Sunteți pe pagina 1din 31

Cursul VI

Aciunea

cel T depinde de capacitatea lor de a recunoate cel. care gzduiesc sau care au internalizat patogeni. Limf T i exercit acest rol prin recunoaterea fragmentelor peptidice derivate din patogen, aceste peptide fiind legate n cupa moleculelor MHC de pe suprafaa cel. infectate. Peptidele provenite din patogeni care se dezv. n compartimente diferite ale celulei sunt recunoscute specific de limf T cu funcii distincte.
2

n interiorul cel. exist 2 compartimente majore separate de membrane: Citoplasma, care comunic cu nucleul prin intermediul porilor din membrana nuclear; Sist vezicular, care include reticulul endoplasmatic, aparatul Golgi, endozomii, lizozomii, i alte vezicule intracelulare. Sist. vezicular este n contact cu fluidul extracel. dac se ia n considerare faptul c veziculele secretorii nmuguresc de pe reticulul endoplasmatic, sunt transportate prin membranele aparatului Golgi, pt a-i elimina coninutul n exteriorul celulei; invers, endozomii preiau materialul extracelular i l introduc n sist vezicular.
3

Agenii

infecioi se pot replica ntr-unul din cele 2 compartimente intracelulare: virusurile i unele bacterii se replic n citoplasm, n timp ce cea > parte a bacteriilor patogene i unii parazii eucarioi se replic n sist vezicular
(include endozomii i lizozomii).

Sist

imun dispune de strategii diferite pt a elimina agenii infecioi din cele 2 compartimente celulare.
4

Cel infectate cu virusuri sau bacterii care se replic n citosol sunt eliminate de ctre limf T citotoxice, caracterizate prin prezena moleculei de suprafa CD8. Uciderea cel infectate de ctre limf T reprezint un mijloc important de a elimina sursele unor noi particule virale sau bacterii citoplasmatice i poate duce la eliminarea infeciei.

Agenii

patog sau produii lor din compartim. vezicular al cel. sunt detectai de ctre o clas diferit de cel T helper, desemnate prin expresia pe suprafa a moleculei CD4.
5

Ag. microbiene pot ptrunde n compartimentul celular vezicular prin 2 moduri:

Unele bacterii i unii parazii invadeaz macrofagele


(celulele fagocitare) (endozomii);

i prolifereaz n veziculele intracelulare

Alte bacterii,care prolifereaz n spaiul extracelular, pot s secrete toxine i ali produi i acestea sunt

internalizate prin endocitoz; n special limf B au


mecanisme specifice de preluare a acestor Ag prin intermediul imunoglobulinei de suprafa.
6

Limf T CD4 CD4+

(helper)

sunt specializate n activarea altor (TH1) nct care devin activeaz capabile s

cel i pot fi mprite n 2 clase funcionale: cel T

inflamatorii astfel

macrofagele,

distrug bacteriile pe care le adpostesc; cel T CD4+ helper propriu-zise (TH2), care activeaz

limf B s produc Ac

Pt producerea unui rspuns adecvat fa de microorganismele infecioase este necesar att ca cel T s detecteze prezena materialului strin n ambele compartimente celulare, dar i ca limf T s
poat discrimina n cele 2 compartimente
7

Aceast discriminare se realizeaz prin transportul la suprafaa celulelor a peptidelor provenite din patogeni care se dezvolt n compartimente celulare diferite de ctre 2 clase distincte de molecule MHC: Molec MHC I transport pe suprafaa celulelor peptide provenite din patogeni prezeni n citosol; complexul peptidic MHC I exprimat pe suprafaa celular va fi recunoscut de ctre limf T CD8+; Molec MHC II transport peptide derivate din patogeni prezeni n sist vezicular la suprafaa celulei; complexul peptid-MHC II va fi recunoscut de cel T CD4+.
8

Generarea peptidelor presupune modificarea proteinei native, proces denumit procesarea Ag , iar expunerea peptidelor de ctre molec MHC pe suprafaa celular este numit prezentarea Ag. Molec MHC de clas I leag peptide care au n general 8-10 AA. MHC de clas II prezint n cup peptide de minim 13 AA sau mai lungi; aceste peptide stau n cupa MHC II ntr-o conformaie elongat i pot s depeasc marginile cupei MHC II, care sunt deschise la ambele capete.
9

Datorit faptului c virusurile pot infecta orice

cel nucleat, MHC I este prezent pe suprafaa tuturor cel nucleate, dei nivelul expresiei acestor molec difer cu tipul celular. Absena MHC I de pe supraf eritrocitelor face din citoplasma acestor cel un sediu n care agenii infecioi nu pot fi detectai de ctrelimf T.Este posibil ca absena MHC I de pe suprafaa eritrocitelor s permit supravieuirea speciilor de Plasmodium n aceste situsuri privilegiate.

10

Principala

funcie a limf T CD4+ este s activeze alte cel ale SI . n mod N,doar cel. care particip n RI exprim pe suprafa molec MHC de clas II. Astfel molec MHC II sunt prezente pe suprafaa limf B, a macrofagelor i a altor cel. prezentatoare de Ag, dar lipsesc de pe suprafaa majoritii cel. tisulare. Cel. T CD4+ helper care recunosc peptide legate de molec. de MHC II de pe supraf. limf B, activeaz cel B s produc Ac.
11

Cel T CD4+ inflamatorii care recunosc peptide

legate de MHC II de pe macrofage, activeaz


macrofagele s distrug patogenii coninui n
vezicule. Molec MHC II sunt exprimate i pe celule

prezentatoare de Ag specializate din esuturile


limfatice, unde are loc activarea cel T CD4+ nave i
diferenierea lor n limf T helper sau inflamatorii. Multe

alte tipuri de celule pot fi induse s exprime MHC II sub aciunea unor molecule biologic active

numite citokine, care sunt eliberate n cursul RI .


Acest fapt poate avea implicaii att n RI normal ct
i n autoimunitate
12

Generarea liganzilor pt MHC de clas I

Peptidele care sunt legate de ctre molecMHC de clas I sunt transportate activ din citosol n lumenul reticulului endoplasmatic (RE). Fragment. antigenice care se leag de molec. de MHC I pt a fi prezentate cel T CD8+ sunt derivate din virusuri. Virusurile preiau mainria de biosintez a cel. infectate pt a-i fabrica propriile proteine n citosol. Molec. de suprafa ale celulei sunt sintetizate pe faa citosolic a RE i apoi sunt translocate n lumenul RE, unde trebuie s se plieze corespunztor nainte de a fi transportate la suprafaa celulei.

13

De

aceea peptidele derivate din prot.

virale din citosol trebuie s ptrund n lumenul RE i se lege de molec MHC I pt a fi transportate pe suprafaa celulei.
Peptidele

sunt transportate din citosol n .

lumenul RE, unde se gsesc molec MHC I, de ctre proteine transportoare Cele 2 proteine TAP formeaz un heterodimer plasat pe membrana RE.
14

(TAP-1, TAP-2)

Att ATP-1 ct i ATP-2 prezint un domeniu hidrofob i un domeniu care leag ATP-ul, care prin asamblare formeaz un transportor cu 4 domenii. Domeniul care leag ATP-ul este plasat n citoplasma celulei, n timp ce domeniul hidrofob traverseaz membrana RE i poemin n lumen. Cele 2 gene pt TAP se gsesc n regiunea genelor pt clasa a II-a a complexului MHC fiind strns asociate cu 2 gene numite LMP (low molecular weight polypeptides), care codific prot. cu gr. mol. joas, componente ale proteazomului. Mutaiile genelor TAP mpiedic prezentarea Ag. de ctre molec MHC de clas I.

(ntre genele DP i DQ),


15

Molec

MHC de clasa I nou sintetizate

sunt reinute n interiorul RE ntr-o form parial pliat pn n momentul legrii peptidului; n absena peptidului molec MHC I sunt instabile, fiind susceptibile la degradare n RE. Aceasta este explicaia faptului c celulele cu mutaii ale genelor

TAP-1 sau TAP-2 nu reuesc s exprime


molec MHC I pe suprafaa celular.
16

Lanurile nou sintetizate ale MHC I se leag rapid de o molecul de 88 kDa exprimat pe membrana RE,numit calnexin

(reine mol. de MHC I parial pliate n RE).

Calnexina se mai asociaz nRE cu alte proteine

imature parial pliate caTCR, Ig,MHC II , avnd un rol n asamblarea multor molecule cu roluri imunologice importante.
n

momentul n care 2m se leag la lanul al MHC I (heterodimerul ): 2m este eliberat de pe calnexin.


17

Urmeaz legarea MHC I la un complex format din 2 proteine:calreticulina i tapasina(protein asociat TAP-1).n acest fel heterodimerul : 2m este legat la subunitatea TAP-1 a complexului transportor i poate atepta transportul n lumenul RE a unui peptid corespunztor. Nu se tie dac asocierea la subunitatea TAP-1 a transportorului are un rol direct n ncrcarea peptidelor n cupa MHC , sau doar permite molec MHC I s scaneze peptidele care sunt transportate n lumenul RE. n final legarea unui peptid n cupa MHC I duce la eliberarea de pe TAP a moleculei MHC complet pliate, complexul MHC I- peptid fiind eliminat ntr-o vezicul RE i transportat la suprafaa celulei.
18

n celulele N (neinfectate), molec mature de MHC I de pe suprafaa celular prezint n cup derivate din proteine self. Cnd o celul este infectat viral, prezena n exces a molec MHC I, permite prezentarea rapid a peptidelor derivate din patogen la suprafaa celulei infectate. Peptidele derivate din patogeni care se dezv n citoplasm sunt generate n citosol nainte de a fi transportate n RE. Proteinele sunt continuu degradate n interiorul celulelor i apoi nlocuite cu proteine nou sintetizate
19

Un rol important n degradarea proteinelor citosolice este jucat de un complex proteazic multicatalitic,

format din 28 de subuniti fiecare cu o gr molecul cuprins ntre 20-30 kDa, complex numit proteazom.
fiecare din ele cu cte 7 subuniti),

(care formeaz o structur cilindric, compus din 4 inele,

dintre subunitile proteazomului(LMP2 i LMP7) sunt codificate n regiunea pt clasa II a MHC, genele LMP2 i LMP7 fiind situate n vecintatea genelor TAP-1 i TAP-2.
Aceasta sugereaz c proteazomul are un rol specific n generarea peptidelor care vor fi prezentate de moleculele MHC de clas I.
20

Nu toi proteazomii dintr-o cel includ cele 2 subuniti LMP2 i LMP7. Rolul subunit. proteazomului codificate n regiunea MHC II este legarea proteazomului la membrana RE sau chiar la complexul TAP-1/TAP-2, permind transferul eficient al peptidelor generate de proteazom n lumenul RE. Molec. MHC de clas I prezint i fragmente peptidice din prot. membranare sau secretate, care sunt n mod N translocate n lumenul RE n timpul sintezei lor. O fraciune mic din aceste prot. nu reuete s fie translocat corect n RE i este sintetizat n citosol. Acest mecanism poate explica faptul c glicoprot. de pe suprafaa virusurilor pot genera peptide care sunt prezentate de moleculele de MHC de clas I.

21

Generarea liganzilor pt MHC de clas II

Peptidele prezentate de molec MHC II sunt

generate n vezicule intracelulare acidifiate.

n timp ce virusurile i unele bacterii se replic n

citosol, alte clase de patogeni (inclusiv micobacteriile) se


replic n vezicule intracel ale macrofagelor.

Proteinele derivate din aceti patogeni nu sunt


accesibile proteazomilor datorit faptului c sunt situate n vezicule nchise prin membrane.
22

Proteinele din acest compartiment celular sunt degradate de proteaze veziculare, rezultnd peptide care sunt legate n cupa molec. MHC II, pt a fi transportate la suprafaa cel., unde pot fi recunoscute de ctre limf T CD4+. Ag. care sunt prezentate de ctre molec. MHC de clas II, rezult prin degradare n endozomii acidifiai. n unele cazuri sursa peptidelor este reprezent. de bacterii sau parazii care au invadat celula i care se replic n veziculele intracelulare. n alte cazuri microorganismele sau prot. strine sunt fagocitate de celulele fagocitare i preluate n lizozomi pt a fi degradate.

23

Prot. pot ptrunde n veziculele intracelulare i prin legare la molec. de Ig. de pe suprafata limfocitelor B, urmat de internalizarea complexului Ig: antigen.

n drumul spre interiorul cel., pH-ul veziculelor n care


sunt inclui patogenii
(endozomii)

scade

progresiv.

Veziculele cii endozomale conin proteaze care


devin active la pH acid i pot degrada proteinele coninute n vezicule, rezultnd peptide. Printre proteazele prezente n endozomi se gsesc
24

catepsinele B, D i L.

Moleculele MHC de clas II nou sintetizate se deplaseaz spre suprafaa celulei n interiorul unor vezicule, care la un moment dat ntlnesc i

fuzioneaz cu endozomii acidifiai, care se


deplaseaz n sens contrar.

Fragmentele peptidice provenite din degradarea


patogenilor din vezicule sunt legate n cupa MHC

II i transportate la suprafaa celulei, unde pot fi


recunoscute de ctre limfocitele T CD4+.
25

Similar moleculelor MHC de clas I, molec MHC II sunt sintetizate pe faa citosolic a reticulului endoplasmatic i apoi sunt translocate n lumenul RE. Funcia molec. MHC de clas II este de a prezenta limfocitelor T CD4+ peptide generate n veziculele intracelulare ale limf B i macrofagelor. Apoi celulele T CD4+ activeaz macrofagele i limf B s distrug patogenii pe care i conin i s produc Ac. Datorit faptului c molec. MHC II sunt specializate n prezentarea Ag derivate din patogeni intraveziculari, este esenial ca molec. MHC II nou sintetizate din lumenul RE s fie mpiedicate s lege peptidele transportate n REde ctre transportorulTAP-1/TAP-2.
26

Acest

lucru este realizat prin asamblarea

molec MHC II nou sintetizate cu o protein specializat, numit lanul invariabil .


Lanul

invariabil formeaz trimeri, fiecare

subunitate a lui legndu-se necovalent la un heterodimer MHC II .


Att

timp ct are loc asamblarea acestui

complex n RE, prile componente ale complexului sunt asociate cu calnexina.


27

Doar n momentul n care asamblarea este

finalizat i rezult un complex format din 9

lanuri, acesta este eliberat de pe calnexin ptr.

a fi expulzat din RE. n cadrul complexului


nonameric,molecMHC peptide, astfel nct II nu pot s lege n peptidele aduse

lumenul RE nu sunt prezentate, de obicei de


ctre MHC II. Lanul invariabil are i o a doua

funcie de a dirija transportul moleculelor


MHC II ntr-un compartiment endozonal cu pH sczut.
28

Complexul MHC: lan invariabil este reinut n compartimentul endozomal cu pH sczut aprox 5 ore n acest interval de timp, lanul invariabil este clivat la nivelul mai multor situsuri. Clivarea este ordonat, iniial este generat o form trunchiat din lanul Ii, care rmne legat la molecula MHC II i o reine n interiorul compartimentului proteolitic i un fragment numit CLIP (situat n cupa MHC II, fiind necesar ndeprtarea lui pt a permite legarea peptidelor

derivate din patogeni).

Prin aciunea molec HLA-DM, care este codificat n reg MHC Ii i are o structur asemntoare MHC II, se faciliteaz ndeprtarea CLIP din cupa MHC II i legarea peptidelor generate prin clivajul
proteolitic al patogenilor din compartimentul vezicular
29

Spre deosebire de molec MHC II, molec HLA-DM nu

se exprim pe suprafaa celulelor i se gsete


predominant n compartimentul vezicular asociat MHC II. Molec HLA-DM nu necesit prezena n cup a peptidelor pt stabilizare. Principalul rol al molec HLADM este dirijarea eliberrii fragmentului CLIP din cupa

MHC II i apoi ncrcarea n cup a peptidelor antigenice.

Dup legarea peptidelor, molec MHC II sunt


transportate la suprafaa celulei i exprimate. Agprezentate pot fi recunoscute delimf T CD4+
30

celulele N moleculele MHC II leag peptide din proteine self. Molec MHC II care dup disocierea de lanul invariabil nu reuesc s se lege endozomal. Fragmentele rezultate din degradarea molec. de MHC II reprezint un component major al peptidelor prezentate de ctre molec MHC II n celulele N. Acest fapt sugereaz c i molec MHC de clas II, ca i MHC de clas I, sunt produse n exces.
(neinfectate),
31