Sunteți pe pagina 1din 109

Microbiologie medical

Definiii
Microbiologia = tiina care se ocup cu studiul microorganismelor.

Microorganism = organism unicelular care poate fi pus n eviden numai cu ajutorul microscopului optic sau electronic.

Obiective instructionale ale microbiologiei medicale


Principalul obieciv - Invaarea viitorului medic de a vedea microorganismele cu ochii minii i s raioneze microbiologic; - S tie unde i ce fel de microorganisme sunt prezente (pe i n corpul uman, pe i n elemente ale ambientului) - Care sunt cile prin care aceste microorganisme ajung dintr-un loc n altul i ce urmri poate avea aceast contaminare

Obiective instructionale ale microbiologiei medicale


-

S cunoasc riscurile contaminrii microbiene n practica medical i chirurgical S neleag rolul microorganismelor n condiionarea strii de sntate i boal

S neleag etiopatogenia bolilor infecioase

Obiective instructionale ale microbiologiei medicale


-

s-i nsueasc deprinderi pentru :


- Prevenirea contaminrii microbiene n raport cu diferitele condiii de risc ntlnite n practica medical i chirurgical; - Recoltarea corect a produselor patologice n vederea diagnosticului etiologic i s poat aprecia semnificaia clinic a unui microorganism observat sau izolat dintr-un produs patologic n condiii clinico-epidemiologice definite; - Iniierea i monitorizarea corect a terapiei antimicrobiene.

Istoric

sute de ani existena microbilor a fost bnuit dar prezena lor a putut fi documentat doar odat cu apariia microscopului;

Istoric

1665, Robert Hooke, un tnr cercettor englez, a fost primul care a vzut i descris fungii cu ajutorul unui microscop rudimentar.

Istoric

n 1673 Antonius van Leeuwenhoek, cercettor olandez, a observat primele microorganisme tot la un microscop propriu, rudimentar. Este considerat printele microbiologiei

Istoric

Desenele cu animalculi publicate la Londra n 1784 au zdruncinat lumea tiinific de atunci. A fost pentru prima dat cnd bacteriile au putut fi vzute.

Teoria generaiei spontane

Francesco Redi, un filosof italian, a artat c viermii nu se nasc spontan din carne ci din oule depuse de mute.

Teoria generaiei spontane

John Needham, un preot englez, susinea c moleculele inerte din lichidele biologice se pot grupa formnd animaliculi Lazaro Spallanzani, n 1765, a demonstrat c un bulion fiert, lsat n contact cu aerul, dup cteva zile se tulbur, dar rmne limpede dac balonul este nchis.

Combaterea teoria generaiei spontane

n 1859 chimistul francez Louis Pasteur discrediteaz definitiv aceast teorie prin conceperea balonului cu gt de lebd n care aerul nu avea acces i bulionul fiert putea fi pstrat indefinit fr ca n el s se devolte microorganisme.

Combaterea teoriei generaiei spontane

Istoric

Consecinele acestor experimente au fost:


imaginarea primului mediu de cultur pentru bacterii bulionul de carne - folosit i astzi; elaborarea unor metode simple de dezinfecie (distrugerea tuturor microorganismelor dar nu i a sporilor); introducerea conceptului manipulrii aseptice a obiectelor, produselor patologice, etc. (la adpost de microorganisme);

Intemeietorii microbiologiei:

Luis Pasteur (1822-1895) - Pune bazele sterilizrii i metodicii lucrului aseptic. - Descoper natura microbian a proceselor de
fermentare anormal a vinului. Face legatura ntre bolile vinului i unele boli infecto-contagioase la animale i om. Descoper numeroi ageni etiologici ai acestora. Realizeaz vaccinuri prin inactivarea sau atenuarea patogenitii unor microorganisme (rabie, antrax, holera ginilor).

Istoric

n 1776, Edward Jenner, medic englez, realizeaz prima vaccinare experimental mpotriva variolei. In prezent, variola este singura boal infeioas eradicat.

Istoric

n 1841, cu 30 de ani nainte de formularea teoriei germenilor, Ignaz Semmelweis introduce pentru prima dat n lume splatul pe mini i folosirea halatelor curate n maternitatea pe care a condus-o la Viena (prima aplicaie practic a antisepsiei).

Teoria germenilor

n anii 1870, Robert Koch, medic german, a evideniat agentul etiologic al antraxului, holerei i tuberculozei; a introdus mediile solide n practica microbiologic.

Robert Koch (1843-1910)

- A examinat microorganismele n preparate -

fixate prin caldur i colorate cu colorani bazici. A introdus mediile solide n practica diagnosticului microbiologic. A reprodus experimental boli infecioase prin inocularea agentului etiologic la animale de laborator.

Robert Koch
A descris secvene experimentale pentru susinerea relaiei cauzale ntre un microorganism i manifestrile de boal - (postulatele lui Koch):

1)

microorganismul care a determinat boala este depistat la toi bolnavii iar distribuia n organism corespunde leziunilor caracteristice bolii; microorganismul care a determinat boala poate fi izolat n cultur pur i subcultivat pentru a fi studiat; cultura pur inoculat la un animal receptiv reproduce boala cu leziuni specifice de unde poate fi reizolat.

2) 3)

Istoric

Chirurgul englez Joseph Lister a folosit principiile antiseptizrii i asepsiei i a redus, n 1860, la 15% mortalitatea datorat interveniilor chirurgicale.

Alte descoperiri importante:


1884 - Cristian Gram dezvolt o metod de colorare i difereniere a bacteriilor; 1887 - Petri realizeaz plcile Petri; 1892 - Ivanovski descoper virusurile; 1910 - Paul Ehrlich descoper salvarsanul primul chimioterapic folosit n terapia sifilisului;

Alte descoperiri

1928 Alexander Fleming descoper penicilina; 1977 Gilbert i Sanger secvenializeaz ADN-ul; 1983 Mullis pune bazele reaciei de amplificare genic (PCR); 1983 Luc Montaigner i Robert Gallo descoper HIV; Microbiologi romni: Victor Babe, (1854-1926, coautor la primul tratat de bacteriologie) i Ion Cantacuzino (1863-1934, creatorul colii de microbiologie n Romnia).

Lumea microorganismelor

Microorganisme cu structur celular:

Eucariote (regnul Eucaryota), constituite din celule


cu structur evoluat: fungi i protozoare;

Procariote (regnul Procaryotae), constituite din

celule cu structur primitiv: bacterii i alge albastreverzi.

Entiti acelulare, la limita viului: virusuri (strict parazite intracelular), viroizi, prioni.

Clasificarea bacteriilor
1. 2.

3.

Clasificarea fenotipic; Clasificarea analitic; Clasificarea genotipic; Taxonomie: clasificarea sistematic a bacteriilor n grupe ordonate.

Clasificarea fenotipic

Dup afinitatea tinctorial:


Gram pozitive; Gram negative;

Dup form:
Sferice sau ovalare coci; Alungite bacili; Virgul vibrioni; Spiralate spirochete;

Coloratia Gram

Clasificarea fenotipic
Dup caracterele de cultur: Hemoliza, pigmentogeneza, forma, mrimea coloniilor, mirosul degajat de o cultur; Dup prezena sau absena unor markeri biochimici specifici. Serotipare: anticorpii formai fa de antigenele bacteriene unice pot fi folosii pentru identificarea lor. Dup comportamentul fa de antibiotice (patern de rezisten).

Clasificarea analitic
Regn ordin familie gen- specie subspecie. Ex. Ordin: Eubacteriales Ex. Familie: Enterobacteriaceae Ex. Gen: Escherihia Ex. Specie: Escherihia coli Ex. Subspecie: Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum

Clasificarea genotipic
Analiza materialului genetic: Raportul guanin citozin Hibridizarea ADN Analiza secvenelor nucleotidice Analiza plasmidelor Ribotipare Analiza ADN-ului cromosomal.

Denumirea tiinific

Primul cuvnt majuscul = genul ex.

Staphylococcus, Enterococcus, Escherichia


Al doilea cuvnt descrptiv pentru specie S. Aureus,

S. Capitis Familia , ordinul si clasele (italice) sunt difereniate prin sufixe Enterobacteriaceae, Spirochaetales, Mollicutes Denumiri comune : meningococ, stafilococ, bacilul Koch

Lumea microorganismelor

Bacteriile au dimensiuni cuprinse ntre 1 i 10 m i sunt observate la microscopul optic.

Structura celulei bacteriene

Structuri constante material nuclear sau nucleoid citoplasm membran citoplasmatic perete celular Structuri facultative glicocalix flageli pili comuni (fimbrii) i pili sexuali endospor

Structura celulei bacteriene schematic

STRUCTURA BACTERIILOR

STRUCTURI ESENTIALE:
Materialul nuclear Citoplasma

Membrana citoplasmatica
Peretele bacterian (exceptie:

Mollicutes - Mycoplasma)

Material nuclear

echivalentul nucleului celulelor eucariote, fr membran nuclear i nucleol; molecul circular unic de ADN (1000-2000

m) cu structur bicatenar complementar i antiparalel; pentru a ocupa un spaiu ct mai redus, dublul helix este rulat n sens negativ sub efectul ADNgirazei; unele bacterii au n citoplasm plasmide, molecule mici circulare de ADN care confer avantaje selective (e.g. rezistena la antibiotice, producerea de toxine, etc.)

Material nuclear

funcii:
- reprezint suportul genetic al caracterelor ereditare; transmite informaia genetic la celulele fiice prin autoreplicare; transmite informaia ctre ribozomi prin heteroreplicare;

Cromozomul bacterian i plasmidele

STRUCTURI ESENTIALE:
Materialul nuclear Citoplasma

Membrana citoplasmatica
Peretele bacterian (exceptie:

Mollicutes)

Citoplasma
hidrogel coloidal ce prezint: - o faz dispersant ce conine ap, substane organice i sruri anorganice; - o faz dispersat reprezentat de: ribozomi, mai mici dect la celulele eucariote (50S i 30S), sediul sintezei proteice; incluzii, acumulri de substane organice sau anorganice prezente la unele bacterii (reprezint depozite de nutrieni; pot avea carcater taxonomic e.g. granulaiile de volutin prezente la Corynebacterium diphteriae).

Ribozomii

Ribozomii

Sintetizarea proteinelor

STRUCTURI ESENTIALE:
Materialul nuclear Citoplasma

Membrana citoplasmatic
Peretele bacterian (excepie:

Mollicutes - Mycoplasma, Ureaplasma).

Membrana citoplasmatic

mrginete la exterior citoplasma; constituit din dou straturi fosfolipidice n


care floteaz molecule proteice;

nu conine steroli (excepie micoplasmele);

Membrana citoplasmatic

Membrana citoplasmatic la b.g.n.

Membrana citoplasmatic

funcii:

- barier osmotic, cu proprieti de permeabilitate

i transport selective; - sediul metabolismului energetic (analogul funcional al mitocondriilor); - include enzime implicate n sinteza unor structuri celulare; - rol n chimiotaxie; - structura i funcionalitatea pot fi afectate de unele antibiotice i dezinfectante.

STRUCTURI ESENTIALE:
Materialul nuclear Membrana citoplasmatica

Citoplasma
Peretele bacterian (excepie: nu

este prezent la Mollicutes)

Peretele celular

structur particular celulelor procariote; nvelete protoplastul n contact intim cu

membrana citoplasmatic; structura sa diferit condiioneaz comportamentul bacteriilor n coloraiile difereniale: Gram i Ziehl-Neelsen; peptidoglicanul sau mureina reprezint constituentul de baz, constant prezent la bacterii (excepie chlamidiile i micoplasmele).

Compoziia peretelui dicteaz comportamentul diferit in coloraia Gram

Coloraia Gram
Gram negativ (roii) Gram pozitiv (violet)

Bacterii Gram pozitiv Streptococcus (coci sferici, n lanuri)

Bacterii Gram negativ b.g.n.


(Ex. Escherichia, Salmonella) (b.g.n., celule inflamatorii)

Coloraia Ziehl- Neelsen (b.a.a.r i ne-a.a.r.)

Structura peptidoglicanului

reea macromolecular alctuit din lanuri glicanice

legate prin puni peptidice; este mai bine reprezentat cantitativ la bacteriile grampozitive; lanurile glicanice sunt formate din alternana a dou aminozaharuri: N-acetilglucozamina i acidul Nacetilmuramic; lanurile tetrapeptidice constituite din alternana unor aminoacizi n forma L sau D se leag de gruprile carboxil ale acidului N-acetilmuramic ; la bacteriile gram-pozitive unitile tetrapeptidice ale lanurilor glicanice adiacente sunt legate prin puni transversale polipeptidice.

Peptidoglicanul - BGN bidimensional; puntea pentaglicanica, BGP tridimensional; puni polipeptidice

Reeaua macromolecular alctuit din lanuri glicanice legate prin puni peptidice

L-alanine D-glutamic acid L-lysine/Diaminopimelic acid D-alanine D-alanine

Peptidoglycan

Muramic acid

Glucosamine

Sinteza peptidoglicanului controlat de enzime de pe suprafaa extern a membranei citoplasmatice (sunt proteinele de legare ale penicilinei PLP analog strutural de D-ala-D-ala, se fixeaz pe PLP si inhib sinteza peptidoglicanului) - transglicozilazele, leag cele 2 zaharuri; - transpeptidazele, catalizeaz formarea subunitilor i punilor peptidice structuri care conin dipeptidul D-alanin-D-alanin. - Penicilina se fixeaz pe PLP si inhib sinteza peptidoglicanului penicilina face parte dintre antibioticele care acioneaz asupra bacteriilor prin distrugerea peretelui.

Funciile petidoglicanului

structur rigid i rezistent, previne explozia


protoplastului n medii hipotone echilibreaz presiunea osmotic intracelular (5-20 atm); confer forma stabil caracteristic: coci, bacili, cocobacili, spirili, spirochete; particip la diviziunea celular; reprezint inta de aciune pentru lizozim i unele antibiotice.

Interes medical
sensibilitatea la lizozim; este inta unor antibiotice active asupra peretelui bacterian (e.g. penicilinele); are proprieti antigenice i de adjuvant imunologic.

Forma bacteriilor

Structuri speciale ale peretelui la bacterii gram-pozitive

acizi teichoici (legai de peptidoglican) i acizii


lipoteichoici (legai de membrana citoplasmatic)

polizaharide neutre (e.g. antigenele Lancefield la


streptococi)

proteine de suprafa cu funcie de


legare la fibronectin etc)

- adezine (implicate n ataare) sau cu - efect antifagocitar (proteina M, proteina A, proteine de

Structuri speciale ale peretelui la bacterii gram-pozitive


Acizi teichoici (legai de peptidoglican) i lipoteicoici (legai de membrana citoplasmatic) apar ca structuri fibrilare pe
suprafaa celulei FUNCII: Ag de specificitate; leag ioni de Mg i enzime autolitice; se ataeaz de suprafaa celulelor eucariote (factori de ataare/colonizare); se leag de receptori de pe suprafaa macrofagelor, cu eliberare de citokine proinflamatorii; prezint receptori pentru bacteriofagi (virusuri ale bacteriilor) sau bacteriocine (antibiotice produse de bacterii);

Peretele bacteriilor Gram (+)

Structuri speciale ale peretelui la bacterii gram-negativ


1.

Membrana extern
LPS (lipopolizaharidul) Lipoproteine Spatiul periplasmic

2.

3.

4.

Peretele bacteriilor Gram (-)

1. Structuri speciale ale peretelui la bacterii gram-negativ - membrana extern

Membrana extern reprezentat de 2 straturi asimetrice din fosfolipide i lipopolizaharide:

Straturile asezate in sandwich se privesc prin


polul hidrofob

Stratul extern care include LPS Stratul intern

Sunt traverasate de molecule proteice (porine,


proteine de transport, enzime)

Molecule proteice care traverseaza membrana externa a BGN

porine, molecule proteice n triplet, care formeaz pori pentru pasajul unor molecule hidrofile;
proteine cu rol n transportul specific al unor molecule (vit. B12, aa, nucleozide); proteine receptor pentru complexul Fe-siderofor, pentru bacteriofagi sau bacteriocine; proteine cu rol n patogenitate (adezine sau cu efect antifagocitar).

Structuri speciale ale peretelui la bacterii gram-negativ - membrana extern

Membrana extern oprete accesul spre protoplast a unor substane cu greutate molecular mare i a unor molecule hidrofobe potenial nocive.

In consecin, bacteriile gram-negative sunt mai rezistente dect cele gram-pozitive la dezinfectante, antiseptice, antibiotice.

2. Structuri speciale ale peretelui la bacterii gram-negativ - LPS


LPS (lipopolizaharidul), molecul complex cu trei regiuni: lipidul A (endotoxina);

core (miez polizaharidic) sau Ag R Ag O, cu specificitate de grup, format din


uniti oligozaharidice repetate - efect antifagocitar

3. Structuri speciale ale peretelui la bacterii gram-negativ - Lipoproteinele

Lipoproteine leag membrana extern de peptidoglican

4. Spaiul periplasmic

situat ntre membrana extern i membrana


citoplasmatic;

conine peptidoglican, lipoproteine, proteine de


degradare a unor antibiotice);

transport i enzime degradative (hidrolaze, enzime de

enzimele stocate n spaiul periplasmic sunt

eliberate dup necesiti in mediul extracelular, spre deosebire de bacteriile gram-pozitive care le elibereaz imediat dup ce au fost sintetizate.

Structuri speciale ale peretelui la bacterii a.a.r.

arabinogalactan, polizaharid cu unele proprieti ale endotoxinei; acizi micolici acizi grai cu catene lung (C70-C90) Complexul arabinogalactan acizi micolici confer:

lipide de suprafa (sulfolipide, fosfolipide, cord factor), cu rol in

patogenitate; complexul lipo-arabinoglican si fosfolipide, induce reacia tisular caracteristi (formarea de granuloame, metaplazierea macrofagelor n celule gigante (celule Langhans) i celule epitelioide)

comportarea particular n coloraia Ziehl-Neelsen; rezistena la factori de mediu (desicaie, dezinfectante, antibiotice);

micozide (sunt peptidoglicolipide, glicolipide), formeaz la exterior un


nveli, care contribuie la supravieuirea in celule fagocitare (rezistent la enzimele lizozomale din fagolizozomul macrofagelor) sunt bacterii facultativ intracelulare.

Bacterii cu perete defectiv = forme L


apar spontan sau sub efectul unor ageni inductori (oc
osmotic sau termic, antibiotice) sau sub efectul unor ageni inhibitori ai peptidoglicanului (lizozim, antibiotice); pot supravieui n medii hipertone (soluii zaharoz 20%, urin), pot fi metabolic active dar nu pot s se multiplice; sferoplati (pstreaz urme de perete) i protoplati (complet nud)

sferoplatii, n absena agentului inductor, pot reveni la forma de origine. pot s se multiplice (mai lent), dnd colonii cu aspect particular (aspect de ou prjit); pot fi reversibile sau stabile.

Consecine
Este posibil ca n medulara renal, sub efectul unor antibiotice beta-lactamice s apar sferoplati care pot explica recderi ale infeciei renale dup ntreruperea antibioterapiei.

Structura celulei bacteriene

Structuri constante material nuclear sau nucleoid citoplasm membran citoplasmatic perete celular Structuri facultative glicocalix flageli pili comuni (fimbrii) i pili comuni endospor

Glicocalix

a treia structur de nveli, constiuit din polizaharide ( la Bacillus anthracis structur polipeptidic); se prezint sub dou forme: o capsula (glicocalix dens: nu poate fi separat prin centrifugare, nu este
penetrat de colorani, deci este vizibil doar in coloraii negative cu tu de India sau nigrizin) particule colorate vizibil in ME, dup coloraii speciale rou ruteniu)

o glicocalix lax (slime: poate fi separat prin centrifugare, este penetrat de

funcii: confer rezisten la fagocitoz i ageni chimici (antibiotice); ligant la receptorii de pe suprafaa celulelor eucariote sau suprafee inerte; Ag de specificitate (Ag K).

Structura celulei bacteriene

Structuri constante material nuclear sau nucleoid citoplasm membran citoplasmatic perete celular Structuri facultative glicocalix flageli pili comuni (fimbrii) i pili comuni endospor

Flageli
structuri filamentoase lungi i subiri, de natur proteic (flagelina); constituii din filament flagelar flexuos, articulat printr-un croet la corpusculul/complexul bazal - cilindru axial asociat cu unul sau dou perechi de inele (la gram-pozitivi: inelul M si S, respectiv gram-negativi: inelele M si S, la care se adaug P i L); M- flotant in ME, S supramembranar; P n stratul de peptidoglican; L flotant n ME numrul i dispoziia flagelilor reprezint un caracter taxonomic; confer mobilitate bacteriilor (bacili, vibrioni, spirili, spirochete); prezint Ag cu specificitate de tip (Ag H).

FLAGELI (ME)

Structura celulei bacteriene

Structuri constante material nuclear sau nucleoid citoplasm membran citoplasmatic perete celular Structuri facultative glicocalix flageli pili comuni (fimbrii) i pili sexuali endospor

Fimbrii (pili comuni)

structuri fibrilare , mai scurte dect flagelii, prezeni pe toat suprafaa unor bacterii gram-negative; codificate plasmidic; constituite din subuniti proteice (pilina); ader la receptori specifici celulari (importani factori de colonizare); pot funciona ca Ag specifice.

Pili sexuali
structuri fibrilare n numr mai redus, cu extremitatea liber butonat; au rol n transferul ADN prin conjugare.

Structura celulei bacteriene

Structuri constante material nuclear sau nucleoid citoplasm membran citoplasmatic perete celular Structuri facultative glicocalix flageli pili comuni (fimbrii) i pili sexuali endospor

Endospor
celul bacterian inactiv metabolic, cu citoplasma deshidratat, protejat de structuri de suprafa suplimentare (cortex, tunic, exosporium); protoplastul deshidratat conine cantiti mari de dipicolinat de Ca (confer termorezistena); sporul este deosebit de rezistent la factori de mediu (ageni fizici i chimici); prezena, forma i dispoziia sporului constituie criteriu taxonomic; poate germina n condiii favorabile de mediu, genernd bacteria de origine.

Sporularea versus germinarea

Sporularea -transformarea bacteriei n spor n stare deshidratat, supravieuire ndelungat.

Condiii favorabile germinarea: este activat o autolizin a cortexului; apa i nutrienii difuzeaz spre protoplast rehidratare ruperea nveliurilor sporale eliberarea bacteriei sub form vegetativ.