Sunteți pe pagina 1din 2

Hidroliza enzimatic a celulozei utiliznd preparate celulozolitice de origine microbiologic.

Substratul natural asupra cruia acioneaz celulazele este celuloza. Ea constituie componenta principal a pereilor celulei vegetale. Se gsete adesea n plante sub form de fibre. Fibra de celuloz este constituit din mai multe straturi succesive ale cror proprieti fizico-chimice i mecanice se integreaz pentru a-i da fibrei funcionalitatea sa specific. Din punct de vedere chimic, fibra vegetal cuprinde trei constitueni principali : celuloza, hemicelulozele i ligninele. a) Celuloza este un polimer insolubil, liniar, de uniti de glucoz legate ntre ele prin legturi de tip -1,4. Dimerul de -D-glucoz format prin aceast legtur se numete celobioz. Gradul de polimerizare este de ordinul a 10 000 uniti/molecul. n stare natural aceste molecule sunt asociate ntr-o structur fibrilar sau cristalin. n esuturile vegetale, celuloza nu se gsete n stare liber, ea fiind legat de ali constitueni: lignina, pectinele, hemiceluloza, cu care formeaz complexe greu hidrolizabile. De cele mai multe ori, celulozoliza este precedat i favorizat de procesele de pectinoliz, n urma crora legturile dintre fibrele de celuloz se desfac, astfel nct ajung s fie expuse pe toat suprafaa lor la aciunea microflorei celulozolitice. b) Hemicelulozele sunt heteropolizaharide scurte, mai uor hidrolizabile dect celuloza. Constituienii principali sunt: xiloza i arabinoza (majoritare), glucoza (ntotdeauna prezent, dar n cantiti mici). Sunt prezente n cantiti mari n paie, n proporie de 6-30% din compoziia esuturilor vegetale. Hidroliza hemicelulozelor furnizeaz pentoze nefermentescibile n etanol de ctre S. cerevisiae, dar sunt n curs de cercetare alte ci de valorificare ale acestor zaharuri. c) Ligninele sunt polimeri tridimensionali de origine fenolic. Legturile ntre monomere sunt de diferite tipuri, multe dintre ele nehidrolizabile. Produii de degradare ai ligninelor sunt practic nefermentescibili. Celuloza, hemicelulozele i ligninele sunt n stare natural insolubile n ap. Ele nu sunt direct accesibile enzimelor celulozolitice datorit structurii cristaline i a diferitelor tipuri de legturi care leag cei 3 polimeri din constituia acestora (fore Van der Waals, puni de hidrogen, legturi covalente). Datorit faptului c celuloza este practic cimentat de ceilali doi polimeri, pentru o hidroliz ct mai complet se fac pretratri fizico-chimice ale biomasei nainte de a hidroliza celuloza i hemiceluloza. ns, s-a observat c o mare parte a fraciunii celulozice din lignoceluloz (uneori cca 50%) nu este legat puternic de lignin i este relativ disponibil descompunerii de ctre microorganisme. Cea mai bun cale de a pune celuloza liber la dispoziia microorganismelor este descompunerea ligninei. Aceasta se poate face enzimatic cu ajutorul ligninazelor, sau chimic, prin oxidare. De asemenea, pentru ca microorganismele celulozolitice s se poat dezvolta n biomasa lignocelulozic, ele au nevoie pe lng sursa de carbon i energie (celuloz) i de o surs de azot. Un substrat att de complex ca BLC nu poate fi hidrolizat total de o singur enzim. Sistemul enzimatic produs de T. reesei este deci un amestec de diferite enzime care coopereaz ntre ele. Cercetrile au dovedit c T. reesei sintetizeaz dou sisteme enzimatice principale: unul specific hemicelulozelor i altul specific celulozei. Mecanismul de aciune al enzimelor care hidrolizeaz hemicelulozele este asemntor cu mecanismul de aciune al celulazelor, dar activitatea lor specific este net superioar.

Sistemul enzimatic celulozolitic care hidrolizeaz celuloza este compus n principal din trei clase de enzime: 1. Exoglucanazele atac molecula de celuloz la captul nereductor al lanului elibernd reziduuri de celobioz; ele mai sunt deci numite celobiohidrolaze. 2. Endoglucanazele opereaz aleatoriu n interiorul lanului de celuloz, crend astfel situsuri de atac suplimentare pentru exoglucanaze. 3. Celobiazele ( -glucozidazele) hidrolizeaz celobioza ,dar n acela timp i celotrioza i celotetroza pna la glucoz. n interiorul fiecrei clase pot exista mai multe enzime care se pot gsi sub diferite forme de izoenzime. n general aceste enzime sunt glicoproteine, cu variaii mari n componenta glucidic. Studiile de purificare i fracionare au relevat faptul c toate cele 3 tipuri majore de enzime celulozolitice sunt produse n forme multiple, din care se pot obine un numr variabil de fraciuni, n funcie de filtratul de cultur folosit i de tehnicile de utilizare. Multe cercetri au demonstrat c diferite enzime acioneaz n mod sinergic n hidroliza celulozei nalt ordonate. Rolul -glucozidazei n sinergismul reaciei este uor de explicat. n timp ce celobioza este un produs finit inhibitor al celobiohidrolazei, -glucozidaza acioneaz ndeprtnd celobioza din amestecul de reacie. S-a artat c sinergismul dintre celobiohidrolaz i endoglucanaz este foarte avansat n cazul substratelor nalt ordonate, mai slab n cazul substratelor amorfe, cum este celuloza gonflat cu acizi i absent n cazul celulozelor solubile substituite(carboximetilceluloza). Endoglucanaza acioneaz asupra regiunilor amorfe din fibrele de celuloz deschiznd noi capete de lan pentru atacul exoglucanazelor care apoi ndeprteaz unitile de celobioz de la capetele nereductoare ale lanului. Sinergismul dintre cele dou enzime rezult aadar din faptul c noul substrat (capetele libere ale lanurilor) pentru exoglucanaze este format n urma aciunii endoglucanazelor. Pentru producerea de -glucozidaz, cele mai potrivite sunt tulpinile de Aspergillus niger, A. phoenicis A. wentii, -glucozidaza produs de acest microorganism fiind mai puin sensibil la inhibiia prin produs finit dect cea produs de T. reesei, motiv pentru care au i fost iniiate fermentaii mixte. n fermentaiile mixte au fost obinute activiti ridicate ale celor trei enzime, ba chiar i pentru xilanaze cnd tulpina de Aspergillus a fost introdus n fermentaie la 15 ore de la nceperea fermentaiei cu tulpina de Trichoderma. Dezvoltarea tulpinii de Trichoderma este restricionat de aciditatea puternic a mediului produs de tulpin de Aspergillus.