Sunteți pe pagina 1din 18

IV.

BAZELE MOLECULARE ALE EREDITII Acizii nucleici Cromozomii, n care sunt localizate genele, sunt nite structuri cu caracter molecular, alctuite dintr-un mare numr de elemente de natur chimic diferit. Aproximativ 90% din masa total a cromozomilor o constituie aa-numitul complex nucleo-histonic, format din acid dezoxiribonucleic (ADN) i proteine histonice. n afar de aceasta, n componena cromozomilor mai intr i mici cantiti de proteine bazice, de lipide, acizi ribonucleici (ARN) i cationi ai unor metale (calciu, magniu . a.). S vedem, ce funcii ndeplinesc fiecare dintre aceste componente i care molecule sunt nzestrate cu proprieti ereditare. La dezvoltarea cunotinelor despre moleculele ereditare o mare contribuie a adus remarcabilul savant N.C.Colov. nc n anul 1927 el a emis o serie de ipoteze i presupuneri n legtur cu natura chimic a substanei responsabile de pstrarea, transmiterea i realizarea capacitilor ereditare (genetice) ale organismelor. Colov a exprimat aceste idei privind mecanismul care asigur continuitatea materialului ereditar prin formula: Omnis molecula ex molecula: Fiecare molecul provine din alt molecul. Ctre acest timp, datorit lucrrilor lui Morgan, i-a ctigat ncredere unanim ideea c genele sunt aranjate ntr-o ordine strict determinat n cadrul structurilor liniare cromozomale. Dar structura molecular a cromozomilor rmnea complet necunoscut. Pornind de la raionamente pur logice, Colov a ajuns la concluzia c fiecare cromozom conine dou molecule gigantice absolut identice. El a fcut presupunerea, c aceste molecule ereditare sunt nite proteine. Mai mult, el a propus i explicaia mecanismului de autodublare a moleculelor ereditare, mecanism care a fost demonstrat pe cale experimental abia peste 30 de ani. Conform opiniei lui Colov, la diviziunea celulelor trebuie s aib loc procesul de formare pe baza moleculei deja existente a unei a doua molecule identice cu prima. n aceast privin Colov s-a dovedit a fi un adevrat profet, dei ideea despre natura proteic a materialului ereditar era greit. Mult timp mai trziu a devenit cunoscut faptul c informaia ereditar se conine n moleculele acizilor nucleici. Ce reprezint acizii nucleic? Primele cercetri asupra acizilor nucleic au fost ntreprinse n anul 1868 de ctre tnrul savant elveian F. Miescher. n laboratorul lui E. Hoppe-Zeiller - cunoscut biochimist german el s-a ocupat de studierea compoziiei nucleelor leucocitelor. Miescher a

reuit s extrag din acestea o substan bogat n fosfor, pe care a numito nuclein (de la latinescul nucleus - nucleu). Cercetrile ntreprinse ulterior au artat, c nucleina nu este o substan simpl, ce un compus complex, alctuit din protein i acid nucleic. Dat fiind faptul c la acel timp proteinele erau cunoscute, chimitii iau propus s extrag din nuclein cellalt component al ei - acidul nucleic n vederea studierii compoziiei acestuia. n 1871 au fost publicate rezultatele cercetrilor iniiale asupra nucleinei, de aceea, n mod formal, acest an este considerat drept anul descoperirii unei noi clase de compui organici - acizii nucleici. n anul 1889 chimistul Altmann a obinut pentru prima oar acid nucleic n stare pur din drojdie, fapt ce l-a determinat s-l numeasc acid nucleic de drojdie. Peste trei ani alt chimist, pe nume Lilienfeld, din timusul unui viel a extras un alt acid nucleic, care avea o compoziie ntructva diferit i pe care l-a numit acid timonucleic. Cercetri ntreprinse n continuare au artat c acidul nucleic de drojdie este prezent n diferite organe i esuturi ale plantelor, animalelor i omului, n special n citoplasma celulelor. Din aceast cauz i s-a dat numele de acid nucleic citoplasmatic. Cel de-al doilea acid nucleic, ns, s-a putut extrage numai din nucleele celulelor i a fost numit acid nucleic nuclear. Aceste denumiri ale acizilor nucleici s-au pstrat pn ce ei au fost supui unei analize mai minuioase. Dup cum s-a putut constata, ambii acizi, n ce privete compoziia chimic, seamn unul cu altul, dei exist i anumite deosebiri. Structura primar a ambilor acizi nucleic este compus dintr-un numr mare de monomeri - aa-numitele nucleotide - care, la rndul lor, constau din trei componente diferite: un hidrat de carbon (zahr), acid fosforic i o baz azotat. Nucleotidele se disting dup compoziia hidratului de carbon i a bazelor azotate. Astfel, nucleotidele acidului nucleic citoplasmatic conin riboz, iar cele ale acidului nucleic nuclear conin un alt glucid dezoxiriboz. n legtur cu aceasta savanii au nceput s denumeasc acizii nucleici nu n dependen de localizarea lor n celul (nucleic, citoplasmatic), c dup glucidul, care intra n componena lor i anume acidul dezoxiribonucleic (prescurtat ADN) i respectiv acidul ribonucleic (prescurtat ARN). Din componena ADN fac parte urmtoarele patru baze azotate: adenina (A), guanina (G), ctozina (CE) i timina (T), iar ARN conine adenin, guanin, citozin i uracil (U). n ce const rolul genetic al acizilor nucleic? Funcia genetic a acizilor nucleic a fost relevat experimental pentru prima oar n anul 1944 de ctre O. Avery, C. Mac-Leod i M. Mac-Carty. Introducnd ntr-o cultur de 3

pneumococi ncapsulai ADN, ei au reuit s le induc un nou caracter apariia capsulei. n esen, avea loc transformarea unei forme de pneumococi n alta. Dup stabilirea rolului pe care l joac ADN n procesul transformrii pneumococilor experiene similare au fost nfptuite i cu alte bacterii. S-a putut constata c, cu ajutorul ADN-ului extras din unele bacterii se pot determina la altele nu numai modificri n caracterele externe (de exemplu, formarea de capsule sau cili), ci i n proprietile lor biologice, bunoar, rezistena la antibiotice (penicilin, streptomicin), la diferite substane medicamentoase (sulfatizol, sulfonamid), precum i capacitatea de a sintetiza aminoacizi (lizin) i vitamine (B12). Moleculele de ADN ating dimensiuni gigantice i, de regul, sunt formate din dou catene, n timp ce moleculele de ARN au o mas molecular mult mai mic i sunt formate dintr-o singur caten. n anul 1953 pe baza a numeroase date, obinute prin diferite metode J. Watson i F. Crick au creat pentru prima oar un model al structurii moleculei de ADN, conform cruia ea este format din dou catene de polinucleotide unite ntre ele i rsucite, avnd aspectul unei spirale duble. Pe lng aceasta, molecula de ADN este capabil s formeze i o superspiral, adic poate cpta o astfel de configuraie care permite acestei molecule gigantice s ocupe un loc ne nsemnat n nucleele celulelor. De exemplu, n colibacil, una din bacteriile cele mai rspndite, ntreaga molecul de ADN este mpachetat ntr-o' structur, amintind un nucleu minuscul. Dac, ns, enorma molecul de acid nucleic, strns ghem, ar fi desfurat i ntins ntr-o linie dreapt, lungimea ei ar constitui un milimetru. Aceasta este de o sut de mii de ori mai mult dect diametrul nucleului n care s-a aflat instalat molecula! Cu ce este mai prejos dect un autentic fir al vieii?! Mecanismul de replicare a ADN Molecula de ADN este elementul activ, care transmite de la prini la urmai, din generaie n generaie, ntreaga informaie ereditar i aceast capacitate poate fi considerat cea mai uimitoare dintre toate capacitile cu care este nzestrat. Modelul structurii moleculei de ADN, propus de Watson i Crick, a permis s fie explicate i nelese un ir de procese biologice importante ca: mecanismul de reproducere (replicaie) a nsi moleculei de ADN, transmiterea caracterelor prin ereditate, codul genetic al sintezei proteinelor, cauzele variabilitii organismelor . a. m. d. Despre toate acestea vom vorbi n continuare. T. Watson (n. 1928) Fr. Crick (n. 1916) 4

Probabil, c puini sunt cei care n-au auzit despre unicelulara amib. Ea se nmulete prin diviziune formnd n consecin dou celule-fiice. Fiecare dintre amibele-fiice, la rndul su, se divid iari n cte dou celule. S-a calculat c n celulele-fiice, rezultate din cea de-a 500-a diviziune, nu se mai pstreaz nici o molecul din substanele care ntrau n compoziia celulei materne primare. Dar de fiecare dat, dup aspectul exterior i nsuiri, celulele-fiice au trsturi comune cu celula matern primar: dispun de aceeai compoziie chimic i au acelai tip de metabolism. n virtutea acestui fapt, la fiecare diviziune a celulei, concomitent cu dublarea, are loc i reproducerea unei substane care conine informaia ce determin toate caracterele i nsuirile ereditare ale amibei i asigur transmiterea acestora la descenden. Aceast substan urma s posede capacitatea de a se dubla. Iat n ce mod prezentau Watson i Crick mecanismul autoreproducerii moleculei de ADN. n corespundere cu schema propus de ei, molecula rsucit sub form de spiral dubl trebuia la nceput s se desfac de-a lungul axei sale. n timpul acestui proces are loc ruperea legturilor hidrogenice dintre dou filamente care, odat ajunse n stare liber, se separ. Dup aceasta de-a lungul fiecrui filament din nucleotidele libere cu ajutorul fermentului ADN - polimeraz se sintetizeaz cel de-al doilea filament. Aici intr n vigoare legea complimentaritii n conformitate cu care la adenin, ntr-un filament comun, se alipete timina, iar la filamentul cu guanin se alipete citozina. Ca urmare, se formeaz dou molecule-fiice, care dup structur i proprieti fizice sunt identice cu molecula matern. Aceasta-i totul. E simplu, nu-i aa? La o examinare mai atent a acestui proces, ns, cercettorii au avut de ntmpinat o dificultate. Fapt este c moleculele de ADN sunt foarte lungi, fiind de aceea numite adesea molecule centimetrice. n celulele organismelor superioare, s zicem, la om, lungimea unor filamente din cromozomi atinge civa centimetri. Firete, aceasta nu nseamn deloc c molecula de ADN poate fi vzut cu ochiul liber: grosimea acestor filamente este infim-de 20-25 angstromi (1 angstrom 10-8 cm). Tocmai de aceea n munca cu acizii nucleici i este nevoie de utilizarea celor mai perfecte microscoape. Dar dac lungimea acestor molecule este att de mare, cum de reuesc ele, totui , s se dezrsuceasc n celul, fr a se nclca i n intervale foarte mici de timp? S examinm procesul de dezrsucire a ADN-ului n celulele celor mai mici organisme - a bacteriilor. Lungimea ADN-ului bacterial constituie civa milimetri. 5

Jirul (bucla) unei spirale este egal cu 34 angstromi iar intervalul de timp care se scurge ntre dou diviziuni consecutive ale celulelor bacteriene este de 20-45 minute Pentru replicarea (autoreproducerea) ADN-ului se consum mai puin de o treime din acest timp Dac, pornind de la aceste consideraii, se va calcula viteza de rotaie a capetelor moleculelor de ADN la dezrsucire, se va obine o mrime fantastic: 15000 rotaii pe minut! Se nelege de la sine c acest lucru este puin probabil. Aceasta fceau necesar elaborarea de noi modaliti pentru explicarea modului n care ADN reuete s se dubleze n intervalele de timp att de scurte. Numeroasele date confirm c n procesul diviziunii n celule se produce o repartizare exact n pri egale a ADN-ului ntre celulele-fiice. Cum se produce acest fenomen? n principiu n celulele-fiice sunt posibile trei ci diferite de diviziune a ADN-ului: calea conservativ, calea semiconservatic i calea dispers. n caz de replicaie conservativ a ADN-ului pe o molecul integral cu dou filamente, se construiete din nou, ca pe o matri, o molecul identic de ADN, iar celula iniial rmne neschimbat. La metoda semiconservativ molecula primar se descompune n dou filamente i pe fiecare din ele se construiete cte o molecul integral de ADN. Metoda de dispersie prevede ca materialul ADN-ului iniial s fie repartizat uniform la celulele-fiice, iar celelalte sectoare ale ADN-ului s fie construite din nou. Care din aceste metode de replicaie a ADN-ului se aplic n realitate? La aceast ntrebare au rspuns Meselson i Stahl, elabornd o metoda special de centrifugare echilibrat a moleculelor de ADN. Esena acestei metode const n urmtoarele: dac la o centrifugare obinuit moleculele polimere se divizau conform greutii moleculare, apoi la centrifugarea echilibrat macromoleculele se divizau conform densitii specifice. n acest scop centrifugarea se fcea ntr-o soluie de sruri cu mare densitate. Deoarece ntotdeauna se poate alege o concentraie a soluiei care ar corespunde densitii polimerului studiat, moleculele substanei studiate se concentreaz n acel loc ngust al epruvetei, unde densitatea substanei este egal cu densitatea mediului, adic a soluiei. Ajungnd aici, substana nu se va mai disloca. Dac preparatul studiat conine cteva tipuri de molecule cu diferit densitate, ele se vor concentra n diferite sectoare ale epruvetei. Efectund o serie de experiene fine, Meselson i Stahl au reuit s determine mecanismul semiconservativ al replicaiei ADN-ului 6

Dar mai rmnea ne soluionat nc o problem, cea a dinamici procesului de replicaie: a fost descoperit un ferment special, care realiza replicaia. Fermentul a fost numit ADN-polimeraz. A. Cornberg, biochimist american, a Clarificat c ADN-polimeraza se deplaseaz din direcia polului 5' spre polul 3' al filamentului ADN. Pentru c filamentele ADN-ului nu sunt paralele n orice pol al lor, un filament purta liber un 3' -atom de hidrat de carbon, iar cellalt filament - un 5' -atom. Aceasta nseamn c fermentul ADN-polimeraza se putea alipi numai la un pol al ADN (la polul 5') i tr de-a lungul acestui filament, iar al doilea trebuia s rmn liber. Dar experienele artau, c se ntmpl invers - ambele filamente de ADN erau supuse replicaiei. n anul 1968 savanii japonezi, n frunte cu R. Ocazachi, au contribuit la soluionarea acestei controverse. S-a dovedit c Cornberg a avut dreptate i c ambele filamente de ADN au fost supuse la dublare, numai c sinteza noilor filamente se efectua pe segmente scurte - fragmente Ocazachi, cci aa au fost numite ele mai trziu. Conform concluziei lui Ocazachi, moleculele fermentului ADNpolimeraza se alipesc de ambele filamente de ADN, dar ele trebuie s-i ncap munca n direcii opuse. La nceput ADN-ul se desface de la un pol, formnd o furc de replicaie de care se alipesc moleculele de ADN-polimeraz. n timp ce ele muncesc, sintetiznd copii ale polilor eliberai, ADN-ul continu s se desfac i pentru ADN-polimeraza devine accesibil un nou sector al ambelor filamente. Prima molecul a fermentului i poate continua micarea de-a lungul filamentului 5' eliberat, iar de sectorul elibera al filamentului 3' se alipete o nou molecul de ADN-polimeraz. Cu ct se desfoar mai mult procesul de desfacere a ADN-ului, cu att va apare o cantitate mai mare de fragmente. Este interesant c n experienele lui Ocazachi pe filamentele 5' copiile noi se sintetizau i ele n fragmente. Ce se ntmpl cu punile dintre fragmente? Doar ADN-ul din celulele n care s-a terminat diviziunea nu este fragmentar. Cu un an pn a descoperi Ocazachi acest lucru, savanii Riciardson i Veis din SUA au gsit un nou ferment. Funcia lui consta n a uni, a alipi polii liberi zaharo-fosfatici ai moleculei de ADN. i deoarece verbul a alipi n englez sun ligaze fermentul a fost numit ligaz. Tocmai ligaza e responsabil de cusutul ntr-un tot unic al fragmentelor Ocazachi, noi sintetizate, i transform catena fragmentar de ADN ntr-o caten ntreag. Replicaia ADN este, ns, numai unul din numeroasele procese care asigur pstrarea i continuarea informaiei genetice. Pentru transmiterea 7

acestei informaii i traducerea ei n caractere concrete ale organizmelor, exist alte procese, la fel de complicate, i alte personaje. Despre unele din ele vom vorbi n continuare. Codul genetic Informaia genetic este codificat n molecula de ADN prin intermediul a 4 tipuri de nucleotide, care fac parte din componena ei. Se cunoate de asemenea c informaia genetic, codificat n ADN, se realizeaz n procesul sintezei biologice a proteinelor n celul. Ca i acizii nucleici, proteinele sunt compui polimerici, dar n calitate de monomeri ele conin nu nucleotide, ci diferii aminoacizi. n structura proteinelor au fost descoperii 20-21 de tipuri de aminoacizi. n ce privete proprietile moleculei de protein, ele depind nu numai de componena lor general, dar i de aranjarea reciproc a aminoacizilor, exact aa precum sensul cuvntului depinde nu numai de literele din care este compus, ci i de ordinea lor. N. C. Colov a calculat cte molecule diferite (izomeri) se pot obine printr-o simpl schimbare a locului aminoacizilor dintr-un lan de 17. Mrimea obinut era de circa un trilion' Dac am dori s tiprim un trilion de izomeri, nsemnnd fiecare aminoacid printr-o liter, iar toate tipografiile de pe glob ar tipri anual cte 50000 de volume a cte 100 coli fiecare, pn la ncheierea acestei munci vor trece tot atia ani ci s-au scurs din perioada arhaic i pn n prezent Dar majoritatea proteinelor sunt compuse nu din 17, ci din cteva sute de aminoacizi. n acest sens sunt impresionante calculele efectuate de savantul Senger Greutatea molecular medie a proteinei este egal cu aproximativ 34000 S-a dovedit c din 12 tipuri de aminoacizi prin varierea succesiunii lor se poate obine un numr de 10 300 de diferite proteine, greutatea lor total constituind 10280 grame. E mult sau puin? Evident, e o greutate enorm. Este suficient s comparm aceast greutate cu greutatea pmntului nostru, egal cu doar 1027 grame. n acest fel, odat ce fiecare dintre aceti izomeri are proprieti specifice, rezult c ncrctura semantic n structura primar a materiei este datorat secvenei (de fiecare dat alta) a aminoacizilor de-a lungul lanului polipeptidic. Dac este aa, atunci prin analogie, o astfel de ncrctur semantic (informaie) trebuie cutat i n succesiunea nucleotidelor n moleculele de ADN. Se isc ntrebarea: n ce mod succesiunea a patru nucleotide diferite din molecula de ADN determin secvena a 20 de aminoacizi n molecula de protein. E cam acelai lucru ca i cum prin combinarea n diferite feluri a patru litere ale alfabetului se pot forma 20 de cuvinte diferite dup 8

coninut i structur. S-a dovedit c prin intermediul a patru baze azotate (nucleotide) se poate transmite o cantitate nelimitat de informaie. Calculele demonstreaz c o singur baz este capabil s codifice nu mai mult de un aminoacid, iar toate cele patru baze (nucleotide) care ntr n componena acizilor nucleici, respectiv nu mai mult de patru aminoacizi. De aici reiese c aminoacizii sunt codificai (specificai) de ctre grupe de baze. Combinaiile din dou baze pot codifica numai 16 aminoacizi (4 2), ne fiind capabile s-i specifice pe toi 20. n schimb, combinaiile de trei baze (nucleotide) sunt capabile s-i specifice pe toi cei 20 de aminoacizi i chiar pe mai muli (43=64). Asemenea trei baze, situate una lng alta (triplete), se numesc codoni i fiecare poate codifica un aminoacid anumit. Urmau de asemenea s fie rezolvate nc un ir de alte sarcini complicate. n primul rnd, era necesar relevarea modului n care n celul are loc citirea informaiei genetice. n al doilea rnd, care sunt tripletele ce codific, anumii aminoacizi. Prin eforturile mai multor savani din diferite ri au fost elaborate cteva variante ale codului genetic, dar dintre acestea nu toate au rezistat la verificri minuioase. Primul care a emis (nc n anul 1954) ipoteza c codul genetic are un caracter tripletic a fost fizicianul american de origine rus G. Gamov. Dup cum s-a menionat, n moleculele de acizi nucleici bazele sunt amplasate unele dup altele n ir liniar i citirea informaiei localizate n ele se poate realiza n chip diferit. Mai jos prezentm dou variante de citire a tripletelor care conin 12 baze: A-T-G-CE -A-T-T-A-G-CE-T-A 1 AA 2 AA 3 AA Citirea tripletelor din acest rnd (de la stnga) se poate efectua, de exemplu, n felul n care a pro-pus Gamov, respectiv: A-T-G-primul aminoacid (1 AA) T-G-CE-al doilea aminoacid (2 AA). G-CE-A-al treilea aminoacid (3 AA) . a. m. d. Un astfel de cod se numete suprapus, dat fiind faptul c unele baze ntr n componena a mai multor triplete vecine. Dar prin cercetri ulterioare s-a demonstrat c un asemenea cod este imposibil, deci, ipoteza lui Gamov nu i a aflat confirmarea. Un alt mod de citire a tripletelor, propus n anul 1961 de F. Cric, este prezentat n continuare: A-T-G - 1 AA; CE-A-T - 2 AA; T-A-G - 3 AA; CE-T-A - 4 AA. Un astfel de cod se numete ne suprapus. Informaia pe care o conine se citete succesiv dup triplete, fr omiterea bazelor i fr 9 2 AA 3AA 4 AA

suprapunerea lor. n acest fel, textul informaiei genetice urmeaz s fie contopit. Dup opinia lui Cric, citirea informaiei se va ncepe de la un anumit punct din molecula de acid nucleic, n mod contrar textul pe care l conine s-ar denatura tot aa cum sensul cuvntului, dac ar fi s-l citim de la o liter ntmpltoare. Experienele ulterioare, efectuate de Cric i colaboratorii si n anul 1963, au confirmat justea ipotezei emise de el. Determinarea principiului de citire corect a informaiei dup triplete nu constituia ns rezolvarea definitiv a problemei codului genetic, deoarece ordinea de alternare a bazelor n triplete (cuvintele de cod) poate fi variabil, respectiv: A-G-CE, G-CE-A, CE-G-A, G-A-CE, A-CE-G, CE-A-G . a. m. d. Se pune ntrebarea: pe care aminoacid l codific fiecare dintre tripletele enumerate? Primele date privind componena cuvintelor de cod au fost prezentate n anul 1961 n cadrul Congresului internaional de biochimie de la Moscova de ctre savanii americani M. Nirenberg i J. Mattei. Utiliznd sistemul de sintez artificial (acelular) a proteinei, savanii au nceput s depun eforturi n vederea descifrrii sensului cuvintelor de cod, adic a modului de alternare n triplete a bazelor. La nceput ei au sintetizat un polinucleotid artificial, aa-numitul poli-U (U-U-U-U-U-U...), care coninea sub form de baz numai uracil. Introducnd ntr-un sistem acelular toate componentele necesare .(suc celular, ribozomi, complexul de fermeni necesari, o surs de energie sub form de acid adenozintrifosforic (ATF), o garnitura complecta compus din 20 de aminoacizi i molecule de poli-U), au constatat c n acest caz are loc sinteza proteinei compuse din rmiele unui singur aminoacid - fenilalanin (fen-fen-fen-fen-fen...). n felul acesta identitatea primului codon a fost descfrat: tripleta U-U-U corespunde fenilalaninei. Apoi cercettorii au realizat sinteza altor polinucleotide i au stabilit care sunt codonii prolinei (CE-CE-CE) i ai lizinei (A-A-A). n continuare s-a realizat sintetizarea garniturilor de trinucleotide (tripletele) cu diferite mbinri ale bazelor i s-a stabilit ce fel de aminoacizi se leag cu ribozomii. Treptat au fost descifrai toi cei 64 de codoni i a fost alctuit dicionarul complect al codului genetic. Codul genetic (ARN) Dar la ce folosesc tocmai 64 de codoni, dac n protein intr doar 20 aminoacizi? nseamn c ceilali sunt de prisos? La nceput aceast ntrebare i-a pus n ncurctur pe savani, dar mai trziu a devenit clar c nu exist nici un fel de surplus de codoni. Experienele ntreprinse de Nirenberg i Leder au demonstrat c numeroi aminoacizi pot fi codificai nu de una, ci de cteva tripletesinonime. Bunoar, aminoacidul numit cistein poate fi codificat de dou triplete (UGU, UGC), alanina - de patru (GCC, GCA, GCG, GCU), iar leucina 10

de ase, (UUA, UUG, CUU, CUC, CUA i CUG). Codul n care unul i acelai aminoacid este codificat de cteva triplete se numete cod degenerativ. S-a constatat c din punct de vedere biologic caracterul degenerativ al codului este avantajos. Este ca un. fel de msur de siguran a naturii, elaborat n procesul evoluiei, cnd, prin nlocuirea unor codoni prin alii, se realizeaz posibilitatea pstrrii structurii i a nsuirilor specifice ale proteinelor. Datorit caracterului degenerativ al codului, diferite organisme pot s introduc n proteinele de care dispun unii i aceeai aminoacizi, folosind n acest scop diferii codoni. A treia nucleotid a codonului a codului Prima 5 nucleotid A doua nucleotid a codonului

UUU UUC UUA UUG


CUU

} fenilalanin } leucin

UCU UCC UCG GCG CCU

serin }

}tirozin, UAA ocru UAG ambr


CAU CAC CAA CAG

UAU UAC

UGU UGC

}cistein

UGA azur UGG triptofan


CGU CGC CGA CGG

U C A G U C A G U C A G U C A G

CUC CUA CUG


AUU

leucin

CCC CCA CCG ACU ACC ACA ACG

prolin }

}histidin }glutamin

arginin } }serin }argin

AUC AUA

izoleucin metionin valin sau

treonin }

AUG
GUU GIC

GCU GCC GCA GCG

AAU asparagin AAC } AAA lizin AAG } GAU acid GAC }

AGU AGC AGA AGG


GGU GGC GGA AGG

GUA

GUG valin formilmet.

alanin }

asparatic }acid glutamic


GAA GAG

glicocol }

i ntr-adevr, s ne imaginm pentru o clip c moleculele de ADN (i corespunztor cele de ARN) ale fiecrei celule conin numai cte un singur codon pentru fiecare aminoacid. n rezultatul unor mutaii aceti codoni se pot modifica i dac ei nu au schimb, aminoacizii care le corespund nu vor fi cuprini n proteine, fapt care va duce la schimbarea structurii i funciilor lor iar aceasta poate conduce, n consecin, la urmri negative

11

pentru activitatea vital a ntregii celule. Dac, ns, n urma mutaiei se va forma un codon-sinonim, atunci totul va rmne fr schimbri. Ceva asemntor ne putem imagina i n cazurile cnd ntr-o coal sau instituie de nvmnt superior pentru predarea unui obiect oarecare exist numai un singur cadru didactic. Dac, de exemplu, acesta se mbolnvete i nu are cine s-l nlocuiasc pentru un timp predarea disciplinei respective se ntrerupe. Probabil, c ar fi fost mai chibzuit dac ar fi existat un nvtor (lector) care, intervenind la timp, s continue predarea acestei discipline. Cel puin pentru ca elevii s nu dovedeasc s uite materialul studiat sau pentru ca predarea obiectului dat s nu fie reprogramat pentru alt trimestru. Cum s-a remarcat deja, moleculele acizilor nucleici sunt catene polinucleotidice, alctuite din iruri lungi de triplete. De-a lungul moleculelor de ADN numeroase triplete codonii - formeaz sectoare aparte, numite cistrone sau gene. Fiecare gen conine informaia necesar pentru realizarea sintezei unei anumite proteine. Dar deoarece genele sunt am-plasate n moleculele de ADN n ordine liniar, una dup alta, se ntreab: unde ncepe i unde se termin citirea i transmiterea informaiei genetice privind fiecare protein n parte i ce semne convenionale sunt folosite n acest scop? Doar codul genetic este, dup cum tim, compact, fr nici un fel de virgule n textul su. S-a dovedit c ntre cei 64 de codoni exist astfel de triplete a cror funcie const n marcarea nceputului i sfritului citirii ( transcripiei) i transmiterii (translaiei) informaiei genetice, coninut n gene. nceputul translrii genelor (sau, aceea ce e acelai lucru, nceputul sintezei proteinei date) se marcheaz prin tripleta AUG. denumit respectiv de iniiere. Tripletele UAG i UAA marcheaz sfritul translrii genelor (ncheierea procesului de sintez a proteinelor) i sunt corespunztor denumite finale. n ce const esena procesului de descifrare a codului genetic i a biosintezei proteinelor? Toate caracterele i nsuirile organismelor sunt determinate de proteine. Prin urmare, transmiterea informaiei genetice n procesul sintezei proteice se desfoar strict conform unui anumit plan (program), schiat din timp. Rolul de baz n biosinteza proteinelor l joac acizii nucleici: ADN i cteva tipuri diferite de ARN, care se deosebesc dup structur, mas molecular i funcii biologice. Dintre acetia face parte aa-numitul ARN informaional sau de informaie (ARN-i), ARN de transport sau de transfer (ARN-t) i ARN ribozomal (ARN-r). Ei sunt sintetizai de pe matriele de ADN ale celulelor, cu participarea fermenilor corespunztori - ARN-polimeraze, iar apoi ncep s ndeplineasc funciile ce le au n procesul biosintezei proteinelor. Astfel ARN-r, unindu-se n complexe cu proteine speciale, 12

formeaz ribozomii, n care are loc sinteza tuturor tipurilor de protein (proteinosinteza). Ribozomii constau din dou subuniti. n celul numrul de ribozomi se ridic la circa 100 mii i de aceea cantitatea general de ARN-r din ei constituie circa 80% din totalul de ARN al celulei. Care sunt, deci, funciile biologice ale ADN-ului, ARN-i i ARN-t? Care este contribuia lor nemijlocit n procesul de biosintez a proteinelor? Vom remarca de la bun nceput c ADN nu particip nemijlocit la sinteza proteinelor. Funcia lui se limiteaz la pstrarea informaiei genetice i la replicarea nemijlocit a moleculei, adic la formarea de copii necesare pentru transmiterea informaiei urmailor. Prima etap a biosintezei proteinelor o constituie recepionarea informaiei genetice de la ADN i nscrierea ei pe o molecul ARN-i, proces care se realizeaz n felul urmtor: pe unul din firele moleculei de ADN cu ajutorul fermentului ARN-polimeraz din nucleotidele libere se sintetizeaz firul ARN-i, n care locul timinei (T), coninute n ADN, l ia uracilul (U). Molecula ARN-i sintetizat, care a preluat informaia coninut n ADN, se instaleaz apoi n ribozomi, unde va servi n calitate de matri pentru sintetizarea proteinelor. Aceasta nseamn c succesiunea aminoacizilor din molecula de protein este determinat de succesiunea nucleotidelor n ARN-i. Schematic acest proces poate fi exprimat astfel: ADNARN-protein. Pe lng ARN-i citoplasma celulelor mai conine nu mai puin de 20 de tipuri de ARN-t - aceasta fiindc fiecrui aminoacid i corespunde cel puin o molecul a sa, specific, de ARN-t. Funcia lui ARN-t const n transportarea aminoacizilor spre ribozomi i aezarea lor pe matria de ARN-i n cadrul lanului peptidic, n conformitate cu codul sintezei proteice. Pentru aceasta fiecare ARN-t trebuie s nhae aminoacidul corespunztor i mpreun cu acesta s treac n ribozom. La realizarea acestei operaii ei sunt ajutai de omniprezenii fermeni, care fac aminoacizii mai activi. La propunerea academicanului V. A. Enghelgard aceti fermeni, dat fiind faptul c ei particip la descifrarea codului genetic, au fost numii codaze. De remarcat c fiecrui aminoacid i corespunde o codaz specific. n acest fel, pentru toi cei 20 de aminoacizi exist tot attea tipuri de ARN-t i respectiv de codaze. La unul din capete moleculele de ARN-t au un sector acceptor cu ajutorul cruia ele ata aminoacizii, n timp ce la cellalt capt se afl un anticodon-triplet cu funcie complementar fa de codonul corespunztor din ARN-i. ncrcate cu aminoacizi, moleculele de ARN-t se apropie de ribozom i se unesc cu codonii corespunztori de ARN-i, pentru a-i complini. 13

Procesul de translare a informaiei genetice nseamn transferarea succesiunii nucleotidelor ARN-i n succesiunea aminoacizilor n lanul polipeptidic al proteinei. Sinteza proteinei ncepe n momentul n care n ribozomi ptrund dou molecule de ARN-t; prima corespunde tripletei iniiale, iar a doua - unei alte triplete de ARN-i, care urmeaz nemijlocit dup prima. Cnd aceste molecule ajung s se afle alturi, aminoacidul de pe prima molecul de ARN-t trece pe cea de-a doua molecul de ARN-t, unindu-se cu aminoacidul acesteia. n acest fel prima molecul de ARN-t se pomenete lipsit de aminoacid i iese n citoplasm, n timp ce cea de-a doua molecul de ARN-t conine doi aminoacizi, unii prin legtur peptidic. n continuare, ribozomul se deplaseaz cu o triplet de-a lungul moleculei de ARN-i i n el ntr o nou molecul de ARN-t, a crei anticodon este complementar fa de cea de-a treia triplet (codon) a ARNi din ribozom. Dipeptida (sau primii doi aminoacizi) se desprinde de cea dea doua molecul de ARN-t i trece pe cea de-a treia molecul de ARN-t numai ce ntrat n ribozom. n acest fel se pomenesc unul lng altul trei aminoacizi legai ntre ei i procesul se repet, pn cnd este translat ultimul codon al ARN-i. n mod obinuit fenomenul transmiterii informaiei genetice este comparat cu modul de funcionare al unei maini de scris, unde dup fiecare apsare a clapelor careta se deplaseaz cu o liter, fcnd loc pentru imprimarea urmtoarelor, pn nu este dactilografiat tot textul. ncheind transmiterea informaiei, ribozomul prsete firul de ARN-i i se localizeaz iari n citoplasm. Moleculele de ARN-i pot avea, n dependen de numrul de gene (cistroane) pe care le conin, diferite mrimi. Este limpede faptul c dac ctirea de pe o molecul lung de ARN-i ar fi efectuat de un singur ribozom, sinteza proteinei s-ar desfura ncet: iat de ce la translarea unor astfel de molecule de ARN-i ribozomii lucreaz prin Metoda de brigad, cteva zeci de ribozomi unindu-se i formnd aa-numiii poliribozomi, sau, mai simplu, polizomi. Dar cum, totui , afl ribozomii din care capt al moleculei de ARN-i trebuie s ncap translarea informaiei genetice? S-a stabilit c ambele capete ale moleculei de ARN-i sunt marcate distinct de anumite grupe. La unul din capete exist grupuri fosfatice (nsemnate convenional prin pppuri latineti), iar la altul-grupa hidroxil (ON). Prescurtat ele sunt nsemnate respectiv prin 5' i 3'. Ribozomii se deplaseaz ntotdeauna de la captul 5' spre captul 3', aa cum e artat pe schema ce urmeaz: 5' PPP-uri AUG-GCU-UCU-AAC-UUU-CGA-AAC-CUG ON... 3'. S-a mai constatat i faptul c n moleculele acizilor nucleici nu toate tripletele sunt citite. Asemenea triplete ca UAG, UAA i UGA sunt 14

repartizate n locuri diferite: la nceputul, la sfritul sau n sectoarele medii ale lanului ntre anumite gene. Datorit faptului c nu sunt translate, aceste triplete servesc ca un fel de zone de frontier ntre genele pe care sinteza lanurilor polipeptidice se ntrerupe. Cu ce ar putea fi comparat activitatea codului genetic? Vom aduce aici un exemplu interesant din cartea lui X. Raubah Enigmele moleculelor. Catena polipeptid ne-o putem imagina ca pe un tren de marf, iar compunerea catenei peptide poate fi comparat cu formarea acestui tren.

La centrul de comanda (n nucleul celulei) este pregtit o list n care se indic succesiunea vagoanelor (o caten de ADN). Aceast informaie urmeaz s fie transmis la staiunea de sortare (ribozomele din citoplasm). Translarea este efectuat de un teleimprimator de construcie special. Pentru ca teleimprimatorul s poat funciona, lista iniial trebuie s fie transcris pe una complementar (ARNi). n procesul acestei transcrieri se produce transformarea lui CE n G, lui G n CE, lui T n A. Teleimprimatorul mai are o particularitate: de fiecare dat, cnd la transformarea lui A trebuie s apar semnul T, teleimprimatorul scrie U, dup cum se indic mai jos. Lista iniial (catena ADN) TAC GAT CCC AGG CGT CAA AAG ATA ATT Transcrierea AUG CUA GGG UCC GCA GUU UUC UAU UAA Lista complementar (ARNi) Acum aceast informaie transmis prin teleimprimator este tradus cu ajutorul tabelelor codului (translarea). Traducerea i indic efului de manevr succesiunea n care trebuie cuplate vagoanele. Mii de vagoane ateapt s fie aduse la trenul care se formeaz. O mic locomotiv electric de manevrare (este a treia varietate de ARN - ARN de transport) trage vagoane aparte la cocoaa de tiraj. eful de manevr formeaz acum trenul n conformitate cu traducerea pe care a primit-o. Se obine urmtoarea succesiune a vagoanelor (aminoaczilor); Met-Leu-Gli--Ser-Ala-Val-Fen-Tir - sfrit. AUG este semnalul de start din ARNi: d ordinul s se nceap sintetizarea catenei peptidice; ARNt- aduce la locul de sintetizare aminoacidul metionina (Met.). Met- este locomotiva electric. Apoi tripleta CUA trebuie s aduc i s cupleze cellalt vagon - aminoacidul leucina (Leu), apoi tripleta GGG - glicina (Gli) . a. m. d. Astfel, conform planului de construcie pus n ADN, catena polipeptid (trenul) crete, datorit aminoacizilor (vagoanelor) aduse i cuplate la locurile lor. Terminarea 15

formrii trenului este indicat n lista complementar de tripleta UAA. Tot despre aceasta semnalizeaz i ceilali codoni finali - UAG i UGA. La sfritul acestor referine despre moleculele ereditare poate s se nasc n mod firesc urmtoarea ntrebri: codul genetic este unul i acelai pentru toate organismele sau, de exemplu, ntre cel al plantelor i animalelor exist anumite diferene? Rspunsul la aceast ntrebare este pozitiv. Mecanismul general de sintez a proteinelor este universal pentru toate organismele vii. Pentru majoritatea aminoacizilor s-a constatat o coinciden deplin a codonilor din organisme, fcnd parte din regnuri diferite, la unele organisme, ns, codonii prezint anumite devieri care se explic prin caracterul degenerativ al codului. n acest fel, limbajul genetic al naturii este unitar, dar n el exist anumite dialecte, ca, de altfel, n toate limbile lumii. Mecanismul de reparaie a defectelor din ADN Acizii nucleic ca oricare alte molecule organice, orict ar fi aprate de celule, sunt supui permanent aciunii celor mai diferii factori ai mediului. De aceea acetia modific structura armonioas a acizilor i, respectiv, funciile, pe care le realizeaz. Din modificrile principale ce se produc n ADN fac parte: substituirea, excluderea i amplasarea bazelor. Aceste transformri din ADN au fost numite mutaii genice. Ele toate conduc la denaturri n structura primar, precum i n cele secundar, teriar i cvarternar a proteinelor. Aceste modificri sunt succedate de proprieti-le lor funcionale, fapt ce influeneaz direct asupra funcionrii celulelor i a ntregului organism. Mutaiile genice se mai numesc i boli moleculare, deoarece acestea provoac adesea modificarea tipului de metabolism. La om au loc peste o mie de aceste boli moleculare, printre care citm galactozemia, alcaptonuria, fenilcetonuria, drepanochitoza . a. Celulele sangvine roii (eritrocitele normale) au o form rotund sau elipsoid. Dac n timpul sintezei prii proteice a hemoglobinei acidul glutamic (Glu) n poziia 6 este substituit cu valina (Val), va apare n loc de hemoglobin normal (HbA) o hemoglobin anormal (HbS). Eritrocitele cu hemoglobin anormal au o form de secer i nu sunt n stare s ndeplineasc funcia lor de baz - s aduc oxigenul la toate esuturile organismului. De aceea pruncii care sufer de aceste boli moleculare ca regul triesc aproximativ doi ani i mor de anemie - insuficien de oxigen. Acestea sunt fenomenele aprute n urma denaturrii codului genetic. Factorii mediului nconjurtor, care exercit o aciune direct asupra moleculelor acizilor nucleici, provocndu-le mutaii de diferite tipuri, sunt, 16

n primul rnd, diferitele radiaii ionizante-i numeroii ageni chimici. Numrul lor total este att de mare, nct, dac celulele n-ar fi ocrotite de ei, ar fi imposibil apariia unei descendene sntoase. Natura, ns, a avut grij s narmeze la timp celulele cu un sistem puternic de aprare contra aciunii factorilor mutageni. Savanilor le-a revenit sarcina s descopere taina sistemului de protecie a celulelor. n deceniul al aselea s-a nceput studierea sistematic a aciunii radiaiei asupra celulelor, i, n primul rnd, asupra genelor lor, precum i cercetrile metodelor de protecie a organismelor contra iradierii. n aceste cazuri experienele ncep prin utilizarea organismelor monocelulare, care, de regul, se aseamn ntre ele. Suspensiile de celule sunt expuse la raze n doze crescnde i savanii caut s determine rezistena lor biologic dup expunere. Odat A. Chelner a schimbat condiiile experienei: jumtate din suspensia iradiat a celulelor a lsat-o s creasc la ntuneric, cealalt jumtate - s creasc la lumin. Rezultatul a fost neobinuit. Celulele care au fost supuse la raze n ntuneric i apoi transferate pentru a crete la lumin au supravieuit mult mai bine, dect celulele care creteau la ntuneric. La sfatul magistrului su M. Delbruc a numit acest fenomen fotoreactivare, adic restabilire luminoas. Imediat s-a pus ntrebarea - ce se produce cu ADN-ul n timpul supunerii la raze. Sa stabilit c n timpul supunerii la raze dou timine, care se afl alturi, se contopesc ntr-o singur structur (TT), formnd o molecul dubl, numit dimer al timinelor. Sa constatat o corespundere exact ntre numrul dimerilor din ADN i nivelul mortalitii, Legtura s-a dovedit a fi direct: cu ct erau mai muli dimeri, cu att era mai nalt mortalitatea. A fost clarificat i cauza acestui fenomen. Dimerul denatureaz molecula de ADN. ADN-ul se desface n locurile dimere i, natural, cu ct sunt mai multe sectoarele tulburate, cu att el este mai puin activ. A devenit limpede c dup fotoreactivare numrul dimerilor din ADN, supus la radiaie, trebuie s se reduc. La sfritul deceniului al aselea geneticiianul american C. Rupert a dovedit c procesul fotoreactivrii se realizeaz cu ajutorul unui ferment special, numit ferment fotoreactivator. Rupert a dovedit c fermentul se unete cu ADN-ul supus la raze i restabilete integritatea lui. S-a clarificat i rolul luminii vizibile. Tocmai cvanii luminii vizibile excitau moleculele fermentului i le permiteau s-i manifeste activitatea reparatoare. La ntuneric fermentul rmnea inactiv i nu putea tmdui ADN-ul. 17

Setlou, un alt savant american, a demonstrat mai trziu c fermentul fotoreactivator desface pur i simplu legturile ce s-au format ntre moleculele vecine de timin, i, ca urmare, structura ADN capt forma lui anterioar i se restabilete complect activitatea lui biologic. Fermenii reactivani au fost descoperii nu numai la bacterii, dar i n celulele plantelor i animalelor. ns posibilitile celulelor vii de a trata moleculele lor ereditare nu se limiteaz la reacia fotoreactivrii. Sa constatat c celulele pot s se tmduiasc i la ntuneric. Dar n aceste condiii funcioneaz cu totul alte sisteme de fermeni. Un alt sistem de protecie a celulelor - reparaia la ntuneric - s-a dovedit a fi mult mai complicat dect fotoreactivarea. Dac fotoreactivarea este efectuat numai de un singur ferment, apoi n reparaia la ntuneric particp cel puin 5 fermeni. Dac n procesul fotoreactivrii sunt nlturate numai leziunile prin expunerea la raze ultraviolete (UV) -dimerii timinei, apoi n timpul reparaiei la ntuneric se vindec i celelalte leziuni, inclusiv cele provocate de numeroii ageni chimic, care vatm ADN-ul. Procesul reparaiei la ntuneric se deosebete radical de procesul fotoreactivrii. Sectoarele lezate sunt, pur i simplu, extirpate din ADN. Aceast extirpare se realizeaz n cteva etape, precum vedem n fig. 11. La nceput un ferment special taie unul din filamentele ADN-ului n apropiere de punctul lezat. Apoi un alt ferment taie sectorul lezat. Al treilea ferment lrgete brea format: el taie unul dup altul nucleotidele n catena lezat a ADN-ului. Al patrulea ferment ncepe a astupa brea. n conformitate cu ordinea nucleotidelor rmase n al doilea filament al ADNului, ce se afl n faa filamentului extirpat, fermentul ADN-polimeraza ncepe procesul de astupare a breei. Fermentul al cincilea - ligaza, despre care s-a mai menionat, unete polii filamentului vechi cu cei ai fragmentului nou construit, terminnd astfel restabilirea ADN-ului. Aa dar, dac n cazul de fotoreactivare tratamentul constituie un amestec terapeutic delicat, apoi n timpul reparaiei la ntuneric se efectueaz o adevrat operaie chirurgical. Fragmentul lezat este, pur i simplu, extirpat din ADN i dat afar. Celula se autoopereaz. Prea stranie tendina celulei de a lrgi brea pn la mrimi gigantice dup extirparea leziunii. Un lucru asemntor face i chirurgul, care, extirpnd esutul bolnav, taie i o parte din esutul sntos pentru a lichida urmele bolii. Posibil c aceast lrgire a breei este determinat de faptul c pentru funcionarea corect a fermentului el trebuie s-i nceap munca de la un anumit punct. Acest punct de start pentru nceputul muncii ADN-polimerazei poate fi hotarul genei. n timpul unor experiene autorii au notat c brea era lrgit n unele celule pn la 1000 de nucleotide, n altele - doar cu cteva zeci de 18

nucleotide, dup care lrgirea breei se oprea. S vedem din ce motiv se ntmpl acest lucru, V. Soifer nc n anul 1969 a presupus c pentru a se evita greeli n cursul operaiilor posterioare de vindecare a leziunii, este necesar ca filamentul lezat s fie distrus complect pn la captul genei n care a aprut iniial leziunea. n cazurile cnd leziunea se afla n apropiere de hotarul genei, nu e nevoie a se extirpa att de multe nucleotide. n toate celelalte cazuri e necesar extirparea unor poriuni mult mai mari. Am vorbit numai despre dou sisteme de reparaie a celulelor care i protejeaz materialul genetic de aciunile duntoare ale razelor UV i ale radiaiei ionizate. Deoarece partea covritoare a energiei radiante o formeaz aceste feluri de radiaie, este limpede ce proprietate de valoare constituie capacitatea celulelor de a-i repara structurile genetice dup aciunea acestor raze. Asupra structurilor genetice exercit, ns, influen i ali factori cu diverse mecanisme de aciune. De aceea celulele au elaborat diferite mecanisme de autoprotecie, dintre care multe au fost studiate doar parial, majoritatea lor rmnnd nc necunoscute i este puin probabil ca n viitorul apropiat s fie clarificate definitiv. Natura a nzestrat fiinele vii cu multe enigme i procesul de descoperire a tainelor vieii de bun seam nu se va sfri niciodat.

19