Manual de Laboratorio de Biologia Celular Citec

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA
UNIDAD UNIVERSITARIA VALLE DE LAS PALMAS
Manual de Prcticas Laboratorio de Biologa Celular
Elaboro: Q.B. Graciela Lizeth Prez Gonzalez Reviso: Dra. Ana Leticia Iglesias Autorizo: M.C. Patricia Avitia Carlos
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UNIDAD UNIVERSITARIA VALLE DE LAS PALMAS MANUAL DE LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR
NDICE INTRODUCCIN .....................................................................................................................3 OBJETIVO GENERAL ...............................................................................................................3 REGLAMENTO GENERAL DE LOS LABORATORIOS .................................................................4 PRCTICA No. 1 ....................................................................................................................9 PRCTICA No. 2 ..................................................................................................................12 PRCTICA No. 3 ..................................................................................................................16 PRCTICA No. 4 ..................................................................................................................20 PRCTICA No. 5 ..................................................................................................................24 PRCTICA No. 6 ..................................................................................................................27 PRCTICA No. 7 ..................................................................................................................30 PRCTICA No. 8 ..................................................................................................................33 PRCTICA No. 9 ..................................................................................................................37 PRCTICA No. 10 ................................................................................................................40 PRCTICA No. 11 ................................................................................................................44

INTRODUCCIN Mediante el conocimiento de la biologa celular se puede explicar la maquinaria fundamental de la vida, donde podemos encontrar la clave para cada uno de los problemas biolgicos que conciernen a la bioingeniera. Es por lo tanto indispensable que los estudiantes del rea de bioingeniera conozcan la estructura y funcin celular, considerando que a partir de tal rea de estudio se construir el conocimiento de organizacin de la materia biolgica, que finalmente llevan a entender las funciones de un organismo integrado, como el cuerpo humano, punto de partida para estudiar los procesos relacionados a las reas de binica, biologa aplicada, ingeniera biomdica e ingeniera ambiental.El presente Manual de Laboratorio de Biologa celular rene las prcticas a desarrollar en las sesiones de laboratorio de la asignatura, recopila la informacin necesaria para su realizacin e indica los pasos principales de la experimentacin, de tal manera que los estudiantes cuentan con la herramienta terica bsica para la realizacin exitosa de las prcticas. Este manual ha sido diseado para apoyo para los alumnos, el proceso de experimentacin en un laboratorio escolar es fundamental para relacionar y aplicar los conocimientos adquiridos en clase y reforzar el proceso de enseanza aprendizaje. El seguimiento y la aplicacin del mtodo cientfico en un proceso de experimentacin culmina con encontrar una respuesta a cuestionamientos que surgen en base a sucesos reales; los objetivos del laboratorio de Biologa celular, es extrapolar a casos reales problemticas revisadas en teora, donde el alumno podr sugerir posibles soluciones en base los conocimientos adquiridos en la materia.
OBJETIVO GENERAL El objetivo general que persigue Analizar la funcin celular relacionando los procesos biolgicos y los elementos formes de la clula para establecer las bases del manejo de sistemas de produccin en bioprocesos biomdicos e investigacin, con un enfoque de sostenibilidad y una actitud respetuosa hacia los seres vivos. Las ilustraciones y ejemplos que contienen las prcticas aqu propuestas respaldan y demuestran los resultados de las sesiones, de sta manera, el alumno podr apoyarse en las mismas para elaborar un informe de laboratorio completo y al nivel de trabajo que la materia y la sesin prctica exija.

REGLAMENTO GENERAL DE LABORATORIOS Los alumnos de CITEC Unidad Valle de las Palmas, cuyo semestre incluya materias que requieran llevar a cabo prcticas de laboratorio debern seguir lo siguiente: 1. Usar bata de laboratorio manga larga, abotonada, pantaln al tobillo y/o falda (En caso de traer falda el largo de la bata de laboratorio ser debajo de la rodilla), zapato cerrado, cabello recogido, tacn mximo de 6 cm de altura y evitar portar objetos o prendas que cuelguen y puedan provocar incidentes y accidentes). 2. Uso de equipo de proteccin personal (guantes de latex, gogles, proteccin respiratoria, etc.) durante la permanencia dentro del laboratorio y de acuerdo a la actividad a realizar. 3. Lavarse las manos antes y despus de trabajar en cada sesin. 4. Prohibido: introducir alimentos, bebidas, fumar, gritar, correr, jugar y sentarse en las mesas de trabajo. 5. Prohibido ingresar y visitar el laboratorio bajo el influjo de bebidas alcohlicas o cualquier otra droga. 6. Antes de iniciar la prctica debe comprender perfectamente las instrucciones para realizar la actividad y contar con su Pre- laboratorio contestado. 7. Reportar incidentes o accidentes por leve que sean con o sin lesin, condiciones inseguras y equipo daado al personal de laboratorio o al responsable del laboratorio. 8. Debe identificar todos los reactivos qumicos y muestras que contengan sustancias qumicas. Queda prohibido utilizar recipientes sin etiqueta. 9. Prohibido oler, ingerir o tocar sustancias qumicas que no sean autorizadas por la autoridad responsable de la prctica. 10. Utilice perilla para pipetear reactivos qumicos (sustancias qumicas). Prohibido realizarlo con la boca. 11. Evitar distraer a sus compaeros durante la manipulacin de material, equipo y sustancias qumicas. 12. Mantener sus pertenencias fuera del rea de trabajo o en espacios asignados por el profesor del laboratorio. 13. Mantener limpia, ordenada y/o saneada su rea de trabajo, antes y despus de realizar la actividad. 14. No trate de atender un accidente o contingencia para lo cual no ha sido capacitado. 15. En simulacros o contingencias obedecer las disposiciones de seguridad indicadas por el profesor, coordinador o responsable del evento. 16. El alumno supervisin del tcnico acadmico, responsable del laboratorio o por personal docente capacitado y autorizado para ello. 17. Prohibido verter slidos o sustancias peligrosas en los lavabos. 18. Respetar las condiciones de seguridad y funcionalidad del laboratorio. 19. Respetar horarios de actividades y en caso de no terminar la actividad en su horario, solicitar autorizacin de acceso al responsable. 20. Prohibido el uso de celulares y cualquier otro sistema de comunicacin mvil. 21. No mover, sustraer, manipular o hacer uso indebido de equipo sin autorizacin, as como sistemas de cmputo y transmisin de datos. 22. Mantener las puertas y ventanas cerradas en caso de que la actividad a realizar as lo requiera. 23. Prohibido visitas no autorizadas. (Los responsables del laboratorio o direccin son los que autorizan las visitas y deben de advertir a los visitantes sobre los riesgos y medidas de seguridad del laboratorio). 24. El usuario debe de contar con material de limpieza de acuerdo a las actividades realizadas. 25. Al terminar la sesin de laboratorio, verificar que llaves de servicio de agua, gas y apagadores de energa elctrica estn cerradas. 26. Al trmino de la sesin debe dejar limpio y ordenado material utilizado y rea de trabajo 27. Prohibido introducir mascotas al laboratorio.

28. es responsable del funcionamiento y conservacin del material. El material y equipo daado debe reponerse por uno de iguales caractersticas (capacidad, modelo, marca). 29. Disponer los residuos generados en la prctica en su contenedor correspondiente y bajo. Por lo cual, en caso de incumplimiento parcial o total a estos lineamientos, se harn acreedores a las sanciones correspondientes indicadas en la reglamentacin universitaria o estipulada en el contrato colectivo de trabajo segn corresponda.

PRCTICA No. 1 MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO-INFECCIOSOS (RPBI)

COMPETENCIA: El alumno aprender la normatividad vigente para la identificacin, recoleccin y disposicin de RPBI, as como la aplicacin de dichos procedimientos en el manejo de residuos dentro del Centro Universitario incluyendo el laboratorio de Biologa celular. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA: La Ley General del Equilibrio Ecolgico y la Proteccin al Ambiente, define como residuos peligrosos a todos aquellos residuos que por sus caractersticas corrosivas, reactivas, explosivas, txicas, inflamables y biolgico-infecciosas, que representan un peligro para el equilibrio ecolgico o el ambiente (LEGEEPA, 2010). La manipulacin de Residuos Peligrosos Biolgico Infecciosos implica un riesgo para la salud de las personas directamente relacionadas con los residuos pero tambin puede significar un riesgo potencial para la poblacin en general y el medio ambiente. Por tales motivos, las personas y empresas que generan y manejan dichos residuos estn obligadas a seguir la normatividad vigente elaborada con el fin de minimizar riesgos y eficientizar su uso y disposicin. La normatividad para el manejo de los residuos peligrosos biolgico-infecciosos responde a estrictas regulaciones ambientales, las cuales, es necesario actualizar tomando en consideracin las experiencias y competencias de los sectores involucrados en su cumplimiento, con el fin de que sus disposiciones sean operativas y adecuadas para proteger el medio ambiente y la salud de la poblacin en general (Diario Oficial de la Federacin, 2003). As pues, siguiendo la labor de informacin, se hizo una actualizacin de la Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-1995, resultando la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, publicada en el Diario Oficial de la Federacin. (Diario Oficial de la Federacin, 2003). Las empresas que manejan y generan R.P.B.I tiene la responsabilidad de consultar la Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 para reglamentar cada una de los procedimientos que se relacionan con estos residuos, as como tener a la mano un plan de contingencia en caso de que suceda el derrame de algn residuo considerado peligroso (Diario Oficial de la Federacin, 2003). Para la identificacin de las reas, recipientes, materiales o procedimientos que impliquen un riesgo biolgico se utiliza un smbolo universal, el cual se muestra en la imagen de la derecha.
MATERIALES Y EQUIPO Recipientes y bolsas especiales para depsito de R.P.B.I. Herramienta didctica con imgenes de RPBI generados en el laboratorio. Diversos materiales utilizados habitualmente en las prcticas (jeringas, tubos, gasas, torundas de algodn, agujas de diseccin, tubos vacutainer, guantes, agujas para vacutainer, etc.)

METODOLOGA 1. El instructor explicar las condiciones de generacin, disposicin y manejo de los residuos peligrosos biolgico infecciosos en el laboratorio. 2. El alumno identificar el rea de disposicin de los R.P.B.I. en el laboratorio. 3. Los alumnos llevarn a cabo un simulacro de disposicin de R.P.B.I (Identificacin, separacin y envase) con los siguientes materiales: Jeringa. Hisopo con saliva. Hisopo con solvente Aguja. Torunda de algodn. Tubo con muestra de sangre. Gasa. Portaobjetos. Cubreobjetos. Cubreobjetos con muestra. Empaque de la jeringa. Aguja de diseccin. Algodn con muestra Guantes. Hisopos. Colorantes. solventes Papel. Tubos rotos. Abatelenguas con saliva.

RESULTADOS Organiza tus resultados en un mapa mental tomando en cuenta la normatividad para la identificacin, recoleccin y disposicin de R.P.B.I. CUESTIONARIO 1. Por qu es importante el buen manejo de los RPBI dentro y fuera del laboratorio? 2. La orina y excremento se consideran RPBI? 3. Consideras que la normatividad abarca y toma en cuenta lo ms importante del manejo de RPBI? Justifica tu respuesta. CONCLUSIONES:
APLICACIN PRCTICA: El manejo de forma correcta de los R.P.B.I en cualquier laboratorio o institucin de salud, donde el estudiante contine su formacin como futuro profesionista. BIBLIOGRAFA: 1. Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin Ambiental, Salud Ambiental, Residuos Peligrosos Biolgico infecciosos, Clasificacin y Especificaciones de Manejo. Diario Oficial de la Federacin, 2003. Extrada de www.fcq.uach.mx/phocadownload/Academico/Material_de_Estudio/RPBI/links/NOM_ 087_ECOL_SSA1_2002.pdf 2. Ley General del Equilibrio Ecolgica y Proteccin al ambiente. Diario Oficial de la Federacin, 2010. Extrada de http://www.diputados.gob.mx/LeyesBiblio/pdf/148.pdf

RCTICA No. 2 USO Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO PTICO

COMPETENCIA: El alumno aprender el uso y el manejo correcto del microscopio ptico. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA: El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a simple vista. Esta constituido por un sistema ptico que incluye las lentes y la fuente de iluminacin, y de un sistema mecnico que permite el soporte y la manipulacin del sistema ptico. Se pueden clasificar desde un punto de vista muy sencillo en: simples y compuestos. Se le da el nombre de microscopio simple a todas aquellas lentes con montura o sin ella, de distintos espesores y dimetros, biconvexas o planoconvexas, que nos permiten amplificar los objetos, comnmente conocidas como lupas. Un microscopio compuesto est constituido por la combinacin de dos sistemas de lentes convergentes. Uno, prximo al ojo del observador, por lo cual se llama ocular y que acta como microscopio simple, y otro prximo al objeto, denominado objetivo. MATERIALES Y EQUIPO: 1. Microscopio ptico 2. Laminillas con diferentes muestras 3. Aceite de inmersin 4. Papel seda (Kimwipes) 5. Lquido para limpiar oculares y lentes METODOLOGA: 1. Designar dos integrantes de cada equipo como responsables de llevar el microscopio a su mesa de trabajo, anotarse en la bitcora de uso y esperar las indicaciones del instructor. 2. Seguir la explicacin del instructor(a) sobre el manejo y los componentes del microscopio ptico. 3. Observar al microscopio laminillas con diferentes tipos celulares bajo el siguiente procedimiento: a) Colocar la laminilla en el centro de la platina, deslizando los clips sujetadores. b) Verificar que el objetivo que est colocado para la visualizacin sea el de menor aumento. c) Colocar mediante el movimiento de la platina la muestra de estudio en el centro del microscopio. d) Acercar la platina al objetivo hasta alcanzar una distancia aproximadamente de 2 mm, entre el cubreobjetos y el objetivo, mediante el ajuste macromtrico, y bajo la observacin directa de la platina con los oculares. e) Enfocar la muestra a observar, viendo a travs del ocular y usando el ajuste micromtrico. Regule el diafragma para mejorar la iluminacin.

f) Al observar las caractersticas de la muestra con el lente objetivo de menor aumento, cambiar el lente objetivo por el siguiente de mayor aumento. Enfocar la imagen con el ajuste micromtrico y observar la diferencia. g) Barrer la muestra a travs de movimientos de la platina, de arriba hacia abajo en forma de ondas. h) Cambiar nuevamente el objetivo hacia el de mayor aumento. Ajustar la imagen con el ajuste micromtrico y regular el diafragma para mejor iluminacin. i) Al llegar al objetivo de 40X y pasar al 100X es necesario que agregar una gota de aceite de inmersin en la muestra y solo entonces colocar el objetivo mayor. 4. Elaborar dibujos de lo observado en las laminillas.
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RESULTADOS A) En los siguientes espacios dibuja lo observado en cada uno de los objetivos utilizados.
Figura 1. Estructuras observadas con el objetivo de 4X.
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CUESTIONARIO: 1. Indica el nombre de cada una de las partes del microscopio:
2. Indica, desde tu percepcin personal, las ventajas y desventajas del uso y manejo del microscopio ptico.
3. Investiga acerca de otras tcnicas de microscopa y en base a ello responde lo siguiente: a) Cul tcnica de microscopa te parece ms adecuada para la observacin de clulas in vivo?
b) Cules son las ventajas de la microscopa ptica frente a la microscopa electrnica?
c) Cul es la utilidad prctica de la presente sesin de laboratorio?
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CONCLUSIONES:
APLICACIN PRCTICA: El microscopio representa una de las herramientas ms tiles en el estudio de las ciencias de la vida, la comprensin de los procesos a escala microscpica y la elucidacin de muchos cuestionamientos relacionados con enfermedades actuales. BIBLIOGRAFA: 1. Bernis, M. 1998. Atlas de Microscopia. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Fernando Aldape Barrera. Pags. 95-107. 2. Vovides, A. 2000. Microscopia ptica: para las ciencias biolgicas. Chiapas. Universidad de Ciencias y Artes del Estado de Chiapas. Pags. 14-19. 3. Sepulveda, J. 2011. Histologa: Biologa celular y tisular. Instructivo de laboratorio. Quinta edicin. Editorial Mc Graw-Hill. Pag. 2.
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PRCTICA No. 3 FROTIS BUCAL

COMPETENCIA: El alumno aprender a elaborar preparaciones de muestras biolgicas que le permitirn observar y reconocer clulas animales al microscopio, as como, sus principales estructuras. FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA: La clula es la unidad bsica funcional y estructural ms pequea que forma a los organismos vivos. En su estado natural, son casi invisibles al microscopio convencional, una manera de hacerlas visibles es realizar preparaciones donde se tian con colorantes orgnicos selectivos, los cuales, se comportan como compuestos cidos o bsicos y tienen la tendencia de formar uniones electrostticas con los radicales ionizables de los tejidos. Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Una preparacin temporal es aquella que es utilizada en el momento de la observacin, ya que requiere que el medio de montaje no se evapore tan rpidamente y que sea posible que el material biolgico se conserve por un tiempo en condiciones de ser observado. Las preparaciones permanentes son aquellas que permanecen intactas por siempre, por lo que se debe hacerse con un material especial para que el cubreobjetos permanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante aos y muestra no se deteriore. MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS: Portaobjetos. Cubreobjetos. Gotero. Papel para la limpieza del microscopio. Hisopos estriles. Azul de metileno. Agua destilada. Microscopio ptico. MUESTRA BIOLGICA: Clulas epiteliales de la mucosa bucal.
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METODOLOGA: . Colcate los guantes. 2. Toma un portaobjetos y un cubreobjetos bien limpios y secos. 3. Para obtener la muestra, tira del labio inferior hacia fuera y raspa de forma circular, la parte interna del mismo con un hisopo estril. 4. Coloca la muestra en el portaobjetos frotando el hisopo en sobre el centro del mismo. 5. Deposita una gota de agua sobre la muestra, en el centro del portaobjetos. 6. Con el extremo contrario del hisopo, extiende la mucosa extrada y disprsala en la gota de agua. 7. Teir las preparaciones agregando una gota de azul de metileno sobre la muestra. 8. Colocar el cubreobjetos cuidando de no hacer burbujas. 9. Observar al microscopio, enfocando progresivamente con los objetivos de menor a mayor aumento. RESULTADOS: CELULAS EPITELIALES Descripcin
Objetivo 4 X
CELULAS EPITELIALES Descripcin
Objetivo 10 X
CELULAS EPITELIALES Descripcin
Objetivo 40 X
CUESTIONARIO:
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1. Dibuja lo observado con cada objetivo indicando las partes de la clula que alcances a distinguir. Da una descripcin breve de lo observado. 2. Se observa algn orgnulo citoplasmtico?
3. Por qu las clulas retienen los colorantes?
4. Cules colorantes se utilizan para teir clulas eucariotas, adems del azul de metileno?
5. Cul es la forma correcta de colocar el cubreobjetos?
CONCLUSIONES:
APLICACIN PRCTICA: Se utilizan tinciones especficas para observar ciertas caractersticas celulares como la organizacin de organelos o resaltar de manera especial alguna caracterstica o componente celular. BIBLIOGRAFA: 1. Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440 2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0 3. Curtis, H. 2004. Biologia. Mexico D.F. Sexta edicion. Editorial Panamericana. Pags. 17-18.
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PRCTICA No. 4 PREPARACIONES TEMPORALES

COMPETENCIA: El alumno aprender a elaborar preparaciones de muestras biolgicas temporales que le permitirn observar y reconocer clulas vegetales al microscopio, as como, sus principales estructuras. FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA: Para poder observar al microscopio clulas, tejidos animales o vegetales y microorganismos es necesario hacer preparaciones sobre portaobjetos. Hacer una preparacin consiste por lo tanto en colocar y extender el tejido o la muestra sobre un portaobjetos, cubrindolo despus con un cubreobjetos. Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Las primeras son aquellas que solo se van a utilizar durante la prctica, unos das; las frescas se usan solo durante la prctica y posteriormente se lavan. Y las permanentes son aquellas preparaciones que duran para siempre, por lo que deben hacerse con un material especial (blsamo de Canad) para que el cubre-objetos permanezca perfectamente adherido al porta-objetos, durante aos. MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS: Microscopio ptico Portaobjetos Cubreobjetos Aguja de diseccin Pipeta Pasteur Frasco gotero con agua Moho de pan Solucin fisiolgica
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METODOLOGIA: 1. Para hacer preparaciones frescas, simplemente coloca un corte muy delgado de la parte externa del moho de pan, (extendida con la aguja de diseccin) sobre el portaobjetos. 2. Si el material utilizado es moho o tejidos meristemticos, coloca sobre tu muestra una gota de agua o solucin fisiolgica. 3. Cbrala muestra con el cubreobjetos dejndolo caer suavemente para que no haga burbujas. Observa la figura: 4. Esta preparacin est lista para que hagas observaciones microscpicas. Su duracin es de aproximadamente una hora ya que al evaporarse el agua con el calor de la lmpara del microscopio, las clulas o los organismos morirn.
RESULTADOS:
Objetivo 10 X Descripcin de la preparacin:
Objetivo 40 X Descripcin de la preparacin:
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CUESTIONARIO: 1. Por qu son importantes las preparaciones temporales?
2. Qu propiedades tiene este medio de montaje?
3. Cules son las preparaciones que se puede hacer en el laboratorio?
CONCLUSIONES:
APLICACIN PRCTICA: Se utilizan tinciones especficas para observar ciertas caractersticas vegetales como la organizacin de hifas o resaltar de manera especial alguna caracterstica o componente celular. BIBLIOGRAFA: 1. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0 2. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial Panamericana. Pags. 17-18. 3. Johnson, G. 2006. biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Panamericana. Pags. 13-15. 4. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc Graw Hill. Pags 43-45.
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PRCTICA No. 5 FROTIS SANGUNEO COMPETENCIA: El alumno es capaz de identificar clulas sanguneas a partir de su morfologa, utilizando tcnicas bsicas de tincin y microscopia ptica. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA: La sangre es un tejido por medio del cual el organismo distribuye los principales nutrientes orgnicos desde el intestino al hgado y luego a otros rganos, para finalmente llegar a los tejidos. Adems, trasporta el oxgeno desde los pulmones hacia los tejidos, y a partir de stos, recoge el bixido de carbono producto de la respiracin celular para ser eliminado en la exhalacin, durante la respiracin pulmonar. Asimismo, es vehculo por el cual los productos orgnicos de desecho y el exceso de iones minerales se transportan a los riones para su excrecin (Lenhinger, 1996). Un ser humano de aproximadamente 75 Kg posee entre 5 a 6 litros de sangre, de la cual aproximadamente la mitad de su volumen son eritrocitos (responsables del transporte de oxgeno y eliminacin del bixido de carbono), mientras que el resto est compuesta por leucocitos y plaquetas. La porcin no celular o plasma sanguneo consiste en varios solutos orgnicos e inorgnicos, del cual el 75% est representado por protenas plasmticas (Lenhinger, 1996). Las variaciones en la constitucin normal de la sangre, tanto del componente celular, como de los solutos del suero, son indicadores de un gran nmero de enfermedades, por lo cual el examen sanguneo suele utilizarse como mtodo de diagnstico. Tambin puede utilizarse para evidenciar efectos de algunos tipos de cncer, leucemia, hemoglobinopatas y para monitorizar efectos secundarios de quimioterapias (MedlinePlus). El frotis sanguneo es una tcnica ampliamente utilizada para analizar una muestra de sangre y es un procedimiento til para el examen de muestras en el estudio microscpico de preparaciones fijas y coloreadas por un mtodo adecuado. La forma ms comn de preparar un frotis es extender un poco de muestra sobre un portaobjetos desengrasado, con el asa bacteriolgica, pero tambin se puede hacer con un hisopo o presionando un portaobjetos sobre la muestra. Dependiendo del tipo de clula que se desee observar, es el tipo de tincin que se emplea. La tincin con colorantes son productos qumicos sintticos capaces de combinarse con una gran variedad de sustancias confirindoles color. El color se debe a la estructura qumica de los pigmentos. Los grupos productores del color son llamados cromforos, siendo los ms comunes -quinona y diazo. La tincin diferencial es un mtodo que requiere de ms de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir entre varios tipos de clulas bacterianas o estructuras celulares, en el caso de tejido sanguneo permite diferenciar entre basfilos, eosinofilos, neutrfilos, etc. Una tincin diferencial tpicamente consiste de tres pasos principales: primero la aplicacin de un colorante primario, el cual se utiliza para teir a todas las clulas en la tincin; enseguida un paso de decoloracin, el cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de clulas y finalmente un colorante de
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contraste, el cual tie las clulas recin decoloradas pero no tiene efecto sobre las clulas que an retienen el colorante primario. MATERIALES Y EQUIPOS Jeringa con aguja desechable (responsabilidad del alumno) Tubo vacoutainer con anticoagulante (EDTA) Torniquete (responsabilidad del alumno) Torundas con alcohol (responsabilidad del alumno) Portaobjetos Recipientes RPBI Microscopio ptico Alcohol etlico (70%) Agua destilada (responsabilidad del alumno) Colorantes para tincin de Wright Aceite de inmersin
METODOLOGA: 1. Tomar una muestra de sangre por va venosa y depositarla en el tubo con anticoagulante. 2. Depositar una gota de sangre en un portaobjetos limpio y desengrasado, realizar la extensin con otro portaobjetos en un ngulo de 45 grados, procurado no dejar el frotis demasiado grueso o delgado. 3. Dejar secar el frotis y fijar con metanol, teir enseguida con la eosina por 40 segundos, enseguida lavar y posteriormente teir con el policromo por 30 segundos). 4. Lavar el frotis con agua de la llave o con una piseta y observarlo en el microscopio, enfocando progresivamente desde el objetivo 4-5 X hasta 40 X y 100X. 5. Realiza un conteo diferencial de la subpoblacin de leucocitos. Contar 100 clulas en total.
RESULTADOS: 1. Dibuja y colorea los diferentes tipos y subtipos celulares observados. Linfocito Monocito Basfilo Eosinofilo Neutrfilo
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2. Reporta a manera de tabla el conteo diferencial segn el tipo celular. Indica en la tabla los valores de referencia de cada uno de los tipos celulares observados.
TIPO DE CELULAS Linfocito Monocito Basfilo Eosinofilo Neutrfilo
CARACTERISTICAS
CUESTIONARIO: 1. Cules son las diferencias morfolgicas que observ en cada uno de los diferentes tipos celulares?
2. De qu color se tie el ncleo de los leucocitos? Porque se tie con ese colorante?
3. Existe alguna diferencia en el citoplasma de los diferentes tipos celulares observados? Explique, cules y porque?
4. Qu forma tienen los eritrocitos?
5. Porque las clulas sanguneas tienen diferentes formas y cualidades?
CONCLUSIONES:
BIBLIOGRAFIA: 1. Alberts B., D. Bray, K. Hopkin, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts, P. Walter, 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0 2. Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440 3. Lehninger, Albert L.; Nelson, David L.; Cox, Michael M.,Cuchillo Foix, Claudi M., 1996. Bioqumica de Lehninger. Ediciones Omega, S.A.
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PRCTICA No. 6 IDENTIFICACIN DE GLANDULA SALIVAL

COMPETENCIA: Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de identificar la estructura microscpica la glndula salival presentes en las larvas de la mosca de la fruta, as como reconocer del patrn de bandeo y tener conocimiento sobre la importancia del estudio de estos cromosomas. FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA: Algunos insectos como la mosca de la fruta cuyo nombre cientfico es Drosophila melanogaster posee en sus glndulas salivales clulas que se encuentran en una fase de la divisin celular llamada interface, este proceso se puede prolongar permanentemente, de tal manera que en el tercer estadio de las larvas la divisin celular se detiene pero las clulas siguen en crecimiento.4 de esta manera, los cromosomas contenidos en el ncleo se duplican repetidamente sin separarse, lo que se conoce como endomitosis. El resultado de este proceso son cromosomas gigantes compuestos gran cantidad de informacin gentica (Politenia). Solo para hacer una comparacin, los cromosomas de Drosophila en una metafase es del orden de 7,5 micras, mientras que el largo total de los cromosomas en un ncleo de las glndulas salivares es de alrededor de 2.000 micras. Los cromosomas implicados en este proceso muestran un patrn particular de bandeo transversal que consiste en zonas ms oscuras, llamadas bandas, que alternan con zonas claras, llamadas interbandas. Cuando se observan al microscopio ptico se identifican como bandas oscuras y claras transversales alternantes.7 el patrn de bandeo que presentan los cromosomas politnicos es un reflejo constante de las secuencias de ADN, las bandas sirven como marcadores para localizar varias caractersticas genticas (lugar de los genes, o cambios en el genoma debido a reordenamientos cromosmicos, por ejemplo deleciones, duplicaciones de bandas y translocaciones) y se han utilizado en diversos estudios genticos y evolutivos. MATERIALES Y EQUIPO Larvas activas del tercer estadio de la mosca Drosophila melanogaster. Microscopio estereoscopio. Microscopio ptico. Portaobjetos. Cubreobjetos. Reactivo de Aceto orceina. Pipeta pasteur. Estuche de diseccin.
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METODOLOGA: 1. Se extrae con una aguja de diseccin una larva de tercer estadio de Drosophila melanogaster, la cual se reconoci por ser proporcionalmente ms grande que las de 1er. o 2do. Estadios. Generalmente estas larvas se encuentran en las paredes de los frascos de cultivo. Se elige a una que se encuentre activa. 2. Se coloca la larva en una platina de vidrio, se le aade una mnima cantidad de agua, esto para no dejar que se seque la larva y as poder realizar la diseccin. 3. La diseccin comienza localizando primero las mandbulas las cuales se distinguen claramente por su forma y color negro (Fig. 1, anexo ). Se coloca la punta de una de las agujas en las mandbulas y la punta de la otra aguja en la regin media del cuerpo de la larva. 4. Se jalan en sentido opuesto las dos agujas al mismo tiempo, para poder desgarrar as la larva. 5. Se separan las glndulas salivales del resto de los rganos por la forma caracterstica de sacos alargados que aparentan estar formados por una red. Las glndulas generalmente se quedan adheridas a la regin mandibular. 6. Las glndulas salivales estn rodeadas por tejido adiposo opaco, se quita la mayor cantidad de este tejido con ayuda de las agujas con el fin de que la preparacin quedara ms limpia. Las glndulas salivales son rganos pares localizados cerca de extremo anterior de larva, generalmente tienen cuerpo graso largo, delgado, unido a ellas. 7. Una vez separas las glndulas salivales, se transportan con las agujas a un portaobjetos y se les agrega unas gotas de Aceto orcena. 8. Observar las clulas de las glndulas (Fig. 2, Anexo ). 9. Para poder apreciar los cromosomas politcnicos, la muestra de tejido se aplana colocando suavemente el dedo pulgar sobre el cubreobjetos y se presiona lo ms fuertemente posible (Fig. 3, Anexo ). RESULTADOS: 1. dibuja lo observado con el objetivo de 40 X y describir las observaciones de la glandula: Glndulas Salivales Descripcin:
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CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO: a) Qu tipos de organismos se pueden observar los cromosomas politnicos?
b) Cul es su funcin?
c) Explique brevemente la forma en la que se generan los cromosomas politnicos.
d) Qu es un Puff y un anillo Balbiani, existe alguna diferencia?
e) En gentica: Qu utilidad tienen los cromosomas politnicos?
BIBLIOGRAFA: 1. Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440 2. Alberts, et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publising, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0W. 3. Kulg et al. Conceptos de Gentica. Ed Prentice hall 5a ed. Madrid 1999. Pp. 43 45. 4. Del Castillo Flacn, V. M., Jimnez Pedraza, M., Romero Rosales M. G., Romo Bonilla, J. A., Valdez Hernndez M. Identificacin de los cromosomas politnicos en las glndulas salivales de la fase larvaria de Drosophila melanogaster. Facultad de Ciencias, Universidad Autnoma de Mxico, Coyoacn: Mxico DF. 5. http://www.cienciaybiologia.com/bgeneral/organizacion-material-genetico.htm. 6. http:/www.uniovi.es/esr/pp/tch2.pdf 7. http://www.agro.uchile.cl/docencia/dpan/genetica/clase6/6Sexta.pdf
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ANEXO INFORMACION COMPLEMENTARIA
Fig. 1. Vista esquemtica de la estructura de una larva de Drosophila melanogaster donde puede observarse la localizacin de las glndulas salivales.
FIG. 2
FIG. 3
Clulas de las glndulas salivales con ncleo claramente definido Fig. 2. Tincin de las glndulas salivales con reactivo de aceto orcena Fig. 3 Ejemplo de un cromosoma politnicos de Drosophila melanogaster. El cromocentro se halla en el ngulo superior derecho. La flecha seala el extremo del cromosoma X. La imagen ampliada (B) muestra las bandas y las interbandas con mayor detalle.
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PRCTICA No. 7 OBSERVACIN DE CLULAS DE CEBOLLA EN MITOSIS

COMPETENCIA: El alumno aprender a identificar las diferentes fases de la mitosis en clulas eucariticas vegetales. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA: La reproduccin, como una actividad celular, comprende una serie ordenada de eventos que se realizan en el ncleo y a los que se denomina Mitosis. El resultado de este proceso es la divisin del ncleo en dos ncleos idnticos que contienen la misma cantidad de material hereditario (1).La duracin del fenmeno vara segn el tipo celular y las condiciones del medio, sobre todo la temperatura. El proceso de la mitosis es continuo y slo para facilitar su descripcin se ha dividido en cuatro fases: Profase, Metafase, Anafase y Telofase (2). Profase: Es la primera parte de la mitosis, en ella la membrana nuclear y el nuclolo desaparecen. El centrolo se divide en dos centrolos hijos, los cuales emigran a cada uno de los polos opuestos de la clula, formando entre ellos los filamentos del uso acromtico. los filamentos de la cromatina se condensan de manera que los cromosomas se hacen visibles al microscopio, notndose que estn formados por dos unidades longitudinales llamadas cromtidas. Metafase: Los cromosomas se disponen en el ecuador del uso acromtico formando la placa ecuatorial. Anafase: Las cromtidas que forman cada cromosoma se separan dirigindose cada una a los polos opuestos. Telofase: Se integran los ncleos hijos con sus membranas nucleares y nuclolos, los cromosomas se alargan y vuelven a su forma de filamentos de cromatina, desaparece el uso acromtico y por ltimo se forma un tabique en el citoplasma o un estrangulamiento en el mismo que divide a la clula en dos (3). Interfase: El periodo durante el cual la clula no se est reproduciendo se denomina interfase. Generalmente las clulas permanecen ms tiempo en esta fase, que en la mitosis. esta etapa es importante en relacin a la mitosis, porque durante ste periodo se duplica el ADN (1).
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MATERIALES Y EQUIPO: Portaobjetos Cubreobjetos Microscopio Estuche de diseccin Encendedor HCl 1 N Ac. Actico 45% Orceina actica Barniz de ua transparente Raices primarias de Allium cepa (cebolla)
METODOLOGA 1. Coloca una cebolla en un recipiente con agua durante una semana, de modo que slo la base toque el agua (como lo marca la imagen). Mantenla en la oscuridad hasta que tenga nuevas raicillas de unos 2 cm de largo. 2. Cortar de 1-2 cm la parte terminal de las races y colocar en un portaobjetos. Adicionar gota a gota orceina actica hasta que cubra la raz. Cuidar que los meristemos queden perfectamente cubiertos con el colorante. 3. Calentar a la llama del encendedor, retirar al desprenderse vapores, enfriar y volver a calentar suavemente por 2-3 veces, cuide que la temperatura no ponga en ebullicin el colorante, ya que esto daa los meristemos. 4. Enfre y transfiera cada una de las races a un portaobjeto, corte 2 mm despus del pice, aada una gota de orcena y coloque encima el porta, presione con la punta de un lpiz la zona donde se encuentra el meristemo y mediante golpes con la goma del lpiz, disprselo en monocapa, quite el exceso de colorante. 5. Observe al microscopio a 40X.
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RESULTADOS: FASE: DESCRIPCCION
FASE: DESCRIPCCION
FASE: DESCRIPCCION
FASE: DESCRIPCCION
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CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO 1. Qu aplicacin dara usted a la observacin de las clulas meristemticas? 2. Qu diferencia hay entre la mitosis de clulas animales y vegetales? 3. En mitosis Qu diferencia existe entre la clula original y la clula hija? 4. Cul es el significado de que la mitosis mantenga la informacin gentica de una generacin de clulas a la siguiente? BIBLIOGRAFIA: 1. Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440 2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0W. 3. Kulg et al. Conceptos de gentica. Ed Prentice hall 5 ed. Madrid 1999. pp. 43-45. 4. Del Castillo Falcn, V. M., Jimnez Pedraza, M., Romero Rosales M. G., Romo Bonilla, J. A., Valdez Hernndez M. Identificacin de los cromosomas politnicos en las glndulas salivales de la fase larvaria de Drosophila melanogaster. Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Coyoacn; Mxico DF. 5. http://www.cienciaybiologia.com/bgeneral/organizacion-material-genetico.htm 6. http://www.uniovi.es/esr/pp/tch2.pdf 7. http://www.agro.uchile.cl/docencia/dpan/genetica/clase6/6Sexta.pdf
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PRCTICA No. 8 OBSERVACIN ESTRUCTURAS FORMES EN LA ORINA

COMPETENCIA: El alumno aprender a identificar las diferentes fases tipos de cristales presentes en la orina y empleara la bsqueda por campo para la localizacin de eritrocitos, leucocitos o clulas epiteliales. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA: El estudio del sedimento urinario es un mtodo diagnstico muy simple en esta poca, en la cual las tcnicas de estudios complementarios son tan complejas. Sin embargo, ste representa un medio diagnstico auxiliar muy valioso, no slo por su sencillez, sino tambin por su rentabilidad. Pero, a pesar de su simplicidad, este mtodo diagnstico slo puede ser aprovechado por el mdico que tiene cierta experiencia en relacionar el cuadro clnico con los datos obtenidos a travs del sedimento, y es muchas veces una tarea difcil establecer una correcta correlacin en la prctica diaria. Cuando se estudia el sedimento urinario con el microscopio, se reconocen numerosas estructuras con una forma muy diversa. En primer lugar, se pueden observar clulas de la va urinaria descendente y de los riones, as como sangre, sales urinarias precipitadas con forma cristalina o cilindros formados en los canalculos renales que aparecen como bandas anchas y estrechas en el campo visual. Al anlisis ptico de la orina se agrega su examen qumico a travs de las tiras reactivas, las cuales logran evidenciar la presencia de protenas, hemates, leucocitos, nitritos, as como aportan informacin acerca del ph y la densidad. Sin embargo, el mdico debe conocer las limitaciones y ventajas de las tiras reactivas y del estudio del sedimento. Elementos formes del sedimento urinario El sedimento normal se halla prcticamente vaco, aunque en ocasiones pueden observarse clulas de la va urinaria e incluso de los genitales externos, as como eritrocitos o leucocitos aislados, cristales, sales amorfas o filamentos de moco, resultando el resto de los elementos de probable origen patolgico. Los componentes patolgicos que se observan ms a menudo son bastante inespecficos y se evidencian en diversas enfermedades de la va urinaria. Eritrocitos: Los hemates se eliminan en forma muy reducida en la orina, incluso en personas normales, con aumento 400x, se puede observar aproximadamente 0 a 2 hemates por campo. stos se identifican al examen microscpico como discos redondos de color dbilmente amarillo rojizo, con doble contorno Leucocitos: Cuando se habla de leucocitos casi siempre se habla de granulocitos, y estos indican la presencia de procesos inflamatorios del rin y la va urinaria. Al examinar un sedimento urinario de una persona sana, pueden detectarse hasta 5 leucocitos por campo de 400x, sin que esto tenga significado patolgico. Son clulas de tamao mayor a los hemates y menor a las clulas epiteliales, con presencia de ncleo sementado y granulaciones.
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Celulas epiteliales: Los elementos epiteliales son frecuentes en el sedimento urinario y su valor diagnstico muy reducido. Tiene su origen desde la pelvis renal, urter y vejiga, hasta la uretra. Su presencia acompaada de leucocituria puede indicar una inflamacin de la va urinaria descendente. En caso de apreciar anomalas nucleares deber descartarse un proceso maligno. Estas clulas son ms pequeas que las del epitelio plano, son redondeadas con "cola" y su ncleo es ms grande y redondo Cilindros: La presencia de cilindros indica casi siempre la presencia de una enfermedad renal, aunque la evidencia de alguno de ellos (hialinos y granulosos) pueden encontrarse en personas sanas tras grandes esfuerzos fsicos. Cilindros hialinos: Est compuestos por una protena de alto peso molecular (mucoproteina de TammHorsfall) que se produce y elimina en cantidades muy pequeas en condiciones normales. Estos cilindros son homogneos, incoloros, transparentes y poco refringentes, por lo que son fciles de omitir. Cilindros granulosos: Ocasionalmente pueden aparecer en personas sanas, aunque su presencia se relaciona con enfermedades agudas y crnicas del rin. Suelen ser ms grandes que los hialinos y presentar inclusiones granulares. No es raro observar una mezcla de cilindros hialinos y granulosos
Cristales: Los cristales pueden adoptar mltiples formas que dependen del compuesto qumico y del ph del medio. En comparacin con otros elementos de la orina, los cristales slo poseen significacin diagnstica en muy pocos casos.
MATERIALES Y EQUIPO: Microscopio ptico Centrifuga Tubo para centrifuga Pipeta pasteur con bulbo Azul de metileno Eosina
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METODOLOGIA: 1. Obtener una muestra de orina de aproximadamente 10- 15 ml. 2. Con centrfuga de mesa se centrifugan 10ml de orina durante unos 7 minutos a una velocidad de 2000 rpm. 3. El sobrenadante se descarta 4. Agita el sedimento aplicando una gota de este sobre un portaobjetos, 5. Extendindolo homogneamente con un cubreobjetos. 6. Examinando la muestra inicialmente con escaso aumento (10x) se obtendr una visin general, luego se intensificar el aumento (40x), lo cual permitir identificar y contar el nmero de distintos elementos formes. TINCION: Tincin de Eosina: tie eritrocitos de color rosa, logrando diferenciarlos de otros elementos. Doble tincin con eosina y azul de metileno: otorga color rojizo a los hemates y cilindros eritrocitarios, diferencindolo del color azul que toman otros elementos. Tincin con rojo neutro y violeta de metilo de Schugt. RESULTADOS:
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CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO: 1. Mencione todos los tipos de cristales comnmente encontrados en una muestra de orina? 2. Cuntos tipos de clulas epiteliales pueden ser encontrados en una muestra de orina tras la observacin al microscopio? 3. Mencione las diferencias nucleares de los leucocitos?
BIBLIOGRAFIA: 1. Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440 2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0W. 3. http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/6to/membr-casos/Fisiol-Nefron/Analisis-Orina.htm 4. http://es.scribd.com/doc/44535454/Practica-Examen-General-de-Orina-2010
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ANEXO ESTRUCTURAS FORMES EN LA ORINA

CRISTALES
Fosfato Triple
Oxalato de Calcio
Urato de Sodio
Virutas de Amonio Clulas Epiteliales
Tirosina Leucocitos y hematies
Fosfato amorfo Cilindros
35

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PRCTICA No. 1 MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO-INFECCIOSOS (RPBI)

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RCTICA No. 2 USO Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO PTICO

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Figura 1. Estructuras observadas con el objetivo de 4X.

Figura 2. Estructuras observadas con el objetivo de 10X.

Figura 1. Estructuras observadas con el objetivo de 40X.

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CUESTIONARIO: 1. Indica el nombre de cada una de las partes del microscopio:

b) Cules son las ventajas de la microscopa ptica frente a la microscopa electrnica?

c) Cul es la utilidad prctica de la presente sesin de laboratorio?

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PRCTICA No. 3 FROTIS BUCAL

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CELULAS EPITELIALES Descripcin

CELULAS EPITELIALES Descripcin

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3. Por qu las clulas retienen los colorantes?

5. Cul es la forma correcta de colocar el cubreobjetos?

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PRCTICA No. 4 PREPARACIONES TEMPORALES

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Objetivo 10 X Descripcin de la preparacin:

Objetivo 40 X Descripcin de la preparacin:

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CUESTIONARIO: 1. Por qu son importantes las preparaciones temporales?

2. Qu propiedades tiene este medio de montaje?

3. Cules son las preparaciones que se puede hacer en el laboratorio?

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TIPO DE CELULAS Linfocito Monocito Basfilo Eosinofilo Neutrfilo

4. Qu forma tienen los eritrocitos?

5. Porque las clulas sanguneas tienen diferentes formas y cualidades?

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PRCTICA No. 6 IDENTIFICACIN DE GLANDULA SALIVAL

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CUESTIONARIO: a) Qu tipos de organismos se pueden observar los cromosomas politnicos?

c) Explique brevemente la forma en la que se generan los cromosomas politnicos.

d) Qu es un Puff y un anillo Balbiani, existe alguna diferencia?

e) En gentica: Qu utilidad tienen los cromosomas politnicos?

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ANEXO INFORMACION COMPLEMENTARIA

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PRCTICA No. 7 OBSERVACIN DE CLULAS DE CEBOLLA EN MITOSIS

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RESULTADOS: FASE: DESCRIPCCION

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