Efecto del PH y Temperatura sobre una reaccin enzimtica Objetivos: Medir la Actividad enzimtica de BGlucosidasa con respecto a temperaturas

as diferentes y Ph diferentes. Calcular la velocidad de reaccin enzimtica Medir la temperatura optima para la enzima. Medir el PH optimo de la enzima Hacer curvas de calibrado Realizar grficos con ecuacin de la recta, velocidad V/s Temperatura, velocidad V/s Ph. Resultados: Tabla de datos Tubos 1 2 4 5 6 7 M=8.81x; B=0.1014 A=8.81x + 0.1014 Para calcular la concentracin de [PNF] : Vinicial*Cinicial=Vfinal*Cfinal (V=velocidad , C=concentracin) Ejemplo de calculo [PNF] [PNF]=(0.1*0.2)/3 =0.0066 [PNF](nm) 0.00666 0.0133 0.02 0.0266 0.0333 0.04 Absorvancia (405nm) 0.126 0.23 0.3 0.359 0.390 0.430

*Para calcular el coef de extincin (mM) A=* l*C =8.81 (1/mM*cm) Efectos de la temperatura Tabla de datos TUBO 1 2 3 4 T (C) 16 40 60 100 A(405nm) 0.474 0.482 0.502 0.401 Control 0.009 0.006 0.007 0.000

Calculo de la velocidad enzimtica: V(UI/ml)= (A/*l )*(1/t)*(V/v)*Fd A= Absorvancia del tubo menos la absorvancia del control *l =Pendiente de la curva de calibrado (8.60) t = Tiempo (5 Min) V= volumen del ensayo (E+S) V= volumen de enzima (0.1 ml) Fd = factor dilucion del ensayo =volumen total/volumen de ensayo Fd=3ml/0.9+0.1=3 Calculo de tubo 1 (ejemplo): V(UI/ml )=(0.474(0.009))/5.23*(1/5min)*(1ml/0.1ml)*3 =0.554 (UI) Tabla de datos Tubo 1 2 3 4 T (C) 16 40 60* 100 V(UI/ml) 0.554 0.560 0.584 * 0.460

Efectos del PH sobre la reaccin enzimtica Tabla de datos

TUBO B 1 2 3 4

PH 5.0 4.0 5.0 6.0 7.0

A (405 nm) 0.243 0.482 0.95 0.288

Control 0.1 0.0 0.01 0.003

Clculos de la velocidad de reaccin enzimtica: Calculo de tubo 1 (ejemplo): V(UI/ml )=(0.2430.1)/5.23*(1/5min)*(0.1+0.9ml/0.1ml)*3 =0.164 (UI) Tabla de datos TUBO 1 2 3 4 PH 4.0 5.0 6.0 7.0 V (UI/Ml) 0.164 0.553 1.08 0.327