritmo relati vamente moderado. Los ms lentos inician una nueva transcripcin despus de concluir la anterior. En estos casos el gen se vera como un tronco con una sola rama -el ARNm-, cuya longitud y posicin en el tronco dependeran del instante en que es tomada la microfotografa.
14-9. Se con ocen las bases molecu lares de la interaccin de los factores de transcripcin con el ADN de las regiones reguladoras y promotora del gen

Hy N rlN.O')---{'CH " H

N --< A ~N H - N~ T }-H
N =< }-N
H O

H=<-0-H N~~ N-{ )=N

O H
SURCO MENOR

CH

o.. . H- N/

YH

SURCO MENOR

SURCO MAYOR
r H

Los factores de transcripcin y el ADN de los reguladores y del promotor contienen en sus molculas informacin suficiente para unirse entre s en forma especfica. Los factores de transcripcin establecen contacto con el ADN mediante gn1pos qumicos complementarios, de un lado aportados por Jos aminocidos y del otro por las bases de los nucletidos. As, la especificidad de la unin depende de la complementariedad estructural entre las partes interactuantes. Originariamente se crey que los factores de transcripcin abran la doble hlice del ADN y reconocan a los grupos qumicos que participan en la formacin de los puentes de hidrgeno entre las bases de Jos nucletidos. Esto ha sido descartado. Si bien se confirm qu.e los factores de transcripcin reconocen al ADN de los promotores y de los regu ladores por sus bases, en ellas identifican a grupos qum icos locali?..ados en la parte exterior de la doble hlice, a nivel de los surcos mayor y menor. All , sin necesidad de romper los puentes de hidrgeno, los aminocidos de los factores de transcripcin interactan con las bases y se unen a ellas.
14-1 O. Los factores de t ranscripcin se asocian a los regu ladores y al promotor del gen a t ravs de ;'!tomos expuestos en los surcos del AD N

O . H- N
H

H~
H

SURCO MAYOR

'r--(0N=<
/
H

NM-H

}-N

H~ H -N~y N~ )=N
O H - N

N-H .O

N - H O

'\,
H

SURCO MENOR

SURCO MENOR

twicas, cantidad desproporcionadamente alta para el nmero de factores de ipcin que existen en la clula. Itrursc1
11- 11 . los f actores de t ranscri pcin contienen estructuras dimrica s especiales

Fig. 14-5. Posiciones y combinaciones de los lomos de oxgeno, hidrgeno y nitrgeno que se hallon expues1 os en el
surco mayor de la molcula de ADN a nivel de los pares de bases A-T. T-A, G-C y C -G.

Visto desde el surco mayor del ADN (fig. 2 4), cada par de nucletidos -en las cuatro combinaciones posibles (A-T. T-A, G-C y C-G)- muestra un tomo de oxgeno, uno de hidrgeno y uno de nitrgeno (fig. 14-5), que son capaces de establecer uniones no covalentes (como puentes de hidrgeno) con tomos de Jos aminocidos de los factores de transcripcin. En cada par de bases esos tres tomos se presentan combinados de manera diferente. Por ejemplo, el par A-T muestra la combinacin N~. y el parT-A, la combinacin 0 - H- N; como vemos, una es la imagen invertida (en espejo) de la otra. Algo semejante ocurre con Jos pares G-C y C-G, en los cuales los tomos forman las combinaciones N-0-H y H-0-N, respectivamente. La informacin c ifrada en el surco menor del ADN (fig. 2-4) es menos ampli a que la del surco mayor, tal vez porque resulta estrecho para la entra da de algunos ami nocidos. Adems de estas asociaciones especficas, entre los factores de transcrip cin y el ADN se producen uniones inespecfi cas; en una de ellas participa el esqueleto de ..fosfatos del ADN y, si bien no le confiere especificidad a In unin, la estabiliza. Por lo general cada factor de transcripcin entabla unos 20 contactos cou el ADN, lo que significa que aproximadamente 20 aminocidos inl l!racllau con otros tantos pares de nuclctidos. sea en 1 promotor o n 1 r T Uiadm drl n . Oado que las Lornhiu:rriours de pans de hn. rs :m nr rr~rlr ll (i\ T, T A. 1:
( ' , (' ( ;). JIIIC'dt ' ll

Analizadas las singularidades estructurales del ADN, nos ocuparemos 11lrtrra de las que caracterizan a los factores de transcripcin. En general, las pttrlr.:nas de los factores de transcripcin contienen estructuras dimricas !mtricas, las cuales se encastran e n los surcos de la doble hlice del ADN. 1\ .r , los dmeros ocupan dos vueltas de la doble hlice, con un monmero en rul:r vuelta. En ese par de vuel tas el ADN tambin presenta simetra, ya que " ~ dos mitades muestran secuencias de nucletdos repetidas en palndromo ilorrnino tomado de la lingstica que designa a la palabra o frase que se lee l> tt:rl de izquierda a derecha o de derecha a izquierda). Cada mitad del palnrltt iiiiO ocupa una de las vueltas del ADN. 1.a dimerizacin de los factores de transcripcin y la simetra del ADN son " "diciones necesarias para que los aminocidos de los primeros puedan in'' r.r ruar con las bases del regulador y del promotor. Aunque existen miles de factores de transcripcin diferentes, los sectores ditt r ricos de sus molculas forman estructuras secundarias y terciarias con tl/,tlos comunes, lo cual permite clasificarlos en un limitado nmero de fa"'ili:rs. Cada factor de transcripcin puede tener una, dos o ms de esas estruc'"':s. diseadas para ingresar en los surcos de la doble hlice a nivel del regulr" ,,,. y del promotor del gen. 1.:r denominacin de las estructuras se basa en las formas que tienen, de ~t h f qu se las llame hlice-vuelta-hlice, dedos de cinc, cremallera de leuci"" y h lice-bucle-hlice. 11(-licc-vuelta-hlice. Esta estructura consta de dos cadenas de aminoci" " , .,11 forma de hlice, separadas por una "vuelta" o cadena ms corta (f1 g. 1 1 t.) , l lu:r de las hlices "lee" la secuencia de nucletidos en el sector reguhrt lttr rlt-1 '," " al que se un si lo reconoce- y la otra mantiene la hlice
h 1111111 ~ 11 la po~il i (HI ttk u:ul1
C)h v i:nnt: nlt',

clm , 111111'. lf,()

()(JI) ( 1fl 1)

p~t!d lt~ltd td t'

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256

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

14. LA TRANSCRIPCION DEL ADN

257

Fig. 14-6. Estructura con forma de hlice-vuel!a-hlice.

Fig. 14-7. Estructura con forma de cremallera de leucina.

la hlice lectora (llamada tambin hlice de reconocimiento) vara en los distintos factores de transcripcin. Cuando una hlice-vuelta-hlice est acompaada por otra simlrica, entre ambas componen un dmero. Las respectivas hlices de reconocimient9 se encajan en sendos surcos del ADN, que corresponden a los dos lados del palndromo. Se han identificado estructuras hlice-vuelta-hlice en diversos factores de transcripcin. Por ejemplo, en algunos factores involucrados en la formacin del plan corporal durante el desarrollo embrionario (cap. 21-22), en los factores implicados en la diferenciacin de las clulas musculares, etctera. Cremallera de leucina. Consta de dos cadenas polipeptdicas dispuestas en paralelo, ambas con forma de hlice. Cada cadena posee dos sectores, uno que se une al ADN y otro que lo hace con su homlogo, con lo cual se forma un dmero (fig. 14-7). Los sectores unidos entre s presentan, cada siete aminocidos -que corresponden a dos vueltas de la hlice-, una leucina que da al interior del dmero. Estas leucinas se encastraran como los dientes de los cierres relmpago, de ah el nombre de cremallera. Los sectores no dimerizados poseen una alta proporcin de aminocidos bsicos, que son los que generan la unin especfica del factor de transcripcin con el ADN. Entre otros, poseen cremalleras de leucina los factores de transcripcin que regulan la actividad de los protooncogenes myc, fos y jun (cap. 18-31). Dedos de cinc. Cada dominio del factor de transcripcin est compuesto por una secuencia de unos pocos aminocidos y un tomo de cinc, el cual se liga tetradricamente a cuatro cistenas, o a dos c istenas y dos histidinas (fig. 14-8). Esos dominios se proyectan como dedos, cuyo nmero y secuencia de aminocidos varan en los distintos factores de transcripcin. Adems, los dedos de cinc se asocian de a dos para formar dmeros. Los dedos de cinc son las estmcturas ms difundidas entre los factores de transcripcin. Se encuentran, por ejemplo, en los receptores citoslicos mencionados en el captulo 11-6. Estos ingresan en el ncleo y actan como factores de transcripcin especficos cuando se les unen las sustancias inductoras. Otro ejemplo corresponde al TFIIIA, uno de los factores de transcripcin del ARNr 5$ (seccin 14- 16). Hlice-bucle-hlice. Esta estrucl1tra tiene una configuracin dimrica muy parecida a la cremallera de leucina, pues posee<!os cadenas polipeptdicas con dos sectores funcional es en cada una: el especlfu:o - reservado para la unin del factor de transcripcin con el ADN- y el responsable de la dimerizacin (fig. 14-9). El primero es rico en aminocidos bsicos. Este diseo se diferencia de la cremallera porque sus partes dimerizadas no se encastran.

14- 12. El enrollamiento de la cromatina influye

sobre la actividad de los genes
En el captulo 12-1 O se describieron las diferencias entre la eucromatina y la heterocromatina. Aunque puede no ser absolutamente cierto que la transcripcin tenga lugar slo en la eucromatina, casi todos los datos sug ieren que durante la interfase el mpaquetamiento altauu;nll' cond usado 1k la n0111a1inu l' S d1rir. la lwh'lnt' ltlllllllinu indku lliiN( 'IIt ' llt th IH ll vulud lllllt ~l

Tipcional en su ADN. Ello no implica que en la relativamente extendida eucromatina se produzca automtiamente la transcripcin, ya que en las clulas la mayor parte de esa cromatina se halla inactiva pues se transcriben slo los genes que reciben el mandato de hacerlo - va factores de transcripcin- , como se vio en la secin anterior. Por otra parte, en el captulo 12-9 se dijo que algunos lazos de la fibra de , romatina de 30 nm podran constituir verdaderas unidades de transcripcin, de modo que cada gen abarcara el ADN perteneciente a un lazo. Adems, en ese captulo se analiz el papel que desempean las histonas en el enrollamiento de la cromatina. Aqu se ver cmo regulan la transcripin de los genes, sin olvidar que esa funcin requiere que el ADN est relativamente desenrollado y libre de molculas adosadas que puedan obstaculit.ar el contacto de la ARN polimerasa con el segmento codificador del gen. Si bien se acepta que la cromatina de 10 nm es la ms apta para la transripcin (fig. 12-10), la ARN polimerasa no puede actuar si no se desenrollan los tramos de ADN de los nucleosomas, al menos localmente y mientras du111 la transcripcin. Se ha sugerido que los factores de transcripcin basales no slo activan al promotor del gen sino tambin el desarmado de los nucleosomas en la parte Inicial del segmento codificador, lo que permite la separacin local de las dos < ' lldenas del ADN para que la ARN polimerasa pueda comenzar la transcrip1'1 m. Al parecer, los factores de transcripcin actan directa o indirectamenll' sobre las histonas H4, que se modifican y desencadenan la remocin de las ulrus histonas, comenzando por las H2A y las H2B. Ms adelante, a medida que avanza por el segmento codificador del gen, lu propia ARN polimerasa sera la responsable de desenrollar el ADN de los nu<.:leosomas, los cuales se rearman conforme la enzima los deja atrs. Diversos datos revelan que el grado de enrollamiento de la cromatina es l<'gulado por el agregado o la remocin de gmpos acetilo, gmpos metilo y 111pos fosfato en las "colas" de las histonas, las cuales estn expuestas a esos < 'll mbios porque se proyectan hacia fuera de los nucleosomas (cap. 12-9). Por ejemplo, la acetilacin de algunas lisinas de la histonas H3 y H4 dis,duuye el enrollamiento de la cromatina, lo que favorece el acceso de los l111'lOres de transcripcin basales al promotor del gen, con la consiguiente '" sta en marcha de la actividad gentica. En cambio, la desacetila cin pro1 vn~a el efecto contrario, ya que incrementa el enrollamiento de la cromati111 1 y puede llegar a convertirla en heterocromatina. Debe sealarse que el 1 1 1 r gado y la remocin de los grupos acetilo son catalizados, respectiva" "' nle, por acetilasas y desacetilasas localizadas en la 11 1triz nuclear. 1 Respecto de la metilacin y la demetilacin, prodnl' '11 efectos opuestos a los de la acetilacin y la desa'' 'llnc in, respectivamente. As, el agregado de gmpos 1 111 tilo a una de las lisinas de la histona H3 aumenta el ' l""llamiento de la cromatina, mientras que su remo, lun lo disminuye. l'or 1ltimo. la fosforllacln y la desfosforilacin de , 1111111 s ri11us y lr 'OII IIIW lnl'llli 'l llllns n la "cola" de la l1 1u1111 111 111111hi 11 1""'""'' 11' 111 ''" opnC"stos a los de l11 1 11'1 tllul'iou y In d1 "' 11111 11 ,,.1, " 1'' l'tl vnutl'lll l'.

Fig. 14-8. Estructura con forma de dedos de cinc.

Fig_ 14-9. Estructura con forma de hlice-bucle-hlice.

258

FUND AMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

14. LA TRANSCRIPCION DELADN

259

H..._ /H

tJ
N

Citosina Fig. 14-10. Metilacin de la citosina (obsrvese el grupo C 3 H en la melilcitosina).

En sntesis, la acetilacin, la demetilacin y la desfosforilacin de distintas histonas disminuyen el enrollamiento de la cromatina y propician la actividad de los genes. Contrariamente, la desacetilacin, la metilacin y la fosforilacin aumentan el enrollamiento y bloquean la actividad gentica. Cabe sealar que en diversos tipos celulares los prode los genes contienen histonas que presentan motores Metilcitosina -en lo re lativo a su nmero y distribucin- una combinacin particular de esos cambios qumicos, lo que sugiere que algunas combinaciones estimulan y otras sile ncian la actividad de los genes. Ello ha impulsado a los que trabaj an en este tema a darle el nombre de cdigo h istnico al conj unto de tales combinaciones. Debe agregarse que en los tipos celulares diferenciados que se di viden, las clul as hijas heredan la misma heterocromatina de las clulas predecesoras, lo cual se repite de generacin en generaci n (cap. 21-21). Esta estabilidad de la heterocromatina se debe a que los factores que la causan se duplican en las clulas prximas a dividirse y se reparten entre las clulas hijas. En algunos casos la actividad gnica se inactiva y la cromatina se compacta debido a que intervienen causas adicionales a las citadas, como sucede en el cromosoma X compactado de las clulas de la mujer, descrito en el captulo 12-11 con el nombre de cromatina sexual o cuerpo de Barr. Si bien el cromosoma X se compacta y sus genes se inactivan debido a que se desacetilan sus histonas y se metila su ADN (esta metilacin se anali za en la seccin 14-13 y no debe ser confundida con la metilacin de las histonas), ambos cambios son precedidos por la activacin del gen Xist (por X-inactivation specific transcript), que como se vio en el captulo 13- 12 se localiza en el propio cromosoma X, en una regin cercana al centrmero llamada Xic. Cuando se activa, el gen Xist genera mltiples copias de un ARN especial denominado AR Nxist (cap. 13-2), las cuales , a partir del Xic, se unen al ADN de los dos brazos del cromosoma X e inactivan a casi todos sus genes. Cabe agregar que mediante tcnicas especiales las copias del ARNx ist aparecen en forma de puntos a lo largo del cromosoma X compactado, lo que sugiere que se asocian con protenas.
14-13. La mct ilacin del AD N inf luye sobre la actividad gniea

CG GC

CH3 1

CG GC
1

CH3 1

CH3 CH3

CG GC

CG GC
1

CH3

CH 3

Fig. 14-11. Meti lacin de ej. losinas tras la replicacin del

ADN.

nucletido (cap. 13-7). Concordantemente, en las clulas de la mujer, los promotores de numerosos genes inactivos pertenecientes a l cromosoma X compactado presentan un alto grado de metilacin en los dinucletidos CG. Como es lgico, un gen puede estar metilado en un tipo celular pero no en otro. Por ejemplo, el gen de la ~-globina se halla metilado en las clulas que no fabrican esa protena y no en las clulas eritropoyticas, donde la ~-gl obi na es producida en grandes cantidades. En las sucesivas generaciones celulares, las clulas de Jos tejidos diferenciados poseen en sus ADN un patrn de c itosinas metiladas virtualmente idntico a l de sus predecesoras. La herencia de las mC se debe a que durante la replicac in, luego de duplicarse las dos cadenas del ADN, las C de las cadenas hijas -las complementarias a las G de los dinucletidos mC-G y G-mC, exclusivamente- adquieren un grupo metilo. Esta metilacin es dirigida por una enzima llamada metilasa de mantenimiento, que acta apenas se duplica el ADN (fi g. 14-11). Contrariamente, en las clulas que se diferencian despus de dividirse, los patrones de metilacin se modifican. As, los genes inacti vos -por lo tanto, 111uy metilados- pierden parte de su metilacin si se activan. El mecanismo que modula el reemplazo de las mC por C - y viceversay el modo como las primeras previenen la transcripcin son te mas que acu..:ian a los investigadores dedicados al estudio de la diferenciacin celular.

14-1 4 . La impronta genmica resulta de la metilacin diferente de los alelas de algunos genes, segn provengan del padre o de la madre
Un fenmeno muy llamativo relacionado con la metilacin del ADN se observa en la denominada impronta genmica. Esta involucra a un grupo de enes cuyos dos a lelos poseen normalmente patrones de metilacin de las cil o.~ inas distintos entre sf, al compararse el alelo aportado por el padre con el 11lelo aportado por la madre. Hasta el momento se han identificado ms de 40 nes con esta caracterstica que, resaltamos, es absolutamente normaL Para que la impronta - o " marca de procede ncia" paterna o materna- de sos genes pueda mantenerse de generacin en generacin, los genes con iml'ronta materna deben perderla en las clulas germinativas masculi nas y adquirir el patrn de metilacin de los genes con impronta paterna, los cuales 1111 se modifican. Obviamente, en las clulas germinativas femeninas debe 1' U ITir lo contrario. Se ignora cmo en el testculo los genes con impronta 111111 crna adquieren el patrn de metilacin de sus homlogos paternos, y en 1 < 1 ovario los genes con impronta paterna adqui eren el patrn de metilacin de 11 1 ~1 l11111161 o os maternos. 'i(ul s produce en la etapa perinatal y tiene lu1\n l'll stfculoiHnuulti,IH 1'' " <'11 11111 \'\ l1d:H. l'll'd< 1 11 ,, loo, l'SIH'I'I IIalogonios (rap. 11!-:1). Hn L':tlll

Adems de las cuatro bases conocidas (A, T, C y ~ en algunos puntos el ADN contiene una quinta, la m etilcitosina o m C, que s0;enera al agregarse un grupo metilo (CH3) a la citosina (fig. 14-10). La metilacin del ADN se halla restringida a citosinas seguidas por guaninas (no estamos diciendo "apareadas"), de modo que si en un punto una de las cadenas del ADN contiene el dinucletido mC-G, la opuesta exhibir el dinucletido G-mC. Como es obvio, la mC del dinucletido mC-G se aparea con la G del dinucletido G-mC, y la G con la mC. Igual que con la metilacin de las histonas, existe una estrecha correlacin entre el grado de metilacin de los genes y su inactividad transcripcional. No obstante, en la metilacin del ADN influye menos su nmero que el Jugar donde se localizan. En efecto, la metilacin del ADN a nivel del promotor puede abolir la actividad de un gen, mientras que muchas metilaciones en su regin codificadora suelen no afectarl a. Recordemos que exist n n s con pnHnuluH'N '1'11' I'H'N < ' Illlnl N ton;s li ll llllHIOs l'l'I(ICIIll'S ( '( ; <hhidu a 'jlll ' < 'lllll it IH1 11111111 o dlll ll " l'"ll 'll lll de ' Nl' d

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

14. LA TRANSCRIPCION DEL ADN

261

Fig. 14-12. Representacin del gen del ARNr 45S asociado a la ARN polimerasa I y a los factores de transcripcin
UBF y SLI.

5'

bio, en el ovario se produce durante la meiosis l, por lo que tiene lugar en el ovocito I (cap. 19-4). Debe sealarse que para que la embriognesis sea normal, por cada par de alelos con impronta se requiere que uno tenga la impronta paterna y el otro la materna. Por consiguiente, si en una clula germinativa de uno de los padres se produce una falla en la reprogramacin de la impronta, el embrin formado con la participacin de esa clula tendr una proporcin inadecuada de alelos paternos y maternos y se desarrollar defectuosamente. Reciben el nombre de disomas uniparentales las afecciones congnitas que se producen cuando los dos alelos de un gen con impronta poseen la impronta del padre o la impronta de la madre y no cada alelo la impronta de uno de los padres. Por ejemplo, una malformacin congnita muy grave, el sndrome de Angelman, se debe a la presencia de dos alelos paternos o a la falta del alelo materno de un gen con impronta perteneciente al cromosoma 15. Su contrapartida es el sndrome de Prader- Willi, en el cual esos aletos son maternos. Debe sealarse que si bien ambos sndromes son consecuencia de

Fig. 14-14. Representacin del gen del ARNr SS asociado a la ARN polimerasa I1I y a los factores de transcripcin
TFIIIA, TFIIIB y TFIIIC.

1 <11 11 -racin de la impronta del mismo gen -la del alelo materno y la del ale-

,, prr lcrno, respectivamente-, sus cuadros clnicos difieren entre s.

11!1\NSCRIPCION DEL GEN DEL ARN RIBOSOMICO 455
1 1 15. El AR Nr 455 se sintetiza en e l n ucl o lo med ian te dos factores de tra nscripci n l',rr el captulo 13-8 se seal que las 200 copias del gen del ARNr 4SS se lto 11 li :-.an en el nuclolo. 1.11 iniciacin de la sntesis del ARNr 4SS por la ARN polimerasa 1 requie' ' ,1, S fac tores de transcripcin, llamados SLl (por selectivity factor) y UBF 11'' " llf!Stream binding factor) (fig. 14-12). Los estudios sobre el SL1 revelalotlr orre contiene tres TAF y una subunidad idntica al TBP del TFIID (a pe'" le que el promotor del gen para el ARNr 4SS carece de secuencia TATA). 111SLl se asocia al promotor del gen y el UBF al regulador (amplificador) 11 1 11 ' 13-8). Luego el SLl y el UBF se comunican entre s -y ambos con la 1 1N poli merasa I - y forman un complejo cooperativo que da inicio a la 11 rtrrlol Tipcin. 1 r transcripcin de cada una de las copias del gen del ARNr 45S conclurl H rribar la ARN polimerasa I a la secuencia de terminacin, rica en timirtr l 1lH do que varias copias del gen se hallan alineadas en tndem, es posilrlr qru; exista algn tipo de asociacin entre la zona de terminacin de una r1plu y el regulador de la copia siguiente, a pesar de estar separadas por un 1"' ""' de ADN espaciador que no se transcribe. Abonan esta idea experimen'" los cuales la transcripcin de una copia no se inicia si la ubicada prelr 1 '' , , rr1 mente no finaliza la suya. 11 < :sludio ultramicroscpico del nuclolo, previo extendido de sus com1 """ rrl s, muestra una sucesin de copias del gen del ARNr 4SS dispuestas 11 lrlrrdem, cada una asociada a numerosos trascriptos primarios. Se ven im' "' 11 semejantes a rboles de navidad como las producidas por los genes ' 1"' !ilrrt etizan ARNm a alta velocidad (fig. 14-13).

1111\NSCRIPCION DEL GEN DEL ARN RI BOSO MICO SS

188 588 1----1 1----1
1

1 1 1Ir. [ 1 gen de l AR Nr 55 se halla fue ra del nuclolo y se activa mediant e tre s factores de transcr ipcin Espacln(hu no tronoorlptn
nnn1 ~nto ,

Espaciador no transcripto

Espaciador transcripto

Espaciadores transcriptos

Fig. 14-13. En la parte superior de la figura se observa un extendido con once genes consecutivos del ARNr 4)S, "<'1"""""
por segmentos espaciadores que no se transcriben. En la parte media aparece uno de dichos genes con mayor (" 'pi,

no proceso de transcripcin; contiene mltiples molculas de ARNr 45S. Jo que le otorga un u~ pe to de la parte inferior se presenta un esquema del gen. corr las partes corrcsporrdiontcs n los ARNr 1HS, 2 H.~
montos cspacindorcs qu e. se tmnscribcn. ( ortsfn du lJ. Scher r. M. 1:. 'J'r(' ntl eJe nhurg y W. W,

" ~ rlml

dr "' vl dud" l'rr .H.~ jrrrrlot" lotrl "'

l :wu kc~ . l

1 '" ll>roximadamente 2.000 copias del gen que codifica el ARNr SS se ' '" 111 rrll'llrt fuera del nuclolo (cap. 13-9). Su transcripcin es dirigida por la 11 N wlimerasa lll, que acta cuando tres factores de transcripcin distinll rr r11ados TFIIIA, TFIIIB y TFIIIC- se unen al promotor del gen '" rll j 1 1 Jtl ). EL TFIIIB contiene varios TAF y la subunidad TBP del TFIID. 1 11 ~ f rrll s is d 1 ARNr SS cesa cuando la ARN polimerasa Ili mriba a la se' tu 111 1 1 d1\ h'1 111inn i{ut, ri c a t.:. n lilninu ~:.

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FU NDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLEC ULAR

14. LA T RA NSCRIPC ION DEL ADN

263

1 1 11\NSCRIPCION DE LOS GENES EN LAS CELULAS PROCARIOTAS

ARN polimerasa 111

1 1 20. La regu lacin de la expresin de los genes bacterianos puede t ene r lugar en e l comienzo o en la t erminacin de la transcripcin Las bacterias poseen mil es de genes, entre los cuales se encuentran los q ue di i'ican a las protenas enzimticas, tanto las que participan en la degrada'1 1111 de los alimentos provenientes del medio como las que intervienen en la 1111 sis de las molculas que compo nen la clula bacteriana. En algunos ca'"' la expresin de tales genes es controlada en el comienzo de la transcrip' 111 11 y en otros tanto en el comienzo como en la terminacin.
11 ? 1. El opern la e es inducido por la lactosa

Fig. 14-15. Representacin del gen de un ARNt asociado a la ARN polimerasa lf[ y a los factores de transcri pcin TFI!IB y TFTIIC.

TRANSCRIPCION DE LOS GENES DE LOS ARN DE TRANSFERENCIA

14- 17. Los
gem~s que codif ican a los ARNt se a ctiva n med ian t e dos fa cto res de t ra nscripcin

La transcripci n de las JO a 100 copias de cada uno de los genes que codifican a los distintos ARNt (cap. 13- 10) es dirigida tambin por la enzima ARN polimerasa lll, la cual requiere que se unan al promotor dos factores de transcripcin, los recin nombrados TFIIIB y TFIIIC (fig. 14- 15). Debido a la presencia de varias timi nas consecutivas e n el extremo 3' del gen, la finalizacin de la sntesis de estos ARN es simil ar a la de los ARNr 45S y 5S.

l'uesto que las bacterias obtienen su ali mento d irecta mente del.medio en

'1'"' viven, los mecanismos que reg ulan la actividad de sus genes debe n adapliii iC rpidamente a los cambios en la calidad y cantidad de las molcu las 1ul11nentos) en dicho medio. l l n buen ejemplo de control transcripcional lo proporcionan los genes de 11 1'1 ~:nzimas q ue mterv ienen cuando la bacteria Esche richia coli utiliza a la lrtt'lom como alimento. La sntesis de estas enzimas puede aumentar hasta 1 11110 veces si se agrega lactosa al medio de cultivo. As , la disponibil idad de "" sustrato esti mula la produccin de las enzimas que intervie nen en su deViildacin. Esta regulaci n - por induccin enzimtica- se cumple taml tl, " en el caso de las enzimas que degradan a otros azcares y a diversos "" dnncidos y lpidos. l .as tres enzimas necesarias para el aprovechamiento de la lactosa como ll l111<.: nto son la ~-galactos idasa, la permeasa y la transacetilasa, cuya codifi' ill'ti n cotTesponde a una unidad gentica comn denominada opern lac ul,.. 14- 16). ! In opern es un grupo de genes que se encuentran muy prximos entre s ~ '1" son regulados (activados o inhibidos) en forma conjunta por un operalur (o) Y un promotor (p). Adems suele intervenir un gen inhibidor (i), '1 ' ~~' ~odifica a una protena denominada rep resor. Los genes se hallan en el umcnto codificador y son transcriptos en un solo ARNm, que por eso re' n,,, la denominacin de ARN policistrnico. Esto explica por qu las protellltll derivadas de un opern se sintetizan en cantidades equivalentes. Volviendo al oper n lac, su segmento codificad or posee tres genes - llallllldos z, y y a- , que codifican a las tres enzimas mencionadas. Es regulado i"" 1 represor lac, un complejo proteico que posee cuatJo subunidades idnCod ificador

TRANSCRIPCION DE LOS GENES DE LOS ARN PEQUEOS

14- 18. Los fac tores de t ra ns cri pci n qu e activa n a los genes
d e los ARN peque os se co nocen parcia lm e nte La mayor parte de los ARNpn son sintetizados por la A RN polimerasa II, y unos pocos por la ARN polimerasa lll. Se ha descubierto un factor de transcripcin ll amado SNAPc (por sma/1 nuclear activator protein complex) que se vincula con ambas polimerasas; posee una subunidad TBP y se une a la secuencia TATA o a la secuencia PSE de l pro motor (cap. 13-1 1). La formacin de Jos restantes ARNpn y de los ARNpno no de pende de polimerasas ni de factores de transcripcin propios, ya q ue est supeditada a la sntesis de los ARNm donde se hall an los intrones que les dan origen (cap. 13-11). Como se vio en la seccin 14-5, la sntesis de los ARNm es dirigida por la ARN polimerasa II. Respecto de l gen del ARNp c, sus m ltiples copias son transcriptas por la ARN polimerasa 111. Los factores de transcripcin de este gen an no se conocen.

TRANSCRIPCION DE LOS GENES DEL ARNxist. DEL ARNte Y DE LOS miARN

14-1 9 .. No se con oce aca bada me nte cmo se transcriben
los genes d el ARNx ist. de l ARNte y de los miARN Si bien durante el desanollo temprano del embrin femenino el gen del ARNxist se transcribe en Jos dos cromosomas X, por causas todava desconocidas ms ta'rde lo hace solamente en el cromosoma X compactado (cuer po de Barr). Respecto del gen del ARNte, existen estudios que sugieren que es trans cripto por la ARN polimerasa ll. Hasta la fecha no existen re ~r ucias so hrl' llllf:tiiN l'l'i pc il'lu de los wuo.:s J,. los miAf{N.

1,1' , 'P'IIIII 11 1111111111111111111 111111 11 1lllllltllllllllltlllllllllltlllllllllllllilllllllllllllllllllllllllrllllllllllllll i p o 1 - -- - z - - - - + - - y --+-- a ---4

Al'lNm i 111111111111 1111111 111111

ARNm lac

ll lllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllltiiiiiiiiiiiiJIIIIIIIlllllllllllllllll

J
11

J
tlnciO[IIC IOOO

J
Permeasa

J
Tronr.ncoillnon

Fig. 14-16. Representaci n del opern l ac, con el gen inhibidor i (que codi fi ca al A RNm del represor l ac), el promotor (p), el operador (o ) y el segmento codi ficador compuesto por los genes z, y y a. Estos codi fican al ARNm pol icistrnico lac que da lugar
a las prote rnas 13-galaclosidnml ,

pt riHlnsn y

I I'IIIINIIt '(' lilw HL

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

14. LA TRANSCRIPC!ON DEL ADN

265

ARN polimerasa

a--,
i :

lllllllllllllllllll/llllllllllllllllllllillllll!l831111111111 111111111111111 1 1 1llllllliiii1 1 11111UIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIllllllllllllllllllllllllltlllllllllllllllllllllllllllllllll

1 l_ - Represor lac -...!

*
o

tosa -y, por lo tanto, de la alolactosa- en el medio es espectacular. Mientras que en ausencia de lactosa la E. coli contiene en promedio slo tres mo1 6culas de P-galactosidasa, despus de la induccin del opern lac pasa a teH er unas 3.000 molculas, las cuales representan el 3% de sus protenas. Adelns esta adaptacin es muy rpida, ya que la mayora de los ARNm bacteriaIIOS, si bien se sintetizan a gran velocidad, tienen una vida media de unos po~o s minutos.
14-23. La AR N polimerasa se une al promot or cuando el represor sa le del opera(lor

Complejo sustancia inductora } (alolactosa)-represor lac

-------------------~

Fig. 14-17. Regulacin del opern lac en ausencia y en presencia de una sustancia inductora. En el primer caso el represor lac -que es un tetrmero- se une al operador e interfiere la transcripcin de los genes. La unin simultnea de la ARN polimerasa con el promotor y del represor con el operador es imposible, ya que la enzima es incapaz de unirse al promotor cuando el represor ocupa el operador. En el segundo caso la sustancia inductora se une al represor y le produce un cambio confonnacional que impide su unin con el operador. De esta manera la ARN polimerasa queda en libertad y puede activar la transcripcin de los genes. En la Escherichia coli la ARN polimerasa posee cinco subunidades: dos a. (de 40 kDa cada una), dos~ (de 160 kDa cada una) y una cr (de 95 kDa). Advirtase que una vez iniciada la transcripcin la subunidad cr se libera del complejo.

El promotor es el segmento del gen donde se coloca la ARN polimerasa se inicia la transcripcin. En la figura 14-18 se muestra la secuencia de nucletidos del promotor en el opern lac. Para la unin de la ARN polill!erasa son importantes dos sectores: 1) la secuencia conservada TATGITG, situada entre 6 y 12 nucletidos antes del sitio de comienzo de la transcripin, presente en casi todos los promotores, y 2) una secuencia necesaria lo~ a lizada a 35 nucletidos de ese sitio, importante porque si muta se inhibe la expresin del opern lac. La ARN polimerasa se une a una regin del gen de aproximadamente 80 nucletidos, correspondiente al promotor. La presencia del represor en el operador bloquea la unin de la ARN polimerasa con el promotor. As, los represores funcionan de una manera muy simple: al estar unidos al operador i1npiden la fijacin de la ARN polimerasa al promotor.
~ uando

14- 24. La tra nscripcin de l opern lac est suj eta a un cont rol positivo por part e del AMP ccli co

ticas de 40 k.Da, codificadas por el gen inhibidor (fig. 14-16). El represor lac se une al operador, que est situado cerca del comienzo del gen z (de la p-galactosidasa). Como se observa en la figura 14-17, la unin del represor lac al operador impide la sntesis del ARNm policistrnico. El represor lac se une a una secuencia de 21 pares de bases del operador que tiene regiones con simetra doble (en palndromo), de modo que algunos sectores ubicados en el lado izquierdo se encuentran tambin en el lado derecho, pero en la cadena opuesta y dispuestos "en espejo" (fig. 14-18). Se han encontrado secuencias similares en los operadores de otros operones y en los reguladores de los genes de las clulas eucariotas (seccin 14-11). Las secuencias simtricas representan sitios de reconocimiento para las distintas subunidades del represor.
14-2 2. La sustancia induct ora se une al re presor y ste sale del opera dor

La afinidad del represor por el operador se halla regulada por la sustancia inductor a, que es una molcula pequea que se liga al represor. La sustancia inductora natural d!'!l opern lac es la alolactosa, un metabolito de la lactosa (en las experiencias de laboratorio se usa el isopropiltiogalactsido o IPTG, que es un inductor ms potente). Cada subunidad del represor tiene un sitio de unin para la sustancia inductora. Esta le provoca un cambio conformacional y onton s ol r rr sor abandona al op rador. ('ono vomos, lu pr s n i n d In , uNIIIIIt">I incil! l" lorll hH \"l" po.Y ih lc In l!'!l o H I<' Ii w ,.,, dcl "1" '1" "' 1 ~ 1 c\lil't" cJ., 111 jll< 111 1< ' 11 dt !11 l lll"

El AMP cclico (AMPc) participa en la regulacin de la transcripcin de los operones. Como se ver, su concentracin en el protoplasma bacteriano c s controlada indirectamente por la glucosa. La E. coli posee una protena receptora para el AMPc llamada CAP (por ra fabolite activator protein). Se trata de una protena dimrica, que se une ni promotor del opern cuando se le asocia el AMPc. Ello hace que la ARN po limerasa tambin se una al promotor (fig. 14-18). As, la ARN polimeraII U reconoce al promotor siempre que el complejo AMPc-CAP se encuentre < "11 l. Como vemos, en el opern lac, adems del control negativo ejercido por el represor lac, existe un control positivo mediado por el complejo 1\ MPc-CAP. El control positivo se registra en la expresin de muchos otros operones, m111o Jos que intervienen en la utilizacin de la maltosa, la galactosa y la aralo inosa. Sin embargo, este control no es necesario para la expresin de los genc.:s que actan durante la utilizacin de la glucosa como alimento. Ello es im1">~ta n te porque cuando las bacterias crecen en presencia de glucosa tienen '"nos molculas de AMPc que cuando lo hacen, por ejemplo, en un medio ' k o en lactosa, que como se sabe proporciona menos energa que la glucosa. 1~ ~~ consecuencia, si la E. coli se desarrolla en presencia de glucosa y lactosa, " ' ar slo la primera. Este mecanismo le permite a la E. coli adaptarse a su < "nltl biante hbitat natural, el interior del intestino.
p
1

Fig. 14-18. Secuencia de nucletidos en el promotor y en el operador del opern lac. En el promotor aparece la secuencia conservada TATGTTG y una secuencia necesaria, cuyas mutaciones afectan la transcripcin del gen. (De R. Dickson y col.)
o

Ul tC UCCICIOICC CC II CCCIITIAAICICACifiCCI C ACIC I ITACCC A CCCClCCCIIT A C ICIITIICCttCCCCCf.CCJ.IJCT T ClCTC ~(rll CUIJIC I C I U CU.U C ICCtJTCJCCJT~ l lllltltlti i CU ICCCtiiCCCIIllll ltH ICII COI CI IIIIIIICCCICCCCICtl llnt i CUII ICCIICtrcCICC~ICIC ~ Cll ll CIIICT CC III CICCI !ICICCII C
l lod<'" ,,,1 AM I 11 C .~A I '

Socuonclo nonn fll'ln

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

14. LA T RANSCR IPCION DEL ADN

267

ARN
1
1

, ~ + Represor Trp

+
p
ADN "

,
1

~~ , ,.

,"_,,-+ Correpre sor (triptfano)

'

~,
/

------------------------------ ',
Activacin por precursor

Inhibicin por retroalimentac i n

'\
\

'

o
11

'

.,---~----------

a b e d e , ,l:llillliiiHIIIi l lllll!lllliiii!IIJ iiJHIIi iii!IIIIIIIIIIIJ!III:IIil!lliillllllillllllllllllll :lllil ll!llillli!llilllllll ! llll~ ~n llli!/ll l i ll!ll:ll!lllll

,
1

---------------------, \

ARNm Trp

1111 111 llllllll lllllll ll lllllllll llllll llllllllllll ll llllllllllllll liiiii.IIIIIIJIIIJIIJIIIIIIIIJIIIf,IIIIIJ 11 lrtllllllllll
Antranllato sintetasa

A.::...... 8 __::_. C - - -- --+

1 1

1 1

1
1

1
1 1

X ~ Y --!.! Z
1
1 1 1 1 1
1

Fosforribosil antranilato transferasa

Fosforribosll antranilato lsomerasa

Triptfano sintetasa ll

Triptfano slntetasa ll

1
1

Enzimas ARNm

1
1 1
1

Fig. 14-19. Regul"cin por represi n enzimtica de la actividad del opern Trp de la Escherichia coli. Cuando la cantidad de triptfano es suficiente, el represor Trp inhibe al operador, por lo que se sus pe nde la sntesis del ARNm po licis trnico Trp que codifica a las cinco e nzimas req ueridas para producir e l aminmlcido . .Debe agregarse q ue el represor es inducido por el propio triptfano, que cuando se halla en exceso acta como correpresor. En cambio, cuando la bacteria es privada de triptfano, ste y el represor se separan del operador y se rean uda la sntesis del ARNm Trp. (De K. Bertrand y col. )

',

__ ___Induccin ----- __ _.,

t t

ADN

....-----------

Represin

_.. /

Fig. 1420. En la inhibicin por retroalimentacin (feedback), el prod ucto final (Z) de una cadena metablica acta como inhibido r alostrico de la primera e nzima de la cadena. En la activaci n por precursor, e l primer producto de la cadena (A) acta como activador a lost rico de la ltima enzima de la cadena.

14- 25. La tran scri pcin del opern Tr p es regulada por dos meca nismos

14-2 6. Tambin e-xiste un contro l postranscr ipcional para regu la r la sntesis de molcu las

En la E. coli las cinco enzimas que se requieren para sintetizar el aminocido triptfano son codificadas por el opern Trp (fig. 14-19), cuya actividad es controlada por dos mecanismos, conocidos como represin enzimtica e interrupcin prematura de la transcripcin. Enseguida se ver que la actividad del opern Trp depende primordialmente de la concentracin del aminocido en la bacteria y que ambos mecanismos de control hacen que las cinco enzimas se produzcan slo cuando son necesarias. En la represin enzimtica la sntesis del ARNm que codifica a esas enzimas es bloqueada cuando la concentracin del triptfano - es decir, del producto de las enzimas- sobrepasa ciettos nivel es. Para ello, el represor Trp derivado del gen inhibidor ingresa en el operador e impide que la ARN polimerasa se una al promotor, lo cual detiene la transcripcin del gen y, por ende, la produccin de las e nzi mas. Debe agregarse que para que el represor ingrese en el operador se requiere que Jo active un correpresor, que en el caso del opern Trp es el propio aminocido triptfano cuando se halla en exceso. La figura 14- 19 muestra cmo obra el opern Trp cuando e l triptfano bacteriano es insuficiente. Obsrvese que el represor y el COITepresor se separan del operador, que la ARN polimerasa retorna al promotor y que el ARNm que se .~enera dirige la produccin de las cinco enzimas necesarias para sinteti zar el aminocido. Debe sealarse que mediante el mecanismo de represin enzimtica la bacteria controla tambin la sntes is de otros aminocidos y de las molculas precursoras de los cidos nucleicos. Como se dijo, la bacteria posee un mecanismo adicional para regular la actividad del opern Trp, basado en la in terrupcin prematura d e la trans cripcin. As, c uando la concentracin de triptfano supera ciertos niveles, el opern Trp intyn umpe su transcripcin y genera un ARNm corto, incapaz de producir las enzimas que se necesitan para sintetizar el aminocido. El ARNm resulta corto porque su molcula forma un bucle que pone fin a la transcripcin. Opuestamente, cuando el Trp bacteriano se halla n cantidad insuri i nlr, s hnt: l no se forma, la lrans -ript: i()n no M' int.-11 "'"1"' y se 1'\'lll'nt 1111
i\I~N JJJ ' '""'l'llo,

La induccin y la represin enzimticas proporcionan un control general del metabolismo en los procariotas, al activar o inhibir la sntesis de las enzimas bacterianas de acuerdo con las necesidades (fig. 14-20). Sin embargo, las cl ulas poseen mecanismos de regu lacin ms finos, pues contro lan la actividad, no la sntesis de las e nzimas. Los ms comunes son: 1) la inhibicin por retroa limentacin, por la cual e l producto final de un ciclo metablico acta como inhibidor alostrico de la primera enzima de la cadena, de modo que cuando se ha sintetizado una cantidad suficiente del producto toda la cadena entra en reposo y se evita la acumulacin intil de metabolitos; 2) la activacin por precursor, en la cual el primer metabolito de la va sinttica acta como activador alostr.ico de la ltima enzima de la cadena (fig. 14-20). El control gentico (por induccin o por represin) es un tipo de regulacin burdo y relativamente lento, mientras que la inhi bicin por retroalimentacin y la activacin por precursor son formas ms finas y casi instantneas de regulacin. El control gentico economiza energa, ya que evita la sntesis de enzimas innecesarias. En cambio, el control de la actividad enzimtica permite una adaptacin casi instantnea del metabolismo celular.

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11111W11 (' 1.1'1
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2C>4 :25:l6.

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1

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II VIH u tn

1111 ,

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

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El procesamiento del ARN

15

15-1. Los ARN son procesados en el ncleo

Recibe el nombre de procesamiento del ARN el conjunto de modificaciones que experimentan los transcriptos primarios para convertirse e n ARN funcionales. Vimos que alg unos transcriptos primarios contienen tramos de ARN sin ~ ignificado funcional aparente, corno Jos intrones en el ARNm y los espaciadores en el ARNr 45S. Un episodio saliente del procesamiento del ARN es la remocin de esos segmentos no utilizables. Pero los transcriptos primarios experimentan otros cambios. Dado que son diferentes en los distintos tipos de ARN, los estudiaremos separadamente en el ARNm, en los ARNr 45S y SS, en los ARNt y en los ARN pequeos.

PROCESAMIENTO DE LOS ARN MENSAJEROS

15-2. El procesamiento de los ARN m comprende varios cambios

El procesamiento del ARNm comprende la remocin de Jos intrones y el agregado de dos estructuras, llamadas cap y poli A, la primera en el extremo 5' y la segunda en el extremo 3' de la molcula (fig. 15-1). Tambi n se metilan algunas de sus adeninas. Estas modificac iones son necesarias para que los ARNrn puedan salir del ncleo y funcionar en el citosol.
15- 3. En el extremo 5' del ARNm se agrega un nucletido met ilado llamado cap

Fig. 15-1. Esquema de los genes que codifican ARN mensajeros. Se muestran los segmentos correspondientes al regulador, el promotor y el codificador, este ltimo con sus exones e intrones. Obsrvense los cambios que experimenta el ARNm al cabo de l procesamiento del transcripto primario. Intrn 2 Exn 3

Al nuclesido trifosfato situado en el extremo 5' del ARNm naciente se le une un nucletido metilado, la 7-metilguanosina. Recibe el nombre de cap (por capuchn) y se agrega al extremo 5' mediante los siguientes pasos (fig. 15-2):
ADN
"

n2
1 .. ranscnpc1on

Transcripto primario

Exn 1

Intrn 1

Exn 2
Procesam1 ento

Intrn 2

Exn 3

1 .

AA Nm

ca

Exn 1

Exn 2

Exn 3

Poli A

Tradlcci6n
Prchthu r II.N ............ . f .( )C111

270

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

15. EL PROCESAMIENTO DEL ARN

271

H,N~N>
H N_..l_NjlN 2
HO OH

TH3

Un1on . - - - - tnfosfato 5'-5'

-------.

Cadena de

ARN
5'
cap

~~CH 5' -0-P-0-P-0-P-0-C~H 11 11 11 5' 8ASE1 2 2 O

1 o1 o1 o-

o
7-meti\guanosina

3'

-o-P=O
o
1 1

O 1

O CH3

5'~0~BASE2
F ig. 15-2. Formacin y estructura qumica del cap (capuchn) en el extremo S' del ARNm. Puede observarse que la 7-meti\guanosina se liga al primer nuclctido del ARNm mediante una unin 5'-5' tri fosfato.

5'
cap

o 1 -o-P=O 1 o

H.
OH

ARN adicional
AON ::::::::::::::~-=======~ A~ A~ T~A ~A ~ A~~~==========~--==============~~======

ARN polimerasa 117

En primer trmino, una enzima especfica incorpora una guanosina tri fosfato (GTP) al extremo 5' del transcripto. Esta reaccin difiere de las generadas por la ARN polimerasa IJ en tres aspectos: 1) el nucletido se agrega en el extremo 5' de la cadena y no en el extremo 3'; 2) entre los nucletidos se establece una unin trifosfato y no una unin fosfodister (uno de los P es aportado por el GTP y los otros dos por el nuclesido trifosfato del ARNm); 3) la unin trifosfato liga el C5' de una pentosa con el C5' de otra, y no un C5' con un C3' como en la sntesis de los cidos nucleicos. Adems, al quedar el nucletido del cap invertido, el extremo 5' del ARNm se convierte en un segundo extremo 3'. A continuacin, otra enzima, la metiltransferasa, toma dos grupos metilo de una molcula donante -la S-adenosilmetionina- y los transfiere al ARNm, uno a la guanina del cap -se forma as la 7-metilguanosina- y el otro al que ha pasado a ser, luego de l.a incorporacin de la guanosina, el segundo nucletido del ARN mensajero. Debe sealarse que el cap se une al transcripto primario apenas ste comienza a sintetizarse -cuando su cadena no alcanza los 30 nucletidos-, por lo que su incorporacin no es postranscripcional sino cotranscripcional. El cap evita la degradacin del extremo 5' del ARNm por fosfatasas o nucleasas y es requerido durante la remocin de los intrones (seccin 15-5). Tambin es necesario para conectar el ARNm al ribosoma en el comienzo de la traduccin (cap. 16-12). 15- 4. El ext remo 3' del ARN m se poliaden ila Lleva el nombre de poliadenilacin el agregado de una secuencia de aproximadamente 250 adeninas -llamada poli A- en el extremo 3' del ARNm. Dado que en el extremo 3' de los genes que codifican ARNm no existe una secuencia de. terminacin de 250 timinas seguidas que genere la poli A, sta se suma al ARNm de la siguiente manera (fig. 15-3): Antes que la ARN polimerasa U alcance la secuencia de termin acin d 1 gen, varios factores especfi cos reconocen en el ITan s Tipto printa rio una s cucm;ia ll amada seal de poliadcnilad 6n, l"onn acl:i po r ls 1111<' 1<' !i dos
i\i\ 11/\i\i\ (coa p . 1 1 '/) , 1,11 ,' . i'n'l>>l<" , S> ' 11 .'1 11 1!111

Seal de poliadenilacin

-Direccin de la transcripcin---+

yadenylation ~pecificity factor), CSTF (por cleavage stimulation factor), CFI y CFII (por cleavage factor). Uno de ellos -no se sabe cul- corta el i\RNm unos 20 nucletidos despus de la seal de poliadenilacin y el trans~ ripto primario se desconecta del ADN. Llamativamente, el resto del gen se transcribe hasta la secuencia de terminacin (como se seal en el captulo 13-7, en los genes de los ARNm esta sccuencia no se conoce). El tramo adicional de ARNrn que resulta de la conlinuacin de la transcripcin no tarda en ser degradado por fosfatasas y nuleasas pues su extremo 5' carece de cap. Volviendo al transcripto primario, una enzima llamada poli A polimerasa agrega las 250 adeninas en su extremo 3', de a una por vez. Para ello se requiere la presencia del CPSP y de otro factor, el PABII (por poli A-binding wotein). A diferencia de la ARN polimerasa II, la poli A polimerasa no necesita un molde de ADN para realizar su trabajo. La poli A es necesaria para proteger el extremo 3' del ARNm de la degradacin enzimtica y ayuda al ARNm a salir del ncleo. El extremo 3' de los ARNm de las histonas no se poliadenila. En cambio, dcsmTolla una estructura que tambin protege a la molcula, consistente en 11 1 1a secuencia corta de nucletidos que se pliega y forma un bucle (fig. 15-4).
15-5. La molcula de los ARNm experimenta co rte s y empalmes

Fig. 15-3. Poliadenilacin del extremo 3' del ARNm antes de que termine la transcripcin. Ntese que el extremo 5' del ARNm ya posee el cap.

La remocin de los intrones del transcripto primario se cumple en dos pasos: en el p.rimero, el ARNm es cortado entre los intrones y los exones; en 1 seg undo, Jos intrones son expulsados y Jos exones se empalman entre s. Antes de analizar estos pasos haremos una breve descripcin de los agentes ' sponsables de su ejecucin y de las seales que deben reconocer en el trans<" 1ipto primario. Los agentes responsables de los cortes y empalmes en el ARNm son las J{ NJ'm mencionadas en el captulo 13-2. Cada una de estas ribonucleopro-

Jlig. 15-4. Forma in d -- un

hl w k 1" 11 1' 1 e.~ ll t' lllll

e 'I'SJI f l'" '

, /, r/\ '(1 .' :<" " ' " ' ' '" '

hl

;\I ~N 111

dt 1 1 111. ldr.lt 1ll t\fl

272

FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

15. EL PROCESAMIENTO DEL ARN

273

Fig. 15-5. Esquema de una de las ribonucleoprotefnas pequeas nucleares (RNPpn), con su ARN pequeo nuclear rico en uridinas unido a varias protefnas.

tenas nucleares posee un ARNpn rico en uridinas -de 250 nucletidos o menos- y diversas protenas (fig. 15-5). Debe se.alarse que la actividad enzimtica de las RNPpn depende del ARNpn, no de las protenas (como se vio en el captulo 2-12, los ARN con propiedades catalticas se llaman ribozimas). Existen varias RNPpn. Son diferentes no slo en su composicin sino tambin en sus funciones, algunas ajenas a los cortes y los empalmes de los transcriptos primarios. Las RNPpn que participan en esos cortes y empalmes son las llamadas Ul, U2, U4, US y U6 (U por ser ricas en uridinas), las cuales concurren al sector del transcripto primario que va a ser procesado y forman un complejo macromolecular denominado espliceosoma (por splicing, empalme). Entre las RNPpn que no participan en los cortes y empalmes de los transcriptos primarios se halla la U7, cuya presencia es necesaria para que se genere el bucle que protege al extremo 3' de los ARNm de las histonas (seccin 15-4). El transcripto primario contiene una serie de seales que marcan dnde debe cortarse su molcula (figs. 15-1 y 15-6). As, en el lmite entre el extremo 3' de los exones y el extremo 5' de los intrones aparece la secuencia GIGU, en la que el dinucletido GU seala el comienzo del intrn. En el otro lmite, es decir, entre el extremo 3' de los intrones y el extremo 5' de los exones, aparece la secuencia AGIO, en la que el dinucletido AG marca la terminacin del intrn. Dado que dentro y fuera de los intrones suele haber otros dinucletidos GU y AG, por s solos no sirven como seales y deben ser complementados por marcas adicionales. As, cerca del extremo 3' del intrn existe un tramo rico en pirimidinas y, algo ms lejos, los nucletidos YNYURAY, en el que y representa a una pirimidina, R a una purina y N a cualquiera de los cuatro nucletidos. La U y la A se presentan en forma constante. Esta A se llama punto de r amificacin y, como se ver, desempea un papel central en la remocin de los intrones. La eliminacin de los intrones y el empalme de los exones se produce en dos etapas (fig. 15-7): En la primera, la Ul se combina con el extremo 5' del intrn y la U2 con el tramo de ARN que contiene el punto de ramificacin. Esta ltima combinacin depende del tramo rico en pirimidinas y consume energa, que es tomada del ATP. La Ul corta al ARN entre el extremo 3' del exn y el GU del extremo 5' del intrn. Despus del corte, el intrn se dobla sobre s mismo y forma un lazo. Ello se debe a que la U6 -asistida por la U4-- se combina con el extremo 5' (libre) del intrn e induce a laG de ese extremo a ligarse con la A del punto de ramificacin, previo contacto de la U6 y la U4 con la U2. La U6 caTramo de pirimidinas Punto de ramificcin

5'-f.__ _ _ _.;:;; G,_;J G ::..__ _ _-.J... 3'

Exn 1 Exn 2

Punto de corte 3'

Fig. 15-6. Cortas secuencias

de nuclctidos en los introncs

y cxoncs, responsables de los t'tii"U ~l y t' lll pn lnH.:s, (s, ~i~ in,L:)
1111 1'[ 11111 1/h

YNYl ii1AY
1M o \11 1
11111 1 '111

(H),

3 '!5'
AC (

tuliza la formacin de una unin fosfodister inusual, ya que el C5' de laG se liga al C3' de la A sino al C2'. Dado que la A retiene en sus flancos a las dos uniones fosfodister origill llies, presenta tres de esas uniones y no dos. Por eso se le ha dado el nomIII'C de punto de ramificacin. Cuando esta etapa culmina, de un lado queda ,. primer exn con su extremo 3' libre y del otro un lazo compuesto por el inll'{>n y el exn siguiente (fig. 15-7). La segunda etapa es dirigida por la U5 y tambin requiere energa. Dicha 1 ibo nucleoprotena, luego de combinarse con la AG del extremo 3' del intrn, 1 ,' corta en el punto en que se une con el exn y empalma a este ltimo con t"l cxn separado en la etapa anterior. El intrn removido, que persiste como 1111 lazo, es finalmente digerido. Recientemente se han descubierto intrones que se eliminan en forma silllilar pero mediante otras RNPpn (excepto la U5, que participa). Estos in11 ones carecen del tramo rico en pirimidinas y en sus extremos 5' y 3' conli tnen los dinucletidos AU y AC, en lugar de los GU y AG de los intrones , ., >n vencionales. Las RNPpn que reemplazan a las Ul, U2, U4 y U6 se denominan Ull , 1112, U4atac y U6atac, respectivamente (el subndice "atac" hace referencia a I11H dinucletidos AT yAC en el ADN, que cmresponden a los dinucletidos 1\ IJ yAC en el ARN). Para que las RNPpn den lugar a los cortes y empalmes se necesita la preilt' llcia del cap en el extremo 5' del transcripto primario. En cambio, puesto , 111 estas reacciones pueden producirse sin que se haya completado la snteIN del transcripto, no exigen la poliadenilacin de su extremo 3'. lin algunos ARNm los cortes y empalmes se completan en segundos, en ltt lllll que en otros tienen una duracin de ms de 20 minutos. Debe sealar!<' que el ARNm no puede atravesar los poros de la carioteca y salir al citol' lii NII Ia si no fueron removidos todos sus intrones. 1Jna de las enfermedades autoinmunes que afectan al hombre -el lupus "' ltt~mnto.w- se ge nera por la prod ucc in de anticuerpos contra varias prolt 111 111. do las I~N l'p11 d 1 spl i, ,oil lll li l.
1111

Fig.15-7. Remocin de un intrn y empalme de Jos exones vecinos por accin de las RNPpn UJ, U2, U4, US y U6.

1lplo

11111 11111 11 ,

274

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

15. EL PROCESAM IENTO DEL ARN

275

15- 6. Al gunas adeninas del ARN m se metilan

Antes de abandonar el ncleo, la mayora de los ARNm se metilan. Los grupos metilo se incorporan al N6' de algunas adeninas (el 0,1 % de stas). Dado que este tipo de metilacin se produce exclusivamente en los exones, es posible que los grupos metilo tengan una funcin protectora de los segmentos funcionales del transcripto primario.

,en de la o ;EIIcitonina y el eGRP

5'
A

eatcitonina

3'
E

Transcripcin

~
franscripto primario

5'

3'

REGULAC/ON DEL PROCESAMIENTO DE LOS ARN MENSAJEROS

15-7. El procesamiento de los ARNm es reg ulado en varios niveles

En el captulo 14-6 hemos dicho que el control de la transcripcin de los genes, operado por medio del promotor y los reguladores, es el mecanismo ms importante que utiliza la clula para determinar qu tipos de protenas debe producir y en qu cantidades. No obstante, para controlar la produccin de algunas protenas existen mecanismos accesorios - postranscripcionalesde no menor importancia. Cronolgicamente, los primeros se cumplen en el interior del ncleo, en algunos casos a travs de la regulacin del procesamiento del transcripto primario y en otros mediante el control de la salida del ARNm al citoplasma. De estos mecanismos nos ocuparemos de inmediato, y dejaremos para el prximo captulo el anlisis de los procesos regulatorios posteriores a dicha salida, es decir, los que se producen a partir del momento en que los ARNm arriban al citosol. Corte y poliadenilacin diferencia l del extremo 3' del transcripto primario. Algunos genes, por ejemplo, los que codifican anticuerpos en los linfocitos B, generan un transcripto primario que puede dar lugar - alternativamente- a dos protenas semejantes aunque una un poco ms larga que la otra. Ello se debe a que un factor regulatorio (no conocido) determ ina que el corte del ARN en el extremo 3' del transcripto primario - y por ende, el agregado de la poli A- se realice, de acuerdo con las necesidades del organismo, en dos lugares diferentes de la molcula, lo cual gene ra dos ARNm de distinta longitud. En el ejemplo citado, uno de los ARNm da lugar a una protena que se segrega (anticuerpo) y el otro a una protena de mayor longitud, cuya parte suplementaria sirve para anclar el anticuerpo a la membrana plasm<itica del linfocito B, en la que cumple funciones de receptor (cap. 7-13). Cor tes y empalmes en lugares alternativos del transcripto pr imario. Los cortes en el transcripto primario deben ser realizados con absoluta precisin, pues bastara que el punto de incisin se corriera un solo nucletido para que se alteren los codones del ARNm y se inutilice su mensaje. Por otro lado, la presencia de intrones convierte al transcripto primario en una molcula bastante verstil, que puede ser cortada y empalmada de diferentes maneras y producir ARNm distintos, es decir, varias clases de protenas. As, puede ocurrir que uno o ms exones sean removidos (con el resultado de ARNm ms cortos), que uno o ms intrones no sean excluidos (y queden como partes de los ARNm definitivos) o que ambos hechos se combinen. Los casos de cortes y empalmes alternativos son muy frecuentes, ya que se estima que ms del 55% de los transcriptos primarios son cortados y empalmados de diferentes maneras. Recientemente se han descubierto seis protenas. J);uu:lcl:ts ASF (por alternative spficin[! j'actors), qu iutl:rvi 'JI ' JI t:JI la sl'lcrri(lu ,,. le 1 :: lt1m\ s d~: ror ll alhntalivos , f)~ hido a qu1 s u:; dlllliI\io~ '-ltlll 11111 1 lll , ''' 11 ~' y 1 11 1~ ininn:. ,

EN LA TIROIDES ARNm

s----1
A

r
ealcitonina D eatcitonina

Procesamiento

~ 3'

~
5' - 1
A

EN El HIPOTALAMO

1
B
e

eGRP E

~3'

Traduccin

+
1

Traduccin

Prehormonas

H2N - - l

~COOH H2N ~eOOH

Fig. 15-S. Proce samiento alternativo del rranscripto primario del gen de la calcitonina y la pro1ena CGRP. Se sintetiza uno u otro producto seg n el tipo celular implicado. (De S. Amara y col.)

se conocen tambin como protenas SR (la figura 2-25 informa que esos aminocidos se identifican con las letras S y R, respectivamente). Un fenmeno singular se observa en las clu las para foli culares de la tiroides y en un tipo de neuronas del hipotlamo, puesto que ambas producen, entre otros, un transcripto primario prcticamente idntico (fig. 15-8). No obstante, segn la clula, los lugares del transcripto en que se producen los cortes y empalmes varan, de modo que en ambas clulas determinados exones son removidos, pero no los mismos. Como resu ltado, en las clulas parafoliculares de la tiroides se produce el ARNm de la hormona calcitonina y en las neuronas hipotalmicas el ARNm de la protena CGRP (por calcitonin generelated product) . Contr ol de la salida d e los ARNm al citoplasma. Se ha postulado, aunque no probado, que ciertos ARNm no pasan al citoplasma porque son degradados selectivamente en el ncleo, o porque - selectivamente tambin- se halla impedida su salida por los poros de la envoltura nuclear. Este mecanismo regulatorio se producira en las clulas cuyos citoplasmas finalmente no requieren de tales ARNm a pesar de haberse sintetizado.

PROCESAMIENTO DEL ARN RIBOSOMICO 45S

15- 8. El procesamiento del t ranscripto primario del ARNr 455 es diferente del experi mentado por los ARNm

El transcripto primario del ARNr 455 no forma un cap en su extremo 5' ni poliadenila su extremo 3' . Su procesamiento -ilustrado en la fi gura ! 5-9tiene lugar en el nuclolo y comienza con una serie ordenada de cortes para eliminar las secuencias espaciadoras y hacer que los ARNr 28S, 18S y 5,8S queden como unidades independientes. El origen de estos ARNr a partir de un mismo transcripto primario asegura su produccin equitativa. Las secuencias espaciadoras del transcripto primario son digeridas por enzimas apenas se separan de las secuencias utilizables. Debe sealarse que las secuencias de los futuros ARNr 28S, 18S y 5,85 se mclihm a Jites el sn rortndn I transcripto primario. Por ejemplo, 43 grupos llll'tilo se
11111'11 11

,., l 11 1' 1" . "

11

lnN 1 il>nsas ele nl rns 1:111tns IHicktidos dl'l

276

FUNDAMENTOS DE BlOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

15. EL PROCESAMIENTO DEL ARN

277

3'

~
20S

45S

l
5,8S

Fig. 15-9. Procesamiento del ARNr 45S, que da luga( a los ARNr 18S. 5,8S y 28S.

l
18S

32S

!
28S

ARNr 18S. Algo semejante ocurre con el ARNr 28S, al que se le unen 74 grupos metilo. Igual que la metilacin del ARNm (seccin lS-6), es posible que en el ARNr 4SS los grupos metilo tengan por funcin proteger a los sectores utilizables del transcripto primario. El procesamiento del ARNr 4SS incluye la formacin de las dos subunidades del ribosoma -la mayor y la menor- , cuya composicin se describe en el captulo 16-9 (fig. 16-S). Para ello, los ARNr 28S, l8S y 5,8S (ms el ARNr SS) se ensamblan con varias protenas. En este proceso intervienen tres RNPpno (cap. 13-2) llamadas U3, U8 y U22. Se sabe que algunas protenas ribosmicas se asocian al ARNr 45S mientras ste se sinteliza, es decir, antes de ser cortado y de ser separados sus tres componentes. Los ARNr desarrollan asas en varios puntos de sus molculas (fig. IS-11). Ello asegura el establecimiento de sus configuraciones tridimensionales normales, lo cual es imprescindible para que las protenas ribosmicas se ensamblen correctamente. Las asas se forman porque los ARNr contienen secuencias de nucletidos complementarios que se aparean entre s (fig. 1S-ll). Debe agregarse que los tramos apareados forman dobles hlices similares a la del ADN. Finalmente, un grupo especial de RNPpno hace que algunas A, C, G y U se conviet1an en nucletidos inusuales. As, varias A, C y G se metilan ----es decir, se transforman en mA, mC y mG- y una parte de las U se convierten en seudouridinas ( IJI). La enorme cantidad de ribosomas que necesita la clula es abastecida hol gadamente por las 200 copias del gen del ARNr 4SS (y por las 2.000 copias del gen del ARNr SS). Adems, la sntesis del ARNr 4SS se realiza a una ve locidad constante, lo que sugiere la existencia de una baja regulacin transcripcional. En efecto, se ha comprobado que el nmero de ribosomas que la clula construye es regulado principalmente mediante el control del procesamiento del ARNr 4SS.
15- 9. La sntesis y el procesamiento del ARNr 455 t ienen lugar en el nuclolo

.') La regin granular, ubicada en la periferia, en la que se encuentran

1 "'' N 11bunidades de los ribosomas en distintos estadios de procesamiento. Es111

I<'P,n -y por lo tanto el nuclolo- no se halla envuelta por membrana

ulr u na.
1 'omo se indic en el captulo 13-8, las 200 copias del gen del ARNr 45S ' 11111 distribuidas en las constricciones secundarias de los cromosomas 13, 1 l. 15. 21 y 22 (figs. 12-1S y 12-16). Dada la condicin diploide de los cro'""',olnas, hay lO de esas constricciones, por lo que existen en promedio 20 ' '1 1111s del gen en cada una. Los tramos de ADN en que se hallan esos genes ' 1111111 an como asas de las constricciones secundarias y en torno de ellas se 111111ruye el nuclolo. Cada asa -y, por consiguiente, las copias del gen con'' 1111las en ella- representa una unidad llamada organizador nucleolar. El '""'o1no del nuclolo vara con la necesidad de la clula de generar ribosomas. 1 ' vnriacin depende de la regin granular, que se expande o se retrae segn ' 1 ' '''no con que se procesan las subunidades ribosmicas. < '11ando estas subunidades estn por terminar su procesamiento, abandol nuclolo y pasan al citosol. Salen del ncleo por los poros de la cario'""' o ' ' ' 11 Como el dimetro de las subunidades supera el dimetro de Jos poros, tl1 " ' l"'"lucirse un cambio conformacional en una de las dos estructuras -o ' 11 '" ""liS- para que el pasaje pueda concretarse. 1 1 pt oc samienlo de las sllhllttidadcs ribosmicas se completa en el cito11 1 11 ' Hilo vila la fotoiiiH in11 oh 1 ihosomas omplelos en el nudcoplasma
1 l t ur o de qut i ll ' '-l ltll ! lO 1 ' ' l'1td1 f tllPI ~ 11 tl irHt tin 1 ft-ltiit' kt),

Fig. 1510. Micrografa e lectrnica de un nuclolo con sus porciones fibrilar (j) y granular (g). La flecha seala materiales que salen al citoplasma a travs de un poro nuclear. 70.000x. (Cortesa de O. Miller.)

Tanto la sntesis como el procesamiento del ARNr 45S se producen en el nuclolo, cuyo estudio .ultramicroscpico muestra una estructura caracterstica, con dos regiones perfectamente distinguibles (fig. 15-10): 1) La regin fibrilar, ubicada en la parte central, donde se sintetiza d ARNr 4SS y se producen los primeros pasos de su procesamiento. onlien las 200 copias del gen del ARNr 45S, molculas de esl ARNr. los faclln,~ URF y Sl.l,la ARN polinll'I IIY ll l.parll' d las RNPmo, 1'1(' , /\ Vl 'l'l' S tiiH!'Sitn
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278

FUND AMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECU LAR

15. E L PROCESAM IENTO DEL ARN

279

PROCESAMIENTO DE LOS ARN PEQUEOS

1!>-12. Los ARN pequeos se asocian con protenas

Una vez que los ARNpn terminan de sintetizarse, los nucletidos compleII IL:ntarios de sus propias molculas se aparean entre s (fig. 15-5). Luego los t\ RNpn salen al citosol, se trimetilan en el extremo 5' y se combinan con un ,omplejo de siete protenas denominadas Sm (por small protein), que tiene lorma de anillo y es igual para todos los ARNpn. Finalmente, los ARNpn unidos a las S m retornan al ncleo y se asocian con otras protenas, esta vez eswcficas para cada tipo de ARNpn. Debe sealarse que lo descrito hasta aqu V 11le slo para los ARNpn que intervienen en los cortes y empalmes de los t\ RNm, pues del procesamiento de los restantes se conoce poco; por ejemplo, que la trimetilacin del extremo 5' de algunos de estos ARNpn no ocu1Te en ,. citosol sino en el ncleo. Antes de sa lir del ncleo, el ARNpc experimenta los siguie ntes cambios: 1) varias secuencias complementarias de su molcula se aparean entre s; ') se asocia con seis protenas diferentes, lo que da lugar al complejo nucleol" oteico P RS (cap. 7- 12). En la figura 7 -1 0 se indican los pesos moleculares tlt las seis protenas y se muestra cmo se asocian con el ARNpc y entre s.

Fig. 15- 11. Forma como se apare an las secuencias complementari as en los ARN ri bosmicos.

PROCESAMIENTO DEL ARNxist. DEL ARNte Y DE LOS miARN

1'>- 13. El AR Nxist y el ARN te permanecen en el ncleo y los miARN salen al cit oplasma

PROCESAMIENTO DEL ARN RIBOSOMICO 55

15-1o. El ARNr 55 ingresa en el nuclol o

Una vez sintetizado, el ARNr SS ingresa en el nuclolo y se incorpora a la subunidad 1ibosmica mayor. No se sabe por qu este ARNr se sintetiza en un lu aar distinto del de los restantes ARNr. C~mo los otros ARN ribosmicos, el ARNr SS establece su configuracin tridimensional merced a apareamientos de secue ncias complementarias de su propia molcula (fi g. 15-11 ).

PROCESAM IENTO DE LOS ARN DE TRANSFERENCIA

15- 11 . El procesamiento de los ARNt incluye modif icaciones en algunos de sus nuclet idos

Los ARNt contienen entre 74 y 95 nucletidos. Su procesamiento incluye la remocin de un intrn, que se elimina por un mecanismo diferente del utilizado por los ARNm, pues prescinde del espliceosoma. Adems, en cada tipo de ARNt un grupo determinado de nucletidos experimentan cambios qumicos (fi g. 16-3). As, algunas U son transformadas en seudouridinas ( IJI), otras metiladas a ribotimidinas y otras reducidas a dihidrouridinas (D ). Tambin es comn que algunas A, C y G sean metiladas (mA, mC y mG) y que una o ms A sean convertidas en inosinas (/). Como muestran las figuras 16-3 y 16-4, los ARNt contienen secuencias d nucletidos complementarios que se aparean entre s, lo que hace que adquieran la forma de una hoja de trbol y luego la forma de la letra L. El procesamiento culmina con el reemplazo del trinud 6t ido A/\A - prc sente en el extremo 3' d~ lo~ tran~t.:riptos prilnarios dr todos los 1\R Nt P"' l'i trimu:k!idu ('('A . :,, ('1 r: pftulo 11>1>''" vul'" '" " 1 11 i "IJ " " ' '" " 'II d\' (''11('

El ARNxist permanece en el ncleo, ya que como se dijo en el captulo 11 - 12, se une al cromosoma X compactado de las clulas de la mujer (cuer1'" de Barr). IJ ARNte tambin permanece en el ncleo. Uno de los pasos salientes de '" procesamiento Jo asocia con el grupo de protenas que participan en la forlll:tcin de la telomerasa. l'or su parte, los miARN se generan a partir de transcriptos primarios de 11l1 dedor de 70 nucletidos que salen al citoplasma. Cada transcripto incluy, un par de secuencias complementarias -stas derivan de las repeticiones 111 v rtidas del gen (cap. 13-1 2)- , las cuales se aparean entre s y producen 111 t\RN doble con forma de horquilla (fig. 15-12). Finalmente, elmiARN de1 l t~lil i vo - que posee 21 nucletidos y como muestra la figura 15-1 2 es una ""'lcula de ARN simple- se desprende de la horquilla luego de ser escinoltdo por la endonucleasa citoplasmtica Dicer (por el verbo ingls to dice, '1 " (' significa "cortar en cubos de tamao unifonn e"). En el captulo 23-44 se lttiHiizan las probables fu nciones de los miARN en las clulas humanas.

Fig. 15-12. Forma de los ARI '\1 precurso res de los miARN.

e n

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La traduccin del ARNm

Sntesis de protenas

16

1f- 1. Los AR Nt de sempean un papel cen tral en la sn tesis de las protenas

285: 1685.

La sntesis proteica tiene lugar en el ribosoma, que se arma en el citosol partir de dos subunidades ribonucleoproteicas provenientes del nuclolo. ,11 d ribosoma, el ARN mensajero (ARNm) se traduce en una protena, pal1 1.1 lo cual se requiere tambin la intervenc in de los ARN de transferencia tARNt). El trabajo de los ARNt consi ste en tomar a los aminocidos del cit .. ~o l y conducirlos al ribosoma en el orden marcado por los nucletidos del RNm, que son los moldes del sistema. 1,a sntesis de una protena comienza con la unin entre s de dos aminolhidos y contina por el agregado de nuevos aminocidos --de a uno por V< ' l . - en uno de los extremos de la cadena proteica. omo se vio en el captulo 13-4, la clave de la traduccin reside en el ,.,digo gentico, compues to por combinaciones de tres nucletidos conse1 ul ivos - o tripletes- en el ARNm. Los distintos tripletes se relacionan esl"l'ff'ic amente con Jos 20 tipos de aminocidos usados en la sntesis de las l""l cnas. ( 'ada triplete constituye un codn; existen en total 64 codones, 61 de los 1 11 1 d<:s sirven para cifrar ami nocidos y 3 para marcar el cese de la traduccin. lid .;antidad deriva de una relacin matemtica simple: los cuatro nucleti.l us (A, U, C y G) se combinan de a tres, por lo que pueden generarse 64 (4 3) 1""1hinaciones. El cdi go gentico, con los 64 tripletes y los aminocidos 1' 1 1 t:specifican, puede consultarse en la figura 13-4. l)ado que ex isten ms codones (61) que tipos de ami nocidos (20), casi 1 1" , >s pueden ser reconocidos por ms de un codn, por lo que algunos triple1 1 . Hc tan como "sinnimos". Solamente el triptfano y la metionina --dos ,, . los aminocidos menos frecu entes en las protenas- son codificados, cadH 11110, por un solo codn. ( ; neralmente los codones que representan a un mismo aminocido se pa~~ < '<'11 t:ntre s y es frecuente que difieran solamente en el tercer nucletido 11 '1' . 13-4). La baja especificidad de este nucletido ha llevado a decir que ii L ' una "degeneracin" en la tercera base de la mayora de los codones. l1 J {,sla agregar que el nmero de codones en el ARNm determina la longi'"d ,, . la prote na.
11

1t. /. l xi l ln 31 li pos di f-rent es de ARNt

1 llli 11111! nlla s inh'rlll<'dim ias nln: los ;odon s dd ARN111 y los amino;11 dur.. <litio i\I{NI, lo, < 'll iol n; il<'lll'llllll duntiuio qu se li ga !' ~ pld l'i C': IIII l' ll
11

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282

FUNDAMENTOS DE BJOLOG!A CELUL AR Y MOLECULAR

16. LA TRA DUCC tON DEL ARNm

283
3'

Fig. 16-1. Los dibujos ilustran cuatro de los seis codones que codifican al aminocido le uc ina (Leu). Los dos de la izquierda se aparean con
un mi smo anticodn, igual

Le u

que el par de codones de la derecha. Ello es posible porque la tercera base de los cadones suele ser " adaptable", es decir. puede establecer
uniones con una base no com-

5' ~ 3'

cu c

GAG

uu uu
Le u Le u Le u

5'

"'G

AUG

UGA

'-----v------'

AAAA

cap

GAG

5' ~ 3'

c uu

OAU CUA

GA U CU G

Protena
1G-4. Los am inocidos se ligan por medio de un iones peptid icas
Fig. 16-2. Esquema de un ARN mensajero, con sus distintos componentes.

ARNm

5' ~ 3 '

5'~ 3'

plemcnturia.

con el cod n aprop iado. El segundo dominio consta de una combinacin de tres nucletidos - llamada anticodn- q ue es complementaria de la delcodn (fig. 16-1). Cada tipo de ARN t ll eva an tepuesto e l nombre del aminocido que transporta. Por ejemplo , leucinil-ARNt para el am inoacii-ARt :t de la Jeucina, li sinii-ARNt para el de la li si na, fenilalanil-ARNt para el de la fe nila lan ina, metionil-ARNt para el de la melionina, etctera. Por su lado, el ARNt unido al aminoitcido co mpatible con l se designa aminoacil-ARNt"", en el que ''AA" corresponde a la sigla del aminocido. Por ejemplo, leucin il-ARNt'-c", lisinii-ARN t'-Y', fenilalanii -ARNtP11" , metionilAR Nt~k , etctera. Si bien tericamente pueden ex istir 61 tipos de ARNt diferentes, slo hay 31 . E l d ficil se resuelve por la capacidad que lienen alg unos ARNI de reconocer a ms de un codlin. Lo logran porq ue sus anticodones suelen poseer la primera base "adaptable", es dec ir, que puede unirse con una base no complementaria s ituada en la tercera pos ici n del codn (recurdese la "degeneracilin" de esta base). As, la G en la primera posicin del anticodlin puede aparearse tanto con una C - es Jo habitua l - corno con una U del codn (fig. 16-1). Similarmente, la U en la primera posicin del anticodn puede hacerlo con una A -es Jo habitua l - o con una G. Por otra parte, la inosi na (I) -una de las bases inusuales mencionadas en el captulo 15-11 - se encuentra en la primera posic i n del anticodn en varios ARNt y es capaz de aparearse con cualquier base (excepto con una G) localizada en la tercera posicin del codn.

L a unitJ de los ami nocidos entre s para construir una protena se produce de modo que el grupo carboxilo de un aminocido se combina con el : ~:upo ami no del aminocido sig uiente, con prdida de una molcula de H 2 0 (1 1 g. 2-26). En e l captulo 2-8 vi mos que esa combinacin se llama unin pcptdica. Cualquiera q ue sea su longitud, la protena mantiene el carcter anfotride los aminocidos aislados. ya que contiene un grupo am i no li bre en uno d sus extremos y un grupo carboxilo en el o tro extremo. La protena se sinId iza a partir del extremo que lleva el grupo arnino libre. Ello se conespon' 1<' con la direccin 5' - >3' usada para la traduccin del ARNm, la misma con que el ADN se transcribe (fig. 16-9).
1'"

Antes de describir los procesos que dan lugar a la sntesis de las protenas, ll ll:tilzaremos cmo arriban los ARNm al citoplasma, qu configuracin po~r .-n los ARNt y cul es la estructura de los ribosomas.

1li-5. Los ARNm arribados a l c itoplasma se conectan con ribosomas

Como vimos en el captulo 14-5, en el ncleo los transcriptos primarios de ltts ARNm se hallan combinados con di versas protenas, con las que forman hes ribonucleoprotenas heterogneas nucleares o RN.Phn. No obstante mue l1;s de esas protenas se desprenden de los ARNm a medida que stos ~ban .J.,uan el ncleo. Los ARNm salen hacia el citopl asma por los poros de la envoltura nuclear. "cn el citosol, cada ARNm se combina con nuevas protenas y con riboso" "'s, lo que lo habilita para ejercer su fu ncin codificadora durante la snte,,.: proteica. Entre las protenas se encuentra la llamada CBP (por cap bin./,,g protein), que se combina con el cap en el extremo 5' del ARNm. Su pawl se analizar en la seccin 16- 12. Alg unos ARNm se localizan en sitios prefijados en e l citoplasma, de moque las protenas que codifican se sinteti zan y se concentran en esos sitios. l lu cjemplo es el ARN m de la actina, q ue se sita en la zona petifrica de las ' lulas epiteliales, donde se deposita la mayor parte de la actina (cap. 5-20). 1~1 extremo 5' de los ARNm contiene una secuencia de alrededor de 10 nu' l_'l idos previa al codn de iniciacin --entre ste y el cap- que, como es l.,r. , o, no se traduce (flg. 16-2). En algunos ARNm esta secuencia participa ' " ,. control de la traduccin y en otros regula la estabilidad del ARNrn es .J,,ir, su supervivencia. '
1.,

16-3. El codn de iniciacin es el triplete AUG

El primer codn que se traduce en los ARNm es siempre el triple te AUG, cuya in formacin codifica al am inocido metionina (figs. 13-4 y 16-2). Por Jo tanto, este codn cumple dos funciones: seala el sitio de comienzo de la traduccin -caso en el cual recibe el nombre de codn d e inicia cin-, y cuando se halla en otras localizaciones en el ARNm codifica a las metioninas del interior de la molcula proteica. Al especificar el primer aminocido de la protena, el codn AUG de iniciacin determina el encuadre de los sucesivos tripletes, lo que asegura la sntesis correcta de la molcula. Tmese como ejemplo la secuencia AUGGCCUGUAACGGU. Si el ARNm es traducido a partir del codn AUG, los codones siguientes sern GCC, UGU, AAC y GGU , que codifican, respectivamente, a los aminocidos alanina, cistina, asparagina y glicina. En cambio, si se omitiera la A del codn de iniciacin , el encuadre de los tripl tes sera el siguiente: UGG, CCU, GUA y ACG , los cuales se trad ucen en los aminocidos triptfano, prolina, valina y treonina. respc tivamcntc. Algo Sl' 1 n j:111t o uni ra si tambin se om itiera la U. pu s 1 \'SIIit :u il ll!l tl'l'l'l'l' tipo <k < 'll<'l! .it ll, : ( ;( ;( ', t'l l(;, 1)/\/\ y('(;(;, l \11 t'Si<' ,.:,11 , d" Jtllt ~ lit ,e,di i'i l':ll' !11:.
-' ' I U III \1' 111' l ' lldtlllt' ,' ; 11

( )tra secuencia especiaJ del ARNm, de hasta miles de nucletidos, suele ltll li ill sc despus del codn de terminacin, entre ste y la poli A (fig. 16-2). t., ...,. por fu ncin controlar la supervivencia del ARNm.

1, (, 1a \ moliculas de los ARNt adquieren una forma caracterstica

1h u1ets visto qtw los cetdou s d 1 ARN tn no seleccionan a Jos alllinocide di tn 'tiiiiH'IIt l'. llnl lll li(' ill ti iiCill('<'it ll l's:t l't~ ll ci 6 !1 l:i l' t1111pic 11 los ARN t,
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IIHI

il llll

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284

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A C ELULAR Y MOLECULAR

16. LA TRADUCCION DEL ARNm

285

, 5 ARNm Anticodn

Codn

U U

e-+
u
Asa anticodn

3,

A G
y A me '!' - - A me-G
U-A

k:tidos establecen apareamientos inusuales entre s, como por ejemplo la 'ombinacin de un nucletido con dos a la vez. La figura 16-4 muestra que ul cabo de este plegamiento el asa anticodn se halla en una de las puntas de le L, el !X tremo aceptador en la otra punta, y las asas D y T quedan juntas ,., la zona de unin de ambos brazos.
1G-7. Una aminoacii-ARNt sintetasa une el aminocido al ARNt

Asa variable G

G-e A G-e
mG

mG

A G G GAG G
Asa O

U me
AsaT

1 1 1 1

mA U

1 1 1 1 1
A

mG A G U A-U A-U U-A U G

D A G 0

El aminocido se liga a su correspondiente ARNt por la accin de una ent ima llamada aminoacii-ARNt sintetasa, que cata! iza la unin en dos pasos. Durante el primero, el aminocido se liga a un AMP, con el cual forma un uminoacil-AMP. Por ejemplo, leucinil-AMP, lisinil-AMP, fenilalanii-AMP, ncclionii-AMP, etc. Dado que el AMP deriva de la hidrlisis de un ATP, se lilwra un pirofosfato (PP) y energa, que tambin pasa al aminoacil-AMP.
aminoacil
AA+ ATP AA-AMP+ PP

sintetasa

e-G G-e e - G 5'

A

En el segundo paso esa energa es utilizada por la arninoacil-ARNt sintelusa para transferir el aminocido del aminoacil-AMP a la A del extremo ur ptador del ARNt compatible, con lo cual se forma una molcula esencial p01ra Ja sntesis proteica: el aminoacii-ARNtAA que reconoce al codn complementario en el ARNm (fig .!6-4).
aminoacil
AA-AMP + ARNt AA-ARNtAA + AMP

Fig. 16-3. Modelo en hoja de

trbol de los ARNt.

@ Extremo aceptador 3'0)

ARNt es alinear a los aminocidos s iguiendo el orden marcado por los cadones del ARNm. A fin de ejercer sus funciones, los ARNt adquieren una forma caracterstica, primero parecida a una hoja de trbol y luego a la letra L. Como muestran las figuras 16-3 y 16-4, los cuatro brazos de la hoj a de trbol se generan porque los ARNt poseen cuatro pares de secuencias complementarias - de 3 a 6 nucletidos cada una- que se aparean como lo hacen las dos cadenas del ADN. Los extremos 5' y 3' de los ARNt se hal lan juntos en la punta de uno de los brazos, la cual recibe el nombre de extrem o acepta dor debido a que acoge al aminocido. Este se conecta con el ltimo nucletido del extremo 3' del ARNt, es decir, con la adenina del trinucletido CCA formado durante el procesamiento (cap. 15-ll ) (fig. 16-4). Los otros brazos de la hoja de trbol presentan en sus partes distales secuencias de 7 a 8 nucletidos no apareados, con forma de asas, cuyas denominaciones derivan de los nucletidos que las caracterizan. Una de ellas, debido a que posee el trinucletido T\JC, se conoce como asa T (en el captulo 15-11 se dijo que la letra T simboliza a la ribotimidina y la 'V a la seudouridina). Otra, e n virtud de que contiene dihidrouridinas (stas se identifican con la letra D) se denomina asa D . La tercera contiene el triplete de nucletidos del anticodn, por lo que se llama asa anticod n (obviamente, su composicin vara en los distintos tipos de ARNt). Existe un asa adicional entre el asa T y el asa anticodn. 1 chido a que su longitud difiere en cada tipo tle ARNt, n.:t:i bc e l lllllllhr dr IIHI! vnrhlbh;. E l pi ga111i nlo ulll'rinr ck los Al~ NI han qnc ck jc- udc 1"' " '''' '""' a 111111 hojll dt ladol y : ulqn i t ~ll lll l.a lu1111 . 1 ti 1!1 lt\l ttl 1.. S1 d h1 H t H l d 1'111\ll 'i 1111

sintetasa

Debe sealarse que la energa del ATP usada en la primera reaccin quedu depositada en la unin qumica entre el aminocido y la A del trinuclelccloCCA. l li- 8. Existen 20 aminoaci- ARNt sintetasas dif erentes La clula posee 20 aminoacil-ARNt sintetasas diferentes, cada una dise11uda para reconocer a un aminocido y al ARNt compatible con l. Ambos ,,onocimientos permiten que cada uno de los 31 tipos de ARNt se ligue s., 11 uno de Jos 20 aminocidos usados en la sntesis proteica. Ello es posible 1" crq ue cada aminoacil-ARNt sintetasa identifica al ARNt por el anticodn, la cric ms especfica del ARNt (fig. 16-3). No obstante, en los ARNt existen 1 as seales que son reconocidas por la enzima, generalmente tramos de nu' ld clidos cercanos al anticodn.

f\111'1'

~ 1111 1

()
(t
f )

1 Xh1111 111
/ II I!JIII1du

xtromo fi(;Ollllrlor

Fig. 16-4. Estructura terciaria de los ARNt, que concluye con una configuracin en L. La molcula de la derecha es un aminoacii-ARNtM porque el extremo aceptador de l ARNt posee un ami nw ido
(tlil). OhN~I Vi' S\'
111111 11
CJII!' ' " "' " ' '

e lllll't 'flldo

lu nd nlnll

d. lldntu hdlldu e '1 .,,

286

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

16. L A TR ADUCCTON DEL AR Nm

287

33 protenas diferentes

50 protenas diferentes

ARNr5,8S

~
ARNr 5S

Subunidad menor

ARNr 18S

ARNr 28S

Subunidad mayor Fig. 16-6. Esquema de las dos subunidades del ribosoma, con las ubicaciones del ARNm (cenado transversalmente) y del ARNt l igado al aminocido (AA ). L a cadena polipeptdica recorre un tnel situado en la subunidad mayor.

Subunidad menor

Subunidad mayor NH2

Fig. 16-5. Molculas que participan en la formacin de los ribosomas citoslicos.

'l" t: migra ms rpidamente hacia el fo ndo del tubo por accin de la fuerza ,,ntrfuga. Juntas, las subunidades 40S y 60S forman la unidad 80S, que representa al ribosoma completo (los nmeros no se adicionan debido a que los <~eficientes de sedimentacin, si bien se re lacionan, no equivalen a los pesos dv las partculas).
<

Ribo soma

Cada subunidad ribosmica est integrada por una o ms molculas de

i\ 1~ Nr ms un determinado nmero de protenas. As, la subunidad mayor

Como es obvio, la existencia de ll clases de ARNt en exceso -o redundantes- hace que algunos aminocidos sean reconocidos por ms de un ARNt. Uno de los ARNt redundantes es el llamado ARNt iniciado o ARNt[i], pues transporta a la metionina destinada exclusivamente al codn AUG de iniciacin (fig. 16-9). Es muy probable que cerca de ese codn existan seales que diferencien al metionil-ARNt[i]M -portador de la metionina dirigida a l- de los metionii-ARNtM"' comunes, portadores de las metioninas destinadas a los restantes codones AUG del ARNm.

'<>lltiene los ARN r 28S, 5,8S y SS ms 50 protenas; la subunidad menor, el i\R Nr 18S ms 33 protenas (fig. 16-5). Las protenas de la subunidad mayor ' denominan Ll , L2, [ ... ] LSO (L por farge ), y las de la subunidad menor, : 1, S2, [ .. . ] S33 (S por small). Dado que las 83 protenas ribosmicas se construyen a partir de otros tanl<>s ARNm , puede deci rse que los componentes del ribosoma derivan de 85 l'< 'l lt:s (83 corresponden a las protenas, uno al ARNr 45S y otro al ARNr SS).

1f, 10. Se conocen las estructuras y las funcio nes de las dos subunidades del ribosoma
l.a subunidad menor del ribosoma es de forma muy irregular. En una de 1 1 s caras - la que se relaciona con la subunidad mayor- existe un canal I'IH el que se desliza el ARNm (fig. 16-6). Junto al canal se observan tres lli t'as excavadas contiguas - denominadas sitio A (por aminoacil), sitio p r p!lr peptidil) y sitio E (por exit, salida)- , cuyas fun ciones se analizan en la ' <'\'cin 16-12. La figura 16-9 muestra las ubicaciones relativas de los sitios . p y E. 1.a subunidad mayor es tambin muy inegular. De una de sus caras -la ' li"' se relaciona con el canal y los sitios A, P y E de la subu nidad menor""''l' un tnel diseado para que la protena salga del ribosoma a medida que ,. intctiza (fig. 16-6). t\ 111bas s ubunidades se repruten el trabajo que realiza el ribosoma. La '"I HII Idad menor coloca juntos a los ARNt para que los aminocidos que ll lttl.' .porlHII sc liguen entre s, es decir, para que se produzcan las uniones u 1'' ti iras. En ambio, la subunidad mayor cataliza dichas uniones y asiste 11 '"' 1 IIV I<H s q11c r gul ;1n lit snr csis rrot cca (~ccci oncs 16- 12 a 16- 14). De,, '< ' ll.tl ii l.v qur ]; 111111'::'\n catalftir a dv la su hunid;ultn;t 'or 111 > csl; ; c;trgo
j
111 111

16-9. Los ribosomas estn compuestos por dos subunidades

Los mecanismos para alinear a Jos aminoacii-ARNtAA de acuerdo con el orden de los coclones del ARNm son algo compl icados. Requieren de Jos r ibosom as, c uya primera tarea es localizar al codn AUG de iniciacin y acomodarlo correctamente para que e l encuadre de ese triplete y el de los siguientes sea el adecuado (seccin 16-3). Luego el ribosoma se desliza hacia el extremo 3' del ARNm y traduce a los sucesivos tripletes en aminocidos. Estos son trados -de a uno por vez- por los respectivos ARNt. Las reacciones que ligan a los aminocidos entre s -es decir, las uniones peptdicas- se producen dentro del ribosoma. Finalme nte, cuando el ribosoma arriba al codn de termi nacin -en el extremo 3' del ARNm- cesa la sntesis proteica y se libera la protena. Como se ve, los ribosomas constituyen las "fbricas" de las protenas. Cada ribosoma est compuesto por dos subun id a des - una menor y otra mayor-, que se identifican con las siglas 40S y 60S, respectivamcnt (f'i ~. 7-4 y !6-5). La letra S hace referencia a la un idad Sv,.dh{'t"N de scdint nta i(ul y los nmeros corresponden a los co ri i n1cs 11\' SldinH'Itt;tri(Ht dr b s Jlilllt
l; lii:I S qll l ' St' :ut;Jii '/.; 111 , l' S d tT il'. ;laS Vt'ltll,.' id :l(h ' -1 t ' t!lltp 'w ',t dill ll'llf l tllt ' ll l iiHi tl

dt'

' ll .'t (lll)ll ' il ll t' .

t: 1111

d t

111111

di' .u;, 1\ J{N J,

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.t nlldlt :tt 't 'llllilu rn d., . A ~. r tk l.1 . d"' ~ t tl'll l ll tl. ldt

dt ldu''''ll l. l, 111 (1ll,' : , ., 1 1 1

111111 {t l qt

1 J I)

288

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

16. LA TRADUCCION DEL ARNm

289

-. o
COOH
NH2 NH2

Fig. 16-7. Formacin del polirribosoma por la asociacin de varios ribosomas a un solo
ARNm.

NH2

/
NH2

16-11 . Los polirribosom as se forman al asociarse una molcu la de ARNm co n muchos ribosomas

Cada ARNm suele ser traducido por varios ribosomas simultneamente, que se deslizan por l en direccin 5'-73' en fila india, separados entre s por una distancia de alrededor de 30 codones. Como se describi en el captulo 7-5, la asociacin de un ARNm con varios ribosomas se llama polisoma o polirribosom a (fig. 16-7). Las figuras 1-10 y 7-3 muestran que es claramente detectable en las imgenes ultramicroscpicas. Los ribosomas se encuentran libres en el citosol o adosados a la membrana del RE (figs. 1-10,7-4,7-6 y 16-8). Los primeros elaboran protenas destinadas al citosol, al ncleo, a las mitocond1ias o a los peroxisomas. Los segundos elaboran protenas que se insertan en la membrana del RE o se vuelcan en la luz del organoide (cap. 7-13); estas protenas permanecern en el RE o se transferirn -mediante vesculas de transporte-- al complejo de Golgi, desde donde podrn pasar a los endosomas, a la membrana plasmtica o salir a l exterior.

Fig. 16-8. Formacin de los polirribosomas libres en el citosol y de los asociados al retculo endoplasmtico rugoso.

lAS ETAPAS DE lA SINTESIS PROTEICA

La sntesis de las protenas se divide en tres etapas, llamadas de iniciacin, de alargamiento y de terminacin (fig. 16-9).
16-12. El comienzo de la snt esis proteica requiere varios factores de iniciacin

De inmediato la subunidad menor se desliza por el ARNm y detecta al coAUG de iniciacin, que se coloca en el sitio P. Como es lgico, el segundo codn del ARNm queda colocado al lado, es decir, en el sitio A. Entre tanto, el metionil-ARNt[i]Mct, ubicado en el sitio P de la subunidad 111enor, se une al codn AUG de iniciacin mediante su anticodn CAU (UAC). El acoplamiento correcto entre estos dos tripletes es imprescindible para asegurar el encuadre normal de los siguientes codones del ARNm en los sit ios E, P y A de la subunidad menor del ribosoma. La etapa de iniciacin concluye cuando la subunidad mayor se une a la subunidad menor y se forma el ribosoma. En l se encuentran los dos primeros codones del ARNm: en el sitio P, el codn AUG de iniciaci n - unido al IIICtionil-ARNt[i]Mc<_ y en el sitio A , el codn que le sigue. La unin entre s de las dos subunidades ribosmicas se produce a instanr as del factor IF-5, q ue acta despus que se desprenden los factores IF-2 IF-3 .
<1 (.10

16-13. El alargamiento de la cadena proteica es promovido por factores de elongacin

La etapa de iniciacin de la sntesis proteica es regulada por protenas citoslicas denominadas factores de iniciacin (IF), que provocan dos hechos separados pero concurrentes, uno en el extremo 5' del ARNm y otro en la subunidad menor del ribosoma. El primero involucra al cap y a una secuencia de nucletidos aledaa, localizada entre el cap y el codn de iniciacin (seccin 16-5). Estas partes del ARNm son reconocidas por el factor IF-4, que se liga a ellas si al ARNm se le ha unido la protena CBP (seccin 16-5). La conexin del IF-4 con el ARNm insume energa, que es provista por un ATP. En el segundo, el metionil-ARNt[i]Mc<se coloca en el sitio P de la subunidad menor del ribosoma. Esta reaccin requiere el factor IF-2 y gasta la energa de un GTP. l .o~1 ;u lo~ illllho~ a ontlic ionamienlos, otro factor de i11ir ia,i6 11, l'l 11<'-.\, ,.,1111 ny ud.<d l ll ' rf ,ulo acl ex lrl'lllll . 'dl' l AI<N111 ''",""la < '!llll ck la ;;11h tll dt l l td 111 1 llltl ,,, l tdllt'tl lll !tttH ' )liH'l' h ollln, r: .. , . y A

La etapa de alargamiento de la sntesis proteica es regulada por factores de elongacin (EF). Comienza con el ingreso en el ribosoma de un aminoacii-ARNtAA cuyo anticodn es complementario del segundo codn del 1\RNm, el cual, como se mencion en la secci n anterior, se localiza en el silo A. En seguida el aminoacil-ARNtAA se ubica en ese sitio y su anticodn se conecta con el segundo codn del ARNm. Lo hace mediante el factor de (' longacin EF-1 y la energa suministrada por un GTP. La figura 16-9 muestra que el arninoacil-ARNtAA recin llegado y el meIonil-ARNt[i]M del sitio P quedan uno al lado del otro, al igual que sus !tlll illocidos. Esta vecindad es necesaria para que ambos aminocidos pue.!1111 ligarse entre s por medio de una unin peptdica, hecho que ocurrir en hwvl' 1iempo. l'lt' via lnCHit: el riiHl'alnlll lil' rorr tres nucletidos en direccin del cxtrc'"" 1' ,,., 1\I<Nui, 1 1, 1 111 11 .J, loo < 'llal ,. l'<HI 11 d inic iaci(\n (y 1 nu-lionil /\ 1 NIJ i l' "'l il< ' 1111111 111" oh 1 ll 1oo 1' II I IHIIO 1'. ,. iI'J:IIudoo l' <~dllll ( Y,. 1 111li

290

FU NDAMENTOS DE B IO LOGTA. CELUL AR Y MOLECULAR

16. LA TRADUCCJON DBLARNm

291

INICIACION

ALARGAMIENTO

3'

5'

3'

CCUG

CCUG

b60l;A.
'-.,--'

AA AAA
Poli A

rrrn

3'

(Term.)

3'

5'
1 J

3'

~T

UG

3' rrrn A AA AA

TERMINACION

Fig. 16-9. Etapas de iniciacin, de alargamiento y de terminacin de la sntesis proteica en el ribosoma.

3'

AA AAA

rr-r-r-1

noacii-ARNtAA) se transfiere del sitio A al sitio P, y el tercer codn del ARNm se ubica en el sitio A vacante. Este corrimie nto, que se denomina translocacin, depende del factor de elongacin EF-2 y de la energa suministrada por un GTP. Apenas el metionil-ARNt[i]M" ingresa en el sitio E, su metionina se desacopla del ARNt[i] y se liga - por medio de una unin peptdica- al amino<cido del aminoacil-ARNtAA ubicado en el si tio P. Como es lgico, e l dipeptidi l-ARNt que se forma reemplaza al aminoaci l-ARNtM en el sitio P. Despus de perder la metionina, el ARNt[i] se desconecta del codn de iniciacin, abandona el sitio E y se encamina hacia la salida del ribosoma, lo que determina el fin del primer episodio del alargamiento de la protena. El segundo comienza cuando un nuevo aminoacil-ARNtAA ingresa en el ribosoma, se ubica en el sitio A y su anticodn se conecta con el tercer codn del ARNm, otra vez mediante el factor de elongacin EF-1 y la energa de un GTP. Luego, debido a que el ribosoma se vuelve a transloear, el dipeptidil-ARNI y el aminoaci l-ARNtAA se trasladan de los sitios P y A a los sitios E y P, respectivamente, y el cuarto codn del ARNm se ubica en el sitio A vacante. Al cabo de la translocacin se produce la segunda unin peptdica, ahora entre el dipptido del dipeptidil-ARNt y el aminocido del tercer aminoac il ARNtAA Como muestra la figur 16-9, el tripeptidil-ARNt que se forma qu\' da ubicado en el sitio P. Mientras tanto, e l ARNt que cedi6 el dipptido abandona el sit io E y se d i

5' .

1"

que ocu1Te durante los dos primeros episodios de la etapa de alarga-

""''ulo de la sntesis proteica se repite en los siguientes. Por consecuencia, "' ".uol e el tercer episodio se forma un tetrapeptidil-ARNt, y luego peptidil1 NI ada vez ms largos, cuyas localizaciones alternan en los sitios P y E 1 1 " ll'diua que se producen las translocaciones y se suceden las uniones pepl i ol lo ' !o ,>~ . Se calcula que por segundo se agregan a la cadena peptdica unos cin-

' . ttlllinocidos.
1"

':ncrg a que se gasta durante la formacin de cada unin peptdica pro-

' li ''"' do la ru ptura de la unin qum ica entre el ARNt ubicado en el sitio E y

1 11 oli11n ido . En la seccin 16-7 se dijo que al formarse cada aminoacilI<NIM, l:1 1111i6n del ami noc ido con el extremo aceptador del ARNt - ms l" ' ' "'""'t' llk 1:011 su 1 l1inoa adcnina- consume la energa suministrada por "" \ 11' l'111 l" ' '"''" l:1 r1 wrfa q u np l a la suhunidau mayor uclribosoma
11

)111 11 '''''' .1

rige a la salida del ribosoma, In qu dclt'nllinn l l'in 1il'l s.tnndo pisodiP dtl
:d:u :un it'lll o d la 111oldua.

11 1dc

11 ltt

lo. ! ll lllllc. H ' i d ~~ . l" :q uJ I :ul:t, \' 11 1 il i11 1:1 insl :llll..' i:l , por s A'I'P. de l.! i ' III ' I J' Id cp11 , ' J'tl'.111po1 ':tdrt !ll llill tt!ll ' iclil cprv "1\' i lll 'tllfll l

1 1 1 111 11 1 JIIH i t 1! 11 1 i ' ll l tll ll ll h ltlll lllllt , ll,lcjlll ' J ld t l !c , p , jl ltlll ' lt 'lll " 1111p1C H 'I" ,II

j
292
FUNDAMENTOS DE BJOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR 16. LA TRADUCCION DEL ARNm

293

muy costoso, ya que se requiere no slo el ATP recin mencionado sino tambin los dos GTP citados con anterioridad: el que se consume en el sitio A para que el aminoacil-ARNtAA se conecte con el ARNm y el que se gasta en la translocacin. Como se dijo, con cada translocacin el ribosoma se aleja del extremo 5' del ARNm y se acerca al extremo 3'. Cabe agregar que cuando el ribosoma se halla a unos 30 codones del codn de iniciacin, ste es abordado por un segundo ribosoma y comienza la sntesis de una nueva copia de la protena. Puesto que ello se repite muchas veces, al cabo de un tiempo se encuentran mltiples ribosomas a lo largo de todo el ARNm, separados entre s por perodos de 30 codones (figs. 1-10,7-4, 7-6, 16-7 y 16-8). En la seccin 16-11 se dijo que esa asociacin recibe el nombre de polirribosoma.
1G-14. La sntesis proteica concluye cuando el ribosoma alcanza

La medicina ha trasladado estos efectos a otros escenarios biolgicos, pnrlicularmente al organismo humano. As, cuando determinadas bacterias In infectan , stas pueden ser destruidas mediante la administracin de antil,{,ticos.

e l codn de terminacin La etapa de terminacin de la sntesis proteica es regulada por factores de terminacin -identificados con la sigla eRF (por eukaryotic releasing factor)- y tiene lugar tras la ltima translocacin, es decir, cuando el codn de terminacin del ARNm (UAA, UGA o UAG, indistintamente) llega al sitio A del ribosoma. Debido a que ello deja al sitio A sin el esperado arninoacil-ARNtAA, lo ocupa el factor eRF-1, que es capaz de reconocer a los tres codones de terminacin (fig. 16-9). Ante la ausencia de un nuevo aminoacii-ARNtAA, el polipptido del peptidil-ARNt -ubicado en el sitio P- se desliga del ltimo ARNt y se independiza del ARNm y del ribosoma. El desprendimiento del polipptido depende del factor eRF-3. Adems requiere energa, que es tomada de un GTP. De inmediato las subunidades menor y mayor del ribosoma se separan del ARNm. En el citosol integran un fondo comn que abastece de subunidades ribosmicas para la formacin de nuevos ribosomas en el mismo ARNm o en otros que se estn traduciendo o que van a comenzar a hacerlo (fig. 16-8). El nmero de ribosomas en el polirribosoma, es decir, la suma de sitios en los que tiene lugar la sntesis de una protena, se mantiene en forma relativamente constante. Es que cuando un ribosoma abandona el extremo 3' del ARNm, se ensambla otro en el extremo 5' (fig. 16-8). Como se ver en las secciones 16-20 y 16-21, esta sntesis continuada de una protena a partir de un mismo ARNm -por el trabajo simultneo de varios ribosomas- es interrumpida, en el momento que corresponde, por la accin de factores reguladores.
16-15. Dos temas mdicos vinculados con la actividad

Debe advertirse que la puromicina afecta tambin a los ribosomas de las , lulas eucariotas, y por ese moti vo su uso farmacolgico es muy restring"" Por su parte, el cloranfenicol, la eritromicina, la tetraciclina y la kirromi, i na, si bien interfieren levemente la sntesis proteica en los ribosomas euca'' 1 ticos citoslicos, afectan mucho ms la de los ribosomas de las mitocontlt ias, lo cual reflej a el posible origen procaritico de estos organoides (caps. H 26 y 8-29). Otro tema mdico vinculado con los ribosomas corresponde al mecanis"'" de accin de la toxina diftrica, que ingresa en la clula por endocitosis y ribosila al factor de elongacin EF-2, lo cual lo anula. Ello conduce en po,o tiempo a la muerte celular.
l li- 16. La metionina situada en el extremo amino de la protena

suele ser removida Varias veces sealamos que la traduccin del ARNm se produce en direc5' ~3' y que el aminocido cifrado por el codn de iniciacin, en el exft< tno 5' del ARNm, es una metionina. Por lo tanto, a ella pertenece el gru1'" amino libre de la cadena proteica en formacin. Esta metionina usual'" nte es removida, de manera que el segundo aminocido pasa a la prime'" posicin. En el extremo opuesto de la protena se encuentra el aminocido que llev ' <:1 grupo carboxilo libre de la cadena proteica, determinado por el triplete 1" vio al codn de terminacin. De estos datos se deduce que en cada unin peptdica que tiene lugar en , ribosoma, el grupo carboxilo es aportado por el ltimo aminocido de la , ttdena peptdica en crecimiento (ubicada en el sitio P) y el grupo arnino es 'dido por el aminocido del arninoacil-ARNtAA (ubicado en el sitio A).
'i
nt

1l)- 17. Las protenas emanadas de los ribosomas portan seales que

las conducen hacia sus lugares de residencia Tericamente, una clula posee los recursos necesarios para sintetizar """s 15.000 protenas distintas. Emanadas de los ribosomas, tales protenas 11 den permanecer en el citosol o tener como destino el ncleo, las mitoconlt ias, los peroxisomas o el retculo endoplasmtico. Por ejemplo, las tubulinas y las enzimas de la gluclisis permanecen en el lioso!, las histonas y las protenas ribosmicas cruzan los poros nucleares e "'gresan en el ncleo, las enzimas del ciclo de Krebs atraviesan las dos mem1" Hilas de la mitocondria y alcanzan la matriz mitocondrial, la catalasa pasa 11 lruvs de la membrana del peroxisoma y arriba a su matriz, etc. Las protenns tlestinadas al retculo endoplasmtico se sitan en la membrana o en el i ~tlerior del organoide luego de que los ribosomas establecen una ntima rela' , 11 con l en el sector del RE llamado rugoso (cap. 7-5). Un trfico tan selectivo obliga a las protenas surgidas de los ribosomas l" l\t:Cpto las que quedarn en el citosol- a portar seales que las conduz'lllt u los organoides apropiados, y stos deben poseer receptores especficos lf'"" t't:to11m.ca11 a esas sea les. En las protenas las seales estn representadn/1 por tlltas se "IICIIt:tts orlus d amino~cidos denominadas pptidos seal tl nldo ll 1),

de los ribosomas Al ser invadidas por bacterias, las clulas de algunos organismos inferiores elaboran sustancias llamadas antibiticos para defenderse de la infeccin. En muchos casos Jos antibiticos logran sus objetivos interfiriendo la sntesis proteica en los ribosomas de las bacterias, lo que las mata. Por ejemplo, el cJranfenicol impide las uniones peptdicas, la tetraciclina no permite que los aminoacil-ARNtAA ingresen en el sitio A, la kirromicina inhibe la actividad de los factores de elongacin, la estreptomicina afecta el inicio de la traduccin y distorsiona la fidelidad de la sntesis, la eritromicina bloquea la translocacin del ARNm y la puromicina usurpa el sitio A del rihosoma, de modo que la cadena peptfdica se liga al antihi6ti o y 1,10 11 1111 :utti11oucil Al~NtM, lo qu intcrrump s tt sfnttsis.

294

FUNDAMENTOS DE BJOLOGIA CELUL AR Y MOLECULAR

Hierro suficiente cap - - - - - A U G

-oorr--

16. L A TRADUCCtON DEL ARNm

295

AAA A

Fig. 16-10. Regulacin de la traducci n del ARNm de la ferritina.

n - - - - Aconitasa Hierro insuliciente cap

~AUG-------------AAAA
Fig. 16-11. Regulacin de la estabilidad del ARNm de la tubulina.

16- 18. La existencia de ch aperonas asegura la correct a form aci n de las est ruct uras secundarias y t erciar as de las protenas

Apenas los polipptidos emergen de los ribosomas, sus tomos tienden a establecer las combinaciones qumicas que dan lugar a la formacin de las estructuras terciarias y cuaternarias que caracterizan a las protenas (cap. 2-9). Estos procesos son contcolados por las protenas chaperonas que fueron mencionadas en los captulos 4-5, 7-1 5, 8-28 y 10-5.

REGULACION DE LA TRADUCCION DE LOS ARN MENSAJEROS Y DE lA DEGRADACION DE lAS PROTEINAS

16- 19. La snt esis prot eica, la supervivencia de los ARN m y la degradaci n de las protenas son reg uladas

/\s pues, cuando la cantidad de hierro cae, una protena llamada aconitasa o I RF (por iron responding fa ctor) se une a la secuencia no traducible del extremo 5' del ARNm de la ferritina y bloquea su traduccin. Ello se debe a que In aconitasa dobla al ARNm y le forma un bucle (fig . 16-1 0), lo cual imped' fa la acc in del IF-4 y, por lo tanto, e l comienzo de la traduccin.
16-21. La degradacin de los ARNm suele ser regulada por factores que actan en el extremo 3' de sus moleculas

En los dos captulos anteriores se seal que los mecanismos de regulacin ms amplios para decidir qu protenas debe sintetizar la clula operan a nivel de la transcripcin del ADN y del procesamiento del ARNm. Aunque menos general izadas, despus que e l ARNm sale al citoplasma se producen otras regulaciones, ahora para controlar el tiempo y el ritmo de produccin de las protenas y para decidir cundo y a qu velocidad deben degradarse.
16- 20. Existen mecan ismos generales y especficos que regulan el t iempo y el r itmo de produccin de las protenas

La existencia de un control sobre los ARNm que especifiq ue cules deben traducirse (es decir, qu protenas deben ser sintetizadas) y cules no lo harn no ha sido probada. No obstante, existen mecanismos que controlan las veces que un ARNm debe traducirse y a qu velocidad. Como es lgico, estos mecanismos actan en el momento en que se inicia la traduccin. Las c lulas en mitosis ofrecen c laras evidencias sobre este punto, ya que, al no sintetizarse ARNm, la produccin de protenas - a partir de ARNm ya formados- cae abruptamente. Indicativa de esa cada es la apariencia de los polirribosomas durante la mitosis, en los que los ribosomas aparecen ms espaciados que en la interfase. Existe un control general o inespecfico de la traduccin. Parece depender del factor de iniciacin IF-2, cuya fosforilacin por una qui.nasa especfica lo hace inoperable . Como consecuencia, la sntesis de todas las protenas celulares decae. El control particular o especfico de la traduccin de los ARNm opera de otra manera. Depende de sustancias reguladoras que suelen modificar la configuracin de un tramo de nucletidos no traducibles, localizados ent re el cap y el codn de iniciacin (seccin 16-5). Un ejemplo de este control lo o frece laferritina. una prol d n:t r itos li.:a qu s 1111 ' allti rro y qtu L 'OIIslilny\' Sil i"ot JJI:t liL' dv1u'. it11 S tt J'IIJJL'L 'JJI J!JL'J.JJJ v:n f:t t.'ntt In ,anlidnd d t l tit t ttl t'lt (' 1 v illl'.tll, y .u . fnll ''d ' 1' ~~ J' lll utlup u t' . l.t ,

Otra estrategia util izada por la clula para controlar la cantidad de protelta que ha de sintetizar opera sobre la supervivencia de los ARNm en el cito,ol. Los mecanismos que regulan la degradacin de los ARNm son muy va' iados. En la mayorfa de los casos se relacionan con secuencias de nucletidos cercanas al extremo 3' de los ARNm, loca lizadas entre el codn de terltti nacin y la poli A (seccin 16-5). En cambio, en algunos ARNm se vinculun con secuencias cercanas al extremo 5' . Finalmente, en otros ARNm, si hicn no se han precisado las sec uencias responsables de la degradacin, se '< lllocen las sustancias que las inducen. Analizaremos algunos ejemplos de vstos mecanismos, comenzando por el planteado en ltimo tm1ino. La casena es una protena de la leche producida por las clulas de la glndul a mamaria en respuesta a ciertas hormonas, principalmente la prolactina. .'> ha observado que la concentracin del ARNm de la casena crece considerablemente en el citosol ante la presencia de esa hormona, no porque se inncmente su sntesis en e l ncleo sino porque aumenta su estabilidad en el cil<~plas m a . Contrariamente, cuando desaparece la prolactina se acelera la deradacin del ARNm de la casena . No se conocen los mecanismos moleculurcs que producen estos efectos. Es interesante el modo como se regula la degradacin de los ARNm de la tubulina dimrica, ya que se basa en la concentracin de sus productos proll'cos, es decir, de sus subunidades a y ~ (cap. 5-6). Cuando en el citosol el nivel de estas protenas es suficiente, una molcula -probablemente un dntcro a~- se une a los primeros aminocidos ele las cadenas proteicas que "IIHtnan de los ri bosomas y ello activa a una nucleasa especfica que degrada L 11 los ARNm de las tubulinas (fig. 16- 11). Como vemos, se trata de un mecaJI ismo autorregulatorio. La zona receptora de la seal de saturacin abarca a los primeros nuc letidos del ARNm y a una pequea secuencia no traducible 111 via al codn de iniciacin. En la sangre el hierro es transportado por una protena llamada transfe' 1nut. Esta, junto con e l hierro, ingresa en el citoplasma por endocitosis prevtn inl ra ~:in con 1 rectlptor de la transferrina, localizado en la mcmbra111 p l n~ t n rt li L'II . C'tu11rtln 111 <'IIJJJ'I' lllr u<' iII de hicrTO aumenta en e l citosol, el JJIIII H ' I" ,( 11 , ., 11tu 1111111 1, IIIII J'.i <tti tJJL di~ tn u n y'. Los ll"L " l'ptorl"s l'HL' Il

296

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR 16. LA TRADUCCION DEL ARN m

297

Hierro suficiente cap - - - AUG

AAAA Durante la fase S cap - - - AUG

Fig. 16-12. Regulacin de la estabilidad del ARNm de la protena receptora de la transfenina.

A AAA

110spus de la fase S cap __.___ A UG

Nucleasa --C;;

Fig. 16-14. Regulacin de la estabilidad del ARNm de las protenas histnicas.

debido a que el ARNm que Jos codifica es degradado por una nuc~easa especfica. En este mecanismo regulatorio tambin intervtene la acomtasa, ya que al unirse a una seal ubicada en el extremo 3' del ARNm, cons1s tente en cinco bucles de ARN con una secuencia CAGUG en cada uno, 1mp1de la accin de la nucleasa. Ello ocmTe cuando desciende la concentracin del hierro (fig. 16-12). . Como vemos, al disminuir el hierro en el citosol actan dos mecamsmos regulatorios simultneos, uno que baja la concentracin de la fenitina (~ec cin 16-20) y otro que aumenta el nmero de receptores para la transfemna. En el primero se bloquea la traduccin de un ARNm y en el segundo se unpide Ja degradacin de otro. En ambos interviene una misma molcula -la aconitasa- , aunque en sectores diferentes de los ARNm ~ . La corta supervivencia de los ARNm de muchas protemas -por eJem~lo, algunos factores de crecimiento (cap. 18-28)- , que no supera los 30 mmutos, se debe a la presencia en su extremo 3' de secuencias de unos 50 nucl~ tdos ricas en A y U, localizadas entre el codn de terminacin Y la poh A (seccin 16-5). Se ha sugerido que estas secuencias atraen a ciertas nucleasas, las cuales, mediante la remocin gradual de las A de la poli A, desestabilizan al ARNm y ello propicia la degradacin de este ltimo por otras nucleasas (fig. 16-13). La vida media del ARNm de la ~globina , que es de unas 10 horas, depende de la integridad de su poli A. Diversas experiencias han demostrado_ que el acortamiento gradual de esta secuencia mediante nucleasas reduce el tiempo de vida del ARN mensajero. La supervivencia de los ARNm que codifican a las histonas depende d~l momento del ciclo en que se halla la clula (fig. 16-14). En la fase S la VIda media de estos ARNm es de una hora, pero cuando concluye la replicacin del ADN se reduce a unos pocos minutos. No se conoce el mecanismo por el cual la replicacin del ADN se vincula con la menor ve!ocida~ de la degradacin de estos ARNm. Slo se sabe que su estabilidad es mflmda po~ una corta secuencia de nucletidos que forma un bucle en su extremo 3 (cap. 15-5) (fig. 15-4).
ARNmde AUAU--AAAA factor de cap - AUG ~,t:--=""-!'=---+--(:,.----crecimiento

Como se ve, en la mayora de los ejemplos citados el tiempo de vida de I11s ARNm depende de secuencias especiales presentes en sus extremos 3', d11nde suele comenzar la degradacin. Debe agregarse que las clulas generan unos ARN pequeos que probahlcmente participan en la destruccin de ARNm. Se denominan microARN o miARN y se analizan en los captulos 13-12, 15-13 y 23-44.
16-22. La degradacin de las protenas tambin es reg ulada

La supervivencia de ciettas protenas de vida breve depende de seales pn;sentes en sus molculas. Hasta hace poco se crea que el tiempo de vida 'h; esas protenas estaba vinculado con la identidad del primer aminocido dd extremo ami no (en la seccin 16-16 se indic que en todas las protenas sa posicin es inicialmente ocupada por una metionina y que cuando sta s removida toma su lugar el segundo aminocido de la cadena proteica). lloy se sabe que las seales utilizadas para degradar muchas protenas de vidn corta son secuencias de aminocidos llamadas PEST, ricas en prolina (/'), cido glutmico (E), serina (S) y treonina (T) (las letras entre parnteft is identifican a esos aminocidos, segn se informa en la figura 2-25). Estus seales son reconocidas por la ubiq uitina, cuya intervencin es impreso indible para que se degraden las protenas en los proteasomas (cap. 4-6). lli- 23. Las pol iproteinas se procesan de manera diversa segn el tipo celular que las produce En el captulo 13-1 se seal que algunos ARNm codifican pol iprotenas. se procesan de manera diferente segn la clula que las produce. Un ejemplo de poliprotena es la prohormona proopiomelanocortina (I'OMC), que en las clulas adrenocorticotropas del lbulo anterior de la hipfisis genera corticotropina (ACTH) y ~-lipotropina (~-LPH), y en las clullts de la parte intermedia de la misma glndula produce ~-endorfina (3-EP), y lipotropina (y-LPH) y las dos formas de la hormona estimulante de los meln nncitos, identificadas con las siglas u-MSH y ~-MSH (fig. 16-15).
1 :stas

II.N

'-'---------'-----------..J
Pptido seal

Fig. 16-15. Procesamiento de la proopiomelanocortina en los distintos tipos de clulas hipofisarias que la elaboran. ACTH, corticolropina; [3-LPH, P-lipolropina; y-I.Pl/,

Fir:. 16-13. Regulacin de la

e};lahilidnd tic los t\I~N111 de
In 1111 11111"1 d1 ~ t 'H 't' hllit \ 11111,

y-lipolropina;

ln1j ;

c-JI1ulh~ulh'' d hl nll'llnu l {lll'i./\ 1 ndudntll

r~-M.I'/1 y

fi M.\'11. 1""'""'"'"

298

FUNDAMENTOS DE BTOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

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La replicacin del ADN

Mutacin y reparacin

17

11 PLICACION DEL AON

11 1. La replicaci n del ADN se produce en la interfase
i\1 cabo de la divisin celul a r las clulas hijas heredan la misma informa' , ul gentica contenida en la clula progen itora. Como esa informacin se ludia en el ADN, cada una de las molculas de ADN debe generar otra mol, 11l: t de ADN id ntica a la o riginaria para que ambas sean repartidas en las ,.,, clulas hij as. Esta duplicacin, merced a la cual e l ADN se propaga e n In. clulas d e gene racin en generacin, se denomina replicacin . La vida d e las clulas que se dividen tra nsita por dos etapas que se alternan td icamente, conocidas con los no m bres de interfase y mitosis (cap. 18-2). 1 11 interfase se subdivide en tres perodos, llamados G 1, S y G2 (fig. 17-1 ). E n 111 l'asc Gl tienen lugar las distintas actividades de la clula (secrecin, con.IIIL 'Cin, contraccin, endocitosis, etc.). Le sigue la fase S, en c uyo transcur,,, se produce, adems, la replicacin del ADN. Luego tiene lugar la fase G2, il.lltsic in q ue se ext iende hasta e l inicio de la fase M -correspondiente a la ""losis-, al cabo de la c ual las molc ulas de ADN duplicadas se segregan en lu, lulas hijas. IJebe sealarse que d esde la term inacin de la fase S hasta que se segrel'' t'L e n la mitosis, los ADN hijos derivados d e un mism o ADN progenitor per11''"reccn juntos, unidos a la all ura del centrmero mediante un complejo de Jll"l nas llamadas cohesinas (fig. 17-2). Mientras est~n unidos, esos ADN ll, v:lll el nombre de cromtidas hermanas. El centr m e ro se ev idencia du' '"'t c la mitosis, c uando la c romatina de ambas c ro mtidas alcanza el mxi'"" g rado de compactacin; desem pea una f uncin c ru' '" ' c:n la separacin de las c ro m tidas hermanas, pues g ra' 1.1s a l cad a clula hija recibe una sola cromtida, q ue p a1 1 a llama rse cromosoma despus de la separacin (cap . 1H 'l) ( rig. 17-2). l'ara que puedan form arse dos molculas d e ADN a par11, d\' una, primero tienen que separarse las d os cadenas de , d"hlc h lice del ADN p rogenitor, pues se utilizan como "" dd s para la construccin de sendas cadenas complemen- 11 11 11" . Dado que las cadenas recin sintetizadas no se sepa' "' ,,. l:ts respectivas cadenas mo lde, se forman dos nuevas ,.,i(,s lt !ices de ADN idnticas a la anterior (fig. 17-3). 11 o ' llt<~S vislo qu; e l i\I)N 1111 \.'~ 1; solo sino combinado tt 1111 1i d nas ( ltis lott:rs , o 'il ', 1 y qrw l:t inlc r;tc it tt de a m has 111.,[ o lll ll', Jlo'VIl 1'1 ll01 11d111 ,[ I ' IUIIIlllillll (li , 1- <)), l , l
Jlll 1 111 IJ I

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G2

Fi~.

17-1.

iclo vital de una -~lula, que ~;omprc ntlc

dt J.l'

p11d 1 fll !l

1 l llli j dlt

( 1 1 i 1 d tldH I d1

1, ll 'l'f j

la illll'l'l'as..: J: tnitosis. l .a pri lllt'!';\ inclu r la~-. ra~l' <; 1, S v (; \ 1 n ~t pli , rtl' llllli'I J t\ 1)N ''t' lltH ' d H u n~t
lu l n.o. t -.

300

FUND AMENTOS D E BIOLOGI A C ELU LAR Y M OLECULAR

17. LA REPLICAC ION DEL ADN

301

1'

t>T
- ADN polimerasa

- ADN polimerasa

Fig. 17-2. Ciclo de condensaci6n-descondensaci6n de los cromosomas. La replicacin se produce en la fase S. La condensacin del ADN es mxima e n la metafase y en la anafase.

Meta fase

~/
1

5'

cacin, por un lado porque intervienen en el enrollamiento de la cromatina y por otro porque ellas tambin se duplican. Con el objeto de simplificar luh descripciones, estos aspectos senn ignorados en las primeras secciones del captulo a menos que sus menciones resulten imprescindibles. 17- 2. La replicacin ti ene algunas similit udes con la transcripcin La sntesis del ADN (replicacin) presenta algunas sirrlitudes con la sfn tesis del ARN (transcripcin del ADN). Igual que el ARN, el ADN se sintc tiza en direccin 5'-->3' y utiliza como molde una cadena de ADN preexisten te. Adems, enzimas equivalentes a las ARN polimerasas, llamadas ADN polimerasas, agregan los sucesivos nucletidos - tambin de a uno por vez- en el extremo 3' de la cadena e n crecimiento. Las ADN polimerasaN catalizan las uniones fosfodister que se producen entre el OH del C3' de In desoxirribosa de un nucletido y el fosfato ligado al C5' del nucletido recin arribado (fig. 17-4). Las diferencias entre la replicacin y la transcripcin se deben en parte a que el ADN es una molcula doble y no simple como el ARN. En la sntesis del ARN, el ADN se transcribe slo en los sectores que corresponden a los 1" " s activos, mientras que en la replicacin no queda ning n sector del 1)N sin duplicar. Para la sntesis del ARN las dos cadenas del ADN se se1' tll lll transitoriamente en la zona donde se produce la transcripcin, por lo ' ""1se forma una especie de "burbuja" que se desplaza en direccin 5'-->3' . 1 1i\ RN copia una sola de las dos cadenas del ADN y, conforme progresa la ''""st:ripcin, se despega de la cadena que le sirve de molde. Contrariamen' ' , c- 11 la replicacin las dos cadenas del ADN se utilizan como moldes y una y, ' s<.: paradas no vuelven a juntarse (porque las cadenas hijas quedan unidas 11 l11s progenitoras). Fi nalmente, la replicacin exige un nmero considerable" ""111 <.: mayor de enzimas que la transcripcin . l \11 sntesis, a partir de una molcula doble de ADN se originan dos mol1 11las dobles de ADN -<los dobles hlices- , cada una compuesta por una , '"h-Ila heredada del ADN progeni tor y una cadena recin sintetizada. Dado '1' " ' las molculas de ADN recibidas por las clulas hijas contienen una cade''" uri ginal (preexistente) y una cadena nueva (recin sintetizada), se dice que ' 1 II ICt:anismo de replicacin del ADN es semiconservador (fig. 17-5).
Fig. 17-4. Acc in de la A DN polimerasa du rante la replicacin del ADN. La enzima ubica en su lugar a un nuclesido trifosfato y cataliza la unin fosfod ister, con liberacin de un difosfato. Se observa que la ADN polimerasa slo puede agregar nucletidos e n la di reccin 5' --?3' .

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Molculas

hijas
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302

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

17. LA REPLICACION DELADN

303

17-3. La replicacin se produce sectorialmente Si la clula abordara la replicacin del ADN considerndolo como una larga, uniforme y delicadsima hebra compuesta por millones de pares de nucletidos apareados que deben separarse a un tiempo en toda su extensin, la tarea no podra concretarse por un elemental problema de espacio. Aunque desde el punto ele vista terico la molcula de ADN exhibe las caractersticas mencionadas, esa situacin no se presenta por el modo como se asocia cou las histonas y se enrolla sobre s misma. Recordemos que el ADN integra los nucleosomas de 10 nm y se enrolla hasta generar una estructura helicoiclal de 30 n m de dimetro (solenoide), que al volver a enrollarse forma lazos de diferente longitud, los cuales emanan de un eje que est constituido por protenas no histnicas (fig. 12-12). Los dos extremos ele cada lazo se sujetan a ese eje por secuencias de ADN llamadas SAR (cap. 12-9). Adems de proteger al ADN de eventuales enredos, nudos y roturas, esta disposicin de la cromatina lo organiza sectorial mente, ya que cada lazo representa una unidad de replicacin. En los captulos 12-9 y 14-12 se dijo que probablemente algunos lazos tambin constituyan unidades de transcrip cin, es decir, genes. Al hablarse de unidades de replicacin se quiere significar que el ADN no se sintetiza globalmente sino a pm1ir ele mltiples sectores a lo largo de su molcula, cada uno de los cuales cmTesponde a un lazo. Por consiguiente, cada unidad abarca al ADN comprendido entre los puntos de origen y de llegada del lazo a su base, es decir, entre las SAR. Es necesario advertir que tal sectorizacin no supone la existencia de algn tipo de interrupcin en la continuidad del ADN, ya que la condicin unitaria de su molcula no se pierde. La estrategia de sectorizar la replicacin del ADN podr ser valorada en las prximas secciones, cuando se analicen las mltiples complicaciones que de be sortear la clula para que este proceso se concrete.
----------- Orgenes d~ replicacin~

1/ 4. La duplicaci n del AD N se gene ra a parti r de mt:1 lt iples orgenes

de repl ica cin

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Fig. 17-6. Esquema que

. ) i para sintctizarse el ADN comenzara a hacerlo a partir de uno de los del cromosoma y avanzara hasta arribar al otro extremo, la replica' "'" lardara en promedio unos 30 das. No obstante, la duracin de la fase S " G1 tiempo que larda el ADN en duplicarse- es de 7 horas aproximada" "'"lc, lo cual se debe a que a lo largo de cada cromosoma aparecen en el \ 1> N mltiples orgenes de replicacin, entre 20 y 80 por cada lazo de cro'" "ri na, es decir, por cada unidad de replicacin. 1 .os orgenes de replicacin se gestan al separarse localmente las dos ca,l,ll as del ADN (figs. 17-6 y 17-7). No surgen todos simultneamente y su "l''"icin ms temprana o ms tarda depende del grado de enrollamiento y ,,. " Iras caractersticas de la cromatina en los lugares donde se forman. 1.os orgenes de replicacin contienen tramos de ADN especiales, coml""stos por cientos de nucletidos. Aunque son diferentes entre s, todos po,.,. , una secuencia comn denominada ARS (por autonomot~\ replication l'rllence), de alrededor de once nucletidos (cap. 12-6). 1:1ADN de los orgenes de replicacin se halla asociado a un complejo de '''" protenas llamado ORC (por origin recognition complex). Este se une al ',, 'l \'-' 11 porque -como ocurre con los factores de transcripcin- invade los u1 cus del ADN y reconoce ciertas singularidades qumicas en sus superficies ' ~ l c: rnas (cap. 14-9). 1': 1 ORCes requerido durante la activacin de los orgenes de replicacin. '' " "que se ignora cmo acta, se sabe que al comienzo de la fase S recluta a o1' :~ s protenas -por ejemplo, las denominadas MCM (por minichromosome "'"in/enance proteins) y Cdc6p (por cell division cycle protein)-, con las <~ d e s integra un complejo mayor llamado pre-R C (por pre-replication com1''''1). Este cataliza el inicio de la replicacin despus de ser inducido por el ru,rm SPF (por S-phase promoting factor), que como se ver en el captulo 1H _4 aparece en la clula al comienzo de la fase S. /\ dems de participar en la activacin de los orgenes ele replicacin, el 1 >l impide que el ADN se reduplique durante la fase G2, por lo que evita ' I" V la c lula comience la mitosis teniendo un nmero de molculas de ADN 11 111 or que el normal (cap. 18-24).
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Fig. 17-7. Un sector cromatfnico durante la replicacin. (Corlesa de S. L. IVJcKnight y O. L. Miller Jr)

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304

FU NDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

17 . LA RE PLIC AClON DEL ADN

305

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3' 5' 3'

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En cambio, la otra cadena hUa -que usa como molde la cadena progenitora que corre en direccin 5'-73'- se sintetiza de un modo singular, ya que para poder crecer debe hacerlo e n direccin contraria al avance de la horquilla. Lo logra porque se fabrica de manera discontinua, Jo cual significa que se e onstruyen pe~eos tramos de ADN ~llamados fragmentos de Okazakique se Jiganntr~ conforme se van formando (fi g-:1:7:8). La figura 17-8 muestra cmo se sintetiza un fragmento de Okazaki. Fueel verse que se copia un segmento de la cadena progenitora relati vamente dejado del ngulo de la horquilla, situado "por detrs" del que diera origen 11 1 fragmento de Okazaki construido con anterioridad. Esto significa que el . gmento de ADN progenitor ms cercano a la horquilla permanece sin copiar, aunque a esa altura la otra cadena progenitora ya fue copiada por la cadena continua. Es por ello que a esta ltima se la llama tambin adelantada, a la discontinua, retrasada. Se dice que la replicacin del ADN es un proceso bidireccional no slo porque las dos cadenas se sintetizan en direcciones opuestas sino tambin porque las dos horquillas avanzan en direcciones divergentes. Adems es asimtrica, ya que una misma cadena se replica en forma continua de un lado de la burbuja y en forma discontinua del otro lado (fig. 17-9). En suma, cada burbuja presenta cuatro reas generadoras de ADN, dos que lo hacen de manera continua y dos de manera discontinua, las primeras cruzadas con las segundas (fi g. 17-9). Como vimos, la sntesis continua se produce e n direccin de las horquillas y la discontinua en direccin contraria. A continuacin anal izaremos de qu modo se sintetiza el ADN en la cadena continua (adelantada) y en la cadena discontinua (atrasada). Por motivos didcticos lo haremos en secciones separadas, aunque estos procesos -como los ya explicados y los que falta explicar- ocurren simultneamente. 17-7. La cadena de ADN que se sintetiza e n fo rma cont in ua comienza a replicarse a parti r de un ce bador Para iniciar la sntesis de la cadena continua de ADN, la ADN polimeranecesita, adems de una cadena de ADN 3' -75' molde, un extremo 3' paa:o poder colocar el primer desoxirribonucletido. Ese extremo lo provee una p quca pieza de ARN de unos 10 nucletidos llamada cebador (fi g. 17-8). 1.u formacin del cebador es catalizada por una ARN polimerasa especfica, lu ADN primasa. Se diferencia de las ARN polimerasas porque genera un t\ 1 ~ N orto que queda uuido ol t\ I)N copiado. 1Jun vo. fomuorlo e l e e l>nclooa , la :: nlcsis d 1i\ ON s produce por la ac~; i n ele In i\ 1lN pol ione lla 11 V Jo J'IO VI loor ele cleoxiooi honole'h' licios. l:slnNse e u
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Fig. 17-8. La replicacin es

bidjreccional. Adems es con-

5'

tinua en la cadena adelantada y discontinua en la cadena atrasada.

3'
5'

Fig. 17-9. Esque ma que muestra dos replicones contiguos y los lugares donde se
origina la replicacin. Asjmismo muesrra el carcter bidireccional de la replicacin y

(fig. 17-6). Ello da lugar --en cada extremo-- a una estructura con forma de Y denominada horquilla de replicacin, ilustrada en la figura 17-8. Sus ramas representan a las cadenas del ADN separadas, y el tronco, a la doble hlice en vas de separacin. Las dos horquillas que nacen en cada origen avanzan en direcciones opuestas. Desaparecen cuando colisionan con sus similares de las burbujas contiguas, al culminar el acercamiento progresivo entre ellas (fig. 17-9). Co mo es obvio, esto no ocurre con la horquilla que recorre el tramo distal del telmero. El segmento de ADN que se sinteti za a partir de un origen de replicacin recibe el nombre de replicn. La replicacin concluye cuando se conectan entre s todos los replicones. La accin cooperativa de miles de ellos es lo que permite que el ADN se sintetice en un tiempo relativame nte breve para el ciclo vital de la cl ula.

los sectores donde el ADN se

sintetiza en forma continua y discontinua.

17- 6. Exist e n d ife re ncias en el modo como se sintetiza n las dos ca denas nuevas de ADN
Si bien hasta el momento se ha analizado la estrategia general usada por la clula para replicar su ADN en e l menor tiempo posible, poco hemos dicho sobre la propia sntesis del ADN y menos sobre los detalles moleculares que dan Jugar a la separacin de sus cadenas. Slo adelantamos que la sntesis necesita un molde de ADN preexistente y enzimas llamadas ADN poli me rasas, y que tiene lugar por el agregado de nucletidos en el extremo 3' de las cadenas hijas. Esta ltima condicin, y porque las dos cadenas de la doble hlice son antiparalela s (fig. 17-3), crea durante la sntesis del ADN una primera dificultad. En efecto, dado que en cada horquilla los nucletidos de una de las ca denas corren en direccin 5' -73' y los de la otra lo hacen en direccin 3'-75', la primera, al copiarse, tendra que gestar una cadena hija en direccin 3'-75', algo que ninguna ADN polimerasa puede realizar. La clula resuelve el problema recurriendo a estrategias diferentes para l':a bricar las dos cadenas nuevas. As, el tramo de cadena hij a que crece en direccin 5'- > 3' - cuyo 111old<' es la cadena progenitora 3'-75'- se construye sin mayor s o111pli.:ar ie\l ll'N, medi ante e l agrcgaclo ctmlimw de nu~; l 6tidos c;11 su ;xlr<.'llll 'l' 11 na(clicln qo w S \' tk spl:aY .a l:a hooqor ll n ( 1i . 1'! K) .

306

FUNDAMENTOS DE B IOLOGIA CELULAR Y MOLEC ULAR

17. LA REPLICAC!ON DELADN

307

Fig. 17-10. Unin de la abrazadera deslizante a la ADN poi i meras a. A la derecha se i lustran las tres subunidades proteicas que componen la abrazadera.

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1

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Abrazadera deslizante

ADN polimerasa Helicasa

'

cuentran en el ncleo como desoxirribonuclesidos trifosfato (dATP, diTP, dCTP, dGTP) y se agregan secuencialmente en el extremo 3' de la cadena en crecimiento siguiendo el orden marcado por los nucletidos de la cadena de ADN que sirve de molde (fig. 17-4). La energa que se requiere para la replicacin del ADN es tomada de los propios desoxirribonuclesidos trifosfato, que li beran dos fosfatos cuando se ligan entre s (fig. 17-4). Dada la natu raleza bidireccional de la replicacin, al in iciarse la sntesis continua del ADN, en cada origen se forman dos cebadores divergentes, uno en cada cadena ele la dob le hlice abierta (fig. 17-9). Seguidamente, la ADN polimerasa 8, que es la enzima que cataliza la sntesis de la cade na continua, agrega un dcsoxirribonucletido en el extremo 3' del cebador y luego los sucesivos nucletidos en el extremo 3' ele la cadena e n crecimiento. La figura 17-11 muestra que la ADN polimerasa 8 se localiza cerca del ngulo de la horquilla ele replicac i n. Cuando la horq uilla arriba al extremo del replicn, la cadena continua toma contacto con la cadena d iscontinua del rep licn veci no -que avanzaba en direccin contraria- y otra enzima, la ADN ligasa. une el extremo 3' de la primera con el ex tremo 5' de la segunda (fig. 17-9). Adems, donde se iniciara la sntesis de la cadena continua, el cebador es removido por una nucleasa r epara dora - ser descrita en la seccin 17-21y reemplazado por una pieza equivalente de ADN generada con la ayuda de una enzima especial, la ADN polimerasa ~ - Finalmente, esta pieza de ADN se conecta con el resto de la cadena continua mediante la ADN ligasa. Una caracterstica de las ADN poli merasas es su tendencia a desprenderse del ADN de la cadena mo lde. Empero, mientras hacen su trabajo permanecen unidas a l debido a que son sostenidas por una abrazader a deslizante. Como muestra la figura 17- 10, la abrazadera se une a la polimerasa y rodea al ADN, de ah que impide el desprendimiento de la enzima pero no su deslizamiento. Se li bera de las ADN polimerasas ~ y 8 apenas stas se detienen, es decir, cuando la ~ completa el tramo de ADN que reemplaza al cebador y la 8 alcanza el extremo del repl icn. Slo entonces las enzimas se desprenden del ADN. Dada la pequeez del cebador, la ADN polimeras ~ se mantiene unida al ADN por un periodo muy breve. La ab.!:.azadera deslizante se forma con el concurso de tres subunidades proteicas iguales entre s denominadas PCNA (por proliferating cell nuclear antigen), cada una integrada por dos dominios topolgicamente idnticos.

Cebador

iiJ

ADN pohmerasa

SSB

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1
ADN primasa

l>lg. 17-11. Cadenas adelantada (o continua) y atrasada (o discontinua) del 1\ I>N durante la replicacin. La primera es sintetizada por la ADN poli mera' " 0: la segunda, por la A DN polimerasa a. L as f iguras de la derecha muesll tnl, en la cadena atrasada, la evolucin del bucle que se genera duranle la fnlcsis de cada fragmento de Okazaki. L as protenas SSB mantienen a esa ' IH h; na estirada pa ra evitar q ue se aparee n entre s sus bases compJement'arius.

17- 8. La cadena de ADN que se sint et iza en forma discontinua requ iere muchos cebadores
Como se acaba de ver, la cadena continua necesita un solo cebador, el cual se instala apenas comienza la replicacin. En cambio, la cadena discontinua requiere que la ADN primasa fabrique m ltiples cebadores, uno para cada fragmento ele Okazaki (rigs. 17-S y 17- 11 ). l .a enzima r sponsahlt.: d l:1 sfnwsis dl' los fnl~llll'lllus ll1 ()Juznki vs la AUN mlhmrnsia o . lJII< ' N<' llalla 1111ida ll lu i\ 1l N l"'lillli'll > 'lll i y 1"" llo ,,,.
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De manera similar a la ADN polimerasa 8 en la cadena continll:l. la ADN pol imerasa a coloca el ptimer desoxirri bonucletido p111 10 al extremo 3' del cebador del fragmento de Okazaki, lo liga 1> d y agrega los s ucesivos desoxiJTibonucletidos en el extremo 1 ' tld fragmento en crecimiento. Lgicamente, Jo hace siguiendo ,1 orden marcado por los n ucletidos de la cadena de ADN que '.II'VC de molde pma formar la cadena discontinua (fig. 17-4). En la seccin 17-6 se dijo que la cadena discontinua se ll ama t1 1111 bin retrasada porque cada fragmento de Okazaki comienza a ' ' 11tstruirse despus de haberse sintetizado un tramo de la cadena ,outinua. Dado que el retraso es ele alrededor de 200 nucletidos, 1 '1 ADN molde del fragmento de Okazaki tiene ese largo cuando '11 1pieza a replicarse. Cabe agregar que la ADN pri.masa y la Al) N polimerasa a necesitan unos 4 segundos para anexar los 10 dbonucletidos del cebador y los cerca de 200 desoxirTibonu1'1 tidos del fragmento de Okazaki, respectivamente. Como muestra la figura 17- Il , a medida que avanza la horquilla de replicacin, se acorta el ADN molde y se alarga la doble hli n: que resulta de la sntesis del fragmento de Okazaki. Adems M ' crea un segundo ADN molde, e l del fragmento de Okazaki que sintetizar en el prximo ciclo. Obsrvese que dos de los tres klllentos mencionados - la doble h lice y el segundo ADN ll>o ldc-- forman un bucle que crece entre la ADN polimerasa a y l'i ngulo de la horquilla de replicacin. 1~1 bucle se forma porque la ADN polimerasa a no puede desl11.:1rsc activamente sobre e l ADN molde debido a que, como se vio, s halla en e l ngulo de la horqui lla de replicacin unida a la i\ 1lN polilllcrasa 8. Por consecuencia, le conesponde al ADN H>Id d s li ,.ars~.: n r lac i6n a lit enzima, lo cual genera un bucle i< loll ,IIId l'l<'l'il'lth' IJII<' 11;1('1' lll>sihlc IJII 1i\i)N ll ll>ld ~.: SI' 1.:011 > V H ' II ll 1' 11 1111 !1 tlt~h l t Jt, l1 1 1\ ' 111 !11 11 ' Jn /\J)N pn l i ll ll' l ll ~ ! !l I Y :.t I I III V

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FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

17. LA RBPLICACION DBL ADN

309

va de su lugar. Cabe agregar que existen otros modelos tericos de bucle que proponen evoluciones distintas a la que se acaba de describir. El modelo presentado aqu es uno de los ms difundidos y, como los restantes, deriva de estudios efectuados en clulas procariotas. Otro dato que revela la figura 17-1 1 es que los dos ADN moldes --el que se acorta y el que se alarga- estn asociados a mltiples unidades de una protena llamada SSB (por single-strand DNA hinding), cuya funcin es mantener relativamente rectos a esos ADN simples para evitar que se apareen las bases complementarias de sus propias cadenas, lo cual impedira la labor de la ADN polimerasa a. Debe sealarse que una vez que la clula fabrica las SSB necesarias, stas se reutilizan mientras dura la replicacin, ya que sus unidades se transfieren de los ADN molde que se acortan a los ADN molde que se alargan. Al igual que las ADN polimerasas o y p, la ADN polimerasa a no se desprende del ADN molde debido a que se le asocia una abrazadera deslizante, cuyas partes se separan - y la abrazadera se desarma- apenas el fragmento de Okazaki termina de sintetizarse (figs. 17- 10 y 17-11). Luego el bucle se endereza y sus dos componentes --el fragmento de Okazaki y el flamante ADN molde- quedan si tuados en el lado opuesto de la enzima (fig. 17-11). Ello crea las condiciones para que comience a formarse un nuevo fragmento de Okazaki, lo cual ocurre una vez que se forma el cebador y que la ADN polimeras a a se une al ADN molde como consecuencia del rearmado de la abrazadera deslizante. Como se vio en la seccin 17-6, a partir de los orgenes de replicacin cada una de las dos cadenas de la burbuja da origen a dos cadenas divergentes, una que crece en forma continua y otra en forma discontinua (fig. 17-9). Dada la manera como se construye la cadena discontinua, su extremo 3' corresponde al extremo 3' del primer fragmento de Okazaki sintetizado, y su extremo 5', al extremo 5' del ltimo fragmento. Adems, el primer fragmento se liga al extremo 5' de la cadena continua del replicn, mientras que el ltimo se liga con el extremo 3' de la cadena continua del replicn contiguo. La ADN polimerasa a interrumpe su actividad despus que agrega el ltimo nucletido del fragmento de Okazaki, cuyo extremo 3' queda junto al extremo 5' del cebador formado precedentemente (fig. 17-8). Del mismo modo que en la cadena continua, los cebadores de la cadena discontinua son removidos por una nu cleasa repara dor a y reemplazados con piezas de ADN construidas por la ADN polimerasa p. Luego acta la ADN ligasa, que suelda el extremo 3' de esas piezas con el extremo 5' de los fragmentos de Okazaki precedentes. 17 - 9. En los t e l meros la replicacin del ADN e s di rigida po r la telo merasa En el captulo 12-6 se dijo que el ADN de los telmeros, a pesar de qu por su ubicacin puede fusionarse con el ADN de otros telmeros o degradarse mediante una nucleasa, en condiciones normales no corre esos riesgos porque se dobla sobre s mismo y las protenas TRF le forman un capuchu protector. Tanto el doblez como el capuchn se ilustran en la parte inferior de la figura 17-12. Obsrvese que el ADN se dobla porque una de sus cadcuas es ms larga que la otra e invade un tramo cercano de la doble h6licc, lu qlll da lugar a una triple hlice de ADN de unos 150 nuck:t'ltidus d xt usitu1. Cabe a 'regar que la cud 'tt:l dis outitllta d 1 i\DN tl'inlllr licn N r' N IIII'ti ~ 1 dl' 1111:1 lll:llll"f:l sill' lri:ll'. .:,, tIIV l1 i\ DN poi IIII'Ill.'lll 11 1111 1"~~'" ' 'C>II'illllll tl

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Fig. 17-12. Replicacin del ADN en Jos telmeros. En la figura inferior se ilustran las protenas TRF y el lazo que se fonna en el extremo libre de los telmeros.

11!11110 de ADN que debe reemplazar al ltimo cebador que se elimina de esa ulcna porque carece de un extremo 3' a partir del cual pueda comenzar a 11 1"1111arse. Por consecuencia, en cada una de las sucesivas divisiones celula" 'N, con la eliminacin del ltimo cebador se pierde un tramo del ADN telo111 rico, lo que provoca su progresivo acortamiento. Naturalmente, si al cabo de un determinado nmero de divisiones los cro1111 > somas no revirtieran ese acortamiento, no slo perderan los telmeros si"" que comenzaran a perder informacin gentica. En la mayora de las cl11 lns esto no sucede porque despus de alrededor de 50 divisiones el acortalll ll'lltO telomrico llega a un nivel que les impide iniciar uria nueva divisin. M.1 Han, esas clulas envejecen y mueren debido a que desde sus telmeros "l'"tados surgen seales que activan al gen de la protena P53, lo c ual, como 1 v r en los captulos 18-29 y 22-6, bloquea la divisin y determina la 1111wlt 'de las clulas. As, la muerte sobrev iene antes de que las clulas pier1h111 informacin gentica. l:u alg unas clulas pertenecientes a las lneas germinativas del testculo y 1 1 1VIII io (cap. 19-3), lo anterior no ocurre a pesar de que se dividen repeti>11111 11'1111', lo <.: ual se debe a que contienen un complejo enzimtico ribonucleoJ I ~<>tt l , dSl' l ado para rtX'IIp<'l lll J i\I)N tCJomriCO que pierden dur:tlltC Jas

310

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLEC ULAR

17. LA REPLICACION DEL ADN

311

Fir~.

17-1:\. Separacin de las dos c:uhnas < i<l 1\DN .a nlwl e h-

divisiones. Ese complejo se llama telom erasa y est integrado por varia protenas y un ARN de alrededor de 4SO nucletidos llamado ARNte (cap 13-2), que incluye la secuencia A UCCCAAUC (fig. 17-12). Veamos cmo acta la telomerasa, adelantando que sus propiedades catalticas derivan d< su fraccin proteica. En los telmeros la cadena 3' ~5 ' del ADN est compuesta por numeros;" secuencias AATCCC consecutivas que, junto con sus complementaria' TTAGGG de la cadena S' - >3' , se van perdie ndo durante las sucesivas divisio nes celulares. La recuperacin del ADN telomrico comienza e n un ciclo ce luJar ulterior, c uando la secuencia AUCCCAAUC del ARN de la telomerasa se une al e xtremo 3' de la cadena S' - >3', colocndose en el lado de la caden; 3'~S ' del modo ilustrado en la figura 17- 12. A partir de ese momento la cadena 5' ~3' re ne los requisitos que le per miten crecer: tiene su propio extremo 3' libre y una secuencia de nucletido~ que le sirve de molde, la del ARN de la telomerasa. Puesto que a medida qut crece provoca el corrim iento de la telomerasa, el proceso se reitera varias ve ces. Concluye cuando la cadena 5' ~ 3' recupera su longitud y el telmero St' libera de la telomerasa. Como se ve, la telomerasa es una ADN polime rasa que copia una secuen cia de ARN, de modo que se comporta co mo una transcriptasa inversa (cap. 17-24). Resta describir cmo la cadena 3' ~ 5 ' recupera su longitud. Es restaurada por la ADN polimerasa a, que utiliza como molde el ADN 5' ~3' recin sintetizado y agrega los nucletidos complementarios a partir del extremo 3' del ARN de un cebador previamente fabricado por la enzima ADN primasa. Fi nalmente, el cebador es removido y la enzima ADN ligasa une el antiguo extremo 5' de la cadena con el extremo 3' del segmento recin formado. Dado que no existe un balance exacto e ntre las prdidas telomricas y sus recuperaciones peridicas, la longitud de los telmeros vara en los distintos cromosomas. Se sospecha que los telmeros no son estructuras diseadas nicamente para evitar el acortamiento progresivo de los ex.tremos de los cromosomas. En estudios sobre envej ecimiento celular se ha comprobado que en medtos de cultivo las c lulas provenientes de embriones y de ind ividuos jvenes se dividen ms veces que las clulas provenientes de individuos de mayor edad, las cuales, adems, mueren mucho antes. Este fenmeno celular seconoce con el nombre de senescencia replicativa. Muchos investigadores creen que las clulas jvenes cultivadas viven ms porque sus telmeros recuperan el ADN perdido a una velocidad mayor que los telmeros de las clula s envejecidas, lo cual estara relacionado con la reduccin progresiva de la sntesis de la telomerasa que tiene lugar en las clulas a medida que se suceden sus divisiones. Esto ltimo no ocurre en las clulas ca ncerosas, cuya telomerasa no se reduce o se halla aumentada, lo que explicara por qu esas clulas suelen dividirse en forma perpetua cuando s las cultiva (cap. 2 1-3). Coincidente mente, varios estudios han de111ostra do que la telomerasa s sint 1i ~.ad a 0 11 las <Julas d ln urnyorfa dl' los l'I II\"<'

17-10. La topoisomerasa 1 y la girasa disminuyen la tensin t orsional que se produce en la doble hlice del ADN al separarse sus dos cadenas por la accin de la helicasa

!" hwqnilla

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Sil CCII ISt.'l' llt.'IIC ill lllt."C'fl ll it-!1, CVII Ud H p o1 lllk lopcli',IIIIH'I IIWI 'l ,

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Debido a que el ADN es una molcula compuesta por dos cadenas helioidales apareadas y enrolladas entre s, su sntesis presenta una dificultad mJ icional, soslayada hasta ahora para no complicar el anlisis de los puntos u1teriores. 1 Hemos visto que las ADN polimerasas copian los nucletidos del ADN d spus que las dos cadenas de la doble hlice se separan. La separacin es producida por una enzima especfica llamada helicasa , que se sita en el ngulo de la horquilla de replicacin por delante de las ADN polimerasas y a corta los puentes de hidrgeno entre las bases complementarias de las dos ,adenas de la doble hlice (fi g. 17-11 ). Este proceso requiere energa, que es lomada del ATP. Conforme avanza la horquilla de replicacin, la helicasa deja tras de s traHIOS de las dos cadenas del ADN con sus nucletidos expuestos. Recordemos que para dar lugar a la cadena discontinua, los nucletidos de la cadena progcnitora 5' ~3' permanecen un tiempo sin replicar, combinados con las SSB. Dada la naturaleza helicoidal del ADN, la helicasa no puede abrir la doble hlice del ADN como si abriera un cierre relmpago. El modelo que se muesIra en la figura 17-13 nos ayuda a comprender por qu. Conforme las cadeIHIS del ADN se separan a ni vel de la horquilla, se va acumulando delante de sta --en la doble hlice no abierta todava- una torsin cada vez mayor. ( 'omo es de suponer, esa torsin hara inviable la separacin de las cadenas por la helicasa. Por lo tanto, para que la accin de la enzima no sea frenada ,s necesario evitar el superenrollamiento con un desenrollamiento equivalen! , a fin de prevenir excesivas tensiones torsiouales en los segmentos de la doble hlice an no replicados. El desenrollamiento es producido por dos enzimas especficas, la topoisolrasa I y la girasa (o topoisomerasa Il). Ambas utilizan energa y evitan las vueltas en exceso mediante un proceso que se cumple en tres pasos. En el primer paso, la topoisomerasa 1 corta una de las cadenas de la dohlc hlice; en el segundo, la cadena cortada gira en tom o de su propio eje; en ,. tercero, los extremos cortados se vuelven a unir. \L En cambio, la girasa no corta ~n a sino las dos cadenas del AD N, las cuak s restablecen sus umones despues de haber gtrado. ~@.r-~'n Corno se ve, ambas enzimas se comportan como .v """\:\ uucleasas (cortan al ADN a nivel de las uniones fos~ J..~~ 1< ,Ji ster) y ADN ligasas (reconectan las piezas cor? 4f3.. ruJas despus de haber rotado el ADN). ~ ~ La girasa es una de las protenas que integra el ~~ ll clamio proteico en el que se sostienen los lazos de 0 ,romatina de 30 nm (cap. 9-9); se asocia con el ADN ,,. lazo colocndose cerca de sus extremos, donde ,., un pondra una suerte de articulacin giratoria siu<i lar a la mostrada en la figura 17-14. Con respecto " la topoisomerasa I, existiran varias en cada lazo, pl"S operaran entre las burbujas de replicacin. 1,;1 lopoisomerasa I y la girasa se diferencian no '" '" porqn la primera corta una sola cadena del Fig. 17-14. Efecto hipottico de la girasa para evitar el su1lN y la sl"gnda corta las dos. sino por la magniJil'l'cnroll:uniento que s producirfa n e l A D~ .cmo const t ' lli' llt' ill dt lll JI"p UI IU' II 1( 'lli'l dn: rudtnu:./ '' "' .,. ;.u:: vln tus, yu '1 '"" vi d,,anolliunintu '(1 11"

.1

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312

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

17. LA REPLlCAC!ON DELADN

313

Histonas preexistentes

Origen

Histonas nuevas

111 H4 _

_ _ _N_J _ _ _ _,

:A r

{ ~----'------ H2A +H2B

Nucleoplasmina

Fig. 17-16. Participacin de la protena N 1 y de la nucleoplasmina en el annado de los

nucleosomas.

NUCLEOSOMA

5' 3'

Origen

Fig. 17-15. Agregado de histonas nuevas durante la replicacin del ADN.

produce la topoisomerasa 1 es de corto alcance y el de la giras a abarca una ex tensin de ADN mucho mayor. Por otra parte, no se descarta que ambas enzi mas sirvan para prevenir en redos en las molculas de cromatina fu era de la replicacin, ya que podran actuar - recurriendo a una analoga imperfecta- como tijeras y manos qm para desenredar un extenso hilo enmaraado lo cortan primero y lo anudan despus.
17- 11. l a topoisomerasa 1 es requerida durante la transcripcin

Durante la transcripcin del ADN, cuando la ARN polimerasa avanza y abre el lado frontal de la burbuja (fig. 14-2), se forma un superenroUarnientn e n la doble hlice similar al que se produce durante la replicacin. No obs tante, el superenrollamiento de la transcripcin es aliviado solamente por h1 topoisomerasa l.
17-12. la com pactacin de la cromati na retrasa la replicacin

""' in. Los nucleosomas nuevos se forman con histonas preexistentes e hislooas nuevas (figs. 17-7 y 17-15). l.os nuc leosomas se construyen en dos pasos. En el primero, las histonas 11 1 y H4 se ligan e ntre s mediante la protena NI (cap. 12-9) y "son entre111das" al ADN por un complejo proteico llamado CAF-1 (por chromatin 1 11\,,.,.nlhly facto r). En el segu ndo, las histonas H2A y H2B, asistidas por la nudeoplasmina (cap. 12-9), se unen a las histonas H3 y H4 y completan el "' t ~ mero (figs. 12-8 y 17- 16). La mayor parte de las histonas nuevas se sintetizan en la fase S y se incor11"' :111 a los nucleosomas apenas el ADN es duplicado (fi g. 17-15). Durante la fase S, casi todas las copias -entre 20 y 50- de los genes de lu; cinco histonas (cap. 13-7) se transcriben simultneamente. Por lo tanto, en 1 1 , rase S la concentracin de los ARNm de las histonas es muy alta, aunque "" slo porque aumenta su sntesis sino tambin porque disminuye su degraoln in (cap. 16-21 ). La pequea cantidad de histonas que se sintetiza fuera de la fase S servira 1111r;1 reemplazar a las que envejecen. Ello es infrecuente porque las histonas 111 bastante longevas y suelen mantenerse durante toda la vida de la clula.
1/- 14. la replicacin const ituye el prlogo de la divisin ce lular

El enrollamiento extremo de la cromatina, derivado de los sucesivos gra dos de compactacin causados por la asociacin del ADN con las histona~ (cap. 12-9), impide la replicacin. En el captulo 14- 12 se analizaron alguno~ mecanismos por medio de los c uales, durante la transcripcin, la ARN poli merasa sortea parte de la compactacin de la cromatina. Hasta el momento no se poseen datos ciertos sobre mecanismos anlogos en la replicacin. A pesar de ello, no se duda de que la compactacin del ADN afecta la replica cin, ya que la heterocromatna, a diferencia de la eucromatina (cap. 10-12), se replica muy tardamente en la fase S. Esta diferencia puede apreciarse cuando se compara la replicacin del ero mosoma X activo con la de su homlogo compactado (cuerpo de Barr); la de ste es bastante ms tarda a pesar de que ambos cromosomas X son virtual mente idnticos. Tambin hay diferencias en la replicacin cuando se compara el ADN d<' las...bmH:Ias R (ricas en G-C apareados) con el ADN de las bandas G y Q (ri eas en A-T apareados) (fig. 12-17): las bandas R se replican durante la prime ra mitad de la fase S y las bandas G y Q lo hacen durante la segunda mitad. El significado de estas bandas ha sido analizado en el captulo 12-13.
17-13. Como el ADN, las histonas tambin se sintetizan en la fase S
.

omo sealamos al comienzo del captulo, al concluir la replicacin los 1.. unosomas contienen u.na doble dotacin de ADN y las molculas gemelas s decir, el par de cromtidas- quedan unidas por el centrmero hasta la """ rase de la divisin celular. As, la replicacin del ADN constituye el prl.,o de la divisin , por lo que parte de lo analizado en este captulo habr de lo 'lomarse en el prximo, dedicado a la mitosis y su control.

MUTACION DEL AON

1/- 15. l as al teraciones del ADN pueden deberse a mut aciones gnicas o a aberraciones cromosmicas El material gentico se halla en constante peligro de ser alterado, no slo por la accin de agentes ambientales sino tambin espontneamente, por 1 k nplo, como consecuencia de errores que ocurren durante la replicacin. uando las alteraciones del genoma involucran a uno o a unos pocos nu' k6tidos, se denominan mutaciones gnicas. Otras veces las alteraciones son de tal magnitud que afectan al cariotipo, 1" 1r lo cual llevan el nombre de aberraciones cromosmicas. Pueden ser es'"' turales o numricas. En las aberraciones estructurales se hallan afectadas 1''"1 s extensas de un cromosoma, que pueden perderse, invertirse, duplicar,,. <> translocarse. En las numricas, en cambio, el cariotipo exhibe un nme1>< d(; cromosomas menor o mayor que el normal. l ~n este captulo nos ocuparemos exclusivamente de las mutaciones gni' ~: . ya que las aberraciones cromosrnica.s sern analizadas en el captulo 20.
1/ 1G. las
mutacion < ~

Hemos dicho que el ADN se replica serniconservadoramente, es decir. qm las dos cadenas progenitoras, al separarse para su replicacin, se rcpart 11 <"11 ambos cromosomas hijos (seccin 17-2) (fig. 17-5). Respecto de 1<1~ nuclcosomas, se sabe cmo se s grcgan sus hislonas, i\1 cabo el la repli<'n< i<'>ll sr r parl n apan: nt 'lllt"lll\ 11! a/ 111 ,... ,,,. "'""'1 non1. ridw. hqu , 1'"' '"'Pw , . ~. r w: tld w uluuvtTt:l,. d t' Id ltt " l .,. ,,., ,,nt ,,,

gn;cas t ienen diversas consecuencias

111 ,,(, ,: <"<>IIIIIIICS

1 .11~ 111111a i<HH' ~ '<

,,

consisten en la sustitucin(](; un nu-

' lt~1111 dn por 01!11 , 1 IJ 111 111 1tl j d (dt lcn Ul) dt 11110 41 V:Uins lllll"k llidus, O \ ' JI

314

FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLEC ULAR

17. LA REPLICACJON DEL ADN

315

~
N-H--0

<

A TAA CT A G

----H-~N /~ >=N \
0---H-N\ Citosina H Guanina
H

N~

111 1 1 1 1 11 1
t, T A T T G A T
Desaminacin

Apurinizacin

C G A T A A C,T A .G GCT

1 11
A

TTG A TC .

1 1 l. 1 1 1

Fig. 17-18. Consecuencia de la mutacin gnica espontnea producida por apurinizacin.

Uracilo

Adenina

<>udi ciones para la aparicin de individuos mejor adaptados al medio aml<il'nlc, base de la evolucin de las especies.

I/ 17. Existen varias clases de mutaciones gn icas espontneas

fN

N-H---0

Fig. 17-17. Consecuencias de mutaciones gnicas espontneas producidas por desaminacin.

~J
Adenina

N/'')---i. ___

-H-~~
o

CH 3 Desaminacin

}-N

\
Hipoxantina Citosina

Timina

la insercin (intercalacin) de uno o varios nucletidos en una molcula de ADN. Cualquiera que sea el tipo de mutacin, genera un cambio en la infor macin contenida en el gen y lleva a la produccin de una protena distintu de la esperada o a la ausencia de su produccin. Como se sabe, el cambio de un nucletido en un gen da lugar a un codn diferente y, en consecuencia, a la presencia en la protena de un aminocido que no corresponde (salvo que el nuevo codn sea "sinnimo" y, por lo tan to, codifique al mismo aminocido). Muchas veces el cambio de un solo ami nocido produce alteraciones sustanciales en las funciones de la protena, yu que la modificacin de su estructura primaria modifica las estructuras secundaria y terciaria de la molcula. La delecin o la intercalacin de un nucletido en un gen cambia el encuadre de los codones en el ARNm desde el sitio de la mutacin hasta el codn terminal (cap. 16-3). Ello suele traducirse en la produccin de una protena aberrante o, ms comnmente, en la interrupcin de su sntesis, al aparecer un codn de terminacin antes del lugar que corresponde. Las mutaciones pueden producirse en las clulas somticas o en las germinativas. En el primer caso, si bien son capaces de afectar el fenotipo de los individuos, no pasan a la descendencia. En cambio, cuando se instalan en las clulas germina tivas pueden transmitirse a la descendencia y heredarse de generacin en generacin. Para los individuos las mutaciones suelen ser perjudiciales. Por ejemplo, cuando corresponden a protenas involucradas en la morfognesis, las mutaciones se traducen en malformaciones congnitas anatmicas. Otras veces las protenas modificadas dan lugar a alteraciones funcionales o a trastornos metablicos. Como ejemplos de las primeras pueden mencionarse las hemoglobinopatas, en las que la presencia en la hemoglobina de un aminocido errado suele generar graves disfunciones sanguneas. En cambio, en los trastornos metablicos se alteran enzimas que participan en procesos sintticos y degradativos de diversas molculas. Las mutaciones tambin pueden afectar a genes necesarios para la supervivencia de las clulas o a genes involucrados en el control de la multiplicacin celular. En el ltimo caso suele descontrolarse la proliferacin de las <: lulas, con la consiguiente aparicin de cuadros canccrfgcnos (<:ap. 1X-30) , Consideradas d'sdc un ngulo hiol6gi o :lt>hal, las tlln!nl' i one ~ ~ nil'as lie
ll l 'll 1111

l .a mayor parte de las mutaciones gnicas que afectan a las clulas se pro"'"' n espontneamente, durante la replicacin del ADN. Ello se debe a que '"'"do se sintetizan las cadenas hijas pueden insertarse nucletidos incorrec'"'' o nucletidos de menos o de ms. Como se ver en futuras secciones, la 1' In la ha desan ollado mecanismos especiales para corregir tales errores y lo11 la mayor fidelidad posible en la duplicacin del ADN. Esos mecanismos 1 "1 1ln ni nan el 99,9% de los errores producidos durante la replicacin, de modo '1 '"' de los numerosos nucletidos inconectamente insertados cada vez que 1 opian los millones de pares de nucletidos del genoma humano, en pro""'dio persisten errados slo tres. Tambin existen mutaciones gnicas espontneas ajenas a la replicacin. lgunas aparecen como consecuencia de la desaminacin de las bases de los uudctidos, dada la facilidad con que pierden sus grupos amino. Como "'"t:stra la figura 17- 17, cuando la citosina se desami na se convierte en ura1"" que se aparea con la adenina y no con la guanina. Si la clula no corri1< 1 error reemplazando al uracilo por una citosina, en la prxima replica' lo1" - al asumir la cadena hija alterada el papel de cadena progenitora- in' 'l < lra una adenina en lugar de una guanina, y esa mutacin se instalara en <1 gcnoma. Algo anlogo ocurre --espontneamente tambin- cuando se d, .~ : nn i na la adenina, que al convertirse en hipoxanti na se aparea con la citolila en vez de hacerlo con la timina. Otras clases de mutaciones gnicas espontneas aparecen a raz de la npurinizacin, es decir, cuando una base - particularmente una purina- se do sprcnde de la desoxinibosa del nucletido (fig. 17-18). Por lo tanto, en < 'il<~s puntos -llamados sitios AP (por apurnico o apirimidnico)- los ge"''S carecen de informacin.

1/ - 18. Varios agentes ambientales inducen la aparicin de mutaciones gn icas

l~xisten tres grupos de agentes ambientales que al actuar sobre las clulas 11ulucen la aparicin de mutaciones: 1) los qumicos, que son los ms difund idos; 2) las radiaciones ionizantes, por ejemplo, la radiacin ultravioleta de lu lu ~.: solar, los rayos y y los rayos X, y 3) ciertos virus capaces de introducir ll 'mcntos de ADN forneo en los genes. Algunos de estos agentes incrementan la aparicin de mutaciones esponI I <~ H:as en el ADN (sustituciones de bases, deleciones, intercalaciones, desa""'la<.:iones, apuri nizaciones). Otros dan lugar a otras clases de cambios. Por ' i<' <11plo, los rayos y y los rayos X producen roturas en la doble hlice, rnien111s quc la luz ultravioleta forma dmeros entre pirirnidinas contiguas en una 1, . las dos cadenas del ADN. Los ms comunes son los dmeros de timina !11. 17- llJ). La unin entre dos ti minas vecinas distorsiona su apareamiento 1' '" 1 1 1 .-: adcninas d la adcna opucsla, lo cual altera la replicacin normal del
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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

L7. LA REPLJCACION DEL ADN

317

CGATAACTAG 1111111111 GeT ATTG A Te

Fig. 17-19. Formacin de dmeros de ti mina por accin de la luz ultravioleta.

~ Luz UV
REPARACION DEL AON

AA 0 CGA\Ii 1 TA C) 111 111 GeT I n \ AT C ~T 0

AG TGAeTTAG reA eTGAATe

ADN ligasa

AGTGAeTTAG TCACTGAATe

Desa-1 1 minacin

4 polimerasa p

17-19. Existen varios mecan ismos para reparar el ADN

AG TGAeTTAG eA UTGAATe

AGTGAeTTAG TeA TGAATC

ADN

Para cada tipo de alteracin del ADN existe un mecanismo de reparacin especial, dirigido por una combinacin de enzimas especficas. A continua cin analizaremos los mecanismos ms frecuentes utilizados por la clula pa ra corregir los errores en el ADN. En la mayora de los casos se basan en la informacin gentica complementaria existente entre las dos cadenas de la doble hlice, de modo que si una de ellas sufre alguna alteracin (mutacin), puede ser reparada a partir de la informacin normal contenida en la otra. Co mo en cualquier proceso biolgico, los mecanismos reparadores de errores en el ADN pueden fallar, con la consiguiente aparicin de mutaciones gnicas.
17-20. La ADN polimerasa corrige los errores que ella misma comete

glicosidasa~
AGTGAC TTAG .

ADN \

eA

TGA A

~""'""""~
Foslodieslerasa

Fig. 17-20. Accin de las enzimas que reparan el ADN mutado por desaminacin.

1/-22. Las desami nacioncs y las apurinizaciones se reparan con las mismas enzimas

Durante la replicacin del ADN, para que un nucletido pueda ser agre gado en el extremo 3' de la cadena hija en crecimiento es imprescindible que el nucletido incorporado precedentemente sea el que corresponde. Ms an, si la ADN polimerasa inserta en forma accidental un nucletido inco erecto, "percibe" el error y no agrega nuevos nucletidos, de modo que el crecimiento de la cadena se detiene transitoriamente. El error es resuelto por la propia enzima mediante el ejercicio de una funcin adicional conocida co mo "lectura de pruebas". As, la ADN polimerasa, ante la presencia de un nucletido insertado in correctamente, retrocede y lo elimina. Para ello utiliza la actividad exonu cleoltica 3' ~5' de una de sus subunidades. Una vez eliminado el nucletido, la sntesis del ADN progresa normalmente. Como vemos, durante la replicacin la ADN polimerasa controla los errores que ella misma comete y adems los corrige. Sin embargo, dada la importancia de la integridad del ADN para la vida celular, si falla esta " lectura de pruebas" se pone en marcha un segundo sistema de reparacin que se cumple de la manera descrita en la prxima seccin.
17-21. Existe un segundo sistema de reparacin a cargo de una nucleasa reparadora

La aparicin en el ADN de uracilos en lugar de citosinas - como conse11 ncia de desaminaciones espontneas- da lugar a un mecanismo de repa1 ncin que utiliza una ADN glicosidasa especfica. Esta reconoce y corta Ia 1t>ncxin entre la base errnea -el uracilo- y la desoxirribosa, de modo que tlcja al nucletido sin su base (fig. 17-20). En forma similar, otra ADN glicoidasa especfica remueve la hipoxantina que se produce al desaminarse la tull:nina. Los sitios AP que se generan evolucionan del siguiente modo. La desoxi" ihosa sin base es removida por la AP endonucleasa y una fosfodiesterasa, qt tl: cortan, respectivamente, el extremo 5' y el extremo 3' del sitio AP y relltlll:Ven el azcar. Luego la ADN polimerasa p coloca el nucletido correcto 1 '11 d lugar vaco y la ADN ligasa pone fin a la reparacin. Estos tres ltimos pasos se utilizan tambin para reparar los sitios AP que w producen como consecuencia de las apurinizaciones espontneas (sec1 i lll 17-17).
1

1/- 23. En la repa racin de los dmeros de timina intervienen dos nucleasas

En primer trmino, el o los nucletidos errneos son removidos por una nucleasa reparadora, la misma que remueve a los cebadores en la sntesis continua y discontinua del ADN (secciones 17-7 y 17-8). Para ello, la nucleasa corta la unin fosfodister que conecta al nucletido incorrecto con el nu cletido contiguo. La reparacin se completa cuando la ADN polimerasa 11 sintetiza la pieza faltante y la ADN ligasa une esa pieza al ADN cortado. Debe existir alguna seal que le permita a la nucleasa reparadora distinguir en cul de las dos cadenas del ADN se encuentra el nucletido incorrecto. 1\n los procariotas tal reconocimiento se basara en la existencia de una dif ren cia transitoria en la mctilacin de dertas adeninas cntr las dos cadtnns dts pu <s d. la r pli a i6u. nudo qm ll'liii SCIIIIl' 1111 It'lll(lO , . ;111\' In ~~ nll::\:1 11 t '!Hit ' ll, llii!l y lnnll'lilul'itlll, ltil ,,,,,11,~~ 1Jt'~l (( llllt''tp1 1111dtll durnnt~ ,- '' llll (tultl

1"'

Generalmente las mutaciones inducidas por agentes ambientales son re(lllf'tldas por los mismos mecanismos que se utilizan para la correccin de las 1111t1aciones espontneas. En cambio, los dmeros de timina (fig. 17-19) producidos por la luz ultravioleta- son removidos por un sistema de en/ ttnas especiales, que hidrolizan simultneamente dos uniones fosfodister, 11tt:l a cada lado de la lesin. As, luego de reconocer la distorsin provocada por la presencia del dme1 11, sendas nucleasas cortan en la cadena afectada la quinta y la vigsima cuar' " 11nin fosfodister, contadas a partir del dmero en direccin 3' y 5', res('cvli vamente. A continuacin, el segmento de 29 nucletidos --que obviaII H' III incluye al dmero- es separado de la cadena normal por la helicasa, tll\' corta los puentes de hidrgeno entre las bases del segmento que hay que " ntovcr y las bases de la cadena normal. La reparacin se completa cuando 111 i\ 1>N polimerasa p reemplaza la pieza ausente por un tramo de ADN nuey., y la i\I)N ligasa lo une a l ADN anterior. :; , 111111 de las nu ka~: 11s 1(11<' l'<~mucvcn los dmeros de timina es dcfici nt
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318

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

17. LAREPLICACION DELADN

319

Fig. 17-21. Transposn con el gen de la transposasa y las secuencias de nucletidos inversamente repetidas en sus

Secuencia repetida

Gen de la transposasa

Secuencia repetida

Cortes del ADN mediante la transposasa

, 1 1 1 1 l!
j 111 ,, 1 11 1 1 11111 1 1\ 11 ( 11 ! 1 1 ; 1! 11 1 1 1 1 1) 1 1! 1 1 ! ,~ i 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 [ t ! 1

extremos.

halla mutado- se produce la enfermedad llamada xeroderma p igmento.w , caracterizada por una extrema sensibilidad de la piel a los rayos ultraviolet a.. de la luz solar. As, la exposicin de la piel a esas radiaciones da lugar a llllll alta incidencia de cncer cutneo.

1
[; : : : : :: : : : : : : : : 11 11 1 1

\
111111 (
1

j 1 111 !.! 1 1 1 !

11 1 1
) . ), !

11

1!

1 f

TRAN SPOSI CION DE SECUENCIAS DE ADN

17- 24. Los transposones son segmentos de ADN que sal tan de un lugar a ot ro del genoma

1 1::::, ,, :: ~,:, ,, ::::: fii':m:': " :':t:c:::::rn :::: :,: :, ::,:::::,.

Reparacin del ADN

Fig. 17-22. Cortes espaciados en el ADN efectuados por la transposasa. Obsrvese la insercin del transposn y la reparacin del ADN.

Durante muchos aos se crey en la existencia de una estabilidad absolu ta en el ordenamiento de los nucletidos en los cromosomas y, por lo tanto. de los propios genes. Sin embargo, para algunos tramos del ADN esto no,.,, cierto. A fines de la dcada del 40 Brbara McC!intock descubri segmento' de ADN que tienen la propiedad de pasar de un lugar a otro del genoma cu cepas de maz cuyas mazorcas presentan granos de colores diferentes. Basn dose en observaciones citogenticas propuso que los granos de color clmo eran producidos por segmentos de ADN que cambian ele posicin e inactivau al gen del grano pigmentado. Su hiptesis fue recibida con total descreimien to y se la ignor durante 20 aos, hasta que se hicieron observaciones equi valentes en la Escherichia coli. Se vio que estos segmentos de ADN transponibles --o transposonesson capaces de codificar una protena denominada transposasa, y que en sil' extremos poseen secuencias de nucletidos iguales si se las lee en direcciom' opuestas. El nmero de nucletidos en estas repeticiones invertidas es fijo para ca da transposn. En el transposn hipottico ilustrado en la figura 17-21 se oh serva al gen ele la transposasa -que es una enzima de restriccin- con la:. secuencias de nucletidos repetidas en sus flancos. La transposasa recono<.:t a esas secuencias en forma especfica, las corta y las inserta en un sitio dis ) tinto del genoma. Las secuencias repetidas presentes en los flancos del transposn son cau sa y consecuencia del mecanismo por el cual los transposones son extrado;. de un lugar del geno ma e insertados en otro. Como ilustra la figura 17-22, du rante ese proceso la transposasa efecta cortes espaciados, inserta el transpt 1 sn y realiza las reparaciones necesarias en el ADN. Los transposones tienen gran similitud con el ARN de los retrovirus. l .w, semejanzas son tan amplias que los retrovirus pueden ser considerados tran' posones especializados que aprendieron a saltar de una clula eucariota n otra. En el ciclo ele los retrovirus la informacin gentica contenida en d ARN es copiada en sentido retrgrado (ARN--;ADN) por una enzima llmn a da transcriptasa inver sa, y el ADN resultante es insertado en el genoma d la clula infectada. En la mosca Drosophila melanogaster la mayor parte del ADN repcliliv" est representado por unas 15 familias de elementos transponibl es. Existun t 'll el genoma entre 20 y 80 copias de cada familia. Se sabe que estas s ut.: ll t.: llli u ~ tienden a saltar de un lado a otro del genoma porqu e en las dislint:1 s cpns dt mo ~ c as los lransposon s s hallar\ locli:-.adns n los r<uhiSIIIIIas 011 1'"',., ll l;S dikl't'llh' .~: . l'tll ' tjc lnpln, ~11 In r vpn dl' ojos hl n u~ o:. ~;~~ t ' I I\ ' Pitllt 1111 <~ h
lllt ' III H ll l lll fl pptdhl, 11 1111

111 1d color rojo del ojo. La mayora de las mutaciones espontneas en laDro,,,,,!zila son causadas por transposones que saltan dentro de un mismo gen. En el hombre los elementos transponibles ms abundantes corresponden '' lts ADN repetitivos dispersos de las familias Alu y Ll (cap. 12-7), cuyas t'vuencias constituyen aproximadamente el 10% del genoma. La mudanza h secuencias Alu puede acanear consecuencias genticas importantes. Por 1 1mplo, se sabe que se producen deleciones (cap. 20-10) en regiones no Jt: nciales de ADN flanqueadas por otras secuencias Alu, por lo que la re' nnhinacin entre secuencias Al u dentro de algunos intrones podra crear ~~' nes nuevos. Otro mecanismo capaz de crear genes nuevos deriva ele la transposicin ,, , xones, que al combinar sectores funcionales de dos genes preexistentes 1 1 11 t.:de llevar a la formacin de un tercer gen. Por ello se considera que la fiel i .l>ilidacl genmica introducida por los elementos transponibles ha sido funtl ll tll ental para la evolucin. No obstante, la mayora de los genes nuevos han H l li ll 't~c ido por el mecanismo de duplicacin gentica (cap. 20-10) seguido 1 '' n una mutacin en la segunda copia del gen. Eso es lo que ha oc unido con 1 .-: genes de las globinas a y ~- los cuales se formaron a partir de un gen an, , -~ Ira! comn.

1/- 25. La s duplicaci on es gent icas sue len producir seudog enes
Muchos de los genes duplicados no se convirtieron en genes nuevos sino los llamados seudogenes, que son incapaces de generar ARN. Puesto que 1 "' sufren ningn tipo de presin selectiva, estos seudogenes -relativamen''' !'recuentes en el genoma de los mamferos- acumulan mutaciones, lo que l""' de convertirlos en genes funcionales.
11

1/ -26. Los seudogenes procesad os se originan por la transcripcin

inversa de mol cula s de ARN

. j,, dt 1 ~~t , llttulliH ' I ldtt!

f,

l ! t tll /

11 11 1 ljll d t l t ~l ll \1

1: 1 genoma contiene tambin seudo genes que no surgen por duplicacin n '- lica sino a partir de ARN que fueron copiados a ADN por la transcripta1 1 in versa e insertados en el genoma. Estos segmentos de ADN -que seco'" < en como seudogenes pr ocesados- se encuentran normalmente en las clt tl us de todos los mamferos. Estn flanqueados por secuencias repetidas de 1 \ 1)N si milares a las descritas en los transposones y podran ser "marcas" deptd!ls en el genoma por algunos virus portadores de ARN (retrovirus). La l111 1t'l ividad funcional de los seudo genes se debe a que carecen de secuencias ' ' / ' lll:clura ~ . Por otra r fl rl c, se h;l n descubierto seudogenes procesados cuyas 1 " '"l " 't;i,ittllt'S son 11111;1 l'"" '' id11 :: a lns d ' lns genes el l:~s inn1 unog l ohu lin:~ s, ltll p lt~l>itl ll l!> lllllllill lll jl

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FUNDAMENTOS DE BIOLOG1A CELULAR Y MOLECULAR

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La mitosis
Control del ciclo celular

18

MITOSIS
18-1. Un individuo adulto est formado por una s 10 13 c lulas
La capacidad de reproducirse es una propiedad fundamental de la clula. Se puede tener una idea de la magnitud de la reproduccin celular si se conoidera que un individuo adulto est formado por billones de clulas (10 13 ), to~ das derivadas de una sola, el cigoto. La multiplicacin celular sigue siendo notable aun en un ser adulto que ha dejado de crecer. Un ejemplo llamativo lo dan los eritrocitos, cuya vida media es de slo 120 das. As, el organismo debe producir unos 2,5 millones de eritrocitos por segundo para mantener su nmero relativamente constante. Esa reproduccin celular debe ser regulada de manera perfecta para que la formacin de nuevas clulas compense las prdidas y se mantenga el equilibrio.

18-2. En el ci cl o celular se interca lan perodos de interfase con divisiones celu lares
Como adelantramos en el captulo 17-11, las clulas pasan por un ciclo que comprende dos perodos fundamentales: la interfase y la divisin celular. Esta ltima tiene lugar por mitosis o por meiosis. A causa de los profundos cambios que el microscopio ptico permita observar, el perodo de divisin constituy durante muchos aos el punto de inters primordial para los citlogos, ya que la interfase fue considerada como una etapa de "reposo", a pesar de ser el perodo en el que ocurren las funciones ms importantes del ciclo celular, tanto en el ncleo como en el citoplasma. La mayora de las clulas pasan la parte ms extensa de su vida en interfase, durante la cual -si se van a dividir- se duplican todos sus componentes. Debe sealarse que algunos tipos celulares diferenciados se dividen rara vez, y que las clulas nerviosas, despus del nacimiento, no se dividen en absoluto; as, en las neuronas el perodo de intetfase dura toda la vida del individuo. El ciclo celular puede ser considerado como una compleja serie de fenmenos que culminan cuando el material celular duplicado se distribuye en las ~.: l u las hijas. La divisin celular es slo la fase final y microscpicamente visible de cambios previos a nivel molecular. As, antes que la clula se divida por mitosis, sus ptincipales componentes ya se han duplicado. En este aspecto la divisin celular representa la separacin final de las unidades molecularc~ y estructurales previamente duplicadas.
10- 3, La interfase co mpwnde los perodos G1, S y G2
pl lt 'll<" h

1:1 tt N o d ' m t odos itnqn fnli l:oNhri nd(l los prim ros indicios do qu la du11 dl' l All N " '' '"' ' d i l l lllll t 1 11 ln tor f'IIN l . M~N lilt'd t ' lu l' l ld l uultlll) rurru

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FUNDAMENTOS DE BJOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

18. LA MITOSIS

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Fig. 18-1. Cambios en el contenido del ADN nuclear durante las fases del ciclo vital de la clula. La letra e representa la cantidad de ADN contenida en un juego haploide de 23 cromosomas. 2c, contenido doble de ADN. 4c, contenido cudruple de ADN.

15<(

::f-,~--~\__
_ G1 S G2 M G1 S G2 M G1

Duplicacin del ADN

Mitosis

1------------Tiempo

--------------+

con timidina marcada permiti determinar el perodo exacto en que se produce la duplicacin del ADN, y demostr que la sntesis tiene lugar solamente durante un tramo limitado de la interfase, denominado fase S (por sntesis de ADN), que es precedido y seguido por las fases 01 y 02 (por gap, intervalo), en las que no hay sntesis de ADN. Esto llev a dividir el ciclo celular en cuatro fases sucesivas: O 1, S, 02 y M (por mitosis) (fig. 17-1). 02 es el tiempo que transcmTe entre el final de la sntesis de ADN y el comienzo de la mitosis. Como muestra la figura 18-1, durante la fase 02 la clula contiene el doble (4c) de la cantidad de ADN presente en la clula diploide original (2c). Despus de la mitosis las clulas hijas ingresan en la fase O l y recuperan el contenido de ADN de las clulas diploides (2c).

PRO FASE

PRO FASE

PROMETAFASE

18-4. El pe rodo Gl e s e l ms vari ab le de l ciclo celular

La duracin del ciclo vara mucho de un tipo celular a otro. En una clula cultivada de mamfero, con un tiempo de vida generacional de 16 horas, la fase O l dura 5 horas; la fase S, 7 horas; la fase 02, 3 horas, y la fase M, 1 hora (fig. 18-2). Los perodos S, 02 y M son relativamente constantes en la mayora de los tipos celulares. El ms variable es el perodo O l, que puede durar das, meses o aos. Las clulas que no se dividen (como las nerviosas o las del msculo esqueltico), o que se dividen poco (como los linfocitos), se hallan en el perodo 01, que en estos casos se denomina 00 porque las clulas se retiran del ciclo celular.
METAFASE ANA FASE TELOFASE Fig. 18-3. Esquema general de la mitosis.

Dijimos que la divisin celular comprende una serie de fenmenos por los cuales los materiales primero se duplican y luego se reparten en proporciones virtualmente iguales entre las dos clulas hijas. Todos los componentes de la clula -no slo los que estn relacionados con la transmisin de la herencia gentica- se duplican antes de que la clula se divida por mitosis. En los captulos respectivos se analizaron los mecanismos por los cuales se produce un aumento en el nmero de algunos organoides y el incremento de volumen de otros. La mitosis comprende tambin el problema de la continuidad de los cromosomas como entidades capaces de autoduplicarse y de mantener sus caracterstic~s morfolgicas a travs de las sucesivas divisiones, de ah que resulte necesario repasar los procesos vinculados con la repl icacin del ADN y los que dan lugar al enrollamiento de la ero matina. Entre los procesos que tienen lugar en el citoplasma, el nu,: llamativo es la formacin del huso mittico, que se organi 1.n cada vez que la clu la COIII \' 11 1,11 rl divi cl irs y d ~.:s ap!II'CI.i\' al 1i F ig. 18-2. Ciclo celular, con la duracin de nal ele la divi s i(HJ. Vvn '11111H q11 c \ ~r l un a rrnn 'l f~ui \' Sll'llc lnru l ,,nrr . .: ada rase c.:. n una c61ula qu l; se.:. di vide cada 16 111 \"l :l ll por 111 i1 ' 1tllllhlll 11 q nt ' Pll lrd trrr 111 I'Hrd d tlll d (,,tl t ' IH

18- 5. Descripci n ge ne ral de la mitosis

:11 osomas y su reparto entre las clulas hijas. Los microtbulos del huso na,. n de un par de centrosomas, los cuales se forman durante la interfase al dupli carse el centrosoma ilustrado en la figura 5-23 (seccin 18-12). Como corolario de la mitosis se produce la pa:.ticin del citoplasma y su distlibucin equitativa en las clulas hijas, fenmeno conocido con elnom1 re de citocinesis. En general, los procesos que dan lugar a las mitosis son semejantes en todas las clulas del organismo. Las figuras 1-12 y 18-3 muestran las diferen~t s etapas de la mitosis, que son consideradas como fases de un ciclo que co"' icnza al final de la interfase o perodo intermittico- y termina al co::cnzar la interfase siguiente. Las etapas en que se divide la mitosis son: profase, prometa fa se, m etafase, anafase y telofase . A partir de la penltit:: a comienza la citocinesis -o separacin de los dos territorios citoplasmli os hijos-, que culmina cuando concluye la telofase. En primer trmino, las distintas fases de la mitosis sern consideradas de 1111a manera eminentemente descriptiva, tratando de dar una idea global de los k 11menos que ocurren tanto en el ncleo como en el citoplasma. En secciollc's ulteriores se pasar revista a la ultraestructura y a la bioqumica de algutuls de esos fenmenos.
11!-6. Durante la profa se las cromtidas se condensan , se forma el huso mitt ico y se desintegra e l nuclol o

1,a deteccin de los cromosomas como filamentos delgados indica el cottli c mzo de la profas e. El trmino mitosis (del griego mitos, filamento) ex1" sa este fenmeno, que se vuelve ms evidente a medida que los cromo"'''us se siguen condensando por el enrollamiento de la cromatina. Como v :1110S en e l captul o 17-1, despus de la duplicacin del ADN en la fase S 111dn n oni OSOil'la cs t;\ onlpli ( NI o por dos molculas de ADN denominadas I ' IIIIIU~fhlnN ( J'i )', . 17 . ), i\ II II I) J) 11 11' IIVHI1 7,a la prof'HS C, J;s CI'Ont; iidas S '
IIIH 1 11 111 1\N 111)1111 /l v J!l l ll 11
\dt ll lt l , 1~ ' C \!1111 IIII'II H! (lt t ' tlll.' ll li n: l cuu ~N

u l

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18. LA MITOSIS

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A
METAFASE

~/~~Fibras

~\~~~~
del sler

18- 7. Durante la prom etafase se desintegra la carioteca

B
ANA FASE A

Lleva el nombre de prometafase la transicin entre la profase y la metafas<.:. Se trata de un perodo muy corto, durante el cual la carioteca se desintegra y los cromosomas - algo ms condensados- quedan en aparente desorden. Los centrosomas arriban a los polos de las clulas y -ya desaparecida la carioteca-las fibras del huso invaden el rea que ocupaba el ncleo. Por sus extremos libres algunas fibras del huso se conectan con los cinetocoros de los cromosomas; estas fibras se denominan cinetocricas. Otras fibras - llamadas polares- se extienden ms all del plano ecuatorial de la clula y sus !ramos distales se entrecruzan con los provenientes del polo opuesto. Existe un tercer tipo de fibras surgidas de los centrosomas, las fibras del ster; son ms cortas, irradian en todas direcciones y sus extremos se hallan aparentemente libres (fig. 18-4A). Volviendo a las fibras cinetocricas. es lgico pensar que, al tratar de conectarse con los cromosomas, no se unan a los cinetocoros todas al mismo tiempo. As, considerando a un cromosoma en particular, al unrsele primero las fibras que vienen de uno de los polos y despus las provenientes del polo opuesto, presenta durante un tiempo movimientos de alejamiento y de aproximacin respecto del plano ecuatorial de la clula. Finalmente, cuando ambas fuerzas se equilibran, el cromosoma se mantiene en ese plano.

18-8. Durante la metafase los crom osomas se co locan en el pl ano ecuat orial de la c lula
En la metafase, los cromosomas -que han llegado a su mxima coitdensacin- aparecen ordenados en el ecuador de la clula. Se acomodan de modo tal que las dos placas cinetocricas de cada centrmero quedan orientadas hacia los polos opuestos de la clula, "mirando" a los respectivos centrosomas (fig. 18-4A). marias) se vuelven claramente visibles debido a que se les han asociado dos placas proteicas llamadas cinetocoros, que dan hacia los lados externos de las cromtidas (fig. 18-6). Al principio los cromosomas estn distribuidos homogneamente en el nucleoplasma, pero luego se aproximan a la carioteca, de modo que aparece un espacio vaco en el centro del ncleo. Este movimiento centrfugo de los cromosomas indica que se aproxima el momento de la desintegracin de la envoltura nuclear. Tambin pueden observarse las constricciones secundarias de los cromosomas 13, 14, 15, 2 1 y 22. Otro cambio es la reduccin del tamao del nuclolo, hasta su desaparicin. Debido a la desintegracin del citoesqueleto, la clula tiende a hacerse esfrica; adems pierde sus contactos con las clulas vecinas o con la matriz extracelular. Simultneamente, el RE y el complejo de Golgi se fragmentan en vesculas pequeas. Pero lo que ms se destaca en el citoplasma es la formac in del huso mittico. Trtase de conjuntos de haces de microtbulos que surgen de ambos centrosomas, los cuales se alejan recprocamente pues se dirigen a los polos opuestos de la clula. Ms adelante veremos cmo - y en qu fases del ciclo celular- la clula forma el segundo cenuosoma. Como se seal en el captulo 5-5, el centrosoma est integrado por la matriz centrosmica -que es el lugar de nacimiento de los microtbulos- y un par de centrolos. Desde los centrosomas las fibras del huso irradian en todas las direcciones, pero las ms llamulivas son las que se extienden hacia el ccn1ro de la clula, dondl' dan ht.m '' 1W11 da,ion s d iiiiJllllllllldll 1'1111\'ionul.

Fig. 18-4. Fibras del huso mirrico y su comportamiento en la mcrafase (A), la anafase A (B) y la anafase B (C).

18-9. Durante la anafase los cromosomas h ijos se dirigen

hacia los polos de la c lula

Durante la anafase se produce la particin de las cohesinas de los centrmeros (cap. 17-1 ), hecho que ocurre casi simultneamente en todos los cromosomas (fig. 18-3). De inmediato las cromtidas -o cromosomas hijosse separan y comienzan a migrar hac ia los polos, traccionadas por las fibras cinetocricas del huso. Los cromosomas suelen adoptar la forma de una V. Los brazos de la V en los cromosomas metacntricos tienen la misma longitud, pero en los submetacntricos y en los acrocntricos son desiguales (cap. 12- 16). El centrmero, en el ngulo de la V, precede a las partes restantes del cromosoma en su "carrera" hacia el centrosoma. Como es obvio, en este proceso los microtbulos de las fibras cinetocricas se acortan progresivamente (fig . 18-4B). En cambio, aumenta la longitud de las fibras polares debido al mutuo distanciamiento de los polos de la clula, que por ello pierde su forma esfrica y adquiere un aspecto ovoide (figs. 18-3 y 18-4C).

18-1 O. Durante la t elof ase se forman los ncleos hijos

La llegada de los cromosomas hijos a los polos -con la consiguiente desaparicin de las fibras cinetocricas del huso- seala el inicio de la telofase. l .u clula se ha alargado un poco ms, de modo que las fibras polares exhiben nnn ntuyor longitud comp;.,ariils con las de la anafase. Los cromosomas co rll il' ll11111 11 d s molllll 'l< ' y N I' 111rus1ran acla vez menos cond nsados; as, en

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18. LA MITOSIS

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Procentriolo

18- 13. Los cinetocoros son los sitios de implantacin de los microtbulos
Como se dijo, las fibras del huso mittico que se unen a los cromosomas se implantan en los cinetocoros (figs. 18-4 y 18-6). Estos estn adosados al centr mero, es decir, al segmento ms estrecho del cromosoma (constriccin primaria). As, el centrmero no es slo el sector por el que las cromtidas hermanas se unen entre s a travs de las cohesinas (cap. 17-1), sino tambin d lugar donde los micro t bulos del huso se conectan -cinetocoros medianle- con los cromosomas. En los captulos 12-7 y 12-11 se vio que la mayor parte del centrmero contiene ADN repetitivo satlite y que se halla en una zona de heterocromatina constitutiva. Los cinetocoros estn situados en los lados del centrmero que dan a las cromtidas, de modo que en la metafase -que es cuando se ven mejor"miran" hacia sus respectivos polos celulares. En los cortes transversales el microscopio electrnico revela que cada cinetocoro es una estructura trilaminar compuesta por dos capas densas de unos 50 nm de espesor, y una capa intermedia, ms clara, de 25 nm de espesor (fig. 18-6). La cara externa del cinetocoro es convexa y en ella se implantan entre 30 y 40 microtbulos. En cambio, su cara interna es plana y est en contacto con la cromatina del centrmero. Se han observado fibras de cromatina surgidas de este ltimo que ingresan en la capa densa interna del cinetocoro y que luego de doblarse sobre sf mismas retornan al cromosoma. Aparentemente manti enen a los cinetocoros ligados al centrmero. Volviendo a la cara externa, posee una especie de corona fibrosa y los extremos de los 30 a 40 microtbulos que se anclan en su superficie estn asociados con protenas motoras de las familias de la dinena y la quinesina (cap. 5-8) (fig. 18-6). Ms adelante se analizar el papel que desempean los cinetocoros duranle la separacin de los cromosomas hijos en la anafase. La esclerodermia es una enfermedad humana que genera autoanticuerpos llamados CREST (por las iniciales de calcinosis, Raynaud's phenomenon, l'.wphageal dysphagia, sclerodactyly y telangiectasia), los cuales reaccionan w ntra los cinetocoros. Ello ha permitido usarlos como marcadores para reconocer y estudiar a las protenas cinetocricas, especialmente las motoras de las familias de la quinesina y la dinena y las que estabilizan la unin del cinetocoro con la cromatina del centrmero. Los autoanticuerpos CREST permitieron detectar a las protenas cinetocricas en todas las etapas del ciclo celular, aunque aparecen asociadas a los

Fig. 18-5. Duplicacin de los cenlro los antes del comienzo de la mitosis.

cierta forma este proceso representa la recapitulacin de lo sucedido en la profase, pero en sentido inverso. Al tiempo que los cromosomas se convierten en fibras de cromatina desenrolladas, stas son rodeadas por partes del RE, las cuales se integran hasta formar las envolturas nuc lea res definitivas en torno de los dos ncleos hijos. Adems, en los ncleos reaparecen Jos respectivos nuclolos.

18- 11. La ci t ocines is reparte e l citop lasma entre las c lu las hij as
La citocinesis, es decir, la particin d.el citoplasma, se inicia en la anafase. El citoplasma se constrie en la regin ecuatorial por la formacin de un surco en la superficie, que se profundi za a medida que la clula se divide. Tanto las fibras del ster como las polares se red ucen hasta desaparecer. Slo sobreviven los tramos de las fibras polares locali zados en la zona ecuatorial de la clula; componen el llamado cuerpo intermedio, que analizaremos ms adelante (fig. 18-7). Como es obvio, estas fibras quedan perpendiculares al surco que divide al citoplasma. Finalmente se restablece el citoesqueleto, por lo cual las clulas hijas adquieren Ja forma original de la clula predecesora y se conectan con otras clulas (si pertenecen a un epitelio) y a la matriz extracelular. Dirigidos por el citoesque!eto, los componentes citoplasmticos (mitocondrias, RE, complej o de Golgi, etc.) se distribuyen en las clulas hijas como estaban en la clula madre.

18-1 2. El ciclo de los ce ntrosoma s comprende la dupli cacin de los ce ntro los y de la ma triz cent rosmica

Los centrosomas comienzan a duplicarse durante la interfase, ms concretamente, al final de la fase G1 o al comienzo de la fase S. Para duplicarse, los dos cen trolos del diplosoma se separan y cerca de cada uno aparece un p r ocent rolo, que se dispone en ngulo recto con respecto al centrolo preexistente (fig. 18-5). Los procentrolos crecen lentamente durante las fases S y G2 y alcanzan su tamao definitivo al comienzo de la profase, que posee dos pares de. centrolos. Cada par de centrolos se halla en medi o de su matriz centrosmica, proveniente de la matri z centrosmica ori ginal, que tambin se ha duplicado. Como vemos , los centrol os no se duplican por divisin ni a pan ir de l lll molde . Duelo que los proccn trfo lossurg n c i ' Jl u di stun i <k lps e ut rfolt 1 s
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Fig. 18-6. Estructura del centrmero en un cromosoma metafsico. Se observan los cinctocoros. en lo> que se -in~c
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FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

18. LA MITOS IS

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centrmeros a partir de la fase S, que es cuando empezaran a formarse los cinetocoros. Con la ayuda de los autoanticuerpos CREST se localizaron los genes que codifican a las protenas cinetocricas y se determinaron sus secuencias. Hllanse en los propios centrmeros, entre el ADN repetitivo satlite que los caracteriza. As, adems de estar compuestos por ese ADN - el cual posee la secuencia alfoide mencionada en el captulo 12-7-, los centrmeros contienen los genes de las protenas cinerocricas. En los cinetocoros de los cromosomas humanos se identificaron, entre otras, seis protenas, denominadas CENP-A, CENP-B , CENP-C, CENP-D, CENP-E y CENP-F (por centromere protein). La CENP-A y la CENP-B estn asociadas a las fibras de cromatina del centrmero, de modo que no se localizan en el cinetocoro sino en la heterocromatina vecina. La CENP-C se encuentra en la capa densa interna del cinetocoro, entre las fibras de cromatina que la unen al centrmero. Respecto de la CENP-D, no se conocen su localizacin ni sus funciones. Finalmente, tanto la CENP-E como la CENP-F se hallan en la capa densa externa del cinetocoro con el fin de reforzar el anclaje de los microtbulos del huso mittico. Puesto que la CENP-E es la quinesi na mencionada anteriormente, se encuentra tambin en la cara externa del cinetocoro. 18-14. Los microtbu los del huso mittico son estructuras d inm icas En el citosol existe normalmente una abundante cantidad de tubulinas libres que se hallan en equiliblio dinmico con las tubulinas de los microtbulos (cap. 5-7). Cuando .la clula comienza la profase se despolimerizan los microtbulos interfsicos y se construyen los del huso mittico. As, en la mitosis slo existen microtbulos pertenecientes al huso. En la anafase, con el desplazamiento de los cromosomas hacia Jos polos, el huso comienza a despolimerizarse, por lo menos sus fibras cinetocricas. En la telofase lo hacen las fibras del ster y las polares, aunque estas ltimas no en toda su extensin, pues persisten los tramos pet1enecientes al cuerpo intermedio (seccin 18-11). Finalmente, antes de completarse la citocinesis, comienzan a reaparecer los primeros microtbulos interfsicos. En el captulo 5-6 se vio que los dos extremos de los microtbulos muestran polimerizaciones y despolimerizaciones diferentes, ya que en el extremo [ +) el crecimiento y el acortamiento son ms rpidos que en el extremo [-) (fig. 5-6). A diferencia de los citoplasmticos, en los microtbulos mitticos el extremo [-) no se halla bloqueado por la matriz centrosmica, de modo que los microtbulos del huso pueden polimerizarse y despolimeJizarse tambin por ese extremo (cap. 5-10). 18-15. Los microtbulos desplazan a los ce ntrosomas e n la profase, y a los cromosomas e n la prometafase y la metafase Los microtbulos son capaces de generar fuerzas mecnicas -de empuje y de traccin- sobre los cinetocoros y, por consiguiente, sobre los cromosomas. El empuje Xla traccin son consecuencia, respectivamente, del alargamiento y del acortamiento de los microtbulos (fig. 18-4B). Durante la profase, la migracin de los centrosomas hacia los polos se debe a que son empujados por el alargamiento de los microtbulos tendidos entre ellos. Dado que entre los tramos entrecruzados de los 111i -rott'lhulos polar s - n la zona 'euutorial d la ,lula s hu d tectudn liiUt pwto(nn lttC>to 111 hipt~lur dr 111 i'nllllilu de lus qui1W1. 111111, 1111 /il d 11 H' u tu qu1 1 " ' 'li ll ~u utlllll

to de unos sobre otros en direcciones opuestas sea un mecanismo adicional usado por la clula para trasladar a los centrosomas hacia los polos. En los fibroblastos, la separacin de los centrosomas se realiza a una velocidad de 0,8 a 2,4 ..m por minuto. En la prometafase, tan pronto como comienza la desintegracin de la carioteca y la regin del ncleo es invadida por los microtbulos, las puntas de las fibras cinetocricas establecen contacto con Jos cinetocoros y los cromosomas comienzan a movilizarse hacia el ecuador de la clula. Este traslado es consecuencia del alargamiento y el acortamiento simultneos de los microtbulos cinetocricos provenientes de los polos opuestos. Durante la metafase existe una suerte de ecuilib1io entre las fuerzas ejercidas por los microtbulos de ambos polos, lo cual mantiene a los cromosomas inmovilizados en el ecuador celular. 18-1 G. Otros t ipos de fuerzas movil iza n a los cromosomas en la anafase En la anafase se rompe ese equilibrio; ello provoca la pa11icin de los centrmeros y, por ende, la separacin de las cromtidas hijas y la movilizacin de los nuevos cromosomas hacia los polos. Lo hacen a una velocidad de 1 ..m por minuto. La caracterstica forma en V adoptada por los cromosomas indica que las fuerzas responsables de la traccin --como resultado del acortamiento de los microtbulos cinetocricos- son transmitidas a los cinetocoros. Un momento antes esas fuerzas fueron suficientemente intensas como para provocar la particin de los centrrneros. Existen dos teoras para explicar la migracin de los cromosomas durante la anafase: la del equiliblio dinmico y la del deslizamiento. La teoria del equilibrio dinmico sostiene que la despolimerizacin de los microtbulos - en sus dos extremos- es la responsable exclusiva del traslado; as, la fuerza mecnica derivada del desarmado de Jos microtbulos bastara para trasladar a los cromosomas. La teora del deslizamiento, aunque reconoce la despolimerizacin de los microtbulos, considera que stos se comportan como "rieles" sobre los cuales los cromosomas se desplazan mediante alguna protena motora asociada a los cinetocoros. 18-17. Durante la anafase, el alarga miento de la clu la agrega un fact or adicional pa ra la mig racin de los cromosomas hacia los polos En la anafase, el traslado de los cromosomas incluye dos procesos distintos pero concuJTentes, los cuales permiten dividir a este perodo en dos etapas, la anafase A y la anafase B. Durante la anafase A el traslado de los cromosomas hacia los polos corresponde a los movimientos descritos en la seccin anterior, vinculados con Jos microtbulos cinetoc1icos. En cambio, en la anafase B, el mutuo alejamiento de los dos conjuntos cromosmicos se produce a consecuencia del alargamiento que expelimenta la clula, por lo que est vinculado al crecimiento de los microtbulos de las fibras polares (fig. 18-4C). En la seccin 18-15 se vio que entre los tramos entrecruzados de estas fibras existe una protena motora bipolar del tipo de la quinesina, por lo que es posible que el deslizamiento de algunos microtbulos polares sobre otros constituya 1111 nn1rso ~;ompl ementari o para alejar a los cromosomas de
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18. LA MITOSIS

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Fig. 18-7. Citocinesis. El cuerpo intermedio y el anillo contrctil se han dibujado por separado, aunque ambas estructuras aparecen simultneamente.

Anillo contrctil

18-18. La carioteca se reconstituye durant e la telofase

En el captulo 12 desctibimos la carioteca, con sus dos membranas, los componentes de los poros y la lmina nuclear. Al finalizar la profase, la lmina nuclear se desarma (por la des polimerizacin de los laminofilamentos), la carioteca se desintegra en vesculas (como ocutTe con el RE) y los complejos del poro quedan ligados a ellas. Al alcanzar la clula la Lelofase, las vesculas derivadas de la desintegracin de la envoltura nuclear se asocian y construyen las cariotecas de los ncleos de las clulas hijas, con sus respectivos complejos del poro. Simultneamente, los la minofilamentos se repolimerizan y forman las lminas nuc leares.
18-1 9. Durante la mitosis no se sintetiza ARN y disminuye la produccin de protenas

La sntesis de ARN (o transcripcin del ADN) se detiene en la mitosis. As, la velocidad de dicha sntesis declina rpidamente en la profase tarda y desaparece en la metafase y en la anafase. Es que, como ocurre en la intetfase con los sectores heterocromticos, el ADN no puede ser transcripto porque se halla muy compactado (cap. 14-12). Por su lado, la sntesis proteica -a partir de molculas de ARN formadas con anterioridad- disminuye drsticamente durante la mitosis, casi al 25% de la que tiene lugar durante la intetfase. La sntesis de los ARN y de las protenas comienza a recuperarse a partir de la telofase.

18-20. La citocinesis se genera al f ormarse un anillo contrcti l com puesto por actina y miosina 11
Aunque en la telofase los microtbulos del huso tienden a despolimerizarse y a desaparecer, las fibras polares persisten en la zona ecuatorial de la clula, donde su cantidad aumenta. Estas fibras remanentes del hu~o mittico, junto con vesculas y matetial denso que se les asocian, componen una estructura llamada cuerpo inter medio (fig. 18-7). La citocinesis -o clivaje celular- deriva de la formacin de un surco en el ecuador de la clula, que aparece en la segunda mitad de la anafase (fig. 18-3). En la telofase, el sur co ecuatorial se profundiza hasta alcanzar al cuerpo intermedio, lo que indica que la particin del citoplasma est por concluir (fig. 18-8). El desarrollo del surco ecuatorial es el resultado de la formacin de un anillo contrctil en la corteza de la clula (fig. 18-7). Consiste en un haz do.: unos 20 filamentos de actina circunferenciales situados por clcbajn do.: la membrana plasmtica, perpeodiculares a los mi crot(ilnilos dd u rpu int o.:r medio. Esos filamcntos se ti sli1.:111 unos sohm ol1'os t t di'<<'< ''"''S <>IHI\', , tu. P<r la prcscuc ia <k pr<>t d uns "'"'"""' d<'l tip<~ .!1 l a ,,,.., ,~~ , JI (< 'llp. , 11 l.
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Fig. 18-8. Micrografa electrnica de una clula al final de la citocinesis. Las futuras clulas hijas se encuentran todava unidas por un pequeo puente que contiene los microtbulos del cuerpo intermedio, electrn icamenle muy denso. 1O.UOOx y 30.000x. (Cortesa de B. R. Brinkley.) tm, se cree que los filamentos de actina van perdiendo monmeros por des1'' > l i ul o.:ri ;~.acin. 1\1 lugar donde s l'ol'llln 1 anillo contrctil sera determinado - al finali1.111 la lllml'us 1"" 1.,,, ud ,t,tuhulos d 11\str, t!ttyos cxtcmos libres se trasllld lldll u al <'l 'lllld<H 11i l11 11 l11l11 1' 1111i1 Wil fa u la poliutclizaLi >11 <k 111011 llllcli'OS

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18. LA MITOSIS

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LA MITOSIS EN LAS CELULAS VEGETALES

18-21. La mitosis en las clulas vegeta les es algo dife ren te de la observada en las clulas anima les Existen diferencias entre animales y vegetales en la divisin de las clulas somticas. Aqu slo sealaremos las disimilitudes, ya que la mayora de los procesos que se registran en la di visin ce! ular mittica son comunes a ambas clases de clulas. En los vegetales superiores -como las angiospermas y la mayora de las gimnospermas- las mitosis son anastrales, es decir, carecen de centrolos y de fibras del ster (fig. 18-9). Esto es lo que indujo a sospechar que los centrolos no son indispensables para la formacin de Jos microtbulos. Para dar lugar a la citocinesis, la regin intermedia del huso mittico se transforma en el fragmentoplasto, que equivale al cuerpo intermedio de las clulas animales (fig. 18-9). El fragmentoplasto comienza a formarse al promediar la anafase. En el plano ecuatorial de la clula el microscopio electrnico permite ver que los microtbulos de las fibras polares del huso se asocian a un material denso y a vesculas derivadas del complejo de Golgi. Al principio el fragmentoplasto se dispone como un anillo en la periferia de la clula, pero luego, por el agregado de nuevos microtbulos y vesculas, crece centrpetamente hasta extenderse por todo el plano ecuatorial. Las vesculas aumentan de tamao y se fusionan entre s. Dan lugar -en las clulas hijas- a membranas plasmticas relativamente continuas, fenmeno que coincide con la transformacin del fragmentoplasto en una estructura llamada placa celular (cap. 3-30). Esta sienta las bases para la formacin de lapared celular (cap. 6-15), que es atravesada por tneles muy pequeos denominados plasmodesmos, los cuales permiten el paso de lquidos y solutos entre los citoplasmas de las clulas contiguas.

CONTROL DEL CICLO

CE~ULAR

18- 22. Existen mecan ismos que controlan la dinmica de los ciclos celu la res Las clulas se reproducen para posibilitar el crecimiento corporal y para reemplazar a las que desaparecen por envejecimiento o por muerte programada (cap. 22-1). Tambin Jo hacen durante ciertas situaciones patolgicas, como la reparacin de heridas. Para poder reproducirse, la clula primero duplica el contenido de su ncleo y de su citoplasma y Juego divide a estas estructuras en dos. La multiplicacin celular aparece al iniciarse la vida embrionaria, con la segmentacin de la clula huevo (cap. 21-7). Dada la rapidez con que se suceden las divisiones de segmentacin, solamente se duplican Jos materiales nucleares de esa clula (fig. 19-3). Por lo tanto, los componentes de su enorme citoplasma se van repartiendo entre las sucesivas clulas hij as. Esta forma de divisin concluye cuando en las clulas del blastocisto se recupera la relacin nucleocitoplasmtica caracterstica de las clulas somticas (caps. 1-14 y 21-7). En el captulo 17 vimos que el ADN y las molculas que lo acompaan se duplican durante la fase S del ciclo celular. La duplicacin de los componentes citoplasmticos abarca las fases G 1, S y G2. En la clula existen mecanismos especiales para coordinar los procesos de sntesis en el ncleo y en el citoplasma y determinar el inicio y la conclusin de las fases del ciclo celular. Las prxi mas secciones estn destinadas al estudio de esos mecanismos. 18-23. En el control de l ciclo celular intervienen ciclinas y quinasas dependie ntes de ciclinas Poco antes de finaJizar la fase Gl -cuya duracin vara en los distintos tipos celulares-, existe un momento en que la clula toma la decisin de dividirse. Recibe el nombre de punto de arranque o de control Gl (fig. 18-10). Oportunamente se ver que la decisin es tomada ante la presencia de sustancias inductoras provenientes de otras clulas. En el control de las divisiones celulares intervienen dos tipos de molculas: 1) las ciclinas, cuyo nombre se debe a que en el curso de cada ciclo celular alternan un perodo de sntesis creciente seguido por otro de rpida degradacin; 2) las quinasas dependientes de ciclinas, que al interactuar con las ciclinas fosforilan y activan a las molculas responsables de la divisin celular. Existen varias clases de ciclinas, cuyas concentraciones se elevan y descienden en diferentes momentos del ciclo celular. Las principales corresponden a dos grandes grupos: las ciclinas Gl y las ciclinas M . Por su lado, en las especies superiores se han identificado dos quinasas dependientes de ciclinas, hi Cdk2 (por cyclin-dependent protein kinase) y la Cdc2 (por celldivision cycle). No obstante, la existencia en el genoma de una numerosa familia de genes relacionados con estas quinasas indica que intervienen varias ms en la regulacin de los distintos pasos del ciclo celular. 113-24. La fase S se prod uce cua ndo la ciclina G1 activa a la Cdk2

Profase

Prometafase

)
Fibra cinetocrica Metafase Anafase

Fig. 18-9. Esquema de la mitosis en la clula vegetal. Obs~rv s In faltu de nll'folos y ole rlh"''' dd A>1

'lh111ada la decisin d dividirse, la clula deja atrs la fase G 1 e ingresa

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FUNDAMENTOS DE BlOLOGlA CELULA R Y MOLECULAR

18. LA MITOSIS

335

Ciclina M

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G2

Cdc2

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S
M

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Fig. 18-10. Diagrama que

ilustra los cambios de concentracin de las ciclinas G 1 y

mitlica durante el ciclo celular. La primera se asocia con la quinasa Cdk2, con la que forma el complejo SPF. En
cambio, la
~cgunda

se asocia

con la quinasa Cdc2 y forma el complejo MPF

ciones en sucesivas protenas intermediarias. La cadena culmina con la activacin de las molculas responsables de la replicacin del ADN. La Cdk2 se activa slo cuando la ciclina O 1 alcanza un determinado umbral de concentracin, ya que ste es un requisito indispensable para que se produzca la activacin (figs. 18-10 y 18- ll). Ms an, a partir de ese momento la Cdk2 y la cicli na O 1 se unen y componen un complejo proteico denominado SPF (por S phase-promoting j{!clor). El SPF induce la apertura de los orgenes de replicacin y activa amolculas involucradas en la sntesis del ADN , como las ADN polimerasas, la helicasa, etc. Como se seal en el captulo 17-4, el SFP acta a travs del complejo pre-RC. Dado que en cierto momento de la fase S la concentracin de la ciclina 01 comienza a declinar, cuando cae por debajo del umbral anteriormente citado se separa de la Cdk2, con lo cual el SPF deja de existir. Las ciclinas son degradadas por proteasomas (cap. 4-6). De las dos molculas, la cclina O 1 es la nica cuya concentracin vara, ya que los niveles de la Cdk2 se mantienen constantes a lo largo del ciclo celular. En cambio, la ciclina O 1 comienza a sintetizarse a partir del punto de arranque, se incrementa durante gran parte de la fase S, en un momento de sta comienza a declinar y desaparece en la fase 02 (fig. 18- 10). En una fase S normal el ADN se repl ica una sola vez, pues si as no fuese las clulas hijas tendran un nmero de cromosomas mayor que el normal. El impedimento para la aparicin de nuevas duplicaciones del ADN ya replicado depende del complejo proteico ORC (cap. 17-4). Los cuadros derivados de alteraciones en el control de este proceso se denominan poliploidas y sern analizados en el captulo 20-8. 18-25. En la fa se G2 actan mecanismos de seguridad

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G1
/

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Ciclina G1 Cdk2

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Fig. 18-11. Formacin de los complejos SPF y MPF durante el ciclo celular.

La pausa impuesta por !a fase G2 le provee a la clula un lapso durante el cual actan mecanismos de seguridad para controlar -antes que la clula se divida- si las molculas de ADN han completado su replicacin y, cuando corresponda, si fueron reparadas (cap. 17 -19). Adems, en la fase 02 se completa la duplicacin de los componentes citoplasmticos. 18- 26. La fase M se produce cuando la ciclina M activa a la Cdc2 Superados tales controles, comienza lafase M . El mecanismo que desencadena la mitosis es similar al que inicia la fase S, aunque con distintos pro tagonistas, pues en la mitosis intervienen la Cdc2 y la ciclina M . La s~,;g uu da comienza a sintetizarse a partir de la fase 02, antes qu' desapar "/. a la i clina Gl (fig. 18- 10). Cuando 1:1 t:iclina alram.:1 1111 dL'IL'I"IItiniulo llllliiiHI d('
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A continuacin, activada por la ciclina M, la Cdc2 fosforila --directamente o a travs de quinasas intermediarias- a diversas protenas citoslicas y nucleares, en particular a las que regulan la estabilidad de los filamentos del citoesqueleto, a las que componen los laminofilamentos de la lmina nuclear, a las histonas Hl, etc. Veamos algunas consecuencias de esas fosforilaciones: 1) Se desintegra la red de fllamentos de actina, de modo que la clula pierde contacto con las clulas vecinas (o con la matriz extracelular) y se vuelve esfrica. 2) Se desarman Jos microtbulos, aunque se forman Jos del huso mittico. 3) Se disgrega la lmina nuclear, y con ella la carioteca. 4) Se modifica la asociacin de la histona Hl con el ADN, lo que aumenta el enrollamiento de la cromatina y la compactacin de los cromosomas. Cuando la divisin celular concluye, estos y otros fenmenos se revierten debido a que las protenas que los producen se desfosforilan a causa de la desactivacin de la Cdc2. A su vez, la Cdc2 se desactiva porque la concentracin de la ciclina M cae a un nivel inferior del que se necesita para que ambas molculas se mantengan unidas formando el MPF. La disociacin del MPF ocurre al comienzo de la anafase. Tiene lugar nic.;amente si todos los cromosomas arribaron al plano ecuatorial de la clula y todos los cinetocoros se ligaron a los microtbulos cinetocricos del huso mittico, lo cual asegura la segregacin normal de los cromosomas hijos y su dc.;splazamiento hacia los respectivos polos celulares. Se ha comprobado que Jos cinetocoros que no se ligan a los microtbulos del huso producen una seal que impide la cada de la ciclina M -es decir, la disociacin del MPF- para que la clula detenga la mitosis antes de que comience la anafase. En condiciones normales esa seal no se genera y la clula entra en anafas<:. 1.o hace despus de formar un complejo proteico llamado ciclosoma o i\ 1'(' (por !IIUIJlha.\e-promvtinR complex), que induce la degradacin de la cii' lin: M y d las ,olwsinas (jlll' <1111'11 a las rom{lidas cnlr s (c,;ap. 17- 1 y s ' "'" 1H 'l),

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FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

t8. LA MITOSIS

337

18-27. Si la fase G1 es muy prolongada pasa a llamarse GO

Las clulas hijas derivadas de la mitosis ingresan en !a jase Gl de la in terfase y, si son inducidas por ciertos factores (seccin 18-28), repiten el ci clo seguido por la clula predecesora y vuelven a dividirse. En caso contra rio, la fase Gl se prolonga -a veces indefinidamente- y la clula "se reti ra" del ciclo, por lo que la fase G 1 pasa a llamarse fase GO (fig. 18-2). Una situacin diametralmente opuesta se da en las divisiones celulares de la segmentacin de la clula huevo, en las cuales la fase G 1 prcticamente no existe. Dado que la fase G2 tampoco existe, la interfase se reduce a la fase S, lo cual explica su corta duracin (seccin 18~22).
" 18-28. Diversas sustancias inducen la proliferacin celula r

La secrecin de las sustancias inductoras es regulada por mecanismos gue l1cnden a mantener un nmero adecuado y ms o menos constante de clulas k cada uno de los tipos celulares. Por ejemplo, la cantidad de eritropoyetina ~tc retada por los riones es proporcional a la destruccin de los glbulos ro~ ls en la sangre y aumenta a niveles considerables en caso de hemorragias. llna situacin similar se da con la ablacin parcial del hgado, en que se se~ 1dan grandes cantidades de HGF; este factor estimula la multiplicacin de los hepatocitos prx imos a la herida, que cesa cuando el rgano recupera su 1.unao normal.
1B-29. La protena P53 controla el estado del ADN antes de que la clula ingrese en la fase S

El ritmo con que las clulas se reproducen depende de diversos factores, que varian en los distintos tipos celulares. Por ejemplo, las clulas que surgen de la segmentacin de la clula huevo parecen tener un mecanismo in trnseco que, en forma automtica, desencadena una divisin apenas concluye la precedente. En cambio, las clulas que no se dividen permanecen en la fase GO porgue en sus citoplasmas no existen ciclinas ni quinasas clependien tes de ciclinas, probablemente por la presencia de factores que inhiben su produccin. En las clulas restantes --cuyo ritmo de reproduccin vara de acuerdo con el carcter particular de cada una- las mitosis dependen de sustancias inductoras provenientes del exterior, sea de clulas vecinas (secrecin paraerina) o de grupos celulares distantes (secrecin endocrina). En el captulo 11-2 se seal que estos inductores actan sobre receptores especficos. Las sustancias que inducen la proliferacin celular lo hacen en el momento del ciclo llamado punto de arranque. El cambio que provocan en el receptor pro mueve la sntesis de la ciclina G l. Entre las molculas inductoras de la multiplicacin celular se encuentran: 1) La somatomedina, que estimula la proliferacin de las clulas cartilaginosas durante el crecimiento seo. Esta sustancia es sintetizada en el hgado, en respuesta a la hormona de crecimiento hipofisaria. 2) Varios inductores llamados factores de crecimiento, en su mayoa secretados por clulas que se localizan en la vecindad de las clulas blanco (se crecin paracrina). As, los factores de crecimiento fibroblstico (FGF), epidrmico (EGF) y derivado de las plaquetas (PDGF) estimulan la proliferacin ele muchos tipos celulares, no slo los sugeridos por sus nombres. Otros ejercen acciones ms especficas; se trata de los factores de crecimiento d; los hepatocitos (HGF), de los nervios (NGF) y del endotelio vascular (VEGF). En el captulo ll ~ 12 se describieron los receptores celulares para estos factores y el modo como son conducidas sus seales en el interior ele las clulas. 3) Varias clases de factores hemopoyticos, cada uno responsable de la proliferacin de un tipo particular de clula sangunea. As, la interleuquina (IL-2) estimula la multiplicacin de los linfocitos T; el factor estimulante dt las colonias de granulocitos y macrfagos (GM-CSF) hace lo propio con los elementos progenitores de estas clulas, etc. Finalmente, la eritropoyelina, originada en los riones, es el factor hemopoytico encargado de estimular la proliferacin de los glbulos rojos en la mdula sea. La IL-2 y ;J (iM -('SI.son producidos por clulas vecinas a las clulas hlauco (s<:cn:ci >u pamniun), rni ntras qu la ritropoy tina lh:ga a la our dula (> Sl'H n 11av s do , :Hnlf',ll" (z.o
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Antes de ingresar en la fase S la clula controla el estado de sus molculios de ADN. El control es ejercido por una protena citoplasmtica llamada 1'53 (por su masa molecular, de 53 kDa), que es sinteti zada por la propia clula en respuesta a la aparicin de alteraciones en su ADN. El gen p53 que la oodifica pertenece a una categora de genes conocidos como supresores de tu~ 111nres, llamados as por causas que veremos ms adelante. La P53 se comporta como un factor de transcripcin que promueve la ex~ presin de los genes de otras protenas reguladoras -llamadas P21 y Pl~. que tienen por misin bloquear la actividad de la Cdk2. Dado que este efecto se opone al de las ciclinas G 1, la clula no replica sus molculas de ADN y permanece en la fase G l. Finalmente, si se comprueba que el dao en el /\ DN es peligroso para las futuras clulas hijas, la protena P53 vuelve a ac~ ruar, pero ahora para provocar la muerte de la clula y con ella la desapari~ r in del ADN daado (cap. 22~6). En lo que atae a la protena P21, si no resultara suficiente para bloquear a lu Cdk2, le queda otro recurso para impedir la mitosis: en el comienzo de la 1 plicacin del ADN se une a la abrazadera desli zante de PCNA (cap. 17-7) y unula su funcin. En la clula existen otras protenas reguladoras de la proliferacin celular, r omo la protena Rb (la sigla Rb deriva del tumor de la retina llamado retioooblastoma). Es codificada por el gen rb, gue tambin es supresor de tumo~ 1 s. La protena Rb inhibe la proliferacin celular cuando est fosforilada. Lo hace mediante el bloqueo de los genes de ciertas protenas necesarias para la replicacin.
18- 30. M uchos t ipos de cnceres se producen por la acum ulacin de alteraciones genticas

Si bien existen mltiples causas ambientales involucradas en la aparicin ok cuadros cancegenos, es sabido que en algunas familias se presentan cier~ ros tipos de cncer con una incidencia mayor que la habitual, lo cual ha lle~ vado a la .investigacin de las posibles bases genticas de la enfermedad. Se loan descubierto dos clases de genes ligados al cncer, los protooncogenes y los genes supresores de tumores. La alteracin de los primeros produce un incremento de la proliferacin celular, mientras que la falla de los segundos lkva a la prdida de los mecanismos normales que detienen la proliferacin. l.il cncer no se genera a partir de clulas normales que se transforman ex~ plosivamente en clulas malignas. Por el contrario, surge al cabo de sucesivo s cneraciones de clulas que pasan por estados precancerosos cada vez n1 rts :w nruados. Fsos " ~ '"""s sooo onsecuencia de la suma progresiva de mu~
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338

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

18. LA M ITOSIS

339

a los primeros e inactivan a los segundos-, lo cual al cabo de un tiempo instala la enfermedad en las clulas descendientes. Por aadidura, en las clulas cancerosas los cromosomas a menudo lucen rotos o con partes translocadas, y algunos se encuentran varias veces repetidos. Al parecer estos cambios no son consecuencia del desarrollo tumoral, sino que se hallan asociados a sus causas.
18-3 1. Los protooncogenes son genes normales, y los oncogenes, sus ve rsi ones defectu osas

Los protooncogenes son genes normales que codifican protenas implicadas en el control de la proliferacin celular y la muerte celular. Hasta el momento se han caracterizado aproximadamente cien, entre ellos los que codifican a las siguientes protenas (los nombres de los genes figuran entre parntesis): l) Los factores de crecimiento PDGF (sis), EGF (cap. 11 -12) y GM-CSF (seccin 18-28). 2) Los receptores de los factores de crecimiento PDGF, EGF (erb-B) (cap. 11-12) y GM-CSF (fms). 3) La protena Ras (ras), que es fosforil ada por receptores con actividad de tirosina quinasa (cap. 11-12). 4) La serina-treonina quinasa Raf (raf), que es activada por la protena Ras (cap. 11 -12). 5) Las tirosina quinasas Src (src), Fes (fes) y Abl (abl). 6) El receptor de la hormona tiroidea (erb-A), localizado en el citosol (cap. 11 -6). 7) Varias protenas nucleares que actan como factores de transcripcin, por ejemplo, las protenas Myc (myc), Myb (myb), Fos (fos) y Jun (jun). Los productos de los genes que activan promueven la proliferacin celular. 8) La protena Bcl-2 (bcl-2), incl uida en esta categora no porque se halla implicada en el conuol de la proliferacin sino en la supervivencia de las clulas (cap. 22-4). La denominacin de protooncogenes se debe a que, como resultado de mutaciones, pueden dar lugar a sus versiones defectuosas: los oncogenes. Estos se diferencian de los normales porque se transcriben desmesuradamente y generan cantidades excesivas de sus productos, o porque su transcripcin origina productos aberrantes. En ambos casos traen como consecuencia un aumento descontrolado de la proliferacin celular o una disminucin de la muerte celular (captulo 22). Diversos virus son portadores de oncogenes. Se cree que ingresaron en el genoma viral como protooncogenes, cuando - en alguna remota ocasinesos virus infectaron clulas de animales y los "sustrajeron"; una vez instalados en el genoma viral, los protooncogenes se transformaron en oncogenes. Respalda esta hiptesis el hecho de que en los virus los oncogenes no cumplen ninguna funcin. En la actualidad, cuando esos virus infectan a diversas especies animales, los oncogenes que les transfieren son causa de cuadros cancergenos (por ejemplo, el sarcoma de Rous en el pollo, provocado por el oncogn src). Si bien varios cnceres que afectan a la especie humana se hallan asociados con infecciones virales (por ejemplo, el virus de la h ~.:palilis 13 aumenta la incidencia de carci noma h p:lico, el papiloma vi1us iiiVlcIJWula la aparic i6n d c;l uc;n d~: nw llo ulv1 ino, <1 vi1ns dd sida ll1 u'< leo uopin ou e l sar
rnrna de 1\.upo, . i , t' lc ', ) , u lurllll llld !llll t'llli ' rrrn p rr1111 de l~lf , I 11 H i r t-~~ lrurrr!IIHH. ~~.

generado por oncogenes transferidos por virus. La presencia de oncogenes en las clulas cancerosas humanas se debe a la apa1 icin de defectos en los prol()oncogenes propios, al alterarse el ADN por mutaciones gnicas o por abenaciones cromosmicas estructurales (caps. 17- 16 y 20- 10). Es suficiente un sow alelo alterado de un protooncogn para transformar a una clula normal en una clula cancerosa o que puede llegar a serlo. Veamos algunos ejemplos de alteraciones de protooncogenes e n la especie humana. Se han observado mutaciones en el protooncogn ras en muchas clases de rumores, y se comprob que ese gen suele ser blanco de diversos carcingenos, lo cual confirma el papel de su amlogo alterado - el oncogn ras- en el desarrollo del cncer. Como consecuencia de la sobreexpresin del oncogn ras se generan grandes ca ntidades de protena Ras, que activa a otras molculas involucradas en la proliferacin celular (cap. ll- 12). En la leucemia mielgena crnica, el protooncogn abl, presente normalmente en el cromosoma 9, es translocado al cromosoma 22, donde se fu siona con el gen bcr (cap. 20-1 7). La unin da lugar a una ti rosioa quinasa Abl hbrida, cuya actividad es manifiestamente mayor que la de la Abl normal. Finalmente, en algunos ncuroblastomas el protooncogn myc suele estar amplificado unas 300 veces.
18-32. Los genes supresores de t umores previenen la multipl icacin < l normal de las c lulas

Mientras que los productos de Jos protooncogenes promueven el crecimiento celular, Jos derivados de los genes supresores de tumores inhiben la reproduccin excesi va de las clulas. As, los defectos de los genes supresores de tumores - a raz de mutaciones gnicas o de aberraciones cromosmicas- dejan a la clula sin esos frenos naturales. Por ende, si la clula adquiere otros defectos genti cos - ahora estimulantes de la actividad mittica- se genera un cuadro cancergeno. Dado que los genes supresores de tumores son recesivos, el defecto se manifiesta cuando se alteran los dos ale/os del gen (cap. 20-3). Hasta el momento se han caracterizado unos 10 genes supresores de tumores. Entre ellos se encuentran: El gen p53, situado en el brazo corto del cromosoma 17. La mutacin de sus dos alelos - con la consiguiente falta de protena P53- explica la gnesis de muchos tumores. Las cl ulas sin protena P53 no controlan el estado de sus molculas de ADN antes de la replicacin (seccin 18-29). Ell o provoca la acumulacin de alteraciones genticas en las sucesivas generaciones celulares -por ejemplo, en los protooncogenes-, lo cual propicia la aparicin de muchos tipos de cnceres. Algo similar ocune cuando se alteran los dos alelas del gen rb, perteneciente al brazo largo del cromosoma 13. En este caso, debido a la falta de protena Rb, se produce un tumor maligno en la retina de los nios, aunque tambin se han detectado defectos del gen rb en cnceres de muchos otros tej idos. Los defectos en los dos alelas son variados, ya que pueden encontrarse ambos mutados, ambos ausentes (por delecin), uno mutado y uno ausente, etctera. Otros genes supresores de tumores son: l) el gen mee (por mutated in colon carcinoma), perteneciente al cromosoma 5; 2) el gen dcc (por deleted in colon carcinoma), ubicado en el cromosoma 18; 3) el gen a pe (por adenomalou.v wlyposis r!F 1111' co /ou ). localizado en el cromosoma 5 (no emparentado W ll el C0111]1ItjoHIII< ' ' '" /\ I'C vislo en la secci6n Ul-26), y 4) el gen wt (por Wi /11 1.1' . "'""'.\' {1//1{ 1' /) 11 ,f, "'' ' !' ll l'lll'<liii!>Stllll:t 11.

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGJA CELULAR Y MOLECULAR

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La meiosis
Fecundacin

19

MEIOSIS
19- 1. La meiosis y la rep roduccin sexua l

La meiosis es un tipo especial de divisin celular, exclusiva de los organismos que se reproducen sexualmente. En muchos protozoos, algas y honr os, la reproduccin es asexual, es decir, por divisin celular simple o mitosis. En este caso todos los descendientes tienen una herencia que proviene de un solo antecesor. En cambio, en la mayora de los organismos multicelularcs (animales y vegetales) la reproduccin se realiza por medio de gametos o lulas sexuales generados por meiosis -espermatozoides y vulos en los animales- , los cuales se unen por un proceso denominado fecundacin. 1:llo da origen al cigoto o clula huevo, que porta el material hereditario de los dos progenitores y se reproduce por mitosis hasta formar un nuevo individuo multicelular. Las figuras ~ - 1 2 y 19-1 muestran Jos fenmenos bsicos de la meiosis (del griego meioum, disminuir). El genoma humano posee 46 cromosomas (44 + XY en el varn; 44 + XX en la mujer). Si la divisin fuese por mitosis, cada gameto tendra 46 cromosomas y el cigoto 92. Dado que esto se repetira en las sucesivas generaciones, el nmero de cromosomas se duplicara de generacin en generacin. La meiosis es el mecanismo usado por los organismos para evitar que ello suceda. As, mediante dos divisiones celulares consecutivas las clulas sexuales reducen a la mitad el nmero de sus cromosomas, con generacin de gametos haploides (cuatro espermatozoides en el varn; un vulo y cuerpos polares en la mujer). Los procesos que llevan a la produccin Jc gametos -llamados espermatognesis y ovognesis- tienen Jugar en las gnadas, es decir, en los testculos y los ovarios. Debe advertirse que para entender los aspectos ms importantes de la ci1ogentica (captulo 20) el lector debe tener una clara comprensin de la meiosis, tanto de su dinmica estructural como de su bioqumica. En este captulo describiremos la meiosis como un tipo especial de divisin celular. En ella se producen: 1) la reduccin del nmero de cromosomas a la mitad; 2) la recombinacin gentica, es decir, el intercambio de segmentos cromosmicos, y 3) la segregacin al azar de los cromosomas homlogos paternos y maternos. Se define como cromosomas homlogos a los dos cromosomas virtuallll ' nle idnticos -uno aportado por el padre y el otro por la madre- que ron viven en las clulas diploides. Debido a que en las clulas somticas hu" ':utas ex isten dos juegos hoploides de 23 pares de cromosomas cada uno 1111 juego haploid(' "i""l :ulo por 1 spcrmatozoidc y otro aportado por el
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342

FUNDA MENTOS DE BIOLOGIA C ELULAR Y MO LECUL AR

19. LA MEIOS IS

343

VARON

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Espermatogonios

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Leptonema

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Mitosis

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Espermatocitos

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Meiosis 1

8
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Ovocito t

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Paquinema Ovocito 11 y primer cuerpo polar

Espermtides

'~"m"oroid)) ~~
Fig. 19-l. Esquema de l a espermatognesis y l a ovognesi s en la especie humana. Se

W V o V a V a V

Meiosis 11

/J e--e
C igotos

8 \J (;: ;,.

Ovulo Y segundo cuerpo polar Diplonema

A B

19-2. Diferencias entre la mitosis y la meiosis Muchos de los fenme nos que ocurren en la mitosis suceden tambin en la meiosis. Por ejemplo, la secuencia de cambios en el ncleo y en el citoplasma, los perodos de profase, prometafase, metafase, anafase y telofase, la formacin del huso mittico, la condensacin de los cromosomas, la evolu cin de los centrmeros, etc. Existen, sin embargo, diferencias esenciales: 1) La mitosis tiene lugar en las clulas somticas y la mei"osis en las clulas sexuales. 2) En la mitosis cada replicacin del ADN es seguida por una divisin celular; en consecuencia, las clulas hij as presentan la misma cantidad de ADN que la clula madre y un nmero diploide de cromosomas. En cambio, en la meiosis cada replicacin del ADN es seguida por dos divisiones celulares - la meiosis 1 y la meiosis Il-, de las cuales resultan cuatro clulas haplo ides que contiene n la mitad del ADN (figs. 1-12 y 19-2). 3) En la mitosis la sntesis del ADN se produce durante la fase S, que es seguida por la fase G2. En la meiosis, la fase S es ms larga y la G2 es corta o falta (fi g. 19-3). 4) En la mitosis cada cromosoma evoluciona en forma independiente. En la meiosis -durante la primera de sus divisiones- los cromosomas hom6logos se relacionan entre s (se aparean) e intercambian partes de sus mol culas (se recombinan) (figs. 1-12 y 19-2). 5) La duracin de la mitosis s corlu ( 1 hora apm,\ irnad;nrw nl \'), nri, lul no :l
qn la Jn iosi. "
1 in r.

observan tres divisiones mitticas sucesi vas por parte de los espermatogonios y los ovogo-

nios, las respectivas di visiones meiticas y la fecundacin del vul o (22+X) por el espermatozoide (22 +X o 22+ Y) .

lnlerlase

Anafase

1
A A

Gametos

A
B

F ig. 19-2. bquema general de l a meiosis, que ilustra el apareamiento de los cromosomas homl ogos. el intercambio de algunos de sus segmentos y l a segregaci n de l os cromoso-

mas. Los cromosomas proceB dentes de cada progeni tor estn representados en azul y en roj o, respectivamente.

<) Otra diferencia fundamental es que en la mitosis el material gentico

lll'rruanccc constante en las sncesivas generaciones de clulas hijas (a menos
" ' " ' 111111 r:u 1 111111:r ionc:1 r' u io 'lls " ah rrm.:ioncs crnmosmi as). mientras que
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FUNDAMENTOS DE BfOLOGfA CELULAR Y MOLECULAR

19. LA MEIOSIS

345
D

19- 3. Descripcin genera l de la meios is

Como se observa en la figura 19-1, las divisiones meiticas comienzan des pus de vatias divisiones mitticas de los esper matogonios y los ovogonioN , es decir, de las clulas germinati vas menos diferenciadas del testculo y d ovario. Al trmino de las divisiones mitticas, parte de los espermatogonios y de los ovogonios se diferencian, respectivamente, en esper ma tocitos 1 y en ovocitos 1, los cuales llevan a cabo la meiosis J. Como corolario de la priml' ra divisin meitica se generan los espermatocitos 11 y el ovocito 11, que son las clulas que realizan la meiosis ll. Finalmente, la segunda divisin mei tica culmina con la formacin de las espermtides y el vulo. Debe agregar se que las espermtides se convierten en espermatozoides y que -por la~ causas que se sealan en la seccin 19- 15- en la mujer se le da el nombrl' de vulo al ovocito II. La figura 19-3 muestra las divisiones mitticas y me iticas de las clulas germinativas, la formacin del cigoto y las dos primeras divisiones de seg mentacin (las caractersticas generales de las divisiones de segmentacin se estudian en los captulos 18-22 y 2 l -7). Adems, seala la condicin haploi de o diploide y el contenido del ADN nuclear de las clulas que llevan a ca bo esos procesos, de cuyo anlisis se ocupan las prximas secciones.
19-4. La meios is comprende dos division es ce lul a res

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G2

G1 Mitosis

Meiosis

Interfase

t t

Meiosis 1 1

t
Mitosis

t
Mitosis

Secuencia de las divisiones celulares - - - - - - - - - - - - -

19-6. Durant e el leptonema los cromosomas aparenta n ser sim ples

Al comenzar elleptonema (del griego lepts, delgado, y nema, filamento) <:1 ncleo aumenta de tamao y los cromosomas se tornan visibles (figs. 19-2 y 19-4A). Ade ms presentan una gran diferencia respecto de los cromosomas de la profase mitti ca: a pesar de haberse duplicado su ADN (durante la rase S) y, por lo tanto, contener dos cromtidas cada uno, parecen ser simples cn vez de dobles. Con frecuencia la mayora de los cromosomas se doblan y sus dos extremos (los telmeros) se fijan en un rea circunscrita de la envol1ura nuclear cercana al cen.trosoma.

Ya dijimos que la m eiosis comprende dos divisiones celulares. La meio sis I se distingue de la meiosis I.I (y de la mitosis) porgue su profase es muy larga y en su transcurso los cromosomas homlogos se aparean y recombinan para intercambiar material gentico. Los perodos de la mitosis son insuficientes para describir los fenmenos que ocurren en la meiosis, cuyos estadios progresan en el siguiente orden:
Preleptonema Leptonema Cigonema Paquinema Diplonema Diacinesis

19-7. Du rante el cigonema se prod uce e l apa ream iento de los cro mosomas hom logos, ent re los cuales se fo rma e l complejo sina ptonm ico
Durante el cigonema (del griego zygn, pareja) tiene lugar el primer fenmeno esencial de la meiosis: los cromosomas homlogos se alinean entre s mediante un proceso denominado apareamiento o sinapsis (fig. 19-2). El apareamiento comprende la formacin de una estructura compleja --observable con la ayuda del microscopio electrnico- , conocida con el nombre de com plejo sinaptonmico (CS) (figs. 19-5, 19-6 y 19-7). El proceso puede comenzar en cualquier punto de los cromosomas. As, en algunos casos los hollllogos se unen primero a nivel de uno de sus extremos y la unin progresa hacia el otro extremo como un cierre relmpago. En otros, en cambio, la aso'iacin se produce simultneamente en varios puntos a lo largo de los homlogos. El apareamiento es muy exacto y especfico, pues se produce punto por punto entre los homlogos. No obstante, los cromosomas quedan separados por una distancia de unos 200 nm, que es ocupada por el complejo sinapton" 'ico. En trminos moleculares esta separacin es considerable, pues el dimctro del ADN es de 2 nm y algunas partes de ambos ADN deben desplazarHL' 1 00 nm para poder encontrarse y recombinarse en medio de ese espacio. 1:1 S est integrado por dos componentes laterales y un componente cenl nll (l'igs. 19-5, 19-6 y 19-7). Los componentes laterales se desarrollan al fiqrll d~l l~,;pll)ncma y el centra! aparece durante el cigonema. Sobre cada coml'""'nlc lat,ral s t aplican las do.~ cro111(olidas h nnanas dc tillO dc los 'I'OIIIO'a ''' lll"
llltlllllltll',lli l

Profase 1
MEIOSIS 1

1
Prometafase 1 Metafase 1 Anafase 1 Telofase 1 Interfase Profase 11 Metafase ll Anafase 11 Telofase 1!

Fig. 19-3. Clulas germinativas diploides (D) y haploides (H) y cambios en el contenido del ADN nuclear durante las mitosis q ue preceden a las divisiones meiticas. en el transcurso de estas ltimas, en los gametos, en el cigoto y en las dos primeras divisiones de segmentacin. Espermatogonios y ovogonios (marrn). Espermatocitos 1 y ovocitos 1 (amarillo ). Espermatocitos 11 y ovocitos 11 (azul). Espermatozoides (rojo) (el vulo no existe en la especie humana). C igoto (verde). Clulas embrionarias derivadas de la primera divisi n de segmentacin (violeta). Fase G 1 del ciclo celular (GJ ). Fase 02 (G2). Fase S o duplicacin del ADN (S). Contenido simple de ADN (le) . C ontenido doble de ADN (2c). Contenido cudruple de ADN (4c).

MEIOSIS U

En primer trmino analizaremos detalladamente los cambios que se suc den durante la meiosis 1 -comenzando por los estadios de la profase 1- . que como se vio tienen lugar en los espermatocitos 1 y los ovocitos l.
19-5. Durante el pre leptone ma los crom osomas son difciles de observar
l\lJirtltrlfollt'ltlll t '"'"' ~ Ponclr
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346

FUNCAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

19. LA ME!OSJS

347

Fig. 19-4. Etapas de la meiosis en la langosta Lapla tacris dispar (2n = 22+X). El cromosoma X aparece sealado por una flecha. (De F. A. Sc1.. )
A LEPTONEMA B PAQUINEMA E DIACINESIS

F METAFASE 1

G ANAFASE 11

C DIPLONEMA TEMPRANO

D DIPLONEMA TARDIO

En un corte transversal, los componentes laterales se hallan separados eJe! componente central por espacios regulares de idntico ancho. En conjunto, el CS tiene el aspecto de una escalera, con peldaos que la cruzan a intervalos de 20 a 30 nm. Tales peldaos, formados por filamentos muy delgados, apa rentan cruzar todo el ancho del CS, desde un componente lateral al otro (fi. 19-6). Tanto los filamentos transversales como los componentes lateralo" contienen protenas fibrilares. En las cromtidas hermanas las fibras de 30 nm forman asas. atla una,,. las cuales contiene entre 5 y 2."i J ru d i\DN . Cor no Sl' ilnslr a rr la li:nr 1 1 J 1l-H, dlll'llnll' ('! il'ph>nl'nlll ) a~ IISliS .J, !' I UIIIllfillll li< ' I H'Ii llllll dr s p(),, it' jull 111
,\ 11

' " las asas aparecen cada vez ms juntas al lado de los componentes laterales del CS. Ms an, igual que en los cromosomas mitticos, en los meitios existe un armazn de protenas no histnicas para sostener a las asas de nomatina (fig. 19-8); la diferencia con los meiticos es que a stos se les 11 regan los componentes del CS. La fijacin de los telmeros a la envoltura nuclear ordena espacialmente 11 los cromosomas, lo que favorece el alineamiento de los homlogos. Una V ~ formados lOS CS, SUS extremOS tambin Se insertan en la envoltura nut'ICar (fig. 19-5). En los puntos donde lo hacen aparecen engrosamientos llarllados

placas de fijacin.

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Una de las funciones del CS es estabilizar el apareamiento de los homl"gos y facilitar su recombinacin. As, las molculas proteicas de sus coml"" 'cntes laterales permiten que los ADN de los cromosomas homlogos se dispongan de manera tal que el intercambio entre ellos resulte favorecido. 1\11 consecuencia, el CS debe ser considerado un armazn proteico que se < '1111Struyc para que se produzca el alineamiento y la recombinacin de los 11111116i11gos, ! '11:11ul" lmni 'nza el apar ami nlo, el acortamiento de los cromosomas es \'1 ' ""'Y l'""'"'~~'i : ulo xi.t 1'"' 1" III!'IIIIS 1111:1 rc~lac- i 11 100; 1 <'11l n (' 1 l:11y o

348

FUNDAMENTOS DE BIOLOG IA CELULAR Y MOLECULAR 19. LA MEIOSIS

349

Fig. 19-5. Micrografa electrnica que muestra los componentes latera les (/) y el componente central (e) del complejo sinaptonmico entre los cromosomas homlogos. Obsrvese la manera en que los telmeros se fijan a la envoltura nuclear (EN).

del ADN y la longitud cromosmica. Esto significa que slo el 0,3% del ADN de los cromosomas homlogos se halla en contacto directo con los compo nentes laterales del CS. 19-8. Durante el paquinema se recomb inan las cromtidas homlogas Durante el paquinema (del griego pachys, grueso) los cromosomas Sl' acortan y el apareamiento de los cromosomas homlogos se completa (figs. 19-2 y 19-4B). Pero lo ms importante de este perodo es que se produce el intercambio de segmentos de ADN entre las cromtidas homlogas, fenme no que lleva el nombre de recombinacin gentica (en ingls, crossing over) (fig. 19-9). Los sucesos que conducen a la recombinacin son muy complejos, pues se cree que sta tiene lugar al cabo de los pasos que se muestran en la figura 19-10. No obstante, en esencia ocurre el proceso que se ilustra en la figura 19-11, es decir, se producen cortes en las dos cromtidas seguidos por el cruce y el empalme de los segmentos que se intercambian. El paquinema es un proceso relativamente prolongado. Su duracin se mide en das, a diferencia delleptonema y el cigonema, que se miden en horas. En el paquinema el ncleo parece contener un nmero haploide de ero mosomas, pero no es as, ya que cada una de las unidades visibles se com pone de dos cromosomas independientes, si bien ntimamente aparcados. Por tal motivo, cada uno de los 23 pares de cromosomas recibe el nomhr dt bivalente. Dado que cada conjunto est integrado por cuatro croml idas, st llama tambin ttrada (fig. 1'J-9).
l .as dos nom{!Jidas hn nt:nms de r adn

ros, uno por cromosoma. Igual que en la mitosis, cada centrmero contiene dos cinetocoros, uno por cada cromtida hermana. Sin embargo, hasta la finalizacin de la meiosis I los cinetocoros hermanos se comportan como una unidad (fig. 19-15). A lo largo del bivalente, en el CS aparece una sucesin de ndulos densos de alrededor de 100 nm de dimetro, denominados ndulos de recombinacin (fig. 19-7). Su nmero y sus localizaciones coinciden con los sitios de recombinacin gentica, lo que sugiere que a nivel de ellos ocurre el intercambio de los segmentos de ADN entre las cromtidas homlogas. Para que se produzca la recombinacin, las molculas de ADN de las cromtidas homlogas deben situarse a una distancia de aproximadamente 1 nm en el componente central del CS. Se cree que ese virtual contacto ocurre a nivel de los filamentos transversales que unen a los componentes laterales, por los cuales las secuencias de nucletidos homlogas se buscaran, hecho imprescindible para que tenga lugar el intercambio de los segmentos de ADN. El ndulo de recombinacin podra considerarse la expresin morfolgica de ese intercambio. Ms a n, el ndulo sera un complejo multiproteico que rene a las cromtidas paternas y maternas y produce los cortes y empalmes necesarios para la recombinacin. Entre las protenas que actan al comienzo de la recombinacin se encuentra la RadSl (por radiation sensitive) , cuya intervencin es esencial para que se produzcan los cambios que se muestran en la figura 19-12, los cuales ocurriran entre los pasos 2 y 3 del modelo de recombinacin gentica ilustrado en la figura 19-10. Obsrvese cmo la cadena invasora se combina con la doble hlice de la cromtida homloga y da lugar a una triple hlice transitoria. Se considera que la cadena invasora se acomoda en el surco mayor de la doble hlice y que sus bases se unen con las de la cromtida homloga mediante puentes de hidrgeno inusuales. 19- 9. Du rante e l diplonema los cromosomas apareados se sepa ran, aun que en algunos puntos permanecen u nidos Durante el diplonema (del griego diplos, doble) los cromosomas homlogos comienzan a separarse, de modo que las cromtidas de la ttrada se vuelven visibles y el complejo sinaptonmico se desintegra (figs. 19-2 y 19-4CD). Sin embargo, la separacin no es completa, ya que las cromtidas homlogas permanecen conectadas en los puntos donde ha tenido Jugar el intercambio (rigs. 19-4D, 19-9 y 19-13). Tales conexiones - llamadas quiasmas (del

1 1

....;;~=---

Componente lateral

o<""'"- - - Cromtida
(se muestra slo una de las dos cromtidas hermanas)

Fig. 19-6. Esquema del complejo sinaptonmico, con los componentes laterales, los filamentos transversales y el componente central. Los filamentos lransversales son dmeros proteicos que nacen de los componentes laterales y se extienden hasta el plano sagital del complejo. All sus extremos libres se superponen y dan Jugar a la linea de alta densidad electrnica del componente central, donde tambin existiran protenas longitudinales. La iluslracin del recuadro muestra que las dos protenas de los dmeros son fibrosas, que estn entrelazadas y que sus extremos globulares se hallan orientados como en el dmero de la figura 5-2.

Ndulo de recombinacin

hermanas
Fi~.
111it

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19-7. Vi,i n lridimcnsiot'tll l 1111

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350

FUNDA MENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

19. LA MEIOSIS

351

19- 10. Durante la diacinesis la cromat ina se vuelve a condensar

Durante la diacinesis (del griego di, a travs) la condensacin de los cromosomas vuelve a acentuarse (fig. 19-4E). Las ttradas se distribuyen homogneamente por todo el ncleo y el nuclolo desaparece. A excepcin del aspecto de los cromosomas, este breve estadio muestra semejanzas con la profase tarda de la mitosis.
Componente lateral

Cromtidu

5' 3'
Fig. 19-8. Formacin de asas de cromatina cada vez ms compactas a medida que avanza la profase de la mciosis l.

A-

B-

G
G

3' D.- 5'

3- a - l : l 5

d- 3'
7

5'

griego khasma. cruz)- expresan la etapa final de la recombinacin, pues muestran a los cromosomas homlogos en vas de separarse, ligados todava por esos puntos. El nmero de quiasmas es variable, ya que pueden aparecer pares de cromosomas homlogos con un solo qu~asma (es el nmero mnimo) y otros con varios. Ms an, la cantidad de quiasmas y sus ubicaciones suelen coincidir con las de Jos ndulos de recombinacin. En la mujer el diplonema es un perodo extraordinariamente largo. Todos los ovocitos I arriban a esta fase del ciclo celular antes del sptimo mes de la vida intrauterina y permanecen as como mnimo hasta la pubertad (seccin 19-15). En el diplonema, diversos sectores de la cromatina experimentan un fuerte desenrollamiento. Situaciones extremas de este fenmeno se observan en los peces, los anfibios, los reptiles y las aves, en los que el desenrollamiento es tan acentuado que los bivalentes suelen asumir una configuracin especial -emiten finas proyecciones laterales- , motivo por el cual se los llama crom osomas plumulados o en cepillo (fig. 19-14). Esas proyecciones son asas de cromatina muy desenrolladas, cuyo ADN se transcribe a gran velocidad. As, tal configuracin cromosmica expresa una intensa sntesis de ARN por parte de la clula, que es la causa del enorme crecimiento que experimenta el ovocito antes de ser expulsado del ovario. En algunas de las clases zoolgicas nombradas, a lo largo de los cromosomas pueden detectarse engrosamientos de cromatina dispuestos entre las asas -llamados crommeros-, con un aspecto de collar de cuentas (fig. 19-14). Los crommeros corresponden a sectores de cromatina altamente condensada, al contrario de la cromatina de las asas, que como acabamos de ver se encuentra bastante desenrollada. Los crommeros comienzan a verse a partir del leptonema.

-A- B _ ;;;
2
a_ b

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10

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_ _A __

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h-,----c d

e
e

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11

o_

\
Fig. 19-9. E squemas qu e muestran cmo se forma el biva lont c (ttnul a). el dl's nrmllo
dcl qu ln-m H1 y In W p 111 11l'li''ln eh lt 1fril 111111llth n iiVI

F ig. 19-10. Modelo te,;co de recombinacin gentica entre las cromtidas homlogas. l. Apareamiento de las cromtidas. Los pares de letras Aa, Bb, Ce y Dd simbolizan a los dos a lelos de Jos cuatro genes representados (cap. 20-3). 2. Corte de las dos cadenas de ADN de una de las cromtidas y ampliacin de las separaciones mediante exonucleasas. Dado que stas remueven nucletidos en direccin 5'-->3', se fonna -en cada cadena cortada- un extremo 3' libre (no apareado). 3. Uno de esos extre mos invade la cromtida homloga y se coloca en el lugar de una de sus cadenas, la que a su vez se desplaza hacia e l s itio qu e deja vacante la cadena invasora. 4. Sntesis de ADN en las cadenas cortadas, para reconstruir los segmentos que faltan. In tervienen polirnerasas que usan a las dos cadenas de la cromtida homloga corno moldes, por lo que los tramos que l'a ltan se s inteti za n por un mecanismo similar al de la reparacin del ADN (cap. 17-21). Los pasos anteriores conducen a la ro rmac i n de dos entrecruzamientos o estructuras de Holliday (llamadas as en homenaje al genetista Robin Holliday, quien d escri bi esos entrec ru zamicntos en 1964). 5. Corte de las dos cadenas a nivel de uno de los entrecruzamientos !flechas). (, , l ;mp;dlll \: lulcrul de las cad enc,., cortadas en el paso anteri o r. 7. E nc orvadura de ambas cromtidas a la a ltura d el seg und o ('111 11.' 4..' 1 '11 'W IIli ut o y ro ta c i n de 1H0 de un a de las cro mti das. S. Formac in de un a estru ctura de Ho lliday iSol Ctrica . 9. orl t' t \11 1111 11 d ~ In . l..'l ld!'ll :l.'l d v l'H d11 (' I'O III i'i lid a (lhduu ). 10 . F n th." J't,'ZH lllit fl l ( l de la s t: ro m r ti das . 11. n uqmiii H ,' lutc r;ll d ~ln s ~ n
d t 11 t1N tl ll d f!N 1\11 1., l p tl t/11 q '

352
,

FUNDAMENTOS DE BlOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

!9. LA MEIOSJS

353

~ 11 1 111111111 1 1 1 111111 ~:
~ 1111 1 11111111111111111 ~:
3'
,
5

Cromtida r aterna

19-1 1. En las restantes etapas de la divisin meit ica 1 los

cromosomas homlogos se separa n y se dirigen hacia los polos opuestos de la clula

Cromatida materna

'llllllllll !
111

1 11

1 'llrrurrms

3'
,

5' TTT~~~~

IIIIIIIII 1111

~rrmrrn 5.

~: 1111111111 1 11 111111111 ~: ~: 1111111111111 111111111 ~:

Fig. 19-11. Mode lo simpl iticado de cortes y empalmes entre las molculas de ADN de las c rorntidas homlogiS du ranle la recombinacin ge nlica.

Durante la prometafase 1 la condensacin de los cromosomas alcanza su grado mximo. La carioteca desaparece y los microtbulos del huso se conel tan con los ci netocoros. Esta conexin es d istinta de la regi strada en la mito sis porq ue las fibras del huso provenientes de cada polo celular se asocian con los dos cinetocoros hermanos y no con uno (en la seccin 19-8 se vio qtw en la meiosis 1 los cinetocoros hermanos se comportan como una unidad). Durante la metafase llos bivalentes se disponen en el plano ecuatorial d, la clula (fig. 19-4F). Debido al modo como se conectan las fibras del huso los ci netocoros de cada cromosoma homlogo "miran" hacia un mismo poi; (fig. 19- l 5). Los bivalentes contin an exhibiendo sus quiasmas. Cuando los cromoso mas son coit os, los quia~mas se localizan en los extremos de los ho mlogos (quiasmas term in a le~) ; cuando los cromosomas son largos, los quiasmas aparecen en varios puntos a lo largo de los ejes cromosmicos (quiasmas intersticiales). Durante la anafase 1 Jos c inetocoros opuestos :;on traccionados hacia los respectivos polos, de modo que los homlogos de cada bivalente -cada uno integrado por dos cro mtidas hermanas- se separan entre s y se movilizau en direcciones opuestas (figs. 19-2 y 19-15). La observacin de los bivalen tes en esta fa se permite comprobar que a menudo la recombinacin gentica se produce e ntre las cromtidas de los dos pares de hom logos (fig. 19-13). As, en algunos tramos del cromosoma la recombinacin tiene lugar entre un par de cromtidas homlogas -no estamos diciendo "hermanas"- y eu otros tramos ocurre entre las cromtidas del otro par. Por consecuencia, al separarse por completo los cromosomas homlogos, en las clu las hijas las dos cromtidas de cada cromosoma son mixtas, pues tienen segmentos cromosmicos taoto paternos como maternos (fig. 19- 16). Durante la telofase 1 los grupos cromosmicos haploides llegan a sus respectivos polos y e n torno de e ll os se construyen las envolturas nucleares.

en los cromosomas mitticos, es decir, uno apuntando a un polo y el otro al polo opuesto (fig. 19-1 5). En la anafase 11, debido a la traccin que las fibras del huso ejercen sobre los cinetocoros, el centrmero se divide y las cromtidas hermanas de cada cromosoma son separadas y traccionadas hacia los polos opuestos de la clula(figs. 19-2, 19-4G y 19-1 5). En la telofase 11 cada uno de los polos de la clula recibe un juego haploide de cromtidas, que pasan a llamarse cromosomas. La formacin de una nueva envoltura nuclear en torno de cada conjunto cromosmico haploide - seguida por la particin del citoplasma- pone fin a la meiosis (figs. 19-2 y 19-3). Como se acaba de ver, la meiosis II se asemeja a la mitosis, excepto porque en la primera las clulas hijas reciben una sola copia de cada cromosoma y no los dos homlogos. La figura 19- 1 muestra que en el varn el resultado de la meiosis II es la rormacin de dos clulas hijas iguales - denominadas espermtides- que al cabo de un tiempo se diferencian en espermatozoides. En cambio, en la mujer, debido a que el reparto del citoplasma del ovocito II es desigual, se forman dos clulas de tamao muy diferente: el vulo, que es voluminoso, y el segundo cuerpo polar, que como el primer cuerpo polar es pequeo y desaparece. En sntesis, la meiosis genera cuatro espermatozoides a partir de cada espermatocito I, y un solo vulo a partir de cada ovocito I (fig. 19-1 ).

Fig. 19-13. Micrografa electrnica de un bivalente y su interpretaci n. Se observan dos quiasmas y la posicin de los centr meros hermanos, que se hallan unidos entre s.

19-12. Entre las dos divisiones meiticas existe una interfase

de corta duracin

5'illilll 1 111 1IDIIJ3' 3' ~ 5'

~: 1111111111111111111111 ~:

! ~:~nn:: ; ;~~ ::
; 1; 1

3' 5'

~:;:F" ~:
111

5' 3'

La telofase 1 es segu ida por la particin d el citoplasm a , y las dos clulas hijas pasan por un corto perodo de interfase en el que no hay replicacin del ADN (no hay fase S). Por consiguiente, las clulas hijas derivadas de la me iosis 1 poseen un nmero haploide de cromosomas, cada uno de stos compuesto por dos cromtidas hermanas (figs. 19-2 y 19-3). En el varn el resultado de la meiosis l es la formacin de dos clulas hijas iguales, denominadas esperma tocitos 11. En cambio, en la mujer, debido a que el reparto del citoplasma del ovocito I es desigual, se forman dos clulas de tamao muy diferente: el ovocito 11, que es relativamente voluminoso, y el primer cuerpo polar, que es pequeo y desaparece (fig. 19- 1). Los espermatocitos II y el ovocito II comienzan la meiosis 11, cuyas etapas, como se ver a continuacin, son similares a las de la mitosis.

5' 1111 ......

J':ciilimm

3'

19- 13. En la divisin meitica li se separan las cromtidas hermanas

La profase 11 es muy breve, aunque suficiente para permitir lar ap;u i ~i< 11 de las fibras del huso y la dcsaparic i<n d~: la nvollma nurkar. 1.a mctafiiS(' 11 11 va a los t"l'llllloSolllas al plano n 111 tlo1 iul d t' la < 'thi1 11 1 .w. J illrll '> th-1111!'--,11 \ t ' \ ' 1111\' d/1 11 11 lnt. tlllt ' lt't 11111' , '"'' 1 11 1di 1 tlo1 11n \ Hlll'

Fig. 19-12. Formacin de una triple hlice transitoria al comienzo de la rccombinacin

glnf-lka. Tit1u. ln)'ar l'IIIH' lo:-. pn,,o. 2 V ,'cJ, In lq111 11 fll 111,

Fig. 19-14. Cromosomas plumulados o en cepillo. La figura de la izquierda es un esquema de poco aumento que muestra dos guiasmas y las asas de cromati na laterales. La figura de arriba ilustra dos asas laterales a mayor aumento y la compactacin de las cromtidas a nive l de l crommero. (Cortesa de O. L Miller Jr.) La micrografa (contraste de fase) permite observar la sucesin de cromme-

ros, que genera una imagen

con asiccw de collar-de c ucn tns. (('tufco.d u d 1 1J. SI'! u t'L )

354

FUNDAM ENTOS DE B IOLOGIA C ELULAR Y MO LECULAR

19 . LA MEIOSIS

355

Cinetocoros de las dos cromtidas hermanas (unidos entre si)

METAFASE 1

ANAFASE 1

Cinetocoro de una de las cromtidas hermanas Fig. 19-15. Evolucin seguida por las cromtidas hermanas y los cinetocoros duranre la meiosis 1 y la meiosis !l.

Cinetocoro del cromosoma

ra que los dos homlogos de un par no se separan y pasan juntos a una de las clulas hijas. Este fenmeno -llamado no disyuncin- puede ocurrir en la anafase I o en la anafase II de la meiosis (cap. 20-9) y por su causa uno de los gametos contendr un cromosoma de ms (24) y el otro uno de menos (22). Si uno de estos gametos participa en la fecundacin, las c lulas somticas del nuevo individuo poseern un nmero anormal de cromosomas (47 y 45, respectivamente). Estos cuadros llevan el nombre de aber r aciones cromosm icas numricas, de las cuales el sfndrome de Down es el ejemplo ms conocido. En el sndrome de Down las clulas contienen 47 cromosomas, ya que existen tres unidades del cromosoma 2 1 en lugar de dos (cap. 20-13). 19-15. En la mujer la me iosis puede durar alrededor de 50 a os En el embrin hu mano las clulas germinativas primitivas aparecen en la pared del saco vitelino a los 20 das de la fecundacin. De all emigran a los esbozos gonadales, donde --en el embrin femenino- se dividen y se transforman en ovogonios. En tre el tercero y el sptimo mes de la vida prenatal los ovogonios entran en meiosis y se convierten en ovocitos !; permanecern en el perodo diplonmico hasta el comienzo de la pubertad. Durante este diplonema tan prolongado los cromosomas experimentan un tipo especial de desenrollamiento que los asemeja - aunque lejanamente- a los cromosomas plumulados (secciones 19-9 y 19- 14). A partir de la pubertad, en cada ciclo menstrual varios ovocitos I reanudan la meiosis l , pero sta se completa en uno solo, que se convierte en ovoci to !l. Los restantes ovocitos I degeneran en el ovario. Debe sealarse que a veces son dos los ovocitos l que completan la meiosis ! , y que con menos frecuencia son ms de dos. Cuando el ovocito Il se libera del ovario (ovulacin) e ingresa en la trompa de Falopio, ya ha iniciado la meiosis Il, pero sta prosigue slo si el ovocito es fecundado por un espermatozoide; ms an, la falta de fecundacin hace que el ovocito JI muera en pocas horas. Contrariamente, la fecundacin activa en el ovocito II algunos mecanismos que impulsan la continuacin de la me iosis ll, al cabo de la cual se generan el cigoto (o clula huevo) y el segundo cuerpo polar. Como se ve, el vulo no se forma en ningn caso, aunque a menudo se emplea su nombre cuando se menciona al ovocito !l. En La recin nacida el nmero de ovocitos I es de alrededor de un mi lln. A la edad de 12 aos se reducen a 300.000, de los cuales cerca de 400 alcan<:arn la madurez total entre esa edad y la menopausia. Por lo tanto, en la mujer la meiosis puede durar alrededor de 50 aos, lo que explica por qu a medida que aumenta la edad materna la proporcin de aberraciones cromosmicas en la descendencia es cada vez mayor (cap. 20- 13). 19-16. En el varn la meiosis comienza a pa rt ir de la pubertad En el embrin masculino, las clulas germinativas primitivas provenientes del saco vitelino arriban a los esbozos gonadales y se incorporan a los tbulos seminferos en formacin, donde se convierten en espermatogonios. Estos entran en meiosis a pmtir de la pubertad. Como vimos, cada uno genera cuatro l'Sp nnal o~.oidcs . La pmfl1so 1 dura unos 14 dfas y la meiosis se completa en 11 1,!1, (!,ll. d!' 4 d fll.'l . 1\ tl if'lonn ia de la ovo 11 sis, la spcnnato ~ m:s i s pm1 11 ilill lill 111111 1 d 11 d 11 1f11 l Vlllll!ll il! II VII II I!id ll ,

Fig. 19-16. Resultado de la recombinacin gentica al cabo de la anafase I.

METAFASE 11

ANAFASE 1 1

19-1 4. Co nsecu e ncias geneticas de la meiosis En la seccin 19-1 dij imos que los procesos esenciales de la meiosis son: 1) la reduccin del nmero de cromosomas a la mitad (fig. 19-3); 2) la recombinacin gentica; 3) la segregacin de los cromosomas paternos y maternos. As, desde el punto de vista gentico la mei osis puede considerarse un mecanismo destinado a distiibuir al azar los genes paternos y maternos en los gametos, tanto por la recombinacin gentica como por la segregacin de los cromosomas homlogos. En la figura 19-17 pueden observarse las consecuencias genticas de la meiosis en una clula hipottica que contiene tres pares de cromosomas homlogos, en los cuales se produjeron una, dos y tres recombinaciones, respectivamente. Las recombinaciones son sealadas por Jos quiasmas, y se ve que han tenido lugar slo en uno de los dos pares de cromtidas homlogas. No obstante, como se seal en la seccin 19- 11, la recombinacin se produce no entre uno sino entre los dos pares de cromtidas homlogas, de modo que al concluir la meiosis todos los cromosomas de los gametos presentan segmentos maternos y paternos alternados (fig. 19- 16). La segregacin al azar de los cromosomas paternos y maternos durante las anafases I y II tambin contribuye a la di versidad gentica de los gametos, pero en distinto grado. Esto no se aprecia en la figura 19-17, ya que muestra el caso (tericamente posible) en que los cromosomas maternos y paternos se segregan en bloque en ambas anafases. Dado que el varn posee 23 pares de cromosomas homlogos en las clulas predecesoras de los gametos, las combinaciones de segregacin posibles alcanzan el nmero de 8.388.608 (223 ) . A ellas deben sumarse las incontables posibilidades de segregacin de los genes mediante la recombinacin. En sntesis, al examinarse las consecuencias derivadas de la asociacin de ambos procesos - la recombinacin gentica y la se rogacin d los ho1116 logos- , se puede observar que c:td:t 11110 d los a lll('lt1.4 n qttv tlii lunr In '-' di kn1111'S m iosis h nda ('ollj uulos dl' 1'1'111

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

19. LA MEIOSIS

357

a
DIPLONEMA

e
METAFASE 1

hia luronidasa y la acrosina, desempean importantes funciones durante la fecundacin. Las dos ltimas etapas de la diferenciacin de los espermatozoides -llamadas maduracin y capacitacin- tienen lugar en el epiddimo y en el tracto genital femenino, respectivamente. En su transcurso se afinan, a nivel molecular, ciertos detalles de algunas estructuras de los espermatozoides, imprescindibles para que uno de ellos fecunde al ovocito II y se forme la clula huevo o cigoto.

./Corona radiante

DIPLONEMA

19-18. Los espermatozoides adquieren

Membrana pelcida

movimientos de hiperactivacin

"'~1ft
Fig. 19-17. Consecuencias genticas de la meiosis en tres pares de cromosomas, uno con un quiasma (a), otro con dos quiasmas (b) y otro con tres quiasmas (e). Los cromosomas paternos se representan en azu 1y los maternos en rojo. Los clrculos marcan las localizaciones de los centrmeros.

1 1\
~
a

V
b

i ~~
ANAFASE 1

1 1\
j V
ANAFASE 11

FECUNDACION
19-17. Caractersticas de los gametos en el momento de la

fecundacin
La fertilizacin del vulo por el espermatozoide -o fecundacin- es d paso que inicia el proceso del desarrollo embrionario, y por ese motivo e~ analizada en los libros de embriologa. Aqu solamente ofreceremos una brl' ve resea de sus aspectos celulares y moleculares. La fecundacin suele producirse en el tercio externo de la trompa de ra !opio, adonde arriba el ovocito II -sin haber completado la meiosis II- IUl' go de la ovulacin (fig. 19-18). El ovocito es una clula de tamao sumamente grande, que posee numc rossimas microvellosidades y se halla envueltl por la membrana pell:idn y las clulas foliculares de la corona radiante (fig. 19- 18). La membrmm p elcida contiene abundante cantidad de glicoprotenas, entre las cual s s destacan la ZP2 y. la ZP3 (por zona pellucida). Por su lado, las clulas d la corona radiante se hallan unidas entre s por un material cemcntanrc 1in o en cido hialurnico. El espermatozoide posee una cabeza, un cuello y una cola. l .a figu1 a 1'1 muestra la cabeza y parle d 1 u llo con sus 1' spel'livos I'IIIIIJHIIIt'llh'N, 1\11 lu

Entre otros cambios, la capacitacin da lugar a la aparicin de movimientos muy enrgicos en la cola de los espermatozoides, los cuales se distinguen con el nombre de hiperactivacin. As, abruptamente, los espermatozoides pasan de un tipo de movimiento delicado y lineal a otro vigoroso y errtio, aunque intercalado con breves episodios de desplazamientos lineales. Los mecanismos moleculares desencadenantes de la hiperactivacin pueden observarse en la figura 19-20. Como se ve, una sustancia inductora desonocida (o factor capacitante) interacta con un receptor de la membraua plasmtica del espermatozoide - situado probablemente a la altura de su < :uello-- y el dominio citoslico del receptor activa a una protena G (cap. 11-14). Esta, a su vez, abre un canal de Ca2 e induce la entrada del ion desde el medio extracelular al citosol. Dado que la protena G activa tambin a la enzima adenilato ciclasa, se incrementa el AMPc citoslico y se activa la quinasa A (cap. 11 - 15). A su tumo, la quinasa A desencadena una cascada de r acciones que culmina con la fosforilacin de una protena de 15 kDa aso<'iada a los microtbulos del axonema (cap. 5-12). Finalmente, ante la presen,ia de ATP -que provee energa- , tanto el Ca 2 como la protena de 15 kDa activan el deslizamiento de las dinenas entre los microtbulos, y con ello los 111ovimientos de hiperactivacin en la cola del espermatozoide.

Fig. 19-18. Corte frontal de la trompa de Falopio, que muestra el encuentro de los espermatozoides con el o vocito [l.

1\l- 19. La fecundacin se divide en varias fases

La fecundacin se inicia a partir del momento en que "" ms de cien espermatozoides completamente diferenr iaclos -se es el nmero que llega al tercio externo de la !rompa de Falopio- establecen contacto con las clulus foliculares que envuelven al ovocito II. Para su mejor comprensin, el proceso de la fecunda i(m suele dividirse en las siguientes fases (fig. 19-21): 1) Penetracin de la corona radiante . Una vez que tollla contacto con la corona radiante, cada espermatozoide on su acrosoma intacto-- trata de alcanzar la mem1" aua pe lcida avanzando entre las clulas foliculares ( 1i ,. llJ-21 A). Para ello construye una especie de tnel en ' 1 uido hialurnico que las une, con la ayuda de pequeIta. t: ullidadcs de hialuroridasa que lleva en su membralla plu;.nl~ li cu (~sla nzima t'S qu frrit':tiiiCIIte idntica a la
1 111111 llllllll'll l'l IH'IU~ItiiHII) 1 11 1111 1/ 1 IIU T !' il iCa

Membrana

interna---~

uku quc n mli c ~ w

ahc~.H oh-ht rtsaltarst la pl t'St' llt'in dlntT UN IIIIIII, I[IU' t. u; 1 .!1 11 1vado ll <o<~ V l nit~. llltJ,u dt ~ ~11 / IIIIIH hulll,lilku', du1 d lt~t 1 1 11 ul 1 , lu

Fig. 19-19. Esquema que muestra algunas estructuras de la cabeza del espermatozoide. Obsrvese el acrosoma y la aparicin de reas de fusin entre la membrana acrosmica externa y la membrana plasrntiticn. con la consiguiente formacin el poroS
(ft' l ll ' l ' i (III IU.' III~ )lllic!l),

fhrivatla

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FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

19 . LA MEIOSIS

359

de los movimientos de hiper activacin impulsa el avance del espermatozoide. As, mientras la hialuronidasa digiere localmente el cemento intercelular, los movimientos de hiperactivacin hacen avanzar al espermatozoide. Es posible que este mecanismo acte como un filtro selectivo para que lleguen a la membrana pelcida slo los espermatozoides ms aptos. 2) Reaccin acrosmica. Cuando el espermatozoide alcanza la membrana pelcida y se pone en contacto con ella, en su prute frontal se desencadena un proceso llamado reaccin acrosmica, que da lugar a mltiples reas de fusin entre la membrana externa del acrosoma y la membrana plasmtica del gameto. Ello genera la formacin de poros - por los que se escapan las enzimas acrosmicas- y luego la desaparicin de ambas membranas (figs. 19-19 y 19-21BC). Por consecuencia, en la regin frontal del espermatozoide, en reemplazo de la desaparecida membrana plasmtica queda expuesta al extc rior una nueva membrana, la acrosmica interna (fig. 19-2 1C). El mecanismo molecular que lleva a la reaccin acrosmica es el siguiente (fig. 19-22): La ZP3 de la membrana pelcida interacta con un receptor de la mem brana plasmtica del espermatozoide, que activa a una protefna G. Esta hace lo propio con la enzima fosfolipasa C, que genera inositol trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG) a partir de fosfatidilinositol difosfato (PIP2) . Como se vio en el captulo 11 -18, el IP 3 abre canales de Ca2+ en la membrana del REL y permite que el ion pase de ese organoide al citosol. Debido a que en el espermatozoide la mayor parte del IP3 se convierte en inositol te trafosfato (IP4) y a que ste abre canales de Ca2+ en la membrana plasmti ca, el ion ingresa desde el. exterior y se incrementa an ms su concentracin en el citosol. El pH citosUco tambin aumenta porgue la entrada de Ca2' desde el exterior se halla acoplada a la salida de H+. Por su parte, el DAG activa a la quinasa C, que desencadena una sucesin de fosforilaciones en varias protenas. La figura 19-22 muestra la acti vacin de las fosfolipasas A y D por medio de la protena G. Dado que la primera elimina un cido graso de la fosfatidil colina y la segunda remueve la colina, generan lisofosfatidilcolina y cido fosfatdico (fig. 2-13), respectivamente. Aunque no se ilustra en la figura 19-22, la protena G activa tambin a In enzima adenilato ciclasa, que forma AMPc a partir de ATP. A su vez, el AMPl' activa a la guinasa A, que fosforita a varias protenas. Finalmente, todos los cambios mencionados hacen que se formen mlti pies reas de fu sin entre la membrana acrosmica externa y la membranu plasmtica del espermatozoide, y que esas fusiones den origen a orificios d dimetros crecientes que eliminan a las membranas. En sfntesis , dichos cmu bios desencadenan la reaccin acrosmica (figs. 19-19 y 19-21 BC). Debe agregarse que antes de la reaccin acrosmica tienen lugar dos pro cesos biolgicos, el reconocimiento y la adhesin de los gametos. Ambo~ son consecuencia de la interaccin de la ZP3 de la membrana pelcida con l'l receptor de la membrana del espermatozoide. En los puntos que siguen se ver cmo la reaccin acrosmica hace posl ble el desprendimiento de la corona radiante del ovocito IJ, el pasaje del ts permatozoide a travs de la membrana pelcida y la fusin de las memhrnuu plasmticas de los gametos. 3) Denudaci6n. La denudacin consiste en el desprendimiento ck lu ''" rona radiante del ovocito JI. Las clulas foli culares de la t:OI"IIIIII Nllll s JHII 1 das por la hlnluronldnsn qu snl de los 1 1TOSIIIlllls, ya quC' C lNiu J11 lun1 Id droli w al( idll hiulurui n ')lit' !11:1 llillllti('lll' 11nidu tli , 1'1 1 1111 ' .

Sustancia inductora (factor capacitante)

Receptor

HtPERACTtVACION 4) Penetraci6n de la membrana pelcida. Como se vio, la membrana acrosrnica interna queda expuesta cuando desaparecen la membrana plasllltica y la membrana acrosmica externa de la cabeza del espermatozoide. l'osee el receptor PH20 (por posterior head), que interacta con la ZP2 de la membrana pelcida. Ello le permite al espermatozoide atravesar la membrana pelcida en busca de la membrana plasmtica del ovocito ll. Lo consigue merced a la acrosina, pues esta enzima hidroliza el material que compo11<: la membrana pelcida y fabrica en ella un tnel que sigue una trayectoria diagonal (fig. 19-210). De igual manera que en la penetracin de la corona radiante, el avance del spermatozoide se debe a la fuerza mecnica generada por los movimientos dL: hiperactivacin. Esa fuerza es del orden de las 3.000 m_icrodinas, sufi ,icnte para romper cualquier unin covalente. Volviendo a la acrosina, no hidroliza masivamente a la membrana pelciol a. como cabra esperar de una enzima hidro ltica liberada abruptamente en .. lmedio. Dijimos que fabrica un tnel , lo cual se explica porgue hidroliza peqllc;as y sucesivas porciones de la membrana pelcida por delante del esper"'atozoide. La hidrlisis controlada se debe a que la enzima se libera como "" precursor, la proacrosina, la cual, a medida que el PH20 interacta con 1111<:vas ZP2 halladas en el camino, da lugar, en dos pasos, a las formas activus de la enzima, la a -acrosina y la ~-acrosina. Como vemos, igual que en la lll"IICtracin de la corona radiante, el espermatozoide realiza esta tarea de licadalllente y avanza por el derrotero que l mismo va creando. 5) Fusin. Si bien son muchos los espermatozoides que atraviesan la " ""'nbrana pelcida, slo uno establece ntimo contacto con la membrana plusmtica del ovocito Il. Cuando esto ocurre, desaparecen sus movimientos d, hircractivacin. 1\ l"lllllinuacin, las partes de las membranas en contacto de ambos game,, ,,, :.,. 1"11sionan, por lo que entre los dos citoplasmas se establece la continui-

Fig. 19-20. Mecanismo molecular que desencadena la hiperacti vacin del espermatozoide.

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGJA CELULAR Y MOLECULAR

J9.LAMEJOSJS

361

Membrana plasmtica

Segunda divisin meilica

E
A

;.....--'-' - - - Proncleo masculino

\ii'----'--\-- Proncleo femenino

Membrana pelcida -

Membrana plasmtica - - -

acrosmica

Membra~~e~

i r

e
F ig. 1921. Fases de la fecundacin. A. Penetracin de la corona radiante. B. Reaccin acrosmica. C. Denudacin. D. Penetracin de la membrana pelcida. E. Fusin de las membranas plasmticas de los gametos y reanudacin de la meiosis li por pane del ovocito !1. F. Formacin de los proncleos masculino y femenino. G. Unin de los proncleos (singamia). H. Metafase

de la primera divisin mittica

(anfimixis). l. Comienzo de la primera divisin de segmentacin de la clula huevo.

dad que hace posible la entrada del contenido del espermatozoide en el interior del ovocito (fig. 19-21E). De parte del espermatozoide, la membrana plasmtica involucrada en la fusin corresponde a la regin ecuatorial de la cabeza (fig. 19-19). De parte del ovocito interviene cualquier zona de su extensa superficie, excepto la aledaa al ncleo (ste se halla detenido en la meiosis Il). Recordemos que la membrana plasmtica del ovocito posee numerossimas microvellosidades, y es precisamente con ellas que se fusiona la regin ecuatorial de la cabeza del espermatozoide. Una vez establecida la continuidad entre ambos citoplasmas, ingresan -en el siguiente orden- la parte posterior de la cabeza, el cuello y la cola del espermatozoide. Luego Jo hace la parte anterior de la cabeza, que es introducida en el ovocito mediante un proceso que remeda una fagocitosis . El material incorporado tiene una evolucin dispar. As, mientras e l ADN y el centrolo del espermatozoide sobreviven, las mitocondrias y las fibras axonmicas no tardan en desaparecer. La fusin de las membranas es mediada por protenas fusgenas presentes en las dos bicapas lipdicas (cap. 7-41). Se han descubierto varias de estas protenas en la membrana del espermatozoide; por ejemplo, las denominadas DE y PH30, halladas en la rata y en el cobayo, respectivamente. La DE est compuesta por dos protenas de 37 kDa (D y E), adquiridas durante el paso del espermatozoide por el epiddimo. La PH30 tambin est integrada por dos protenas - ambas transmembranosas- , una que se liga a la protena complementaria del ovocito y otra que es responsable de la fusin . Se sabe muy poco sobre las protenas fusgenas de la membrana plasmtica del ovocito; no se encontraran en la regin aledaa al ncleo, ctondc tampoco existen microvellosidades. 6) Bloqueo de la poli.1-permia. Un ~o lo ~.:~p nuatot.oid ddw f,~ionllr:ll' con Ic>Votilo. Para que Hl'll asf. lntH la fu si 111 ch- l~>N f' l!llolnrl N c Jllculll< 'l' ll \ ' lll ll hit~'~ < ~IIIII J 'IIIIIIfl ~ q llllt ' (lllll d.J pVt WI Itt, 11 !111 dt ~ 11! ~11111111 /1 11 l 11 1 111 111d11 d1~

...,--- - ' ; - - - Melafase de la primera divisin meitica

nuevos espermatozoides y evitar la polispermia. El origen de estos cambios se encuentra en un proceso denominado reaccin cortical, que consiste en la exocitosis de las enzimas hidrolticas contenidas en las numerossimas vesculas de secrecin - llamadas grnulos corticales- que la clula huevo posee por debajo de su membrana plasmtica. Como todas las vesculas de secrecin, son generadas en el complejo de Golgi. Entre las enzimas expulsadas desde los grnulos corticales se encuentra una proteasa que modifica a la ZP3 e hidroliza a la ZP2. Tales cambios alteran la estructura de la membrana pelcida, Jo que provoca la inmovilizacin y la ulterior expulsin de Jos espermatozoides atrapados en ella. Otro impedimento para la polispermia reside en la membrana de la clula huevo, que pierde la capacidad para fusionarse con las membranas de los nuevos espermatozoides que se le acercan. La inhabilitacin dependera de la presencia de algunos componentes recibidos de las membranas de Jos grnulos corticales, que se integran a la membrana plasmtica de la clula huevo al producirse la exocitosis. La secrecin de Jos grnulos corticales es regulada (cap. 7-23) y se produce a consecuencia de un aumento de la concentracin de Ca2 en el citosol. Como muestra la figura 19-23, este aumento es inducido por el IP3, que libera e l Ca2 del REL (cap. 11-18). Obsrvese que el proceso se desencadena en 1 momento en que se produce la fusin entre los gametos y que la sustancia iuductora que activa al receptor de la membrana plasmtica del todava ovocilo ~ una protdna de 1:1 llll' llthrana plasmtica del espermatozoicte. El recep,.,,. c- >lti11111la ll """

1""'' lc llo (:

ll ':cw iada a la fosfolipasa (' , IJIIl' l'lliiiCl sv sahc-

362

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR 19 . LA MEIOSlS

363

ac ta sobre el PIP2 y genera DAG y el citado IP3 (cap. 11-17). En el prximo punto se analizar el significado funcional del DAG. El aumento del Ca2 en el citosol comie nza a producirse a los 10 segundos de iniciada la fusin de los gametos , mientras que la exocitosis de los grnulos corticales se desencadena casi 2 minutos despus. 7) Reasuncin de la segunda divisin meitica por parte del ovocito 11. Mientras bloquea la polispermia, el ovocito II rea nuda la meiosis II. Esta genera dos clulas haplo ides, el vulo - que no llega a formarse porque el ovocito II fecundado se convie rte directamente e n clu la huevo- y el segundo cuerpo polar (fig. 19-2 1EF). Como ilustra la figura 19-23, la reanudaci n de la meiosis II es promovida por el DAG mencionado e n el punto anteri or. Este compuesto activa a la quinasa C, la cual fosforita a las protenas responsables del proceso. 8) Formacin de los pro ncleos masculino y femenino. En la clula huevo los ncleos haploi des del espermatozoide y del v ulo pasan a llamarse pron cleo masculino y proncleo femenino, respectivamente (fig. 19-21F). Mientras se tornan esfricos, ambos se dirigen a la regin central de la clula, donde se desenrollan sus cromosomas y se replica el ADN. La descondensacin de los cromosomas en el proncleo masculino merece una consideracin especial. Es que e n los espermatozoides el ADN no se halla asociado a histonas sino a otro tipo de protenas bsicas - llamadas protaminas- , que compactan al ADN mucho ms que las histonas. Cuando el espermatozoide ingresa en el o vocito, las histonas reemplazan a las protaminas apenas concluye la descondensacin de los cromosomas, y lo hacen muy rpidamente, en menos de 5 minutos. 9) Singam ia y anfimixis. Los proncleos se colocan uno muy cerca del otro en el centro de la cl ula huevo y pierde n sus cariotecas (singamia) (fig. 19-21 G). Finalmente, los cromosomas se vuelven a co ndensar y se ubican en el plano ecuatorial de Ja clula, igual que en una metafase mittica comn (anfimixis) (fig. 19-21 H).

ESPERMATOZOIDE

OVOCITO Protelnas fosforiladas

Ca2

EXOCITOSIS

MEIOSIS 11

F ig. 19-22. Mecanismo mole cular que desencadena la reac cin acrosmica. PLC, PLA y PLD, fosfolipasas C , A y D, respectivamente; PC, fosfatidilcolina; AF, cido fosfatdi co ; LPC, lisofosfatidilcolina.

Durante la anfimixis en cada polo de la clula hue vo hay un par de centro los. Debido a que Jos c uatro derivan del centro lo aportado por el espermatozoide (vase Fusin ), ste tuvo que duplicarse, lo mismo que los dos primeros centroJos hijos (cap. 18- 12). La anfimixis representa el f in de la fecundacin; con ella se inicia la primera divisin ele seg mentacin de la clula huevo, es decir, el desarrollo embrionario (figs. 19-3 y 19-21!) (vanse los captulos 18-22 y 2 1-7).

Fig. 19-23. Mecanismo molecular q ue de sencadena la reacci n cortical y la reanudacin de la meiosis II e n el ovocito Il.

ZP3

LA MEIOSIS EN LAS CELU LAS VEGETALES Y LA REPRODUCCION DE LAS PLANTAS

g*g gg tg ug
PLA

[~~~~c~~fF~~~~~
(pLDI
>pH

'19-20. los mecanismos ce lulares responsables de la reproduccin de las plantas son diferentes de los existen tes en los animales
Los mecanismos celulares que llevan a Ja reprod uccin de las plantas son bastante diferentes de los observados e n Jos ani males. En las plantas superiores el proceso comienza en los rganos reproduc tores masculino (antera) y femenino (ovario), los cuales generan mic1osporocitos y megasporocitos , respectivamente. Estos se dividen por meiosis, que es esprica y oc urre en un mome nto intermedio entre la formacin de los gametos y la fec undaci n. Como se observa en la figura 19-24 , al cabo de la meiosis cada microsporocito origina c uatro m icrosporos haploides funcionales. Por su lado, a partir de cada megasporocito se forman cuatro mega sporos haploides, tres de los c uales degeneran. Los microsporos se convierten en gam etofitos masculinos, conocidos comnmente como granos de p olen. En cambio, el megasporo que sobrevive pasa por tres divisiones m itticas y da lugar al gametofito femenino, que ,onrie n ' \>l:ho n(l!'l!ol h PI>idcs. En !u fecundaci n participan tres de estos llll!'i!' t>rl , tl ,,. lu t lrtltt v .,. don mcho.~ mfart'.\'.

Protenas tosto riladas

lll IICCIO N IIC J tm\OMIC/1

l ;~

,,.,,,.

364

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

Microsporocito

'""('
0

)/

Microsporas (haploides)

0 0 0

'
1 \
Semilla

Megasporo (haploide)

Las bases de la citogentica

20

1
Gametot1 to \

gr~~~P~~~gz;en
Fig. 19-24. Ciclo vital de una planta fanergama.

mascu mo o

o
\_ Tubo

~mbnn

Tegumentos (d1plo1des) (d1p/o1de)

J
Megasporo (haplolde)

polni~o

~~

\:::~~:~to

Endosperma

/,

"" 0

20-1. La unin de la bi ologa celular con la gentica dio origen a la citogentica

":;;:====:~

femem" Ncleos polares (ha plo1 des)

Espermatozoides (haploides)

Ncleo de la clula ovular (haploide)

Por su lado, cada grano de polen genera una estructura accesoria llamada tubo polnico y dos espermatozoides haploides, uno de los cuales fecunda al ncleo de la clula ovular. Se forma as la clula huevo diploide, de la que se origina --en el interior de la semilla- el embrin de la nueva planta. El otro espermatozoide se une a Jos dos ncleos polares, lo que da lugar a un ncleo triploide que al cabo de varias di visiones mitticas genera el endosperma de la semilla, es decir, el material nutritivo del embrin. Como se ve, la semilla es un mosaico de tejidos en el que el embrin es diploide, el endosperma es triploide y los tegumentos poseen clulas diploides de origen materno.

La ctogentica se oc upa de las bases cromosmicas y molecu lares de la herencia y ayuda a resolver impo1tantes problemas en el campo de la medicina, la ganadera y la agricultura. Puesto que estos temas son abordados por los textos de gentica, en este captulo nos ocuparemos slo de los que conciernen a la biologa celular. As, se analizarn las bases c.romosmicas sobre las cuales se asientan los pri ncipios de la herencia, algunas aberraciones cromosmicas que ocurren e n la especie humana - las mutaciones genticas fueron estudiadas en el captulo 17- y el papel que desempean los cromosomas en la evolucin de las especies.

LEYES DE LA HERENCIA MENDELIANA

20-2. Mendel descubri las leyes que llevan su nombre en el ao 1865

,
1 1

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Yt11 k
gcnetic rccombin:uion. t\nnu. l~cv. Bio h m. () J;(,01. 1( ( l'l'l'l) Mnn1111111iuu i"<' liil ~n l i<>ll , l11 : l'h :d olo~ ni l<quodiH'IIon, 111d l'd. l< uv ~ll l'h"IN, N'W

Las bases que rigen la transmisin de los caracteres hereditarios deben buscarse en el comportamiento de los cromosomas durante la meiosis y en las consecuencias genticas de este tipo de divisin (cap. l 9- 14). Sin embargo, cuando en 1865 Gregor J. Mendel descubri las leyes fundamentales de la herencia nada se saba sobre los cromosomas y la meiosis. Sus descubrimientos derivan de resultados de cruzamientos de plantas analizados en forma cuantitativa aplicando un pensamiento abstracto genial. Mendel realiz cruzamientos entre arvej as (Pisum sativum) que tenan pares de caractersticas diferentes y contrastantes. Utiliz plantas con semillas amarillas y verdes, con semillas lisas y rugosas, con flores blancas y rojas, con tallos altos y bajos, etc. Despus del primer cruzamiento observ los hbridos resultantes en la primera generacin filial (F 1), cruz los hbridos F 1 entre s y estudi los resultados en la segunda generacin filial (F 2 ).
20- 3. La ley de la segregacin enuncia que los genes se distribuyen sn mezclarse

En un cruzamiento realizado entre progenitores (P) con semillas amarillas

y verdes, encontr, en la primera generacin (F 1), que todos los hbridos te-

;Jan semillas amarillas y, por lo tanto, slo la caracterstica de uno de los padres. En el seguqdo cruzamiento (F2 ), las plantas presentaban las caractersticas de sus antepasado~ con una proporcin del 75% para las semillas amarillas y del 25% para las verdes, o sea, con una relacin 3: l. M ndcl sostuvo CJII ' el color de las semillas era controlado por un " factor" ' 1'"' s lransntit fa 11 la tlt"h'''""ucia por medio de los gametos, y qu s "fa~:-

366

FUNDAMENTOS DE BIOLOGTA CELULAR Y MOLECULAR

20. LAS BASES DE LA CITOGENETICA

367

tor" - conocido ahora como gen- poda transmitirse sin mezclarse con otm~ genes. Mendel enunci que los genes se separan en los hbridos F 1, entran 'JI gametos diferentes y se distribuyen en los hbridos F2 A causa de ello, est1 ptincipio se denomina ley d e la segregacin de los genes. Posteriormente observ que las plantas con sem illas amarillas en la F2 po seen diferentes constituciones genticas. Un tercio de este grupo siempre da semillas amarillas en la generacin F3, pe ro los otros dos tercios originan plantas con sem illas amarillas y verdes en la proporci n 3: l . El 25% de plan tas de la F2 con sem illas verdes, cuando se cruzan entre s, producen siempre semillas verdes en la generacin F 3 . Ello demuestra que existen dos lneas puras para ese catcter. Si en los cruza tnientos se representa a los genes por medio de letras y s~.: designa con la A a l gen para el carcter amarillo y con la a al gen para el carcter verde, se obtiene el siguiente resultado:
Genes parentales Generaci n F, Generacin F2 AA (homocigota do minante)
1

AA;< aa

l
A a XAa

l
2Aa

1 aa
(homocigota recesiva) 1 verde

(heteroc igotas)

to de feno tipo se extiende a todas las expresiones de los genes, tanto a las visibles (por ejemplo, el color de la piel, el color de los oj os, etc.) como a las que no se detectan por la observacin directa (por eje mplo , las distintas clases de hemoglobina, los grupos sanguneos, etc.). Si se cruzan ciertas plantas q ue tienen flores rojas y blancas, como la Mira bilis jalapa, es posible encontrar en la F2 tres fenotipos y no dos: flores rojas, blancas y rosadas, q ue conesponden a los tres genotipos. Estos casos de herencia intermedia se deben a que en los heterocigotos (flores rosadas) la dominancia es incompleta. Aqu exi ste, por lo tanto, una codomin ancia . Como vemos, no siempre se cumple la regla de la dominancia y la recesiv idad. La codominancia es menos frecuente que la dominancia y la recesividad completas. En la codominancia se da un fenotipo con caractersticas intermedias respecto de los fenotipos de los progenitores, aunque sin que se mezclen los alelos.

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Fenotipo

3 amarillas

La generacin F 1 posee ambos genes - A y a- , pero slo el A es visible (color amarillo) porque es domin ante. El gen a permanece oculto y se denomina recesivo . En los rganos reproductores los dos genes se separan y pasan a gametos diferentes. As, la mitad de los gametos recibe el gen A y la otra mitad el gen a . Dado que en ambos sexos las plantas generan los dos tipos de gametos, en la generacin F2 se producen tres combinaciones genticas posibles en una relacin 1:2: l. E l 25% corresponde a plantas AA con semillas amarillas puras, el 50% a plantas Aa con semillas amarillas hbridas, y el 25% a plantas aa con semillas verdes p uras . Ahora es posible explicar los resultados de Mendel sobre la base del comportamiento de los cromosomas y de Jos genes. Estos se encuentran de a pares -uno en cada cromosoma homlogo- y los dos miembros de cada par se denominan alelos . En cada cromosoma homlogo el alelo ocupa un lugar particular llamado locus (plural, loci). En el caso ilustrado en la fig ura 20-1 se analiza el comportamiento de dos alel os homlogos en el ratn, los dominantes GG en el ratn gris y los recesi vos gg en el ratn blanco. Como se sabe, ambos se separan en la meiosis y entran en los gametos. En la generacin F 1 los ratones resultan hbridos, pues llevan los a lelos G y gen los cromosomas homlogos. No obstante, todos son grises. Cuando se cruzan los hbridos F 1, sus gametos se unen en las combinaciones que muestra la figura 20-1. Los individuos que tienen alelos iguales --GG o gg- se denominan homocigotos, y los que tienen alelos diferentes --Gg- , h eterocigotos. El trmino genotipo define la constitucin gentica del individuo; el trmino fenotipo, las caractersticas visibles. Por ejemplo, en las semillas analizadas anteriormente existen dos fenotipos en la F2 : e l color amarillo y e l color verde, tres amarillas po r cada verde. S in embargo, hay Ir s cno tipos - AA, Aa y aa- , n propor i n 1:2 : l. J:sro si\nifi,fl CJIH' ('X isl<n dos pro ]IOJ'(: OIH'S lll~'lllkli i lllll ,, J11 fe not jl \'11 ( \ : 1) y iii)'I' JI O I p i1 'l l ( 1 ! 1 ), I ' J <' O IJ( ' I'II

20-4. La ley de la distribucin independiente enuncia que los genes que estn en cromosomas dif erentes se distribuyen en forma independ iente

Mientras que el principio de la segregacin se aplica al comportamiento de un solo par de genes, la ley de la distribucin indepen diente describe el comportamiento simultneo de dos pares de alelos cuando estn localizados en cromosomas diferentes . Los genes que no estn localizados en un mismo cromosoma se distribuyen independientemente en Jos gametos, de modo que la descendencia resulta hbrida en dos loci. La figura 20-2 muestra el cruzamiento entre un cobayo negro de pelo corto (BBSS) con otro pardo de pelo largo (bbss). El animal BB SS produce slo gametos BS y el animal bbss produce slo gametos bs. En la generacin F 1 todos los cobayos son negros de pelo corto, pero

~ ~
((

(j)
~~/

'

Fig. 201. Cruza monohbrida

entre un ratn gris (rasgo dominante) y uno blanco (rasgo recesivo). Se indica el paralelis mo entre la distribucin de los genes y los cromosomas, lo mismo que los genotipos resultantes en las generaciones F , y F 2 .
! '

heterocigotos (BbSs ). Cuando dos de los di hbridos de la F 1 se aparean entre s, debido a que cada uno produce cuatro tipos de gametos (BS, B s, bS y bs), al producirse la fecundacin se originan 16 combinaciones diferentes en los cigotos. Nueve individuos de la F2 son de pelo negro y cotto, tres de pelo negro y largo, tres de pelo pardo y corto, y uno de pelo pardo y largo. Esta relacin fenotpica de 9:3:3:1 es caracterstica del cruzamiento de dos pares de genes.

20- 5. Cua ndo los genes estn en un mismo cromosoma se producen ligamientos entre ellos
Los ejemplos anteriormente mencionados de cruzamientos genticos responden al hecho de que durante la meiosis los cromosomas -y con ellos los l'.t'JIL's s distrihu ,.,, ni :.'l.:~r en las clulas de los descendientes (cap. 19- 14). H11 q )I'H , nu u~elt a l ttd l /1 111 r.t11clin:-\ t:O II o hjotivos s 'IH jan1 s n la lllosca

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FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

20. LAS BASES DE LA CITOGENETJCA

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1 PROGENITORES 1

Negro de pelo corto

Pardo de pelo largo

~~o ~~---~
Genotipos (-

{~
(~
(

(lli
Ovulos

Espermatozoides

Fenotipos

Negros de pelo corto

B
(,

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A B

Genotipos

.,(_ ~

~)
~)

A --

1 \

1 \

(~
(

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a
b

Fig. 20-3. Segregacin de dos pares de genes (AB y ab) localizados en sendos cromosomas homlogos. D ado que durante l a meiosis no se ha producido ninguna recombinacin gnica, se f orman dos cl ases de gametos diferen> es: AB y ab.

20-6. El ligamiento puede romperse por recombinacin gentica

Fenotipos

Negros de pelo largo: 3

Fig. 20-2. Cmzamiento de un cobayo negro de pelo corto (rasgos dominantes) con otro pardo de pelo largo (rasgos recesivos). Obsrvese que los genes se segregan independien/nte. (De C. A. Ville.)

Estudios posteriores demostraron que el ligamiento no es absoluto y que se rompe con relativa frecuencia. Esto se ilustra en la fi gura 20-4, que muestra una recombinacin entre los genes A y B durante la meiosis. Por consecuencia, se forman cuatro clases de gametos, dos de los cuales poseen cromosomas que han sufrido recombinacin gentica. Es evidente que el intercambio de segmentos entre las cromtidas homlogas ha roto el ligamiento. La frecuencia de recombinacin entre dos genes ligados en un cromosoma depende de la distancia que los separa. Los que se hallan prximos entre s se recombinan con una frecuencia menor respecto de los que se encuentran apariados. Ms an, las proporciones de ligamientos permiten estimar la distancia entre los genes y averiguar sus posiciones relativas en el cromosoma. En el captulo 19-7 se seal que la recombinacin gentica no es detectable microscpicamente. Sin embano. los quiasmas que se observan en el diplonema son una representacin de los sitios donde se produjo el intercam-

Pardos de pelo corto: 3

Pardos de pelo largo: 1

Negro, largo

@@@
Pardo. corto

a
b

Pardo, largo

Drosophila melanogaster, se observa que la ley de la distribucin independiente no tiene aplicacin universal. As, en los cruzamientos de dos o ms pares de ale los existe una acentuada tendencia por parte de esos genes a quedar ligados, de modo que se produce entre ellos una proporcin de combinaciones diferente de la esperada. La Drosophila posee slo cuatro pares de cromosomas, lo que eleva laposibilidad de que sus genes se encuentren en un mismo cromosoma. Si dos genes distintos -por ejemplo, A y B - se localizan en un mismo cromosoma, y sus correspondientes recesivos --a y b- en el cromosoma homlogo, se obtienen, para esos genes, dos clases de gametos: AB y ah (y no los cualm esperados: AB, Ab, aB y ab). La cocxisiCtH.:ia de dos o mfls g n s n 1 lll sn>o no""'"""ll' s dennii>
11:1 li~lllll i('lltll . l,a fi \lll'll . () \ iJII!il l'l l .-1 IIW! ' ill d :IIIH> dl' Jn I>H ' io .i.'l y J11 1'11111>11
\ inri

a
b

A
b

1 \
A

""'
a
13

a
H

Fig. 20-4. Segregacin de dos pares de genes (AB y ab) localizados en sendos cromosomas homlogos. Dado que durante la meiosi s se ha producido una rccombinaci6n gnit;a, se l'o1 UHIIl ('ll:llnl l' la~L' 1l di.' j'IIIIH'I II/.
dlfnnllt"l; i\/1 , 1 \1, 11 /l y ,,

ti Ion plll lll ' f,r.

1 11 t"N111. 1' 111.n rJ

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

20. LAS BASES DE LA CITOGENETICA

371

bio. Por lo tanto, el nmero de recombinaciones puede ser estimado median te el recuento de los quiasmas meiticos. En las especies con ms quiasm<1~ la posibilidad de recombinaciones es ms elevada, y ello da lugar a mayorc~ variaciones en la descendencia.

METAFASE

!!
1 1
AN AFASE Fg. 20-5. No disyuncin mitlica. Arriba. Metafase normal. Abajo izquierda Anafase normal. Abajo derecha. Anafase no disyuntiva (da lu-

ABERRACIONES CROMOSOMICAS
20-7. Accidenta lment e pueden produ cirse ca mb ios e n e l cariotipo
El funcionamiento normal del sistema genti co se mantiene por la constancia del material heredit.ario en los cromosomas. En los captulos 12-12 y 19-l se dijo que las clulas somticas tienen un nmero diploide de cromosomas -dos juegos haploides de 23 cromosomas cada uno- y se analiz el cariotipo. Accidentalmente pueden producirse cambios en el ca.riotipo, que tienen diversas consecuencias genticas. As, los cromosomas pueden cambiar en su nmero o sufrir alteraciones en sus estructuras. Tales cuadros se denominan, respectivamente, aberraciones cromosmicas numricas y aberraciones cromosmicas estructu ra les.

gar a una clula hija con una trisoma y a otra con una moNormal No disyuncin
nosoma).

20-8. En las poli plo id as las c lu las contienen m lt iplos del nme ro hap loide de cromoso mas, d ifere nt es del d iplo ide
La tabla 20- 1 muestra las dos clases principales ele cambios en el nmero de cromosomas. En las poliploidas existe un nmero superior de conj untos haploides - ms de dos-, pero cada conjunto se presenta equilibrado. As, en las clulas triploides existen tres conjuntos haploides normales, en las tetraploides, cuatro, etc. En las clulas somticas las poliploidas pueden originarse por la reduplicacin ele los cromosomas (caps. 17-4 y 18-24); en los gametos, por la no separacin de los cromosomas en cualquiera de las dos divisiones meiticas.

20-9. En las a neuploid as est afectado e l n mero d iploide de u no de los pares de cromo somas hom logos
En las aneuploidas hay ganancia o prdida de uno o ms cromosomas, por lo que el conjunto deja de ser equi librado. Como la alteracin es cuantitativa, el mensaje gentico contenido en los cromosomas se mantiene intacto, aunque, como se ver, las aneuploidas pueden causar graves alteraciones en el organismo.

Las aneuploidas se producen por una falla en la separacin de los cromosomas hom logos -denominada no disyu n cin-, durante la di visin celular. La causa inmediata de la no disyuncin es la falta de separacin de una de las cromtidas hermanas en la anafase; as, al atTibar la clula a la telofase, esa cromtida permanece en una de las clulas bijas junto a la cromtida hermana. Ello da lugar a una clula con un cromosoma de menos y a otra con uno de ms (fig. 20-5). La no disyuncin se produce generalmente en la meiosis, pero tambin puede ocurrir en la mitosis. La meiosis no disyuntiva da origen a un gameto aneuploide que, cuando se une a un gameto normal, forma un c igoto portador de una ane uploida. Si al gameto aneuploide le falta un cromosoma, el cigoto resultar monosmico. Si le sobra un cromosoma, el cigoto ser tr ismico. As, en los individuos monosmicos se produce la prdida de uno de los cromosomas, mientras que en los trismicos hay un cromosoma de ms (tabla 20-1 ). La mitosis no disyuntiva puede ocurrir en la divisin mittica que precede a la formacin de los gametos o en las clulas derivadas de la divisin del cigoto. En el primer caso, los efectos son similares a los producidos por la meiosis no disyuntiva. En el segundo -<fado que la no disyuncin tiene lugar en los primeros estadios del desarrollo embrionario- se originan mosaicos, es decir, individuos que exhiben lneas celulares somticas con cariotipos diferentes.

" !'
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20- 1O. Existe n va rias clases de a be rraciones cro mosmicas estructu ra les
Las aberraciones cromosmicas estructurales deben ser diferenciadas de las mutaciones gnicas, en las cuales los cambios se producen a nivel molecular, al alterarse el cdigo gentico (cap. 17-1 5). Para comprender los mecanismos que dan lugar a las abenaciones cromosmicas estructurales es necesario recordar que los cromosomas contienen una sola molcula de ADN (cap. 12-1). En las aberraciones cromosmicas estructurales se produce una alteracin en la composicin o en la organizacin de uno o ms cromosomas. As, la ruptura de uno de ellos puede conducir, segn el caso, a la prdida de un segmento cromosmico - fenmeno denominado delecin- , a la duplicacin de un segmento, a la translocacin de segmentos entre cromosomas no homlogos o a la inversin de un segmento dentro del propio cromosoma. Estos .defectos pueden ser detectados si se ana liza a los cromosomas en su estado de mxima compactacin, es decir, en la rnetafase (cap. 12-12) (fig. 12-15) . l)clccin. 1.a pi'rdid:~ dt ttl:ll cri al cromosmico puede ser terminal - e n
1111 t ' X I H' IIltl

Tabla 20-1. "Frmulas y complementos cromosmicos en clulas poliploides y aneuploides

Cuadro clnico l'oliploidas Triploidfa Tetraploida Aneuploidas Monosoma Trisoma Tetrasoma Doble trisoma Nulisoma
( 'onl'l ptc) Jl'IIIo tk
lii111JIUit J'j

Frmula

Co'!'plemento cromosmico*

3n 4n 2n- 1 2n+ 1 2n + 2 2n + 1 + 1 2n - 2
.inlphlk nr, 1,.'ll t"Ht'
c~jomplo

(ABCD) (ABCD) (ABCD) (ABCD) (ABCD) (ABCD) (ABCD) (ABCD) (ABC) (ABCD) (ABCO) (B) (ABCD) (ABCO) (B) (B) (ABCD) (Al3CD) (A(') (AIK) (A ll< 'l
w ltllliJ 111 lcdolthllln,
lniiHI/'41111 111 ,

A.

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372

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR 20. LAS BASES DE LA CITOGENET ICA

373

Normal

Intersticial Delecin { Terminal

ABeBeD

EFGH

Duplicacin

....
Paracntrica Inversin { Pericntrica

Fig. 20-7. Ruptums (flechas) de cromtidas producidas por radiacin. (De H. Evans.)

ABERRACIONES CROMOSOMICAS EN LA E SPECIE HUMANA

AB C D

Translocacin

Fig. 20-6. Esquemas que

muestran algunas de las aberraciones cromosmicas ms
comunes. Translocacin robertsoniana

....
F GH

20- 12. Las c lulas humanas pueden ser afectadas por aberracion es cro mosm icas

A 8

A 8

Las alteraciones cromosmicas ms comunes en el hombre estn representadas por aneuploidas (monosomas y trisomas) y por abe1raciones estructurales. Producen malformaciones congnitas graves, retardo mental y esterilidad, situaciones que actan como mecanismos selectivos para eliminar de la poblacin esos graves desequilibrios genticos. El diagnstico de las aberraciones cromosmicas puede hacerse antes del nacimiento, mediante el estudio de unas pocas clulas fetales obtenidas del lquido amnitico (amniocentesis) o de las vellosidades corinicas (biopsia) (fig. 20-8).
20-13. Una de las aneuploidias autosmicas ms difundid<Js es el sndrome de Down

cromosoma- (fig. 20-6A). En el primer caso la aberracin es el resultado de una sola rotura; en el segundo, de dos. Usualmente las del eciones son letales en la condicin homocigota, lo cual indica que la mayora de los genes son imprescindibles para el desarrollo del organismo. Duplicacin. En esta aberracin un segmento cromosmico est representado ms de una vez en un mismo cromosoma (fig. 20-6B). Las duplicaciones producen efectos menos graves para los individuos que las deleciones. lnve~:sin. Aqu un segmento de un cromosoma se invierte 180. Las inversiones se denominan pericntricas cuando el segmento afectado incluye al centrmero y paracntricas cuando no lo incluye (fig. 20-6C). Translocacin. Esta aberracin cromosmica se produce al romperse dos cromosomas no homlogos e intercambiarse sus segmentos (fig. 20-60). Cuando la rotura se registra al lado del centrmero, ambos cromosomas pueden fusionarse y dar origen a un cromosoma metacntrico ms grande (fig. 20-6E). Este proceso --denominado translocacin robertsoniana- ha acontecido durante la filogenia de muchas especies, en las cuales han apare cido cromosomas nuevos pero su nmero se ha reducido.
20- 11. Las rad iaciones y los mutgenos qumicos pueden producir roturas en los cromosomas

Entre las aneuploidas ms difundidas se encuentra el sndrome de Down o mongolismo, en el que existen tres cromosomas del par 2 1 (trisoma) en lugar de dos. Los afectados presentan un profundo defecto en el desarrollo del sistema nervioso central, retardo mental y otras malformaciones. Esta aberracin cromosmica es ms frecuente a medida que aumenta la edad de la madre (caps. 19-4 y 19-15). Adems, no se observan recurrencias familiares.
Miometrio

'l

.;
: 1

Ext raccin de lquido amnitico

Extraccin de vellosidades corinicas

Fig. 20-8. Esquema que ilus-

Igual que las mutaciones gnicas, las aberra;ioncs CI"OIIH>sil111icas sln>v turales puede n produc irse sponl:hH.::IIII nlt;. No ohslanl l', su f'I<TII<'IIc ia "" lltcnl:t por l:t acc ic~ n de ag 'llles qu nlir o s llllll lgcnnH. (' in lo: vl 1w, 11 ptH . ~ f\ ,, ltltlt' IJ l!ldi!lt ' itllH' ,' , ittlli ll llllt ',' {I IIY t !fj X, j\1 y, lll t iiii111 VH d ~ 1 1! 1) (11 1' , , ,, /)

Cavidad amnitica

tra la reali zaci n de una amniocelllesis para extraer clu-

las fetales del lfquido

plll'n
t' X fl'lll' l'

~ mni

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vllo.Jidncil-1 t'o

1 h 11 l1 IIN

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGJA CELULAR Y MOLECULAR

20. LAS BASES DE LA CITOGENETICA

375

20-14. Otras aneuploidas se dan en los cromosomas de los pares 18 y 13 En la trisona del par 18 - llamada sndrome de Edwards- el nio e pequeo y dbil, su cabeza se halla achatada lateralmente, Jos pabellones au riculares estn mal desarrollados, las manos son cortas y las impresiones di gitales son sumamente simples; presenta evidente retraso mental y la muerh ocurre antes del ao de vida. En la trisoma del par 13 -llamada sndrome de Patau- aparecen ml tiples malformaciones somticas y retardo mental profundo. La cabeza es pe quea y a menudo los ojos son chicos o estn ausentes; tambin son frecuen tes el labio leporino y el paladar hendido. En la mayora de Jos casos la muer te se produce poco despus del nacimiento. 20-15. Las aneuploidas tambin puede n afectar a los cromosomas sexuales En la tabla 20-2 se indican las aneuploidas ms frecuentes en los cromo somas sexuales, junto con los nombres de los sndromes clnicos y la indicacin de la presencia o ausencia de la cromati na sexual o cuerpo de Barr (caps. 1~11 yl~l~ . . Sndrome de Klinefelter. Estos individuos poseen 47 cromosomas (44 autosomas + XXY y, por ende, cromatina sexual positiva). Son de apariencin normal, pero presentan testculos pequeos, ginecomastia, tendencia a una talla elevada, obesidad y menor desarrollo de Jos caracteres sexuales secundarios. La espermatognesis no se produce, lo cual determina la esterilidad que padecen. Se han detectado varones con 48 cromosomas (44 autosomas + XXXY), dos cuerpos de Barr, Jos signos del sndrome de Klinefelter que se acaba de mencionar y retardo mental. Menos frecuentes son los pacientes que tienen 49 cromosomas (44 autosomas + XXXXY), tres cuerpos de Barr, defectos esquelticos, hipogentalismo extremo y un coeficiente mental marcadamente bajo.
Tabla 20-2. Aneuploidas sexuales en el hombre
Cuadro clnico Cromatina sexual

Tabla 20-3. Mosaicos cromosmi.cos sexuales

Sndrome clnico Cromatina sexual

Mujeres

XO I XY
XO / XXY

XO I XXX
Varones XX / XXY

Tumer Tumer Variable Klinefelter Klinefelter Organos sexuales poco desarrollados Hermafrodita

- /+

- / ++ + +
++ !+++
1

XYIXXY
XXXY/XXXXY XO / XY

Sndrome XYY. Los individuos afectados poseen 47 cromosomas (44 autosomas + XYY). Se trata de varones de aspecto normal, altos, con trastornos de la personalidad. Sndrome XXX. Se debe a la presencia de 47 cromosomas (44 autosomas + XXX) y da Jugar a mujeres con fenotipo prcticamente normal. Algunas presentan distintos grados de retardo mental o caractersticas psicticas. En sus clulas se observan dos cuerpos de Barr. Tambin se han detectado pacientes con 48 cromosomas (44 autosomas + XXXX), tres cuerpos de Barr y severo retardo mental. Sndrome de Turner. En el cariotipo de estas pacientes existen 45 cromosomas (44 autosomas + X) y no aparece la cromatina sexual. Los individuos tienen fenotipo femenino, suelen ser de pequea estatura, poseen membranas cervicales (pliegues de la piel que se extienden desde las mastoides hasta Jos hombros) y sus rganos sexuales internos son infantiles. El ovario no completa su formacin y a causa de esta disgenesia ovrica no se desarrollan los caracteres sexuales secundarios. Mosaicos. En los tejidos de estos individuos conviven clulas con distintos complementos cromosmicos. La tabla 20-3 ilustra los mosaicos de cromosomas sexuales ms frecuentes, tanto en varones como en mujeres.
20-16. Existen varios cuadros producidos por aberraciones cromosmicas estructurales La aberracin cromosmica estructural ms comn en el ser humano se produce por la translocacin de un segmento de uno de los cromosomas del par 21 a un cromosoma del par 13, 14 o 15 (fig. 20-9). Genera sndromes de Down, pero menos graves y menos frec uentes - representan el 2% de los casos- , y su aparicin no guarda relacin con el aumento de la edad materna. A veces la presencia del segmento translocado se halla compensada por la ausencia del mismo segmento en un cromosoma del par 21. En este caso los individuos son fenotpicamente normales pero portadores de la aberracin, por lo que pueden transferir la malformacin a sus descendientes. El sndrome del maullido de gato se produce a consecuencia de una delecin en el brazo corto del cromosoma 5. Da lugar a mltiples malformaciones y a un acentuado retraso mental. Adems, el nio emite un llanto extrao, semejante a un maullido. Otros cuadros de aberraciones cromosmicas estructurales se originan por la delecin de una parte de uno de los cromosomas X (genera un cuadro semejante al sndrome de Turner) o por la delecin del brazo corto o largo de ttno de los cromosomas del par 18 (produce alteraciones faciales, esqueltis y oft:lmi as ju111o '<>11 1111 profundo retardo mental).

.1

Monosoma

xo

Turner

2n = 45 Disoma XX Normal 2n = 46 Trisoma

Disoma XY Normal 2n = 46 Trisoma XXY Klinefelter 2n =47 Tetrasoma XXXY Tipo Klinefelter 2n = 48 Penlasoma XXXXY Tipo Klinctcltcr 2n 49

Trisoma

XYY
Sndrome XYY 2n = 47 Tetrasoma XXYY Klinefelter 2n = 48 2

XXX
Metahembra 2n = 47 Tetrasoma

xxxx

Metahembra 2n = 48

fJ.'r 'I IOIIflO

l 'tuu:nintt

M.~t-ll Uhuo

M .l t UhiU I

376

FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

20. LAS BASES DE LA CJTOGENET!CA

377

PROGENITORES NORMAL PORTADOR SANO

11 .. . 1
11
+

1 Cromosoma 21
1 Cromosoma 15

1
1

1 11
1 11
1 11

NORMAL

1
Fig. 20-9. Clulas somticas
(diploides) y gametos (haploides) de los progenitores cuando en el genotipo de uno de ellos existe una translocacin
de un segmento de un cromosoma del par 21 en un cromo-

NO SOBREVIVE

En poblaciones salvajes se demostr que los individuos son, en cierto grado, genticamente heterocigotos. En algunos casos, Jos genes, aun cuando son idnticos, estn ordenados de manera distinta a causa de alteraciones ocurridas en los segmentos crornosmicos. Estos cambios desempearon un papel preponderante en el mecanismo de formacin de las especies. La organizacin de los cromosomas y de los cariotipos observada en los individuos, las especies, los gneros y los grupos sistmicos mayores indica que en la evolucin han intervenido diversos mecanismos cromosmicos. Las principales fuentes de vadacin han sido la aneuploida y Ja poliploida. La poliploicla no es tan importante en el reino animal. Entre los vertebrados, diversas clases de peces tienen distintos nmeros de cromosomas. Los anfibios, en especial los anuros, se caracterizan por la presencia de un nmero fijo para cada familia. La variacin en las aves y en los mamferos se debe ms a cambios en los cromosomas individuales y a mutaciones gnicas que amodificaciones en el contenido total del material gentico. 20-19. Se ha estudiado la evolucin del cariotipo en los primates

11 11

1
1

MONGOLICO

soma del par 15. A la derecha se muestran las posibleS clulas somticas (diploides) de los descendientes.

.
DESCENDIENTES

PORTADOR SANO

GAMETOS

20-1 7. Algun os tumores muestran aberraciones cro mosmicas en sus c lulas Las clulas cancerosas frecuentemente presentan aneuploidas, cromos" mas rotos y aberraciones cromosmicas estructurales (translocaciones) (cap 18-30). Por ejemplo, en la leucemia mieloide crnica aparece el llamad" cromosoma Filadelfia, producto de una translocacin entre los cromosomtt1 9 y 22 (cap. 18-31). En el retinoblastoma, el defecto en ambos alelos del g<" n Rb puede deberse a deleciones en el brazo largo de los dos cromosomas dl par 13 (cap. 18-32). En e1linfoma de Burkitt se transloca una parte del er" mosorna 8 al cromosoma 14. En algunos cnceres de pulmn se observa uur delecin en el cromosoma 3.

Muchos de los trabajos sobre la evolucin se refieren a la relacin cito gentica entre el hombre y los grandes monos (chimpanc, gorila, orangutn). Dado que el hombre tiene 23 pares ele cromosomas y Jos grandes monos poseen 24, por lo menos pudo haber tenido lugar una translocacin robertsoniana en su evolucin (seccin 20-1 0). Se cree que el cromosoma 2 del hombre c:s el resultado de tal translocacin a partir de dos cromosomas de los monos. Por otra parte, trece pares de cromosomas humanos son casi idnticos a otros 1antos pares de cromosomas del chimpanc, y en Jos restantes cromosomas se observan inversiones pericntricas y adicin de material cromosrnico. En suma, en los primates la evolucin de los cromosomas ha sido consecuencia de fusiones, translocaciones y, fundamentalmente, inversiones pericntricas de segmentos cromosmicos, todo lo cual permiti seleccionar a los genes que dieron origen al Horno sapien.>. El anlisis de la secuencia del ADN mitocondrial tambin tuvo un impor1ante impacto en los estudios taxonmicos. Permiti establecer relaciones genealgicas entre especies ntimamente relacionadas --como la humana y la de los monos- y reconstruir el posible rbol evolutivo de esas especies.

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( ~ 1' 111 t

PAPEL DESEMPEADO POR LOS CROMOSOMAS EN LA EVOLUCION

20-18. La ci tog entca mptlls el estudio de la evolucin de las especies El estudio de la evolucin torn gran impulso gracias al desarrollo de In citogentica, al poder compararse los genomas de especies ernparentad w: , La sistemtica tambin experiment un progreso considerable por el apm" lt de la citogentica, pues sta le ha proporcionado muchos recursos para cl ilu cidar interrelaciones entre diferentes categoras taxonmicas (co mo se sal w, las familias, gneros y especies se caracterizan por tener sislema s g u ' li<"" distintos).
s ric

El estudio del cariolipo d di v,rsas s pr ies Ir a p< rrll itid" ''''' " """~"' " ' 1111 11 d l htv ho.; eh )1 ,fi lll i lllt ' J t- ::, la111o t'.IJ ~ ~ 1 rt ~ i lltl 111 rlsn rd t 'tl lll t l t' ll 1 , Vt 1" 1 d

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

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La diferenciacin celular
21 - 1. Introduccin
En la primera parte de este captulo, despus de exponer las caracte sticas generales de las diferenciaciones celulares, analizaremos Jos posi bles mecanismos que generan las diferencias iniciales entre las clulas de los embriones ms jvenes. Luego veremos cmo se forma el cuerpo del embrin y estudiaremos los mecanismos que dan lugar a las diferenciaciones celu lares - y el modo como se mantienen- en las etapas ulteriores del desarrollo. Finalmente, nos ocuparemos de los genes responsables del establecimiento del plan corporal en la mosca Drosophila melanogaster y de sus posibles equivalentes en Jos embriones de los vertebrados.

21

21- 2. Caractersticas generales de la diferenciacin celular

En trminos moleculares, diferenciacin celular significa actividad gnia variada en las clulas de un organismo. La especializacin de las clulas implica la sntesis de protenas especficas (como la hemoglobina en los eritrocitos, Jos anticuerpos en los linfocitos, los neurofilamentos en las neurouas, etc.); as, en cada tipo celular se expresa un gen singular, distinto de los expresados en los otros tipos celulares (en realidad, las diferencias no son delc>minadas por un solo gen sino por conjuntos de genes distintos). En el captulo 14 estudiamos los mecanismos que regulan la expresin de los genes. Muchas de las actuales investigaciones en biologa molecular procuran interpretar cmo se expresan los genes en las distintas clases de clulas. Obviamente, no todos los genes que se expresan en un tipo celular dado lo hacen en forma exclusiva. Algunos se activan en todos los tipos celulares; 'i<' llaman genes de mantenimiento y son necesarios para construir los componentes comunes a todas las clulas (por ejemplo, las membranas celula" s, los ribosomas, las mitocondrias, las enzimas glucolticas, etc.). En caml>io, los genes que se expresan en forma diferencial (como los de la bemol' lobina, los anticuerpos, los neurofilamentos, etc.) corresponden a las Jlamadus -en la jerga de la biologa celular- funciones de lujo.
J

l - 3. En las clulas diferenciadas el genoma permanece constante

l .a diferenciacin celular no acarrea prdida de informacin gentica, de "'"do que en todas las clulas del organismo --cualquiera que sea su estado ti diiCrenciacin- existen conjuntos de genes idnticos, que son los mismos '1'"' s hallaban en la clula huevo. Una prueba rigurosa de ello provino de , ~1 w ri nlcnt.os de tniSIIhm h.' nuclear en huevos de la rana Xenopus. Se des' "'Yoou sns n1ckon <'<>11 1111 11llollviolcfa y se les inycclaronncleos somli111 ti!- 1' lul w lntc 11 111d ' t1tplt ' llllllt"llft' dift'll'IH'i:ulns, provcnicnlcs ch-1
1

380

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

21. LA DIFERENC!ACION CELULAR

381

Clula huevo

Clulas epidrmicas

Rana

) -.. ( ") +--

Destruccin del ncleo Transferencia del ncleo

~
Renacuajo

Rana

mismo animal. Como se observa en la figura 21-1 , los huevos que recibieron un ncleo de clula intestinal se desarrollaron hasta formar ranas adultas normales, que adems resultaron frtiles. Esto demuestra que las clulas somticas conservan todos los genes requeridos para completar el ciclo vital de la rana, incluida la formacin de sus clulas germinativas. El trasplante nuclear es posible tambin en mamferos. En el ratn el procedimiento se basa en la introducci n de un ncleo somtico de un embrin temprano en un cigoto recientemente fertilizado al que se le extraen con la misma pipeta los proncleos feme nino y masculino (fig. 21 -2). Como es lgico, la cra que resulta es genticamente idntica al embrin que aport el nc leo. Procedimientos similares permiten la clonacin de mamferos de mayor tamao, aunque con ellos la cra se gesta a partir de un ovocito al que se le extraen los cromosomas y se le introduce el ncleo diploide de una clula somtica tomada generalmente de otro animal adulto.

Fig. 21-1. Trasplante nuclear en la rana Xenopus laevis. Se extraen ncleos de clulas del intestino y se lfasplantan a huevos cuyos ncleos son previamente destruidos con rayos ultravioletas. Puesto que se obtienen ranas adultas, puede afirmarse que las clulas somticas contienen los genes

21-4. El estudio de las interaccione s nucl eocitoplasmticas ha aportado conocimientos sobre los mecanismos que es tablece n y manti en e n las difere nciacion es celulares

que se necesitan para formar

un organismo completo.

El ncleo y el citoplasma son interdependientes: uno no sobrevive sin la presencia del otro. Por ejemplo, mientras que el citoplasma posee las molculas de ARN para la sntesis proteica y provee la mayor parte de la energa de la clula mediante la fosforilacin oxidativa en las mitocondrias, el ncleo aporta la informacin gentica que da lugar a esos ARN. Las clulas HeLa - una lnea celular indiferenciada derivada de un carcinoma uterino de una paciente llamada Henrietta Lacks - tienen la propiedad de multiplicarse indefinidamente en medios de cultivo. Pueden ser enuclea das por centrifugacin tras el agregado de citocalasina B , una droga que de sarma los filamentos de actina (cap. 5-8). El tratamiento hace que los ncleos tiendan a escaparse de los citoplasmas, aunque inicialmente quedan conecta dos por un pequeo istmo (fig. 21-3). Cuando se desprenden se forman m cleos rodeados por una delgada envoltura citoplasmtica (carioplastos) y ci toplasmas sin ncleo (citoplastos). Ambos sobreviven muy poco tiempo. No
~e mbra donante ~~del blastocisto
a . : _mbra donante

obstante, los citoplastos, que permanecen viables por lo menos dos das despus de la enucleacin, realizan las princ ipales funciones de las clulas normales. Esto indica que las funciones citoplasmticas no dependen del ncleo celular, al menos durante un tiempo. La interdependencia entre el ncleo y el citoplasma ha sido demostrada mediante experimentos de fusin celular. La fusin de clulas con ayuda del virus Sendai permite co locar ncleos en citoplasmas ajenos a ellos. E l producto de la fusin de dos cl ulas diferentes se denomina heterocarin (cap. 3-6), que es una clu la con dos ncleos de distinto origen. Como se ve en la figu ra 21 -4, ambos ncleos pueden entrar en mitosis, formar una placa metafsica comn, dividirse y producir clulas hijas hbridas con cromosomas de los dos ncleos progenitores. Al fusionarse eritrocitos de pollo con clulas HeLa, los ncleos inactivos de los primeros se reactivan. Debe recordarse que los eritrocitos tienen una vida muy breve (cap. 18- 1). Si bien en los mam feros estas clulas pierden el ncleo cuando cu lmina su diferenciacin, ello no ocurre en las aves , que Jo retienen en forma inactiva. As, los eritrocitos de pollo son clulas diferenciadas con un ncleo muy condensado, que no sintetiza ADN ni ARN. El inters de este heterocarin reside en que despus de la fusin el ncleo del eri trocito aumenta su volumen unas 20 veces, dispersa su cromatina, comienza a sintetizar ARN , forma un nuclolo y su ADN llega a replicarse. En consecuencia, es capaz de reanudar la sntesis de ARN y de ADN a pesar de provenir de una clula en la que ambas actividades no se producen jams. La revelacin ms importante de este experimento de fusin celular es que la sntesis del ARN y del ADN en el ncleo es controlada por el Clula citoplasma. Dicho de otro modo, sustancias presentes en el citoplasma ingresan en el ncleo e ind ucen la duplicacin del ADN y la produccin de los ARN.

Carioplasto 0

Citoplasto

-_.,:::,.
./\..._.._

Fig. 21-3. Formaci n de carioplastos y citoplastos a partir de clu las adheridas a una superficie de plstico y tratadas con citocalasina B.

Clula

21 -5. El co ntro l de la actividad gnica se cumple e n

varios niveles Los experimentos de fusin de clulas y de trasplante n uclear han demostrado que los genes no se pierden en el c urso de la dilcrenciacin celular y q ue las diferencias entre las clulas espe<.:iali zadas se deben a que en cada una se expresan conjuntos de )\enes di stintos. Concurrentemente, los resul tados obtenidos con los experimentos de fusin celular no dejan dudas de que el citoplasma contiene componentes capaces de reg ular la actividad de los genes. En la seccin 2 1-7 se ver que si en la clula huevo sos compone ntes se distribuyeran asi mtricamente en el citopl as ma y, por lo tanto, se repartieran entre las cl ul as embrional i u.~ !tijas en form a despareja, podran tener un papel fundamental t'll e l esta blecimiento de las primeras diferenciaciones cel ulares '1 1 1embrin. C'cllno se se11al en los captulos 14, 15 y 16, el control de la IH'Iividnd gnicn se cumple en varios ni veles, aunque el ms gelll litli zlldo es e l control transcripcio nnl. Debe recordarse cmo 111'1111111 lo i'at'lt>t'l1S do ll'iiiiS.:ripcii\n, la importancia del g rado de l lltt> IIHIItltllllt> el<~ lu n ont ltlin lt y I11N l]h los r gul111nrins de lu mcll liH 'i''" dt In l'illltHtllt , YIIII'II IIIIHio, h 1 1 11 1111 ' '' "' cl rt1 parto flNi1111 (/''"

~~ del cigoto

F ig. 21-2. Esquema de un trasplante nuclear en el ratn. Se toma un blastocisto de una hembra preada y con una micropipeta se extrae el ncleo de una de sus clulas. Con la misma micropipeta ese ncl eo se introduce en un cigoto recin f ormado aportado por otra hembra, al que posteriormente se le extraen los pron cleos masculino y femenino. El embrin as obtenido se desarrolla in vitro hasta el perodo de blastocisto y se implanta en el tero de una hembra

~
. '
Extraccin de un ncleo del blastocisto

Inyeccin del ncleo en el cigoto

MITOSIS

Extraccin de 101 proncleos derii'J''"'

~ - ~--- ,
n(Jflf:(!llfh ulf:lf l lfiii!IIH I I llllll hll lll!nl ul/ 1

+t , IIIVI '

Fig. 21-4. Fusin celular mediante el virus Sendai, que lleva a la produccin de un he tcrocarin con dos ncleos. La clula hbridn es el rcsulladn de una di visi6n sincr6nic01

scudopreiiada, donde cvt)lurioualtaN ia d nntltnitllfn.

111111 hu 1i11lt1

,,,/11.1 ' '''"''''"'" "'

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1

382

FUNDAMENTOS DE BJOLOG!A CELULAR Y M OLECULAR

21. LA DIFERENC!AC ION I 'HI 111 A 11

IH 1

Fig. 21-5. Segmentacin o clivaje de la c lula huevo hasta la formacin del blastocisto.

entre las primeras clulas embrionarias, diversas experiencias sugieren que algunos de esos componentes son factores de transc1ipcin especficos que activan a genes especiales en las sucesivas clulas hijas a medida que la clula huevo se segmenta.
21-6. La aparicin de las dif erenciaciones celulares en el embrin y el modo como se desarrolla el plan corporal constituyen unos de los principales enigmas de la biologa actual

Posteriormente el embrin se convierte en una esfera hueca -denominada blastocisto (fig. 21-5EF)- en la que se visualizan dos tipos de tejidos, el macizo celular inter no, primordio del futuro cuerpo del individuo, y el trofoblasto, que interviene en la formacin de la placenta. Dos semanas despus el macizo celular interno da lugar a un embrin plano discoidal compuesto por tres capas epiteliales superpuestas. Estas se llaman ectodermo, mesodermo y endodermo y entre ellas existen inequvocos signos de diferenciacin (fig. 21-6). Nos ocuparemos ahora de describir cmo surgen las diferencias iniciales entre las clulas del embrin primitivo. Dado que las clulas ms tempranas no escapan a la regla de contener los mismos genes que la clula huevo, las desigualdades iniciales entre ellas deben buscarse en las molculas distribuidas en sus citoplasmas, que heredan al segmentarse la clu la huevo. En efecto, se considera que el citoplasma de la clula huevo contiene - asimtricamente distribuidas- molculas que se reparten de manera desigual entre las primeras clulas del embrin y que influyen en la actividad de sus genes (fig. 2 1-7). As, esas molculas --que llevan el nombre de determinantes citoplasmticos del desa!Tollo- actuaran como factores de transcripcin especficos (cap. 14-7 y seccin 21 -5).
21- 8. La idea de la distribuci n asimtrica de los det erm inantes cit oplasmticos fue presentada hace ms de 100 aos

La cuestin de cmo aparecen las diferencias entre las clulas en el curso de la embriognesis constituye uno de los mayores enigmas de la biologa del desarrollo. Si bien en los ltimos aos se han adquirido importantes conocimientos sobre el tema, los interrogantes esenciales continan sin respuesta, aunque van cediendo a medida que progresa su investigacin. Otra cuestin que desvela a los investigadores es conocer cmo se establece la organizacin espacial del cuerpo. Se sabe que, conforme se reproducen y diferencian, las clulas embrionarias no quedan mezcladas para ordenarse despus, sino que paso a paso van construyendo el cuerpo a pequea escala. Ello se debe a que las clulas arman una especie de andamiaje o modelo corporal, que constituye el basamento de la estructura definitiva del cuerpo.

21 - 7. Los determinantes citoplasmt icos se repa rten asimtricamente en la cl ula huevo

Fin. 2 1-6. l:squellla th rlil1 1111lnnr dt } 1 d(uN,

Los organismos multicelulares se desarrollan a partir de una clula huevo que, tras sucesivas divisiones y diferenciaciones, da origen a la totalidad de las clulas que componen los tejidos corporales. En primer trmino el cigoto experimenta una serie de divisiones rpidas en las cuales se duplica slo el ADN (fig. 19-3). Debido a que el citoplasma de las sucesivas clulas hijas se va reduciendo o segmentando Ectode rmo con cada ciclo di visiona!, a estas divisiones se las denomina dt segmentacin o clivaje (cap. 18-22) (fig. 21 -5). Notocorda Cabe sealar que a partir del estadio de 16 clulas los cito plasmas se vinculan por uniones comunicantes (cap. 6- 14) y - --Endodermo las clulas perifricas se enlazan entn: s por uuiou s ol'l usiv:w (cap. 6- 11 ). uaudo 1 t:rnhriu aleauza t'St' t'~l l:ulio adqnit~t Ir forrna dl' llllil tsli.ra ."l Jlida t'OIIll ~qwdo th 111111 11 , rr r111ivo por, lnN llnjlt': dr l t'tuhri{lll t'lllll lt't 'ilw t ' lllt~llrl>l> ' olt IIIUI' II III (l tl' 11 >1 1)
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La idea de que el citoplasma de la clula huevo contiene determinantes que se distribuyen en forma desigual entre las clulas hijas y afectan la actividad nuclear no es nueva. En la edicin de 1896 de la clsica obra de E. B. Wilson, The Ce// in Development and Heredity, el desarrollo embrionario primitivo aparece resumido de la siguiente manera: "Si la cromatina fuese el idioplasma [trmino antiguo aplicado a los genes] en el cual se reuniera la suma total de las fuerzas de la herencia, y se distribuyera por igual con cada divisin celular, de qu manera podra variar su modo de accin en las distintas clulas para causar diferencias de estructuras [es decir, diferenciacin]? Por la influencia del idioplasma, el citoplasma de la clula huevo, o de los blastmeros derivados de sta, experimenta cambios especficos y progresivos, y cada cambio reacciona sobre el ncleo e incita un nuevo cambio. Estos cambios difieren en las distintas regiones de la clula huevo debido a diferencias preexistentes -qumicas y fsicas- en la estructura citoplasmtica, y stas constituyen las condiciones bajo cuya influenci a acta el ncleo". Como vemos, algunos de nuestros conceptos sobre el desarrollo han cambiado poco en el curso de los aos. Por otro lado, a lo largo del camino hemos aprendido bastante acerca de cmo se controlan los genes. Los mtodos de estudio actuales han hecho del control de la actividad gnica uno de los campos de la ciencia biolgica que avanza con mayor celeridad. As, la sensacin de optimismo de quienes creen que se llegar muy pronto a comprender detalladamente cmo se controlan los genes durante el desarrollo embrionario parece justificada.
21-9. La segregacin de los determinantes citoplasmt icos es fcilmente detectable en algunas especies

Fig. 21-7. Arriba. Determinantes citoplasmticos del desarrollo en la clula huevo. Abajo. Obsrvese su reparto asimtrico entre las clulas hijas.

1~~~ alguuas espcc i<s la SL'gr' gacin de los componentes citoplasmticos de lu ,., lul a lillt'VO L'N < 'VIIIo 'lllt' 1111 hllt' ll , utplo lo proporcionan los !tu vos de
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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

21. .LA DIFERENCt ACION CELULAR

385

Polo animal

Espermatozoide

Blastocele

Futuro lado dorsal Blastoeele

Lado dorsal

~7 ~~
Polo vegetativo Medialuna gris Blastoporo Cavidad intestinal Futura cabeza Intestino OVOCITO CELULA HUEVO BLASTULA GASTRULA RENACUAJO Fig. 21-8. Desarrollo de la ra-

lo cual produce, en ese lugar, un rea denominada medialuna gris (fig. 21-8). Ms tarde esa regin da origen al blastoporo, es decir, el lugar donde las clulas superficiales se invaginan para fonnar el mesodermo. En consecuencia, el punto de entrada del espermatozoide, que es fortui to, determina la posicin del eje dorsoventral del futu ro individuo (fig. 21 -8).

21-11. En los e mb riones de ma mferos las primeras ocho c lulas

so n tot ipote ntes La dispar distribucin de las molculas contenidas en la clula huevo se extiende --<iiversificndose cada vez ms- a las s ucesivas generaciones de clulas, lo c ual se prolongara hasta la formacin del embrin de tres capas. No obstante, en los mamferos lo antedicho no es aplicable hasta la cuarta divisin de segmentacin, ya que al cabo de las tres primeras, al forma rse el embrin de 8 clulas, entre stas y el cigoto aparentemente no existe diferenciacin. As, hasta ese estadio cada una de las clulas es totipotente, es decir, puede generar un organismo completo, como la propia clula huevo. Esta condicin es la que hace posible el desarrollo de gemelos idnticos. En sntesis, es probable que en los citoplasmas de las primeras 8 clulas embrionarias existan molculas cuantitativa y cualitativamente equivalentes a las de la clula huevo, lo cual indicara que hasta ese momento su reparto fue parejo.

na Xenopus /aevis. La gastrulacin comienZ:l a las 1O horas de la fecundacin y durante su transcurso se producen

extensos movimientos celulares morfogenticos. El blusto pom se forma en el centro de una zona pigmentada llamada medialmw t:ris, que ap~lrecc en el lado opuesto al de la entrada del espermatozoide. Este punto determina el eje dorsal del embrin. (Cortesa de J . B. Gurdon.)

llamada plasma gemzinativo, que puede reconocerse porque posee unos gr nulos especiales. Al culminar la segmentacin, e~a regin del citoplasma 1h la clula huevo da origen a las clulas germinativas del nuevo organismo. Po1 lo tanto, cuando se irradia con luz ultravioleta el plasma ge rminativo de lo~ huevos, los animales resultan estriles. En cambio, si se inyectan plasma~. germinativos en otros puntos del huevo, en el indiv iduo adulto aparecen c lulas germi nativas en localizaciones anormales.

21-10. Los ovocitos acumu lan sustancias para ser usadas du rante
el desarro ll o incip iente del nuevo ind ividuo En general, los ovocitos -y por ende, los cigotos- son muy volumino sos, ya que acumulan muchas de las molculas y de las estructuras que se m cesitan para que se concreten las primeras etapas del desarrollo embrionario Por ejemplo, un ovocito de Xenopus contiene 100.000 veces ms ARN poli merasas, histonas, mitocondrias y ribosomas que una clula somtica dd mismo animal adulto. Una de las razones para acumular esos materiales no tener que fabricarlos durante la embriognesis temprana- es la extraru dinaria rapidez de las divisiones celulares durante el clivaje o segmentaci n de la clula huevo. La velocidad es tao alta que no da tiempo para que se sin teticen nuevos ARN y protenas. Se sabe que la mayora de estas molcuilw se forman durante la ovognesis, de modo que estn en el citoplasma del ovo cito -y de la clu la huevo- mucho antes de que se produzca la fecundu cin. Obviamente, tales molculas son codificadas por genes pertenecienl<'' a la madre, no al embrin. La primera divisin de segmentacin en el huevo de Xenopus tiene lua1 90 minutos despus de la fetilizacin. Las once divisiones siguientes se pro ducen cada 35 minutos, en forma sincrnica. Comprese este tiempo con d de 24 horas utilizado por una clula comn para dividirse. La produccin,, . estos ciclos celulares tan cortos se debe a que en el ADN de las primeras \T lu las embrionarias aparecen muchos ms orgenes de replicacin (lo q111' acorta la fase S) y las clulas omiten las fases G 1 y 02. As, cada mitosis n seguida por otra en forma inmediata. El ARN comienza a sintetizarse a p:u tir de la duodcima divisin de segmentacin. La causa que impide esa s(n tesis en las etapas previas sera la presencia de una sustancia que se um: u lu cromatina y anula la transcripcin del ADN. Dado que su cantidad seda .u ficiente para bloquear el ADN de hasta 4.000 ncleos, esa sustanc ia s a" tara en la duodcima divisin de segmentacin, moment o en lJII los 1u comienzan a expresarse. En mm;has ~:sp i s lalo ;1ii1.acin dt l:ts lnol tlll:ts IIJIIHI IHin:; 11111 11 Vn l' ito 1111 St' h;lila i'ijada ,,. llllh'lllllllll. l'111 <' i< ' IIIJ'III. 1' 11 tl l1111 VI>,, 't 'tlll/ '11 1 l1 1

21 -1 2. En las eta pas ms prim it ivas de l desarrollo e mbrionario las

c lu las podra n difere nciarse de acuerdo con sus posicione s E n los embriones de mamferos no se descarta el siguiente mecanismo para la generacin de las primeras diferenciaciones celulares. Durante el traslado del embrin por la trompa de Falopio, sus clu las seran alcanzadas por diferentes concentraciones de sustancias presentes en el medio, de acuerdo con las posiciones que ocupan en la mrula. As, cuanto ms profunda es la ubicacin de una clula en la mrula, menos concentradas le ll egaran tales sustancias, y esa di simil itud podra contribu ir al desencadenamiento de las primeras diferenciaciones celulares. Cabe sealar que las sustancias que ingresan en el embri6n se propagan de una clu la a otra a travs de las uniones comunicantes, aparecidas apenas se constituye la mrula, cuando se alcanza el estadio de 16 clulas (seccin 2 1-7). Lleva el nombre de morfgeno toda sustancia difusib)e que produce respuestas diferentes en clulas idnticas segn el nivel de concentracin con que llega a ellas. La calidad de la respuesta -en este caso, el tipo de diferenciacin- se debera a que en las clulas inducidas se activaran genes distintos cuando el morfgeno se halla por debajo o por encima de sucesivos umbrales de concentracin.

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21-13. Los va lores posiciona les de las clula s e mbri onarias crea n
las bases para la apa rici n de los fe nme nos inductivos Las sustancias involucradas en la generacin de las primeras diferenciaiones tienen una responsabilidad adicional: dejar establecidos los cimientos que condicionan la aparicin de las diferenciaciones futuras. En efecto, a medida que los grupos celulares se ubican en sus correspondientes emplazant icntos corporales, esas sustancias les confieren a las clulas determinados vulnres poslclnnuk~. di N ti nl tts entre s. Estos valores comienzan a tener vi'11 CJI Il' lus ~: lulas mbrionari as se dislribuy n en 1 l' lll'illll p11rtir tl lnuult 11111 1 1'111 1 111111 1 mlll'ln Jlhuw frllumlnnl' ttt t'lt JIIt!l pil<l lui< ' IIJ" '1'"' lit

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FUNDAMENTOS DE BJOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

2 1. LA DIFERENCJAC!ON CELULAR

387

(fig. 21-6)-, lo que da lugar a relaciones de vecindad entre Jos grupos celulares que hacen posible la influencia de algunas clulas sobre otras. As, en este contexto una clula puede actuar sobre otra -la primera emitiendo una seal y la segunda diferencindose- al posibilitar sus respectivos valores posicionales tal accin y tal reaccin . En otras palabras, los valores posicionales crean las bases para la aparicin de los fenmenos inductivos propulsores de la mayor parte de las diferenciaciones venideras. Los estudiaremos despus de analizar cmo se establece el modelo corporal en los embriones de los mamferos.

21-14. El plan corpo ral se est a blece muy temprano en los embriones
En los emb1 i ones de los mamferos, las polaridades corporales -o sea, los ejes cefalocaudal, dorsoventral y mediolateral del cuerpo- se instauran apenas comienza a formarse el mesodermo, la tercera en aparecer de las capas epiteliales que integran el disco embrionario de 21 das (fig. 21 -6). El punto de referencia para esas coordenadas es el ndulo de H ensen, donde se originan la notocorda y las restantes partes del mesodermo, es decir, la placa cardiognica, el mesodermo branquial, los somitas, los gononefrtomos y los mesodermos laterales (fig. 21-9). El embrin plano trilaminar no tarda en ingresar en una etapa salie nte de su desarrollo y a la vez crucial para el establecimiento del modelo a partir del cual se formar el cuerpo del futuro indi viduo. En ella el disco embrionario se pliega tanto longitudinal como transversalmente, lo que genera un cuerpo cilndrico, con sus extremos ceflico y caudal, sus caras ventral y dorsal y sus lados derecho e izquierdo perfectamente identificables. Ms an, en su dorso -previa aparicin de un surco ectodrmico-- se forma el tubo neural, donde es posible distinguir una sutil metamer izacin (o segmentacin), particularmente en el prosencfalo y en el rombncfalo. Los segmentos en que se divide el prosencfalo se denominan pros6meras ; los del rombencfalo, rombmeras. Una vez formado el tubo neural, a Jos lados de la mdula espinal quedan situados los somitas, cuyos bloques le confieren al cuerpo una segunda metamerizacin (fig. 21-9). Junto con el establecimiento del plan general del cue1po comienzan a aparecer los esbozos y a diferenciarse las clulas y tejidos de prcticamente todos los rganos corporales. El primer sistema orgnico que aparece - y funciona- es el ca.rdiocirculatorio, cuya sangre en poco tiempo ms ha de transportar, entre otros elementos, a las sustancias inductoras de mltiples diferenciaciones (seccin 21- 18). 21- 15. las diferenciaci ones generadas por fe nmenos ind uctivos com ie nza n cuando se forma el embrin t rilaminar
L~s inducciones son procesos por los cuales las clulas de algunos tejidos incitan a las clulas de otros tejidos a que se diferencien, es decir, a que se transformen en otros tipos celulares (segn la oportunidad, tambin pueden hacer que mueran, cambien su ritmo de proliferacin o se movilicen). Lamanifestacin de este mecanismo biolgico revela la existencia de por lo menos tres grupos celulares distintos: unos que se comportan como inductores, otros que son inducidos y otros que no inducen ni se dejan inducir. Para que las clulas puedan ser inducidas tienen que s r competentes, s decir, deben tener la capacidad ele reaccionar on un ca111hio (di k ll'lll' iaci 11) anl !:1 pr s 11cia d 1111:1 sushmdulndudnna. 'J'al""l'" ll'lll'i 1 ah:ll l'll u11 1,..

del momento adecuado, su influencia es nula; no obstante, en algunos casos una misma clula puede seguir distintas vas de diferenciacin segn el momento en que la influye el inductor. Por su parte, a menudo los tejidos inductores tambin tienen un tiempo limitado para ejercer sus acciones inductivas. Un ejemplo de induccin y de competencia Jo ofrecen la notocorda y el ectodermo situado por encima (fig. 21-6): la notocorda carece de accin inductiva sobre el endodermo y el resto del mesodermo debido a que estos tejidos no son competentes como lo es el ectodermo. Parte de ste se diferencia en tejido nervioso al ser inducido precisamente por la notocorda, nico tejido habilitado para tal fin. Vemos entonces que la notocorda y el ectodermo son diferentes entre s y respecto de los otros tejidos no slo por sus localizaciones y caractersticas morfolgicas sino tambin por sus comportamientos inductivos. Estos estados de diferenciacin derivan ele las historias previas de los grupos celulares, que poseyeron distintos valores posicionales segn los determinantes citoplasmticos que heredaron de la clula huevo.

Fig. 21-9. Disti ntos sectores en que se segmenta la hoja mesod6rrnica del embrin de 21 das, al que le confieren una evidente polaridad corporal.

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21-16. Se han ide ntificado algunas molculas capaces de gene rar ind ucciones t e mp ran as en el embrin
El tipo de induccin que acabamos de analizar exige que Jos tejidos participantes sean vecinos, ya que el tejido inductor ejerce su influencia a travs de molculas difusibles que secreta en el medio y que alcanzan al tejido competente si ste se encuentra en las inmediaciones (secrecin paracrina). Cabe agregar que el tejido reacciona --es competente- si sus clulas poseen receptores especficos para tales molculas. Ultimamente se han identificado algunas molculas con probada capacidad para generar inducciones. Una de ellas -a la que se le ha dado el nombre de activina- fue detectada en el embrin temprano de Xenopus , en el que podra desempear un papel inductivo en el labio dorsal del blastoporo (a nivel del organizador de Spemann ), una estructura equivalente al ndulo de Hensen de los embriones tempranos de los vertebrados superiores (figs. 21 -6 y 21-8). La activina pertenece a la familia ele sustancias inductoras TGF-~ (cap. ll-11 ), lo mismo que otra molcula con similares funciones inductivas, llamada Vg-1 (por vegeta/ising-1 fa ctor). El FGF, mencionado en el captulo 11 -12, tambin est involucrado en actividades inductivas durante el desarrollo embrionario. En diversas localizaciones de embriones de varias especies se han descubierto otras molculas con funciones inductivas, como la dorsalina -tambin perteneciente a la familia TGF-~-; una familia de molculas llamadas Wnt (por winglesslint) -necesarias para la formacin del mesodermo y el sistema nervioso central-; las protenas denominadas noggina, folistatina, cordina y neurogenina -inductoras del tejido neural-; el cido retinoico (cap. 11-6) y las protenas Shh (por sonic hedgehog) y BMP4 (por bone morphogenetic protein) - involucradas en la induccin de los miembros y del tubo neural-; etctera. El cido retinoico y la protena Shh son secretados por la notocorda. 2 1- 17. Algunos inductores se com portan como morfgenos En algunoN
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FUNDAM ENTOS DE B tO L OGlA CELULAR Y MOLECULAR

2 1. LA D IFERENCI ACION CELULAR

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minuyen a medida que tluyen por los citoplasmas de las cl ulas. Segn sus posiciones en el tejido inducido, las clulas reciben distintas concentraciones del morfgeno. motivo por el cual se convierten en tipos celulares diferentes. Ms an, cada umbral de concentracin del morfgeno le provee a las clulas un valor posicional singular. Este se conserva en forma indeleble independientemente de que las clulas se mantengan juntas en el tejido o se separen y se siten en puntos distantes del embrin. Los distintos valores posicionales crean las bases para las conductas futuras de las clulas, incluida la aparicin de nuevas diferenciaciones.
2 1-18. En eta pas ms avanzadas del desarrollo se producen inducciones entre tejidos distantts

En etapas ms avanzadas del desarrollo embrionario aparecen inducciones mediadas por hormonns - es decir, entre tejidos distantes- . que se agregan a lag anteriores. Una vez elaboradas por las clulas inductoras. las hormonas llegan a los lugmes ele destino transportadas por la sangre (secrecin endocrina). Corno en las inducciones mediadas por secreciones paracrinas, las clulas competentes son aquellas que poseen receptores especficos. Cabe advertir que los procesos inductivos - por vecindud o a distanciacontinan hasta el nacimiento y durante toda la vida posnatal. ya que son imprescindibles para el funcionamiento y la supervivencia del organismo. El modo como actan las molculas inductoras sobre los receptores celul11res y la forma como se propagan las seales en el interior de las clulas fueron analizados en el captulo 11.
21-19. La determinacin para el cambio se fija en las clulas antes que revelen esta r diferenciadas

En algunos tipos celulares la potencialidad se man tiene relativamente elevada en forma permanente aun Significado evolutivo eu la vida posnatal. Por ejemplo, en la mdula sea existe una clula multipotencial que da origen a los eritrocitos, a los granu locitos, a los linfocitos, a los monoPotencialidad evolutiva citos y a las plaquetas. Por otro lado, en situaciones vinculadas con la reparacin de tejidos, clulas que ya han alcanzado su signi l"icado evolutivo final suelen desdiferenciarse y retroFig. 21 -10. Diagrama que receder a un estado ms primitivo. imprescindible para su multiplicacin. Veapresenta la disminucin de la mos el siguiente ejemplo: si se extirpa una parte del hgado, algunas clulas potencialidad evolutiva y el del sector no ex tirpudo se desdiferencian y se multiplican (cap. 18-28); reaumento inversamente proporcional del signijicado evoluticuperado el tamao del rgano, vuelven a diferenciarse y recobran las caracvo en los tejidos embrionarios. tersticas de las clulas hepticas origi nales. No ex isten constancias de que una clula pueda desdiferenciarse hasta reasumir un grado de pote ncialidad evoluti va tal que le permita volver a diferenciarse en otro sentido, esto es, en un tipo celular distinto de aquel al que perteneca. Es que, una vez que las clulas fueron determinadas, sus estados di ferenciales qu0dan establecidos a perpetuidad. Veremos en seguida que si la clula se divide, la estabilidad de su diferenciacin se transmite a las clulas hijas. hecho que ~e repite de generacin en generacin.
2 1- 21. Los estados dt' diferenciacin se mantienen estables y st transmiten a las clulas hijas

Las clulas adquieren el "compromiso" de cambiar antes que pueda descubrirse que estn diferenciadas. Este compromiso previo, llamado determinacin, es irreversible y puede ser fijado por un determinante citoplasmtico o por una sustancia inductora. Existe, entonces. un perodo de latencia - que vara en cada tipo celular- entre el instante en que la clula queclu determinada y el momento en que se hace evidente su diferenciacin.
21-20. Cuanto menos diferenciada se halla una clula, mayor es su potencia lidad evolutiva

Lleva el nombre ele potencialidad evolutiva la condicin biolgica que lo permite a una clula generar un nmero determinado de clulas diferentes; as, cuanto m)s grande es el nmero de tipos celulares que una clula es capaz de originar, mayor es su potencialidad (fig. 21 -10). La clula huevo, por ser la predecesora de todos los tipos celulares del organismo, es la que posee la potenc ialidad evolutiva ms alta. Conforme avanza el desarrollo y aparecen lns sucesivos tejidos embrionarios, la potencialidad de las clulas declina. Los somitas, por ejemplo, dan origen a un nmero ms restringido de tipos celulares, Cuando una clula alcanza su mximo grado ele diferenciacin - n su, cuando adquiere las caractersticas de uno de los tipos celulares presentes llll el organismo adulto-, su potencialidad desaparece. Se dice, entonces, qno ha alcanzado su significado evolutivo final. Las clu las en 1briouuri a.~ au mentan su significado evolutivo (se acercan al tipo ~.:el ular quo hun d uk:ru zar al final de su evolucin) al mismo tiempo quu reslri ng 11 sus poi\HK'iuli dados voh1ti vas ( onl"on uu s di!" r 'IH.:iuu, p1wdo11 ori.iuar 1111 1111 1111111' 111(' 1 1111"d ll l'iiiS\'S d i" \"l i11 h1 s).

Una de las caractersticas de la diferenciacin celular en los organismos superiores es que, una vez que se instaura, se mantiene estable y persiste hasta la muerte de la clula. Por ejemplo, las clulas que nn se dividen (neuronas, etc.) permanecen como tales durante toda la vida del individuo. Algo similar ocurre con las clulas que se dividen asiduamente; si bien mueren en poco tiempo. lo hacen sin cambiar su estado de diferencicin. Las clulas diferenciadas no pueden convertirse en otros tipos celulares bajo ninguna condicin, ni siquiera cuando son sometidas a las ms complejas nwnipulaciones experimentales (por lo menos, con los recursos actuales). Esta camcterstica biolgica se conoce con el nombre de memoria celular. Depende de la persistencia en la clula de las causas que controlan la expresin ele los genes, es dec ir, de los factores de transcripcin, de la me!ilacin del ADN y dt~ l grado do enrollamiento de la cromat in1 (c;1ps. 12-6, 12- 12 y 12- 13). Estos mecanismos se mantienen a lo largo de toda la vida de las clulas mediante procesos biolgicos no muy bien comprendidos. Seguramente estn relacionados con sustancias citoplasmticas especficas para cada tipo celular. Esta presuncin es avalada por los experi mentos de trasplante nuclear descritos en la seccin 2 1-3, ya que en la clula trasplantada no se expresan los genes que estaban activos cuando el ncleo se hallaba en el citoplasma originl y s se expresan los que lo hacan en el ncleo eliminado. Los estados de di ferenc iacin pasan a las clilas hijas de generacin en generacin hasta la ltima ele las clulas descendientes. Esta herencia de la memoria celular se debe a que, cuando el ADN se replica, los elementos que controlan la expresin de los genes, ms que mantenerse, tambin se duplican, de modo que en las clulas hijas aparecen los mismos factores de transcriptic n, luH 111is1111lS patrones de metilac in del ADN y los mismos modlllu d11l'~>lll h 11 1l1l11n d1 lu 1 '1'011\lltinn quCl\11 las e lulas pro cllitlll'as (cups.
1 1 1) y l 1 1 \)

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

21. LA DIFERENCIACION CELULAR

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21 - 22. El establecimiento de l plan corporal en la Drosophila es el resu lt ad o de deci siones esca lon ad as tomadas por un a serie de genes
Al iniciarse el desarrollo embrionario, el genoma, adems de codificar la sntesis de las protenas que dan lugar a los distintos tipos celulares, aporta el programa que lleva al establecimiento del mod elo tridimensional del cuerpo . Las informaciones contenidas en ese programa y sus consecuencias -que aparecen apenas el espermatozoide fecunda al vulo y continan hasta etapas relativamente avanzadas del desarrollo embrionario- han comenzado a develarse, ya que se ha descubierto la forma como las claves unidimensionales encerradas en los genes dan lugar a organismos tridimensionales. Los datos ms reveladores provienen de trabajos realizados en la mosca Drosophila melanogaster, cuyo desarrollo embrionario pasamos a resear (muy sucintamente) con el propsito de facilitar la comprensin del tema que nos ocupa (fig. 21-11). La Drosophila se desarrolla -luego de forrnarse la clula huevo tras la fecundacin y atravesarse el periodo embrionario- a partir de una larva. Esta se halla compuesta por una sucesin de segmentos -uno ceflico, tres torcicos y ocho abdominales-, Jos cuales le confieren una clara polaridad espacial, pues tan pronto aparecen quedan configurados los ejes cefalocaudal. dorsoventral y mediolateral del cuerpo larvario. La larva se convierte en mosca a partir de varios grupos celulares que aparecen y se asientan debajo de la epidermis de los segmentos larvarios. Estos grupos celulares se conocen con el nombre de discos imaginales (por imago. insecto adulto que se forrna a partir de una larva); existen nueve pares colocados a los lados de la lnea media de la larva ms uno impar situado en el extremo caudal (19 discos en total). Cada disco da origen a una de las estruc turas exteriores de la mosca. As, de un par de discos surgen los ojos y las an tenas, de otro la boca, de otro las alas y parte del trax, de otros las patas unidas al resto del trax, de otros las estructuras que componen el abdomen, etc. Estas partes, adecuadamente ensambladas, forman un cuerpo adulto tambin segmentado, como el de la larva. Si bien desde el ptincipio las clulas de todos los discos imaginales son morfolgicamente idnticas, ya estn determinadas, pues generan -cualquiera que sea la manipulacin expetimental a que se las someta- slo las estructuras pertenecientes a sus segmentos de oligen. En efecto, si se trasplanta m1 par de discos imaginales a la posicin de otro par, al forrnarse la mosca adul ta los discos injertados desarrollan las estructuras correspondientes a sus emplazamientos otiginales, independientemente de su nueva localizacin. El desarrollo del plan corporal que acabamos de desclibir se halla contro lado por una compleja red de genes reguladores, que comienzan a ejercer sus funciones apenas se forma la clula huevo. Los plimeros en actuar son los lla mados genes de la polaridad d e la clula huevo, que pertenecen a la madr ; tienen por misin establecer Jos ejes cefalocaudal, dorsoventral y mediolatc ral del cuerpo. Luego lo hacen tres conjuntos de genes agrupados bajo el nombre de genes segmentarios; son los que dan lugar a la forrnacin de los segmentos larvarios. Finalmente actan los denominados genes hometicos, de Jos cuales deriva la forrnacin de los discos imaginales y, por consigui n te, el desarrollo de las estructuras exteriores de la mosca adulta (ojos, ant c nas, boca, alas, patas, tra x, abdomen, etctera). La polaridad del cuerpo se inslnla d sd d cnmi nzo d 1 d ."arru llo \'111
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que, como en ste antes de la fecundacin, se concentran Clula huevb y distribuyen en forma desigual en los distintos sectores de la clula huevo. Tras las divisiones de segmentacin Larva esas molculas son heredadas -tambin en forma desigual- por las primeras clulas embrionarias, lo cual fija las polaridades espaciales del futuro cuerpo larvario. Es obvio que tales molculas, al provenir del ovocito, no son codificadas por genes del embrin sino por genes de la !mago madre, concretamente, los genes de la polaridad de laclula huevo, petienecientes al ovocito. En realidad algunos de estos genes corresponden a las clulas foliculares que rodean al ovocito, las cuales -durante la permanencia del ovocito en el ovario- sintetizan las molculas a que hacemos referencia (ARNm y protenas) y las vuelcan en el citoplasma de la clula germinativa. Dijimos que existen tres clases de genes segmentados; se denominan genes de hendidura , de regla par y de la polaridad de los segmentos. Se expresan, en ese orden, al ser activados por seales posicionales establecidas en las clulas embrionarias con antelioridad. De estos genes depende la formacin de los segmentos larvarios y, en ellos, el desarrollo de detalles cada vez ms finos. Por ltimo se expresan los genes hometicos, despus de ser activados por los productos de algunos genes que actuaron precedentemente. Definen la forrnacin de las partes adultas de la Drosophila. As, segn los discos imagina] es en que se expresan, algunos forman la cabeza, otros los segmentos torcicos, otros los segmentos abdominales, etc. Estos genes estn alineados en el cromosoma en el mismo orden que los segmentos corporales de la mosca, comenzando por los que se expresan en la cabeza y terminando con los que lo hacen en la cola (fig. 21-11). Los tres tipos de genes que participan en la construccin del plan corporal lo hacen mediante activaciones sucesivas en forma de cascada, de modo que cada gen (por medio de la protena que codifica) produce la diferenciacin que le compete y prepara al gen que habr de activarse en el prximo paso. Los episodios se suceden ordenadamente, no slo en el tiempo (vimos el orden con que se expresan los genes) sino tambin en el espacio, ya que siempre ocurren en direccin cefalocaudal. Adems, el producto de cada gen influye sobre los genes que actuaron precedentemente, lo cual imprime en las clulas de cada segmento un deterrninado e indeleble valor posicional. El conjunto de estos valores, adems de afianzar la organizacin del plan corporal, crea las bases para la aparicin de las diferenciaciones futuras.

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Disco imagina!

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Fig. 21-11 . Desarrollo de la mosca Drosophila melanogasler. En la parte inferior aparece uno de los cromosomas de la mosca, en el que se localizan varios genes con caja hometica. Obsrvese cmo el orden de los genes se corresponde con el orden de los segmentos COf1JOrales en que esos genes se expresan.

21-23 . Los genes que participan en la formaci n del plan corpora l contienen una secuencia de nucletidos conservada, ll amad a caja hometica
Los genes que participan en la forrnacin del plan corporal pertenecen a la categorfa de genes r ector es, pues controlan la expresin de varios genes subordinados que se suceden en un definido orden jerrquico. Los genes rectores codifican factores de transcripcin especficos (cap. 14-5) cuyas molculas proteicas suelen ser diferentes entre s. No obstante, casi todas tienen en comn un segmento similar de 60 aminocidos llamado homeodominio. 1~ !l o e ~ porque el ADN de los genes que codifican a esos factores posee un a , r, u n ia d 1Hll 111 ' " ' 1k II UL:i 'ti dos con muy poc:1s varia..:ioncs nl rc 1111

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392

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLEC ULAR

gen y otro, conocida como caja hometica. Su nombre se debe a que fue descubierta en los genes hometicos. Se han descubietto genes con caja hometica en todas las especies estudiadas -incluida la humana-, ordenados en los cromosomas de modo semejante a los de la Drosophila. Tal hallazgo ha llevado a suponer que los mecanismos genticos responsables del desarrollo del plan corporal se encuentran difundidos en la mayor parte de los organismos multicelulares. Refuerza esta hiptesis el hecho de que en los embriones de los vertebrados se expresan varios genes con caja hometica en las clulas de los somitas y del tubo neural, rganos que presentan una organizacin metamrica anloga a la de los segmentos de la Drosophila. No obstante, las extrapolaciones en torno a este punL o deben realizarse con cautela, por un lado porque para muchos tal analoga no existe y, por otro, porque en el ann ado del modelo que lleva a la formacin del cuerpo de los vertebrados parecen prevalecer los fen menos inductivos.

La muerte celular

22

22-1 . La muert e celular programada es un f enmeno comn en el organismo

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1'11 ~ ~~

La muerte de las clulas es un fenmeno comn durante el desarrollo embrionario, necesario para remover tejidos provisorios (por ejemplo, las membranas interdigitales durante la formacin de los dedos), eliminar clulas superfluas (como ocurre con casi la mitad de las neuronas en el curso de la ne urognesis), generar conductos, formar orificios, etc. Tambin se producen muertes cel ulares durante la vida posnatal, cuando el organismo necesita remodelar tejidos o remover clulas daadas, innecesarias, redundantes, envejecidas o peligrosas para su salud, como lo son las clulas infectadas, las tumorales o las autorreactivas (por ejemplo, los linfocitos T que reaccionan contra el propio organismo). Puesto que las clulas destinadas a morir suelen perecer para que sobrevivan las restantes del cuerpo, puede decirse que protagonizan una suerte de inmolacin biolgica. Estas muertes celulares fisiolgicas o programadas oculTen al cabo de una serie de cambios morfolgicos que reciben el nombre de apoptosis (del griego ap, separado de, y pt6sis, cada), trmino que se usa para diferenciarlas de las muertes celulares accidentales -producidas por traumatismos, sustancias txicas , obstrucciones vasculares, etc.- , que se denominan necr osis.
22- 2. La apoptosis genera cambios celulares caractersticos

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Los cambios que experimentan las clulas cuando mueren por apoptosis son caractersticos. Se deben a que se activan unas proteasas citoslicas especiales llamadas caspasas (por f.YSieinyl QJJ2.artate proteinases) y ocurren en el siguiente orden (fig. 22-l): 1) El citoesqueleto se desarma debido a la ruptura de sus fil amentos. Como consecuencia, la clula pierde contacto con sus vecinas (o con la matriz extracelul.ar) y se vuelve esfrica. 2) La clula se encoge porque el citosol y los organoides se condensan sin ser afectadas sus estructuras. La condensacin se debe a que se altera la permeabilidad de las membranas celulares. 3) Los laminofilamentos se disocian, con la consiguiente desintegracin de la envoltura nuclear. 4) La cromatina se compacta y las molculas de ADN se seccionan por accin de una endonucleasa, lo cual divide al ncleo en pequeos fragmentos que se distribuyen en el citoplasma. 5) 1) la sii(WII ki.- d t la c l11l a c m c rg n num rosas protrusion ' S, a si tod 1:,
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394

FUNDAMENTOS DE BTOLOGTA CELULAR Y MOLECULAR

22. LA MUERTE CELULAR

395

6) Luego las protrusiones se desprenden, convertidas en fracciones celulares llamadas cuerpos apoptt icos. Cabe sealar que sus organoides se hallan relativamente bien conservados. 7) Las fosfatidilserinas de las membranas que envuelven a los cuerpos apoptticos -previamente localizadas en la monocapa citoslica de la membrana plasmtica (cap. 3-3) - se trasladan a la monocapa externa. 8) Finalmente, atrados por estas fosfatidilserinas, numerosos macrfagos acuden al lugar de la apoptosis y fagocitan a los cuerpos apopttcos. Como se ve, a diferencia de la necrosis, la remocin de las clulas muertas por apoptosi s preserva la arquitectura original de los tejidos, puesto que no da lugar a reacciones inflamatorias ni produce cicatrices.

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Cuerpo apopttico

22-3. la apoptosis se activa por dist intas causas

La mayor parte de las muertes celulares por apoptosis se producen cuando: 1) se suprime n los factores trficos que mantienen vivas a las clulas: 2) sustancias que inducen la muerte celular se unen a receptores especficos: 3) el ADN nuclear es afectado por mutaciones capaces de poner en peligro al organismo. A conti.nuacin se ver que estas causas desencadenan vas de seales intracelulares diferentes entre s, las cuales convergen en un tramo final comn.

Macrfago

Fig. 22-1. Cambios celulares que ocurren durante la apoptosis. Obsrvese la fagocitosis de los cuerpos apoptticos por parte de un rnacrfago.

antagonist of cell death), que se inactiva y se une a la protena citoslica

denominada 14-3-3. En la condicin descrita la Bad se halla separada de la Bcl-2 (por B cell L eukemia), una protena perteneciente a la membrana mitocondral externa que deriva del protooncogn bcl-2. Debe agregarse que cuando est separada de la Bad, la Bcl-2 se encuentra activa e impide que la clula muera por apoptosis. En seguida se ver que previene la muerte celular porque mantiene cerrado un canal de la membrana mitocondrial interna llamado PTPC (por per-

22- 4. la apoptosis que se activa cuando se suprime n los fa ctores trficos es la ms generalizada
Cada clase de clula es mantenida viva por una sustancia inductora especfica llamada factor trflco o factor de supervivencia, que le llega desde clulas vecinas (cap. 11-1) (fig. 11-IB). La mayotia de las muertes celulares por apoptosis tienen lugar cuando se suprimen esas sustancias. Los factores trficos ms estudiados son las glicoprotenas CSF (por colony-stimulating factors) y el grupo de sustancias llamadas neurotrofinas. Las CSF estimulan la supervivencia, el crecimiento y la diferenciacin de las clulas sanguneas. En cambio, las neurotrofinas -unas sustancias que secretan los tejidos inervados, a cuya fami lia pertenece el NGF visto en los captulos 11-1 2 y 18-28- tienen por funcin mantener vi vas a las neuronas y estimular el crecimiento de sus axones. La fig ura 22-2A muestra el modo en que los factores trficos interactan con los receptores de las clulas inducidas, situados en la membrana plasmtica. Cabe aclarar que si bien esa figura ilustra un factor trfico que interacta con un receptor que posee acti vidad de tirosina quinasa (cap. 11 - 12) (fig. 11-11 ), existen factores que interactan con receptores acoplados a las protenas G 13 o G; (cap. 11-20) (fig. 11-21). E n los captulos 11-1 2, 11-14 y 11-20 se vio que cuando son activados, esos receptores se unen y activan a distintas fosfatidilinositol3-quinasas (PI 3-K). Tambin se vio que con fosfatos de molculas de ATP, las PI 3-K acli vadas fosforil an el inositol del fosfatidlinositol 4,5-difosfato (PIP2 ) de In membrana plasmtica y lo convierten en fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfatu (PIP3) (figs. ll -11 , 11 -21 y 11-22) A continuacin, sin abandonar la membrana plasmtica, un PIP3 se une a la quinasa PDK1 (por phosphatidylinositol dependent-protein kinase) y otm a la serina-treonina quinasa B, lo cue hace que ambas enzimas queden m ximas entre s. La PDKI J'os J'o rila a In q11i11nH n 11, q11 s< : a fiva y S\' s<pnn l dr l 1'11',. l .tH'~' IIIn quinmm lt llt 'li v 11dH le' lc,td ll ll ttt llt pruh rn l t ll ltllt.ul!l Uucl (JIPI /le/ J

meability transition pore complex).

Veamos cmo se desencadena la apoptosis. La figura 22-2B muestra que en ausencia del factor trfico, la Bad -que carece de fosfato- se activa, se desvincula de la protena 14-3-3 y se une a la Bcl-2 en el lado citoslico de la membrana mitocondral externa. Debido a que la Bad inactiva a la Bcl-2, el PTPC se abre y se descontrola el pasaje de molculas entre los compartimientos de la mitocondria, lo cual distorsiona la estructura de la membrana mitocondrial externa y permite que dos componentes presentes normalmente en el espacio intermembranoso de ese organoide -la protena AIF y el citocromo e (cap. 8-11) (fig. 8-12)- se escapen hacia el citosol. Una vez en el ctosol, la AIF (por apoptosis inducing factor) se dirige a la membrana plasmtica e invierte la posicin de las fosfatidilserinas, que como se vio en la seccin 22-2 se trasladan a la monocapa externa de la membrana y atraen a los macrfagos. Adems, la AIF ingresa en el ncleo, induce la condensacin de la cromatina y activa a la endo nucleasa que degrada a las molculas de ADN. Respecto del citocromo e, se combina con la protena adaptadora Apaf-1 (por apoptosis protease activating factor). Ello la une a la procaspasa 9, que se escinde y convierte en caspasa 9 . Luego sta escinde a la procaspasa 3, la cual se transforma en caspasa 3 y activa a las enzimas que producen los cambios apoptticos enumerados en la seccin 22-2. Debe agregarse que en las clulas moribundas el Ca2 citoslico aumenta 2 considerablemente. Cuando se trata de clulas epiteliales, el Ca cierra los ~.:onexones y vita el paso de elementos que pueden daar a las clulas vcciuas
(~.:ap.

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FUNDAMENTOS DE BIOLOOJA CELU LAR Y MOLECU LAR

22. LA MUERTE CELULAR

397

Factor trfico

Factor trfico

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Receptor

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C1tocromoc~~ Apaf-1
Procaspasa ----

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Caspa sa 9

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Caspasa 3

@------ ~ Procas pasa 3

APOPTOSIS \
A

Fig. 22-2. A. Clula mantenida viva por la unin de un fac-

tor lr nco a st1 receptor. PS, fosfatidi lserina; MME, membrana mitocondrial externa; MM /, membrana mitocondrial
interna; EIM , espacio n termembranoso.

22-5. La apoptosis debida a la activacin de receptores especifico~ es ms rpida que la estudiada en la seccin anterior
Durante algunas respuestas inmunol gicas, en la membrana plasm;ti('ll lit ciertas clu las infectadas y cancerosas aparecen receptores especiales ('111' 11 activaci n conduce a la apoptos i ~ de una manera mucho ms rpida qm In analizada en la seccin anterior. Algo similar ocurre en la me mbrana pl uN ulll tica de los linfocitos T especficos que sobran al trmino de esas rcspiit"illtN inmunolgicas. Los receptores q ue se estn analizando se llaman T NF-R y Fas. S(' 1'11111 ponen de tres subunidades proteicas iguales entre s y pertenecen 11 tll llt t'lllt' gora diferente ele las reseadas en el captulo 11 -9, ya que sus dtuu iult 1 1 toslicos - que contienen una secuencia de aminocidos co uuida 1'1111111 dominio de muerte- activan a caspasas, es decir, a enzitHus prllho l!tlta . Las sustancias inductoras que interactan ~on esos rL 'CllllllL't 'H lllll tlllll TNF y FasL. Son tambin ho motrimricas y, cono ' lt ~ llllll thn N ll i1111 11, combinan con los receptores TNF-R y FaH, r~\N pc ti V IIIl l(lllt o . 1\1 TNF (por fwnor llf'l'l'rlsi.lj(utm) liS ~t 1 L'l'llll tdn dtiNdL ' 't ln litH lttlltdll 11 1 la vttlndtu l ptinl'i pu ln ull til' ll llll'ttli'lt 11M y liu ltwlltt '1' ll l'lltl u lit dlvt t 11 inltt'l'llllll ~ ( li ~ 11 111 V 11 1) 1 1! 11 1111 11 dt jllll lltlllt h In VIII dt tll th lt ll hl

cida por el TNF es la unin de sus tres subunidades con los dominios externos de las tres subuniclades del receptor TNF-R (fig. 22-3). Ello rene a estas ltimas -el receptor se trimeriza- y hace que sus dominios citoslicos se conecten con la protena adaptadora TRADD (por TNF receptor-associated death domain), la que a su vez se une a otras tres protenas adaptadoras, denominadas FADD (por Fas receptor-associated death domain), RIP (por recep tor-interacting p rotein) y TRAF (por TNF receptor-associated factor). Las dos ltimas protenas se relacionan parcialmente con la apoptosis, a diferencia de la FADD, que se une a la procaspasa 8, la escinde y transforma en caspasa 8. Luego esta enzima activa a la procaspasa 9 y la convierte en caspasa 9, que como se vio en la seccin anterior escinde a la procaspasa 3 y la transforma en caspasa 3. Los pasos que siguen hasta que se llega a la apoptosis son similares a los descritos en la seccin 22-4. El FasL (por f ascicle ligated) es elaborado por linfocitos T citotxicos y linfocitos asesinos naturales a causa de algunos cnceres e infecciones. Debido a que el FasL no se secreta sino que se sita en la membrana plasmti,a, para que pueda interactuar con el receptor Fas es necesario que los linfo,ilos 111Cnc ionado1: < 't llahlen contacto con las clulas cam:crnsas 11 infc tadas
(lq s. ll lt ~v " 11

Fig. 22-2. B. Apoptosis producida por la supresi n del factor trfico. PS, fosfatidilserina; MME, membrana mitocondrial externa; MM!, membrana mitocondrial interna; EIM, espacio intermembranoso.

22. LA MUERTE CELULAR

399

398

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

LINFOCITO T CITOTOXICO O ASESINO NATURAL

FADO

Caspasa 8

@------

Procaspasa 8

Procaspasa 9

~~-----@

CELULA INFECTADA O TUMORAL

FADO

Caspasa 8 Caspasa 9

@-----

Procaspasa 8

Fig. 22-3. Apoptosis producida por la activacin del receptorTNF-R.

----

""'""" ',----~ '~-'

APOPTOSIS 1

Procaspasa 9

~~----@
~

Caspasa 9

-~' ,----~ '""""~'

APOPTOSIS

La va de seale~ inducida por el FasL se diferencia de la impulsada por el TNF porque es mas co_rta,. ya que los dominios citos!icos del receptor Fas se conectan con la protema FADD no por intermedio de la TRADD sino directamente (fig. 22-4).
22-6. La a ~o~tosis ?ebida a mutaciones en el ADN evita la aparicin de d1stmtos t1pos de cnceres BIBUOGRAFIA

Fig. 22-4. Apoptosis producida por la activacin del receptor Fas.

Otra condicin biolgica que lleva a la apoptosis se produce cuando el ADN pre:enta alteraciones debidas al envejecimiento celular (cap. 17-9), a la rephcacwn (caps._ !7-17 Y 17-19), a la accin de agentes ambientales (rayos y, rayos X, radacion solar ultravwleta, sustancias qumicas virus etc) ( 17 18) 1 ' ' cap. ~ o a a acumulacin en la clula de perxido de hidrgeno (H2Q2) o de amones superxidO (Q2- ) (caps. 10-2 y 10-3). . Ante la presencia de esas alteraciones suele intervenir la protena P53 denvad~ del gen supresor de tumores p53. En el captulo 18-29 se dijo q~e la protema P53 estabiliza el c1clo celular en la fase Gl y controla la presencia de alteracwnes en el ADN para procurar su reparacin. Cuando no logra repararlas Y son peligrosas para el organismo, la propia protena P53 induce la muerte '1 p de la clula a fin de impedir el traspaso del ADN daado a 1as ce u1 as. h.. IJ3S. ara ello la P53 inactiva a la Bcl-2, lo cual pone en marcha el mecanismo que conduce a la apoptosis descrito en la seccin 22-4 (fig. 22-2B). , A menudo se halla alterado el mismo gen p53, por lo que genera una pro tema P53 ~.efectuosa, ~.ncapaz de controlar el estado del ADN y de condu~:ir a la c~lula al SUICidiO . Por consecuencia, si se trata de un tipo de clula qm: se divide, las clulas que descienden de ella acumulan alteraciones a Jo Juro de las sucesivas divisiones. Este hecho es grave cuando ~e af'ctan )\ljll -~ 1; 1 phcados en la regulacin ele la pmli~rac in clular, ya qul' ptu1kn . 111- 111 . , 11 a do s11111as l'lasl'S <k ,ou ,.,, .., (1 ' 111' 1H 1? ),

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Los mtodos de estudio en biologa celular

23

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mcdiated signa! transducrion in apoptos -,

FAS E B J. l l :843.

23-1 . Introduccin La observacin de las estructuras biolgicas se ve dificultada por el hecho de que las clulas son muy pequeas y transparentes. Ms difcil an es descubrir su organizacin molecul ar y establecer de qu manera actan las molculas para determinar las estructuras y las funciones celulares. El extrao rdinario progreso experi mentado en los l timos aos por la biologa molecular de la clula es consecuencia del desarrollo de nuevos mtodos para el estudio de los componentes celulares, basados en la aplicacin de tcnicas bioqumicas y biofsicas de ltima generacin. Debido a que actualmente el ntnnero de metodologas experimentales es muy grande, la idea de describirlas exhaustivamente en un libro de estas caractersticas resulta imposible. As, el presente captulo no es ms que una resea de los mtodos generales que se emplean para descifrar las estructuras y las funciones celulares. Se describirn los principios generales de la microscopia ptica y electrnica, algunos mtodos especiales que hacen posible el estudio de la clula viva, diversos mtodos de citoqumica, inmunoqumica, radioautografa y fraccionamiento celular, y las tcnicas que se emplean para el anlisis molecular de los c idos nucleicos.

MICROSCOPIA OPTICA
23- 2. Microscopio ptico En el captulo 1 se describieron los lmites de resolucin del ojo humano y de los distintos tipos de microscopios (fig. l-1 ). El ojo es capaz de detectar variaciones en la longitud de onda y en la intensidad de la luz. Los adelantos de la microscopia permitieron aumentar ambas posibili dades, tanto mediante el uso de instrumentos que amplan el poder de resolucin como de tcnicas que contrarrestan la transparencia de las clulas au mentando el contraste de sus estructuras. La mayora de los componentes celulares son transparentes, a excepcin de algunos pigmentos citoplasmticos que absorben ciertas longitudes de onda de la luz. La baja absorcin de esas longitudes por la clula viva se debe a su alto contenido de agua, aunque despus de desecada sigue presentando un contraste muy escaso. Un medio para contrarrestar esta limitacin consis1 en emplear colorantes que tian selectivamente los distintos componentes <: lulares introduciendo diversos compuestos que absorben longitudes de ontlit s pcc fi~.:as. S in <'llthiiiJII t, 1;11
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FUNDAMENTOS DE BlOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOG!A CELULAR

403

an, antes de ser coloreados los tejidos deben ser fijados, deshidratados, incluidos y seccionados, y todos estos procedimientos generan cambios qumicos y morfolgicos en las clulas y en la matriz extracelular.

MICROSCOPIO OPTICO

MICROSCOPIO ELECTRONICO - Fuente de e lectrones

j~ Observador

23-3. Poder de resolucin del microscopio ptico

Como en cualquier tipo de microscopio, en el microscopio ptico (fig. 23- 1) el poder de resolucin -que es la capacidad del instrumento pana brindar imgenes distintas de puntos muy cercanos- depende de la longi tud de onda A y de la apertura numrica (AN) del objetivo. As, el lmite de resolucin, que se define como la distancia mnima que debe existir entn dos puntos para que puedan ser discriminados como tales, responde a la siguiente ecuacin: 0,61 A.
Lmite de resolucin = - -- - Condensador

~&------ Muestra

1 - - - - -- Objetivo

-AN
~-----

Proyector

A su vez, la AN depende del ndice de refraccin del medio (n) y del se no del ngulo de apertura (ex), segn la frmula:
AN = n . seno o.

"'V Observador
1

Debe agregarse que el lmite de resolucin es inversamente proporcional al poder resolutivo del instrumento utilizado, de manera que cuanto mayo sea ste, menor ser el lfmite de resolucin conseguido. Puesto que el seno de ex no puede exceder de 1 y el ndice de refraccin de los mejores materiales pticos no puede ser superior a 1,6 (usando aceite de inmersin), la m xima AN posible de las lentes es de alrededor de 1,4. Con estos parmetros es fcil calcular que el lmite de resolucin del microscopio ptico no puede exceder los 170 nrn (0, 17 .J.m) cuando se usa luz monocromtica de A= 400 nm (violeta). En cambio, con luz blanca el poder resolutivo es de 250 nm (0,25 .J.m). El aumento de la imagen en el microscopio ptico depende principalmen te de las lentes del objetivo, con las cuales el incremento mximo es de 100x a 120x. Como el ocular agranda la imagen del objetivo entre 5 y 15 veces, se llega a un aumento de 500x a 1.500x.

Imagen en pantalla

l=====:t celulares menos organizadas, como el citosol, la preservacin es difcil, de modo que con frecuencia se producen artificios de fijacin. Cuando se intenta mantener intacta la composicin qumica de los componentes tisulares se uti lizan mtodos de fijacin fsicos. El ms conocido es el mtodo de congelacin-desecacin, que consiste en la congelacin rpida del tejido y su deshidratacin en el vaco a baja temperatura. La fase de congelacin comienza con la introduccin de pequeas piezas de tejido en un bao a una temperatura de -160 a -190 e, lograda con nitrgeno lquido. Tambin se emplea la fijacin con helio lquido a una temperatura cercana al o absoluto (Kelvin). La desecacin se realiza al vaco entre -30 y -40 c. En tales condiciones el hielo sublima a vapor y se produce la deshidratacin de los tejidos. Las ventajas de este mtodo son obvias: no causa retraccin del tejido, la fij acin es homognea en toda la pieza, no hay extraccin de sustancias solubles, la composicin qumica se mantiene prcticamente sin cambios Y la estructura se conserva con muy escasas modificaciones, generadas por los cristales de hielo. La rapidez de la fijacin tambi n permite sorprender a las clulas en momentos funcionales crticos.

Fig. 23-1. Trayectorias de los rayos de luz y de los haces de electrones en el microscopio ptico y en el microscopio electrnico, respectivamente.

23-4. Fijacin del material

La fijacin del material es esencial para preservar la morfologa y la com posicin qumica de los tejidos y las clulas. Consiste en la muerte de stas de una manera tal que las estructuras que posean en vida se conserven con un mnimo de artificios. La eleccin del fijador adecuado depende del estudio que se desea reali zar. Por ejemplo, para el ncleo se utilizan los fijadores cidos y para el ex a men de la actividad enzimtica en el citoplasma se emplean la acetona, el fnr maldehdo o el glutaraldehdo, que producen una mnima desnaturalizaci6n y preservan muchos sistemas enzimticos. Algunos agentes fijadores, como l'i formaldehdo, el glutaraldehdo, el bicromato y el bicloruro de mercurio, dan lugar a fuertes uniones entre las molculas proteicas. El grado de organizacin a nivel macromolecular es de gran imporlanl'iu para la conservacin de la estructura luego ele la fijacin. l:n una slrul'iniH bien organizada -como los cromosomas , las milocondrias, los l'ln1 opln::tor., te.- ~xisl ~n div rsas flll' l'i' a s qw llll lltil ' lh'll l m~ 1nolt tnlllll 1111iti!HJ, y 1'"' In
tnnln la l H.'t' iuu dtl Ji judnr un altc ' IH l.1. , ~ ,HIIIt ' llll . l/l , ...; 111 t' lnhl 11 1' " 111 11 J!IUIII-

23-5. Corte del materia l

Para poder ser observado con el microscopio, el tej ido debe cortarse en lminas delgadas mediante instrumentos llamados micrtomos. Esta tcnica exige que el tejido haya sido incluido en un material que le confiera cierta consistencia. Si el tejido ha de ser coloreado con los mtodos convencionales, se lo incluye en parafina o en celoidina. Para poder ser infiltrado por el material de inclusin, el tejido debe ser deshidratado. Este proceso requiere el uso de un lquido intermediario apropiado, por ejemplo, xileno, benceno o 1olucno para la para fina, y etanol-ter para la celoidina. ( 'uando se drll'll 11 111111u1 la composic in qufm ica d al gunos compon ntc n , 1 1ulmt 1~ r , tn plt "'
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FUNDAMENTOS DE BfOLOG !A CELULAR Y MOLECULAR

23 . LOS METO DOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

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Fig. 23-2. A. Retraso o cambio de fase e n las o ndas de un rayo de luz cuando atraviesan un material transparente no absorbente de mayor ndice de refraccin que el medio. B. Cambio de fase ms pronunciado ocasionado por un material ig ual al anterior pero
ms grueso.

2> 7. Microscopio de fa se
A

friadas con C0 2 lquido, llamados micrtomos de congelacin o cristatos. Dado que producen una aceptable fijacin de los tejidos y no requieren inclusin, con ellos pueden efectuarse cortes de tej idos frescos para estudios citoqumicos. Los vibrtomos son micrtomos de congelacin provistos de una navaj a vibrtil.

23-6. Coloracin del material

La mayora de los colorantes tisulares son de naturaleza orgnica y aromtica. Se reconocen dos tipos de colorantes, los bsicos y los cidos. En los colorantes bsicos el grupo cromforo (es deci r, el que imparte el color) es bsico (catinico). Por ejemplo, el azul de meti leno es el clorhidrato de tetrametiltionina, en que la parte cida es incolora. A veces los dos componentes de la sal son cromforos, como en el eosinato de azul de metileno. En Jos colorantes cidos los grupos cromforos ms comunes contienen nitritos. Es conveniente que el estudiante aprenda cul es el mecanismo de accin de los colorantes, para lo cual deber recordar la propiedad que tienen las protenas, los cidos nucleicos y algunos polisacridos de ionizarse como bases o como cidos. En las protenas la ionizacin bsica se establece en el grupo arnino (-NH2 ) y en otros grupos bsicos. La ionizacin cida se produce en los gmpos carboxilo (-COOH), hidroxilo (-OH), sulfato (- HS04) y fosfato (- H 2P04). Si el pH es superior al punto isoelctrico, los grupos cidos se ioni zan; si es menor, lo hacen los grupos bsicos (seccin 23-31). A causa de esta propiedad, por encima del punto isoelctrico las protenas reaccionan con los colorantes bsicos (azul de metileno, fucsina bsica, etc.) y por de bajo de l con los colorantes cidos (naranja G, eosina, azul de anilina, etc.). Para los cidos nucleicos la carga neta es determinada por la ionizacin de los grupos fosfato, y su punto isoelctrico es muy bajo. Por esta causa, para la tincin de estos cidos Sl' utilizan colorantes bsicos, como el azul de toluidina para 1 cido ribonucleico (su especificidad puede ser demostrada mediante una hidrlisis previa con la enzima ribonucleasa). Ciertos colorantes bsicos del grupo de las tiazinas --co mo la tionina, el azur A y el azul de toluidina- tienen In propiedad de teir ciertos componentes celulares con un ;o lor diferente del que caracteriza al colorante. Esta propiedad -llamada metacromasia- posee interesantes derivac ionn . citoqumicas. La reaccin es bastante positiva wn los poli sacridos complejos (glicosaminogli<;anos) y tnt:nor r ou lor. Fig. 23-3. Observacin con microscopia de fase cidos nuclcil:os y rdgnnos l [pidos (!,idos. 1 (~ tu (!~ illil'JJ:: 1 1 11
JaS (..'(- JuJaS fllll' jltl~a"t' ll llllll ' t'IJIU:; I 'IHI J',lllfll l/l 'lllll llltl, t ' lllltll

Para el estudio de las clulas vivas se utilizan tcnicas pticas especiales, como la microscopia de contraste de fase y la de interferencia, en las cuales se recurre a cambios de fase (retrasos) en las radiaciones que atraviesan las estmcturas biolgicas, a pesar de ser stas muy transparentes a la luz visible. En la figura 23-2 se muestran los efectos de ciertos materiales transparentes y no absorbentes sobre las ondas de Jos rayos de luz. Debido a que los ndices de refraccin de esos materiales son diferentes del que posee el medio, las amplitudes de las ondas no cambian pero s sus velocidades. Por consecuencia, las ondas se retrasan, fenmeno que se conoce como cambio de fase. Obviamente, el retraso subsiste al salir el rayo del material transparente. En el microscopio de contraste de fase, cuando los rayos laterales pasan a travs del objetivo, son adelantados o retrasados un cuarto de longitud de onda con respecto a los centrales, los cuales atraviesan el objeto por medio de una placa anular que produce una variacin en el plano focal posterior del objetivo. El efecto depende de la interferencia entre la imagen geomtrica directa dada por la parte central del objetivo y la imagen lateral, que se retrasa o se adelanta en un cuarto de longitud de onda. Dado que los dos grupos de rayos se suman, c uando el contraste es negativo el material aparece ms brillante en el medio que lo rodea, pero cuando es positivo los dos juegos de rayos experimentan una interferencia sustractiva, y la imagen del material aparece ms oscura que la del medio (fig. 23-3). De este modo, pequeos cambios de fase producidos en el material son ampliados y transformados en cambios de amplitud (intensidad). As, la imagen aparece con diversos tonos de gris, que dependen del espesor del material y de las diferencias existentes entre los ndices de refraccin del material y del medio. La microscopia de fase se usa como mtodo de rutina en la observacin de clulas y tejidos vivos' y es particularrnente valiosa para la observacin in vivo de la mitosis en clulas cultivadas (fig. 23-3).

23-8. Microscopio de int erferencia

El microscopio de interferencia se basa en principios similares a los del microscopio de fase, pero tiene la ventaj a de dar resultados cuantitativos. Este instrumento permite determinar cambios en el ndice de refraccin, mientras que el microscopio de fase slo revela las discontinuidades ms notables. Adems, las variaciones de fase se pueden ret1ejar en cambios de color tan acentuados que las clulas vivas parecen coloreadas. Un tipo especial de mjcroscopio de interferencia es el llamado microscopio de Nomarski, en el cual un rayo de luz nico atraviesa el material y el objetivo y luego se di vide en dos rayos que se interfieren entre s por medio de un prisma bi.rrefringente. '1':1mbin se utilizan filtros que actan como polarizadores y analizadores y un prisma compensador ubicado en el condensador. La imagen resultante pr s nta un rclicvr l'ararl crstico (fig. 23-4). Este 111inoscopio t'S p ntl t '" li """ ' llt c 1 iil para 1 estudio
,,. lm. t'tholll/1 vl v11 l11 o 1111 1(1 11111n11 i::

Fig. 23-4. Micrografa obtenida con la ptica de Nomarski de una neurona coloreada con un anticuerpo. El ncleo contie ne un nuclolo de gran tamao y sobre la superficie celular se
observan lcnninucioncs nerviosas que slahl e n
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FUNDAMENTOS DE BIOLOG IA CELULAR Y MOLECULAR

23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

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23-9. M icroscopio de f ondo oscuro

En la microscopia de fondo oscuro la luz se dispersa a nivel de los lmites entre los distintos componentes celulares, siempre que posean ndices de refraccin diferentes. El microscopio posee un condensador que ilumina al material oblicuamente. Con el condensador de campo oscuro la luz directa no ingresa en el objetivo, de modo que el fondo aparece oscuro y el material brillante a causa de la dispersin de dicha luz. Por ejemplo , en una clula culti vada, el nuclolo, la membrana celular, las mitocondrias y las gotas de lpidos se muestran brillantes y se destacan sobre el fondo oscuro del citoplasma. Por medio de este instrumento pueden descubrirse estructuras ms pequeas que las visualizadas con el microscopio ptico com n.

23-1 O. M icroscopio de polarizacin

Este microscopio se basa en el comportamiento de ciertos componentes celulares y tisulares cuando son observados con luz polarizada. Si el material es isotrpico, la luz polarizada se propaga a travs de l con la misma velo cidad, cualquiera que sea la direccin del plano de incidencia. Las sustancias y estructuras isotrpicas se caracterizan por tener e l mismo ndice de refrac cin e n todas las direcciones. En cambio, en un material anisotrpico la ve Jocidad de propagacin de la luz polarizada es distinta segn su direccin. Un material con estas caractersticas se denomina birrefringente porque presen ta dos ndices de refraccin distintos. que corresponden a dos velocidades d transmisin de la luz. En las fibras biolgicas, la birTefringencia es positiva si el ndice de r~ fraccin existente cuando la luz sigue el plano longitudinal de la fibra es ma yor que cuando sigue el plano perpendicular, mientras que es negativa en l; situacin contraria. El microscopio de polarizacin difiere de los convencionales por el agl'l' gado de dos elementos, el polarizador y el analizador, los cuales estn cons tituidos por una hoja de polaroid o por prismas de Nicol de calcita. El pola rizador se monta debajo del condensador y el analizador se coloca por enci ma de las lentes del objetivo. Este microscopio puede ser acoplado a una vi deocmara.

MICROSCOPIA ELECTRONICA
23-11. Microscopio electrnico de t ransmisin
El microscopio electrnico de transmisin es un instrumento que permih conocer la ultraestructura de las clulas y de la matriz extracelular, ya que po see un poder de resolucin mayor que el del microscopio ptico. Utiliza lu propiedad que tienen los haces de electrones de ser desviados por un campo electrosttico o electromagntico, de la misma forma que un rayo de lu~. ''refractado al atravesar una lente. Si se coloca un filamento en el interior de un tubo de vaco y luego Sl' lo calienta, el filamento emite electrones que pueden ser acelerados por lll<'diu de un potencial elctrico. En estas condiciones el haz de electrones 1i ud< 11 seguir una trayectoria rectilnea y presenta propiedades sirnilan.:s a las dt li1 luz. Al igual que sta, manifiesta un carcter vibratori11 y corpuscular. P''"' h longitud de onda es menor (A = 0,005 nm para los d 1rou s, u lugar el loo 250 nm de la luz). El fila m nlo ( lodo) que 'Jilile la ,.,,, inl k <'kt'l'"'"' aci(IH t'OJno una fllt'111l' lnnloi(mil'H. Pnr lll('dio th- 111111 huhum rh\' 'llnlllhJ'IU ti l pw '11111pl 1 a h nH' I uw ~. dtl 1'1111d nr.tu lor dt ~ l nllt Hlll ''11111 11)111111 In
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electrones se concentran en el plano donde se coloca el material. Una segunda bobina funciona como una lente objetivo, por lo que da una imagen agrandada del objeto en observacin. Esta imagen es recibida por una tercera "lente" electromagntica, que al actuar como el ocular o lente de proyeccin aumenta la imagen que proviene del objetivo. La imagen final se observa sobre una pantalla fluorescente o se recoge en una placa fotogrfica (fig. 23-1). A pesar de las semejanzas, entre el microscopio ptico y el microscopio electrnico existen grandes diferencias, algunas de las cuales corresponden al mecanismo de formacin de la imagen. En el microscopio electrnico dicho mecanismo se basa en la dispersin de los electrones, que al chocar con los ncleos de los tomos del material se dispersan de forma tal que caen por fuera de la apertura de la lente del objetivo. En esta dispersin -llamada elstica- la imagen observada en la pantalla fluorescente refleja la ausencia de esos electrones, ya que -como vimos- caen fuera de la apertura del objetivo. Adems, la dispersin se debe a mltiples colisiones entre los electrones, que disminuyen la energa de los que logran pasar. En este caso la dispersin se llama inelstica. La dispersin de los electrones depende del espesor y la densidad molecular del material y del nmero atmico de los tomos que lo componen. Amayor nmero atmico, mayor dispersin. Gran parte de los tomos que integran las estructuras biolgicas tienen un nmero atmico bajo y contribuyen muy poco a la formacin de la imagen. Por esta razn, el material debe ser procesado con tomos pesados para aumentar su contraste (seccin 23- 13). El poder de resolucin del microscopio electrnico es tan alto que la imagen del objetivo puede ser aumentada por el ocular en una proporcin mucho mayor que la lograda con el microscopio ptico. As, con un aumento inicial del objetivo de IOOx, se puede ampliar la imagen con la bobina proyectara unas 200 veces, lo que equivale a un aumento de 20.000x. Con los instrumentos modernos se obtienen mayores incrementos todava, ya que poseen una o ms lentes intermedias que permiten lograr aumentos de hasta l .OOO.OOOx. Ms an, los negati vos fotogrficos pueden volver a aumentarse, lo cual posibilita aumentos finales de 10.000.000x cuando la resolucin de las imgenes lo permite. Otra diferencia con el microscopio ptico es que el electrnico ofrece una mayor profundidad de foco.

23-12. Corte del material

Una de las limitaciones de la microscopia electrnica deriva del escaso poder de penetracin que tienen los electrones. Si el espesor del material que va a ser estudiado excede los 500 nm, la opacidad es casi total. La necesidad de realizar cortes ultrafinos ha conducido al empleo de medios de inclusin de considerable dureza. Los ms usados son resinas de epoxi, que impregnan los tejidos y luego se polimerizan con catalizadores apropiados. Se han elaborado resinas miscibles en agua, que pueden infiltrarse y polimerizarse a temperaturas de - 35 a - 50 C. Estas resinas reducen los artificios y permiten efectuar estudios citoqumicos. Para lograr cortes muy delgados se utilizan ultramicrtomos, que emplean cuchillas de vidrio o de diamante. Con estos instrumentos se consiguen ortes de hasta 20 nm de espesor. El material cortado se coloca sobre una pelfcula de colodin o ele carbn muy fina (de 7,5 a 15 nm de espesor), que a "1"'' ""'' dl'lgncla (\rilla de mela!. Adems, el material debe su vez s apoya " t' l th~:hithaluln Jfi U ii lh'd' u p11l m l'l vacro al q~~t st lo solllt'h'l'tl ,

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23. LOS METO DOS DE ESTUDIO EN BIOLOGJA CELULAR

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Una metodologa para el estudio de las macromolculas es la denominada de monocapas, en la cual aqullas se extienden sobre una interfase aire-agua antes de ser colocadas sobre una pelcula. Este procedimiento ha dado excelentes resultados para la observacin de molculas de ADN y de ARN.

23- 13. Aument o de contraste ent re los componentes del material

El empleo de sustancias que poseen tomos pesados --{;Omo osmio, uranio y plomo- permite obtener un aceptable contraste entre los componentes de las clulas y los tejidos. En ciertas condiciones estas sustancias actan como colorantes electrnicos comparables a los colorantes histolgicos, ya que se combinan especficamente con varias estructuras del material examinado. Para estudiar algunos procesos biolgicos --corno la incorporacin dt macromolculas o de partculas por endocitosis- se utilizan trazadores, qut poseen un alto grado de opacidad a los electrones. Esos trazadores permiten detectar las vas por las que son transportadas ciertas sustancias, tanto entn las clulas como dentro de ellas. Los trazadores suelen ser enzimas cuyos productos son opacos a los electrones. Por ejemplo, las peroxidasas -inyel' tadas en animales que luego se sacrifican en plazos progresivamente mayo res- se detectan mediante el uso de perxido de hidrgeno y 3,3-diamino bencidina. Uno de los trazadores ms pequeos es la microperoxidasa, qm tiene un peso molecular de slo 1,9 kDa. Otra tcnica que permite aumentar el contraste de Jos componentes celu lares es la de som breado, que en las folomicrografas da lugar a imgem~ con un aspecto tridimensional no conseguido con los otros mtodos. Pa111 ello, el material se coloca dentro de una cmara de vaco en cuyo interior M ' evapora un metal pesado (como cromo, paladio, platino o uranio) medianil un filamento incandescente. Dado que el metal se aplica oblicuamente, se d, posita sobre uno de los lados de las estructuras en estudio, por lo que eu 1'1 lado opuesto se generan sombras cuyas longitudes permiten calcular el esw sor de los elementos observados. Otra tcnica --empleada para el estudio de las macromolculas y de lu virus- es la de coloracin n egativa, en la que el material es embebido 1'11 una gota de un lquido denso, por ejemplo, fosfotungstato. Este penetra en tu dos Jos espacios vacos entre las macromolculas, las cuales aparecen hh11 delimitadas y con un contraste negativo (fig . 1-4).

1. Congelacin y fractura

2. Grabado por sublimacin

3. Aplicacin de metal

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4 . Aplicacin de carbono

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5. Extraccin de la rplica

23- 14. Congelacin-fractura de membranas celulares y congelacin-grabado de clulas

El anlisis de la ultraestructura interior de las membranas celulares sl' hu facilitado con el empleo de la tcnica denominada de congeladn-fnut mu (criofractura). Lo mismo ha ocurrido con el estudio ultramicroscpico de las de111:. ' tructuras de la clula , aunque en este caso gracias al uso de una tcniru 1111 poco ms compleja, llamada de congelacin-grabado (fig. 23-5). i\1111111 tcnicas se basan en el congelamiento rpido del tejido y su fractura 1'1111 1111 instrumento cortante. Si se desea que la fractura pase por el plano q111 '1 1'1'11 ra a las monocapas lipdicas de una membrana, el tejido debe cong l:u:., 11011 nitrgeno lquido. En cambio, si se desea que la fract11ra pas 'llln la:: 11 l11 las o que las atraviese, el tejido debe se r eongd :1do 1ou hl'lio lfquido. La tcnica de congelat:i6n-fractura outim:1 ru11 1'1 dq"'.,:ito d1 111111 I IIJ III de metal sohr la s11pcrfici1 de la IIIIHim'upu lip di1 11 .,. l11 1111'111111 111111 q111 ' q111 cla l Xpllt ' S (ll , J:J IIH'Illl ,' /IJt"J t t' l11plt ' tll .' ,i pJ11tl1111 1" I"VII JHII Il dt r 1 l lllllt 1 11 l1
1

Fig. 23-5. Arriba. T cnica de congelacin-grabado. l. Congelacin del tejido y fractura con un instrumento cortante. 2. Exposicin de uno de las fragrnenlos y grabado de su super ficie por sublimacin del hielo al vaco. 3. Partes de la superficie grahnda se c ubre n con un nwla l a plicado e n forma o blicua. 4. Las 'h cas de me ta l y las que se hallan e ntre e llas se c ubre n con c:lr1nno, qn( st aplit a~ nu 1111 ll nr tdn eh- 1)0. 5. Disoluc in de l tejido y extraccin de la rplica de nlctal~c.:mhono puna st'l' oh.HT v:uln cnn cl lll it' HI/jl "1' .. ' lt IH IHt t ' ' Ah1~jn. IU pliea d l' \lll i l t'L~ Iula de rn(' d~,. (..T holla. St oh.'>t ' I VII II In: pnw :. nt~t ' l c !u c, (/ 'N I, cl nn, hn t N l , lu m cdll u '' 111 11 h u r 1 N ) ,1( ,nrn pkjn ek C, d,i ({;) y 111111 v ll'lln ln 1 \' l. , 0011 (C'11rh' 1flt de 11 ll rn 11111 n 1

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23 LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

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tcnica de sombreado descrita en la seccin anterior. Finalmente, el tejido que sirvi de molde se disuelve y la rplica de metal que se obtiene se coloca sobre una grilla para su observacin con el microscopio electrnico. La criofractura ha permitido importantes descubrimientos sobre la estructura molecular de la bicapa lipdica de diferentes membranas celulares debido a que la corta por su interior. A diferencia de la anterior, la tcnica de congelacin-grabado requiere que se cincele la superficie del tejido que queda expuesta despus de la fractura, lo cual se consigue mediante la sublimacin al vaco de la fina capa de hielo que la cubre, ya que el pasaje directo de hielo a vapor tiene la propiedad de esculpir su relieve. A continuacin, sobre la superficie grabada se deposita un metal, que tambin suele ser platino y se aplica de la misma manera que en la tcnica de congelacin-fractura. Luego se agrega una capa de carbono evaporado, el cual se deposita con un ngulo de 90 a fin de llenar las reas del grabado no cubiertas por el metal. Finalmente, el tejido subyacente se desecha y la rplica de metal-carbono que se obtiene se coloca sobre una grilla para su observacin con el microscopio electrnico. La micrografa de la figura 23-5 muestra que la tcnica de congelacin-grabado da una idea bastante acabada de la organizacin tridimensio nal de los componentes celulares.

23-15. Microscopio electrnico de barrido

Con el microscopio electrnico de barrido o SEM (por scanning electro11 microscope) se pueden obtener imgenes topogrficas tridimensionales dl los materiales sujetos a estudio (fig. 23-6). Se emplea un haz de electrones que acta sobre la superficie del materiul; all los electrones excitan a las molculas de la muestra, las cuales emiten un delgado haz de electrones secundarios que adquieren un movimiento seml" jante al observado en los tubos de rayos catdicos. Dado que estos electronc. son derivados hacia un tubo fotomultiplicador, generan imgenes en una pan talla de televisin. Para aumentar el poder dispersante de las estructuras situadas en la supo ficie de la muestra, sta se recubre con un metal pesado (por ejemplo, plati no), que se evapora en una cmara de vaco. Adems se hace rotar la mues tra para que el metal se deposite uniformemente en toda la superficie. Se ha logrado una combinacin del microscopio electrnico de barrido con el de transmisin, llamado STEM (por scanning-transmission electnm microscope).

2 3- 17. Difraccin de rayos X

Para descubrir la estructura molecular a nivel atmico se emplea una tcnica aje na a la microscopia electrnica, llamada difraccin de rayos X. El mtodo requiere que la molcula sea bombardeada por un delgado haz de rayos X de O, 1 a 0,2 nm de longitud de onda a fin de que los tomos de la molcula dispersen al haz en distintas direcciones, y que ste, as difractado, alcance una placa fotogrfica situada por detrs de la muestra. Finalmente, la estructura tridimensional de la molcula se descifra mediante complejos anlisis de las posiciones y las intensidades de las manchas registradas en la placa fotogrfica.

Fig. 23-6. Micrografa electrnica de barrido de una clula culti vada y cubiena con partculas de oro. Se observan lamelipodios y fi lopodios. (Cortesa de Albrecht-B uehler.)

23-16. Reconstruccin de imgenes a partir de micrografas electrnicas

En el caso de molculas o estructuras suprarnoleculares dispuestas en fu ma de cristales, es posible obtener una informacin detallada partiendo dt electromicrografas poco claras. El mtodo de reconstruccin de imr,om consiste en colocar la micrografa electrnica en la trayectoria de un ha~. do rayos lser, a fin de obtener un diagrama de difraccin ptica. Luego, a pm tir de ste, se puede reconstruir la imagen de las molculas individuales 1111 diante el procesamiento por computadora de las fases y amplitudes uno pondientes a un rea de la micrografa electrnica. En la figura 6- 13 se ofrece un ejemplo de reconstrucc(m il nug<liH'N o11 el cual, a partir de un conju111o ol macroiiJol<! ulas t:oll rolorur i 111 ll< ltlnlo vn localizadas o11 111111 1111 >11 o 'lllllllllio nllh' , il u po. :i l>lo ol>lou- lu! ionol:'"" 1 oh
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ESTUDIO DE LAS CELU LAS VIVAS

23-1 8. Cultivo cel ula r
Uno de los mtodos ms empleados para estudiar las clulas vivas es el cultivo celular. Desde que se pudo hacer crecer explantes de tejidos durante varias generaciones, la tcnica de cultivo progres notablemente. Hoy es uno de los procedimientos ms utili zados para dilucidar problemas fundamentales de la biologa celular. En los primeros tiempos la tcnica consista en colocar un explante de un pequeo trozo de tejido -preferentemente embrionario- en un medio compuesto por suero sanguneo, extracto de embriones y solucin salina. A partir de 1955 se crearon medos qumicos ms adecuados, y ahora que se conocen lns n;qnormio'llh>ll uull l .,, ,,. las,. '- lulas eucarolas se las puede manten r y
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23 LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

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Se distinguen tres tipos de cultivos, denominados primarios, secundarios y de lneas establecidas. Los cultivos primarios se obtienen directamente de los animales o de los vegetales. El tejido se separa en condiciones de asepsia y se corta en pequeos trozos, a los que se trata con tripsina. Esta enzima proteoltica disocia los agregados celulares y genera una suspensin de clulas libres que se cultivan en una cpsula de Petri con un medio de cultivo apropiado. El cultivo secundario se obtiene mediante el tratamiento con tripsina de un cultivo primario, seguido de un nuevo cultivo en otra cpsula de Petri. De uso ms corriente son los cultivos de lneas establecidas, cuyo crecimiento se prolonga debido a la condicin cancerosa de las clulas. Entre las ms usadas se encuentran las clulas HeLa --obtenidas de un carcinoma humano (cap. 21-4)-, las clulas L y 3T3 de embriones de rata (fig. 23-6), las clulas BHK obtenidas del rin del hmster recin nacido y las clulas CHO del ovario del mismo animal adulto. Cuando se cultivan clulas normales no sobreviven mucho tiempo, ya que al cabo de varios subcultivos dejan de dividirse y mueren. Las lneas establecidas tienen caractersticas especiales: se disponen apretadamente, necesitan menor concentracin de suero sanguneo y suelen ser heterohaplo ides (el nmero de los cromosomas vara de una clula a otra). A pesar de tales anomalas estos cultivos son muy tiles para el estudio del cncer. Uno de los adelantos ms importantes consisti en la obtencin de cepas puras, o sea, de poblaciones celulares derivadas de una sola clula progenitora. 23-19. Microcirug a celular Este mtodo ha contribuido considerablemente al conocimiento de laclula viviente. La microciruga consiste en la introduccin de micropipetas, microagujas, microelectrodos y microtermocuplas en las clulas y los tejidos. Se vale de aparatos especiales que permiten el movimiento controlado de tales instrumentos bajo el microscopio. Este recurso hace posible la diseccin y extraccin de partes de clulas y tejidos, la inyeccin de sustancias, la medicin de variables elctricas, el pasaje de componentes de una clula a otra, etc. Tambin se emplean rayos lser para producir daos controlados en determinadas estructuras celulares.

23-2 1. Para la detecci n de grupos a ldehdo se utiliza e l react ivo de Schiff Para detectar protenas, cidos nucleicos, polisacridos y lpidos pueden emplearse algunos agentes cromognicos capaces de unirse selectivamente a ciertos grupos qumicos de estas molculas. Veamos algunos ejemplos: El reactivo de Schiff, selectivo de los grupos aldehdo, se utiliza para detectar el cido desoxirribonucleico, algunos hidratos de carbono y lpidos. Este reactivo se prepara tratando fucsina bsica, gue contiene parafucsina (cloruro de tliaminotrifenilmetano), con cido sulfuroso. La parafucsina se trans. forma en un compuesto incoloro (cido bis-N-aminosu lfnico), es decir, el reactivo de Schiff, que es "recoloreado" cuando reacciona con los grupos aldehdo de las molculas celulares. Reaccin de Feulgen. El ADN puede ser detectado por medio de la reaccin de Feulgen. Para ello, Jos cortes de tej ido fijado se someten a una hidrlisis cida dbil y luego se tratan con el reactivo de Schiff. Esa hidrlisis es suficiente para extraer el ARN (que desaparece), pero no el ADN. Los pasos de la reaccin son los siguientes: 1) la hidrlisis cida extrae las purinas del ADN a nivel de la unin desoxirribosa-purina, por lo que se liberan los grupos aldehdo de la desoxi rribosa; 2) los grupos aldehdo libres reaccionan con el reactivo de Schiff. Cuando se aplica a la clula, la reaccin de Feulgen es positiva e n el ncleo y negativa en el citoplasma. Las fibras de cromatina condensada son francamente Fe ulgen-posi tivas, pero el nuclolo es negativo. Se puede confirmar la especificidad de la reaccin tratando a los cortes con desoxirribonucleasa, enzima que hidroliza al ADN. Reaccin d e PAS. La reaccin de PAS se basa en la oxidacin de Jos grupos gliclicos 1-2' de Jos polisacridos mediante el cido perydico, lo cual produce la liberaci n de los grupos aldehdo, que entonces dan positiva la reaccin de Schiff. En las clulas vegetales este test es positivo para el almidn, la celulosa, la hemicelulosa y las pectinas, mientras que en las clulas animales lo es para las mucinas, el cido hialurnico, los proteoglicanos y la quiti na. 23- 22. La deteccin de los lpidos puede lograrse mediante colora ntes li posolubles Las gotas de lpidos en el citoplasma se demuestran por medio del tetrx ido de osmio, que las colorea de negro al reaccionar con los cidos grasos no saturados de los triglicridos. Las coloraciones con Sudn III o rojo escarlata tienen mayor valor citoqumico porque actan por un simple proceso de difusin y solubil idad, motivo por el cual se acumulan en el interior de las gotas lipdicas. El Sudn negro B, adems de brindar un mayor contraste, presenta la ventaja de disolverse tambin en los fosfolpidos y en el colesterol. 23- 23. Algunas enzimas pueden detectarse despus de su incubacin con sustratos adecuados Para estudiar algunas enzimas los cortes deben realizarse en el cristato (seccin 23-5). En cambio, otras enzimas resisten una breve fijacin en acetona fra, formaldehdo o glutaraldehdo. Las tcnicas enzimticas se basan e n la incubacin de los cortes tisulares con un sustrato apropiado. Por ej emplo, pHra la fo:lar wn<:~ 1.- : tlina sc uliliza el mlodo de Gomori. que usa 6slercs
l'o~;f'uit 'tl(.

CITOQUIMICA
23-20. Los mtodos citoqu micos permiten identificar co mpuestos qu m icos en sus loca lizaciones celu la res originales El principal objeti vo de la citoqumica consiste en la identificacin in si
tu de los diferentes compuestos qumicos de las clulas. Este objetivo nos(\

lo es cualitativo sino tambin cuantitativo. Ms an, a veces involucra el es tudio de los cambios dinmicos producidos en el contenido qumico celular durante los distintos estadios funcionales. As, ha permitido establecer el pa pe! desempeado por diferentes componentes celulares en varios procesos metablicos. Para la determinacin citoqumica de una sustancia deben curnplirs 1'"' siguientes requisitos: 1) debe ser inmovilizada en su posic in ori ginal ; 2) <k be ser identificada por un proccdirnierrlo qrrc sea esp cffi o para olla " parro un grupo qumico que onl on~a . l:llo S<' lora pllr nwtlio ti,. 111 lodos 1(,,,.",.
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23. LOS METO DOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

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Fig. 23-7. Mtodos inmunohistoqumicos directos que emplean anticuerpos marcados con un colorante fluorescente (A ), una susrancia ra-

23- 24. Los mtodos citof ot omt ricos recurren a la absorcin de la luz ultravioleta Diversos componentes celulares tienen la propiedad de absorber especficamente la luz ultravioleta. As, los cidos nucleicos la absorben en la banda de 260 nm, mientras que las protenas lo hacen en la de 280 nm. Estas sustancias pueden anali zarse cuantitati vamente por medio de instrumentos denominados citofotmetros. En los cidos nucleicos la absorcin especfica de la luz se debe a la presencia de las bases purnicas y pirimidnicas, por lo que es semejante en el ADN, el ARN y Jos nucletidos. En consecuencia, la citofotometra con luz ultravioleta permite la localizacin de los dos tipos de cidos nucleicos, sin distinguirlos entre s. 23- 25. La f luorescencia puede ser natura l o mediada por f luorocromos Los componentes tisulares pueden ser descubi ertos por la fluorescencia que emiten en el espectro visible. Los tejidos emiten dos tipos de fluorescencia: 1) una natural (autofluorescencia), surgida de sustancias presentes normalmente en los tejidos, y 2) una secundaria, inducida con colorantes fluorescentes, ll amados jluorocromos . El examen de los cortes se realiza con el microscopio de Ouor escencia. Veamos algunos ejemplos: El colorante naranja de acridina genera una fluorescencia verde en el ADN Y otra roja en el ARN. Ambas pueden analizarse simultneamente mediante un citofluormetro especial. Algunas protenas son detectadas mediante en lorantes fluorescentes como la fluorescena y la rodamina sin que experimen ten alteraciones, de modo que al ser inyectadas en un animal que luego es su criticado, es posible localizarlas en sus clulas o en la matriz extracelular. En tre otras aplicaciones, estos colorantes permiten analizar la fluidez de las pro tenas en las membranas celulares (cap. 3-6) y detectar las uniones comuni cantes entre las clulas, de ah que se los utilice para el estudio de la permea bilidad tisular.

Fig. 23-8. Mtodo inmuoohistoqufmico indirecto que emplea un segundo anticuerpo marcado.

diactiva (B) o la enzima peroxidasa (C).

dasa, una enzima que en presencia de diaminobencidina y perxido de hidrgeno produce un depsito opaco visible con el microscopio. Adems de la peroxidasa se usan otras enzimas, como la fosfatasa alcalina y la ~-galactosida sa. Finalmente, otro mtodo inmunocitoqumico de observacin directa emplea anticuerpos acoplados a la ferritina, que es una protena rica en hierro opaca a los electrones. Mtodos indirectos. Cuando la sensibilidad de los mtodos directos es baja debe recurrirse a los mtodos indirectos, en los que la imagen del complejo anticuerpo-componente celular se amplifica debido a que se introduce un segundo anticuerpo (fig. 23-8). Los dos anticuerpos se obtienen de animales diferentes. Por ejemplo, si el primero se extrae del conejo, el segundo debe ser un anticuerpo anticonejo obtenido de la cabra o la oveja. Igual que en los mtodos directos, el segundo anticuerpo se marca con colorantes fluorescentes, sustancias radiactivas, peroxidasa o ferritina. Otro mtodo inmunocitoqumico indi recto que requiere la ayuda del microscopio electrnico se basa en la aplicacin de partculas de oro coloidal, las cuales son muy opacas a los electrones. Estas partculas se rodean con protenas extradas del Sraphylococcus aureus -llamadas protenas A- , que tienen la propiedad de interactuar con el extremo libre del anticuerpo. Las partculas de oro son fciles de descubrir con el microscopio electrnico. Ms an , debido a su pequeo tamao permiten identificar claramente los componentes celulares y hacer una estimacin cuantitativa de .Jos mi smos.

RADIOAUTOGRAFIA
23- 27. La radioaut ograf ia tiene mlt iples aplicaciones La radioautografa se basa en la marcacin de componentes celulares con r adioistopos, los cuales pueden demostrarse por su capacidad de interactuar con los cristales de bromuro de plata (BrAg) de las emulsiones fotogrficas. As, el radioistopo es incorporado a un componente de la clula y luego localizado mediante una emulsin fotogrfica. Para ello, el tejido con el componente celular marcado se pone en contacto con la emulsin fotogrfica durante un tiempo y la radioautografa se revela como una fotografa comn. Luego la imagen fotogrfica se superpone con otra del tejido (que se proces para ser examinado con el microscopio) y se obtiene una idea bastante precisa sobre la localizacin del componente celular que lleva la marca del radioistopo. La tcnica radioautogrfica ms usada es la que emplea emulsiones fotogrficas lquidas con cristales de BrAg. El mtodo comprende las siguientes etapas (fig. 23-9): l ) el corte del tejido se monta sobre un portaobjeto o una grilla y se sumerge en la emulsin fotogrfica a 45 e; 2) el preparado queda a temperatura ambiente hasta que la emulsin fotogrfica forma una pel..:ul< l de gelatina sohrl' la superficie del tejido; 3) el conjunto se guarda varios d as o s<'lllatlll' 111 1111 11 '"i" 111'1'111 ti a - para que nn ingrese la luz- a rin d

INMUNOCITOOUIMICA
23-26. En las reacciones inmunocitoqumicas se utilizan anticuerpos marcados La inmunocitoqumica se basa en las propiedades antignicas de los com ponentes celulares, que por eso pueden ser detectados mediante anticuerpor~ cuando a stos se le acoplan marcadores capaces de ser vistos con la ayuda del microscopio ptico, el microscopio de fluorescencia o el microscopio electrnico. Mtodos directos. La figura 23-7 ilustra tres mtodos de observacin di recta del complejo anticuerpo-componente celular. En el primero el ant i 'ttl'l pose conjuga con un colorante fluorescente que se detectu, scg1n s vio, ro11 el microscopio de fluorescencia. En el segundo 1 a11ti u 1po s< 111a1'n 1 ro11 una susta11 ia radia<tivn (111>1.-jolllplo, Iritio) que S< ' nvcla lllcdimll<' 11111 111 clioalltOitlllffn (:11'< '1'11111 '1 ' '!) 1-:ta c l " '" '''"' 1'11 1111i1 auap" u llun 111 p< '" ~

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23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

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piejo de Golgi y de otras membranas celulares, y 4) la soluble, que contiene los ribosomas, macromolculas grandes, virus, etc. En algunos tejidos glandulares se obtiene otra fraccin ms, rica en grnulos secretorios.

23- 29. las fraccion es celulares se obtienen por ultracentrifugacin

Fig. 23-9. Radioautografa. Arriba. Una partcula beta ({J-) emitida por un tomo de lri(io (-'H) del tejido choca contra un c rista l de BrAg y lo convie rte
en un grano de plata metlica.

-Portaobjeto o grilla

Abajo. Examen con el mic roscopio electrnico despus del revelado. Todos los cristales de BrAg no impactados por la radiacin se disolvieron dura nte la fijacin fotogrfica. (Cortesa de L. G. Caro.)

Grano de plata

- ' - - - - - Gelatinn
~------Tejldto

Portaobjeto o grlll

que la radiacin que emite el radioistopo incida sobre los cristales de BrA de la pelcula y convietta a los iones Ag en granos de plata metlica; 4) la p.lcula se revela y los granos de plata se visualizan como puntos oscuros. El radioistopo q ue ms se usa es el tritio (lH). Por ejemplo, se utiliza Ji midina tritiada para estudiar el metabolismo y el mecanismo de replicadon del ADN, ya que la timidina es un nucles ido especfico de este cido 1111 cleico. Similarmente, se emplea uridina tritiada para estudiar la formacin v la dinmica celular del ARN. Por otra parte, en el ejemplo que aparece en h1 figura 23-10 puede verse que los ncleos marcados con timidina tritiada q111 se hallan en el fondo de las criptas intesti nales de un ratn inyectado han K horas, aparecen en el ex tremo libre de las vellosidades intestinales a las 1(, horas de la inyeccin. As, el marcador revela en forma grfica la evolud un de alg unas clulas intestinales, mostrando que se multiplican en el fondo,, las criptas, recorren el epitelio y mueren en la punta de las vellosidades.

En el ejemplo de la figura 23- 11 se realiza la separacin de las fracciones celulares mediante el mtodo de ultracentrifugacin diferencial, que requiere el empleo de ultracentrfugas. Al principio todas las partculas se hallan distribuidas homogneamente, pero luego de la centrifugacin se depositan en el tubo a distintas alturas de acuerdo con sus respecti vas velocidades de sedimentacin. Las tcnicas de ul tracentrifugacin se facilitan si previamente se establecen gradientes de densidad, los cuales pueden ser continuos o disconti nuos. Para lograr gradientes discontinuos se colocan en el tubo de la centrfuga sucesivas soluciones de densidad creciente, por ejemplo, soluciones de sacarosa cuya molaridad, parti endo del fondo del tubo, vara entre 1,6 y 0,5 M. Una vez formado el gradiente, se coloca la muestra en el tope de la solucin, que entonces se centrifuga hasta que las distintas partculas a lcancen su posicin de equilibrio con respecto a las sucesivas fases del gradiente. La ultracentrifugacin permite separar partculas an ms pequeas -como virus y macromolculas (protenas, cidos nucleicos)- en la ultr acentrfuga a naltica. Con este aparato se determinan los coeficientes de sedimentacin de esas partculas, que como se vio en el captulo 16-9 se expresan en unidades Svedbergs o S.

23- 30. La citometra de flujo perm it e seleccionar clulas o compon ent es subcelu lares enteros de una muestra
Existen mtodos para seleccionar clulas enteras y los cromosomas metafsicos. Esto se logra mediante el empleo de cmaras de sedimentacin especiales --que funcionan con pequeas fuerzas de gravedad- , en las cuales las clulas o los cromosomas se separan segn sus tamaos y densidades.

FRACCIONAMIENTO CELULAR Y MOLECULAR

23- 28. El fraccionam iento celular sirve para aislar a los dist intos componentes de la clula
El fraccionamiento celul ar consiste en la homogeneizacin o deslnll'< 'l"ll de las uniones celul ares por medio de diferentes procedimientos mecniru " qumicos, lo que rompe las membranas plasmticas y separa a las fracci' "" subcelulares de acuerdo con su masa, superficie y peso especfico. Se "'"' zan di versos m todos de fraccionamiento celular, la mayora basados ,., lu homogeneizaci n de la clula en una solucin acuosa - generalmcntt do 11 carosa- a distintas concentraciones. En la fi gura 23-11 se ha esquematizado el procedimie nto corriente. 1' " te ejemplo el hgado de un animal se perfunde con una soluo,;i(ln s:tl inu l11 lu da y luego con sacarosa 0,25 M, helada tambin. Se hace atrav sar 1 11'1"'" por un disco de acero perforado, se lo homogeneza en 11na sol111'i<'n1,,. '' " '' rosa 0,25 M y se lo somete a una serie de o,;entrif11gaci01ws d, 1111'1/ !1,, 1111 1 fuga creciente. Este tipo de l'raceionami nto cc lni:lr pcnn itc di viol i1 loo:. < '""IJ'"'" ""' o, In lar s ~n Cllalro l'ra< 'l'iorlls: 1) lil lllll'ilflll' , '1 '"' ind nv lo or. 1111o 'looo11 y ,. ld11
IUI ' IIIII~ ;

Fig. 23-10. Corte de intestino de ratn inyectado con timidina tritiada. Izquierda. Ratn sacrificado a las 8 horas de la

inyeccin. J)crcclm. Ratn

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11 1 , ,1 , 1, 11111

418

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

419

Pero las poblaciones celulares pueden ser separadas mucho ms eficientemente mediante un instrumento llamado citmetro de flujo, en el que las clulas fluyen una tras otra por un tubo muy delgado. Son discriminadas -y entonces separadas- de acuerdo con la fluorescencia que emiten. El fluorocromo es agregado en los distintos tipos celulares mediante anticuerpos especficos (seccin 23-26).

23-31. Las protenas pueden separarse por enfoque isoelctrico y por electroforesis
En el captulo 2-11 definimos el mecanismo que da lugar a la electroforesis y vimos que cada protena tiene un punto isoelctrico caractestico. Ahora veremos cmo pueden ser utilizadas estas propiedades para separar a las protenas. En la tcnica llamada de enfoque isoelctrico se hace la electroforesis de las protenas a travs de un gradiente de pH. Las protenas se desplazan hasta que alcanzan un pH igual al del punto isoelctrico. En ese momento la migracin en el campo elctrico se detiene debido a que las protenas tienen carga cero. Se han combinado las tcnicas de enfoque isoelctrico y de electroforesis en geles de poliacrilamida para la separacin bidimensional de las protenas. La figura 23-12 muestra cmo se pueden aislar varios cientos de protenas celulares. Esta tcnica aprovecha dos propiedades de las protenas: primero las separa por sus cargas (punto isoelctrico) y luego por sus masas (peso molecular). Cuando a las protenas se les agrega el detergente inico dodecilsulfato de sodio (SDS), se separan principalmente por su peso molecular. Ello se debe a que el SDS se une a las protenas y les confiere un gran nmero de cargas negativas; se reduce as el efecto de las cargas, de modo que las protenas se mueven segn sus masas: las protenas pequeas son ms rpidas que las grandes porque encuentran menos resistencia para atravesar los poros moleculares del gel de poliacrilamida. Este tipo de electroforesis se usa tambin para determinar el peso molecular de las protenas.
Homogeneizacin

Homogeneizado

1G 20 min .

Clulas intactas

1.000G 20min.

..
Ncleos

10.000 G 20 min.

Mitocondrias, lisosomas y peroxisomas

23- 32. La cromatografa perm ite obtener grandes cantidades de protenas bastante puras
Las tcnicas cromatogrficas emplean columnas verticales en las que se colocan las muestras, de forma que las molculas proteicas se distribuyen en dos fases, una fija y otra mvil. La fase mvil corresponde al solvente, qm: fluye arrastrando a la mayoa de las molc ulas de la muestra. En cambio, la fase fija incluye un elemento inmvil acondicionado para que se le unan la protena o las protenas deseadas. El elemento inmvil puede ser un papel <.1 filtro, resinas cargadas, camas porosas, etc. Las protenas buscadas se recogen tiempo despus de haber salido la fase mvil por la parte inferior de la columna. Los mtodos de cromatografa ms usados son el de filtracin por gel, el de intercambio itco y el de afinidad. Todos permiten obtener mayo1 cantidad de protenas que con la electroforesis, aunque de menor pureza.
105.000 G 120 min.

Desoxlcolato de sodio 105.000 G 20 min.

ooo 000 00 o0 o oo o o o o o
Retlculo endoplasmtico

Oo 0

00

ANALISIS MOLECULAR DEL ADN E INGENIERIA GENETICA

23-33. El ADN put'Ik
'>1'1

rk,nalura lizado y vuelto a naturalimr

o lllot ' ltttll 11!-

T uil'udu <' 11 '" 11111 qttt l11 uidu ptll lllllltl lt l it~ 1 11 \li la 11! 1

dnhk hliin d!'li\llN

fltiH"tlllt l~

t' ,

llllllll o'

lll l1 1 1111 h HJC' /1 ( "tJdl t'IIIIHI IIl

tlt ' lluht t

Fig. 23-11. Etnpn.< de In tcnica de cenlrifugacin diferencial. En el lado izquierdo se observa un trozo de hfgado homogcnoizn lo y somcll<lo 11 111111 'llrl d contrifugnciones de fueras centrifugas crecientes. En el lado derecho se ihtslrnn 11111 'ltthfllt<' (lour.1: q111~ dt' uhu ' 1 1111 ,u 11plo ole tr6nico. (D W. Bloom y D. W. Pnw ott; mocJifi ulo.)
1 , ..

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

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geno), es posible separar sus dos cadenas por medio del calor y otros tratamientos, como el pH alcalino. Este proceso se denomina desnaturalizacin del ADN. Dado que la temperatura necesaria para romper el par C-G (que tiene tres puentes de hidrgeno) es mayor que la requerida para romper el par A-T (que tiene dos puentes de hidrgeno), la temperatura a la cual se separan las cadenas del ADN -llamada punto de fisin- depende de la relacin CG/AT. Si el ADN desnaturalizado se enfra lentamente, las cadenas complementarias se aparean en forma ordenada y se restablece la conformacin original de la molcula. Este proceso se denomina renaturalizacin. Ms an, una de las cadenas del ADN puede unirse a una cadena de ARN complementario para formar una molcula hbrida, mitad ADN y mitad ARN.
23-34. Los mtodos de secuenciamiento del ADN han permi tido con ocer la com posicin molecular de muchos sectores de los cromosomas

La secuencia de los nucletidos de un gen puede ser parcialmente deducida a partir de la secuencia de los aminocidos de la protena que codifica. Los resultados que se obtienen mediante este recurso abarcan solamente las partes codificadoras del gen, ya que no aportan informacin sobre los segmentos reguladores ni sobre los intrones. Tampoco tienen en cuenta una de las caractersticas del cdigo gentico, la que establece que la mayora de Jos aminocidos son codificados por ms de un codn (cap. 16-2). Se han desanollado varios mtodos que permiten obtener un rpido secuenciamiento del ADN, lo cual produjo una verdadera revolucin en el mundo de la biologa molecular. Gracias a ellos se ha llegado a conocer la composicin de los cromosomas nucleares y mitocondriales humanos y la de muchos de sus genes. Adems se ha estudiado el ADN de otros organismos eucariotas y de numerosos virus y bacterias.
Enfoque isoelctrico (unidades de pH) 6

U>

o ~

J?

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U>

o
(/)

e
Q)

a;

o (/)

Fig. 23-12. Electroforesis bidimensional de las protefnas del ovocito de Xcmopus lw rNiii,, . Las clulas se marcaron con m t iouiuu 1 ~S y se homoge neizaron. Luego las prolc fnus .~ M' pararon por enfoque iscwlc:tctrko (uinlt'l ll di111cnsin) y se ngrcgt. docl il!-iulfnlo ck sodio
sohrc tlll j'CI de polim: d l 1 1111idu ( ,1 Jtlllldll d l nu 1nNi(w ). Poi' rnclionuto~rnlfn :-.e dclc-rt:uon dcn hs d Jllold nw., ,.~ lu'-1 qu ' ' Uulun 1!1 111 1 1111 y 1111 1 ruhulluuv fY V llf,t que lu ml,un ~o: h IIth~ lfp, JIIHI 1111 1 t 11 lt '' '"'"ll dltn 11 l~tn ' tt JIIIIJIUII ' Iunu l u l ln~ udlt llll dPI Jll''to n tul t u hu 11 ,, 1 1\1 l it llnlu 111 1

f\,

Los mtodos de secuenciamiento se basan ' Cebador , en la produccin de fragmentos de ADN de lon5 1111111 3 gitudes crecientes, los cuales empiezan en un 3, 1 1 i 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1Al.ll.ll.A.LU..LI.A 1 1 1 1 1 1 1 5' punto comn y poseen uno de los cuatro tipos 1 9 15 21 de nucletidos en sus extremos terminales. 1---- Secuencia desconocida - + { La figura 23-13 muestra las etapas del mto2 do de secuenciamiento denominado de terminacin de cadena, que comienza con la desna5' 111 IIJJ XXxx xxxTxxxxxTxxxxxTdd 3' turalizacin del ADN que se quiere analizar a 3' 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1Al...LULAl.LJ...liA 1 1 1 1 1 1 b' fin de obtener molculas de una sola cadena. 1 21 Seguidamente se coloca un cebador en el extremo 3' de una de las cadenas, y con la ayuda de 5' 111 xxxxxxxxTxxxxxTdd 3' una ADN polimerasa se sintetiza la cadena 3'! 11111 j 1 j j i j 1 j I ALlLlLAl.LJ...liAII 11 1 1 5' complementaria. El cebador es un fragmento de 1 15 ADN que deja expuesto su propio extremo 3', a partir del cual la ADN polimerasa agrega los 5' 1 111 xxx xxxxxTdd 3' nucletidos como Jo hace durante la replicacin del ADN. Debe sealarse que los nucletidos 3' 1 1 1 jlj 11111] 1 1 IAl.ll.ll.Al.LJ...liAI I 1 1 1 1 5' 1 9 que se emplean estn marcados con una sustancia radiacti va y que el procedimiento se realiza 3 en forma simultnea en cuatro dispositivos. Fig. 23-13. Pasos en el mtodo de terLa sntesis de las cadenas nuevas se inteGel minacin de cadena para secuenciar el rrumpe en sitios especficos debido a que cada ADN. l. Se coloca un cebador junto al dispositivo contiene uno de los cuatro nucieADN monocatenario que se desea secuenciar. 2. Se sintetiza la segunda catidos (A, T, G y C) bajo la forma 2',3'-didesodena del ADN despus de la incorporaxin ucletidos (ddATP, ddTTP, ddGTP y cin de la ADN poli merasa y de los 21 ddCTP), que son molculas que bloquean la cuatro tipos de nuclesidos trifosfato. La sntesis se detiene cuando se agresntesis del ADN cuando se incorporan a la ca15 gan didesoxinuc!etidos. En el ejemplo dena en crecimiento. As, la bloquean a nivel que muestra la figura se observa cmo de las A en uno de los dispositivos, de las Ten el ddTIP detiene la sntesis a la altura de las timinas de la cadena en creciel segundo, de las Gen el tercero y de las C en miento. 3. Para la lectura de la secuenel cuarto. El bloqueo se produce porque los cia se desnaturaliza el ADN y se corren 2',3'-didesoxinucletidos carecen de OH en el por electroforesis, sobre distintas calles de un gel de poliacrilamida, las cadenas sitio 3' de sus desoxirribosas, Jo que impide de ADN terminadas en los cuatro tipos que se le unan nuevos nucletidos. Como rede didesoxinucletidos (se muestra ssultado, en cada dispositivo se generan fraglo la correspondiente a la ti mina). mentos de ADN de longitudes crecientes, ya que todos empiezan en un punto com n pero terminan -con el mismo tipo de nucletido- en un sitio diferente. Para leer la secuencia, los fragmentos de ADN de los cuatro dispositivos se vuelven a desnaturalizar y las cadenas nuevas se corren si multneamente en cuatro "calles" de un gel de poliacrilamida, las cuales separan y ordenan a los fragmentos segn sus tamaos. Obviamente, cada calle del gel corresponde a uno de los nucletidos. En la figura 23-1 4 puede verse que los fragmentos de ADN aparecen como bandas verticalmente ordenadas. Finalmente, los fragmentos se revelan por radioautografa y la secuencia del ADN se lee integrando las posiciones de las bandas en las cuatro calles. Por ejemplo, en la figura 23-14 las bandas 30 y 31 se hallan en la calle C (corresponden a dos citosinas sucesivas), la banda 32 se halla en la calle T (corresponde a una timina), la banda 33 se halla en la calle G (corresponde a una guanina) y la banda 34 se halla nuevamente en la calle C (corresponde a otra citosina), de modo que entre las posiciones 30 y 34 la secuencia del ADN es ('('T(if'. 1 ,, '""' """ "1 q11r 1 s!udianl hn n 1 jc rci('io ele kerdid1a ri

-9

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FUNDAMENTOS DEBfOLOGfA CEL ULAR Y MOLECU LAR

23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

42J

70

gura entre las posiciones 30 y 70 y que compare su resultado con la secuencia indicada en la leyenda. Actualmente se util iza una tcnica de secuenciamiento mucho ms rpida que la que se acaba de describir; emplea fragmentos de ADN cuyos ltimos nucletidos son marcados con uno de cuatro colorantes fluorescentes, aplicando un color determinado a cada tipo de nucletido (A, T, G y C). Una vez que el instrumento separa a los fragmentos marcados de acuerdo con su longitud, un rayo lser excita a los colorantes y revela sus posiciones. El resultado es una secuencia de colores que se lee electrnicamente y que corresponde al orden en que se hallan los nucletidos en el ADN. 23- 35. La tcn ica de l ADN recombinante hace posible e l e st ud io del g eno ma

Tabla 23- 1. Secuencias reconocidas por algunas endonucleasas .de restriccin

Nombre Secuencia Extremos libres despus del clivaje Orige11

J,
EcoRI -GAATIC-CTTAAG-

i
J,
Hindfil -AAGCIT-TICGAA-

-G -CTTAA

AATICG-

Eschericltia co/i con el plsndo Rl

..\;
-A - TICGA
1

AGCTTA-

Haemophilus influenzae serotipo D

i
J,
Bam I -GGATCC-CCTAGG-G -CCTAG

..\;
1

GATCCG-

Baci/lus amyloliquefaciens

..\;
-GG -CC CCGGHaemophi/us aegypticus

Flg. 23-14. Gel de poliacrilamida que muestra la secuencia de un fragmento de ADN. ada calle representa a las cadenas de ADN terminadas en uno de los cuatro nucletidos. ( ortesa de W. Bames.) En stc ejemplo la secuencia es:

La secuenciacin de los ADN de los virus, las bacterias, las mi- 40 tocondrias y los cloroplastos es relati vamente sencilla debido a que son molculas de tamao pequeo que pueden obtenerse puras. En cambio, cualquiera de los cromosomas eucariticos nucleares posee una molcula de ADN muy larga y, por lo tanto, mucho ms difcil de estudiar. Este problema se resuelve mediante tcnicas de ADN recombi nante -o de ingeniera gentica-, que emplean segmentos de ADN COI1os, los cuales se insertan en cromosomas circulares bacterianos muy pequeos, denominados plsmidos (cap. 1-5). Posteriormente, una vez que las bacterias se multiplican, la replicacin repetida del plsmido da lugar a numerosos segmentos de ADN idnticos al insertado en el plsmido original. Luego esos segmentos son separados de los plsmidos con diversos fines; por ejemplo, para ser secuenciados mediante las tcnicas descritas en la seccin anterior. 23-36. Las e ndonucl easas de res triccin reconocen en e l ADN secuencias de nucle tidos especificas Las tcnicas del ADN recombinante son posibles gracias a las endonucleasas de restriccin, unas enzimas que reconocen en las molculas de ADN secuencias especficas de nucletidos y las cortan. Asf, cada endonucleasa constituye una especie de bistur molecular que corta al ADN en un lugar determinado. La mayorfa de las clulas procatiotas poseen endonucleasas de restriccin, cuya funcin principal es proteger a las bactelias cuando las invaden ADN forneos. Por lo tanto, si un bacterifago (cap. 1-5) infecta a una bacteria, sta puede destruir al ADN viral mediante las endonucleasas presentes en su protoplasma. El ADN bacteriano no es afectado porque en las bacterias existen enzimas que lo metilan a nivel de las secuencias susceptibles de ser cortadas por las endonucleasas, lo que lo toma invulnerable. La denominacin de las endonucleasas de restriccin procede de los nombres de los microorganismos en que fueron aisladas. Por ejemplo, la Eco Rl es una endonucleasa que se halla en un plsmido de la Escherichia coli llamado RI, que le confiere a la bacteria resistencia a ciertas drogas. Las endonucleasas de restriccin sue len reconocer secuencias que pos en entre cuatro y seis nul'k tldor. (tubla 2 - 1). Las que reconocen cuatro nm;l 6 I " ' AI IN ('llriON (d' trnos -2.~ 0 pans dt hur.oN ), licios produnm ii'III\1110\III H 111i 1111'111 1 q111 lur IJII 1111 111011 1 11 1 11111ln tldorl produn 11 1111 111< 111o1 11 1

J,
Hae/IH -GGCC-CCGG-

..\;

largos (de alrededor de 4.000 pares de bases). Una caracterstica importante de estas secuencias es que son simtricas, es decir, existe un eje de simetra a partir del cual la secuencia se lee igual e n ambas cadenas tanto en la direccin 5' ~3' como en la 3' 5'. Por ejemplo:
5'-G A A-f-TTC -3' 3'- C TT-j-A A G - 5'

30 40 50 tO

CCTGCGTGTA GCGAACTGCG ATGGGCATAC T GTAACCATA

Algunas endonucleasas producen un corte neto en el ADN (vase la endonucleasa Haellll en la tabla 23- 1). Otras, como la Eco RI, producen cortes sesgados, por lo que generan extremos de una sola cadena, los cuales pueden aparearse con otros complementarios (fig. 2)-1 5). As, esos extremos - ll amados " adhesivos"- pueden unirse a cualquier fragmento de ADN cortado por la misma endonucleasa de restriccin, lo cual se aprovecha en algunas reacciones de la ingeniera gentica. 23- 37. Los genes d e las c lul as e uca ri ot as pueden ser introducidos e n pl smidos y clonad os en bacte ria s En la seccin 23-35 se dijo que las bacterias poseen ADN circulares pequeos - los plsmidos- que se replican autnomamente. Entre los pl smidos ms conocidos se encuentran los que poseen genes que les confieren a las bacterias resistencia a los antibiticos. Se dij o tambin que con la ayuda de endonucleasas de restriccin puede incorporarse un fragmento de ADN eucaritico en un plsmido e introducir a ambos en una bacteria para que se multiplique el ADN eucaritico. La combinacin de dos ADN de diferentes procedencias realizada para que uno se multiplique en una clula ajena dio origen a la ingeniera gentica. La figura 23-16 muestra las diferentes etapas compren1 1 1 1111 1 didas en la produccin de un ADN recombinante. El ADN circular del plsmido se corta con una endonucleasa de restriccin, lo cual genera dos extremos de ADN "adhesiFig. 23-15. La endonucleasa Eco Rl reconoce en el ADN una secuencia de cuatro nucletidos. Los astevos" . Dado que se emplea la misma endonucleasa para riscos sealan la presencia de nucletidos metilados, cortar el ADN eucari6tico, en ste se generan segmentos los cuales impide n que esos lugares scnn l:Ortudm: dr AJ)N on < 'XI Il" lllll'l "11dh sivos" idnticos a los del po r cndonu lcasns d r striccifm.

1'

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FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

23 . LOS METODOS DE EST UI) IO 11.N IIIOI.Ot; J\ ("l ' l,l ll .AH

42~

PLASMIDO

ADN A INVESTIGAR

ADN CELULAR

PLASMIDOS

Goo~O
CORTE CON ENDONUCLEASAS resistencia a un antibitico

="=111111 111~
~

LIGAMIENTO CON ADN LIGASA

r'\.

o
~

m ;;~PTT;/1 ""
AD' ' - " " ' " "

Corte con endonucleasas de reslriccin

1
./

1111111 1 ::::IIIIII
~
Ligamiento ~ con ADN ligasa /

0 O Oo 0
lnlroduccin de los plsmidos en bacterias

S:o~~~ante

INTRODUCCION DEL PLASMIDO EN LAS BACTERIAS

Plsmido~Cromosoma
AGREGADO DEL ANTIBIOTICO Y MULTIPLICACION DEL PLASMIDO

bacteriano

Cultivo

Fig. 23-16. Produccin de una molcula de ADN recombinaote mediante ingeniera gentica. (Cortesa de S. Cohcn; modificado.)

plsmido cortado. Como consecuencia, ambos ADN -el del plsmido y el de la clula eucariota- se adhieren a travs de sus extremos, unin que se completa con la ayuda de la ADN ligasa. Luego el plsmido con el ADN recombinante se introduce en bacterias con la simple maniobra de colocar a ambos en una solucin de cloruro de calcio (fig. 23-16). Debido a la funcin que desempea, el plsmido recibe el nombre de vector. A continuacin se agregan antibiticos a fin de eliminar a las bacterias que no incorporaron el plsmido. Veamos un ejemplo: si el plsmido contiene un gen que confiere resistencia a la tetraciclina, el agregado de este antibitico hace que sobrevivan nicamente las bacterias cuyos plsmidos poseen el gen. Una vez que se seleccionan las bacterias deseadas, stas se reproducen y se consiguen millones de copias del ADN eucaritico incorporado al plsmido (fig. 23-16). Debido a que todas las copias del ADN provienen de una so la, la tcnica se denomina clonacin de fragmentos de ADN o clonacin d e genes.
23-38. Pueden emplearse otras clases de vectores pa ra clonar fragmentos de ADN

Colonias de bacterias

Fig. 23-17. Etapas de la formacin de una "biblioteca de genes" o genoteca. (Cortesa de A. Blanco.)

Otros vectores que se emplean para la clonacin de fragme ntos de ADN son los cromosomas artificiales de levaduras o YAC (por yeast artificial chromosomes), que contienen secuencias centromricas y telomricas y una secuencia ARS. Como se vio en Jos captulos 12-6 y 17-4, esta ltima se relaciona con los orgenes de replicacin.
23-39. Las tecnicas de ingeniera genetica han permitido construir "bibliotecas de genes" de clulas eucariotas

Para conseguir la clonacin de fragmentos de ADN no slo se emplea n plsmidos como vectores. Otro vector usado es el bacterifago lambda, qu adems pudo ser construido in vil ro mezclando el ADN del virus con sus pro tenas. As se han construido baeteriragos que puede n accpla r ills<.:rt:i<>II<'S d<" ADN for{ln eos <.l e l.'i.OOO a 20.000 1111 h- >lidos. l.os plils11rido:: '(lit ' un pl ll ll 111<>1 'C III!I S d t i\I)N 1!111 lm i l.~ "11" >q>lic 1111 IIIIIY ptll"l;, cl t 1 d1 f 111 V<' III II JII ele Ju
ltlll 'k
1 t

La localizacin, separacin y multiplicacin de un gen en la clula eucariota puede conseguirse siguiendo los pasos mostrados en la figura 23-17. El proceso comienza con el aislamiento del ADN de varias clulas, que al ser digerido con en zimas de restriccin genera una enorme cantidad de segmentos cortos de ADN, llamados fragmentos de r est r iccin. Medi ante el procedimiento indicado en la seccin 23-37 tales fragmentos son incorporados a vectores - plsmidos, por ej emplo-, de modo que cada vector recibe uno de Jos fragmentos. Luego los vectores con sus fragmentos de restricci n se introducen en bacterias, las cuales son sembradas en medios de cultivo. La multiplicacin de cada bacteria genera una colonia separada de las dems, de modo que en los cultivos se forman miles de colonias. Como conse-

cuencia, cada coloni_a resulta habitada por un clon de bacterias que desciendcll de un anc slrn nn11n. Como es obvio, cada clan contiene un fragmento
tk
H 'S fl i n i ( HI

i ti ~ 't ~

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IIf t

426

FUNDAMENTOS DE BIOLOG!A CELULAR Y MOLECULAR

23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

427

La coleccin de estos clones, cuyo conjunto posee la totalidad del ADN de las clulas investigadas, se conoce con el nombre de "biblioteca de genes" o genoteca. El fragmento de ADN buscado se encuentra en uno de los "ejemplares" de la biblioteca.

~
Rplica del cultivo en papel de nitrocelulosa

Cultivo de clones de bacterias que contienen genes diferentes

23-40. Se usan sondas de ADNc para localizar la colonia de bacterias que contiene el fragmento de ADN que se desea aislar
La tcnica ms usada para individualizar el clon de bacterias que contiene el ADN que se desea hallar se resume en la figura 23-18. Primero se coloca un papel de nitrocelulosa sobre el cultivo sembrado con las colonias de bacterias para que stas se transfieran al papel y se forme una rplica del cultivo. A continuacin las bacterias se lisan y sus ADN se desnaturalizan mediante calor (seccin 23-33). Este procedimiento no altera la posicin de los ADN, que siguen en el papel de nitrocelulosa en los mismos lugares que ocuparan las colonias bacterianas. La rplica en el papel de nitrocelulosa se incuba con una sonda de ADN radiactivo complementario (ADNc) del segmento de ADN que se desea hallar. El lento enfriamiento del papel hace que el ADNc radiacti vo se hibride con el segmento de ADN buscado. El prximo paso consiste en colocar sobre el papel de nitrocelulosa una pelcula fotogrfica en la que quede impresa - por radioautografa- la posicin de ese segmento de ADN. Este dato, al confrontarse la pelcula con el cultivo, permite identificar la posicin de la colonia portadora del ADN. Si la colonia se resiembra en nuevos medios de cultivo se consigue un nmero creciente de bacterias y, por ende, grandes cantidades del ADN. Para su estudio (su secuenciacin, por ejemplo) se lo debe extraer de los vectores mediante endonucleasas de restriccin, previa lisis de las bacterias. Debe sealarse que las sondas de ADN complementario (ADNc) se obtienen a partir de molculas de ARN tomadas de clulas que las fabrican en gran cantidad. Estos ARN sirven de moldes para la construccin de los ADNc, los cuales se si ntetizan mediante la enzima transcriptasa inversa. La radiactividad del ADNc se obtiene empleando desoxirribonuclesidos trifosfato marcados con np, Las sondas de ADNc pueden tambin construirse teniendo en cuenta el orden de los aminocidos en las protenas codificadas por los genes que se desea identificar.

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Usado de las bacterias y desnaturalizacin del ADN

Adicin de la sonda de ADNc radiactivo

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Hibridacin

23-41. Los f ragmentos de restriccin pueden ser se parados por e lectrofo resis y detectados po r e l mtodo de tra nsfe re ncia del AD N
Los fragmentos de restriccin pueden ser separados por electroforesis en una placa de gel de agarosa sobre la base de sus tamaos (fig. 23-19), lo cual posibilita la localizacin de uno de ellos. Se comienza tratando al gel con una solucin alcalina que desnaturalice las molculas de ADN, es decir, separ sus dos cadenas. Con el objeto de facilitar la manipulacin de las bandas el el: troforticas (invisibles para el investigador), stas son transferidas a un fillro de nitrocelulosa. Para ello se coloca el gel sobre varias hojas de papel emhc bidas en solucin fisiolgica, se aplica el filtro de nitrocelulosa sobre el gd y sobre el filtro se ponen varias hojas secas de papel absorbente. La solu;i "' salina asciende por capilaridad desde las hojas empapadas ha ia las s ;: 1.~ arrastra a los fragmentos d ADN contenidos en las bandas <kl gl'l , las < 'llll les son lransf ridas al filt1n tlr 11itronlulosa sin '1'!1' :uuhi.- u la:. pn:dcinlll'l' 1[11(' ,,.11fau c11 ,, 1

Radioautografa El gen buscado se halla en la colonia representada en amarillo

Fig. 23-18. T cnica para individualizar el clon de baclerias portador del fragmento d e ADN que se desea obtener. (Cortesa de A. Blanco.)

El filtro -separado del gel y de los papeles usados para la transferencia del ADN- se trata con una sonda radiactiva de ADNc marcada con 32P, especfica para el segmento de ADN que interesa localizar. Tras la hibridacin de este ADN con el ADNc, el filtro se aplica sobre una pelcula fotogrfica d 1110do que In hmulu " laNbandas que contienen el ADN queden imprcsus

428

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLEC ULAR

23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

429

en la pelcula (radioautografa). Para localizar a los fragmentos de ADN en el gel de agarosa, bastar confrontar el gel con la pelcula. La transferencia del ADN desde el gel de agarosa al filtro de nitrocelulosa lleva el nombre de Southern blotting, en parte por su significado literal (blotting, transferencia) y en parte como homenaje al creador del mtodo, E. M. Southem. Debe agregarse que existen tcnicas semejantes para transferir ARN y protenas, designadas -no sin cierto humor- Northem blotting y Westem blotting, respectivamente.
23-42. La reacci n en cadena de la polimerasa (PCR) permite conseguir grandes cantidades de un fragmento de ADN en poco t iempo

ADN celular

Corte del AON con endonucleasas de restriccin

Separacin de los fragmentos de restriccin por electroforesis en una placa de gel de agarosa

Hemos visto que las tcnicas de clonacin permiten conseguir grandes cantidades de un fragmento determi nado de ADN. No obstante, esas tcnicas estn siendo reemplazadas por una metodologa relativamente nueva -denominada reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)- , que es un sistema de amplificacin in vitro del ADN por el que pueden conseguirse en pocas horas grandes cantidades de un gen (o de una parte de l) a partir de muy poco ADN, incluso el de una sola clula. Con esta tcnica se evita el uso de endooucleasas de restriccin y no es necesario recurrir a una genoteca ni construir molculas de ADN recombinante. El procedimiento se ilustra en la figura 23-20. El ADN de la clula se desnaturaliza por calentam iento y se agregan al medio dos clases de oligonucletidos cebadores, complementarios de las secuencias situadas en los extremos del tramo de ADN que se desea amplificar. Una vez que Jos cebadores han encontrado las secuencias complementarias en medio de todo el ADN celular, se unen a ellas (hibridacin), Jo cual es posible porque se hace descender la temperatura del medio. Seguidamente se fabrican las cadenas hijas a partir de los extremos 3' de Jos cebadores, sntesis que es catalizada por una ADN polimerasa especial - extrada de la bacteria Thermus aquaticu~~, resistente a la temperatura usada durante la desnaturalizacin. Junto con la enzima se agregan cantidades suficientes de los cuatro desoxirribonuclesidos trifosfato que componen el ADN. Al concluir el proceso se obtienen dos fragmentos de ADN a partir de uno. Puesto que la misma operacin se repite en cada fragmento duplicado, al cabo del segundo ciclo se obtienen cuatro de esos fragmentos, y as sucesivamente en los ciclos venideros, por lo que el ADN se amplifica en forma exponencial.
23- 43. La tcnica de .hibridacin in situ de cidos nucl eicos posibilita el mapeo gentico

Desnaturalizacin del ADN mediante una solucin alcalina

Los fragmentos de ADN son transferidos del gel a un filtro de nitrocelulosa

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Se retira el filtro de nitrocelulosa y se hibrida el ADN con una sonda radiactiva de ADNc

El filtro de nitrocelulosa se coloca sobre pelcula fotogrfica

Radioautografa Las bandas que contienen los ADN buscados quedan impresas en la pelcula

Fi g. 23-19. Separacin de Jos fragmentos de restriccin mediante la tcnica de transferencia de ADN denominada Southern blotling.

Muchos genes pueden ser detectados directamente en los lugares que ocupan en los cromosomas mediante el mtodo de hibridacin in situ. El exp rimento consiste en la hibridacin del gen que se desea detectar con un ADN complementario, el cual debe llevar un marcador para que pueda ser idenlil"i cado en el tejido o en el extendido. Cuando el marcador es fluoresccnt~:, la tcnica se denomina FISH (porjluorescen.t in situ hybridization). Esta tcnica permiti localizar un gran nmero d~: gcn~:s Juuuauos: poo ejemplo, el gen del ARNr 45S '11 las ouslri ' ionl's s~' "'"'"' ius " " los ,.,. lllOSOIIHIS 13, 14, l . , 2 1 y ~'' (1-u p . 1 1 K) y l'i gen tkl i\ l~N o . 1111 ,, t'Xfli 11110
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ANALISIS DE LA FUNCION DE LOS GENES

23- 44. Una tcnica creada recientemente permite estudiar la funcin de los genes

Entre los 3 x 109 pares de nucletidos del genoma humano hay alrededor de 30.000 genes que codifican protenas, pero las funciones de la mayora - es decir, qu protenas codifican los distintos genes- an se ignoran. No obstante, gracias a una nueva e ingeniosa tcnica ahora es posible estudiar las runciou:: ,,. 1111 1111111 \' l'<l .,. cicnte de genes, lo cual se logra sin ncccsidnd ck 111 .111 ipul nh d111 111 1111 1111' , t11:111 iohra que s c 1fa
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430

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECl'LAR

23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGIA CELULAR

431

La tcnica se basa en un fenmeno biolgico denominado interferencia del ARN (en ingls, RNA interference o RNA i), que en clulas de plantas y de animales invertebrados provoca el silenciamiento postranscripcional de genes mediante la destruccin de sus ARNm . Para ello intervienen unos ARN especficos de 21 a 23 nucletidos llamados ARN pequeos de inter ferencia o ARNpi (en ingls, small intetfering RNA o siRNA ), los cuales se aparean totalmente - es decir, a travs de todas sus bases- con un tramo complementario de sus respectivos ARNm. Finalmente, stos se destruyen con la ayuda del RISC (por RNA -induced silencing cmnplex), un complejo proteico qu e es activado por los propios ARNpi. Los ARNpi -presentes como se dijo slo en clulas de plantas y de animales invertebrados- derivan de genes que contienen repeticiones invertidas (cap. 17-24). Estos generan transcriptos primarios relativamente largos que incluyen varios pares de secuencias complementarias de corta longitud. Dado que en cada transcripto las secuencias complementarias se aparean entre s, se forman molculas de AR N en las que alternan segmentos de ARN dobles con segmentos de ARN simples (fig . 23-21 ). Por otra parte, cuando ciertos virus infectan a las clulas de los animales y plantas mencionados, la duplicacin del ARN viral genera en sus citoplasmas molculas de ARN con alternancias similares. Cualquiera que sea el origen de tales ARN, a continuacin la endonucleasa citoplasmtica Dicer (cap. 15-13) escinde sus segmentos dobles y los convierte en ARNpi, los cuales conservan su condicin de molculas dobles (fig. 23-21). El proceso finaliza cuando cada ARNpi se aparea con su correspondiente ARNm y lo destruye. Lgicamente, si se trata de una infeccin viral, el ARN que se destruye es el del virus, cuya supervivencia es por Jo tanto interrumpida y la infeccin superada. Volviendo a la tcnica creada para estudiar la funcin de los genes, puede emplearse en cualquier especie -incluida la humana- y requiere que el ARJ.'Ipi se sintetice in vitro y se inyecte en las clulas mediante vectores especiales. Finalmente, una vez destruido el ARNm del gen cuya funcin se desea estudiar, sta se deduce por los trastornos que acarrea la ausencia de la protena derivada del gen silenciado. Es oportuno sealar que por su gran especificidad, la tcnica basada en la interferencia del ARN, adems de permitir el estudio de la funcin de los genes podra convertirse en una herramienta promisoria para curar enfermedades. Por ejemplo, dado que durante la hepatitis no habra dificultades para introducir en las clulas hepticas el ARNpi que silencia al gen de la protena Fas (cap. 22-5), se lograra evitar la muerte de esas clulas, una de las complicaciones ms temidas de la enfermedad. Por otro lado, si con la ayuda de ARNpi especficos se consiguiera silenciar la actividad de genes relacionados con la divisin celular, se podra detener el avance del cncer. Concluida la descripcin de los ARNpi, es oportuno hacer algunas consideraciones sobre otros ARN pequeos -los microARN o miARN- , que como se mencion en el captulo 13-2 se encuentran en el citoplasma ele las clulas humanas. Agreguemos que se hallan tambin en las clulas ele las d ms especies y que los aspectos ms importantes de sus genes y de la fonna cin y el procesamiento de sus transcriptos primarios se desc riben en los ~_: ptulos 13-12, 14-19 y 15- 13 , r spcct iv amcnfc.
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23. LOS METODOS DE ESTUDIO EN B!OLOGIA CELULAR

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Fig. 23-21. A lte rn anc ia de segmentos dobles y simples en los ARN precursores de los ARNpi. La tije ra re presenta a la endonucleasa Diccr.

son capaces de silenciar genes mediante el fenmeno de interferencia del ARN. Ello se fundam enta en las semejanzas que los miARN guardan con Jos ARNpi, particularmenle las siguientes: l) Sus largos son casi idnticos, ya que Jos ARNpi poseen 21 a 23 nucletidos y los miARN tienen 21. 2) Ambos se originan a partir de ARN dobles, los cuales derivan de la transcripci n de genes que poseen repeticiones inverlidas. 3) Una misma endon ucleasa citoplasmtica - la Dicer- corta tanto a Jos transcriptos primarios de los ARNpi como a los de los miARN. Junto con estas semejanzas existen tambin diferencias. A continuacin se mencionan las ms importantes: 1) Los lranscriplos primarios de los ARNpi son relativamente largos y al cabo de sus procesamientos conti enen segmentos de ARN dobles alternados co n segmentos de ARN simples (fig. 23-2 1). En cambio, los transcriptos primarios de los miARN se componen de aproximadamente 70 nucletidos y adquieren forma de horquilla (cap. 15- 13) (fig. 15- 12) 2) Los ARNpi son dobles, a diferencia de los miARN, que son cidos nucleicos simples. 3) Los ARNpi se aparean totalmente con las secuencias complementarias de los ARNm, mientras que los miARN lo hacen slo parcialmente. 4) Cuando los ARNpi se aparean con los ARNm, los desttuyen, para lo cual se asocian con el complejo proteico RISC. Por su parte, los miARN detienen la traduccin de los ARNm en el ribosoma, de modo que no llevan a cabo el fenmeno de interferencia del ARN. No obstante, a raz de un creciente nmero de excepciones descubiertas por distintos equipos de investigacin, esa incapacidad de los miARN es ahora cuestionada, ya que en varias especies se descubri que existen ARNpi dt: cadena simple similares a Jos miARN, y que muchos miARN se comportau como los ARNpi , pues se aparean totalmente con las secuencias complemeu tarias de sus respectivos ARNm, se asocian con el complejo RISC y no d tienen la traduccin de los ARNm sino que Jos destruyen. Cabe sealar que a pesar de las semejanzas entre los miARN y los ARNpi y de las excepciones que se acaban de mencionar, no se sabe si los mil\!< N rk los mamferos participan en pisodios rk in! rrcrencia dcl 1\R N, ya q ue l'll lw. ARNtn de sos ani111a ks i ii tl ur1 :lt' rltt 'lllll l': ll'lltl Sl'L"IIl'ttri:ts lol :liltll'tl li' rrll tiJlll ' rmnlar ias a l:rs d<' los uri !\I{N 1'11 ""'' '' " '' 11\'iil. IJ:hl !l J kd 111 1111 :11' h.llllll
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lndice alfabtico

A2:ll87,61 ABC. 66, 67, 134. 140 Aberraciones cromosmicas, 3 13, 355, 370, 371 . 373, 375 Abl. JJS. 339 ABO. siSielll< l. 55 .1\BP. 97 Ahrazadcra dcslizamc. 306. 308, 337 A.C. V. lt.denilala cicla.w Acelil CoA. 163. 168 Acclilcolina . 20 1
N-Acclilgalactosamina, 28 N-Acetilg.lucos~mina. 28

Accli lo. 163. 164. 168

Acido(s). N -acetlneuramnico,

V. Acido silico dcsoxirribo nucleico, V. AON fosfatdico, 31. 126, 128,358 fosfrico. 24 glucurnico, 27 grasos, 3 1, 126, 162, 164, 174 ~-oxidacin de los, 164, 166, 168, 193. 194 hial urnico, 29, 109, 356,357, 358 idurnico, 28 lctico, 174 nucleicos, 21, 23 retinoico, 200, 387 ribonucleico, V. ARN silico, 28, 33 Acil CoA, 126 Acon.itasa, 294, 296 Acrosina, 357, 359 Acroso ma, 356, 357, 358 Actina, filamentos de, 12, 77, 92, 97, 101, 104. 108, 116,283, 330, 335 corticales, 92. 93 transcelulares, 92, 94, 95 G, 92,98 a-Actin.ina, 94, 95, 106, 116 Activaci n por precursor, 267 Acti vador, 250 Activina, 387 Acuaporina, 61 Adaptacin inducida, 199 Adaptina, 153, 155 Adenilato ciclasa, 208, 209, 357 Adenina, 24 Adcnosina, 25

ADN, 16, 23, 25,225.227,247, 299 circular. 25, 166, 176, 19 1 contenido de, 322, 344 de los cloroplastos, 19 1 desnaiUra lizaci n, 420, 421, 426 espaciador, 228, 243, 244, 275 hipervariable, 227 rnetilacin del, 258 mitocond1 ial, 176 mutacin del, V. A1utacin del AON recombinante, 422, 423 repardcin del, V Reparacin del ADN repetitivo. 226,318 disperso, 227,319 dispuesto en landas, 226 de los telmeros, 227 replicacin del, V. Replicaci11 del AON satlite, 226, 231, 327 secuenciamiento del, 420 sonda de, 426 surco mayor del, 26, 254 surco meno r del, 26, 254 1ranscripcin del, V. Transcripcin dei AON transferencia del, 426 transposicin del , V. Transposicin deiADN ADN ligasa, 306,308,3 10,316,317 ADN polimerasa(s), 300, 421 a, 306.308
~.306,308,3 1 7

. 306. 308
ADN primasa, 305, 306, 310 ADP, 24, 159, 167, 171, 187 Adrenalina, 21 1, 2 13 Aducina, 108 Agua, 21, 22, 57, 172 AIF, 395 Alelo, 366 Aleurona, granos de, 157 Almidn, 29, 18 1, 185 Alteraciones funcionales, 314 Alu, 227, 319 Alzheimer, e nfermedad de, 86 a-Amanitina, 250 Amiloplastos, 181 Aminocidos, 35, 162. 165, 174, 240,

AIW, 93, l)H

Aclhcs il'ln clular, 11 1, 1 H.
l 'lll

281. 283
1 Aoninuac ii-AR NI, 2H 2, 2H~ . H 1, 2111

Aminoacii-ARNt sintctasa. 285 Amniocentesis, 373 AMP, 24,21 0 AMPc, 67, 208,209,265, 357, 358 AMP cclico, Y. AMPe Anafase. 18, 323. 325. 329 1, 329, 352 Il,329,353 Aneuploidas. 370. 373 Antimixis, 362 Angelman, sndrome de. 260 Anillo contrctil, 10 1, 330 Anin superxido. 194, 398 ANP, V. Pptido IWiriurfico auricular Anquirina, 93, 108 Amena, 186, 187 Antibiticos, 292 Anticodn, 282, 285 Anticuerpos, 145 Antgenos, 206 Antimonio, 67 Apaf-1, 395 Apareamiento, 345, 347 apc, 339 APC, 335 Apoptosis, 393, 394 Apurin izacin, 3 15,317 ARF, 15 1, 152, ARN, 16, 23, 26, 219, 247 heterogneo nuclear, V. ARNhn de inactivacin del cromosoma X, V. ARNxist mensajero, V. ARNm pequeo(s), citoslico, Y. ARNpc de interferencia, Y. ARNpi nuclear, Y. ARNpn nucleolar, Y. ARNpno procesamiento del, V. Procesamiento del ARN ribosmico, V. ARNr sntesis del, V. Transcripcin delADN de la te lomerasa, V. ARNte de transferencia, V. ARNt ARN po1imerasa(s), 247, 248, 250, 265 !, 250, 261 Il, 250,262 lll, 250, 26 1, 262 ARNhn, 251 ARNm, 26. 166. 176. 23R, 24 1, 250, ~ l . (,'). XI

436

FUNDAMENTOS DE BIOLOGJA CELULAR Y MOLECULAR

INDICE ALFABETICO

437

cortes y empalmes en el, V. Cortes y empolmes en el ARNm me ti !acin del , V. Metilacin deiARNm poliadenilacin del, V. Poliadenilacin del ARNm policistrnico, 263 traduccin de l, V. Traduccin delARNm ARNpc. 131,238,244,262,279 ARNpi, 430, 432 ARNpn, 238, 244, 262, 272, 279 ARNpno, 239, 244, 262 ARNr, 26, 166, 176,238,243 SS, 243,244,26 1,278 45S,233,243,261,275,276 ARNt, 26, 166, 176, 238, 244, 262, 278, 28 1 ARNt(i), 286 ARNte, 239, 245. 262,279, 3 10 ARNxist, 239, 245, 258, 262, 279 Arp2/3, 98, 99 Arrestina, 209 ARS, 226, 303, 425 Arteriosclerosis, 155 Asa, anticodo., 284 D, 284 T, 284 variable, 284 AS F, 274 Astrotacti na, 100 ATP, 24, 92, 105, 126, 128, 159, 164, 167, 168, 171 , 173, 186, 187, 189,291 ATP-ADP translocasa, 171 ATPasa, 172 ATP sintasa, 66, 167, 17 1, 176, 187, 188 Autofagia, 140, 148 Autofagosoma, 140, 148, 195 Antosomas, 232 Auttrofos, organismos, 4 Axn, 99, 139 Axonema, 86, 88, 90, 91 AZT, 67

electrognica, 64
de H', 66, 141, 146, 17 1

de Kw. 65 de Na K+, 63, 64, 65, 66 protnica, 141 , 143, 144 Borde/ella pertu.uis, 21 2 Burbuja, de replicacin, 303 de transcripcin, 247, 250

Bacteria, 5, 263, 292 Bacterifago, 7, 422, 424 Bad, 395 Balsas lipdicas, 156 Banda, 3, 108 4 .1, 108 A, 103 H, 103 !, 103 Bandeado cromosmico, 234, 3 12 Barra terminal , V Cinturn adhesivo Bases nitrogenadas, 24 Bcl-2, 338, 395, 398 bcr, 339 Biblioteca de genes, 426 Bicapa lipdica, 49, 56, 57 Bio psia de vellosidades corinicas, 373 Bivalente, 348 Blastocisto, 333, 383 8 lasroporo, 385 BMP4, 1H7 Bcuuhn, clt ( 'u 2', (,(,, .._ 1\

CAAT, 241 Cadena, respiratoria, 164. 167 tra nsportadora de electrones, V. Cadena respiraroria Cadherina, 94, 114, 1 16 CAF- 1, 313 Caja homctica, 392 Calcio, 66, 105, 118, 140, 156, 166, 174, 2 14, 2 15,357, 358, 361,395 Calcitonina, 275 Calmodulina, 105, 2 14 CAM, I1 4 Cmbium, 68 Canal inico, 56, 58, 59, 67 depe ndiente de liga ndo, 60 dependiente de voltaje, 60 Cncer, 66, 194, 310,314,337.338, 339,376,398 cap (capuchn), 269, 283 CAP, 265 Cpside, 7 Caps mero, 7 Cardiolipina, V. Difo.ifatidilglicerol Cardio tnicos, 64 Carioplasto, 380 Carioteca, V. Envoltura nuclear Cariotipo, 23 1, 232, 313, 370 en primates, 377 Caroteno, 186 Carotenoide. 181. 183, 186 Casena, 295 Caspasa 3, 395, 397 Caspasa 8, 397 Caspasa 9, 395, 397 Caspasas. 393 Catalasa, 193, 194 Catastrofina, 84 Catenina. 94, 11 6 Caveolas, 156 CaveoJinas, 156 CBP, 212, 283, 288 Cdc2, 333, 334 Cdc6p, 303 Cdc42, 98 Cdk2,333,334,337 Cebador, 305,306.3 10,421, 428 Clula(s), 1 animal. 10, 321 blanco, 197 diploide, 227, 322, 341 eucariota, 3, 8, 45 gemunati vas, V Clulas sexuales glial radial, 100 haploide, 227. 34 1 HeLa , 380.4 12 hli ... VO, V, ('i8olo
1, l'llf(.ruwdnd dt, 1 IH, 1 PI
iudul'idu, IIJ / , IHf

inductora, 197, 386 muscular, cardaca, 107 estriada, 72. 102, 174, 2 11 lisa, 107 origen de la, 43 ovular, 363 procariota, 3, 5, 45, 263 sexuales, 18, 259, 341, 342, 344, 355 somticas, 16,227,333, 341,342 totipotente, 385 vegetal, 9, 14, 68,119, 157,18 1, 195 , 332, 363 Celulosa, 29 CENP, 328 Centrolos. 12, 81, 89, 9 1. 324, 326, 363 Centro de reaccin, 187 Centrmero, 225, 232, 327 Centrosoma, 12, 8 1, 89, 9 1, 323, 326, 328 Ceramida, 32, 129 Ce rebrsido, 32, 54 CF, 27 1 CFTR, 67 CG, V. Regin CG CGRP, 275 Chaperonas. 73, 74, 134, 147, 178, 200' 224 ' 294 Chaperonina, 74 CHIP,6 1 Ciclina(s), 333 0 1, 333,334 M, 333, 334 Ciclo, del C 3, V. Ciclo de Calvitt del e,, 190 de Calvin, 189, 190 celular, 16,299, 321, 384 control del. 333 del glioxilato, 195 de Krebs, 163, 164, 166, 168, 194 Ciclosoma, 335 Cigonema, 345 Cigoto, 14, 16, 18.321,333, 341, 344. 357. 362. 364, 381' 382, 390 Ci liog~nesis, 91 Cilios, 86, 91 Cinetocoro, 324, 327 Cinetosoma, 86 Cintur n adhesivo, 94, 116 Citidina, 25 Citocalasina B, 93, 380 Citocinesis, 18, 323, 326, 330 Citocromo, e, 167, 170, 395 P450, 141, 175 Citocromo oxidasa, 167, 170, 176 Citoesqueleto, 12, 77, 393 Citofotometna, 414 Citogentica, 365, 376 Ci!ometria de flujo, 41 7 Citomusculatura, 77 Citoplasma. 8, JI . 7 1 Citoplasto, 380 C itoqucratinas, 79 C itoqufmica. 4 12 C'itoquinas. 20(, ('ilosina, ti
( 'lt o::ol,

J 1,

/ 1, l t)
1

( 'htl1 1 uu, V. ( ,,,.,Ir/ ,J

lnt1l11o

Claudina, 115 Clivaje, V. Segmentacin del cigoto Clon de bacterias, 424, 425 Clo nacin, de fragmentos de ADN, V. Clonacin de genes de genes, 424 de mamferos, 380 C loranfenicol. 292 Clorofila, 14, 181, 184, 185, 186 C loroplas to, 14, 18 1, 182 biognesis, 190 envoltura del, 183 origen, 192 C1oroquina, 67 Coacervado, 45 Coatmero, V Cubierta de coatmero Codificador, 240, 242, 243, 244, 245, 263 Cdigo gentico, 25, 177, 240, 28 1 degeneracin del, 240 Cdigo his tnico, 258 Codominancia, 367 Codn(es), 177, 240, 28 1 de iniciacin, 282, 289 de terminac in, 240, 286, 292 Coenzima(s), 4 1 A. 126, 163, 166 Cohesina, 299, 335 Colgeno, 95, 110, 111 Colcemid, 84 Colchicina, 84 Clera, 213 Colesterol, 34, 48, 49, 129. 155, 174 Coloracin, 404 negativa, 408 Complejo, b-e,. 167, 170, 176 b-f, 187 del poro, 221, 330 sinaptonmico, 345, 349 Comunicacin intercelular. 197 Condensina, 229 Condroitinsulfato, 29, 109 Co nexina, 117 Conexn, 11 7 Congelacin-desecacin, 403 Congelacin-fractura, 408 Congelacin-grabado, 408 Cono de c recimiento, 100 Constriccin, primaria, V. Centrmero secundar ia, 233 Contacto focal, 95, 99, 11 2 Contratransporte, 62, 65 COP, V. Cubierta de COP COPI, 149, 150 COPI!, 149, 150 Cordina, 387 Corona radian le, 356, 357, 358 Correpresor, 266 Corte de materiales, 271 Cones y empalmes en el ARNm. 27 1 regulacin de los, 274 Cotranspone, 62 CPSF, 270 CRE, 212 CREB, 212 Cremallera de leucina, 256 CREST, 327 Crestas mitocondriales, V Mtocondra C riofractura. V. Congelacin-fractura

Cristato, 404 Cromtidas, 18, 232, 299, 323, 325, 345,348 Cromatina, 16. 225, 256, 299, 393 enrollamiento, 227.256,312, 323, 335 lazos de, 229, 302 satlite, V Satlite sexual, V. Cuerpo de Barr Cromatograffa. 4 18 Cromatosoma, 228 Crommero, 350 Cromoplastos, 181 Cromoprotenas, 35 Cromosoma(s), 6, 16,219,225,227, 299.322,325,328, 341, 372 acrocntr ico, 23 1, 233, 325 artificiales de levaduras, V YAC bac1 eriano. 6 en cepillo, V. Cromosomas plumulados Filadelfia, 376 homlogos, 16, 18, 341 , 345 metacntrico, 233, 325 papel en la evolucin, 376 plumulados, 350 sexuales, 227, 232, 374 submetacntrico, 233, 325 Crossingover, V. Recombinacin. gentica CSF, 394 CSTF, 271 CTP, 25 Cubierta de clatrina, 149, 150, 152, 155 de coatmero. 150 de COl', 149, 150 Cuerpo, de Barr, 23 1,258,279,312 apopttico, 394 basal, 86, 89,9 1 intermedio, 326, 328, 330 polar, 352, 353 prolamelar, 190 proteico, 157 residual, 147 Cultivo celular, 100, 411 de lnea establecida, 412 primario, 412 secundario. 412

DeleJTninantes citoplasmticos, 383 Diacilglicerol (DAG), 30, 126, IZZ, 208,213, 2 15,358,362 Diacinesis, 351 Dicer, 279, 432 Dictiosoma, 124 Diferenciacin celular, 379 Difosfatidilglicerol, 32, 49. 167, 176 Difraccin de rayos X, 3, 411 Difusi n, facilitada , 56, 58 simple, 56, 57 Dig itoxina, 64 Dihidrouridina. 278 Dmeros de timina, 31 5,3 17 Dinamina, 85, 100, 150 Dinactina, 84 Dinena. 84, 88, 327. 357 Diploide, 16, 342, 344 Diplonema, 349, 355 Diplosoma, 81, 326 Disacridos, 28 Disco, imagina!, 390 intercalar, 107 Z, 103 Disoma uniparental, 260 Distrofia muscular, 106 Disrrofina, 106 Distroglicano, 106 Divisin celular, 14, 16,313,321 ,336 Dogma central de la biologa celular, 23 Dolicol fosfato, 34, 50, 134 Dominio, intercromosmico, 234 de muerte, 396 Dorsalina, 387 Down, sndrome de, 355, 373, 375 Drosophila melanogaster, 203. 3 18, 368,379,390 Duplicacin gentica. 3 19, 371, 372

DAG, V. Diacilglicerol Dalton, 3 dcc, 339 DE, 360 Dedos de cinc, 256 Deleci n. 3 13,371 Denudacin, 358 Derrnatansulfato, 29, 109 Desarninacin, 3 15, 3 17 Descarboxilacin oxidativa, 163, 166, 168 Desmina, 78, 80, 106, 107 Desmocolina, 11 6 Desmoglena, 116 Desmoplaguina, 117 Desmosoma, 107, 116 Desoxirribosa, 24, 27 Destoxificaci6n, 14 1, 193, 194 Determinacin, 388

El , 76 E2, 76 E3, 76 Eco Rl, 422 Ectodermo, 383 Edwards, sndrome de, 374 EF, 289 EGF, 204, 336, 338 Electroforesis, 40, 418, 426 Elongina, 25 1 Embrin, 382, 385 Encaje inducido, 4 1, 199 Encuadre, 282, 3 14 Endocitosis, 139, 14 1, 143, 153, !55 Endoderrno,383 Endonucleasa de restriccin, 422 Endosoma, 13, 121, 124, 139, 141 , 144, 145 primario, 144 secundario, 144, 148 Endosperrna, 364 Energa protonicomotora, 171, 174, 188 Enfoque isoelctrico, 418 Enlace, N-glicosdico, V Unin N 0-glicosdico, V. Unin O Envejecimiento celular, 310 Envoltura nuclear, 13, 16, 219, 220, 324,330,335,393 Enzimas, 22. 40. 43. 162.41 3

438

FUNDAMENTOS DE B!OLOGI A CELULAR Y MOLEC ULAR IN DICE ALFA BET1CO 8

439

erb, 338 eRF. 292 Eritromicina, 292 Eritropoyetina, 206, 336 ERK, 205 Escherichia coli, 5, 25, 263, 266, 31 8, 422 Esclerodermia, 327 Esfingofosfolpido, 32, 129 Esfngomiclina, 32, 49, 129, 148 Esfngosina, 32, 129 Espacio, intermembranoso, V. MiLocondria pcritluclear, 220 tilacoide, 183 Espectrina, 93, 101, 107 Espermtide, 344, 353 Espermatocito, 344, 352 Espenn:ttognesis, 34 1 Espermatogonio, 344 Espermatozoide, 86, 2 12, 227, 341, 353, 356, 362 capacitacin, 357 hipcractivacin, 357, 358, 359
madur<1ci6n, 357

Ferredoxina, 187 Ferritina, 115, 294 Fes, 338 PGF, 204, 336, 387 Fibras, del sler, 325, 326, 33 1 cinetocricas. 325 colgenas, 95, 99. 110, 111, 11 2 polares, 325, 330 tensoras, 95, 107 Fibronecti na, 95, 99, 11O, 111, 1 12 Fibrosis qufstica, 67
Ficocianina, 18 J
Ficoerilrin a, 18 1

Fragmentoplasto, 332 Fragmentos, de Okazak, 305. 306 de restriccin. 425, 426 FRAP, 53 Fructosa. 27 Fucosa, 27 Fusi n, 359 celular, 381 Fusgenos, agentes, 53

Fijadores, 402 Pilagrina, 79

Filamentos, Ue actin a, V Actina

Espliccosoma, 272 Esteroides, 34, 14 1, 174 Estre ptomicina, 292 Estroma, 183, 189 Etiolacin, 190 Etioplasto, 190
Eucariotas, 1

Eucromatina, 16, 230,257 Exocitosis, 126, 139 Esones, 239, 242, 27 1, 273 Expo rtina, 224 Extremo, aceptador, 284, 285,29 1 ms l+l, 82 menos H . 82 Factor(es), capacitante, 357 de crecimiento, 204, 296, 336, 338 de elongacin, 251 , 289 hemopoyticos, 336 de iniciacin, 288 de supervi vencia, 394 de terminacin, 292 de tra nscripcin, 250, 254, 255 basales, 250 especficos, 250. 252, 39 1 trfico. 394 FAD, 4 1, 161 , 164,169, 170, 173 FADO, 397, 398 FADH,, 161 , 164, 168, 169, 170, 173 Fagociosis, 142 Fagolisosoma, 144, 148 Fagosoma, 142 Fas, 396, 397 Fase, GO, 336 G l , 299, 322,333,336 G2, 299, 322, 334 M, 299, 322, 334 S, 16, 322, 333 FasL, 396, 397 Fecundacin, 113, 198,215, 227, 341, 356, 357" Fenotipo, 366 Fermentacin !{lctica. 174

gliales, 78, 80 intermedios, 12, 77, 78, 101 Filamina, 97 Pilopodio, 98, 99, 100 Fimbrina, 98, 102 FISH , 428 Fisin binaria, 175, 190, 195 Flagelos, 86 Flavina adenina dinucletido, V FAD Flip-j7op, 50, 176 Flipasa, 129 Floema, 68 Fluorescencia, 414 recuperacin despus del fotoblanquco, V f'RA P Fluorocromos, 52, 414 fms, 338 Fodrina, 93 Folistatina, 387 Forbol, 2 16 Forma celular. 77, 79, 85, 93 Fos, 338 Fosfatasas, 2 14 Fosfatidilcolina, 31 , 49, 128 Fosfatidiletanolamina, 3 1, 49, 128 Fosfatidilinositol (PI). 3 1, 49, 129.213 Fosfatidilinositol di fosfato (P1P2), 32, 129,208,2 13,215,217, 358,362 Fosfatidilinositol fos fato (PIP), 32, 129,2 13 Fosfatidilinositol 3-quinasa (PI 3-K), 205,208,217, 394 Fosfatidilinositol trifosfato (PlP3) , 32, 129,208, 2 17, 394 Fosfatidilseri na, 3 1, 49, 128,394 Fosfodiesterasa, 2 1O Fosfoglucomutasa, 2 11 Fosfol ipasa A, 2 14, 358 Fosfolipasa C-~. 205. 208,213,21 5, 358, 361 Fosfolipasa C-y, 205 , 214,215 Fosfolipasa D, 2 14, 358 Fosfolpidos, 31, 49, 175 Fosforilacin oxidati va, 164, 167, 170 Fosforilcolina, 128, 129 Fotofosforilacin, 188 Fotorrespiracin, 196 Fotosntesis, 5, 14, 181, 184, 185. 189 Fotosistema, 1R6, 1R7 F rttt.:cio namil'IIIO, n lul:n, tll (,
lllolttulal', 'lit ,

GAG, Y. Gli~osam inoglicanos Galactocerebrsidos, 32, 130 Galactosa, 27 Gameto, 18, 341 Gametofto, 363 Ganglisidos, 32, 54, 130, 148 GAP, 98, 15 1, 154, 204,223,225 Gaucher, enfermedad de, 148 GEF, 98, 15 1, !54, 204,223,225 Gelsolina, 97, 98 Gen(es). 226, 237, 240, 241 , 366 an,\lsis de la funcin de los, 429, 430 dominante, 366 de hcndiduro, 39 1 homericos, 390, 39 1 inhibidor, 263
de mantenimiento, 379

GM-CSF, 336, 338 GMPc, 200, 203 GMP cclico, V. GMPc Golgi , complejo de, 13, 69, 12 1, 123, 130, 136, 143 Gota, 84 Gotas de grasa, 72 Gradiente, de concentracin, 57 electroqumico, 57, 66 osmrico, 58 de voltaje, 57 Gramicidina, 61 Grnulos corticales, 36 1 Granwn, 183 Grasa parda, 174
Grupos sanguneos, 55

fF, 288 IL-2, 336 !mago, 390 lmportina, 223 Impronta genmica, 259 Inclusiones, 7 1, 141 Induccin, 197, 200,201 ,386, 387 autocrina, 1 98 endocrina, 197, 336, 388 enzimtica, 263 neuroendocrina, 197 paracrina, 198, 201, 204, 336, 387 l nductor, V Sustancia inductora
lneslabilidad din{lmica, 84 fngeniera genrica, 4 18, 422

Leucemia mieloide crnica, 376 Leucoplastos, 14, 18 1 Licopeno, 18 1 Ligamiento, 368, 369 Ligando, 197 U NE. 227 Lnea M, 103 Linfoma de Burkitt, 376 Lpidos, 21 , 30, 48, 128 Lipo[uscina, 73 Lipoprotenas, 35, 141 Liposoma, 48 Lisosoma, 13, 66, 12 1, 124, 143, 146 Locus, 237, 366 Lupus eritematoso, 273

GTP, 25, 83, 151, 154,203,204,207, 223, 270, 288, 289 Guan ilato ciclasa. 200, 203 Guanina, 24 Guanosina, 25

de la polaridad de la clula huevo, 390, 39 1 de la polaridad de los segmentos, 39 1 rece si vo, 366 rec1ores, 39 1 de regla par, 39 1 regulacin de la actividad de los, 25 1 segmentarlos, 390, 391 supresor de tumores, 337, 339 Genoma, 226 Genoteca, V. Biblioteca de genes Genotipo, 366 Girasa, 311 Glicerofosfolpidos, 3 1, 128, 176 Glicocliz. 54. 136 Glicoforina, 108 G!icolpidos, 28, 32, 54, 130 Glicoprotenas, 28, 35, 54, 134 Glicosarninoglicanos (GAG), 29, 30, 54, 109, 136 G!icosomas, 72 G!ioxisoma, 195 Globina, 296, 319 G!ucano, 68 Glucocerebrsidos, 32, 130, 148 Glucgeno, 29, 72, 141 , 162,211 Glucgeno fosforilasa, 211 Glucgeno fosforilasa quinasa, 2 1l , 2 15 Gl ucgenosintasa, 2 11 ,2 15 Glucogenogncsis, 2 11 Glucogenlisis. 2 11 Glucogcnosis. 72 Gluc61isis, JI> , 17 ( ;lti~IISII , ~/ , 111 , 1/o, , !7,1, 2 11
( jllll.'tl/oU\ (Iill'i l !ll ll/oll,/ 11

llc l'.!nln, 111 , 1 11

11 iutd r1l11,

1 11 , ' 11

Halofantrina, 67 Haploide, 18, 344 Haptot;txis, 99 Helicasa, 311, 317 Hlice a., 37 Hlice-bucle-hlice, 256 Hlice-vuelta-hlice, 255 Hemidesmosoma, 112 Hepara nsu lfato, 29, 109 Hepatitis, 430 Heterocarin, 52, 381 Heterocigoro, 38 1 Heterocromatina, 16, 230, 23 1, 256, 258,312 constitutiva, 23 1, 327 facultativa, 23 1 Hetertrofos, organ ismos, 4, 14 Hexoquinasa, 21 1 HGF, 204, 336 Hialuronidasa, 357 Hibridacin in silu, 428 Hidratos de carbono, 27, 54 -!ipercolesterolemia, 155 1 Hipoxantina, 315,31 7 Histonas, 225, 227,243,257,27 1, 296, 3 12, 335 acetilacin de las, 257 demetilacin de las. 257 desacetilacin de las, 257 desfosforilacin de las, 257 fosforilacin de las, 257 metilacin de las, 257 HIV, V. VirtL~ HIV 1-loja plegada~. 37, 168 llolliday, estructuras de, 35 1 11omeodominio, 39 1 llomocigoto, 366 1lorrnona(s), 198, 388 de crecimiento, 206, 336 esteroideas, 200, 224 tiroidea, 200 Horquilla de replicacin, 304 ilsp60, 74, 178 ilsp70, 74, 134, 147, 178 ilsp90, 74, 200, 224
Iluso rnit 6 tiC(I, Xh, t.
1,

Inhi bicin, por contacto, 100 por retroali mentacin, 267 lnmunocitoqumica, 4 14 Inmunoglobulinas, 145 lnosina, 278 lnositol trifosfato (IP1), 208,2 13,2 14, 2 15,358,361 Inositol tetrafosfato (IP,), 358 Insu lina, 137, 204,2 15 1ntegrina, 95, 11 2 1nteraccin, hidrol'bica, 39 nucleocitoplasmtica, 380 Interfase, 16,299,32 1, 352 Interferencia del ARN, 430 lntergrana, 183 lnterleuquina 2, V. /L-2 Interrupcin de la transctipcin. 266 lntrones, 239, 242, 27 1. 273 Jnver.~in , 371 , 372 lonforo, 61 formador de canales, 6 1 transportador mvil, 6 1 IP3, Y. lnositoltrifosfato IP, , Y. lnositol tetrafosfato IRF, 295 lsopreno, 34

Macizo celular interno, 383 Macromolculas, 56 Mal formaciones congnitas, 314 Manosa, 27 Manosa 6-fosfato, 137, 138, 143 MAP, 81, 85, 86, 205 Matriz, centrosmica, 8 1, 324, 326
citoplasmiltica, V. Citosol

JAK, 206 Jun, 338

Kaposi. sarcoma de, 338 Kartagener, sndrome de, 89 KDEL, 139 Kilodalton, 3 Kirromicina, 292 Klinefelter, sndrome de, 374

)d , 1 't<

Ll , 227, 3 19 Lactato, 174 Lactosa, 28 Lamelipodio, 98 Lmina, basal, 106, 109, 11 1, 112 nuclear, 79, 220, 330, 335 Laminina, 106, 11 O, 11 1, 11 2 Laminofi lamentos, 78, 79, 221, 330, 393 Lanzadera, 173 de glicerol 3-fosfato, 173 de malato-aspartato, 173 Lectura de pruebas, 3 16 J. p!nJH' II1a, 14 1

extracelular, 109, 110 mitocondrial, 166 nuclear, V. Nucleoplasma Maullido de gato, sndrome de, 375 mee, 339 MCM, 303 MOR, 66,67 Medialu na gris, 385 Menoquina, 67 Megasporocitos, 363 Megasporos, 363 Meiosis. 18, 341 , 344, 367 consecuencias genticas de la, 354 diferencias con la mitosis, 342 esprica, 363 en la mujer, 355 en el varn, 355 MEK, 204 Membrana(s), celulares, 47, 128, 194 estructura, 48 pelcida, 356, 359 permeabilidad, 56 plasmtica, 5, 8, 47, 68, 124, 13Y termi nai, 102 tilacoide, 183, 186, 187 Memoria celular, 389 Mendel, leyes de, 365, 366, 367 Mesodermo, 383, 386 Metacromasia, 404 Metafase, 18, 231,323, 325,329 1, 352 II, 352 Metamerizacin, 386 Meti lacin del ARNm, 269 Metilasa de mantenimiento, 259 Metilcitosina, 258 7-Meti lguanosina, 269 Mtodos de estudio, 401 miARN, 239, 245, 262, 279, 2'J7. ~ tll, 432 Michaelis, constllnte de, 42 Micoplasma, 6 microARN. V. miA NN
Microl'illl}'fllctlnlnl,'l l .!.

440

FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

INDIC E ALFA BETICO

441

Microfibrilla, 68, 69 Microfilamentos, 92 Mic rosatlite, 226 Microscopio, electr nico, 2, 406 de barrido, 41 O de fase, 405 de fluorescencia, 52, 414 de fondo oscuro, 406 de interferencia, 405 ptico, 2, 40 1 de polarizacin, 406 M icrosporocitos, 363 Microsporas, 363 Micrtomo, 403 de congelacin, V. Cristato Microtbulos, 12, 77, 80, 322, 328, 335 cenrriolares, 81, 90, 91 centro organizador de los, 8 1 c iliares, 8 1, 86, 91 cito plasmticos, 8 1, 82 mitticos, 81, 86, 328 Microve llosidad, 1O1, 356 Migracin celular, 97, 99 M inerales, 23 Minisatlite, 227 Miofibrilla, 103 Miosina, 1, 94, 96, 98, 102 1!, 96, 98, 101 , 103, 105, 330 V, 94, 95, 96, 100 Mitocondria, 13, 46, 66, 75, 159, 165, 194, 2 14, 395 crestas de la, 166 espacio intermembranoso de la, 168 matriz de la, 166, 168, 178 membrana, exte rna de la, 168, 175, 178 interna de la, 166, 170, 175, 178 origen de la, 179 reproducci n de la, 175 Mitosis, 18,299,32 1,322 anastral, 332 Modelo corporal, 390 Mongolis mo, V. Down, sndrome de Monmeros, 21 Monosacridos, 27 Monosomas, 37 1, 373 Monotransporte, 62, 65 Morfgeno, 385, 387 Mrula, 382 Mosaico fluido, 52 Mosaicos, 371, 375 Motilidad celular. V. Migracin celular MPF, 335 MTOC, V. Micr01bu/os, centro organizador de los Muerte celular, 175, 205, 217, 393 Mmaci n(es). en el ADN, 313,3 16,398 gnicas, 194, 3 13, 3 15,3 16 Myb, 338 Myc, 338, 339

Nebulina, 106 Necrosis, 393 NES, 224 Ne urofilame ntos, 78, 80 Neurogenina, 387 Neurotransmisor, 140 Neuro trofinas, 394 Nexina, 88

Nexus, V. Unin comunicante

NGF, 204, 336, 394 Nicotinamida adenina dinucletido, V.NAD Niemann-Pick, enfermedad de, 148 Nitroglicerina. 201 NO, V. Oxido ntrico No disyuncin, 355, 37 1 Ndulo, de Hensen, 386, 387 de recombinaci n, 349 Noggina, 387 Northern blouing, 428 NSF, 154 NSL, 223 Nucleasa reparadora, 306, 308, 316 Ncleo, 8, 14, 75, 2 19 entrada de protenas en el, 222 salida de molculas de ARN del, 224, 277 salida de protenas de l, 224 Nucleoide , 6 Nuclolo, 16,219,234,243.26 1, 275, 276, 324 Nucleoplasma, 16, 219 Nucleoplasmina, 228, 3 13 Nucleoporinas, 22 1 Nucleoprotenas, 35 Nuclesido, 24 Nucleosoma, 16,228,229,302,3 12 Nucletido, 24

NAD,4 J, 16 1, 163, 164,170, 173 NADH, 16 1, 163, 164, 168, 169, 170, 173 NADH deshidrogenasa, 167, 170, 176 NADp+, 41 , 185, 187 NADP reduclasa, 187 NADPll, IK5, IX7, IX <I

Ocludina, 11 5 OCT. 244 Oligopptido, 35 Oligosacridos, 28, 54, 134 Oncogenes, 338 Operador, 263, 264 Oper n, 263 lac, 263, 265 Trp, 266 Opsonina, 143 ORC, 303, 334 Organizador, nucleolar, 277 de Spemann, 387 Origen de replicacin, 176, 226, 303 Ouabana, 64 Ovocito, 227,344, 352, 356,358, 359, 362,384 Ovognesis, 341 Ovogonio, 344 Ovulo, 341, 344, 353, 362 ~-oxidac in de los cidos grasos. V. Acidos grasos Oxido ntrico, 200 O xido ntrico sintasa, 201

PABU, 271 Paquinema, 348 Pared, celular, 5, 11 , 68 primaria, 68 secundaria, 69 Pancula de reconoc imiento de la seal, V. PRS Patau, sndrome de, 374 Paxilina, 95 PCNA, V. Abrazadera deslizante PCR, V. Reaccin en cadena de la polimerasa POGF, 204, 336, 338 POK I , 394 Peptidasa seal, 132 Pptido, C, 137 natriurlico auricular (ANP), 203 seal, 73, !30, 223,293 Permeasa, 56, 58, 62 Perxido de hidrgeno, 14, 193, 194, 196, 398 Peroxisoma, 14, 75, 193, 194 reproducci n, 195 PEST, 297 PH20, 359 PH30, 360 Picogramo, 3 Pigmento(s), 72 de desgaste, 73, 147 Pinocitosis, 141 PI 3-K, V. Fo.ifatidilino.,irol 3-qu.inasa PIP, V. Fosfatidilinositol fosfato PIP2, V. Fosfatidilinositol difosfato PIP3 , V. Fosfatidi/inositol trifosfato Pirimidinas, 24 Piruvato, 162, 168 Piruvato deshidrogenasa, 163, 166, 168 Placa, celular, 332 discoidal , 11 3, 117 de fijaci n, 347 Placoglobina, 94, 116,117 Plactina, 80 Plan corporal, 386, 390 Plasma germinalivo, 384 Plsmido, 6, 422, 423 uso como vector, 424 Plasmodesmo, 11 9, 157, 332 Plstidos, 14, 181, 190 Plastocianina, 187 Plastoquinona, 187 Poder de resolucin, 402 Polen, granos de l, 363 poli A, 270 poli A polimerasa, 271 Poliadenilacin del ARNm, 270, 274 Polmeros, 21 Polipptido, 2 1, 35 Poliploidfas, 334, 370 Poliprenoides, 34 Poliprotenas, 238 Polirribosoma, 123, 288 Polisac\ridos, 2 1, 29, 54 Polisoma, V. Po/irribosoma Polispermia, bloque~ de la, 360
Porina. 5, 1()t{

P16, 337 1'2 1, 317

i' l 1, I(IJ, 11 7 , 1111 , 1111

Poro(s),% tk lu t'II VOillllllllllt'it'Hr, 11) , } 1 l'oh')ll'lnltl l'll k o. V (;nul~tnlt'IJ,

l1flllt1/l'

Potencialidad evolutiva, 388 Potocitosis, 157 Prader-Willi, sndrome de, 260 pre-RC, 303, 334 Preleptonema, 344 Preproinsulina, 137 Primaquina, 67 Prime r mensajero, 202 Proacrosina, 359 Procariotas, 1 Procaspasa 3, 395, 397 Procaspasa 8, 397 Procaspasa 9, 395, 397 Procentrolos, 91, 326 Procesamiento del ARN, 239, 269, 275, 278, 279 regulacin del, 274 Profase, 18, 323, 328 1, 344 ll, 344 Pro filina, 93 Proinsulina, 137 Prolactina, 206, 295 Prometafase, 18, 323, 325, 329 !, 352 Promotor, 240, 24 1, 243, 244, 263 Proncleos, 362 Proo piomelanocorti na (POMC), 137, 297 Proplslido, 190 Prosmera, 386 Proslaglandinas, 2 16 Protamina, 362 Proteasoma, 75, 147, 297 Protena(s), 2 1, 35, 73, 75, 130, 137, 176,293 14-3-3, 395 de anclaje , 221 conjugadas, 35 degradacin de las, 75, 297 estructura, cuaternaria, 38 primaria, 37 secundaria, 37 terciaria, 38 fibrosas, 38 fusgenas, 154 , 360 G, 207,357, 358, 361 complejo ~y. 207, 209, 2 12 subunidad o:, 207, 209 G 13 , 2 17, 394 G;, 2 10,212,217, 394 Gq, 213 G,, 209, 2 11, 213 globulares, 38 integrales, 51 intercambiadora, 176, 195 ligadoras, 77, 88, 90 motoras, 77, 88 multipaso, 51, 133 NI, 228, 3 13 perifricas, 50 radiales, 88, 221 reguladoras, 77 sntesis de, 238, 28 1, 288, 294, 330 transmembranosas, 5 1 unipaso, Prote inoide, 45 Proteoglicanos, 30 , 54, 109, 136 Pr01ofil:un nlos, 7R, R2. <JO

Protooncogenes, 337, 338 Protoplasma, 5 PRS, 131 , 133, 279 PSE, 244 PTPC, 395 Puentes de hidrgeno, 39, 254 Punto, de arranque, 333 de control G 1, V. Punto de arranqu.e isoelctrico, 40 de ramificacin, 272 Purinas, 24 Puromicina, 292

Queralaosulfato, 29, 109 Queratina, 78, 79, 11 2, 11 7 Quiasma, 349, 354 Quimiorrepulsin, 99 Quimiotaxis, 99 Quinasa(s), 202, 335 A, 209,210,212,357, 358 B. 394 c. 215, 216, 358, 362 CaM, 214 dependiente de c iclina, 333 G, 203 Quinectina, 84 Q uinesina, 84, 327, 328, 329 Quitisoma, 69

Rab, 152, !54 Rae, 98, 152 Rad51 , 349 Radical libre, 194 Radioautografa, 41 5, 428 Radioistopos, 415 Raf, 204, 215, 338 Ran, 152, 223, 224 Ras, 152,204,207, 338, 339 Rb, 337, 339 Reaccin(es), acrosmica, 358 en cadena de la polimerasa, 428 conical, 36 1 de Feulgen, 413 fotoq umicas, 185, 186 e n la oscuridad, 186, 189 de PAS, 4 13 Reactivo de Schiff, 4 13 Receptor(es), 197, J99 a 1-adrenrgico, 2 13 a.,-adrenrgico, 212 ~2-adrenrgico, 2 11 acoplados a protenas G, 205, 207, 208

Regin CG, 242 Regulador, 240, 242, 243 Relacin nucleocitoplasmtica, 14, .1 1 1 Reparacin del ADN, 316 Repeticiones invertidas, 31 8 Replicacin del ADN, 225, 238, 29\l, 303 Replicn, 304 Represin enzimtica, 266 Represor, 250, 263, 264 lac, 263 Trp, 266 Respiracin aerbica, 5 Retculo, endoplasmtico, 12, 121 , 122, 126, 128, 130, 136, 175,220 liso, 123, 140,141 ,2 11 .214 , 215,361 rugoso, 123, 130 sarcoplasmtico, 123, 140, 2 14 Re tinoblastoma, 337, 376 Retrotranslocacio, 134 Retrovirus, 3 18, 3 19 Reversibilidad, 199 Rho,96,98, 152 Ribosa, 24, 27 R ibosoma, 5, 11, 73, 130, 177, 1'11 , 238, 243, 276, 28 1, 2K3, 286, 287, 292 Ribotimidina, 278 Ribozima, 41 , 272, 287 Ribulosa 1,5-difosfato carboxilasa, 189, 191 RIP, 397 RISC, 430, 432 RNAi, V. Interferencia del ARN RNPhn, 25 1, 283 RNPpn, 239, 27 1 RNPpno, 239, 276 Rombmera, 386 Rous, sarcoma de, 338

que activan a una tirosina quinasa,

206 con actividad de , g uaoilato ciclasa, 203 serina-treonioa qu inasa, 203 tirosina quinasa, 203 citoslicos, 200, 224 de la membrana plasmtica, 20 l con propiedades enzimticas, 202 para la PRS, 131 para el ribosoma. 13 1 Recombinacin gentica, 18, 348, 354, 369 Reconocimiento celular, 11 3. 11 4, 358

Sil, 25 1 SIII, 251 Sales inorgnicas, 21, 22 SAR, 230, 302 Sarl , 15 1 Sarcoglicano, 106 S arc mero, 103 Satlite, 233 Sarurabilidad, 199 Sec, 150 Secrecin, 124, 126, 139, 140 apocrina, 72 constitutiva, 140 regulada, 140, 153 Secuencia, alfoide, 226. 3?X de terminacin, 24 1, 2tll . J!l , '11 Segmentacin del cigoto. 1 t 1, llt . 363, 382, 3X4, 111 ., Seg undo mensajero, 202, iiK Seleclina, 113 Semaforina, 99 Senescencia replicativa. 3 10 Seal(es), de anclaje. 73. 1.1 1 97 inlfacelularcs. 1 de poliadcnila in, n o
Scrina- lr onina quinii'HI, / 0'

442

FUNDAMENTOS DE B!OLOGIA CELULAR Y MOLEC ULAR

Seudogenes, 319 procesados, 319 Seudouoidina, 276, 278 Shh, 387 Sialoadhesina, 113 Sida, V. H/V Significado evoluti vo, 388 Sinamina, 80 Sinapsis, 345 nerviosa, 198 SINE, 227 Singamia, 362 sis, 338 Sistema de endomembranas, 12, 75, 121,137,157 en la clula vegetal, 157 Sitio(s), A, 287, 288, 289 AP, 3 15,3 17 E, 287,288, 289 P, 287, 288, 289 SLI, 261,276 Sm, 279 Smad, 203 SNAP, 154 SNAPc, 262 SNARE, 153, 154 Solenoide. 229. 302 Solutos, 56 Somatomedina, 336 Sombreado, 408 Somita, 386 Southem blotting, 428 SPP, 303, 334 SR, 275 Src, 338 SSB, 308, 311 STAT, 206 Succinato deshid rogenasa, 167, 169, 170 Sustancia inductora, 197, 199,264, 336, 386

Tirosina guinasa, 204, 206 Titina, 106 TNF, 396, 397 TNF-R. 396, 397 TOM, 178 Tonofilamentos, 79 Topoisomerasas, 250, 3 11, 312 Tos ferina, 212 Toxina diftrica. 293 TRADD, 397 Traduccin del ARNm, 23, 237, 281, 288 regulacin de la, 294 TRAF. 397 Transcitosis. 145 Transcripcin del ADN, 23,237. 247, 26\,300,312,330 en clulas procariotas, 253, 263, 264, 265, 266, 267 regulacin de la, 251, 265. 266 Transcriptasa inversa, 3 1O, 3 18, 426 Transcripto primario, 239, 250, 269, 274, 275, 283 Transferrina, 295 Translocacin, 290, 371, 372
robertsoniana, 372

gap, V. Unin comunicante en hendidura, V. Unin comunicante

heteroflicas, 11 3 homofO icas, 114, 116 intercelulares, 109 inica, 39 N, 28, 54, 134 no covalentes, 39, 249, 254 O, 28, 54, 136 oclusiva, 114 peptdica, 35. 283, 286 Uracilo, 24 Uridina, 25, 272, 278 UTP, 25

Vac uola, 157

Vaina interna, 88 VaJinomicina. 6 l

Valor posicional, 385, 388

van der Waals, interaccin de, 39

TAF, 250. 252. 261 Talina, 95 TATA, 241, 244 Tau, 85 Taxol, 86 Tay-Sachs, enfermedad de, 148 TBP, 250, 261 , 262 Telofase, 18, 323, 325 !, 352 11, 353 Telomerasa, 239, 279, 31 O Telmero, 225, 308, 347 Termogenina, 174 Territorio cromosmico, 234 Tetraciclina, 292, 424 Ttrada, 348 TFII, 250, 261 TPIIS, 25 1 TFIII, 261, 262 TGF-~. 203, 387 Tilacoide, 14, 183 TIM, 178 Timina, 24 Timosina, 25, 93, 98

Translocn, 56, 131, 147 Transportador, 56 Transporte, activo, 56, 62, 223 pasivo, 56, 65 Transportina, 223 Transposasa, 3 18 Transposicin del ADN, 318 Transposn, 3 18 Trasplante nuclear, 379 Trastornos metablicos, 3 \4 TRF, 226. 308 Triacilgliceroles, 30, 72, 126, 162 Triglicridos, V. Triacilgliceroles Tripletes, 240, 28 1 Trisomas, 371 , 373 Trisguelin, 149, 152 Trofoblasto, 383 Tropocolgeno, ll O Tropomiosina, 105, 108 Tropomodulina, 108 Troponinas, 105, 215 TTP, 25 Tubulina(s), 81 , 295. 328 a , 81 ~. 81 , 319 capuchn de, 84 y, 8 1, 82,91 Turner, sndrome de, 375

Vectores, 424, 426 YEGF, 204, 336 Yescula(s), 56 secretora, 140 recicladora, 12 1, 139, 140, !54 transportadora, 12 1, 124, 139, 149. 153 Vg- 1, 387 Vibrtomo, 404 Vibrio cho ferae, 2 13 Yillina, 102 Yimentina, 78, 80 Vinblastina, 86
Vincristina, 86

Vi nculina, 94, 95, 116 Virus, 7, 338 de la hepatitis B, 338 HIV, 67, 338 Sendai, 53, 38 1 Vitamina D, 200

Wesrem blorting, 428 Wnt, 387 wl, 339

UBF, 26 1, 276 Ubiguinona, 34, 167, 170 Ubiguitina, 76, 147, 297 Ultracentrifugacin, 41 7 Ultramicrtomo, 407 Unidad(es). de replicacin, 302 S (Svedberg), 4, 286, 417 Unin(es), comunicante, 107, 117 covalentes, 39 estrecha, V. Uni n oclusiva fosfod ister, 24, 247. 249, 300

Xantfila, 186 Xenopus, 379,-384, 387 Xeroderma pigmentoso, 318 Xic, 245, 258 Xilema, 68 Xilosa, 27 Xist, 258 XXX, sndrome, 375 XYY, sndrome, 374

YAC,425

Zellweger, sndrome de. 195

Zonula tulhenns, V. Cinturn m /111 ',\11'' Zonulo ocdmh11s, V. Unilm od u.\11'11

ZP. 35C. 35X. .WJ