SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:1

PROCEDURA SPECIFIC IDENTIFICAREA I TESTAREA SENSIBILITII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

COD: PE-03
Editia: 1 Revizia: 1 Data: 01.2013 Examplar nr: ELABORAT, DR. POPESCU LILIANA VERIFICAT, SEF LABORATOR DR. POPESCU LILIANA APROBAT, MANAGER DR. ENACHE DRAGOS Avertisment: Documentul de fata este proprietatea SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL. Reproducerea integrala sau partiala a prezentului document, in orice publicatie si prin orice procedeu (electronic, mecanic, fotocopie, microfilm) este interzisa daca nu exista acordul scris al LABORATORULUI DE ANALIZE MEDICALE Copiile sunt numerotate si controlate

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:2

LISTA DIFUZARE
NR. EXEMPLAR MANUAL 1 2 3 EDITIA/ REVIZIA DESTINATAR (FUNCTIE SAU NUME) SEF LABORATOR RMC RENAR SEMNATURA DATA

1 / 1
1 / 1 1 / 1

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:3

PAGINA REVIZIILOR IN VIGOARE

NR. CRT 0 0 1 NR. FISA DE CAPITOLE SI SUBCAPITOLE MODIFICARE/ AFECTATE DE MODIFICARI DATA 1 2 Ed.1/revizia0 Redactarea initiala Ed.1/revizia1 Inlocuire RMC NUME RESPONSABIL CALITATE 3 Pencu Mirela SEMNATURA 4 1.2

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:4

CUPRINS NR. CAP. DENUMIRE CAPITOL PAGINA DE GARDA LISTA DE DIFUZARE PAGINA REVIZIILOR IN VIGOARE CUPRINS SCOP DOMENIU DE APLICARE DOCUMENTE DE REFERINTA DEFINITII SI ABREVIERI ECHIPAMENTE DE ANALIZA.MATERIALE DESCRIEREA ACTIVITATII-REGULI DE PROCEDURA RESPONSABILITATI INREGISTRARI ANEXE NR. PAG. 1 2 3 4 5 5 5 6 6 6 14 15 15

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:5

IDENTIFICAREA I TESTAREA SENSIBILITII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

1.

SCOP

Procedura prezint modul de executare pentru: - Identificarea agenilor patogeni din exudatul nazal. -Testarea sensibilitii n vitro pentru bacteriile patogene izolate din exudatul nazal, prin efectuarea antibiogramei.
2. DOMENII DE APLICARE

Procedura va fi aplicat de ctre personalul responsabil de ncercare din cadrul compartimentului bacteriologie din cadrul Laboratorul de Analize Medicale SC ELITE MEDICAL. 3. DOCUMETE DE REFERIN
3.1. Metode de laborator de uz curent, Ed. Med., Vol.II , 1977, Ministerul Sntii, ACADEMIA DE tiine Medicale, pag. 16-29,85-93. 3.2. Tratat de Microbiologie Clinica Buiuc ,1999,Ed.Medicala,Bucuresti. 3.3. Instruciuni de folosire cu tabele de sensibilitate ale discurilor de antibiotice. 3.4. Instruciuni de folosire pentru mediile de cultur: geloz snge, AABTL, CLED, TSI, MIU, MILF,Citrat, Sabouraud, Chapman. 3.5. Instruciuni de folosire ale truselor de tipare a stafilococilor i a streptococilor. 3.6 .Instruciuni de folosire pentru kit-ul de coloraie Gramm.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:6

4.

DEFINIII I ABREVIERI:

-flor microbian saprofit = flor microbian normal sau populaii bacteriene complexe, autohtone, adaptate la condiiile gazdei umane, care populeaz repere anatomice din primele ore de existen ale organismului uman -flor microbian patogen. Patogenitatea este capacitatea real sau potenial a unei bacterii de a determina natural sau n condiii experimentale, un proces infecios i este atributul unei specii microbiene, n raport cu o gazd aflat ntr-o stare convenional de rezisten. -microorganisme condiionat patogene (oportuniste) aparin microbiogenozei normale a tegumentelor i mucoaselor, n mod normal nepatogene, devin patogene prin surprinderea gazdei n momente de scdere general a rezistenei antiinfecioase sau prin introducerea lor accidental n numr mare n anumite teritorii ale organismului , n mod normal sterile. -Mediul II solid tip Sabouraud-se foloseste pentru cultivarea levurilor.

5.

ECHIPAMENTE DE ANALIZ.MATERIALE:
- autoclav, -termostat, -hot cu flux laminar vertical, -anse de nsmnare, -bec de gaz Bunsen, -placi Petri, -eprubete i stative, -standard McFarland.

6.

DESCRIEREA ACTIVITII REGULI DE PROCEDUR Pregtirea pacientului pentru recoltare:

-pacientul este informat explicit despre tehnica de recoltare.

Recoltarea probelor
Exudatul lingual se preleva in : a) n interiorul laboratorului n spaii special amenajate, b) n exteriorul laboratorului: cabinete de ORL,etc.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:7

Prelevatul clinic:
-s fie recoltat nainte de nceperea terapiei antifungice, -recipiente sterile adecvate , -continut corespunzator solicitarii -se recolteaza preferabil dimineata inainte ca pacientul sa fi mancat sau sa se fi spalat pe dinti, daca recoltarea nu se efectueaza dimineata este necesar ca aceste operatiuni sa fie facute cu minimum 4 ore inainte de recoltare. -proba se recolteaza prin raclaj de pe limba. Probele se recepioneaz n maxim dou ore de la prelevare, este recomandat ca insamntriile pe mediile de cultura sa se faca imediat ce probele ajung la laborator.

Nu se accept prelevatele : - nemarcate,

-care au depit timpul de transport, -necorespunztoare solicitrii.

Etichetarea recipienilor:
-proba biologic i cererea de analize se preiau de ctre compartimentul recepie-registratur, - nume, prenume, data naterii, adres, tipul prelevatului, solicitarea de examen, tratamentul cu antibiotice anterior i actual, -data i ora recoltrii, -data i ora recepionrii probei, -se eticheteaz probele cu numele i numrul din registru de intrare, -se transport rapid n laborator n compartimentul microbiologie.

Transportul i pstrarea prelevatelor

-prompt preferabil n maxim 2-3 ore , este recomandat ca transportul sa se faca la temperatura ambianta.

Pregtirea probelor pentru lucru

-se scriu caietele de lucru, -se resping probele care nu sunt corect nchise, desfcute, vrsate sau recoltate in recipieni necorespunztori.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:8

Etape de lucru I). Bacterioscopie direct:

a). preparat proaspt ntre lama si lamela b). preparat colorat Gram

II) nsmnri
-pe mediile: agar Sabouraud cu Chloramfenicol si Gentamicina, mediu care inhiba multiplicarea bacteriilor contaminante si permite o buna dezvoltare a levurilor.

III) Incubarea la termostat.

-dup incubare 24 ore la 37 C, n cazul culturilor pozitive, se noteaz aspectele macroscopice ale coloniilor si se procedeaz la identificarea genului si speciei

IV. ) Prezentam criterii minimale necesare identificrii principalilor fungi prezenti la nivel
lingual: Candida spp., Aspergillus spp., Alternaria spp., Geotrichum candidum, Fusarium spp., Acremonium spp., Scopulariopsis spp., Trichosporon spp., Histoplasma capsulatum, Coccidioides imitis;

a)caractere de cultura:
Cultivarea produselor patologice se face pe agar Sabouraud cu Chloramfenicol si Gentamicina, mediu care inhiba multiplicarea bacteriilor contaminante si permite o buna dezvoltare a levurilor. Pe mediile de cultura levurile de interes medical se dezvolta in 48-72 de ore de incubare, in anumite suspiciuni diagnostice perioada de urmarire prelungindu-se pana la 7 zile. Dupa obtinerea primoculturii se verifica obligatoriu puritatea acesteia, deoarece contaminarea bacteriana compromite etapele ulterioare de identificare a speciei. In acest scop se efectueaza frotiuri colorate Gram care vor fi examinate la microscop cu obiectivul de imersie. In cazul prezentei bacteriilor se fac repicari in vederea purificarii culturii

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1 Pagina:9

b)caractere microscopice:
In cadrul examenului cultura si identificare fungi cu antifungigrama se urmareste izolarea in special a levurilor.. Examenul microscopic urmareste prezenta, forma si dimensiunile formatiunilor levurice: blastospori, pseudohife, hife, eventual artrospori. Detalii precum prezenta sau absenta capsulei, modul de inmugurire vor fi retinute ca aspecte importante pentru viitoarea identificare. La pacientii sub tratament antifungic este posibila evidentierea levurilor la examenul microscopic in absenta cresterii acestora pe mediile de cultura.

c)caractere biochimice:
Uzual, se face cu ajutorul unui sistem biochimic standardizat bazat pe fermentarea a 7 zaharuri si un test enzimatic. Cu ajutorul acestui sistem se pot identifica urmatoarele specii: Candida spp., Cryptococcus spp., Trichosporon spp., Saccharomyces cerevisiae, Rhodotorula Pentru tulpinile ce nu pot fi identificate utilizand sistemul mentionat anterior, se foloseste un alt sistem biochimic bazat pe fermentarea a 13 zaharuri si 3 teste enzimatice, ce permite identificarea urmatoarelor specii: Candida spp., Cryptococcus spp., Trichosporon spp., Saccharomyces cerevisiae, Geotrichum spp., Prototheca wickerhamii.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1

Pagina:10

V. ) Urmtoarea etapa n stabilirea diagnosticului bacteriologic este efectuarea:

Antifungigramei difuzimetrice standard

Pentru determinarea sensibilitatii la antifungice se foloseste urmatoarelor antifungice: Amfotericina B, Nystatin, Flucytosine, Fluconazol, Ketoconazol, Miconazol, Econazol. 1. Antifungigrama difuzimetric se efectueaz pe mediu Saubouraud in cazul levurilor. Se face o suspensie bacteriana ntr-un flacon steril de 0.5uMc Farland, care se disperseaza pe o placa petri pe care aplic discurile de antifungice la 30 mm distan . Se incubeaz placa la termostat 24 h. Se citete zona de inhibiie si se raporteaz caracterul SENSIBIL/INTERMEDIAR/REZISTENT n funcie de indicaiile productorului.

PRINCIPUIUL METODEI
O cantitate de substanta antifungica este depusa pe suprafata unui mediu de cultura , preinsamantat cu bacteria testata. Concomitent se produc doua fenomene: difuzarea substantei antimicrobiene si cresterea bacteriei. In zonele in care substanta antimicrobiana realizeaza concentratii mai mari decat concentratia minima inhibitoare, bacteria nu creste.

INDICATII
Metoda este indicata pentru laboratoarele care testeaza un numar relativ mic de tulpini bacteriene cu crestere rapida la 35 -37 0C, fara diferente semnificative, de la tulpina la tulpina, a ratei de crestere.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1

Pagina:11

SCOP, OPTIUNE, ORIENTARE, MONITORIZARE

Scopul terapiei antimicrobiene ramane acela de a distruge sau cel putin de a stanjeni multiplicarea unui agent patogen intr-un organism care, la un moment dat, nu poate realiza el insusi aceasta sau o face insuficient. Optiunea, orientarea si controlul terapiei antimicrobiene sunt decizii bazate pe triada formata de: subtilitatea rationamentului clinic; cunoasterea farmacologiei substantelor antimicrobiene;rezultatul testelor de laborator; Pentru necesitatile terapeutice curente definim o tulpina microbiana In raport cu un medicament antimicrobian ca:- sensibila: in situatia in care concentratia minima inhibitoare (CMI) este de minimum 2-4 ori mai mica decat nivelul medicamentului in ser sau alte umori, in conditiile administrarii unor doze mici sau repetate, normale. In aceste conditii, efectul terapeutic este posibil. - rezistenta: daca CMI este mai mare decat nivelul medicamentului in ser sau alte umori. In acest caz medicamentul este toxic pentru pacient inainte de a fi toxic pentru germenul respectiv.- intermediara, sau moderat sensibila: daca CMI este apropiata de nivelul medicamentului din sange sau alte umori. in acest ultim caz, efectul terapeutic este intermediar sau imprevizibil, cu exceptia situatiilor in care se pot administra doze foarte mari si medicamentul se concentreaza in focarul de infectie, sau poate fi administrat local. Dintre multiplele metode, procedee si variante, pentru laboratorul clinic se recomanda metoda difuzimetrica. Aceasta este mai usor de executat, mai economica si asigura o reproductibilitate de aproximativ 90%, daca se respecta strict toate conditiile de lucru.

MODUL DE LUCRU
Insamantarea. Se imerseaza tamponul de vata steril in suspensia bacteriana etalonata. Se scurge excesul de lichid prin rotirea tamponului pe peretii eprubetei. Se descarca tamponul in striuri paralele pe toata suprafata mediului, succesiv in trei directii, prin rotirea placii cu 600. Insamantarea se poate realiza si prin inundare, urmata de eliminarea lichidului in exces. Placile insamantate se lasa la uscat pentru absorbtia inoculului, prin mentinerea la temperatura camerei 5 -15 minute pana la depunerea discurilor. Discurile se vor aseza in placa numai atunci cand nu mai exista lichid pe suprafata mediului. Se depun discurile cu substante antifungice la distanta de minimum 15 mm de marginea placii si de 30 mm intre centrele a doua discuri vecine. Dupa repartizarea discurilor, placile se incubeaza imediat, la 370 C, timp de 16-18 ore.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1

Pagina:12

CITIREA SI INTERPRETAREA REZULTATELOR ANTIFUNGIGRAMEI

Dupa trecerea perioadei de incubatie se masoara cu rigla gradata in mm diametrul zonelor de inhibitie completa, in lumina reflectata pe fond negru mat. In caz de urgenta, placile pot fi citite la 5-6 ore de incubare, cu conditia verificarii diametrelor zonelor de inhibitie dupa 16-18 ore. . Se urmareste inhibitia completa a cresterii, facnd abstractie de coloniile fine, periferice, vizibile numai la scrutare atenta prin transparenta.. Se verifica daca diametrele zonelor de inhibitie a fiecarei substante antimicrobiene se cuprind in limitele variatiei admise (conform tabelelor universale, standardului NCCLS)

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1

Pagina:13

Arhivarea rezultatelor
Registrele de analiz din sectorul bacteriologic se arhiveaz pe o perioad de cinci ani fiind stocate pe hard-disk, pentru o perioad de cinci ani n serverul din departamentul informatic al laboratorului.

Protecia personalului
n timpul lucrului personalul poart mnui de unic folosin i va purta echipamentul de protecie. De asemenea se vor respecta dispoziiile standard i instruciunile de protecia muncii. Astfel: - personalul va purta echipament de protecie corespunztor -recoltarea se va realiza n spaii cu geamuri nchise -manevrarea mijloacelor de ncercare i a probelor recoltate se va face cu atenie -deeurile se vor colecta n containere speciale -splarea minilor se va face dup fiecare recoltare -se vor decontamina suprafeele de lucru -recipientele se manevreaz cu atenie fiind plasat pe o suprafa orizontal n zona de lucru; -splarea minilor i dezinfectarea lor -respectarea precauiunilor standard i a instruciunilor privind securitatea muncii

Stabilirea incertitudinii de msurare

Pentru parametrii bacteriologici laboratorul de analize medicale are n eviden tulpini standardizate de Candida albicans. Se efectueaz 10 determinri: descrcri pe mediu de cultur i respectiv stabilirea caracterului de patogenitate pentru germenii standardizai. Repetabilitatea rezultatului certific asupra conformitii procedurale anterior descrise. Pentru aceast procedur se efectueaz determinri trimestriale, lunare i/sau sptmnale sau ori de cte ori responsabilul de analiz observ valori discordante n rezultate.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1

Pagina:14

7.

Responsabilitati

Asistenii din serviciul recoltare: -recolteaz probele i completeaz Registru de Recoltare, -nmneaz probele asistentului care transport probele n condiii standardizate ctre compartimentul microbiologie Asistentul medical din cadrul compartimentului microbiologiede din cadrul laboratorului de analize medicale al SC ELITE MEDICAL : -face recepia probelor aduse de asistent, -atribuie cererii un numr de registru n laborator, eticheteaz probele pe care scrie numele prenumele i codul numeri al pacientului, -scrie caietele de lucru. Medicul responsabil de activitatea din cadrul sectorului bacteorologie: -verific numrul de registru i corespondena lor cu probele de lucru, -examineaz nregistrrile, dispune repetarea unor determinri daca observa valori neconcordante, -executa determinarile biologice, -elaboreaza prezenta procedura. Seful de laborator: -verifica si valideaz (semneaz si parafeaz) Buletinul de investigaii paraclinice. -adauga comentarii generale, dac este cazul. -dispune repetarea unor determinri daca observa valori neconcordante. -verifica si participa la elaborarea prezentei proceduri.

Responsabilul Managementul Calitatii:

-difuzeaz prezenta procedura.

Directorul General:
-aproba prezenta procedura.

SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL LABORATOR DE ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE
IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Cod:PE-03 Editia:1 Revizia:1

Pagina:15

8. INREGISTRARI -Tabel catagrafie- autocontrol aeromicroflora cod FL-5.17-01 - Tabel catagrafie- autocontrol suprafete cod FL-5.17-02 -Caietele de lucru ale sectorului bacterologie CL- 03 -Caietul de control al sterilizarii si autoclavarii FL.5.7.4 -Caietul de control intern al mediilor de cultura si al discurilor de antibiograma CLCI 0301,respectiv CLCI 03-02

9. ANEXE
Prezenta produra nu are anexe