UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR FACULTAD MULTIDISCIPLINARIA PARACENTRAL DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AGRONOMICAS GENETICA

SILENCIAMIENTO GENICO LIC. NELSUS ARMANDO LOPEZ TURCIOS BR. EDWIN OSWALDO RODRIGUEZ GALLEGOS SEBASTIAN RIVAS CASTRO FRANCISCO JAVIER MARTINEZ ERICK BALMORE MEDRANO CRUZ

SAN VICENTE, 25 JUNIO DE 2013

ndice
I. Introduccin................................................................................................................................... 3 II. Objetivos ........................................................................................................................................ 4 III. Revisin Literaria ........................................................................................................................ 5 3.1. Silenciamiento Gnico ......................................................................................................... 5 3.2. Mecanismo del silenciamiento ............................................................................................ 6 3.3. Molculas Involucradas en el Silenciamiento Gnico ..................................................... 7 3.3.1. Heterocromatina ............................................................................................................ 7 3.3.2. Dicer ................................................................................................................................ 7 3.3.3. RNA de interferencia pequeo (siRNA, por sus siglas en ingles). ........................ 8 3.3.4. MicroARNs de Interferencia (miARNs, por sus siglas en ingles)........................... 8 3.3.5. Complejo de silenciamiento inducido por RNA (RISC) ........................................... 9 3.4. Silenciamiento Post-Transcripcional y Transcripcional .................................................. 9 3.4.1. Silenciamiento Post-Transcripcional ........................................................................ 10 3.4.2. Silenciamiento Transcripcional.................................................................................. 10 3.5. Silenciamiento Gnico en Animales ................................................................................ 10 3.6. Silenciamiento gnico en plantas..................................................................................... 11 3.7. Aplicaciones......................................................................................................................... 12 3.7.1. RNAi: en busca de nuevas terapias antivirales ...................................................... 13 3.7.2. Tecnologa RNAi: Cncer .......................................................................................... 13 3.7.3. Mejoramiento en plantas ............................................................................................ 13 IV. Conclusiones ............................................................................................................................. 15 V. Bibliografas. ............................................................................................................................... 16

I. Introduccin En los ltimos aos se ha descrito un fenmeno de regulacin de la expresin gnica en eucariotas genricamente conocido como silenciamiento por ARN o ribosilenciamiento, basado en la degradacin especifica de secuencia RNA codificante, bloqueando de este modo la funcionalidad del gen correspondiente. (Atencio, 2005) El silenciamiento gnico es un mecanismo de vigilancia que est presente en todos los organismos eucariotas (excepto en la levadura Saccharomyces cerevisiae) y participa en la defensa contra virus y viroides, protege el genoma de transposones y regula la expresin gnica. (Martnez & Pea, 2007) Ahora en dia gracias a los avances en los conocimientos tericos sobre el mecanismo de interferencia de RNA se est dando lugar, cada vez ms, a la posibilidad de utilizar la tecnologa RNAi para solucionar distintos problemas (Ferrero et al, 2008). El ARNi ha emergido rpidamente como una herramienta para identificar funciones de genes y terapia gnica (Lpez et al, 2007). La tecnologa del ARNi facilita el anlisis de vas de sealizacin involucradas en el desarrollo de la obesidad, resistencia a insulina y diabetes, adems, de la identificacin y validacin de nuevos blancos para la intervencin teraputica del SIDA o el cncer. (Nakamura et al 2009) En general el silenciamiento gnico va interferencia de ARN (ARNi) mediada por pequeos ARNs de interferencia (siARNs), es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas de los ltimos aos en muchas reas. (Lpez et, al 2009).

II. Objetivos Conocer el mecanismo del silenciamiento gnico y su papel en los organismo eucariotas. Estudiar el funcionamiento del mecanismo de silenciamiento gnico post-

transcripcional en la defensa de plantas.

III. Revisin Literaria 3.1. Silenciamiento Gnico La principal funcin que siempre se le haba reconocido al RNA es la de simples mensajeros encargados de transmitir la informacin gentica del ncleo a los ribosomas, para efectuar la sntesis de protenas (Llibre, 2008), Ahora uno de los avances ms importantes en la biologa de las ltimas dcadas ha sido el descubrimiento de molculas de RNA que regulan la expresin de genes (Moreno & Muoz, Sf.). El silenciamiento por RNA es un mecanismo altamente conservado en la naturaleza en el que molculas de RNA de doble cadena (dsRNA) regulan la expresin de genes (Lpez et al, 2007). Los primeros indicios de la existencia de mecanismos de silenciamiento gnico se obtuvieron a principios de los aos 90, a partir de estudios con plantas transgnicas en las que se trataba de sobre expresar un gen introduciendo copias extra mediante transformacin gnica (Rodrguez, 2007). En muchos de estos casos los resultados obtenidos fueron contrarios a lo esperado: en lugar de una mayor expresin del producto gnico, se produca una anulacin de su expresin, provocada por una degradacin especfica de los RNA mensajeros (Barajas et al, Sf.). Despus de esta observacin inicial, se encontr este fenmeno en D. melanogaster, Neurospora crassa, C. elegans asignndole diferentes nombres a lo que se conoce hoy en da como silenciamiento gnico (Correa et al, 2007). El silenciamiento gnico es un mecanismo presente en la mayora de los organismos eucariotas para controlar la expresin de genes endgenos y exgenos (Martnez & Pea, 2007). Este mecanismo desempea un papel decisivo en la diferenciacin celular, en la regulacin del desarrollo y en la defensa contra genes forneos y elementos transponibles (Barajas, 2005). Puede ocurrir tanto en el ncleo como en el citoplasma y regula la transcripcin y la traduccin de determinados genes adems participa en la defensa contra virus y viroides, protege el genoma de transposones (Martnez & Pea, 2007); Por eso se cree que el silenciamiento gnico forma parte de un sistema de defensa ancestral que resguarda a algunos organismos de la invasin de cidos nucleicos infecciosos (Bey, 2007). Se denomina silenciamiento gnico postranscripcional (PTGS) en plantas, represin
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(quelling) en hongos, o interferencia por ARN (ARNi) en animales superiores e inferiores (Atencio, 2005). Las molculas efectoras del silenciamiento gnico son pequeas molculas de RNA (sRNAs) de 21 a 30 nt. (Renovell, 2010) Hay tres tipos de sRNAs bien caracterizados que son los miRNAs (microRNAs), los siRNAs (small interfering RNAs) y los piRNAs (piwiRNAs) aunque estos ltimos slo estn presentes en animales. (Sanguinetti, 2011) Se diferencian entre s por su mecanismo de

biognesis ya que cada clase de sRNAs tiene distintos tipos de transcritos primarios o precursores. (Renovell, 2010) La represin de la expresin de los genes mediante el silenciamiento gnico puede darse a dos niveles: silenciamiento gnico transcripcional (TGS), y silenciamiento gnico postranscripcional (PTGS). (Barajas, 2005) 3.2. Mecanismo del silenciamiento El silenciamiento gnico mediado por RNA se desencadena a partir de RNAs bicatenarios (dsRNAs) o monocatenarios (ssRNAs) muy estructurados que pueden originarse a partir de la transcripcin en el ncleo, durante las infecciones virales o por la accin de RNA polimerasas dependientes de RNA (RNAdependent RNA polymerase, RDR) que lo sintetizan a partir de ssRNA (Renovell, 2010), luego la enzima DICER, del tipo ARNasa-III, procesa el ARN de doble cadena exgeno o endgeno en piezas de pequeos ARNs interferentes (Chvez & Ortiz, 2011). Estos siRNAs son transferidos a otro complejo enzimtico, denominado complejo de silenciamiento inducido por RNA (RISC), (Barajas, 2005). El RISC contiene una helicasa, la cual se encarga de separar las dos hebras del siARN (Atencio, 2005). Durante este paso, el RISC se queda unido a la hebra antisentido del siARN (Lpez et al, 2007). La que tiene sentido se une a una protena llamada Argonauta, que la separa del complejo y la entrega al proceso de degradacin. (Llibre, 2008). Una vez que el RISC se queda con la hebra sencilla antisentido, localiza un ARNm que tiene una secuencia complementaria a esta y se le une (Atencio, 2005). Una protena del complejo homloga a Dicer

(denominada recientemente Dicer2) con actividad de nucleasa se encarga de

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cortar el ARNm complementario a la secuencia del siARN, al degradarse el ARNm existente en la clula no se producir nueva protena, resultando en la deplecin de esa protena en particular (Llibre, 2008). 3.3. Molculas Involucradas en el Silenciamiento Gnico Los componentes moleculares del silenciamiento poseen caractersticas dismiles que les permiten actuar a diversos niveles en una amplia gama de procesos celulares, garantizando su ubicuidad espacial y temporal. La precisin de este mecanismo est justificada por la variedad de funciones que desempean sus componentes, entre las que estn el reconocimiento de genes exgenos y endgenos potencialmente dainos para la integridad celular, la actividad RNAsa guiada por la complementariedad de cidos nucleicos y la actividad

metiltransferasa que media la inactivacin de determinadas zonas en el cromosoma (Martnez & Pea, 2007). 3.3.1. Heterocromatina Una de las funciones del silenciamiento mediado por RNA es el control de la actividad de elementos transponibles a travs de la formacin de la heterocromatina (Barajas, 2005). Los elementos transponibles, transposones y retrotransposones, son secuencias de DNA muy abundantes en el genoma de eucariotas que tienen la capacidad de moverse de un punto a otro del genoma (Dominguez et al,2012). La actividad de estos elementos implica la posibilidad de que se produzcan mutaciones o reorganizaciones perniciosas del genoma que pueden ser controladas a travs de la formacin de la heterocromatina. (Renovell, 2010) 3.3.2. Dicer Dicer es una protena que presenta su secuencia primaria relativamente conservada, presente en casi todos los organismos eucariotas, incluidos Schizosaccharomyces pombe, hongos, plantas y animales. La variabilidad observada entre los organismos se asocia principalmente con la presencia o ausencia del dominio PAZ, siendo los dominios mas conservados los dos dominios catalticos RNasa III. (Sanguinetti, 2011) Esta ribonucleasa fragmenta el dsARN en porciones de 21-25 pares de nucletidos de longitud, los denominados siARN o
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ARN interferentes pequeos. (Llibre, 2008) Esta enzima tiene cuatro dominios particulares: un dominio helicasa, otro de unin a dsRNA, motivos RNAsa III repetidos en tndem y un dominio similar al de la familia proteica Argonauta (Ago), de actividad endonucleasa; aparentemente, el clivaje del dsRNA est catalizado por los dominios RNAsa III. (Ferrero et al, 2008) Organismos como las plantas y Drosophila poseen varios tipos de Dicer; Drosophila posee dos tipos de Dicer, Dcr1 que cliva miARNs y Dcr-2 que se especializa en el clivaje de siARNs, en el caso de los mamferos y C. elegans, estos tienen una nica Dicer que cataliza tanto a los miARN como a los siARNs. (Sanguinetti, 2011) 3.3.3. RNA de interferencia pequeo (siRNA, por sus siglas en ingles). Estas molculas tienen un tamao de 21 a 25 nucletidos y son producidas a partir de precursores de RNA de doble cadena que pueden variar de tamao y origen. (Lpez et al, 2007) Estos precursores son procesados por miembros de la familia de enzimas que degradan RNA, conocidas como la familia de la RNAsa tipo III. (Atencio, 2005) En particular, la enzima que degrada los precursores de dsRNA hasta siRNA se conoce como Dicer (Chvez & Ortiz, 2011). Los siRNA resultantes son incorporados a un complejo denominado siRISC (RNA-induced silencing complex) (Lpez et al, 2007). Dentro del mecanismo de silenciamiento gnico el componente ms importante es el ARN de pequeo tamao, que le permite al resto de la maquinaria (a travs del paramiento de bases) llevar a cabo el silenciamiento de genes especficos a varios niveles de la expresin gnica. Estos ARN de pequeo tamao se clasifican en micro RNA (miRNA), pequeos ARN de interferencia (siRNA) y otros que tienen un papel menos importante en los organismos en que se han descubierto. (Martnez & Pea, 2007) 3.3.4. MicroARNs de Interferencia (miARNs, por sus siglas en ingles). Los microARNs son fragmentos de ARN simple hebra de aproximadamente 22 nt, son generados a partir de transcritos endgenos, pudiendo adoptar estructuras secundarias y llevan a cabo su funcin unindose entre otras, a protenas de la subfamilia Argonauta (Sanguinetti, 2011). Estos se producen en el ncleo de las clulas y son sintetizados como precursores en el ncleo (denominados microARNs primarios), luego de un procesamiento nuclear salen al citoplasma a
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travs de los poros nucleares (Llibre, 2008). Ya en el citoplasma, el pre-microRNA es cortado hasta adquirir la estructura del microRNA maduro; es decir, una molcula de dsRNA lineal de entre 21 y 24 nucletidos en donde de los extremos 5 sobresalen dos nucletidos (Lpez et al, 2007). Los microRNA maduros se incorporan a un complejo ribonucleoprotenico (miRNP o miRISC) que es similar, y posiblemente idntico, al siRISC (Llibre, 2008). Una vez que estas molculas de RNA se encuentran ensambladas en el miRISC, el complejo dirige el silenciamiento gentico. (Lpez et al, 2007) 3.3.5. Complejo de silenciamiento inducido por RNA (RISC) Los siRNA reclutan protenas con las que forman el complejo ribonucleoproteico RISC. (Ferrero et al, 2008) Estas protenas clivan y finalmente permiten la degradacin del mRNA blanco. (Atencio, 2005) El complejo primero media el desenrollamiento y luego la desnaturalizacin de los dplex siRNA y as permite que la cadena antisentido lo dirija hacia el mRNA de secuencia homloga (Chvez & Ortiz, 2011). Este reconocimiento ocurre por apareamiento complementario de bases. (Ferrero et al, 2008) 3.4. Silenciamiento Post-Transcripcional y Transcripcional Existe una clasificacin que establece dos grandes categoras, el Silenciamiento Gnico Post Transcripcional (en ingls, Post-Transcriptional Gene Silencing o PTGS) es un mecanismo que implica la degradacin de un determinado ARN mensajero. (del Vas et al, Sf.) La destruccin de este ARNm impide su normal traduccin y consecuentemente no se sintetiza la protena correspondiente (Bey, 2007), en cambio el Silenciamiento Gnico Transcripcional (TGS, en ingls Transcriptional Gene Silencing), ocurre en el ncleo de la clula

(PorqueBiotecnologia, Sf.). Mediante el TGS se inhibe la sntesis de ARNm, es decir, no ocurre la transcripcin. (del Vas et al, Sf.) En este caso, los genes estn silenciados por modificaciones a nivel de ADN, que implican su metilacin (adicin de un grupo metilo -CH3 a una molcula) o remodelamiento. (PorqueBiotecnologia, Sf.)

3.4.1. Silenciamiento Post-Transcripcional El PTGS es un mecanismo descrito en plantas y mediante el cual la maquinaria celular desencadena la degradacin de un ARNm (Chvez & Ortiz, 2011). Se dice que esta degradacin es especfica de secuencia, ya que slo sern degradadas las molculas de ARNm que contengan una secuencia en particular, y no otros. (Bey, 2007) Este mecanismo de degradacin de ARN especfico de secuencia evolucion como un mecanismo de defensa antiviral en plantas. (del Vas et al, Sf.) Adems de jugar un papel como defensa natural frente a virus, el PTGS puede usarse artificialmente como herramienta biotecnolgica para generar resistencia a virus en plantas, mediante la introduccin de transgenes u otras molculas inductoras de PTGS frente al virus. (Barajas, 2005) 3.4.2. Silenciamiento Transcripcional El TGS, al igual que PTGS est basado en el reconocimiento de secuencias de cidos nucleicos, pero a diferencia de este ltimo, a nivel transcripcional, por lo que los transcriptos no son formados (Martnez & Pea, 2007). La interaccin ADN-ARN, especficamente ADN-siRNA, dirige una serie de eventos que regulan la metilacin tanto de ADN como de algunas histonas asociadas a este, promoviendo el remodelado de la cromatina (del Vas et al, Sf.). Existen tres mecanismos de TGS en el ncleo: la metilacin de ADN en plantas dirigida por ARN, el ensamblaje de heterocromatina en levaduras, animales y plantas mediada por interferencia de RNA (RNAi) y la eliminacin de ADN en protozoos. (Martnez & Pea, 2007) Las primeras investigaciones en el rea proponan que el TGS y el PTGS eran fenmenos independientes sin embargo, se encontraron ms tarde evidencias en algunos virus y transgenes que inducan ambos procesos, sugiriendo que se trata de dos mecanismos alternativos pero no excluyentes de regulacin de la expresin gnica. (PorqueBiotecnologia, Sf.) 3.5. Silenciamiento Gnico en Animales Recientemente se descubri que el ARN de doble cadena es un inhibidor potente y especfico de la transcripcin gnica en el nematodo Caenorhabditis elegans (Sanguinetti, 2011). Se han reportado resultados similares en especies como
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Drosophila melanogaster, planaria, pez cebra, entre otras. (Estrada et al, 2007) Algunos experimentos realizados en vertebrados, a diferencia de los invertebrados, la introduccin de dsRNA largos en clulas somticas de mamferos induce la activacin de la respuesta anti-viral mediada por la produccin de interfern (IFN), la cual produce la inhibicin general de la traduccin y la apoptosis celular. (Correa et al, 2007) La produccin de IFN activa la expresin de varios genes, incluyendo la expresin de la protena-cinasa dependiente de RNA (PKR) la PKR reconoce dsRNAs y a continuacin fosforila e inactiva al factor de iniciacin 2 (eIF2-), inhibiendo as la traduccin del mRNA de forma generalizada. (Ortiz, 2009) Sin embargo ms tarde, el grupo de Tom Tuschl describi que cuando se utilizan directamente los siRNA, es posible inducir el proceso de interferencia en clulas de mamfero sin que despierte la respuesta que conduce a la muerte celular. (Lpez et al, 2007) Aunque inicialmente esta tecnologa se ha aplicado a estudios en cultivos celulares, recientemente se han desarrollado algunos modelos de ratones transgnicos KO para genes determinados, mediante la expresin de un siRNA especfico. (Aguirre, Sf.) En camarones, especie de gran importancia econmica, y con la cual se trabaja en varios laboratorios en el mundo para el estudio de los mecanismos moleculares que regulan su crecimiento, no se ha reportado silenciamiento gnico mediado por ARNdc, en estos organismos acuticos no se ha demostrado hasta el momento la habilidad de ARNdc para inducir silenciamiento gnico en estadio adulto. Su funcionalidad sera de gran utilidad para comprender la regulacin gnica en estos animales y en un futuro lograr tambin una posible aplicacin prctica. (Estrada et al, 2007) 3.6. Silenciamiento gnico en plantas. El mecanismo natural de defensa de las plantas conocido como silenciamiento gnico postranscripcional (PTGS), es mediado por pequeas molculas de ARN que participan en una interaccin de manera especfica de secuencia para inhibir la expresin gnica por medio del silenciamiento del ARN (Chvez & Ortiz, 2011). Las plantas han desarrollado este mecanismo que sirve de defensa degradando el RNA viral. (Atencio, 2005) Sin embargo, muchos virus son capaces de sintetizar
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protenas que inhiben este mecanismo a distintos niveles, disminuyendo, por tanto, la defensa del husped frente a la infeccin viral. (Renovell, 2010) Los virus son tanto los inductores como el blanco del PTGS, pero los virus no son pasivos frente a estas defensas vegetales, y han evolucionado protenas que pueden actuar como supresores del PTGS (Chvez & Ortiz, 2011). Se sabe que la mayora de virus que infectan plantas tienen genomas de ARN, los cuales son fcilmente reconocidos por la maquinaria de silenciamiento de ARN de la planta (Renovell, 2010). En consecuencia, los virus vegetales han sido forzados a

desarrollar respuestas contra el silenciamiento de ARN con el propsito de supervivir y replicarse en el hospedero (Chvez & Ortiz, 2011). El mecanismo de contra ataque se da con protenas especficas codificadas por el virus con funciones alternas, como por ejemplo la protena del componente ayudador (HCPro) de potyvirus, que interfieren con el sistema de defensa de la planta en los diferentes pasos de la ruta del PTGS (Renovell, 2010). De manera colectiva, estas protenas se conocen como supresoras del silenciamiento porque pueden interferir de manera efectiva con el ARN silenciador (Chvez & Ortiz, 2011).

En las plantas, la respuesta del silenciamiento gnico no se limita a las clulas donde se inicia sino que es capaz de propagarse clula clula a travs de los plasmodesmos y a larga distancia por el sistema vascular mediante el movimiento de los siRNAs de 21 nt (Bey, 2007). Cuando estos siRNAs penetran en las nuevas clulas, pueden inducir el silenciamiento mediante su incorporacin al complejo RISC o pueden servir de cebadores para la sntesis de nuevos dsRNAs que daran lugar a siRNAs secundarios. (Renovell, 2010) 3.7. Aplicaciones El avance en los conocimientos tericos sobre el mecanismo de interferencia de RNA est dando lugar, cada vez ms, a la posibilidad de utilizar la tecnologa RNAi para solucionar distintos problemas (Lpez et al, 2007). Por lo tanto, dada la gran cantidad de aplicaciones, solo se describirn aquellas que fueron consideradas ms relevantes. (Ferrero et al, 2008)

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3.7.1. RNAi: en busca de nuevas terapias antivirales En el caso de los virus, la lista de ejemplos en los que se ha utilizado la interferencia es amplia y crece continuamente (Rodrguez, 2007). Se ha demostrado que es posible reducir la replicacin de muchos de estos virus en la clula utilizando siRNA dirigidos contra el genoma viral. El uso de la interferencia de RNA para combatir el cncer o la infeccin de virus como el de la inmunodeficiencia humana (VIH) o el de la hepatitis C (VHC) depender de dos elementos: El primero es elegir los blancos adecuados, y el segundo el direccionamiento e introduccin del mediador de la interferencia (siRNA, shRNA o microRNA) a las clulas blanco adecuadas (Lpez et al, 2007). 3.7.2. Tecnologa RNAi: Cncer Existe gran inters en utilizar la tecnologa del RNAi en el tratamiento de tumores, la evidencia indica que muchos miRNAs estn altamente expresados en tejidos diferenciados, pero su expresin est reducida en tumores. Se ha sugerido que si los miRNAs contribuyen al cncer, la supresin de los mismos puede servir como terapia antitumoral (Rodrguez, 2007). Por ejemplo, podemos mencionar los mRNA que codifican a los inhibidores de apoptosis, la telomerasa, los receptores de factores de crecimiento y algunas molculas sealizadoras, por otro lado,

tambin se puede lograr una mejor susceptibilidad de los tumores a frmacos, suprimiendo mediante la tecnologa de RNAi los genes encargados de otorgar posibles resistencias. (Ferrero et al, 2008) El primer oncogen en ser inhibido por ARNi fue K-Ras en el que se observ una inhibicin del crecimiento tumoral en ratones desnudos atmicos (Rodrguez, 2007). Despus de ste, sigui una gran lista de oncogenes disminuidos por ARNi en diversos modelos, los cuales ya empiezan a ser probados in vivo con el objeto de encontrar mejores mtodos para infectar clulas blanco, evitar efectos secundarios y los efectos off-target. (Nakamura et al, 2009) 3.7.3. Mejoramiento en plantas Las plantas constituyen un grupo de organismos apto para la experimentacin con el silenciamiento. (Ferrero et al, 2008) Es posible utilizar el silenciamiento gnico como una herramienta para generar mejores cultivos y alimentos, como por
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ejemplo, plantas resistentes a virus, mejoras en la calidad de los aceites, y otras mejoras nutricionales en granos y tubrculos. (Bey, 2007) Por ejemplo, la tecnologa de RNAi se ha utilizado en plantas de caf para reducir el contenido de cafena mediante la supresin del gen que produce la cafena sintetasa; o en cultivos de algodn para disminuir el nivel de dos desaturasas claves para as incrementar el valor nutricional del aceite de las semillas. (Ferrero et al, 2008)

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IV. Conclusiones El ARNi ha emergido rpidamente como una herramienta para identificar funciones de genes y terapia gnica. La tecnologa del ARNi facilita el anlisis de vas de sealizacin involucradas en el desarrollo de la obesidad, resistencia a insulina y diabetes, adems, de la identificacin y validacin de nuevos blancos para la intervencin teraputica del SIDA o el cncer. (Nakamura et al 2009) El RNAi no solamente protege contra las infecciones virales, sino que adems asegura la estabilidad genmica silenciando los elementos mviles (transposones y retrotransposones), controla la sntesis de protenas, regula el desarrollo de organismos, mantiene la cromatina condensada

suprimiendo la transcripcin, y controla procesos evolutivos. (Atencio, 2005) Si bien el empleo de siARNs resulta alentador en la inhibicin de infecciones virales o la disminucin del crecimiento tumoral, an falta resolver el problema de la va de administracin en humanos, efectos secundarios, dosis, contraindicaciones, etc. (Nakamura et al, 2009) El RNAi es una herramienta eficaz para suprimir la expresin de genes de forma especfica, por lo que su aplicacin en medicina ha despertado un gran inters. (Estrada et al, 2007)

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