Explorați Cărți electronice
Categorii
Explorați Cărți audio
Categorii
Explorați Reviste
Categorii
Explorați Documente
Categorii
Mure LP4
Examen direct nu se practic de rutin evidenierea virusului din materii fecale prin ME evidenierea antigenelor virale din biopsie hepatic prin reacii imunohistochimice din materii fecale prin reacii antigen-anticorp - greu evideniabile la nceputul bolii Izolare nu se practic de rutin dei virusul poate crete pe linii celulare, nu produce efect citopatic
Diagnostic serologic Dinamica apariiei anticorpilor: o IgM: apar odat cu primele simptome de boal ajung la titru maxim n 1-3 sptmni, dispar n 3-6 luni o IgG: apar dup aproximativ o lun de la infecie, ajung la titru maxim n 3-6 luni, apoi persist la un nivel detectabil toat viaa o anticorpii se detecteaz prin ELISA
-1-
- Hepatita viral B Produs patologic snge pentru detectarea markerilor virali (antigene i anticorpi) esut hepatic detectarea antigenelor virale virusul se mai elimin prin secreii genitale, saliv. Izolare virusul nu este cultivabil Diagnostic Markeri virali detectabili din snge prin ELISA: o Ag HBs, Ac anti HBs o Ag HBe, Ac anti HBe o Ag HBx, Ac anti HBx (cercetare) o Ac anti HBc o din snge se mai poate evidenia ADN-ul viral prin PCR, polimeraza (cercetare). Markeri virali detectabili din biopsie hepatic prin imunohistochimie o Ag HBs o Ag HBc o AgHBx (markerul cronicizrii i al malignizrii - cercetare) o ADN viral Dinamica apariiei markerilor virali n snge: 1. AgHBs: se evideniaz primul, apare n perioada de incubaie (la 1-2 sptmni de la infecie), scade n convalescen; dispare odat cu apariia anticorpilor antiHBs; detectarea lui dup 6 luni de la infecie semnific cronicizare. 2. AgHBe: se evideniaz nc din perioada de incubaie, imediat dup apariia AgHBs; dispare n convalescen odat cu apariia anticorpilor antiHBe; detectarea lui indic infectivitatea persoanei. -2-
3. Anticorpi antiHBc primii anticorpi produi, apar odat cu simptomele bolii i persist mai muli ani; se determin IgM sau Ig totale (IgG+IgM); detectarea IgM indic replicare viral.
5. Anticorpi antiHBs apar la cteva luni sau ani de la infecie, dup anticorpi antiHBe; detectarea lor indic instalarea imunitii.
Ac anti HBe
Profiluri serologice posibile n hepatita viral B Prezena AgHBs = infectivitate o AgHBs + IgM antiHBc = hepatit acut o AgHBs + Ig totale antiHBc (> 6 luni) = infecie persistent o AgHBs + Ig totale antiHBc + AgHBe (> 6 luni) = hepatit cronic Prezena Ac anti HBs = vindecare o Ac anti HBs + IgM anti HBc (titru crescut) = infecie recent, vindecat o Ac anti HBs + Ig totale antiHBc (titru sczut) = infecie n antecedente, vindecat o Ac anti HBs (fr ali markeri) = imunitate postvaccinal Persistena AgHBs dup 6 luni = infecie persistent -3-
Examen direct evidenierea acidului nucleic din snge (viremie) sau din ficat prin PCR.
Izolarea nu se practic Diagnostic serologic detectarea anticorpilor anti VHC prin ELISA, metode radioimune, folosind antigene recombinate detectarea imunoglobulinelor prin metode Western-blot
Virusul hepatitei D este un virus defectiv, infecia apare doar n prezena virusului hepatitei B. Examen direct evidenierea virusului n nucleul hepatocitelor prin ME, metode imunohistochimice; evidenierea ARN-ului viral din snge, dup tratarea serului cu detergeni pentru a ndeprta AgHBs care nvelete virusul. Diagnostic serologic evidenierea anticorpilor anti VHD prin ELISA.
-4-
- Hepatita viral E Virusul hepatitei E se transmite enteral, determinnd forme uoare de boal, cu excepia femeilor gravide la care boala poate avea o evoluie letal. Boala evolueaz epidemic n Asia, n nord-vestul Africii i n Mexic. Foarte rar apare n SUA. Nu s-au descris cazuri la noi n ar. Nu se fabric reactivi comerciali pentru diagnosticul de laborator de rutin. n scop tiinific: o se evideniaz antigenele virale din celula hepatic prin IME; o se evideniaz ARN-ul viral prin PCR; o se evideniaz anticorpii anti VHE.
-5-
n cursul diagnosticului infeciei cu HIV se evideniaz: Antigene virale ARN viral, ADN proviral Anticorpi: Ac. anti core, Ac. antienvelope
-6-
ARN-HIV
P24
P24
Ani
Diagnostic
Protocolul standard de diagnostic: se evideniaz anticorpii prin metoda ELISA ELISA reprezint prima etap de diagnostic a infeciei HIV (screening), avnd sensibilitate de aproape 100% o generaia I: se folosete lizatul total viral de pe culturi de limfocite (whole virus) o generaia II: se folosesc antigene clonale o generaia III: se folosesc antigene recombinate o generaia IV: metode combinate care testeaz simultan prezena anticorpilor anti HIV i a antigenului P24 metodele de generaie III i IV au sensibilitate i specificitate ridicat este posibil apariia rezultatelor false: o fals negative (fereastra imunologic, diferite tipuri virale (HIV-1, HIV-2) i subtipuri (HIV-1-N, HIV-1-O, HIV-1-M)) o fals pozitive (probe de snge alterate, incorect etichetate sau schimbate, greeli de laborator, contaminarea probelor) rezultatul pozitiv al testrii ELISA se raporteaz ca ser reactiv, i NU confirm diagnosticul pozitiv de infecie HIV -7-
n cazul pozitivrii se face o retestare prin printr-o metod cel puin la fel de sensibil din aceeai prob de snge (determinare ELISA la centre de referin)
dup retestare, probele reactive trebuie confirmate prin metoda Western-blot o se detecteaz proteine specifice virale: glicoproteine de nveli (env): gp41, gp120, gp160 proteine nucleare (gag): p18, p24/25, p55 endonucleaze-polimeraze( pol): p34, p40, p52, p68
o se consider pozitive probele care prezint: 2 benzi pentru antigene din grupul env (dup World Health Organization WHO) 1 band (glicoprotein) + 1 band (alt protein specific HIV) (dup Deutsches Institut fr Normung - DIN) benzi pentru P24, p34, gp41, gp120/160 (dup Food and Drug Administration) Interpretarea Western-blot Proba 1: Proba 2: HIV+ (control pozitiv) HIV- (control negativ)
Proba A: Pacient A Proba B: Pacient B Proba C: Pacient C * pacientul C prezint un pattern sugestiv pentru infecie HIV * pacientul B rezultat intermediar dup WHO, dar pozitiv dup DIN
Teste rapide de diagnostic (point-of-care, bedside tests) Se bazeaz pe 4 principii: aglutinare, immunodot, immunofiltration sau immune chromatography Se poate efectua din snge capilar/venos Rezultatele se obin n 15-30 min. Ex: OraQuick, Reveal, Uni-Gold Recombigen au specificitate i sensibilitate nalt -8-
Diagnostic direct nu se face de rutin detectarea AN virali: ADN proviral din limfocite sau ARN viral Reprezint marker de infecie Se folosete n situaii speciale: o Calitativ: suspiciune de infecie primar, cnd Ac lipsesc (fereastra imunologic); nou nscut din mam infectat cu serologie pozitiv (Ac materni) o Cantitativ (ncrctura viral): marker de prognostic; monitorizarea tratamentului. NU se folosete ca metod de diagnostic PCR (polymerase chain reaction), b-DNA (branched DNA), NASBA (nucleic acid sequence-based amplification), LCR (ligase chain reaction) Izolarea virusului rezervat pentru cazuri speciale, se face n laboratoare specializate pe culturi de limfocite umane stimulate cu fitohemaglutinin, n prezena interleukinelor efect citopatogen n 2-3 sptmni
-9-
Ser nereactiv
Ser reactiv
Retestare prin metode de screening sau printr-o metod cel puin la fel de sensibil din aceeai prob de snge
Repetarea probei peste 7-10 zile (Ag, Ac din ser i PCR din snge pe EDTA)
Reactiv
Nereactiv
Eroare de lucru
Infecie absent
-10-