UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN VETERINAR BUCURETI

FACULTATEA DE BIOTEHNOLOGII
MASTER APLICAII MODERNE ALE BIOTEHNOLOGIILOR N AGRICULTUR

Sisteme productive: Bioreactoare

ndrumtor tiinific: Prof. univ. dr. Adrian Vamanu

Masterand: Toma Rodica Elena

Bucureti, 2013

Biotehnologii productive
Reprezint gama larg a aplicaiilor biotehnologice cu rol de producere de bunuri i servicii. La prima vedere poate prea c nu au aceei importan cu celelalte dou clase n ce privete considerentele ecologiei sistemice, ntruct nici nu utilizeaz surse de energie auxiliar (a stocurilor materiale reciclabile), nici nu reverseaz datoria fa de mediu, deci poate prea orientat spre o cretere economic imediat. n realitate, clasa C de biotehnologii reprezint din nou un proces de eficientizare deci de evoluie calitativ a SSE, prin randamentele deosebit de mari i costurile relativ sczute raportate la valoarea bunurilor produse. De aceast dat, sub raport informaional i al capacitii de management al relaiilor SSE-CN, biotehnologiile folosesc la dimensionarea corect a absorbiei de resurse regenerabile dinspre CN spre SSE, putnd juca un rol cheie n stabilirea acestora la un nivel mai mic sau cel mult egal cu capacitatea de suport a componentelor CN. Acelai efect, la o scar spaial mai restrns, avnd n vedere c vorbim despre resurse regenerabile, asupra capacitii CN de a oferi bunuri i servicii. Multitudinea de procese biotehnologice cunoscute n prezent nu cred c are nevoie de enumerare. n plus, flexibilitatea acestui domeniu al cercetrii aplicate este imens, astfel nct practic o soluie teoretic programat are mari anse de a putea fi practic aplicat, chiar dac n acel moment nu se afl ca exemplu particular n baza de cunoatere. Acest fapt reprezint un plus n cartea pe 18 care omul o are de jucat mpotriva propriei sale indiferene de pnmai ieri n ce privete respectarea unor legiti intrinseci ecosferei. Planificarea strategiei de dezvoltare n cazuri particulare ale diverselor sisteme socio-economice naionale trebuie s porneasc de la identificarea posibilelor materii prime disponbile pentru utilizare n procesul biotehnologic, adic a acelor materii cantitativ i calitativ eficiente (studii de fezbilitate, cost-beneficiu i expertize de impact de mediu), ca i de la identificarea acelor produi care se impune a fi transformai prin procese biotehnologice (n vederea limitrii impactului lor asupra mediului). Aceste studii preliminare care fundamenteaz strategia naional de utilizare a biotehnologiilor se trebuie integrate strategiei naionale de dezvoltare pe termen mediu i lung, astfel ca planificrile care decurg din acestea s nu abordeze domeniul sectorial, existnd pericolul n acest caz ca respectivele planuri s nu poat fi aplicate din lips de fonduri sau suport decizional. n acest context, trebuie subliniat c termenul mediu i lung utilizat n momentul de fa este vzut ca o perioad de 5 ani. Sistemele socio-economice, care se circumscriu legitilor sistemice, sunt entiti mari, a cror evoluie i modificare de traiectorie se percepe la scar de timp mare,

datorit faptului c factorii lor cheie de comand acioneaz la acest orizont de timp. Strategia pe termen mediu, din acest punct de vedere, nu se poate referi la perioade de 5 ani, ci se refer la perioade de aproximativ10 ani, iar termenul lung se refer n cazul SSE la zeci de ani. Riscurile elaborrii strategiilor n general sunt acelea de a privi domeniul n care se face planificarea rupt de contextul general al traiectoriei alese pentru sistemul integrator (SSE n totalitatea sa n 19 cazul de fa) i de a potena o anumit direcie doar pentru c aa se poart a se vedea teoriile privind importul de know-how. Acest din urm aspect poate fi benefic doar n contextul integrrii cunoaterii internaionale la realitile concrete naionale, cu precdere prin evaluarea aspectului eseniale ale funcionrii SSE: relaia sa cu componentele Capitalului Natural, care reprezint suportul material i energetic al acetuia. Aceast modalitate de analiz, sistemic i nu sectorial, la scar de timp larg i nu punctual, poate da rezultatul scontat, acela de a elabora o strategie viabil, adic durabil (sustenabil). Ca n toate domeniile complexe, exist pericole legate de cele mai mrunte aspecte considerate lipsite de importan. Rspunsurile se afl sau se vor afla ns totdeauna n cercetarea i aplicarea principiilor teoretice ale ecologiei sistemice. BIOREACTOARE

Principalul scop al biotehnologiei este obinerea de produse sau servicii utile activitii umane, cu ajutorul organismelor vii. Procesul de baz n biotehnologie este procesul biologic", dup cum procesul de baz n tehnologia chimic este procesul chimic". Spaiul n care se desfoar o reacie sau un proces chimic se numete reactor chimic". In mod asemntor, spaiul n care se desfoar un proces biologic se numete bioreactor. 'Dei procesul de baz din tehnologia de biosintez este procesul biologic", el aparine, totui, domeniului ingineriei biochimice, care se ocup de studiul proceselor de fermentaie aerob i anaerob, al reaciilor enzimatice, precum i de procese specifice industriei fermentative, cum ar fi: sterilizarea, . pasteurizarea, liofilizarea, uscarea prin atomizare, izolarea i purificarea produselor extrase din mediile biologice. Descoperirile succesive i dezvoltarea spectaculoas a biotehnologiei au favorizat att studiul aprofundat al proceselor implicate, ct i al aparaturii utilizate, n principal, al bioreactoarelor. S-a nscut astfel bioingineria", care studiaz bioprocesele sub toate aspectele (modul de desfurare, cinetic, transfer de mas i cldur), oferind soluii de optimizare a procesului biotehnologie. n bioreactor, transformarea materiilor prime este realizat de sistemul enzimatic al microorganismelor vii, al celulelor animale i vegetale sau de enzimele izolate din acestea. Reuita experimentului biotehnologie depinde n cea mai mare msur de condiiile optime de cretere a microorganismelor create n bioreactor. Celulele se

lupt continuu cu modificrile din mediul nconjurtor, astfel nct s obin i s-i menin condiiile optime de cretere. ntr-un bioreactor, aceast tendin a celulelor este asistat, este controlat n mod continuu. Reactorul trebuie s asigure aprovizionarea continu a celulelor cu mijloacele necesare creterii sau producerii de metabolii, asigurnd pe ct este posibil valorile optime pentru pH, temperatur, concentraia substratului, concentraiile n sruri minerale, factorii de cretere i pentru concentraia n oxigen. n legtur cu reactorul n care trebuie s aib loc procesul biologic sau biochimic, apar urmtoarele probleme importante: care este cel mai bun reactor pentru o transformare biochimic dat; cum se calculeaz mrimea i volumul interior util, alte elemente constructive al bioreactorului; care sunt condiiile optime de operare, astfel nct bioreactorul s realizeze performanele dorite. Fenomenele care au loc n bioreactor au un caracter complex, datorit interdependenei fenomenelor de transfer cu cele biochimice. Analiza procesului trebuie s ia n considerare, pe lng reaciile biochimice propriu-zise, i fenomenele fizice cu care acestea interacioneaz i anume: curgerea, transferul de mas i transferul de cldur, prezente n orice reactor industrial. Descrierea cantitativ a acestor fenomene furnizeaz ecuaiile cu ajutorul crora bioreactorul poate fi analizat, optimizat, dimensionat, reglat. Pentru a micora riscul n procesul de realizare la scar industrial a unui proces biotehnologic stabilit n laborator, este necesar construirea unei instalaii pilot care s furnizeze informaii intermediare i foarte utile pentru proiectul industrial; trecerea de la model la producie poate fi adesea uurat cu ajutorul teoriei similitudinii. Aceasta stabilete criterii care permit calcularea mrimilor fizice ale sistemului la scar mare, bazat pe rezultatele obinute n modelul experimental, la scar mic. Pentru fiecare proces elementar, factorii determinani pot fi inclui ntr-un numr caracteristic, denumit criteriu de similitudine; acesta trebuie s rmn constant pentru ca procesul la nivel industrial s se desfoare n mod similar cu procesele de laborator i pilot. Dac aceast similitudine este asigurat, atunci, rezultatele care sau obinut n laborator sau pilot pot fi utilizate pentru proiectarea reactorului industrial. nainte de alegerea modului de operare (discontinuu, continuu, semicon-tinuu), a tipului, a mrimii i a condiiilor de operare, este necesar o alegere preliminar a tipului de reactor n funcie de microorganismul utilizat, mediul de cultur i de caracteristicile procesului biochimic. Alegerea tipului de bioreactor se efectueaz n momentul n care bioprocesul se afl nc n faza de cercetare, de obicei n perioada de experimentare la nivel pilot.

CONCEPTE DE BAZ N OPERAREA BIOREACTOARELOR Exist dou sisteme majore de cultivare a microorganismelor care s-au impus cu timpul n domeniul biotehnologiei: n sistem submers; n culturi de suprafa. n cazul cultivrii microorganismelor n sistem submers, mediul de cultur este lichid, agitat i aerat; din punct de vedere al continuitii procesului, se disting trei moduri de operare: discontinuu, semicontinuu i continuu. Operarea n sistem discontinuu, adic n arje (sistem batch). Cultivarea ncepe la timpul t = 0 i se termin la timpul t = t'. La nceput, proliferarea celulelor are loc n condiii nelimitative. Dup ce s-a atins densitatea maxim n celule are loc operarea n condiii limitative de substrat. Substratul se refer la unul dintre nutrieni (sursa de carbon, sursa de azot etc.) sau la oxigen. n particular, pentru oxigen, care este consumat foarte rapid, o aprovizionare continu n mediu este posibil, astfel nct concentraia sa s nu scad sub o valoare critic specific microorganismului. Operarea n sistem discontinuu se noteaz DC, fiind reprezentat grafic astfel:

n cazul acestui tip de operare avem regimul de circulaie amestecare perfect, caracteristic fiind n aceast situaie uniformitatea valorilor concentraiei, temperaturii n spaiul bioreactorului i, n general, a tuturor parametrilor care influeneaz bioprocesul. Operarea n sistem semicontinuu (extended culture operation"). n acest caz, reactorul este astfel operat nct concentraia substratului limitativ este pstrat constant prin aprovizionarea sa continu (fed batch"). Se noteaz SC i se reprezint grafic astfel:

Operarea n sistem continuu (continuous operation"). Aceasta presupune alimentarea continu cu nutrieni i n acelai timp evacuarea din reactor a unei cantiti echivalente de mediu de cultur. Cultivarea continu poate fi realizat n dou tipuri de reactoare ideale: R i D. Pentru reactorul R (cu recirculaie) se impune amestecare perfect, deci un grad foarte mare de omogenitate, iar n cazul reactorului D (cu deplasare) se consider o curgere tip piston.

Reprezentarea schematic a reactoarelor R i D. n modelul cu deplasare ideal, D, elementele dintr-o seciune transversal, o dat intrate n reactor, se deplaseaz prin translaie n direcie axial prin reactor; nu exist elemente de fluid care s depeasc alte elemente de fluid. Cantitativ, acest model se exprim prin constana vitezei fluidului n seciunea transversal. Un alt criteriu care st la baza clasificrii bioreactoarelor este regimul termic Pentru reactoarele chimice, se pot practica urmtoarele regimuri: - izoterm: au loc schimburi de cldur cu exteriorul, temperatura rmnnd constant; - adiabat: nu au loc schimburi de cldur cu exteriorul; - neizoterm-neadiabat: au loc schimburi de cldur cu exteriorul, iar temperatura n reactor nu este constant; - programat: se modific regimul termic, astfel nct s se ating un optim dorit; -autoterm: reactorul se susine singur din punct de vedere termic. Reaciile chimice pot fi exoterme, cu degajare de cldur (IR < 0) sau endoterme, cu absorbie de cldur din mediul exterior (Ir> 0). Reaciile chimice exoterme pot fi conduse n oricare din regimurile termice specificate, pe cnd cele endoterme nu pot fi operate autoterm. Reaciile biologice sunt exoterme, indiferent de microorganismul utilizat, de condiiile de lucru sau de produii obinui. Dei cantitatea de cldur degajat n urma proceselor biologice este mic n comparaie cu cea degajat n procesele chimice, nu trebuie neglijat deoarece materialul biologic (microorganisme, enzime) este foarte sensibil la variaiile de temperatur. CARACTERIZAREA BIOREACTOARELOR 1. Bioreactorul discontinuu Bioreactorul discontinuu este caracterizat prin amestecarea ideal a mediului de cultur i prin operarea n arje: se ncarc componentele mediului, se inoculeaz, iar dup un interval de timp determinat se descarc mediul de fermentaie coninnd produii de biosintez. 2. Bioreactorul continuu

n cazul cultivrii continue, prelungirea fazei de cretere exponenial un timp nedefinit se realizeaz prin adugarea continu n reactor a unei soluii de mediu proaspt cu un debit volumetric i eliminarea continu a biomasei cu acelai debit, astfel nct volumul biomasei din fermentator s rmn constant. Pentru stabilirea ecuaiei ce genereaz dezvoltarea microorganismelor, trebuie s se in seama de faptul c variaia concentraiei biomasei este datorat existenei a dou fenomene antagoniste: -creterea numrului microorganismelor datorit dezvoltrii populaiei -scderea cantitii de microorganisme datorit eliminrii lor din sistem. 3. Bioreactorul cu recirculare extern In unele cazuri, mediul de fermentaie de la ieirea din bioreactor este supus unei operaii de separare (prin centrifugare, filtrare, sedimentare), iar concentratul coninnd biomasa se recircul parial n bioreactor. Ecuaiile ce guverneaz acest proces se bazeaz pe aplicarea bilanurilor de materiale pentru biomas i substrat. Notm cu r raportul de recirculare i presupunem aceeai concentraie a substratului i a produsului n debitul de alimentare i n cel de evacuare.

Reprezentarea schematic a bioreactorului cu recirculare. Bilanul de materiale pentru biomas se scrie astfel: Biomas intrat + Biomas existent + Biomas generat = = Biomas rmas + Biomas ieit. 4. Bioreactorul ideal cu deplasare (D) (curgere tip piston) Reactoarele cu amestecare, operate discontinuu sau continuu sunt tipurile de bioreactoare cel mai frecvent ntlnite n biotehnologie. Exist ns situaii n care se utilizeaz i reactoarele tubulare (cu diametrul mult mai mic dect lungimea), acestea avnd urmtoarele avantaje: construcie simpl, fr zone stagnante; n acest caz ridicarea la scar industrial se realizeaz mai uor, fr riscuri; se poate regla durata de staionare a celulelor n bioreactor, astfel nct conversia substratului s fie mai mare i concentraia produsului finit mai mare;

 spumarea este mai mic; eforturile de forfecare sunt mai mici, deci distrugerea pereilor celulelor este mai mic. Reactorul cu o curgere tip piston este caracterizat prin existena unui profil plan de viteze n seciune perpendicular pe direcia de deplasare a fluidului (axa reactorului). Aceasta este o idealizare, deoarece implic o amestecare radial infinit i lipsa amestecrii axiale.

Reprezentarea schematic a reactorului cu deplasare. Operarea bioreactoarelor n culturi extinse (cu adaosuri) n afara modalitilor de operare a bioreactoarelor, expuse anterior, n practica biotehnologic se folosete cu succes i tehnica adugrii n bioreactor a unuia sau a mai multor substraturi, n timpul cultivrii, fr eliminare de biomas (fermentaie cu adaosuri), numit i cultur extins sau operare n sistem semicontinuu. Acest tip de cultivare se situeaz ntre cultivarea n arj" i cea continu. Caracteristicile celor trei tipuri de operare: n arj: concentraia substratului scade; continuu: concentraia substratului este constant; semicontinuu: concentraia substratului se menine constant o perioad, dup care scade. Avantajele sistemului de operare semicontinuu sunt urmtoarele: -prin alimentarea mediului n timpul cultivrii se obin rezultate superioare n productivitate fa de sistemul discontinuu; -n cazul n care se utilizeaz nutrieni cu proprieti inhibitoare (metanol, etanol, acid acetic), prin meninerea concentraiei acestora ntre anumite limite se poate obine o scurtare a perioadei de latenta i micorarea efectului inhibitor al substratului; -este posibil obinerea unor concentraii mai mari de biomas (circa 50 g/l) prin adugarea de substrat. -n cazul n care se dorete obinerea unor concentraii foarte mari de biomas (circa 100 g/l), sunt necesare concentraii ridicate de nutrieni, ceea ce determin apariia unui efect de inhibiie. Astfel intervine aa-numita represie catabolic", care apare Ia utilizarea unor surse de carbon i energie uor metabo-lizabile (glucoza) i care const n represia enzimelor implicate n biosintez datorit acumulrii unei

cantiti mari de ATP n celul. Pentru a micora acest efect se adaug treptat glucoza.

Bibliografie
Albert Sasson - Biotehnologii i dezvoltare, Editura Tehnic, 1993 Nicolae Botnariuc, Anchelu Vdineanu - Ecologie, Editura Didactic i Pedagogic, 1985 http://dbb.pub.ro/masterat/biotehnologie/masterat-biotehnologie/ cursuri/sisteme-productive-biotehnologie