Sunteți pe pagina 1din 121

Genetica ca stiinta

1.1. Genetica ca tiin GENETICA: O tiin ambiioas, care dup ce a elucidat ceea ce prea imposibil, natura cromozomilor i a genelor, sinteza proteinelor, complexitatea accidentelor ereditare ., vrea s dea o explicaie de ansamblu vieii . C.Maximilian 1.1. Obiectul geneticii Genetica tiina ce studiaz ereditatea i variabilitatea organismelor, regulile i mecanismele ce asigur nregistrarea, pstrarea i transmiterea informaiei ereditare n cadrul ontogenezei i filogenezei organismelor vii Ereditatea proprietate general a organismelor de a conserva i de a transmite informaia despre caracterele prinilor la descendeni Variabilitatea proprietate general a organismelor de a genera caractere noi la descendeni sub aciunea factorilor de mediu 1.1. Sarcinile geneticii Investigarea aparatului genetic al organismelor (gene, cromozomi) Studierea fenomenului ereditii i variabilitii la diferite niveluri de organizare Stabilirea legitilor de transmitere a caracterelor normale i patologice Analiza mutaiilor i a factorilor mutageni ai mediului nconjurtor Investigarea mecanismelor de reparaie Determinarea structurii genetice a populaiilor panmictice Investigarea particularitilor realizrii informaiei genetice la organismele procariote i eucariote Determinarea rolului predispoziiei ereditare i a factorilor de mediu pentru realizarea unui caracter Elaborarea metodelor de profilaxie i tratament a bolilor ereditare Manipularea genetic i analiza organismelor modificate genetic Perfecionarea genetic i obinerea de noi soiuri de plante, rase de animale i sue de microorganisme Etc. 1.1. Metodele geneticii Metoda hibridologic Permite determinarea legitilor motenirii caracterelor n rezultatul ncrucirii formelor parentale i analiza descendenei Metode citogenetice Permit studierea structurii cromozomilor cu ajutorul microscopiei optice i electronice Metode biochimice Permit studierea rolului diferitor componente biochimice ale celulei n procesul de transmitere a informaiei genetice Metoda populaional - statistic Permite stabilirea frecvenei genelor alele n populaiile panmictice Metode moleculare Secvenierea ADN (tehnica Sanger) Pentru determinarea structurii primare a genei

RFLP (Restriction Fragment Lenght Polimorfism) Polimorfismul Lungimii Fragmentelor de Restricie Tehnica Southern - blot Pentru identificarea poziiei genei n genom Tehnica Northen - blot Pentru determinarea mARN (expresiei genei) Tehnica Western - blot Pentru determinarea produsului proteic al genei Tehnica PCR (Polymerase Chain Reaction) Pentru identificarea genei normale sau mutante 1.2. Istoria geneticii 1. perioada pretiinific .. - 1865 2. apariia geneticii ca tiin 1865 - 1953 3. etapa modern 1953 - prezent 6000 . H. : pedigriul a cinci generaii de cai pe desenele rupestre s. VI I . H.: asemnrile dintre prini i copii (Mohabharata, Ramaiana) Empedocl: fiecare printe produce n fiecare parte a corpului semine care se unesc n embrion 450 . H. : Anaxagora: elaboreaz teoria preformismului 360 . H. : Aristotel: sngele este elementul care transmite caracterele ereditare 400 . H. : Hipocrate: susine ereditatea caracterelor la om; autorul teoriei pangenezei 60 . H.: Lucreiu: nsuirile ereditare sunt legate de nite particule care se transmit de la prini la urmai Teoria preformist (Malpighi (1628-1694), Swammerdam (1637-1680)): embrionul este preformat n spermatozoid (sau ovul) Teoria epigenezei (K.Volf (1733-1794)): gameii ambelor sexe particip la formarea noului organism care se dezvolt treptat 1859: Charles Darwin public Originea speciilor, propunnd o teorie evoluionist care explica diversitatea organismelor prin selecia natural 1863: Ch.Naudin remarc uniformitatea hibrizilor primei generaii la Papaver, Datura, Nictoiana 1863: F.Galton arat transmiterea nsuirilor ereditare la om 1866: Gregor Mendel - public Cercetri asupra hibrizilor la plante i propune legile de baz ale ereditii, ignorate pn n 1900 1869: Friedrich Miescher izoleaz acizii nucleici 1876: August Weismann propune teoriile plasmei generative i determinanilor genetici 1882: W.Fleming propune termenul de cromatin 1884: K.W.Nageli elaboreaz teoria micelar a ereditii 1888: W.Waldeyer propune termenul de cromozomi 1889: R.Altmann descoper acidul nucleic n nuclein 1900: redescoperirea legilor lui Mendel de ctre Robert Correns, Hugo de Vries, and Erich von Tschermak 1901: Gregory Bateson confirm legile lui Mendel la animale (gini) 1902: Archibald Garrod presupune c alcaptonuria reprezint o dereglare biochimic determinat genetic 1902: W.S.Sutton, T.Boveri susin c genele sunt localizate n cromozomi

1902: G.Bateson, E.R.Saunders propun termenul de segregare genetic 1903: W.S.Sutton reflect rolul cromozomilor n ereditate 1903: W.Johannsen introduce termenul de linie pur 1904: Gregory Bateson coreleaz caracterele ereditare cu cromozomii, contribuind la fondarea geneticii. 1904: T.H.Montgomery introduce termenul de autozom 1905: Gregory Bateson introduce termenii genetic, homozigot, heterozigot 1907: Gregory Bateson propune termenul de epistazie 1907: W.Johannsen propune termenii de genotip, fenotip, gen, alel 1908: G.H.Hardy, W.Weinberg indic frecvena genelor i genotipurilor n populaii 1910: Thomas Hunt Morgan susine c genele sunt localizate liniar n cromozomi, experimentnd cu drozofila; descoper caracterele legate de sex la drozofil 1910: H.Nilsson-Ehle elaboreaz teoria genelor multiple (polimeria) 1910: L.Plate propune termenul de pleiotropie 1912: T.H.Morgan, E.Cattell propun termenul de crossing-over pentru a evidenia recombinarea intracromozomial 1915: T.H.Morgan et al. propun termenul de locus genetic 1917: C.B.Bridges introduce termenul de dificien cromozomial 1918: R. A. Fisher pune bazele geneticii cantitative i evideniaz rolul factorilor de mediu 1919: C.B.Bridges introduce termenul de duplicaie cromozomial 1920: W.Winkler introduce termenii genom, plasmogene 1920: N.I.Vavilov elaboreaz legea seriilor omoloage a variabilitii ereditare 1925: T.H.Morgan, C.B.Bridges, A.H.Stertevant, H.J.Muller elaboreaz teoria cromozomial a ereditii (apare lucrarea The Genetics of Drosophila melanogaster) 1926: N.I.Vavilov argumenteaz concepia despre centrele de origine a plantelor de cultur 1927: Hermann J. Muller obine forme mutante de drozofil sub aciunea razelor X 1928: F.Griffith descoper fenomenul de transformare genetic 1930: R.A.Fischer pune bazele interpretrii matematice n genetica populaiilor 1938: G.W.Beadle, E,.Tatum elaboreaz concepia o gen o enzim 1944: Charlotte Auerbach obine mutaii sub aciunea iperitei 1944: Oswald Avery, Colin MacLeod i Maclyn McCarty explic fenomenul de transformare la bacterii (Griffitth, 1928), demonstrnd c ADN-ul este purttorul material al ereditii. 1946: H.J.Muller demonstreaz recombinarea genetic la E.coli 1949: M.L.Barr, E.Bertram descoper cromatina sexual n celulele somatice la pisic 1950: Barbara McClintoc descoper structurile genetice mobile la porumb 1951: E.Chargaff constat c A+G/T+C=1 1952: A.D.Hersey, M.Chase confirm rolul genetic al ADN-ului la fagi 1952: A.Zinder, J.Lederberg descriu fenomenul de transducie 1953: James Watson i Francis Crick propun modelul de dublu helix al ADN-ului 1954: F.Sanger propune o metod de secveniere pentru aminoacizi, adaptat mai apoi pentru ADN i ARN 1954: G.Gamov propune modelul de codificare genetic 1954: A.Kornberg realizeaz sinteza in vitro a ADN-ului 1955: M.Grunberg-Manago, S.Ochoa realizeaz sinteza in vitro a ARN-ului cu ajutorul ARN-polimerazei 1956: I.H.Tjio, A.Levan indic prezena a 46 de cromozomi n celulele somatice umane 1957: S.Benzer propune termenii cistron, recon, muton 1957: V.M.Ingram descoper mutaia genic n hemoglobin (Hbs) 1985: R.K.Saiki et al. propun metoda PCR polimerase chain reaction

1995: E.Lewis, C.Nusslein-Volhart, E.Wieschauns premiul Nobel pentru descoperirea genelor HOX ale dezvoltrii la drozofil i la om 2001-2005: descifrarea genomului uman

1.3. Rolul geneticii tiina cu cele mai mari realizri din ultimele decenii tiina cu cea mai accelerat dezvoltare tiina ce a revoluionat disciplinele biologice tiina cu perspective foarte promitoare tiina cu o complexitate pronunat

Diversitatea geneticii (dup obiectul de cercetare) Genetica microorganismelor Genetica plantelor Genetica animalelor

Genetica uman Diversitatea geneticii (dup obiectivele de cercetare) Genetica formal Studiaz principiile de motenire a caracterelor ereditare Genetica populaional Studiaz structura genetic a populaiilor, frecvena genelor n populaiile panmictice Citogenetica Studiaz cariotipul organismelor, particularitile de organizare a crtomozomilor Genetica biochimic Studiaz rolul diferitor substane ale celulei n procesul de transmitere a informaiei ereditare Genetica molecular Studiaz mecanismele realizrii informaiei ereditare la nivel subcelular Ontogenetica Studiaz controlul genetic al dezvoltrii individuale ale organismelor Imunogenetica Studiaz mecanismele genetice ale rspunsului imun al organismelor Genetica social Studiaz particularitile genetice ale comportamentului uman n societate Farmacogenetica Studiaz reacia individual a organismului la medicamente Ingineria genic Studiaz posibilitatea manipulrilor la nivel de gene Etc.

Rolul geneticii biomedical, genetics, and reproductive technologies Analiza genetic Testarea genetic Terapia genic Clonarea Planificarea familiei Testarea medicamentelor Monitoring genetic OMG

Aparatul ereditar

1.1. Noiunile de baz Gen unitatea de baz a informaiei genetice. Genele determin caracterele ereditare. Genom totalitatea informaiei ereditare a organismului. Cromozomi unitile materiale de depozitare a genelor. ADN - acid nucleic ce conine informaia ereditar despre particularitile dezvoltrii biologice ale tuturor organismelor

Structuri cromozomiale Locus poziionarea genei n cadrul cromozomului. Alel o form a genei n cadrul unui locus

Locusul1 Alele posibile: A1,A2 Locusul2 Alele posibile: B1,B2,B3


Genomul uman Celulele somatice umane conin 46 de cromozomi: 2 cromozomi sexuali (hererozomi) (X,Y): XY la brbai. XX la femei. 22 perechi de cromozomi, numii autozomi.

Genotip Fenotip Fiecare locus (cu excepia cromozomilor sexuali) conine 2 gene. Acestea constiuie genotipul individual al acestui locus.

Expresia genotipului se realizeaz prin fenotip. De exemplu, culoarea prului, culoarea ochilor, prezena sau absena pistruilor etc.

Genotip Fenotip (exemple)

Eb- alel Ewalel dominant recesiv. . Dominant vs. Recesiv Alela dominant se exprim (este vizibil) indiferent de prezena sau lipsa alelei recesive. Alela recesiv se exprim (este vizibil) doar n cazul cnd este pereche.

Homozigot genotip ce formeaz un singur tip de gamei i nu segreg n generaiile urmtoare. Heterozigot genotip ce formeaz dou (sau mai multe) tipuri de gamei i segreg n generaiile urmtoare. 1.2. Acizii nucleici F.Meischer (1871) descoperirea nucleinei R.Altman (1889) divizarea nucleinei n protein i acid nucleic

F.Griffith (1928) descoperirea fenomenului transformrii O.Avery, C.Mac Leod, M.Mac Carty (1944) explicarea fenomenului transformrii E.Chargaff (1947) regula lui Chargaff (A+G/T+C=1) I.Watson, F.Crick (1953) structura de helix dublu a moleculei de ADN M.Meselson, F.Stahl (1954) replicarea semiconservativ a moleculei de ADN

Caracteristici generale Polimeri naturali, monomerul fiind nucleotidele * Fiecare nucleotid este format din 3 molecule asociate: Baz azotat: - A - adenin - G guanin - C citozin - T timin sau U uracil Pentoz: - Dezoxiriboz - Riboz Acid fosforic

Caracteristici generale Bazele azotate complementare: A T (U) GC Legturile:

- 5 - 3 fosfodisterice (n caten) - de hidrogen (ntre catene) Localizarea: - nucleu, mitocondrii, cloroplaste, citoplasm (numai ARN)

A-T G-C Perechi de baze

Catenele sunt

Antiparalele Un fragment cu baze azotate(randomizat)

bogat n AT

bogat n GC

Diversitatea acizilor ribonucleici celulari mARN transcriu informaia genetic din secvena de ADN despre structura catenei polipeptidice a unei anumite proteine 2 5% din cantitatea de acizi ribonucleici celulari - este uor degradabil i instabil tARN transport aminoacizii la locul de sintez a proteinelor (ribozomi) 15% din cantitatea de acizi ribonucleici celulari - are aspectul unei frunze de trifoi cu cap (locul de fixare de codon) i coad (locul de fixare al aminoacidului)

rARN particip la formarea ribozomilor 80% din cantitatea de acizi ribonucleici celulari Replicarea ADN-ului Catena parental servete ca matri Catena nou se formeaz dup principiul complementaritii

1.3. Cromozomii W.Waldeyer (1888) propune denumirea de cromozomi W.S.Sutton, T.Boveri (1902) susin c factorii ereditari (genele) sunt localizai n cromozomi T.H.Morgan (1910) teoria cromozomial a ereditii Tijo, Levan; Ford, Hamerton (1956) determinarea cariotipului uman

Nivelurile de organizare a cromatinei

Cromozomii se autoreproduc prin replicarea ADN-ului ce se realizeaz numai n perioada S a interfazei. Cromozomii reprezint grupuri de nlnuire a genelor: fiecare cromozom conine un numr anumit de gene; fiecare gen are o poziie fix pe cromozom locus; genele unui cromozom formeaz grupuri linkage, ce de regul, se transmit n bloc, nlnuit Setul diploid de cromozomi a unui individ formez cariotipul: - La om - 23 perechi: 22 perechi autozomi + 1 pereche gonozomi (XX sau XY). - Cromozomii pereche = cromozomi omologi Repere de identificare a cariotipului sunt: lungimea relativ i absolut a cromozomului, poziia centromerului = constricia primar - c, prezena constriciilor secundare - h, prezena sateliilor - s Cromozomii pot fi analizai n: Metafaz - prin colorare omogen sau n benzi Prometafaz - prin colorare n benzi Interfaz - prin hibridare cu sonde moleculare marcare fluorescent Cromozomii au o structur neomogen: - Secvene codificatoare i necodificatoare; - Segmente de eucromatin i heterocromatin, - secvene unice i repetitive;

- Secvene bogate n GC i AT; - Secvene transcrise i netranscrise; - segmente bogate n proteine acide i bazice. - !!! Acestea explic originea benzilor cromozomiale Structura cromozomului metafazic. Repere cromozomiale

Forma cromozomului metafazic depinde de POZIIA CENTROMERULUI

p Ic = p + q x100

Cariotipul uman

4p22.2 5q13.4 9p21.3

Nomenclatura benzilor Cromozomul ------brae------regiuni-----benzi-----subbenzi

Codul genetic
2.2. Realizarea informaiei genetice n celul Replicarea ADN Codul genetic i proprietile lui Etapele realizrii informaiei ereditare 1.1. Replicarea Replicarea reprezint procesul molecular de autoreproducere a moleculei de ADN, n rezultatul cruia dintr-o molecul de ADN se obin dou molecule noi identice. 1.1. Replicarea asigur: Procesul dublrii i transmiterii identice a informaiei genetice Procesul autoreproducerii Ereditatea

Continuitatea dintre generaii i constana informaiei genetice n cadrul diviziunilor celulare 1.1. Realizarea replicrii: 1.2.

1.1. Principiile replicrii Sintez matricial Sintez complementar Sintez antiparalel Sintez n dou direcii Sintez semiconservativ Sintez fr abateri Proces complex cu participarea diferitor proteine i enzime

1.1. Schema replicrii ADN

1.1. Replicarea n dou direcii

1.1. Direcia replicrii

1.1. Dificultile procesului de replicare Conformaia moleculelor liniare lungi i a celor circulare mici de ADN Tendina catenelor de ADN spre renaturare i formarea fragmentelor bicatenare Specificitatea enzimelor i numrul mare de reacii specifice Replicarea asincron a sectoarelor de eucromatin i heterocromatin Necesitatea de energie pentru procesele de denaturare/renaturare Necesitatea mecanismelor de neadmitere sau nlturare a erorilor de replicare 1.1. Aparatul replicrii Catenele ADN n calitate de matri Punctul de iniiere ORI Nucleozidtrifosfai liberi (dNTP, NTP) Proteine SSB Complexul de enzime: - helicaza - ADN-polimeraza - praimaza - topoizomeraza I i II - ligaza ORI punctul de iniiere al replicrii conine circa 300 perechi de nucleotide conine sectoare capabile s fixeze proteine specifice de iniiere

ADN-helicaza Asigur despiralizarea i denaturarea local a ADN, utiliznd energia hidrolizei ATP

ADN-Polimeraza catalizeaz reacia de polimerizare a nucleotidelor

Tipurile de ADN-polimeraza la eucariote nucleu + + nucleu + + reparat

mitocondrii + + + ambele

nucleu + + + lider

nucleu + + + reparat

Localizarea

Replicarea

Reparaia

Activitatea polimerazic

Activitatea exonucleazic ntrziat

Catena sintetizat

ADN-polimeraza nu poate de sine stttor s iniieze sinteza unei catene noi, ea poate doar s extind aceast caten n prezena unui mordant. Praimaza asigur sinteza unui fragment mic de ARN, care exercit rolul de mordant

Topoizomerazele elimin spiralele datorit restriciei

Ligaza unete fragmentele nou formate

Proteinele SSB stabilizeaz catena ADN-matri n form liniar

Replicarea se asigur prin activitatea coordonat a ntregului aparat de replicare

Replicon unitate funcional a replicrii este format din 100-300 mii p.n. are punct de iniiere (ori) i punct de finalizare (terminus) conine dou furci replicative la procariote -1 replicon, iar la eucariote - multe

Direcia sintezei n furca replicativ

Pe catena ntrziat sinteza are loc cu formarea fragmentelor Okazaki

Controlul replicrii este asigurat de: ORI Proteinele site-specifice Proteinele reglatoare a ciclului celular Etapele replicrii: Iniierea - adiionarea proteinelor specifice la ORI - denaturarea local i formarea ochiului replicativ - sinteza praimerului - adiionarea primelor dNTP la praimer Elongarea - alungirea catenelor noi datorit polimerizrii nucleotidelor - depistarea erorilor i nlturarea lor Terminaia - ntlnirea furcilor replicative vecine - eliminarea praimerilor - completarea breilor - unirea fragmentelor Okazaki - renaturarea ADN Iniierea replicrii adiionarea proteinelor specifice la ORI - denaturarea local i formarea ochiului replicativ - sinteza praimerului - adiionarea primelor dNTP la praimer

Particularitile replicrii la procariote (tipul ) Un replicon i un punct ori, prin care ADN/ul se fixeaz de membrana citoplasmatic Viteza 1000 nucleotide/sec 3 tipuri de ADN-polimeraza (I,II,III) tipul III de baz , posed activitate polimerazic i exonucleazic, tipul II completeaz breile i elimin praimerii.

dou furci replicative Particularitile replicrii la eucariote Replicarea este iniiat n mai multe puncte ori i decurge asinhron Viteza de replicare 20-100 nucleot./sec 5 tipuri de ADN-polimeraza Din cauza eliminrii ultimului praimer catena ntrziat de fiecare dat este mai mic Regiunile telomerice se replic dup un mecanism special Replicarea regiunilor telomerice

1.2. Codul genetic Cifrarea informaiei ereditare despre succesiunea aminoscizilor n catena polipeptidic sub form de succesiune a tripletelor de nucleotide n molcula de ADN (mARN) Codul genetic G.Gamov, 1960: presupune c codul genetic este tripletic

S.Brenner, F.Crick, 1961: presupune c citirea se face succesiv (5 - 3) M.Nirenberg, I.Matthaei, 1961: sinteza polifenilalaninei S.Ochoa et al., 1982; Bretscher, Grunberg-Manago, 1962; Nirenberg, Matthaei, Jones, 1962: descifrarea codului genetic Proprietile codului genetic 1: Codul genetic este tripletic

Fiecare aminoacid este determinat de trei nucleotide Exist 64 de triplete (codoane), dintre care 3 fr sens (UUA, UAG, UGA) Codonul AUG - de iniiere 2: Codul genetic este degenerat Degenerat acelai aminoacid poate fi codificat de mai multe tipuri de codoni 3: Codul genetic este nesuprapus Nesuprapus codonii se aranjeaz unul dup altul fr ntrerupere AUG/CCA/CAC/ACC/CAA

4: Codul genetic este colenear Colenear succesiunea aminoacizilor n molecula de protein corespunde ordinii codoanelor respective din gen 5: Codul genetic este specific Specific unul i acelai codon (triplet de nucleotide) codific doar un singur aminoacid 6: Codul genetic este universal Universal aceiai codoni codific aceiai aminoacizi indiferent de natura organismului (virusuri, bacterii, ciuperci, plante, animale) !!! 6: Exist unele mici abateri de la universalitatea codului genetic

Codul genetic din mitocondriile mamiferelor 1.3. Expresia genelor Expresia genelor totalitatea etapelor realizrii informaiei genetice de la molecula de ADN (gen) pn la sinteza proteinei (transcripia, splising-ul, translaia)

1. 2. 3. 4.

Evoluia concepiei despre gen. Structura, localizarea i funciile genelor. Clasificarea i structura genelor eucariote. Particularitile organizrii genelor procariote.

1. Evoluia concepiilor despre gen G. Mendel Noiunea de factori ereditari W.Johannsen, 1909 Gen unitatea elementar i indivizibil a ereditii G.W.Beadle, Ipoteza O gen o enzim E.L.Tatum, 1945 Ingram, 1957 Ipoteza O gen un polipeptid P.A.Sharp, 1977 Structura exon intronic a genei la eucariote W.Gilbert, 1978 2. Care este interpretarea modern a noiunii de gen? n termeni fizici gena este o poriune din cromozom ce conine o succesiune de nucleotide

n termeni funcionali - gena este o unitate informaional ce asigur sinteza dirijat a ARN-ului

n termeni genetici gena este o unitate a ereditii ce determin un anumit caracter al organismului

Gena este un segment din ADN, ce conine informaia despre sinteza: - unui lan polipeptidic; - unor lanuri polipeptidice nrudite; - moleculelor de ARN (tARN, rARN). Gena este unitatea elementar structural i funcional a ereditii i variabilitii organismelor Structura general a genelor

Localizarea genelor: Genele sunt localizate dea lungul ADN-ului; Genele sunt reprezentate prin secvene unicale i secvene repetitive; Genele sunt separate de secvene necodificatoare (spacer); Genele nu posed limite morfologice stricte, ele fiind separate funcional; Mrimea genelor este variabil Funciile genelor: La nivel molecular controlul sintezei polipeptidului, formarea de proteine funcionale La nivel celular formarea structurilor celulare, unui lan metabolic etc. La nivel de esut i organe realizarea funciilor specifice (respiraia, nutriia, contracia muscular etc.) La nivel de organism determinarea unui caracter specific. Mrimea genomului uman 3,3 x 109 p.n. - 2% din genomul uman codific proteine - numrul de gene 30 000 perechi - localizarea genelor n cromozomi (37 gene n mitocondrii) - n cromozomul 1 sunt cele mai multe gene 2968 - n cromozomul Y sunt cele mai puine gene 307 - Funciile exercitate sunt cunoscute la peste 50% de gene - Mrimea genelor n medie 10-15kb - gena -globinei 1,5 kb - gena insulinei 1,7 kb

- gena catalazei 34 kb - gena distrofinei 2,4 Mb 3.Clasificarea genelor la eucariote Gene de clasa I codific rARN (5.8S; 18S; 28 S). Gene de clasa II codific proteine, se transcriu n mARN; Gene de clasa III codific 5S rARN i tARN. Funciile intronilor

Concepia clasic

Concepia modern Codific (snARN) biopolimeri

Separ exonii

Particip la slising (autoexcizia regiunilor de ADN )

Fosile ale evoluiei ADNului


Promotorul

Asigur expresia genelor

Regiune special la captul 5 al genei, responsabil de fixarea ARN-polimerazei i iniierea transcripiei. Include: - boxa asigur orientarea corect a ARN-polimerazei, - boxa dirijeaz fixarea proteinelor de iniiere cu ARN-polimeraza, - boxa GC determin direcia transcripiei, - boxa octameric servete pentru fixarea factorilor de transcripie.

Elementele structurale ale promotorului genelor eucariote

Elementul structural TATA-box CAAT-box GC-box Octamer

Succesiunea

Localizarea

Mrimea ADN-ului 10 p.n. 22 p.n. 20 p.n. 20 p.n.

Factorii de transcripie TBP CTF/NF1 SP1 Oct1, Oct2

TATAAAA GGCCAATCT GGGCGG ATTTGCAT

- 30 - 75 - 90

Terminatorul se afl la captul 3a catenei codificatoare i se prezint printr-o secven inversat

Secvene modulatoare Enh, S sunt localizate la captul 5sau n introni, servesc pentru adiionarea proteinelor speciale care accilereaz sau stagneaz procesul de transcripie

Structura genelor de clasa I (rARN) codific 5,8S; 18S; 28S rARN, sunt localizate n regiunea organizatorului nuleolar, sunt organizate n uniti de transcripte mixte care sunt moderat repetitive (pn la 200300 ori) i separate de spaceri, nu conin introni, promotorul este localizat la o distan de - 45+20 Organizarea genelor de clasa III codific 5S rARN i tARN, sunt organizate n form de tandemuri repetitive (pn la 3000 ori), promotorul este localizat n interiorul regiunii transcrise (+55+80), se amestec cu pseudogenele.

4. Particularitile materialului genetic la procariote Genomul bacterian este alctuit din 2 categorii de gene: gene eseniale (eucromozomiale) din cromozomul bacterian gene accesorii (extracromozomiale) plasmidele, elementele genetice transpozabile, fagii ADN are o form circular, Molecula de ADN nu formeaz complexe cu proteinele histonice i nehistonice (este nud), Genomul bacterian este reprezentat printr-un numr restrns de gene, Genomul bacterian conine un singur grup linkage Bacteriile sunt organisme haploide, dar pot fi parial diploide i diploide n funcie de sinteza ADN, Transmiterea caracterelor ereditare este diferit de cea a eucariotelor, deoarece lipsete procesul clasic al reproducerii sexuate, Genele structurale au o structur mai simpl i sunt organizate n operoni, Operonul are un promotor i cteva gene de structur, Intronii lipsesc, iar secvene necodificatoare sunt foarte puine Caracteristica genomului la E.coli ADN-ul are o form circular, Lungimea ADN/ului este de 1000-1400 m, Diametrul moleculei de ADN este de 2,5 nm,

Numrul de nucleotide este de circa 2,5 109 daltoni, Numrul de gene este de circa 4 000, Diversitatea plasmidelor - circa 250 tipuri Diversitatea genelor procariote Gene structurale determin structura primar a proteinelor (circa 90% din gene), n genom pot fi grupate n operoni (Jacob, Monod, 1961) Gene reglatoare determin activitatea genelor structurale prin intermediul produsului lor (represor sau aporepresor), Gene operatoare reprezint receptorul semnalelor (represorului sau inductorului) i asigur funcionarea ordonat a operonului, sunt parte component a operonului, Secvene de iniiere reprezint fragmente mici de ADN (1-2 gene: circa 800-1400 de nucleotide) care se pot deplasa n genomul bacterian fie singure, fie n complex cu unele gene structurale (transpozoni), Gene rARN i tARN determin sinteza a rARN (10-20 de gene) i tARN (circa 50 de gene), Suprafee de legare fragmente de ADN care se leag de membrana celular (mezozomi), Gene criptice (tcute) gene ce nu se exprim n mod normal n cursul vieii. Structura operonului la procariote (F.Jacob, J.Monod, 1961)

Structura genelor rARN i tARN la procariote sunt organizate n unuti de transcripte mixte i separate prin spaceri, sunt dispersai prin genom i se transcriu de rnd cu alte gene Transpozoni (elemente genetice mobile)

Sunt secvene de ADN, capabile s se deplaseze dintr-un loc n altul. La eucariote constituie 10-20% din genom. Se evidenieaz transpozoni simpli i complexi. Mecanismele transpoziiei Transpoziia nereplicativ Transpoziia replicativ Retrotranspoziia

Reglajul genetic la procariote 1. Inductibil intervine n sinteza enzimelor catabolismului Fixarea proteinei supresor de gena operator n lipsa substratului n celul i blocarea transcripiei genelor funcionale Lipsa sintezei enzimelor ce particip la descompunerea substratului Fixarea substratului (la apariia substratului!) de represor Lipsa fixrii represorului de gena operatoare Activarea genelor structurale, transcrierea mARN i sinteza enzimelor specifice pentru metabolizarea substratului !!! Pn cnd n celul este prezent substratul, permanent se sintetizeaz enzima ce l descompune !!! Dac substratul este consumat, atunci represorul se elibereaz i blocheaz prin intermediul operatrului funcionarea genelor structurale 2. Represibil intervine n sinteza enzimelor anabolismului Proteina represor blocheaz operatorul n asociere cu substratul n lipsa substratului operatorul este liber i genele structurale funcioneaz Procesul de transcriere a mARN i de sintez a enzimelor necesare continu pn la apariia surplusului de substrat Excesul de substrat se unete cu proteina represor i blocheaz operatorul

n consecin, genele structurale se inactiveaz i sinteza enzimelor respective se ntrerupe Reglajul genetic la eucariote La eucariote sistemele de reglare a activitii genelor sunt mai complexe Reglarea activitii genelor eucariote este determinat de mai muli factori: Prezena nucleului, delimitat de citoplasm printr-o membran dubl Structura complex a cromozomilor i prezena complexului ADN histone - Genele se activeaz odat cu eliminarea histonelor de histon-proteaze Prezena diverselor sisteme de reglare caracteristice organismului (n special, a hormonilor) - Unii hormoni steroizi se fixeaz n citoplasm de receptori specifici i n form de receptor-hormon ptrund n interfaz n nucleu unde acioneaz difereniat asupra activitii genelor (Watson et al., 1983) Nivelurile de reglaj genetic la eucariote 1. Reglaj transcripional se determin genele care vor fi transcrise n mARN 2. Reglaj de maturare a mARN se dirijeaz modul de eliminare a intronilor i asamblare a exonilor n cadrul formrii mARN ------------------------------------------------ 3. Reglaj al transportului mARN se selecteaz moleculele de mARN matur care vor trece din nucleu n citoplasm 4. Reglaj translaional se selecteaz moleculele de mARN ce for fi translate n proteine 5. Reglaj la nivelul degradrii mARN se selecteaz moleculele de mARN supuse degradrii Mecanismele reglajului transcripional 1. Reglaj negativ genele funcioneaz numai n prezena proteinelor represoare 2. Reglaj pozitiv genele funcioneaz numai n prezena unor proteine inductoare ------------------------------------------------!!! Predomin mecanismul de reglaj pozitiv, deoarece este mai economic pentru celul s sintetizeze proteine inductoare pentru 7-10% din ADN, ce se transcriu n mARN, dect s sintetizeze proteine represoare pentru 90-93% din genom. Concluzii: Gena ocup un anumit loc (locus) n cromozom Gena constituie unitatea funcional a informaiei ereditare n cadrul genei pot avea loc recombinmri (reconi) i mutaii (mutoni) Exist gene funcionale i gene structurale Genele structurale codific sinteza proteinelor Genele funcionale controleaz i dirijeaz activitatea genelor structurale Aranjarea tripletelor de nucleotide n genele structurale este coliniar aminoacizilor din lanul polipeptidic, codificat de gena respectiv Funcia genelor este influenat de factorii interni i externi Exist diferite sisteme de reglare a activitii genelor

Grila lui Punnett


Caracterul analizat

nlimea plantei pitic (t) sau Normal (T)

Legenda: Se ncruciaz o plant homozigot dup caracterul dominant (TT) cu una homozigot dup caracterul recesiv (tt). Fiecare plant formeaz doar un singur tip de gamei. TT x tt T Interpretarea rezultatelor Genotipul tuturor plantelor este Tt. => Raportul dup genotip este: Tt - 4/4 Fenotipul tuturor plantelor este nlime normal. => Raportul dup fenotip este: nlime normal - 4/4 T t t

3.1. Legile lui G.Mendel


Gregor Johann Mendel 1822- 1884 Clugr austriac A experimentat cu plantele de mazre Susinea c factorii ereditari (genele) pstreaz individualitatea din generaie n generaie 1865 - Versuche ber Pflanzen-Hybriden

Premizele 1831 Charles Darwin iniiaz cltoria pe corabia Beagle 1839 Schleiden i Schwann propun Teoria celular

1847 Semmelweiss presupune c infecia se transmite prin mnele contaminate ale medicilor 1856 Mendel iniiaz studiile de hibridizare cu boabele de mazre 1857 Louis Pasteur propune teoria despre germenii bolilor infecioase 1859 Darwin public Originea speciilor 1865 Mendel comunic rezultatele despre transmiterea caracterelor fenotipice la mazre n cadrul Societii Naturalitilor din Brnn. 1900 Hugo de Vries n Olanda, William Bateson n Anglia, Franz Correns n Germania, i Erich Tschermak n Austria redescoper legile lui Mendel, punnd bazele geneticii clasice Termenii de baz: Generaii: P = generaia parental (prinii) F1 = prima generaie F2 = generaia a doua ncruciri: ncruciare monohibrid = ncruciarea a dou forme homozigote ce se deosebesc dup un caracter analizat ncruciare reciproc = tip de ncruciare cu inversarea sexelor formelor parentale ncruciare dihibrid = ncruciarea a dou forme homozigote ce se deosebesc dup dou caractere analizate Termenii de baz: Semne: = genotipul (organismul) feminin = genotipul (organismul) masculin X = ncruciare + = alela dominant a genei G = genotip (totalitatea de gene ale organismului) F = fenotip (totalitatea de caractere externe ale organismului) Termenii de baz

Obiectul de studiu: Pisium sativum 1856-64 Mendel aplic ipoteza Puritii gameilor A iniiat investigaiile cu 34 tipuri de Pisium sativum Dup 2 ani a ajuns la 22 de linii pure

Avantajele Pisium sativum Plant autogam cu o structur a florii ce exclude apariia polenizrilor strine ntmpltoare Plant cu o perioad scurt de vegetaie Plant cu caractere bine conturate Specie cu un sortiment bogat de varieti Caracterele analizate la mazre

Caractere din stnga sunt dominante, iar cele din dreapta - recesive Caracterele (7) analizate de G.Mendel

Componentele florii

Ipotezele lui Mendel Exist forme alternative de gene=alele Pentru fiecare caracter organismele au 2 gene una de la mama i una de la tata Spermatiile i oosfera (gameii) au o singur alel, deoarece alelele segreg Cnd o alel se exprim, iar cealalt nu are efect notabil, atunci aceast alel este dominant

Experimentele lui G.Mendel 1. Plantele trebuie sa posede caracteristici distincte de difereniere. 2. Pe perioada nfloririi hibrizii de plante trebuie s fie protejai (izolai) reproductiv pentru a exclude ptrunderea polenului strin 3. Hibrizii i descendana lor nu trebuie s sufere nici o modificare n fertilitatea sa 1. ncruciarea monohibrid Legea uniformitii Legea segregrii

Legea (principiul) uniformitii La ncruciarea formelor homozigote ce se deosebesc dup un caracter (sau mai multe caractre!), n generaia urmtoare se obine o uniformitate dup caracterul dominant

Legea (principiul) uniformitii Genotipuri n F1 4/4 Ss Fenotipuri n F1 4/4 netede

Legea segregrii La ncruciarea a doi indivizi heterozigoi ce se deosebesc dup un caracter, n generaia urmtoare are loc segregarea dup fenotip n raport de 3 : 1

Legea segregrii Genotipuri n F2

1/4 SS 1/2 Ss 1/4 ss Fenotipuri n F2 3/4 netede 1/4 rugoase

2. ncruciarea dihibrid S forma neted a bobului S forma rugoas a bobului Y culoarea galben a bobului y culoarea verde a bobului

ncruciarea dihibrid Segregarea dup fenotip: 9:3:3:1 Segregarea dup genotip: 1:2:2:4:1:2:1:2:1 dup forma bobului: 3:1 dup culoarea bobului: 3:1

Legea segregrii independente La ncruciarea formelor parentale ce se deosebesc dup dou sau mai multe caractre segregarea n generaia a dou (F2) are loc independent dup fiecare caracter n raport de (3 : 1)n , unde n reprezint tipul ncrucirii (numrul perechilor de gene)

ncruciarea trihibrid 1. Organismele iniiale se deosebesc dup trei caractere 1. Rezultatele ncrucirii: 1. 64 de combinaii a 8 tipuri de gamei 1. 27 de diferite genotipuri 1. 8 diferite fenotipuri (2 x 2 x 2) 1. Segregarea dup fenotip = 27:9:9:9:3:3:3:1 Dac numrul de perechi de gene este n, atunci: Numrul de gamei n F1 = 2n Numrul de clase fenotipice n F2 = 2n Numrul de clase genotipice n F2 = 3n

Legea segregrii independente este valid, dac: Gameii i zigoii sunt deopotriv de viabili i viguroi Gameii care poart alelele unei gene se unesc randomizat Genele sunt localizate n cromozomi diferii (nu sunt nlnuite) Genele sunt localizate n autozomi (nu sunt cuplate cu sexul) Genele nu interacioneaz ntre ele

3. Bazele citologice i statistice ale segregrii mendeliene Fiecare pereche de cromozomi omologi dintr-o celul somatic conine cte un cromozom matern i unul patern Fiecare pereche de gene analizat (forma bobului i culoarea bobului) este localizat pe cromozomi omologi diferii Orientarea cromozomilor omologi n cadrul diviziunii meiotice este randomizat (la ntmplare)

Gameii obinui pot conine diferite combinaii de gene 4. ncruciarea de analiz Tip de ncruciare a unui organism cu genotipul necunoscut cu un organism homozigot dup caracterul recesiv pentru determinarea genotipului dup rezultatul segregrii

Analiza statistic a datelor: 1. Raporturile mendeliene pot fi prezise matematic ipoteza nul 1. Ipoteza nul = diferena se datoreaz ansei 1. Compar ipoteza nul cu rezultatele testului ce se potrivesc 1. Testul chi-patrat (2) reprezint testul cel mai valorificat 2 = (# observat - # preconizat)2 / # preconizat 2 = (# observat - # preconizat)2 / # preconizat 1. Selectarea valorii - P (probabilitii c diferenele dintre cele observate i cele preconizate se datoreaz ansei). 1. Valoarea - P se obine din tabelul cu valorile probabilitii (0.05, 0.10. 0.30, etc.) n dependen de gradul de libertate (df). 1. P = 0.05 este deseori citat ca fiind semnificativ. 1. df = # clase fenotipice - 1 (n - 1)

3.2. Motenirea nlnuit a caracterelor


Teoria cromozomial a ereditii. Legea lui T.Morgan Crossing-overul i mecanismul lui Hrile genetice i principiile de elaborare 1. Ereditatea nlnuit Foarte multe caractere nu se supun legilor lui G.Mendel! Exist mult mai multe gene dect cromozomi! - peste 500 de gene la Drozophila melanogaster la cei 4 perechi de cromozomi - peste 30 000 de gene la Homo sapiens la cele 23 de perechi de cromozomi => O pereche de cromozomi gzduete mai multe gene! Rezulate ce in de motenirea nlnuit a caracterelor au fost obinute i de G.Mendel Ex.: culoarea florii (Purpurie sau roie) de mazre i forma polenului (Alungit sau sferic)

Avantajele Drozophila melanogaster Numrul relativ mic de cromozomi (2n = 8) Ciclul de dezvoltare relativ mic (circa 14 zile) Posibilitatea cultivrii n condiii de laborator Numrul mare de forme mutante Dimorfismul sexual pronunat Prolificitatea foarte nalt Legitile motenirii nlnuite a caracterelor au fost descoperide de T.Morgan cu discipolii si Caracterele analizate: - culoarea corpului (Cenuie sau neagr) - forma aripilor (Aripi normale sau aripi rudimentare)

PPBBVgVg x bbvgvg F1 BbVgvg 100% PPBbVgvg x bbvgvg FA B Vg B vg b Vg b vg b vg BbVgvg Bbvgvg bbVgvg bbvgvg % Teoretic 25 25 25 25 % Experim. 41,5 8,5 8,5 41,5

PPbbvgvg x BbVgvg FA b vg B Vg BbVgvg B vg Bbvgvg 25 b Vg bbVgvg 25 b vg bbvgvg 25 50

% Teoretic 25 % Experim. 50

Concluzii: Genele caracterelor analizate se afl n aceeai pereche de cromozomi (sunt nlnuite) i se transmit mpreun: 50% : 50% nlnuirea nu este complet, formele intermediare (8,5% : 8,5%) aprnd n rezultatul crossingoverului Lipsa formelor crossovere n cadrul celui de al doilea experiment se explic prin blocarea crossing-overul la masculii de drozofil Principiile teoriei cromozomiale: Genele sunt localizate n cromozomi liniar, fiecare gen ocupnd un anumit locus strict determinat Genele localizate ntr-un cromozom formeaz un grup linkage, numrul crora este egal cu numrul haploid de cromozomi Genele ce aparin unui cromozom sunt nlnuitr i se motenesc mpreun nlnuirea genelor nu este absolut, cauza nlnuirii incomplete i a recombinrii genetice fiind crossing-overul Cromozomii sunt aranjai n perechi; ntre cromozomii omologi poate avea loc schimb de gene 2. Crossing-overul

Crosing-over schimb de fragmente a cromatidelor nefiice a cromozomilor omologi Se realizeaz Profaza I a meiozei

Factorii ce determin intensitatea crossing-overului 1. Factorii interni - distana dintre gene: cu ct este mai mare distana dintre dou gene, cu att este mai mare procentul de crossing-over - poziia centromerului: de regul, centromerul blocheaz crossing-overul dintre genele localizate de ambele pri ale centromerului - sexul: la unele organisme (masculul de drozofil, fenela de verme de mtase) crossing-overul este blocat 2. Factorii externi - fizici: radiaia, temperatura - chimici: substanele mutagene - biologici: virusurile !!! Distana dintre gene se msoar n uniti de recombinare genetic (morganide cM) 1cM = 1% de crossing-over 3. Hrile cromozomiale Harta cromozomial este o reprezentare grafic a poziiei, ordinei i distanei genelor de pe un cromozom La ntocmirea hrilor cromozomiale se utilizeaz metode genetice i citologice

O hart cromozomial parial a drozofilei Fenotipuri mutante Antene scurte Corp negru (g) Ochi cinebar(c) Aripi rudimentare(l)

Ochi maro

Antene lungi Corp cenusiu (G) Ochi rosii (C) Aripi normale(L) Ochi rosii Fenotipuri spontane Determinarea poziiei genelor Exemplu: genele analizate A, B i C 1. La ncruciarea indivizilor ce se deosebeau dup genele A i B s-au obinut 12% de organisme recombinate: A__________B 2. Pentru determinarea poziiei genei C este necesar de a stabili % de recombinri cu ambele gene - A i B 2.1. Dac % de recombinri ntre B i C este de 10%, atunci ordinea poate fi a) A___C________B sau b) A__________B________C 2.2. Ordinea genelor se stabilete dup % de recombinare ntre genele A i C. Dac el este de 2%, atunci ordinea genelor este a) A___C________B, iar dac el constituie 22% / atunci ordinea genelor este b) A__________B________C 3.2. Genetica sexului Cromozomii sexuali i sexul. Segregarea dup sex Mecanismele de determinare a sexului Motenirea caracterelor cuplate cu sexul 1. Sexul ca caracter genetic Sexul reprezint totalitatea caracterelor morfologice, fiziologice i biochimice care permit reproducerea organismelor i transmiterea caracterelor descendenilor Celulele somatice a unui brbat posed un cromozom X i un cromozom Y Celulele somatice a unei femei posed doi cromozomi X Gameii masculini (spermatozoizii) care conin fie cromozomul X, fie cromozomul Y, determin sexul viitorului copil

2. Determinarea cromozomial a sexului Tipul Drosophila (X-Y)

XX

XY

Tipul Protenor (X-O)

Tipul Abraxas (Z-W) Numrul de cromozomi Determinarea genetic a sexului 1. Cromozomial - Sexul depinde de raportul cromozomilor sexuali (X i Y) - Sexul depinde de raportul dintre cromozomii sexuali (X) i autozomi

Dac X : A = 1 => Dac X : 2A = 0,5 => Dac X : A = [0,5 - 1] => intersexi Dac 3X : 2A = 1,5 => superfemele Dac X : 3A = 0,33 => supermasculi 2. Genic Sexul depinde de activitatea genelor din autozomi i din cromozomii sexuali n cromozomul X sunt concentrate, n special, genele dezvoltrii feminine n autozomi sunt concentrate, n special, genele dezvoltrii masculine !!! Organismele conin gene pentru ambele sexe, dar ele se exprim difereniat n cadrul ontogenezei Determinarea sexului (dup modalitatea formrii zigotei) 1. Progamic - Sexul este determinat pn la fecundaie (Rotatoria) 2. Singamic - Sexul este determinat n procesul de fecundaie (Mammalia) 3. Epigamic - Sexul este determinat dup procesul de fecundaie (Bonellia viridis) Diferenierea sexului (la om) 1. Etapa genetic - Sexul este determinat de particularitile cromozomilor sexuali n cadrul formrii zigotului 2. Etapa gonadic - Sexul este determinat de dezvoltarea difereniat a gonadelor: combinaia XX determin dezvoltarea zonei corticale (a ovarului), iar combinaia XY a zonei medulare (a testiculului) 3. Etapa hormonal - Sexul este determinat de particularitile de secreie a hormonilor sexuali ai gonadelor (ovarului i testiculelor), care pot secreta diferite tipuri de hormoni 4. Etapa psihic - Sexul este determinat de particularitile comportamentului psihic al individului 3. Motenirea caracterelor cuplate cu sexul Toate genele localizate n cromozomii sexuali sunt cuplate cu sexul Particularitile motenirii caracterelor depinde de localizarea genelor (n cromozomii X sau Y) Exemplu: culoarea ochilor la drozofil

Motenirea caracterelor cuplate cu sexul Legitatea criss cross

Particularitile motenirii se explic prin faptul c la masculi celulele somatice conin un cromozom X, iar la femele doi cromozomi X Schemele de mai jos reflect motenirea culorii ochilor la drosofil (gena respectiv este localizat n cromozomul X)

R = alela ochi roii r = alela ochi albi 3 : 1 - 50% : 25% : 25% 1 : 1 - 25% : 25% : 25% : 25% Motenirea caracterelor sex-linkate

Cuplate cu sexul Caracterele genele crora sunt localizate n cromozomul X se transmit de la mam la fiu sau fiic, iar de la tat la fiic Caracterele genele crora sunt localizate n cromozomul Y se transmit de la tat la fiu Exemple: culoarea ochilor la drozofil; hemofilia, daltonismul la om

Limitate de sex Caracterele genele crora sunt localizate n autozomi sau cromozomii sexuali sunt suprimate de sex Exemple: genele lactaiei la tauri; genele depunerii oulor la gini Dependente de sex Caracterele genele crora se expreseaz n dependen de sexul organismelor Exemple: prezena coarnelor la bovine; chelia la om CC sau Cc la numai CC la

3.4. Interaciunea genelor alele


I. Dominana incomplet II. Alelismul multiplu. Codominarea III. Pleiotropia Genotipul ca sistem integru Gene alele: Gene ce ocup acelai locus n cromozomii omologi i condiioneaz formarea unor caractere alternative n meioz se repartizeaz n cromozomi diferii Gene nealele: Gene ce ocup loci diferii n acelai cromozom sau n cromozomi diferii

Genele alele i genele nealele


PP, aa, Bb gene alele Pa, PB, Pb gene nealele I. Dominana incomplet Tip de interaciune a genelor alele cnd o alel domin incomplet cealalt alel, genernd un fenotip intermediar Segregarea dup fenotip coincide cu segregarea dup genotip 1 : 2: 1 Exemple: culoarea florii la regina nopii, cistinuria

II. Alelismul multiplu Tip de interaciune a genelor alele cnd expresia caracterului este determinat de o gen ce se poate afla n populaie n trei sau mai multe forme alele Se formeaz serii succesive de dominare

a a 2 a 3 .. a n Exemple: Culoarea blnii la iepurele de cas, grupele sangvine la om n sistemul ABO III. Codominarea Tip de interaciune a genelor alele cnd expresia caracterului este determinat de prezena concomitent a dou gene dominante Exemple: Grupa a 4-a sangvin la om n sistemul ABO Grupele sangvine n sistemul MN Culoarea blnii la bovine Example: grupele sangvine tipul O = ii tipul A = IAIA sau IAi 3. tipul B= IBIB sau IBi 4. tipul AB = IAIB Culoare neagr + culoare alb = culoare pestri III. Pleiotropia Tip de interaciune a genelor alele cnd o singur gen poate determina expresia a dou sau mai multe caractere Segregarea dup fenotip este de 2 : 1 Exemple: Culoarea blnii la oricei Culoarea blnii la ovine 1. 2.

3.4. Interaciunea genelor nealele


I. Complementaria II. Epistazia III. Polimeria I. Complementaria Tip de interaciune cnd dou gene nealele, combinndu-se ntr-un genotip, determin un caracter nou ce se deosebete ce cele parentale Se nregistreaz diferite rapoarte de segregare: 9 : 3 : 3 :1 9:3:4 9:7 Motenirea culorii penajului la papagali (9:3:3:1) PP AAbb x aaBB F1 AaBb 100% Legenda: A prezena pigmentului galben a lipsa pigmentului galben B prezena pigmentului albastru b lipsa pigmentului albastru AB Ab aB ab

AB Ab aB ab

AABB AABb AaBB AaBb

AABb AAbb AaBb Aabb

AaBB AaBb aaBB aaBb

AaBb Aabb aaBb aabb

Motenirea culorii blnii la iepuri (9:3:4) PP AAbb x aaBB F1 AaBb 100% Legenda: A prezena pigmentului (culoarea neagr sau sur) a lipsa pigmentului B repartizarea uniform a pigmentului (sur) b repartizarea neuniform a pigmentului (negru) AB Ab aB ab AB Ab aB ab AABB AABb AaBB AaBb AABb AAbb AaBb Aabb AaBB AaBb aaBB aaBb AaBb Aabb aaBb aabb

Motenirea auzului la om (9:7) PP AAbb x aaBB F1 AaBb 100% Legenda: A dezvoltarea melcului a lipsa dezvoltrii melcului B dezvoltarea nervului auditiv b lipsa dezvoltrii nervului auditiv AB Ab AB AABB AABb Ab AABb AAbb aB AaBB AaBb ab AaBb Aabb

aB ab

AaBB AaBb

AaBb Aabb

aaBB aaBb

aaBb aabb

II. Epistazia Tip de interaciune cnd o gen nealel inhib expresia fenotipic a altei gene Se distinge: Epistazia dominant (13 : 3; 12 : 3 : 1) Epistazia recesiv: (9 : 3 : 4; 9 : 7) Exemple: Fenomenul Bombei - motenirea grupelor sangvine (IB- H- - grupa I; IB- hh grupa III) Motenirea culorii penajului la gini (13:3) PP AASS x aass F1 AaSs 100% Legenda: A prezena pigmentului a lipsa pigmentului S suprimarea culorii s lipsa suprimrii AS As aS as AS AASS AASs AaSS AaSs As AASs AAss AaSs Aass aS AaSS AaSs aaSS aaSs as AaSs Aass aaSs aass

Motenirea culorii blnii la cini (12:3:1) PP AASS x aass F1 AaSs 100% Legenda: A prezena pigmentului negru a prezena pigmentului cafeniu S suprimarea culorii s lipsa suprimrii AS As aS as

AS As aS as

AASS AASs AaSS AaSs

AASs AAss AaSs Aass

AaSS AaSs aaSS aaSs

AaSs Aass aaSs aass

III. Polimerie Tip de interaciune a genelor nealele cnd mai multe gene determin un singur caracter, intensitatea cruia depinde de numrul de alele dominante Genele se noteaz cu aceiai liter Tip de motenire caracteristic caracterelor cantitative Poate fi polimerie comulativ i necomulativ Exemple: Culoarea bobului de gru, pigmentaia pielii la om Motenirea culorii cariopsei de gru (15:1) PP A1 A1 A2 A2 x a1 a1 a2 a2 F1 A1 a1 A2 a2 100% Legenda: A1 , A2 prezena pigmentului a1 , a2 lipsa pigmentului A1 A2 A1 a2 a1 A2 a1 a2 A1 A2 A1 a2 a1 A2 a1 a2 A1 A1 A2 A1 A1 A2 A1 a1 A2 A2 a2 A2 A1 a1 A2 a2

A1 A1 A2 A1 A1 a2 a2A1 a1 A2 a2A1 a1 a2 a2 a2 A1 a1 A2 A2 A1 a1 A2 a2a1 a1 A2 A2a1 a1 A2 a2

A1 a1 A2 a2A1 a1 a2 a2 a1 a1 A2 a2 a1 a1 a2 a2

Concluzii: I. Genele alele i nealele interacioneaz, fenomen ce duce la modificarea segregrilor clasice II. Fenotipul este rezultatul interaciunii genelor, iar genotipul reprezint un sistem integru III. Fenotipul este rezultatul interaciunii genotipului integru cu mediul extern n ontogeneza organismului 3.6. Motenirea extracromozomial 1. Particularitile ereditii Nucleare: Conine un numr stabil de cromozomi Nu poate nltura aberaiunile cromozomiale Se reproduce identic (dup numrul de cromozomi) Cromozomii se repartizeaz uniform

Se supune legilor mendeliene ADN liniar, n complex cu proteinele histone Un numr mare de gene Etc. Citoplasmatice: Conine un numr diferit de organite Poate substitui diferite organite Nu reproduce identic (repartizarea diferit a organitelor) Organitele nu se repartizeaz uniform Nu se supune legilor mendeliene ADN inelar, nud, fr proteine histone Un numr mic de gene Etc. 2. Cum se poate evidenia ereditatea extracromozomial? Metode de evideniere a ereditii citoplasmatice: Neidentitatea hibrizilor obinui n rezultatul ncrucirilor reciproce iap (2n=64) x mgar (2n=62) = > catr (2n=63) mgri x armsar = > catr (2n=63) Ambii sunt sterili, dar diferii! Merogonia eliminarea genomuluimatern din procesul de reproducere La aricii de mare, crinii de mare, organismele dezvoltate din ovule anucleate conin i trsturile formelor materne! La Acetabularia (A.mediterranea i A.wettsteinii) forma corpului dup transplantare depinde de natura nucleului prezent! Segregarea nemendelian La Mirabilis jalapa (barba mpratului) culoarea frunzei (verde, alb, pestri) se motenete pe linia matern! 3. Diversitatea ereditii extracromozomiale Ereditatea: 1Cromozomial: Determinat de ADN-ul din nucleu 2. Extracromozomial: 2.1. Plastidial Determinat de ADN-ul din cloroplaste 2.2. Mitocondrial Determinat de ADN-ul din mitocondrii 2.3. Plasmidial Determinat de ADN-ul din plasmidele bacteriilor 2.4. Endosimbiontic Determinat de ADN-ul strin din citoplasm Particulele kappa la parameci; particulele sigma la drozofil Genomul mitocondrial uman

Particularitile genomului mitocondral uman 1% din ereditatea uman (2-10 molecule) ADN circular, nud 2 catene: catena grea (HS) i catena uoar (LS) Lipsesc intronii Este prezent bucla dedeplasare D-loop (circa 1000 pb) Conine 37 de gene (2 gene rARN, 22 gene tARN, 13 gene a proteinelor lanului respirator)

Mutaiile ADN-ului mitocondrial Boala mitocondrial Manifestarea clinic Mutaia Neuropatia optic ereditar Leber Encefalopatie mitocondrial Sindromul KearnsSayre Pierderea progresiv a Substituie G A vederii prin atrofia nervului Hipostatur Substituie A G Surditate Convulsii Oftalmoplegie extern Deleie progresiv Tulburri cardiace

4.1. Genetica populaiilor Noiune de populaie i indicii principali ai unei poipulaii Structura genetic a unei populaii. Legea Hardy-Weinberg Factorii ce determin structura genetic a populaiei 1. Populaia Totalitatea de indivizi a unei specii ce se aseamn ntre ei dup particularitile morfologice, fiziologice, biochimice etc., determinate genetic, se ncrucieaz liber i dau urmai fecunzi, se supun aciunii acelorai factori ai mediului extern, ocup un anumit teritoriu (areal) i exzist relativ izolai de alte grupri de indivizi ale aceleiai specii Grupri locale de organisme care aparin unei singure specii i posed un fond de gene comune Pot fi descrise dup diferii indici statici i dinamici Indicii principali ai unei populaii Efectivul numeric Numrul de indivizi ce populeaz un anumit teritoriu Densitatea populaiei Numrul de indivizi pe o unitate de suprafa Arealul Teritoriul ocupat de indivizii populaiei Natalitatea Numrul de indivizi nscui ntr-o perioad de timp Mortalitatea Numrul de indivizi ce au pierit ntr-o perioad de timp Undele populaionale

Variaiile numerice ntr-o perioad de timp Raportul de vrst Diversitatea de vrst Raportul de sexe Diversitatea de i Etc.

2. Structura genetic a unei populaii Este determinat de frecvena genelor Frecvena cu care alelele unei anumite gene sunt prezente ntr-o populaie Poate fi programat Depinde de fluctuaiile numerice ale indivizilor din generaie n generaie Legea lui Hardy-Weinberg (1908) ntr-o populaie panmictic, ce satisface anumitor condiii, frecvena genelor alele (homozigoilor i heterozigoilor) rmne constant Simbolurile aplicate: ntr-o populaie, p + q = 1 p = frecvena alelei dominante A q = frecvena alelei recesive a Probabilitatea ovulului fecundat cu aceiai alel este p2 (AA) sau q2 (aa)

Probabilitatea ovulului fecundat cu alele diferite este pq (Aa) Ecuaia Hardy-Weinberg p2 + 2pq + q2 = 1 1 = 100% genotipuri n noua generaie p2 i q2 este frecvena genotipurilor homozigote dominante i recesive 2pq este frecvena hgenotipurilor heterozigote n populaie Calcularea frecvenei genelor alele ntr-o populaie panmictic (Exemplu) Fie c o populaie conine a (q = 0.4) i A (p = 0.6) a = pr neted A = pr ondulat Frecvena alelelor: A = 0.6 a = 0.4 Frecvena genotipurilor: AA = 0.6 x 0.6 = 0.36 Aa = 2(0.6 x0.4) = 0.48 aa = 0.4 x 0.4 = 0.16 Calculm frecvena genelor alele n generaia urmtoare: A = 0.36 + 0.48/2 = 0.36 + 0.24 = 0.6 a = 0.16 + 0.48/2 = 0.16 + 0.24 = 0.4 !!! Frecvena genelor alele nu s-a modificat n generaia urmtoare. Legea lui Hardy-Weinberg se aplic pentru: Estimarea frecvenei alelelor autozomale dominante sau recesive n populaie

Depistarea modificrilor frecvenei genelor alele ntr-o populaie (schimbrile evolutive) Determinarea frecvenei heterozigoilor n cadrul unei populaii Calcularea frecvenei genelor alele autozomale Structura genetic a unei populaii se poate determina la cunoaterea frecvenei organismelor homozigote recesive - (aa) Frecvena genotipurilor aa = q2 Frecvena alelei recesive (a) este q2 = q Frecvena alelei dominante (A) se calculeaz dup formula p = 1 - q Calcularea frecvenei genelor X-linkate n cazul genelor X-linkate femelele (XX) transport 2/3 din alele, iar masculii (XY) - 1/3 din alele Frecvena alelelor depinde de sexul organismelor Frecvena alelei recesive X-linkate la brbai este q Frecvena alelei recesive X-linkate la femei este q2 Calcularea frecvenei n cazul alelismului multiplu n cazul grupelor sangvine n sistemul ABO sunt posibile 6 genotipuri diferite (AA, AO, BB, BO, AB, OO) Frecvena alelelor: p (A) + q (B) + r (O) = 1 Frecvena genotipurilor: (p + q + r)2 = 1 Ecuaia Hardy-Weinberg este urmtoarea: p2 (AA) + 2pq (AB) + 2pr (AO) + q2 (BB) + 2qr (BO) + r2 (OO) = 1

Determinarea frecvenei heterozigotilor n populaie Determinm numrul (rata) homozigoilor recesivi n populaie (q2) i calculm frecvena alelei recesive: q Calculm frecvena alelei dominante: p (p = 1- q)

Calculm frecvena heterozigoilor n populaie: 2pq Descrierea structurii genetice frecvena genotipurilor frecvena alelelor Frecvena genotipurilor: 200/1000 = 0.2 rr 500/1000 = 0.5 Rr 300/1000 = 0.3 RR Frecvena alelelor: 900/2000 = 0.45 r 1100/2000 = 0.55 R Generalizare: Estimarea frecvenei geleor alele (homozigoilor i heterezigoilor) ntr-o populaie prezint un interes deosebit n caractarizarea acestei populaii 3. Factorii ce determin structura genetic a populaiei Panmixia Izolarea

Selecia natural

Mutaiile Panmixia ncruciarea randomizat (la ntmplare) creeaz premize egale pentru supravieuirea fiecarei alele i lipsa avantajrii uneia din ele Se poate instala pentru unele specii de organisme i lipsete la altele

Izolarea Exclude importul sau exportul de gene n populaie prin diferite mecanisme (izolare geografic, izolare ecologic, izolare reproductiv) - Se poate instala pentru unele specii de organisme i lipsete la altele Selecia natural Favorizeaz anumite alele graie supravieuirii indivizilor mai viguroi la aciunea factorilor selectivi ai mediului (fizici, chimici, biologici) Aciunea factorilor mediului nconjurtor practic nu poate fi exclus n populaiile naturale

Mutaiile Determin modificarea frecvenei alelelor n populaie n rezultatul modificrii alelelor iniiale (spontane) - Mutaiile reprezint nite ntmplri necesare i nu pot fi excluse populaiile naturale Concluzii: n natur exist diferii factori ce determin structura genetic a unei populaii Legea lui Hardy-Weinberg este valid pentru condiii idiale: Prezena unei populaii panmictice prezena unei populaii izolate; lipsa seleciei naturale; lipsa mutaiilor Legea lui Hardy-Weinberg poate fi aplicat pentru populaiile naturale n condiii concrete de trai

Variabilitatea: Proprietate universal a indivizilor oricrei specii de a se deosebi ntre ei. Se produce sub aciunea factorilor de mediu (fizici, chimici, biologici) Asigur adaptabilitatea organismelor la condiiile de trai Poate fi neereditar i ereditar Este determinat de repartizarea independent a genelor

Repartizarea independent a genelor

Repartizarea independent a genelor depinde de comportarea lor n meioz i particularitile fertilizrii Separarea cromozomilor parentali n cadrul meiozei i recombinarea lor n cadrul fertilizrii permite obinerea de noi combinaii de gene n exemplul ce urmeaz se prezint repartizarea cromozomilor paterni (n albastru) i materni (n rou) Genotipul: Bbcc Genotipul: bbCc Fenotipul: ochi cprui, pr drept Phenotype: ochi albatri, pr ondulat Brbat Femeie Spermatozoizi Ovul

b c c

b C c

Meioza: cromozomii omologi se separ n gamei

B c

b c

b C

1. Variabilitatea proprietate general a organismelor de a cpta caractere noi sub aciunea factorilor de mediu Variabilitate neereditar Modificrile au loc n cadrul normei de reacie Nu se motenete la descendeni Asigur adaptabilitatea individului Nu reprezint semnificaii evolutive deosebite Variabilitate ereditar Modificrile au loc cu schimbarea normei de reacie Se motenete la descendeni Asigur adaptabilitatea speciei Prezint semnificaii evolutive deosebite, deoarece genereaz material pentru selecia natural 2. Tipurile de mutaii (dup mecanismul apariiei) Genice (punctiforme) deleii adiii substituii: tranziii (A G; C T); transversii (A T C G) Cromozomiale structurale: deleii; inversii; duplicaii; translocaii) numerice poliploidia: autopoliploidia; allopoliploidia aneuploidia Transpoziia (inseria) 2. Tipurile de mutaii (dup locul apariiei)

Cromozomiale (nucleare) Extracromozomiale cloroplastice mitocondriale cinetocorice 2. Tipurile de mutaii dup tipul celulelor generative (n) somatice (2n) dup expresia fenotipic indiferente (neutre) semiletale letale Factorii ce determin frecvena mutaiilor Controlul genetic al proceselor mutaionale Aranjarea genelor n genom Scderea adaptabilitii organismelor ca rezultat al mutaiilor Interaciunea genelor Prezena genelor modificatoare Intensitatea proceselor de reparaie etc. Legea seriilor omoloage a variabilitii ereditare Speciile i genurile genetic nrudite se aseamn ntre ele dup seriile omolage a variabilitii ereditare

4.2. Mecanismele moleculare ale proceselor genetice


Mecanismele moleculare ale mutaiilolr * Mecanismele moleculare ale reparaiilor 1. Mecanismele mutaiilor spontane Rezultatul erorilor de replicare: Mutaiile apar n rezultatul unor erori n cadrul replicrii ADN-ului (apariia unor baze necomplementare; transformrile tautomere a bazelor azotate) C = O = C OH; - NH2 - NH Rezultatul reparaiei eronate: Mutaiile apar n rezultatul unor erori n cadrul corectrii leziunilor de ADN erori ale enzimelor Rezultatul recombinrilor genetice: Mutaiile apar n urma inseriei ADN-ului strin (transpozonii, plasmidele, fagii temperai) 1. Mecanismele mutaiilor induse 1. Aciunea factorilor fizici: 1.1. radiaiile UV ( 254 nm ) Hidratarea citozinei slbirea legturii de H cu G tranziie Formarea legturilor covalente ntre pirimidine dimeri pirimidinici ( T ) dereglri a codului genetic 1. Mecanismele mutaiilor induse

Dimeri timinici, indui de razele UV 1. Aciunea factorilor fizici: 1.2. radiaiile ionizante (,,, neutronii) Mutaii punctiforme Generarea de radicali nalt reactivi Hidratarea timinei Dezaminarea citozinei Rupturi a catenei de ADN

2. Aciunea factorilor chimici: 2.1. analogi ai bazelor azotate (5-bromuracil, 2-aminopurin) Se incorporeaz n ADN i produc erori de replicare

2. Aciunea factorilor chimici: 2.2. acidul nitros (HNO2), hidroxilamina (NH2OH), agenii alchilani (iperipa, dimetilsulfonatul) Modific bazele azotate i, ca rezultat, produc erori de mperechere

2. Aciunea factorilor chimici: 2.3. coloranii de acridin (proflavina, acridinoranjul) Interacioneaz cu ADN/-ul i provoac distorsiuni locale ale moleculei, favoriznd erori de replicare i recombinare

Mecanismele moleculare ale mutaiilor genice Mutaiile pot aprea deoarece bazele azotate pot cpta diferite forme Norma: A i G purine aminice T i C pirimidine cetonice Dereglri: A* i G * purine imine (A *- C; G * - T) T * i C * pirimidine enolice (T *- G; C * - A) Mecanismele mutaiilor cromozomiale Mutaiile apar n rezultatul nondisjunciei cromozomilor n cadrul meiozei

Meioz normal

Nondisjuncia n Meioza I

Nondisjuncia n Meioza II

Tipuri de mutaii genice Nonsens ( terminatoare de caten) Modific un codon funcional ntr-un codon stop Missens ( cu sens greit)

Modific un codon funcional ntr-un alt codon funcional Silent ( cu acelai sens) Modific un codon funcional ntr-un codon ce determin acelai aminoacid Back ( de reversie)

Indicii aprecierii mutaiilor Frecvena mutaiilor ( a = M / N ) Reprezint raportul numrului total de mutaii (M) la numrul total de organisme n populaii (N) Rata mutaiilor Reprezint probabilitatea apariiei unei mutaii la o celul (generaie)

5.3. Reparaia ADN


REPARAIA proprietatea unic a moleculelor de ADN de a-i restabili structura primar, iniial; proprietatea celulelor de a controla i evita acumularea mutaiilor; este reprezentat de un sistem complex de enzime ce sunt capabile: s identifice greelile din ADN, s nlture fragmentul de ADN cu eroare, s sintetizeze un nou fragment s-l integreze n macromolecula de ADN bicatenar; se realizeaz dup principiul complementaritii; se realizeaz n timpul replicrii; dup repicare sau independent de replicare Mecanismele de alterare a moleculelor de ADN Cauze naturale: depurinizarea oxidarea A Hipoxantin C Uracil Erori de mperechere a BA n timpul Replicrii Cauze accidentale radiaii dimeri T-T dimeri T-C ageni chimici alchilarea ADN rupturi de caten Cauzele apariiei leziunilor ADN Tipul leziunii Cauza Lipsa BA BA incorect BA modificat Dimeri Legturi nespecifice Rupturi Apurinizarea acid sau termic Dezaminarea spontan sau indus Radiaia ionizant, ageni alchilani Radiaia UV Mitomicina C Radiaia ionizant, peroxizi, nucleaze

Tipuri de reparaie: Autocorecia erorilor n timpul replicrii: ADN polimeraza relectur activitate exonucleazic 3 5 corecia greelilor; MMR (Mismatch Repair) independent de replicare multienzimatic repar n special greelile din secvenele microsatelitice (cu rat nalt de muTaii). BER (Base Excision Repair): excizia bazei greite excizia nucleotidului fr baz completarea golului NER (Nucleotide Excision Repair) : recunoaterea dimerului excizia unui fragment de 24-32 nucleotide din catena afectat completarea golului. Reparaia replicativ

Reparaia postreplicativ

Fotoreparaia Hedgepeth, Goodmen, Boyer, 1972 Degradarea dimerilor pirimidinici la E.coli Reparaia afeciunilor provocate de razele UV Participarea enzimelor speciale (fotoliaze) Decurge n prezena luminii

SOS reparaia ! Nu este foarte exact La aciunea stresului termic se sintetizeaz proteine specifice Rea A - proteza Rec A proteaza regleaz activitatea proteinei Lex A Lex A se unete cu o secven de ADN (blocul SOS) care blocheaz sinteza enzimelor de reparaie

Rec A proteaza hidrolizeaz proteina Lex A, n rezultat se activeaz circa 15 gene (la E.coli) de reparaie Reparaia prin excizia bazelor (BER) reparaia alterrii unui nucleotid . ADN-glicozilaza nltur baza modificat 2. AP-liaza produce o incizie la captul 3 3. AP-hidrolaza incizeaz captul 5 4. ADN-polimaraza completeaz golul 5. ADN-ligaza unete capetele.

Reparaia prin excizia nucleotidelor (NER) reparaia fragmentelor mari cu nucleotide alterate Un complex proteic (XPA-PRA) recunoate fragmentul defect Excinucleaza (endonucleaz) produce incizii monocatenare la distana de 5 pb de la captul 3 i 24 pb de la captul 5 Golul este completat de ADN-polimerazele i ADN-ligaza unete capetele

Reparaia mismatch (MMR) repararea situsurilor nemperecheate Excizia bazelor nepereche (pentru fiecare pereche eronat exist complex enzimatic special) ADN-polimeraza completeaz golul format i ADN-ligaza unete capetele.

Repararea rupturilor bicatenare

Boli detrminate de defecte ale reparaiei ADN Xeroderma pigmentosum Hipersensibilitate la radiaia UV; Leziuni ale tegumentelor, inclusiv cancer; Majoritatea pacienilor mor pn la vrsta de 30 ani; Cauza incapacitatea de nlturare a dimerilor pirimidinici.

Ataxia-telangiectasia Hipersensibilitatea fa de radiaiile ionizante; Ataxie cerebral, teangiectasie oculo cutanat, imunodeficiene Anemia Fanconi Hipersensibilitatea fa de agenii ce provoac legturi covalente nespecifice bicatenare; Leucemii i anemie aplastic progresiv; ? Defectul enzimelor de reparaie. Sindromul Bloom Hipersensibilitatea fa de numeroi ageni mutageni; imunodeficiene; retard de cretere; pedispoziie la cancere

6.1.Genetica microorganismelor
1. Structura i funcionarea materialului genetic ADN & ARN ADN=acid dezoxiribonucleic ARN=acid ribonucleic Polinucleotide: Structura nucleotidului Grupul fosfat Pentoz Baz azotat Structura ADN Caten dubl (dublu helex) Conine nucleotide 5 - 3 (catenele sunt antiparalele) Bazele azotate complementare A-T G-C Structura ADN Fosfat -P Glucid -albastru Baze-ATGC Replicarea ADN ADN-ul bacterian este circular, nchis Genomul: gene eucromozomiale + gene accesorii E. coli 4 milioane perechi de baze Circa 250 de plasmide diferite (la diferite sue!) ADN ocup circa 10% din volumul celulei Replicarea ADN se realizeaz cu formarea furcii replicative De la 5 spre 3 ADN-helicaza + catena ADN parental n calitate de matri Catena lider (5 spre 3- continuu) *ADN - polimeraza asigur extinderea catenei adiionnd baze azotate (complementare) Catena ntrziat (5 spre 3-prin fragmente) *ARN-polimeraza (recunoaterea RNA primer) *ADN-polimeraza (extinderea catenei i formarea catenei ADN)

*ADN-ligaza (unirea fragmentelor Okazaki) Furca replicativ

Sinteza proteinei ADN------- mARN------ protein transcripie a geneticii moleculare 2. Ereditatea extracromozomial Plasmide (P) Secvene de inserie (SI) Transpozoni (Tn) Bacteriofagi (B)

translaie Dogma Central

Particularitile ereditii extracromozomiale Conin informaia ereditar accesorie (nu de prima importan) Pot exista semiautonom (sau chiar autonom) de cromozomul bacterian

Pot s se replice mpreun cu cromozomul bacterian Plasmidele

Elemente genetice sub form de molecule circulare de ADN care exist autonom sau semiautonom de cromozomul bacterian Lederberg, 1952 Pot s existe diferite tipuri Tipuri de plasmide (dup efectul provocat) Plasmide de fertilitate F Plasmide de colicinogenez Col Plasmide de rezisten R Plasmide de toxigenitate Vir Ti (dup capacitatea de a media transferul de material ereditar) Plasmide conjugative Sunt donatori de material ereditar F Hfr F` Unele plasmide Col, R Plasmide neconjugative Nu sunt autotransmisibile Unele plasmide Col, R (dup capacitatea integrrii n cromozomul bacterian) Plasmide de tipul episomilor F Col E1 Celelalte plasmide Factorul Col F`

Caracteristicile plasmidelor Sunt structuri genetice formate din ADN circular Exist autonom (sau semiautonom) de cromozomul bacterian Nu sunt structuri genetice eseniale (pot lipsi) Se pot intercala n cromozomul bacterian (episom) Pot induce conjugarea ntre bacteriile + i - Pot codifica sinteza unor substane importante Posed diferite funcii Funciile plasmidelor Rezistena la antibiotice (penicilina, streptomicina, tetraciclinele, sulfamide, etc.) Rezistena la metalele grele (Hg, Cd, Pb) Rezistena la razele ultraviolete Inducerea de tumori la plante (Ti Ag.tumefaciens; Ri Ag.rhizogenes)

Producerea de antibiotice (cloramfenicol, metilenomicina) Transferul materialului genetic prin conjugare i formarea pililor (fimbrii sexuali) Producerea de toxine i factori de virulen (enerotoxina Ent; colicine Col) Provocarea fermentaiei lactice (g. Lactobacillus) Utilizarea unor substane netradiionale (hidrocarburi ciclice) Formarea vacuolelor gazoase (g. Halobacterium) Etc 3. Recombinarea genetic la bacterii La eucariote are loc n procesul de formare a gameilor prin recombinarea cromozomial i conversie La procariote are loc prin fenomene specifice Trei tipuri: Transformarea: transferul se realizeaz cu fragmente de ADN de la o celul la alta Conjugarea: transferul se realizeaz n rezultatul contactului direct Transducia: transferul se realizeaz cu ajutorul unui virus Transformarea (E.Griffith, 1928; Avery, MacLeod, McCarthy, 1944) Descoperit cu ajutorul a dou sue de bacterii Diplococcus pneumoniae Sua S (smouth) Cu capsul Colonii netede Virulent Sua R (rough) Fr capsul Colonii rogoase Avirulent Etapele transformrii la bacterii 1. Adsorbia ADN Fixarea segmentului de ADN de ctre bacteriile receptoare (posed receptori specifici) 2. Penetrarea ADN Ptrunderea extremitii ADN cu care s-a fixat n celula receptor 3. Eclipsa ADN Desfacerea ADN-ului de endonucleaz, fragmentarea i distrugerea unei catene de ctre nucleaz 4. Integrarea ADN Inseria ADN-ului monocatenar n ADN-ul endogen supus restriciei i funcionarea ca un replicon comun

Semnificaia transformrii Este caracteristic pentru bacteriile aceleiai specii (mai rar pentru specii diferite) Asigur transferul unei singure gene (mai rar 2 sau 3) Permite stabilirea frecvenei recombinrilor genetice i stabilirea ordinii genelor n cromozomul bacterian

Asigur variabilitatea combinativ a bacteriilor Conjugarea (J.Lederberg, E.L.Tatum, 1946) Descoperit cu ajutorul a dou tulpini auxotrofe de E.coli Sua Y10 Auxotrof pentru treonin, leucin, tiamin Prototrof pentru biotin, fenilalanin, cistein Sua Y24 Prototrof pentru treonin, leucin, tiamin Auxototrof pentru biotin, fenilalanin, cistein Posibilitatea unei mutaii triple de reversie este de 1 la 10 la puterea a 18-ea Etapele conjugrii la bacterii 1. Formarea perechilor de celule Celulele aparin sexelor diferite i posed structuri genetice specifice conjugoni (n plasmidele F) 2. Formarea canalului de conjugare 3. Transferul segmentului cromozomial De la celula donor la celula receptor, ce devine merozigot (parial diploid) 4. Integrarea segmentului n cromozomul bacterian femel 5. Segregarea merozigotului Se asigur apariia de forme recombinante Conjugarea la E. coli

Transducia (N.D.Zinder, J.Lederberg, 1952) Descoperit cu ajutorul fagului P22 i bacteria Salmonella Typhimurium Sua LA2 Phe Tri met his Sua LA22 phe tri Met His Transducia cu ajutorul bacteriofagilor

Tipuri de transducie dup materialul transferat Transducie specializat Se transfer doar un anumit fragment de ADN Transducie general Se transfer orice gen (!de obicei, o singur gen) dup comportamentul segmentului transferat Transducie complet Segmentul de ADN se include n cromozomul bacterian Transducie abortiv Segmentul de ADN nu se include n cromozomul bacterian

7.1. Genetica dezvoltrii


Etapele ontogenezei Controlul proceselor dezvoltrii Genele implicate n dezvoltare Anomaliile de dezvoltare Ontogeneza Totalitatea proceselor biochimice, morfologice i fiziologice de la formarea zigotei pn la pierea organismului Este determinat de un program genetic i se realizeaz n anumite condiii (externe i interne) Etapele principale ale ontogenezei Gametogeneza Fertilizarea Etapa prenatal Etapa postnatal Senescena, pierea Gametogeneza ovogeneza i spermatogeneza

Gameii

Fertilizarea Fuziunea seturilor haploide de cromozomi Timp de 24 ore Decurge n trompa uterin 100-150 spermatozoizi din 300 mln Spermatozoidul trece o serie de bariere Cumulus oophorus (proteina PH-20) Zona pelucid (proteina EBPs egg-biding-protein) Membrana plasmatic a ovulului (proteina PH-30 sau fertilina) Etapa prenatal Etap determinatoare n ontogenez Clivajul zigotei (36 ore), morula (72 ore), blastocistul (92 ore) Jonciunile celulare devin mai strnse; blastocistul n a 7-ea zi se fixeaz de peretele uterului Din ziua a 14-ea ncepe histogeneza Organogeneza i formarea organelor (sptmnile 3-8) Creterea embrionului Etape, procese Timpul de la fertilizare

Preembrionar - prima diviziune - implantarea - formarea a dou foie embrionare - formarea a trei foie embrionere Embrionar - organogeneza - formarea SNC, iniierea membrelor - diferenierea sexual Fetal - adausul la greutate datorit creterii

30 ore 5-6 zile 12 zile 19 zile 3-8 sptmni a 4 sptmn a 12 sptmn 28-38 sptmni

Etapa embrionar Controlul proceselor dezvoltrii Programul genetic al zigotei - se formeaz n cadrul fuziunii a dou genomuri paterne Efectul matern - ADN-ul mitocondrial - mARN, sintetizat n cadrul ovogenezei - repartizarea asimetric a citoplasmei n ovul Factorii externi - fizici, chimici, biologici Evenimentele celulare n cadrul dezvoltrii Proliferarea celular Diferenierea celular Interaciunea intracelular i intercelular Migraia celular Apoptoza Controlul proceselor dezvoltrii Se realizeaz prin molecule de semnalizare codificate de anumite gene Reprezint rezultatul unei strict coordonri a proceselor de: - cretere celular depinde de factorii de cretere extracelulari (PI-kinaze) - proliferare celular este determinat de mitogenii extracelulari (CDK cyclin dependent kinase) - difereniere limitarea proliferrii i specializarea sub aciunea mecanismelor extracelulare i intracelulare - moarte celular (apoptoz) reacia celulei la lipsa factorilor de supravieuire Apoptoza include urmtoarele componente: Efectori (caspaze) - activeaz ADN-aza care cliveaz ADN-ul celulei Adaptori - proteine ce se leag de precursorii caspazelor la nivelul regiunii denumit domeniu efector al morii celulare (DED) Reglatori - proteine care coordoneaz capacitatea de activare a efectorilor de ctre adaptori (AIF apoptosis indusing factor) din spaiul intermembranar mitocondrial

Proliferarea fr difereniere

Proliferarea cu difereniere

La baza diferenierii se afl activitatea difereniat a genelor

Gene implicate n dezvoltare Gene ce codific molecule de semnalizare i receptori Gene ce codific factorii de transcripie Gene ce codific proteine ale matricei extracelulare Gene ce codific molecule de semnalizare i receptorii acestora Familia de gene Funciile FGF (factorii de cretere fibroblastic) - 23 FGF i 4 receptori (FGFR) - glicoproteine Hedgehog (epi, arici) TGF (factorul de cretere transformant ) - Proteine homo- sau heteropolimeri migrarea celulelor creterea i diferenierea celular dezvoltarea osoas specificitatea axelor embrionare (dezvoltarea esuturilor) formarea plcii neurale modelarea membrilor stabilirea polaritii n cursul formrii membrelor specificarea axei dorso-ventrale (Wnt 3) formarea creierului, muchilor, gonadelor (Wnt 4), cordului Wnt 11), scheletului (Wnt 14) specificarea axelor embrionare (BMP4 proteine morfogenetice osoase) dezvoltarea oaselor

Wnt (wingless) - 16 la om - glicoproteine

Gene ce codific factori de transcripie

Familia de gene SOX - 20 gene

Funciile diferenierea gonadelor (SOX 9) defecte scheletice (SOX 9) dezvoltarea celulelor Schwan (SOX 10) reglarea expresiei genelor SRY (SOX 2) reglarea genelor implicate n realizarea diferitor ci de dezvoltare reglarea dezvoltrii embrionare determinarea poziiei celulelor n cadrul embrionului Acioneaz specific n timp i spaiu adezivitatea celular (PAX 6) diferenierea organelor (ochiului PAX 6) dezvoltarea creierului dezvoltarea scheletului reglarea genelor hipohizare

HOX - 39 gene

PAX - 9 gene EMX 2 gene MSX 2 gene Ptx

Gene ce codific proteine ale matricei extracelulare Asigur organizarea tuturor esuturilor i organelor Clusterii de gene HOX la om

Cluster

Nr. de gene 11 9 9 9

Localizarea

HOX 1 HOX 2 HOX 3 HOX 4

7p 17q 12q 2q

Mecanisme genetice n cadrul dezvoltrii omului Imprinting-ul genomic

Disomia unipatern Mixoploidia (mozaicism, himere) Selectarea celulelor n embriogenez Inactivarea cromozomului Imprintingul genomic inactivarea genei a unui din prini n gametogenez, n rezultat la ce n zigot se exprim doar alela unui printe

Mecanismul ? Metilarea bazelor ADN n genomul uman sunt prezente circa 30 de gene ce se supun imprintengului i care au o expresie monoalelic specific unui esut, ct i 3 clusteri ai genei: 7q32, 11p15, 15q(11.2-13) Disomie unipatern

Disomia unipatern Prezena n cariotip a cromozomilor omologi de aceiai origine patern Sunt rezultatul corectrii aneuploidiilor: - 1/3 dint trisomiile rectificate, - toate monosomiile rectificate, Genereaz modificri fenotipice, datorit imprintengului genomic: - cr. 7, 14 i15 de origine matern - cr. 11, 14 i 15 de origine patern Mixoploidii (mozaicism i himere)

Inactivarea cromozomului

Cauzele, mecanismele i tipurile malformaiilor congenitale Perioadele critice n dezvoltarea prenatal

Factorii genetici normali + condiiile favorabile ale mediului dezvoltarea normal Factorii genetici normali + condiiile nefavorabile ale mediului dereglarea dezvoltrii

Dereglri genetice (mutaii) +/- condiiile nefavorabile ale mediului dereglarea dezvoltrii Anomalii n dezvoltare

Defecte morfologice ale organului, a unui pri a organului sau pri a corpului ca rezultat al dereglrilor n dezvoltrii prenatale Sunt prezente la nou-nscui Se depisteaz n cadrul naterii sau mai trziu Sunt determinate de factorii genetici sau cei de mediu Etilogia anomaliilor congenitale Cunoaterea etologiei este semnificativ pentru consultarea genetic i profilaxia bolilor ereditare Cunoaterea etologiei este limitat de: - greutatea n determinarea factorului de inducie - eterogenitatea etiologic - diversitatea cauzelor ce pot determina aceeai anomalie - pentru 50% de anomalii factorii etiologici nu se cunosc Cauzele anomaliilor congenitale Genetice: - mutaiile genelor (7,5%) - mutaiilor cromozomilor (6%) - multifactoriale (20%) Negenetice: - efectul matern (3%) - infecii intrauterine (2%) - alcoolul, substane stupefiante, preparate medicamentoase (1,5%) Unele exemple de aciune a factorilor teratogeni Cauza Anomalia congenital Rujeola Toxoplasmoza Citomegalovirusul Alcoolul Streptomicina Tetraciclina Talilomid Microcefalia, cataracta, boli de cord, retinit Microcefalia/hidrocefalia, cataracta, surditate Microcefalia, surditate Anomalii faciale, boli de cord, dereglri ale SNC Surditate Hipoplazia smalului dentar Anomalii ale membrilor, boli de cord

Clasificarea anomaliilor congenitale Patogenetice: - malformaii - dizrupii - deformaii - displazii Clinice: - izolate - sistemice - multiple Primordii

embrionare anormale Primordii embrionare normale Primordii embrionare normale

Malformaii Deformaii

Dizrupii

Malformaia Defect morfologic al unui organ sau a unei pri a organului ca rezultat al dezvoltrii primordiilor anormale Deformaia Modificarea n forma, dimensiunile sau poziionarea organului ca rezultat al aciunii factorilor mecanici, ce acioneaz asupra dezvoltrii primordiilor embrionare normale Dizrupia Defect morfologic ca rezultat al ntrerupeii procesului normal n dezvoltarea organului Displazia Deplasarea i dezvoltarea celulelor n esuturile atipice

7.2. Genetica cancerului


Particularitile celulelor transformate (canceroase) Pierderea inhibiiei de contact Proliferarea nelimitat Reducerea ciclului celular Modificri la nivelul citoplasmei i nucleului Pierderea adezivitii fa de celulele vecine Geneza tumorilor secundare (metastaze) Pierderea capacitii diferenierii specifici Modificarea formei celulelor (globular) Creterea viabilitii Reducerea necesitii n factorii de cretere Scderea secreiei de fibronectin cu rol n adezivitatea celular, creterea i diferenierea celulelor Intensificarea schimbului transmembranar Creterea volumului nucleului pe contul multiplicrii pariale Creterea volumului citoplasmei pe contul creterii cantitii de ARN i a proteinelor Etc Originea cancerului 1. Cancerul este rezultatul mutaiilor somatice Hanzeman, 1890; Boveri, 1914; Burnet, 1957 Mutaiile somatice provoac modificri morfologice, fiziologice i biochimice, ce determin lipsa controlului proliferrii celulare i formarea tumorilor monoclonale Nu se motenete 2. Cancerul este cauzat de viruii oncogeni Raus, 1911; Galo, Himima 1980; Galo, 1985 Virui cu genom ARN (ribovirui) Virusul leucemiei tip I al celulelor T (HTLV-I) ce provoac leucemia celulelor T i limfome

Virusul imunodificienei umane (HIV-I sau HTLV-III) ce provoac cancer al celulelor endoteliale ale vaselor sangvine sau limfatice (sarcomul Kapoi) Virui cu genom ADN (adenovirui) Papilomavirusul ce poate determina carcinoame ale cervixului uterin Virusul hepatitei B ce este asociat cu cancerul ficatului Virusul Epstein Bar ce este asociat cu limfomul Burkitt (cancer al limfocitelor B) 3. Cancerul este o boal cu pedispoziie ereditar Forme autozomal dominante Retinoblastomul Forme autozomal recesive Xeroderma Forme poligenice Cancerul gastric Cancerul pulmonar Gene implicate n dezvoltarea cancerului Oncogene (ONC oncos - tumoare) Sunt active la etapele timpurii de dezvoltare, apoi se represeaz V ONC (oncogene virale) C ONC (oncogene celulare protooncogene)

Nu conin introni Nu sunt dirijate de un promotor viral activ Pot fi hibride (V-ONC X CONC) Conin frecvent mutaii punctiforme

Nu toate au componente virale

Oncogene V-ABL V-ERBB V-FES V-SRC V-SIS

Ribovirusul Virusul leucemiei murine Abelson

Gazda

ProtoLocalizarea oncogenele 9q34 7p13 15q25 20q12.13 22q12.3

oarece C-ABL C-ERBB C-FES C-SRC

Virusul eritroblastozei aviare Psri Virusul sarcomei la feline Virusul sarcomei Raus Virusul sarcomului semian Pisic Psri

Maimu C-SIS

V-MYC

Virusul mielocitomatozei MC29

Psri

C-MYC

8q24

Activarea protooncogenelor 1. Inseria viral stimuleaz funcionarea genei (virzsul Epstein-Bar (EBV) stimuleaz genele C-MYC ce provoac transformarea limfocitelor B n limfomul Burkitt) 2. Mutaiile cromozomiale 2.1. translocaii cromozomiale antreneaz protooncogenele particulare i formarea genelor hibride (peste 50 de translocaii: 9-2; 2-8; 8-14; 8-22 ...) 2.2. deleii ale cromozomilor 12 (limfome), 1 (neuroblastom), 6 (carcinomul glandei salivare); 2.3. duplicaii la nivelul cromozomilor 4, 5, 9, 12, 16 (adenoame tiroidiene); 1, 3, 6, 9, 10, 17 (neuroblastome) 3. Amplificarea genic multiplicarea genelor sub aciunea diferitor factori Antioncogenele (TSG tumor supresor gene) Sunt n stare activ (circa 50 de gene) Genele Localizarea Funciile p53 17p13 Factor transcripional Proteine inhibatoare a activitii unor gene inhibarea replicrii ADN-ului Controlul negativ al proliferrii celulare Inhibarea sintezei ciclin (C, D, E) chinazelor Controlul negativ al ciclului celular Controlul dezvoltrii rinichilor i gonadelor

MTS1 9p21 (supresoare de tumori multiple) Rb 13q14 (Retiniblastom) WT1 11p13 (Wilms toumor 1)

Factori implicai n cancerogenez Factori cancerigeni Radiaiile Fumul de igri Agenii chimici Virusuri Etc. Factori anticancerigeni Transplantul de celule etiteliale Enzime (glutationperoxidaza, glutationtransferaza) Vitamine, -carotenul Starea sntii Etc.

8.1.Ereditatea patologic la om
1. Schi istoric Hipocrate (461 374 .e.n.) Evidenierea frecvenei sporite a unor maladii i malformaii ereditare n unele familii Mopertiu (sec.XVIII) Alctuirea i analiza pedigriului unei familii cu polidactilie Presupunerea caracterului ereditar al acestei boli Adams (Tratat despre particularitile ereditare a unor boli la om) Presupune existena unor boli ce se transmit prin ereditate Observ c n cazul bolilor familiale soii sunt nrudii Indic c bolile ereditare se manifest nu numai la natere, dar i pe parcursul vieii Susine existena unei predispoziii ereditare Concluzioneaz c bolile cu aceeai manifestare clinic pot avea origine diferit (ereditar sau neereditar) Nase (1820) Depistarea particularitilor motenirii hemofiliei (femeile transmit boala, dar sufer brbaii) Garod (1908) Studierea alcaptonuriei i presupunerea naturii genetice a dereglrilor de metabolism Lejeune et al. (1959) Stabilirea naturii cromozomiale a sindromului Down ... Elaborarea bazelor geneticii clinice 2. Noiuni generale Boli ereditare Boli ce se transmit de la prini la copii cu excepia cazurilor letale sau de sterilitate Boli genetice Boli cauzate de dereglri ale aparatului ereditar Pot fi ereditare i neereditare Boli familiale Boli caracteristice unei familii Pot fi ereditare i neereditare Pot fi determinate de aciunea factorilor comuni: Deprinderi nocive comune Obinuine alimentare Noxe profesionale comune Condiii nocive de trai etc Boli congenitale Boli ce sunt evideniate la natere Pot fi ereditare i neereditare Cauzele apariiei: Anomaliile cromozomiale Unele boli infecioase n perioada sarcinii Unii factori hormonali Vrsta mamei Factorii mutageni fizici i / sau chimici Factorii nutriionali etc. Manifestarea bolilor congenitale neereditare

Consecinele constriciilor amniotice la pacientul analizat: Constricie la ncheietura minii stngi Lipsa unui deget de la picior Despictura buzei i a palatinului

Simbolurile pentru arborele genealogic

3. Clasificarea bolilor ereditare Sunt determinate de dereglrile n moleculele de ADN i variaz n dependen de: Origine Celule germinale se transmit descendenilor Celule somatice cancerul sau unele malformaii congenitale Natura mutaiilor Mutaii cromozomiale schimbri n structura cromozomilor translocaii, deleii, etc Mutaii genomice schimbri a numrului de cromozomi: monosomii, trisomii Mutaii genice schimbri la nivelul unei gene Categoriile bolilor genetice

Boli a genelor mutante cu efect pronunat Contribuie la povara genetic Erori de metabolism Motenire mendelian Boli cu cauzalitate multifactorial Bolile comune Aciunea factorilor de mediu Studiu pe gemeni monozigoi Boli cu dereglri cromozomiale Clasificarea bolilor ereditare Dup mecanismul genetic 1.Boli cauzate de mutaiile genice autozomale dominante - sunt caracteristice ambelor sexe - se exprim n fiecare generaie Brahidactilia Polidactilia Miopia Coree Huntington

2.Boli cauzate de mutaiile genice autozomale recesive - prinii pot fi normali - frecvena crete n cazul consangvinizrilor - dereglri de metabolism Anemia cu hematii falciforme Galactozimia Albinismul Fenilcetonuria Microcefalia Hidrocefalia

3.Boli cauzate de mutaiile genice X-lincate - absena motenirii tat fiu - motenirea criss cross - posibilitatea exprimrii bolii n stare hemizigot Hemofilia Daltonismul Distrofia muscular Diabetul zaharat

4.Boli cauzate de mutaiile genice Y-lincate - motenirea tat - fiu Hipertricoza 5.Boli cauzate de anomalii cromozomiale numerice autozomale Sindromul Down (21) Sindromul Edward (18)

Sindromul Patau (13) 6.Boli cauzate de anomalii cromozomiale numerice heterozomale Sindromul Turner (44 + XO) Sindromul Kleinfelter (44 + XXY) Trisomia X (44 + XXX) 7. Boli cauzate de anomalii cromozomiale structurale strigt de pisic (deleia braului scurt al cromozomului 5) Dup manifestare 1. Morfologice Polidactilia Brahidactilia Sindactilia Microcefalia Ancefalia 2. Fiziologice Hemofilia Hipertonia Hipotonia Modificri n activitatea nervoas superioar 3. Biochimice Boli de metabolism glucidic Boli de metabolism lipidic Boli de metabolism proteic (aminoacizi) Boli de metabolism mineral Dup momentul manifestrii n fenotip 1. Boli letale n timpul vieii prenatale Anomalii cromozomiale Ancefalia 2. Boli prezente la natere Malformaii congenitale Unele forme de surditate i orbire 3. Boli exprimate curnd dup natere Fenilcetonuria Galactozemia Amemiile 4. Boli exprimate n primul an de via Boala Tay Sachs Distrofia muscular 5. Boli exprimate n diferite perioade ale vieii Diabetul zaharat (0 -80 ani) Coreea Huntington (15 65 ani) Distrofia muscular facio-scapulo-hzmeral (2 45 ani) Dup sistemul afectat 1. Boli ale sistemului locomotor / muscular Distrofii musculare Sindromul Marfan 2. Boli ale sistemului digestiv Boala Wilson

Hiperbilirubinemiile 3. Boli ale aparatului vizual Miopia Cataracta Glaucomul Retinoblastomul 4. Boli ale sistemului cadriovascular Hipertensiunea Ateroscleroza Boala coronarian BOLILE CROMOZIOMIALE Autozomale: - Trisomia 21 (s.Dawn) - Trisomia 13 (s.Patau) - Trisomia 18 (s.Edwards) - Trisomia 8 (s.Warkany) Heterozomale (gonozomale): - Monosomia X (s.Turner) - Trisomia X - S.Klinefelter SINDROMUL DOWN SAU TRISOMIA 21 John Down 1866; Jerome Lejeune 1959 trisomia 21. Incidena 1:700 nn; Cariotipuri posibile: 47,XX,+21; 47,XY,+21; 46,XX / 47,XX,+21; 46,XY / 47,XY,+21; 46,XX,rob(21;21) 46,XY,rob(21;14); 46,XY, i (21q)

Semne clinice

hipotonie muscular, hiperlaxitate articular i hiporeflexie nervoas. dismorfie cranio-facial sugestiv. minile sunt scurte i late, clinodactilie deget V i, frecvent, pliu simian; inconstant, malformaii viscerale (defecte cardiace, atrezie duodenal, imperforaie anal). ntrziere dezvoltare psiho-motorie / RM (QI - variaz ntre 20 i 85). Sindromul Patau 47,XX (XY), +13 Microoftalmie Retard fizic i mintal Urechi deformate, surditate Criptorhism Pliu palmar transvers unic Uter divizat Triradius axial distal Hernie ombilical Defectul septului inimii Hidronefroza Inima n partea dreapt Anomalii ale unghiilor Rinichi polichistic Polidactilie Dublarea ureterelor Despictura buzei i Arc S-form pe talp n palatului regiunea halucelui Hipotelorism Segmentare exagerat a Defecte ale craniului nucleilor PMN Microcefalie, arinencefalie

Sindromul Edwards 47,XX (XY), +18 Dolicocefalie Gt sucit Arcuri pe 3 sau mai multe degete Pliu palmar transvers unic Stern scurt Lipsa unei artere ombilicale Rinichi n form de potcoav Hipertonie muscular Flexie dorsal a degetului mare

Fontanele mari Hipertelorism Urechi deformate Micro- i retrogtatie Anomalii de flexie a degetelor Defectul septului interventricular Diverticuli intestinali Anomalii multiple ale organelor genitale Retard fizic i mintal

SINDROAMELE CU ANOMALII ALE CROMOZOMILOR SEXUALI Anomaliile cromozomilor sexuali au o inciden de: 1 la 400 nn sex masculin (47,XXY; 47,XYY) 1 la 650 nn sex femenin (45,X; 47,XXX) Fenotipuri mai puin severe; se asociaz frecvent cu: ntrziere n dezvoltarea pubertar, disgenezii gonadice (amenoreea primar-secundar; azoospermia) sterilitate

Sindromul Turner: 45,X Singura monosomie viabil Incidena 1/2500 1/5000 fete nou-nscute Majoritatea eliminai prin avorturi spontane Nu coreleaz cu vrsta matern 80% - erori n MI la tat Indivizii cu X patern prezint un IQ mai mare dect cei cu X matern este o aneuploidie, caracterizat prin absena sau printr-un defect al unui cromozom X Semne clinice: Greutate i talie mic Prezint edeme limfatice ale membrelor care dispar dup primul i al doilea an de via Toracele lit Malformaii asociate cardiace ntrzierea maturizrii sexuale Infantilismul organelor genitale interne i externe Defecte ale inimii Malformatii renale si scheletale

Sindromul Klinefelter 47,XXY Incidena 1/1000 biei nou-nscui Originea crs X suplimentar 50% matern, 50% - patern 72% cauzate de nedisjuncie cromozomial n MI

Semne clinice Hipogonadism, azoospermie sau oligospermie Majoritatea indivizilor sunt sterili Terapia cu testosteron permite meninerea caracterelor secundare sexuale IQ normal sau redus

Sindromul Cri du chat 46,XX,5p- sau 46,XY,5p-

Semne clinice la nou-nscui: Plns monoton, asemntor cu iptul pisicilor Microcefalie Fa rotund Hipertelorism Urechi aezate jos Defecte morfologice: Defecte ale cordului Clivarea palatinului Anomalii renale Anomalii ale scheletului Scolioza Hernii Probleme ale deglutiiei Boli autozomal-dominante Frecvena nalt a afeciunii n familie Afectarea ambelor sexe n proporii egale Persoane bolnave n fiecare generaie Doi prini sntoi au ntotdeauna copii sntoi Doi prini bolnavi pot avea copii sntoi Ex.: acondrodisplazia, polidactilia, brahidactilia, s.Marfan, neurofibromatoza etc. Marfan Syndrome Marfan syndrome is a disorder of the connective tissues of the body, manifested principally by changes in the skeleton, eyes, and cardiovascular system prevalence is estimated to be 1 in 5000 70% to 85% of cases are familial and show autosomal dominant inheritance

the remainder are sporadic and arise from new mutations Boala Marfan Clinica 1. Cardiovascular dilatarea i anevrisme de aort valva mitrala floppy 2. scheletice pectus excavatum scolioza laxitate articulara Raportul dintre segmentul superior de segmentul inferior al corpului este de obicei 2 SD de mai jos medie de varsta, rasa, si sex arahnodactilie 3. ocular ectopia lentis Boli autozomal-recesive Frecvena mic a afeciunii n familie Creterea frecvenei anomaliei la consangvinizare Afectarea ambelor sexe n proporii egale Discontinuitatea pe vertical din prini sntoi copii bolnavi Doi prini bolnavi au ntotdeauna copii bolnavi Doi prini sntoi pot avea copii sntoi i bolnavi, fete i biei Ex.: boala Gaucher, fenilcetonuria, anemia HbS, albinismul oculo-cutanat, etc Transmiterea X-dominant Frecvena nalt a afeciunii n familie Femeile sunt afectate mai frecvent Tata bolnav are ntotdeauna fete bolnave Continuitate n transmiterea anomaliei caracterul dominant poate fi urmrit n fiecare generaie Ex.: rahitismul rezistent la vit. D, displazia smalului dentar, incontinena pigmentrii, etc Transmiterea Y-lincat (holandric) Genele sunt localizate pe cromosomul Y Anomalia poate fi transmis doar de tata Anomalia poate fi motenit doar de fii Continuitate n transmiterea anomaliei caracterul poate fi urmrit n fiecare generaie pe linie patern Ex.: hipertrihoza pavilionului urechii, ihtioza, membrane ntre degete FRECVENA BOLILOR MONOGENICE Denumirea bolii Frecvena Tipul de motenire Hipercolesterinemia familial Polichistoza renal Mucoviscedoza Neorofibromatoza 1:500 1:1000 AD AD

1:1600 1:3000 AR 1:4000 AD

Miopatia Duchenne-Backer Sindromul Marfan Fenilcetonuria

1:3000 1:5000 X-lincat, recisiv 1:10000 1:10000 AD AR

Bolile poligenice Sunt deteminate multifactorial; Se caracterizeaz prin agregare familial; Pot avea distribuie continu sau bimodal; Riscul de recuren depinde de severitatea bolii la ascendeni, de gradul de rudenie cu bolnavul, NR de rude afectate, coeficientul de heritabilitate; Ex.: bolile comune ale adultului; anomalii congenitale izolate; boala canceroas; retardul mental non-sindromic

BOLI CU PREDISPOZIIE EREDITAR Bolnavi, la 1000 oameni Displazia buzei i palatinului Stenoza pilorului Picior plat schizofrenia epilepsia 12 0,5 3 5

10 20 8 10

Psoriazis Astm bronic Boala hipertonic Boala coronarian

10 20 25 1000 2000 50 - 100

Concluzii: Patologia ereditar este foarte variat i include: - boli congenitale, - boli monogenice, - boli cromozomiale, - boli cu predispoziie genetic Prevenirea i tratamentul bolilor ereditare necesit cunoaterea profund a cauzelor i mecanismelor acestor boli Educaia genetic a populaiei i, n special, a tinerilor reprezint o problem extrem de actual i trebuie s fie abordat la diferite nivele.

INGINERIA GENIC
9.1. BAZELE INGINERIEI GENICE w Baza tehnico-material a ingineriei genice w w Etapele principale a ingineriei genice Ingineria genetic Manipularea cu genomul organismelor n vederea perfecionrii lor genetice Ex.: mutageneza experimental, hibridizarea

w Ingineria genic - Manipularea la nivelul moleculelor de ADN prin obinerea de molecule recombinante i transferul lor n alte organisme - Ex.: obinerea de hormoni, obinerea de organisme modificate genetic (OMG) Cnd a aprut ingineria genic? w 1972, P.Berg Obinerea primei molecule recombinante de ADN w 1944, A.Avery, C.McLeod, M.McCarty Descoperirea fenomenului de transformare Etapele principale n dezvoltarea ingineriei genice: w Descoperirea mecanismelor principale de transmitere a informaiei ereditare Transformaiei (Griffits, 1928; Avery, McLeod, McCarty, 1944) Sexduciei (Lederberg, Tatum, 1946) Transduciei (Tsinder, Lederberg, 1952) w Descoperirea structurii moleculei de ADN (Watson, Crick, 1953) w Descoperirea sistemului enzimatic (ann. 50-60) Restrictazele Ligazele Etapele principale n dezvoltarea ingineriei genice (continuare): w Descoperirea transcripiei inverse (G.Temin, S.Mizutani, D.Baltimor, 1970) w Descoperirea posibilitii sintezei artificiale a genelor (H.Corana, 1970-76) w Obinerea primei molecule recombinante de ADN (P.Berg, 1972) w Obinerea artificial a insulinei (1982) 2. Baza tehnico-material a ingineriei genice

Ingineria genic se bazeaz pe izolarea unor fragmente de ADN i clonarea lor n diferite sisteme vectoriale ce se replic autonom n celulele (organismele) gazd Baza tehnico-material include: w Sistemul enzimatic w Sistemul de transfer (vectorial) w Organismele gazd Enzimele (Grupele principale de restrictaze) w Endonucleaze - Pentru activitate necesit prezena n mediu de incubare ATP, S-adenozilmetionin, Mg2+ - Sunt instabile - Nu produc fragmente discrete w Endonucleaze site-specifice Pentru activitate necesit prezena doar a Mg2+ Sunt circa 500 Produc fragmente discrete, uor evideniate prin electroforez n agaroz sau poliacrilamid

w Grupa intermediar - Pentru activitate necesit prezena a Mg2+ i ATP - Produc fragmente discrete Proprietile restrictazelor w Pot tia molecula de ADN n fragmente discrete w Se izoleaz relativ uor n stare pur din mediu w Posibilitatea de a forma n rezultatul restriciei a marginilor lipicioase (nu toate restrictazele) w Posibilitatea restriciei succesivitilor nucleotidicesimilare cu restrictaze din diferite microorganisme (unele restrictaze) w Specificitatea de aciune nalt (taie molecula de ADN ntr-un anumit site de recogniie) Site-urile de restricie a unor restrictaze:

Exemple de restricie Recognition Site EcoR1 w Sma 1

Cleavage Products ---G ---CTTAA AATTC-G

---GAATTC-----CTTAAG---

STICKY ENDS ---CCCGGG-----GGGCCC-----CCC ---GGG GGG--CCC---

BLUNT ENDS w Situsurile de restricie conin 4 8 perechi de baze n lungime Denumirea enzimelor de restricie Denumirea restrictazelor provine de la denumirea bacteriilor de origine: w Ex.: EcoRI Vine de la E.coli, tulpina R I numrul (prima) enzimei izolate

w Ex.: HindIII Vine de la Haemophilus influenzae, tulpina Rd III numrul (a treia) enzimei izolate Cile de obinere a vectorilor de origine fagic w Prin inserii - Este prezent doar un site de restricie pentru restrictaz - Se pot clona fragmente de ADN cu o mas molecular mic

w Prin substituii - Sunt prezente dou sau mai multe situsuri de restricie - Se substituie segmentul propriu cu un segment de ADN necesar clonrii - Se pot clona fragmente de ADN cu o mas molecular mai mare Celulele gazd (cerine) w Capacitatea sporit de includere n cercetarea tiinific w Lipsa dezvoltrii proprietilor protectoare n afar de laborator w Prezena capacitii degradrii ADN-ului clonat n afar de laborator w Excluderea posibilitii transferului informaiei ereditare altor organisme w Excluderea fenomenului de poluare biologic a mediului nconjurtor n rezultatul manipulrilor genetice 3. Etapele ingineriei genice w 1. Izolarea i / sau sinteza de gene w 2. Clonarea genelor i obinerea moleculelor recombinante de ADN w 3. Transferul i expresia moleculelor recombinante de ADN n celulele (organismele) gazd 1. Obinerea de gene w 1.1. Izolarea de gene Hibridizarea ADN - ADN (Dj.Shapiro et al., 1969) hibridizarea ADN-ului fagilor i 80; izolarea regiunii lac-operonului; Hibridizarea ADN- ARN (Tomas, 1976) - complexul ADN ARN este mai stabil dect cel ADN ADN; Hibridizarea ARN- ADN (G.Temin, B.Mizutani, D.Baltimor, 1970) - utilizarea reverstranscriptazelor; - Fragmentarea ADN- ului (Maniatis et al., 1978) - se aplic i pentru ADN-ul celulelor eucariote; - presupune analiza fragmentelor obinute pe medii selective 1.2. Sinteza de gene - Din amestecul de dezoxinucleotidtrifosfai n prezena ADN polimerazei (A.Cornberg, M.Djulian, 1967) - obinerea materialului genetic infecionist a fagului X174; - Prin sintez chimic (H.Corana, 1970 - 1976) - sinteza genei tARN alaninice a drojdiilor (genetic neactiv); - sinteza genei tARN a tirozinei (genetic activ), constituit din promotor (52 nucleotide), regiunea de structur (126 nucleotide) i terminator (21 nucleotide); 2. Obinerea moleculelor recombinante de ADN w 1.1. metoda ligazic Utilizarea restrictazelor ce formeaz margini lipicioase Utilizarea ligazelor Pericolul dereglrii integralitii genelor; Nu toate restrictazele formeaz margini lipicioase; Numrul mic de molecule recombinante; Necesitatea selectrii complexe a moleculelor recombinante; w 1.2. metoda terminal Utilizarea endo- i exonucleazelor Alipirea artificial a marginilor lipicioase

Utilizarea n calitate de vector a oricrei plasmide Utilizarea fragmentelor de ADN complexe 3. Transferul i expresia moleculelor recombinante de ADN w Tipuri de transfer Transformarea n calitate de vectori sunt utilizate plasmidele; Transfecia n calitate de vectori sunt utilizai fagii specifici; Transgeneza n calitate de vectori sunt utilizai viruii nespecifici; w Direciile de transfer Procariot procariot Procariot eucariot Eucariot procariot Eucariot eucariot Mecanisme de protecie a informaiei genetice exogene w Metilarea ADN-ului (virusurile) w Transferul formei liniare de ADN n cea inelar (fagul ) w Blocarea sistemului de restricie a celulei gazd (fagul T3) w Aciunea restrictazelor Mecanisme de protecie a informaiei genetice endogene w Metilarea ADN-ului w Aciunea restrictazelor speciice w Aciunea vecintii epigenetice w Aciunea nespecific a nucleazelor celulare w Proprietile protectoare ale membranelor w Aciunea proteinelor histonice w Aciunea proteinelor acide ale cromatinei w Aciunea interferonului 9.2. APLICAII ALE INGINERIEI GENICE 1.Obinerea de hormoni n Cile de obinere a hormonilor peptidici: Extragerea din celulele animale Sinteza chimic Sinteza n cadrul ingineriei genice Insulina n Hormon al pancreasului n Peste 60 milioane de bolnavi de diabetul zaharat n 2 catene cu 51 de aminoacizi (21 n catena A; 30 n catena B) n n celule se afl n form de proinsulin (catena C cu 35 de aminoacizi) n La clonarea ADN-ului se utilizeaz i gene reglatoare (gena -galactozidazei) Obinerea insulinei

Insulina reprezint primul hormon artificial obinut pe calea ingineriei genice aplicat n practica medical dup testrile preclinice i clinice Obinerea de interferoni n -interferoni Se formeaz la aciunea virusurilor asupra leucocitelor Sunt compui din mai multe proteine Se codific de circa 20 de gene Nu conin resturi de zahr n -interferoni Se formeaz la aciunea virusurilor asupra fibroflastelor Este compus dintr-o singur protein Se codific de o singur gen Sunt glicozilai n -interferoni Se formeaz la aciunea virusurilor asupra limfocitelor Este compus dintr-o singur protein Se codific de o singur gen Sunt glicozilai Cile de obinere de interferoni n Din snge Din 1l de snge - 1g de interferon n Prin tehnologiile ingineriei genice Din 1l de suspensie de E.coli 5 mg de interferon (de 5000 de ori mai mult) 2.Transformarea genetic a plantelor

Transformarea genetic a plantelor

4. Beneficii i riscuri Contra n Temerea oamenilor n Producia de noi boli incontrolabile n Animale ciudate (himere) n Efecte adverse asupra mediului pe termen lung Domenii de aplicare n Rezistena la erbicide n Rezistena la boli n Rezistena la temperaturi n Rezistena la srturare n Rezistena la toxine n Transferul de embrioni i fertilizarea artificial

n Clonarea de esuturi i organe n Tratarea bolilor ereditare n Obinerea de hormoni 10.2. Ameliorarea plantelor Plante 350,000 specii la nivel mondial < 300 utilizate n alimentaie ~ 150 importante pentru comerul mondial 15 surse alimentare majore gru, porumb, orez, orz, sorg, soia, fasole, arahide, cartofi, manioc (nuc de cocos), banane, trestie de zahr, sfecl de zahr Ameliorarea plantelor Identificarea/generarea de variaii Coleiile de germplasm Inducerea de variaii Hibridizarea/recombinarea Selectarea caracterelor valoroase Depinde de tipul culturii i sarcinile propuse Evaluarea rezultatelor Variaii Coleciile de germplasm Genele primare (ale aceleiai specii) Plantele de elit Soiuri locale (culturile primitive) Plantele slbatice (spontane) Genele secundare Plantele cultivate, soiurile locale, obinute n rezultatul ncrucirilor Variaii Inducerea de variaiuni Poliploidia Tratarea plantelor cu substane chimice (colhicina) Mutaiile Rata natural ~1 per milion de diviziuni celulare Sporirea ratei cu factorii fizici i/sau chimici Biotehnologia/Ingineria genetic Abilitatea transferului orizontal de gene Variaii Hibridizarea i Recombinarea Autopolenizarea - vs. Polenizarea ncruciat Autopolenizarea gru i soia Utilizarea polenului i oosferelor ale aceleiai plante Puine semine pentru o polenizare (3-15) Polenizarea ncruciat porumb i fructe Polenul unei plante fertilizeaz oosfera altei plante Multe semine pentru o polenizare (300-400) Selecia Plantele cu autopolenizare Selecia n mas numeroase selecii

Linii pure selectarea separat Plante cu polenizare ncruciat Selecia n mas Sib-selecia parial i complet hibrizi Selecia recurent linii intermediare Backcross Marker-selecie Selecie recurent Pentru reconstruirea formelor parentale / dezvoltarea populaiilor Genereaz familii Testul de performa Recombinarea n cadrul familiei pentru finalizarea unui ciclu de selecie Cderea tulpinii un exemplu de selecie recurent (periodic) Evaluarea Vartiaiile fenotipice sunt determinate de: Mediu = fertilitatea solului, ap, factorii biotici i abiotici de stress Genotip** = genele responsabile de caracter ** aceasta este aceea ce amelioratorii doresc s valorifice Investigaiile in de asigurarea stabilitii condiiilor de mediu