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INMUNODIFUSIN RADIAL

Villano Barrial Viviana Villar Portuguz Jocelyn

INMUNODIFUSIN RADIAL
Para la realizacin de estas tcnicas se requiere que tanto el Ac como el Ag se encuentren en un medio fluido en el que sea posible la precipitacin del complejo Ag-Ac.

La inmunodifusin radial (IDR) es una tcnica que puede determinar cuantitativamente la concentracin de un antgeno. Es una tcnica sensible que es usada clnicamente para detectar niveles de inmunoglobulinas Ig.G, M y A antgenos solubles (C3, C4, transferrina, etc) presentes en muestras biolgicas

creada

Jacques oudin, ( dreux 1908-paris 1985)

doctor en medicina en 1946 escribi algunas notas y clasicos en el que se describen las soluciones de antgenos y anticuerpos de inmunodifusion en gel de agar Recibi premio nobel en 1984 por las teoras en cuanto a la especificidad del desarrollo y control del sistema inmuno y el descubri del principio para la produccin de anticuerpos monoclonales.

En 1946, oudin descubre la precipitacin

Orjan ouchterlony ( Estocolmo 19142004)

Medico sueco ouchterlony desarrollo en su tesis un nuevo mtodo analtico para la inmunodifusion. Este mtodo se llama a menudo el mtodo de ouchterlony y fue fundamental para el desarrollo de la inmunologa durante dcadas. El mtodo se usa en todo el mundo.
Modifica la teora de oudin dando lugar a la doble inmunodifusion

Inmunodifusion radial simple (IDRS, o tcnica de Mancini)

INMUNODIFUSIN RADIAL

ALGUNOS ASPECTOS A TENER EN CUENTA

El gel de agarosa es el mas utilizado en las pruebas de inmunodifusion,

los geles de poliacrilamida no son recomendadas,

la concentracin del agar es de alrededor 10 g/ L. se calienta hasta 100 C

La agarosa debe enfriarse a 52C antes de que se le agregue el antisuero

La T de las placas de IDR debe ser de 2 a 8C

Las placas en posicion invertida

El volumen a dispensar es de 5 microlitros

Es mas recomendable utilizar microtip

Incubar en camara hmeda

INMUNODIFUSIN RADIAL principio


La tcnica se basa en la difusin de la muestra conteniendo el antgeno a mediren una matriz semislida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac especfico. a medida que el antgenodifunde, se alcanza la relacin Ag-Ac que permite la formacin precipitados visibles., con el objeto de construir una curva de calibracin.

Generalmente toma de 24 a 48 horas Para cada antgeno, se formar una precipitacin final en anillo de cierto dimetro

concentracin de antgeno vs mediciones de dimetro de los anillos

A partir de esta curva de calibracin lineal, la presencia y cantidad de antgeno en las muestras desconocidas pueden ser determinadas.

en un comienzo esta presente en una concentracin relativamente alta y forma complejos solubles

El halo de precipitacion es directamente proporcional a la concentracion del antigeno

hasta que se alcanza el punto en el cual los reactantes estn ms cerca de las proporciones ptimas (zona de equivalencia),

INMUNODIFUSION DOBLE (IDRD, O TCNICA DE OUCHTERLONY)

fundamento

Empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusin tanto Ag como Ac (difusin doble) . De modo que al encontrarse en proporciones optimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitacin visible. Constituye un mtodo mas completo por que permite obtener una informacin mas completa que las anteriores.

principio

La precipitacin ocurre con la mayora de los antgenos, debido a que stos tienden a ser multivalente. Cada anticuerpo, a su vez, tiene por lo menos dos sitios de unin para los antgenos.

procedimiento
En una placa Petri estril se depositara 15ml de agar y enfriado a 50C. Se dejara solidificar y se confeccionaran pares de orificios 5 mm de dimetro, que distaran 1 cm entre si En los distintos orificios enfrentados se agregaran 10 ul de Ag y 10 ul del suero. Se detectaran las correspondientes bandas de precipitacin en el espacio que separan los orificios. Las placas se mantendrn en cmaras hmedas

Las lecturas de los resultados se efectuaran a las 24-72 hs.

Difusin simple

Difusin doble

Una dimensin

Dos dimensiones

La distancia a la que una sustancia difunde est:

en relacin DIRECTA con su CONCENTRACION.

Concentracin de equivalencia

Exceso de Ac

Reacciones de precipitacin

Patrones de precipitacin por IDRD

Sistema con tres reservorios pueden generar bandas de precipitacin que han recibido nombres especficos

IDENTIDAD: los dos sistemas antignicos son iguales, por lo tanto se funden en una banda de precipitacin.

NO IDENTIDAD: los dos sistemas antignicos son distintos, cada uno origina bandas de precipitacin independiente que se cruzan.

IDENTIDAD PARCIAL: los dos sistemas antignicos comparten algn componente (banda que se funde), pero no son iguales (espoln o prolongacin).