METABOLISMUL

Metabolismul cuprinde totalitatea transformrilor chimice care au loc ntr-o celul, esut sau organism. Aceste reacii chimice nu au loc izolat, ci sunt organizate sub forma unor secvene de mai multe reacii succesive care poart numele de ci metabolice; n cadrul acestora, produsul unei reacii devine substrat pentru reacia urmtoare. Cile metabolice sunt orientate spre patru direcii diferite: 1. Degradarea oxidativ a combustibililor metabolici din diet i din depozitele tisulare (glucoz, acizi grai, aminoacizi) - scop: generarea de energie pentru a susine procesele de biosintez i diversele procese fiziologice (contracia muscular, transportul activ, etc.). 2. Stocarea combustibililor metabolici (n perioadele post-prandiale), respectiv mobilizarea rezervelor (n perioadele inter-prandiale). - ex: glucoza este stocat sub form de glicogen (n ficat i muchi), acizii grai sunt depozitai sub form de trigliceride (n esutul aidpos). 3. Biosinteza de molecule biologice avnd diverse roluri structurale i funcionale. - ex: proteine, acizi nucleici, componente ale membranelor celulare (fosfolipide, sfingolipide), componente ale matricei extracelulare (proteoglicani), etc. 4. Degradarea biomoleculelor cu rol structural sau funcional, cu formare de produi reziduali care sunt eliminai ca atare sau dup detoxifiere. - ex: amoniacul rezultat din degradarea aminocizilor este detoxifiat prin transformare n uree, iar aceasta este eliminat prin urin; nucleotidele purinice din componena acizilor nucleici sunt degradate la acid uric, eliminat ca atare pe cale renal. Primele dou direcii se refer la metabolismul energetic, care cuprinde transformrile pe care le sufer moleculele cu rol de combustibil biologic (capabile s genereze energie). Aceasta reprezint o parte extrem de important a metabolismului oricrui organism viu, avnd n vedere c majoritatea proceselor fiziologice, precum i procesele biochimice de sintez, se desfoar cu consum energetic. Cile care alctuiesc metabolismul energetic pot fi de dou tipuri: catabolice i anabolice. (#3) Cile catabolice sunt implicate n degradarea moleculelor complexe (de natur glucidic, lipidic i proteic) obinute din mediu (sub forma nutrienilor) sau din rezervele tisulare, n molecule mai simple, n cele din urm CO 2, H2O i NH3. Caracteristicile comune ale acestor ci sunt: - cuprind reacii oxidative (de dehidrogenare), n care echivalenii reductori sunt transferai pe coenzime nicotinamidice sau flavinice, cu generare de NADH, NADPH i FADH2; - n cursul lor are loc degajarea energiei libere coninute n moleculele degradate i conservarea sa parial sub form de ATP (cile catabolice sunt exergonice). Etapele catabolismului combustibililor biologici sunt: (#4) 1. Oxidarea glucozei, acizilor grai i a unor aminoacizi, cu formarea unui produs de degradare comun, acetil-CoA. 2. Oxidarea acetil-CoA n ciclul Krebs (ciclul acidului citric). n aceste prime etape, electronii ndeprtai n reaciile de oxidare sunt ncorporai n moleculele coenzimelor reduse NADH i FADH2. 3. Fosforilarea oxidativ: reoxidarea NADH i FADH2 n lanul respirator (cu consum de oxigen), cuplat cu generarea de ATP. Cile anabolice sunt implicate n sinteza moleculelor complexe din precursori simpli. Caracteristicile comune ale acestor ci sunt: - cuprind reacii de reducere, n care donorul de echivaleni reductori este NADPH; - au loc cu consum de ATP (sunt endergonice). 1

Catabolismul este un proces convergent: o varietate larg de molecule sunt transformate n civa produi finali comuni. Anabolismul este un proces divergent: un set restrns de precursori simpli servete la sinteza unei mari varieti de biomolecule complexe. Dei au roluri complet diferite, catabolismul i anabolismul sunt interrelaionate: muli intermediari metabolici sunt mprtii de ctre cele dou procese, iar precursorii necesari pentru cile anabolice se gsesc printre produii cilor catabolice. Rolul coenzimelor nicotinamidice i flavinice n procesele metabolice Coenzimele nicotinamidice (NAD+ i NADP+) i cele flavinice (FAD) colecteaz electronii eliberai n cursul catabolismului, n reaciile de oxidare (dehidrogenare) ale diverilor combustibili biologici. Ulterior, formele reduse ale acestor coenzime au roluri diferite: (#5) NADH i FADH2 transfer echivalenii reductori oxigenului (acceptorul final de electroni), prin intermediul lanului respirator. n acest proces, energia liber degajat n cursul catabolismului este utilizat la sinteza ATP i stocat temporar sub aceast form (procesul fosforilrii oxidative). NADPH are rolul de agent reductor: cedeaz echivalenii reductori ctre diverse substrate, n cursul reaciilor de reducere din cursul anabolismului. REGLAREA PROCESELOR METABOLICE Diversele ci metabolice nu se desfoar cu viteze constante pe parcursul a 24 ore i, de asemenea, exist diferene ntre amploarea pe care o anumit cale metabolic o are n organe diferite, la un moment dat. Aceast variaie n desfurarea proceselor metabolice este determinat de fluctuaiile circumstanelor n care se afl organismul (intermitena aportului alimentar, modificarea compoziiei dietei de la un prnz la altul, creterea marcat a necesarului de ATP al muchiului scheletic n timpul unui exerciiu fizic, scderea disponibilitii de oxigen ntr-un esut datorit hipoxiei sau ischemiei). Procesele metabolice sunt supuse unor mecanisme reglatorii complexe, care asigur adaptarea vitezei lor de desfurare la necesitile particulare din fiecare moment ale unui anumit esut sau ale organismului ca ntreg. Reglarea cilor metabolice se realizeaz, n principal, la nivelul unei enzime cheie (reglatorie), care catalizeaz etapa limitant de vitez din acea cale. Caracteristicile acesteia sunt: este reacia cea mai lent din ntreaga cale (deoarece enzima care o catalizeaz se afl ntr-o concentraie mic n celul); astfel, viteza global de desfurare a cii metabolice respective depinde n mod esenial de viteza acelei reacii; are un caracter ireversibil (fiind puternic exergonic); este situat n prima parte a cii metabolice. Enzimele cheie sunt supuse unor mecanisme variate de control; modificarea activitii sau a cantitii lor determin ajustarea vitezei reaciei pe care o catalizeaz i, n consecin, modificarea vitezei globale a cii metabolice respective. Cile metabolice de natur anabolic i de natur catabolic sunt reglate independent, dar ntr-o manier coordonat. Acest lucru este posibil datorit faptului c o cale de sintez a unui anumit compus nu se suprapune exact cu calea utilizat pentru degradarea acelui compus: (#7) a) Uneori, cele dou procese opuse se desfoar pe ci complet diferite, fie n acelai compartiment celular (de ex. sinteza i degradarea glicogenului, care au loc n citosol), fie n compartimente celulare diferite (de ex. sinteza acizilor grai are loc n citosol, iar degradarea acizilor grai are loc n mitocondrie); astfel, etapele reglatorii din cele dou procese sunt localizate pe ci complet distincte.

b) Alteori, calea de sintez i calea de degradare a aceluiai compus mprtesc unele etape, dar exist i etape care cuprind reacii enzimatice distincte n cele dou ci (de ex. degradarea i sinteza glucozei); n aceste cazuri, etapele limitante de vitez care servesc ca puncte de control sunt catalizate de enzime care sunt unice pentru fiecare din cele dou ci opuse. Reglarea coordonat (reciproc) a cilor metabolice cu caracter opus presupune c activarea cii de degradare a unui anumit compus are loc n paralel cu inactivarea cii de sintez a acelui compus i viceversa, astfel nct cele dou procese s nu funcioneze concomitent cu viteze egale ; aceast situaie ar duce la formarea unui ciclu cu rezultat nul (ciclu inutil, futile cycle) i, n multe situaii, consumator de energie. Modaliti de reglare a activitii enzimelor cheie 1. Modificarea activitii catalitice a moleculelor de enzim existente n celul Activitatea unei molecule de enzim poate fi modificat n dou moduri pricipale: alosteric i covalent. a) Modularea alosteric a activitii enzimatice este, n general, declanat de modificarea nivelului unui anumit metabolit n celul. Efectorul alosteric poate fi un intermediar din calea respectiv, un produs al unei alte ci sau un compus cheie care indic starea metabolic sau energetic a celulei (de ex. NADH/NAD+ sau ATP/ADP/AMP). Modularea alosteric este foarte rapid, efectul apare n intervale de timp de ordinul milisecundelor. b) Modificarea covalent a activitii enzimatice se realizeaz prin fosforilare defosforilare. (#9) Fosforilarea se realizeaz la resturi de serin, treonin sau tirozin prin transferul unei grupri fosfat din ATP, sub aciunea unor protein kinaze. Una din principalele enzime din aceast categorie este protein kinaza AMPc-dependent (protein kinaza A), care este activat de ctre AMP ciclic. AMPc, la rndul su, este un mesager secund sintetizat din ATP sub aciunea adenilat ciclazei, enzim situat n membrana plasmatic a multor celule i activat n urma aciunii unor hormoni (printre care glucagonul i adrenalina). Defosforilarea este realizat prin ndeprtarea hidrolitic a gruprii fosfat, sub aciunea unor protein fosfataze. Una dintre acestea este protein fosfataza-1, care este activat printr-un mecanism complex de ctre insulin. Efectele fosforilrii/defosforilrii asupra enzimelor sunt diferite n funcie de enzim: unele enzime se activeaz prin fosforilare, altele, dimpotriv, se inactiveaz. Modificarea covalent a activitii enzimatice este relativ rapid: secunde-minute. 2. Modificarea numrului de molecule de enzim Numrul de molecule de enzim dintr-o celul depinde de viteza de sintez i de viteza de degradare a acelei enzime. Viteza sintezei enzimei depinde de viteza transcripiei genei codante i de viteza translaiei ARNm. Cantitatea de enzim dintr-o celul poate fi reglat prin modificarea vitezei de sintez a unor noi molecule de enzim: creterea vitezei de sintez va duce la creterea cantitii enzimei (proces numit inducie), scderea vitezei de sintez va duce la scderea cantitii enzimei (proces numit represie). Aceste procese sunt adeseori declanate n urma aciunii unor hormoni i sunt relativ lente, timpul necesar pentru instalarea efectelor lor n celul fiind de ordinul minutelor-orelor. Un tip particular de reglare este reglarea feed-back, n care produsul final al unei ci metabolice controleaz rata producerii sale. Are loc prin inhibiia alosteric sau prin represia enzimei limitante de vitez de ctre produsul final al cii. (#8)

METABOLISMUL GLUCIDIC
Glucidele sau carbohidraii reprezint cele mai abundente molecule organice din natur. n organismul uman, ele ndeplinesc o multitudine de roluri importante: - constituie o surs important de energie (furnizeaz o fraciune important, n general peste 50%, din caloriile unei diete echilibrate); - sub form de glicogen, servesc ca form de stocare a energiei n corp; - sub form legat de alte tipuri de molecule (formnd glicolipide, glicoproteine i proteoglicani), ndeplinesc diverse roluri structurale i funcionale: sunt componente ale membranelor celulare i ale matricei extracelulare, mediaz unele forme de comunicare intercelular. Structura glucidelor: #11-18. Glucoza este principalul glucid, deinnd o poziie central n cadrul metabolismului, din urmtoarele motive: - este un bun combustibil biologic, fiind relativ bogat n energie liber; - poate fi stocat sub forma unui polimer cu greutate molecular mare (glicogen), la care se poate apela atunci cnd aportul exogen de glucide lipsete; - poate da natere unei game largi de biomolecule, utilizate n diverse procese de biosintez (acizi grai i glicerol-fosfat, aminoacizi, riboz-5-fosfat, etc.). Sursele exogene de glucoz sunt reprezentate de glucidele din diet: - polizaharide de origine vegetal (amidon) i, ntr-o mai mic msur, de origine animal (glicogen); - dizaharide: zaharoz, lactoz, maltoz; - glucoz liber. Exist 3 posibiliti principale de metabolizare a moleculei de glucoz: (#19) 1 - degradarea prin glicoliz, urmat de ciclul Krebs, cu generare de ATP; 2 - depozitarea sub form de glicogen; 3 - degradarea pe calea pentoz-fosfailor, cu generare de NADPH (agent reductor) i riboz-5-fosfat (precursor n sinteza de nucleotide i acizi nucleici).

GLICOLIZA
Glicoliza este o cale de degradare a glucozei printr-o serie de reacii enzimatice, care are ca scop eliberarea unei fraciuni din energia coninut n molecula glucozei i conservarea ei sub form de ATP. Este prima cale metabolic elucidat, fiind descris n anii 1930 de ctre Embden i Meyerhoff. Glucoza este o surs important de energie (substrat energogen) pentru toate esuturile. Glucoza este principalul carbohidrat din diet; alte monozaharide sunt reprezentate de fructoz i galactoz, care sunt degradate prin transformare n intermediari ai glicolizei. Procesul glicolizei are loc n citoplasm i este o cale unic de metabolism, ntruct poate funciona att n condiii aerobe, ct i anaerobe; capacitatea glicolizei de a furniza ATP n absena oxigenului are o importan crucial, aa cum se va vedea ulterior. n vederea angajrii pe calea glicolizei, glucoza plasmatic trebuie s ptrund n celule. Acest proces se realizeaz cu ajutorul unor transportori proteici membranari care aparin familiei GLUT i care sunt de mai multe tipuri, fiecare tip avnd o anumit localizare tisular: (#21) 4

- GLUT-4 se gsesc n esutul adipos i muscular; ei sunt depozitai n citoplasm, insulina determinnd translocarea lor n membrana plasmatic; - GLUT-1 sunt localizai n eritrocit i creier; - GLUT-2 se gsesc n ficat (i n celulele pancreatice) i sunt prezeni permanent n membrana plasmatic, nedepinznd de aciunea insulinei; ei realizeaz transportul glucozei prin difuzie facilitat n ambele sensuri, cu vitez mare, n felul acesta asigurnd echilibrarea permanent a concentraiei glucozei extracelulare i intracelulare. Procesul glicolizei cuprinde dou etape (faze): (#22,23) - o prim etap n care se consum energie sub form de ATP, pentru fosforilarea (mbogirea energetic) a unor intermediari - este aa-numita faz pregtitoare; - o a doua etap n care se genereaz ATP, astfel nct bilanul energetic global este pozitiv. I. Etapa consumatoare de energie (#25) 1. Fosforilarea glucozei la glucoz-6-fosfat (G-6-P). (#24) Are loc prin transferul unei grupri fosfat din ATP pe gruparea OH din poziia 6 a glucozei. ntruct reacia are loc cu pierdere de energie liber sub form de cldur ( G = 4 kcal/mol), are un caracter ireversibil. Acest proces de fosforilare a glucozei este important din dou puncte de vedere: - realizeaz reinerea glucozei fosforilate n celul, determinnd angajarea sa n procesul de metabolizare (numai glucoza liber poate fi transportat prin membrana plasmatic); - energia eliberat prin ruperea legturii fosfat macroergice din molecula ATP-ului este conservat parial n legtura fosfo-esteric a G-6-P glucoza fosforilat are o molecul mbogit n energie liber, deci mai reactiv, ceea ce favorizeaz metabolizarea sa ulterioar. Reacia de fosforilare a glucozei este catalizat de hexokinaz (n toate esuturile) i de glucokinaz (n ficat). Cele dou izoforme difer n privina afinitii pentru substrat: - hexokinaza are un Km mic pentru glucoz (0,1 mM), deci o afinitate mare, ceea ce face ca aceast enzim s asigure fosforilarea eficient a glucozei chiar n condiiile unei concentraii sczute a glucozei plasmatice i tisulare; - glucokinaza din ficat are un Km mare (10 mM) pentru glucoz, ceea ce traduce o afinitate mic pentru glucoz; ca urmare, glucokinaza funcioneaz eficient numai atunci cnd concentraia intracelular a glucozei este mare, aa cum se ntmpl postprandial, cnd exist un aport crescut de glucoz la nivel hepatic prin vena port; prin aciunea sa, glucokinaza contribuie la minimizarea hiperglicemiei postprandiale. Glucozo-6-P reprezint un punct de rscruce n metabolismul glucidic, fiind precursorul pentru toate cile care utilizeaz glucoza, principalele fiind: glicoliza, calea pentoz-fosfailor i sinteza de glicogen. 2. Izomerizarea glucozo-6-fosfatului la fructoz-6-fosfat (F-6-P). Aceast reacie constituie un proces de izomerizare aldoz-cetoz i este catalizat de fosfohexoz izomeraza, avnd un caracter reversibil. 3. Fosforilarea fructozo-6-fosfatului la fructoz-1,6-difosfat (F-1,6-P2). Are loc prin transferul unei grupri fosfat din ATP pe gruparea OH din poziia 1 a F-6-P, proces care are loc cu pierdere de energie liber sub form de cldur, ceea ce i confer un caracter ireversibil (G = 3,4 kcal/mol). Aceasta este prima etap care angajeaz ferm glucoza pe calea glicolizei, G-6-P i F-6-P putnd urma i alte ci, pe cnd F-1,6-P2 este direcionat spre glicoliz. Reacia este catalizat de fosfofructokinaza-1, care deine un rol major n cadrul glicolizei, fiind principalul punct de control al vitezei de desfurare a acestei ci metabolice. 5

4. Scindarea fructozo-1,6-difosfatului n dou trioze fosforilate : gliceraldehid-3-fosfat (GA-3-P, cuprinde atomii C4-C6 ai fructozei) i dihidroxiaceton fosfat (DHAP, cuprinde atomii C 1C3 ai fructozei). Reacia este catalizat de aldolaz (aldolaza A, spre a o deosebi de aldolaza B din muchi, care acioneaz asupra fructozo-1-fosfatului; enzima face parte din clasa liazelor). ntruct numai GA-3-P poate fi degradat n continuare n glicoliz, intervine triozfosfat izomeraza, care catalizeaz o interconversiune cetoz-aldoz i transform DHAP n GA-3-P. II. Etapa generatoare de energie (#26) 5. Oxidarea gliceraldehid-3-fosfatului la 1,3-difosfoglicerat (1,3-DPG). Gruparea aldehidic a GA-3-P este oxidat n prezen de NAD + i fosforilat cu fosfat anorganic, cu formarea unei grupri carboxil(acil)-fosfat (de tip anhidrid acid mixt). n aceast reacie, mare parte din energia liber degajat n procesul oxidrii este conservat n legtura carboxil-fosfat a 1,3-DPG, care este de tip macroergic ( G pentru hidroliza acestei grupri este de 11,8 kcal/mol). Reacia este catalizat de gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaza, enzim ce conine o grupare SH n centrul activ, la care substratul se leag covalent prin gruparea sa aldehidic. Acceptorul de hidrogen n reacia de oxidare este NAD +, care se reduce la NADH + H + n cursul reaciei. 6. Transferul gruprii fosfat din 1,3-difosfoglicerat pe ADP, cu sinteza de ATP. Sub aciunea fosfoglicerat kinazei, gruparea fosfat nalt energetic de la C1 al 1,3-DPG este transferat pe ADP, cu generarea unei molecule de ATP i a 3-fosfogliceratului. ntruct legtura carboxil-fosfat din 1,3-DPG nmagazineaz mai mult energie (11,8 kcal/mol) dect este necesar pentru sinteza ATP din ADP i Pi (7,3 kcal/mol), 1,3-DPG poate servi la sinteza ATP. Cuplul reaciilor catalizate de gliceraldehid-3-P dehidrogenaza i fosfoglicerat kinaza reprezint un proces de fosforilare la nivel de substrat: sinteza ATP prin fosforilarea ADP-ului, utiliznd energia nmagazinat ntr-un substrat macroergic, fr participarea oxigenului. Energia eliberat prin oxidarea gruprii aldehidice a GA-3-P la grupare carboxil este conservat prin formarea cuplat a ATP din ADP i Pi. Sinteza ATP prin fosforilare la nivel de substrat reprezint o cale complet distinct de sinteza ATP prin fosforilare oxidativ, care este un proces strict aerob. 7. Transformarea 3-fosfogliceratului n 2-fosfoglicerat. Are loc sub aciunea fosfoglicerat mutazei, care catalizeaz o reacie de transfer reversibil al gruprii fosfat ntre C-3 i C-2 al gliceratului. 8. Deshidratarea 2-fosfogliceratului la fosfoenolpiruvat. Procesul este catalizat de enolaz i reprezint a doua reacie din glicoliz care genereaz un intermediar ce conine un fosfat nalt energetic. Pierderea unei molecule de ap din 2-fosfoglicerat determin o redistribuire a energiei n interiorul moleculei, ducnd la creterea considerabil a energiei libere nmagazinate n gruparea enol-fosfat (legtur de tip macroergic, G = 14,8 kcal/mol). 9. Transferul gruprii fosfat din fosfoenolpiruvat pe ADP, cu sintez de ATP. Reacia este catalizat de piruvat kinaz i duce la formarea unei molecule de ATP i a enolpiruvatului, care tautomerizeaz rapid la piruvat. Este cea de a doua reacie de fosforilare la nivel de substrat din glicoliz. n cursul acestui proces, aproximativ jumtate din energia coninut n legtura fosfat-macroergic a fosfoenolpiruvatului este conservat sub forma legturii fosfo6

anhidridice din ATP, restul pierzndu-se sub form de cldur ( G a acestei reacii este 7,5 kcal/mol). n consecin, reacia are un caracter ireversibil.

Soarta piruvatului i a NADH formate n glicoliz (#27) NADH produs n glicoliz trebuie s fie reoxidat continuu napoi la NAD +, n vederea meninerii n celul a unor rezerve adecvate de NAD+, care s participe ca acceptor de electroni n reacia catalizat de gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaz. Dac NADH nu este reoxidat eficient, rezervele de NAD+ se epuizeaz la un moment dat i glicoliza nu mai poate continua. Exist dou posibiliti alternative de reoxidare a NADH, care se desfoar n funcie de condiiile n care are loc metabolismul celular. Soarta piruvatului rezultat din glicoliz depinde de calea aleas pentru oxidarea NADH. Astfel: n condiii aerobe, NADH este transferat n mitocondrie i oxidat n lanul respirator, astfel nct produsul final al glicolizei este piruvatul; acesta poate fi oxidat n mitocondrie la acetil-CoA, care este oxidat ulterior total n ciclul Krebs; (#28) n condiii anaerobe, lanul respirator nu poate funciona; NADH-ul poate fi reoxidat prin angajarea n reacia de reducere a piruvatului la lactat, sub aciunea lactat dehidrogenazei, ceea ce explic faptul c n condiii anaerobe, glicoliza se termin la lactat. (#29) Reacia lactat dehidrogenazei are un caracter reversibil n condiiile din celul, sensul su de desfurare la un moment dat depinznd de concentraiile intracelulare relative ale piruvatului i lactatului i de raportul [NADH]/[NAD+]. Lactatul format ca produs final al glicolizei anaerobe difuzeaz n snge, de unde este preluat de diverse esuturi (ficat, miocard, muchi scheletic n repaus) i reoxidat la piruvat. Acesta poate fi folosit la sintez de glucoz prin gluconeogenez (n ficat) sau oxidat total, cu generare de ATP. Aceast modalitate de reoxidare a NADH, cuplat cu sinteza lactatului, este semnificativ deoarece permite glicolizei s funcioneze n condiii anaerobe , cu generarea de ATP fr participarea oxigenului (prin fosforilare la nivel de substrat). Acest aspect are o importan deosebit n anumite condiii: - limitarea aportului de oxigen ntr-un esut, care duce la hipoxie tisular; n astfel de situaii, esuturile care au o capacitate glicolitic semnificativ pot supravieui (de ex. medulara renal, tractul gastro-intestinal, pielea), n timp ce miocardul, care este bogat n mitocondrii i este adaptat pentru metabolism aerob, nu poate face fa situaiilor de suprimare a aportului de oxigen i se necrozeaz; - creterea accentuat a necesarului de ATP, disproporionat fa de ritmul aprovizionrii cu oxigen; aa se ntmpl n muchiul scheletic aflat ntr-o activitate susinut, cnd mare parte din ATP-ul necesar contraciei poate fi obinut doar prin glicoliz anaerob; - n celulele care nu au mitocondrii, cum este eritrocitul, fosforilarea oxidativ nu poate avea loc, aceste celule depinznd de glicoliza anaerob pentru a genera ATP. Este de menionat faptul c glucoza este singurul combustibil biologic care poate genera ATP n condiii anaerobe; toate celelalte surse de energie (acizi grai, corpi cetonici, aminoacizi) pot genera ATP numai n condiii aerobe, cu implicarea fosforilrii oxidative. Exist cteva esuturi pentru care glicoliza este n mod particular important, ele depinznd de glucoz, ca surs de energie, n mod total sau ntr-o msur substanial (nu pot utiliza deloc alte surse de energie, sau o pot face doar ntr-o msur redus). Aceste esuturi sunt considerate esuturi gluco-dependente, ele necesitnd o aprovizionare continu cu glucoz. Este vorba de: creier (are un consum de ATP substanial i nu poate obine energie din acizii grai, acetia netraversnd 7

bariera hemato-encefalic), eritrocit, muchi scheletic n activitate susinut (motivele glucodependenei lor au fost expuse mai sus).

Ecuaia global a glicolizei: n condiii aerobe: glucoz + 2NAD+ + 2ADP + 2Pi 2 piruvat + 2NADH + 2H+ + 2ATP + 2H2O NADH rezultat se va angaja n lanul respirator, unde va fi reoxidat i va genera ATP n procesul fosforilrii oxidative; n condiii anaerobe: glucoz + 2ADP + 2Pi 2 lactat + 2ATP + 2H2O Bilanul energetic al glicolizei anaerobe: - n etapa consumatoare de energie se consum 2 molecule de ATP, n reaciile catalizate de hexokinaz i fosfofructokinaza-1; - n etapa generatoare de energie se sintetizeaz 2 molecule de ATP prin oxidarea unei molecule de gliceraldehid-3-fosfat, n reaciile de fosforilare la nivelul substratului catalizate de fosfoglicerat kinaz i piruvat kinaz; deci pentru o molecul de glucoz, din care se formeaz 2 molecule de gliceraldehid-3-fosfat, se vor genera 4 molecule de ATP; - ca urmare, bilanul global va fi 4 2 = 2 ATP. Glicoliza elibereaz numai o mic fraciune din energia total a moleculei de glucoz (aproximativ 5%); cele dou molecule de piruvat formate conin nc majoritatea energiei chimice a glucozei, care va fi extras ulterior n cursul degradrii oxidative totale a piruvatului la CO2 i H2O. Rolurile glicolizei (#31) Dei rolul cel mai evident al glicolizei este generarea de ATP prin degradarea moleculei de glucoz, acest proces are i alte roluri, concretizate n generarea de precursori pentru diverse ci de biosintez: - acetil-CoA rezultat din oxidarea piruvatului poate fi folosit la sinteza de acizi grai; - dihidroxiaceton-fosfat se poate transforma n glicerol-fosfat, care este utilizat mpreun cu acizii grai la sinteza de trigliceride sau de fosfolipide; - unii aminoacizi pot fi generai din intermediari glicolitici: serina din 3-P-glicerat i alanina din piruvat; - fructozo-6-P i gliceraldehid-3-P pot participa la generarea de riboz-5-P (ntr-un proces numit calea pentoz-fosfailor), aceasta fiind utilizat la sinteza de nucleotide; - n eritrocit se sintetizeaz 2,3-difosfoglicerat, care moduleaz afinitatea hemoglobinei pentru oxigen, facilitnd deoxigenarea hemoglobinei n esuturile extra-pulmonare. REGLAREA GLICOLIZEI Reglarea procesului glicolizei are loc la nivelul a 3 enzime reglatorii i anume cele care catalizeaz reaciile ireversibile: hexokinaza/glucokinaza, fosfofructokinaza-1 i piruvat kinaza. Fiecare dintre aceste trei enzime exist sub forma mai multor izoforme (izoenzime) cu specificitate tisular, care pot fi supuse unor modaliti diferite de reglare, n acord cu particularitile metabolice ale fiecrui esut. (#32) 1. Hexokinaza/glucokinaza - hexokinaza - este inhibat alosteric de glucozo-6-fosfat (inhibiie feedback de ctre produsul de reacie): dac G-6-P nu este utilizat att de rapid pe ct se formeaz, acumularea sa 8

duce la inhibarea hexokinazei; n felul acesta, rata formrii G-6-P este meninut n echilibru cu rata utilizrii sale ulterioare; - glucokinaza (din ficat) - nu este inhibat de G-6-P; enzima este indus de ctre insulin, astfel nct angajarea glucozei n glicoliz este favorizat dup prnzurile glucidice, cnd nivelul insulinei plasmatice este crescut. 2. Fosfofructokinaza-1 (PFK-1) Aceast enzim catalizeaz etapa limitant de vitez a glicolizei . PFK-1 este reglat prin mecanisme alosterice, coninnd patru situsuri alosterice: - pentru AMP i fructozo-2,6-difosfat - modulatori pozitivi; - pentru ATP i citrat - modulatori negativi. ATP n concentraie mare n celul este semnal de abunden energetic: dac rezervele de ATP sunt suficiente, degradarea glucozei n scop energogen este inhibat; AMP n concentraie mare este semnal de depleie a rezervelor energetice; n aceste condiii glicoliza este activat, ducnd la refacerea rezervelor de ATP ale celulei; citratul - se formeaz n concentraie mare n condiiile unei degradri accelerate a acizilor grai (de ex. n ficat, n perioadele inter-prandiale) acesta este un semnal c celula i satisface necesitile energetice prin oxidarea substratelor de natur lipidic; prin inhibarea glicolizei de ctre citrat, glucoza este economisit pentru esuturile gluco-dependente; fructoz-2,6-difosfat (F-2,6-P2) - este un modulator alosteric pozitiv pentru fosfofructokinaza-1, acest efect avnd o importan deosebit n ficat (aici, n absena F-2,6-P2, PFK-1 are o activitate foarte redus); (#33) - concentraia intracelular a F-2,6-P2 depinde de rata formrii i de rata degradrii sale; - F-2,6-P2 se sintetizeaz prin fosforilarea F-6-P sub aciunea fosfofructokinazei-2; - degradarea F-2,6-P2 are loc prin hidroliz sub aciunea fructozo-2,6-difosfatazei; - fosfofructokinaza-2 i fructozo-2,6-difosfataza sunt dou domenii cu activiti catalitice diferite ale aceleiai enzime (enzima bifuncional PFK-2/F-2,6-P2aza); - echilibrul dintre cele dou activiti enzimatice este controlat de ctre insulin i glucagon prin intermediul reglrii covalente: n perioadele inter-prandiale, glucagonul acioneaz prin intermediul mesagerului secund AMP ciclic acesta activeaz protein-kinaza A (PKA) fosforilarea enzimei bifuncionale activarea domeniului fosfatazic i inhibarea domeniului kinazic => scderea concentraiei F-2,6-P 2 ncetinirea glicolizei la nivelul PFK-1 (n absena aportului alimentar glucidic, ficatul i ob ine energia prin degradarea acizilor grai economisete glucoza pentru esuturile gluco-dependente); n perioadele post-prandiale, insulina activeaz o protein fosfataz defosforilarea enzimei bifuncionale activarea domeniului kinazic i inhibarea domeniului fosfatazic => creterea cantitii de F-2,6-P2 accelerarea glicolizei la nivelul PFK-1. 3. Piruvat kinaza (#34) a) reglare alosteric: F-1,6-P2 (intermediar din prima parte a glicolizei) activeaz piruvat kinaza (exemplu de modulare alosteric de tip feed forward): creterea concentraiei F-1,6-P2 (atunci cnd PFK-1 este activ) va duce la creterea activitii piruvat kinazei situat n aval, pregtind-o pentru fluxul mare de substrat pe care va trebui s-l transforme; n felul acesta se sincronizeaz n mod eficient activitatea PFK-1 cu cea a piruvat kinazei; ATP (semnal de abunden energetic) este un inhibitor alosteric al piruvat kinazei, ducnd la ncetinirea consumului de glucoz n glicoliz. b) reglare covalent - este caracteristic izoenzimei piruvat kinazei localizat ficat; forma activ a enzimei este cea defosforilat: - creterea nivelului glucagonului (n condiiile scderii glicemiei din cursul perioadelor inter-prandiale) duce la activarea protein kinazei A (prin intermediul AMPc) fosforilarea piruvat

kinazei inactivarea sa => este ncetinit utilizarea glucozei drept combustibil de ctre ficat glucoza este economisit i trimis spre esuturile gluco-dependente; - atunci cnd nivelul glucagonului scade (n condiiile abundenei de glucide caracteristic perioadelor post-prandiale), o protein fosfataz defosforileaz piruvat kinaza, ducnd la activarea sa.

METABOLISMUL PIRUVATULUI
Piruvatul, care se formeaz prin degradarea glicolitic a glucozei, ocup o pozie de rscruce important n metabolismul glucozei. Metabolizarea sa ulterioar depinde de circumstanele de moment din esutul respectiv: (#36) n condiii aerobe: piruvatul este degradat prin decarboxilare oxidativ la acetil-CoA, care apoi va fi degradat total n ciclul Krebs; n condiii anaerobe, piruvatul este redus la lactat sub aciunea lactat dehidrogenazei; n condiii de activare a gluconeogenezei (sinteza glucozei din compui neglucidici), piruvatul este carboxilat la oxalacetat, care apoi se va transforma n glucoz.

Decarboxilarea oxidativ a piruvatului

Are loc n mitocondrie: piruvatul format prin glicoliz este transportat din citoplasm n mitocondrie prin cotransport cu un proton, cu ajutorul simporterului piruvat/H + localizat n membrana mitocondrial intern. Decarboxilarea oxidativ a piruvatului la acetil-CoA (#37) este catalizat de un complex multienzimatic numit piruvat dehidrogenaza (PDH), alctuit din 3 enzime i 5 coenzime. (#38) Avantajul organizrii mai multor enzime sub form de complex const n faptul c intermediarii metabolici sunt transferai de la o enzim la alta (produsul unei enzime devine imediat substrat pentru enzima urmtoare), astfel nct ei nu difuzeaz n celul; aceasta duce la o cretere semnificativ a vitezei procesului. Componena complexului PDH este urmtoarea: (#39-43) Enzima Piruvat dehidrogenaza (E1) Dihidrolipoil transacetilaza (E2) Dihidrolipoil dehidrogenaza (E3) Coenzime necesare tiamin pirofosfat acid lipoic coenzima A FAD NAD+ Vitaminele din care provin tiamina (vitamina B1) acid lipoic acid pantotenic riboflavina (vitamina B2) nicotinamida (vitamina PP)

- acidul lipoic este un acid carboxilic cu 8 C i cu o punte disulfidic ntre C 6 i C8; el ocup o poziie particular n cadrul complexului: este legat amidic de gruparea -amino a unui rest de lizin din componena E2 formeaz o molecul lipoil-lizil, care reprezint gruparea prostetic a E2 i care joac rolul unui bra lung, flexibil, ce se deplaseaz de la situsul activ al E 1 la situsurile active ale E2 i E3, transportnd astfel intermediarii metabolici; - complexul mai conine i 2 proteine reglatorii: - o protein kinaz (PDH kinaza) - o protein fosfataz (PDH fosfataza). Decarboxilarea oxidativ a piruvatului are loc n 5 etape: (#44) Piruvatul reacioneaz cu TPP legat la E1 i sufer un proces de decarboxilare, rmnnd ataat la TPP ca derivat hidroxi-etil (E1); 10

Gruparea hidroxi-etil este oxidat la un acid carboxilic (grupare acetil) (E1); - cei 2 H ndeprtai n reacie reduc legtura disulfidic a acidului lipoic la 2 grupri SH, formndu-se acidul dihidrolipoic; - gruparea acetil este transferat de pe TPP pe acidul lipoic legat la E 2 (este legat tioesteric la una din cele dou grupri SH) se formeaz acidul acetil-dihidrolipoic i se regenereaz TPP; Gruparea acetil este transferat pe coenzima A, rezultnd acetil-CoA (E2); - energia liber degajat n reacia de oxidare anterioar este utilizat pentru formarea legturii tioesterice macroergice din molecula acetil-CoA; Acidul lipoic este regenerat prin oxidarea acidului dihidrolipoic cu ajutorul FAD (E3); Prin transferul echivalenilor reductori de la FADH 2 la NAD+ se formeaz, n final, NADH + H+ (E3). Ecuaia reaciei globale a decarboxilrii oxidative a piruvatului sub aciunea PDH: Piruvat + CoASH + NAD+ acetilCoA + NADH+H+ + CO2 Reacia este puternic exergonic (G = 8 kcal/mol) i are caracter ireversibil n condiiile din celul. Reglarea activitii complexului PDH (#45) a) Reglare alosteric acetil-CoA i NADH (produi ai reaciei) inhib E1 din complex. b) Reglare covalent are loc prin fosforilarea/defosforilarea la un rest de serin din componena E1, sub aciunea PDH-kinazei i a PDH-fosfatazei: - PDH-kinaza este activat alosteric de concentraii crescute de acetil-CoA, NADH i ATP; - PDH-fosfataza este activat de ionii de Ca2+ (n muchi) i de insulin (n esutul adipos). Activitatea PDH este sczut atunci cnd necesarul energetic al unui esut este satisfcut pe seama lipidelor; astfel, n condiii de depleie glucidic (ntre prnzuri i n strile de post), esuturile gluco-independente degradeaz acizi grai ca surs de energie se formeaz cantiti crescute de acetil-CoA, NADH i ATP, care duc la inactivarea PDH prin mecanismele descrise. Activitatea PDH este crescut n condiii de abunden glucidic: n asemenea condiii degradarea acizilor grai este redus scade cantitatea de acetil-CoA, NADH i ATP dispare efectul acestora de inhibare a activitii PDH piruvatul format n cantiti mari prin degradarea glucozei va putea fi degradat eficient la acetil-CoA, care apoi va fi antrenat spre degradare total n ciclul Krebs. Activarea PDH de ctre ionii de Ca2+ (ca urmare a activrii directe a PDH-fosfatazei) are o importan particular n muchiul scheletic: creterea concentraiei Ca2+ n cursul contraciei musculare are ca efect i activarea complexului PDH, favoriznd degradarea glucozei ca surs de energie. n esutul adipos, activarea PDH-fosfatazei de ctre insulin duce la activarea complexului PDH, acesta fiind unul din modurile n care insulina exercit o influen pozitiv asupra metabolizrii glucozei n scop energogen.

11