Sunteți pe pagina 1din 23

EXAMENUL BIOCHIMIC AL URINEI

Introducere Urina este un lichid biologic, produs al excreie renale, cu o compoziie complex, alctuit din ap, substane minerale, substane organice. etc. Compoziia urinei depinde de o serie de factori cum sunt: aportul exogen (alimentaie), metabolismul intermediar, starea de funcionare a unor organe (rinichi, ficat), medicaie etc. Urina excretat n condiii de funcionare normal (fiziologic) a organismului are o compoziie i caracteristici fizico-chimice bine determinate, acestea modificndu-se, mai mult sau mai puin profund, odat cu modificarea factorilor menionai. De aceea un examen de laborator al urinei poate furniza clinicianului date utile privind att explorarea metabolismului intermediar ct i a funciei diverselor organe. Pentru ca rezultatele examenelor de laborator s reflecte fidel starea de funcionare a organismului, la colectarea urinei din care urmeaz s se efectueze determinrile trebuie s se in seama de anumite prescripii. Colectarea i conservarea urinei Colectarea urinei se face n vase de sticl, bine splate i acoperite, iar pentru examenul bacteriologic trebuie s fie sterile. Uneori este necesar utilizarea unor recipiente nchise la culoare deoarece unele substane pe care vrem s le determinm (ca de exemplu, bilirubina, porfirinele) sunt sensibile la lumin, iar expunerea lor conduce la rezultate false. Colectarea urinei se face diferit, n funcie de produsul pe care vrem s l determin i de testul utilizat: Urin Urina spontan recoltat din jetul mijlociu Timp de colectare Prima urin de diminea Teste efectuate - examen bacteriologic - examen cu stripuri - testul pentru punerea n eviden a nitriilor (doar pentru urina recoltat n recipient steril) - examinarea microscopic a sedimentului urinar - determinarea semicalitativ a proteinelor urinare - alte determinri biochimice calitative - examen cu stripuri - determinarea semicalitativ a proteinelor i glucozei urinare - determinarea semicalitativ a glucozei urinare postprandial Teste neindicate - determinarea cantitativ tuturor compuilor biochimici (pentru toate situaiile n care folosim urina spontan).

A dou urin de diminea Urina spontan, recoltat n oricare moment al zilei

- testul pentru punerea n eviden a nitriilor - examen bacteriologic - examinarea microscopic a

Urin Urin recoltat prin puncie suprapubian Urina colectat pe anumite intervale de timp

Timp de colectare -

Teste efectuate - examen bacteriologic

Perioad de timp bine determinat, de obicei 24 ore (sau 3 ore pentru unele determinri)

- determinarea cantitativ tuturor compuilor biochimici (24 ore). - sedimentul minutat Addis-Hamburger (3 ore)

sedimentului urinar Teste neindicate - determinarea cantitativ tuturor compuilor biochimici. - examen bacteriologic - examinarea microscopic a sedimentului urinar

Pentru urina de 24 ore colectarea ncepe la ora 8 dimineaa dup ce s-a aruncat urina emis la aceast or. Poriunile urinate n continuare n cursul zilei i a nopii se colecteaz mpreun, numai urina emis a doua zi dimineaa la ora 8 se colecteaz separat. Conservarea urinei. Pentru ca urina s nu se altereze n timpul colectrii este necesar conservarea ei. Se poate face fie prin congelare imediat sub -20C, prin depozitare la frigider (4-80C), fie prin adugarea unor substane conservante, dar care s nu afecteze componentele urinei. Partea experimental Examenul sumar al urinei Examenul sumar al urinei cuprinde: examenul macroscopic examenul biochimic examenul microscopic al sedimentului urinar. 1. Examenul macroscopic al urinei: a) Volumul Nu intr n analiza sumarului de urin, ci doar la determinrile ce se efectueaz cantitativ pe urina de 24 de ore, dar din motive didactice l vom trata n acest capitol. Cantitatea de urin emis n 24 de ore, denumit diurez, se colecteaz ntrun vas de sticl acoperit cu un capac i se msoar cu un cilindru gradat. n condiii normale, diureza la brbai este de 1500 ml (1200 -1800 ml) iar la femei 1200 ml (1000-1400) dintre care 3/4 sunt eliminate n cursul zilei i numai 1/4 n cursul nopii (raport diurn / nictemeral 3/1). La copii diureza crete cu vrsta. Diureza n clinostatism este mai mare dect n ortostatism, funcia normal se poate adapta la eliminarea unui volum foarte mic (25 ml/or) sau foarte mare (1200 ml/or) de urin, dup necesitile de moment. n condiii fiziologice volumul urinei din 24 de ore depinde de ingestia de lichide, alimentaie i temperatur, precum i de masa corporal i de factorii emoionali (starea psihic). Produii finali azotai, ingestia de cafea, ceai i buturi alcoolice (n special berea) au efect diuretic, crescnd volumul urinei emise n 24 ore. Modificrile patologice ale diurezei se refer la: - volumul de urina eliminat n 24 de ore: poliurie, oligurie, anurie. - ritmul eliminrii n 24 de ore: nicturie, opsiurie.

Poliuria nseamn producerea unei cantiti de urin ce depete 2 litri n 24 de ore. Se ntlnete n: - condiii fiziologice: frig, umezeal, emoii, consum excesiv de lichide sau produse vegetale bogate n ap, consum excesiv de cafea; n poliuriile fiziologice raportul nictemeral rmne nemodificat; - condiii patologice: hipertiroidie, administrare de diuretice n insuficiena cardiac sau edeme renale, dup crize dureroase (angor pectoris, colic renal), dup crize de epilepsie, diabet zaharat, diabet insipid, glomerulonefrit, pielite, pielonefrite acute sau cronice, scleroz primar sau secundar, rinichi polichistic, TBC renal, hipertrofie de prostat etc; nicturia este caracteristic poliuriilor de cauz renal. Oliguria nseamn producerea unei cantiti de urin mai mic de un litru n 24 de ore. Se ntlnete n: - condiii fiziologice: ingestia de cantiti mici de lichide, pierdere excesiv de ap prin transpiraie; - condiii patologice: insuficien cardiac, deshidratri prin vrsturi, diaree i hemoragii, oc, colaps, afeciuni hepatice, hipotiroidie, stri febrile, tulburri nervoase reflexe, glomerulonefrite difuze, glomerulonefrite cronice, nefrite interstiiale, nefropatii tubulare toxice, litiaz renal, tumori ale micului bazin, cuduri ureterale prin rinichi mobil etc. Anuria nseamn incapacitatea complet a rinichiului de a produce urin (se elimin totui o cantitate mai mic dect 150 ml urin n 24 de ore). Anuria apare n toate afeciunile n care se produce oligurie, dac aciunea factorilor cauzali este mai intens sau de durat mai lung. b) Aspectul Aspectul urinei normale variaz n funcie de timpul trecut de la emisiune, de temperatura mediului ambiant, de tehnicile de conservare. La emisiune, urina normal este limpede, transparent. La o examinare fcut dup cteva ore, apare o suspensie sau un depozit floconos (nubecula) compus din celule descuamate ale cilor urinare, iar la femei i din celule vaginale descuamate. n cazul urinelor alcaline sau neutre, aspectul imediat dup emisiune poate fi tulbure, datorit fosfailor alcalino-pmntoi. inut la temperatur prea sczut, urina se tulbur datorit cristalizrii acidului uric i a uratului acid de sodiu. Conservat defectuos, urina formeaz depozite de carbonat de calciu i fosfat amoniaco-magnezian. Pentru a diferenia modificrile patologice ale aspectului urinei de modificrile ce depind de factorii mai sus amintii, se folosesc urmtoarele modaliti: - nclzire uoar pentru dizolvarea cristalelor de acid uric i urat acid de sodiu (5 ml urin ntr-o eprubet nclzit la flacr); - acidifiere cu acid acetic pentru dizolvarea depozitelor de carbonat de calciu, fosfat amoniacomagnezian, fosfai alcalinopmntoi (5 ml urin peste care se pipeteaz un ml acid acetic 10%). Modificri patologice ale aspectului urinei se ntlnesc n afeciuni renale ale cilor excretoare renale i sunt datorate prezenei elementelor figurate ale sngelui (hematii, leucocite), mucusului i diferiilor cilindri. Analiza unei urini tulburi (cu excepia determinrii aciditii), se execut numai dup ce urina a fost limpezit prin sedimentare. Exist i afeciuni renale (insuficiena renal cronic) n care urina este foarte limpede, ca apa, transparent i fr sediment datorit poliuriei.

c) Culoarea Culoarea urinei este dat de substanele colorate pe care le conine. Dintre acestea unele apar ca produi normali sau patologi ai metabolismului intermediar (pigmeni urinari, cromogeni, etc.), iar altele sunt de provenien alimentar (de exemplu coloraie roie dup consum de sfecl i varz roie) sau medicamentoas. n mod fiziologic, urina prezint modificri i anume: - urina nocturn este mai nchis la culoare fa de urina diurn; - urina acid: este mai nchis la culoare fa de urina alcalin; - urina ce conine medicamente sau produi de conjugare ai acestora poate fi: - verde albastr n cazul albastrului de metilen; - brun pn la neagr n cazul fenolului, rezorcinei, salolului, pirogalolului, taninului; - roie n cazul piramidonului, aspirinei. Schimbri ale coloraiei urinei pot fi atribuite i diferitelor afeciuni renale sau extrarenale: - urina galben-portocalie, n boli febrile acute sau dup transpiraii acute; - urina galben palid, n diabet insipid, scleroz renal, insuficien renal cu poliurie, dup ageni diuretici; - urina roie, n hematurie (bulion de came), hemoglobinurie, porfirie; - urina cenuie, n methemoglobinemii, sarcom; - urina brun n sindroame icterice: - urina verde-roiatic, pn la verde-neagr n nefrite acute hemoragice, sindroame icterice forme grave; - urina neagr, n alcaptonurie. d) Mirosul Urina normal are un miros fad, miros de migdale amare, datorit acizilor volatili sau substanelor urinoide. Urina normal poate avea miros modificat i anume: - accentuat, n urinele concentrate; - de violete, dup administrare de medicamente cu esen de terebentin; - dezagreabil, dup aport exogen de sparanghel, usturoi, hrean. Modificrile patologice ale mirosului urinei pot fi: - miros amoniacal n boli infecioase sau tumorale renale i ale cilor excretoare renale; - miros putrid n infecii cu flor anaerob; - miros de mere acre n diabet, vrsturi acetonemice ale copiilor. 2. Examenul biochimic al urinei Examenul biochimic se efectueaz n prezent cu ajutorul stripurilor urinare (numite i bandelete reactive). Acestea analizeaz semicantitativ unii produi prezeni n urin: urobilinogenul, bilirubina, corpii cetonici, acidul ascorbic (unele dintre ele), glucoza, proteinele, hematiile, nitriii, leucocitele precum i pH-ul i densitatea urinar Banda de test conine mai multe zone distincte, fiecare corespunztoare unui anumit parametru de testat. Introducerea benzii n urin va produce sau nu modificarea coloraiei n fiecare zon. Modificrile vor fi comparate cu o scar etalon, livrat odat cu testul, n care se face corelaia ntre concentraia parametrului analizat i modificarea de coloraie obinut.

Un strip este alctuit din 4 straturi suprapuse: o folie protectoare de nylon, o hrtie impregnat cu reactivul corespunztor, o hrtie de filtru absorbant i un suport de plastic.
Folie protectoare de nylon Hrtie impregnat cu reactiv Hrtie absorbant Suport de plastic

Indicaiile utilizrii stripurlor urinare: - boli renale i de tract urogenital. n acest caz, se urmresc modificrile de culoare la nivelul bandeleltelor reactive n special a urmtorilor parametrii: pH, leucocite, nitrii, proteine, hematii, densitate urinar. Importana efecturii unui examen sumar de urin de rutin reiese din faptul c bolile renale i de tract urogenital rmn adesea asimptomatice o perioad lung de timp conducnd adesea la alterri ireversibile. De exemplu, insuficiena renal reprezint stadiul terminal al diverselor nefropatii primare i secundare iar singura posibilitate de tratament a acesteia este reprezentat de dializ sau de transplantul renal. n plus, are repercusiuni negative asupra altor organe i sisteme, ndeosebi asupra sistemului cardiovascular. - boli metabolice (n special diabetul zaharat) . Se urmresc glucoza i corpii cetonici urinari i nu numai acestea deoarece, n timp, diabetul zaharat se complic cu diverse forme de nefropatie. - boli hepatice i anemii hemolitice. n acest caz important este determinarea urobilinogenului i a bilirubinei. n multe boli hepatice simptomatologia apare doar n stadii avansate iar un diagnostic precoce conduce la instituirea imediat a tratamentului, evitnd complicaiile ce pot aprea ulterior. - monitorizarea unor tratamente cu schimbarea, la nevoie, a strategiei terapeutice. - medicina general cu scopul efecturii de screening-uri pentru depistarea bolilor aflate ntr-un stadiu incipient asimptomatic. Mod de lucru Se utilizeaz urina proaspt necentrifugat, de obicei prima urin de diminea. Urina se colecteaz ntr-un vas de preferin steril (dac recipientul nu este steril, nu se interpreteaz nitriii). Bandeleta se imerseaz timp de dou secunde n urin n aa fel nct toat suprafaa s fie acoperit. Se ndeprteaz excesul de lichid lipind marginea benzii de marginea vasului cu urin, apoi se pune banda n poziie orizontal. Se compar zonele reactive de pe band cu cele corespunztoare de pe scala etalon ntr-un interval de 60 de secunde (pentru leucocite intervalul de 60-120 de secunde). Nu se vor depi dou minute pentru compararea rezultatelor. Parametrii determinai cu ajutorul stripurilor urinare a) Densitatea urinar Principiu Testul determin concentraia ionic a urinei bazndu-se pe eliberarea protonilor care, n prezena cationilor formeaz un complex. Reacia produce schimbarea culorii indicatorului (albastru de brom-timol). Constituenii neionici ai urinei, cum ar fi glucoza sau ureea nu sunt determinai. De aceea, o cretere a

densitii datorit concentraiei glucozei > 1000 mg/dl (> 56 mmol/L) nu este determinat prin acest test. EGTAH K + H+ EGTAH * + K+
4 3

Anionul albastru de brom - timol + H+ (colorat n albastru)

Albastru de brom timol (colorat n galben)

(* = Etilenglicol bis (-aminoetileter) N,N-tetraacetic acid) Surse de eroare: - prezena proteinelor (100-500 mg/dl) conduce la rezultate fals crescute. Acelai fenomen are loc i n cazul urinei cetoacidozice. - la un pH de 7 sau mai mare, valorile sunt mai mari cu 0,005 g/ml Semnificaii clinice Densitatea urinei normale, numit normostenurie, variaz ntre 1,015-1,025 g/cm3. n condiii de hidratare sau de deshidratare a organismului, limitele sunt mai largi, variind ntre 1,000-1,030 g/cm3. n condiii fiziologice densitatea urinei variaz invers proporional cu cantitatea emis i direct proporional cu cantitatea de substane pe care le conine i cu intensitatea culorii. Valorile mai mici de 1,010 g/ml au o semnificaie analitic deoarece n acest caz leucocitele i hematiile sufer o liz rapid. Aa se explic rezultatele negative obinute la citirea sedimentului urinar dar cu rezultate pozitive pe strip. n cazul alterrii funciei de concentrare a rinichiului, sau a eliminrii anormale a unor metabolii, corelaia dintre densitate i diurez se pierde. Patologic se remarc urmtoarele situaii: - Hiperstenurie, densitate peste 1,025, apare n diabet, proteinurie, urinei concentrate survenite n urma unui regim de sete, transpiraii abundente, stri febrile etc. - Hipostenurie, densitate sub 1,015, apare n diabet insipid, aport excesiv de apa sau alimente bogate n ap (fructe). - lzostenurie, densitile tuturor emisiunilor din 24 de ore sunt egale i cuprinse n jurul valorii de 1,002 (densitatea ultrafiltratului plasmatic glomerular). Apare n caz de insuficient renal grav dovedind incapacitatea de diluare sau concentrare a rinichiului. b) pH-ul. Principiu Zona reactiv conine un amestec de trei indicatori: rou metil, albastru de brom-timol i fenolftalein. n limita de pH de 5-9 se obine o culoare care variaz gradat de la portocaliu-galben-verde pn la albastru.

Br O

Br OH -H
+

Br O

Br

O-

+H+ SO3SO3-

galben O OH O R

Albastru de brom-timol

albastru O-Na+

+2NaOH -H2O

O R

R OH incolor COOH N+ H rosu urina acida: portocalie rosu metil N N(CH3)2 -H


+

R O Na Fenolftaleina rosu
+

COOH +H+ N N galben urina alcalina: verde N(CH3)2

Surse de eroare n cazul probelor de urin care staioneaz timp ndelungat nainte de a fi lucrate, pH-ul poate vira spre alcalin ca rezultat al creterii bacteriene.

Semnificaii clinice n mod normal, urina are o reacie acid. pH-ul urinei este determinat n cea mai mare msur, de proporia de fosfai bibazici (alcalini) i monobazici (acizi) aflai n urin. Dup cum se tie, rinichiul este irigat de snge, care are un pH de aproximativ 7,4 i formeaz urina cu un pH acid. Aceast variaie de pH se realizeaz, n parte, prin modificarea proporiei dintre fosfaii acizi i alcalini. Raportul acestora n plasm (pH = 7,4) este: NaH 2 PO 4 1 = Na 2 HPO 4 5 iar n urin (pH = 4,5-5,5) se inverseaz:

NaH 2 PO 4 5 = Na 2 HPO 4 1 n cazurile n care urina atinge aciditatea maxim, raportul este egal cu 50:1. Prin acest mecanism sunt cruate o mare cantitate de baze fixe ale organismului (n special Na+, dar i K+, Mg2+ i Ca2+). pH-ul urinar variaz ntre 5,8 i 7,4 n cursul zilei; urina de diminea are un pH de 5-6. n condiii fiziologice, pH-ul urinar variaz n funcie de alimentaie. ntr-o alimentaie strict carnal, urina este acid, cu un pH cuprins ntre 5,2 - 5,3, n timp ce ntr-o alimentaie exclusiv vegetarian, urina este alcalin, cu un pH cuprins ntre 7,0 - 7,5. n cazul unei alimentaii mixte, reacia urinei este slab acid. Trebuie reinut faptul c, dup administrarea de bicarbonai sau tratament cu ape minerale, urina are o reacie alcalin. Ca i volumul urinei, valoarea pH-ului este supus unui ritm nictemeral. Urina cea mai acid se elimin spre miezul nopii i cea mai puin acid (uneori alcalin) dimineaa. Prin pstrare timp mai ndelungat, urina poate deveni alcalin cci prin contaminare cu germeni microbieni are loc descompunerea ureei (sub aciunea ureazei) n amoniac. Valorile pH-ului care depesc valoarea 7 au o importan analitic deoarece, n acest caz, eritrocitele i leucocitele sufer o liz rapid ceea ce explic rezultatele negative obinute la sedimentul urinar n condiiile unor rezultate pozitive pe strip. n mod patologic semnalm persistena valorilor pH-ului acid sau alcalin independent de alimentaie. Valori sczute ale pH-ului urinar (urinei acide) se ntlnesc n: - inaniie - diverse intoxicaii - insuficien renal - cetoacidoz diabetic Valori crescute ale pH-ului urinar (urinei alcaline) se ntlnesc n: - vrsturi abundente de diferite etiologii; - infecii ale cilor urinare (uretrite, cistite, pielite, pielonefrite). - hipopotasemii severe - diverse intoxicaii - febr de diverse etiologii

c) Leucocitele Principiu Leucocitele excretate n urin sunt aproape exclusiv granulocite ce prezint o activitate esterazic detectat prin reacia de pe strip. Zona reactiv conine un ester indoxilic care este clivat de ctre esteraza granulocitar. Indoxilul liber reacioneaz apoi cu o sare de diazoniu formnd un derivat diazo colorat violet. Acest test detecteaz activitatea esterazei granulocitare i histiocitare (histiocitele sunt de asemenea produse n urma unui proces inflamator iar la examinarea microscopic nu se pot diferenia de leucocite pe preparate native necolorate). Ca urmare, sunt detectate nu numai celulele intacte ci i cele lizate.

O O N H Ester indoxilic

NH SO2

Esteraza leucocitara N H Indoxil

OH HO + O NH SO2

OH + N N H Indoxil N+ R2 Sare de diazoniu


R1-

OH N H Derivat azo (violet) R2


R1

Surse de eroare - dac urina este intens colorat, aceast coloraie poate masca culoarea obinut n urma reaciei de pe strip - excreia de proteine peste 500 mg/dl i a glucozei peste 2 g/dl poate bloca colorarea zonei reactive zonei reactive. Aceleai efecte le au i unele medicamente administrate n doze mari (gentamicina, cefalexinul). - unele medicamente pot da reacii fals pozitive: meropenemul, imipenemul, acidul clavulanic. Semnificaii clinice: Leucocituria reprezint un indicator important al proceselor inflamatorii renale i ale tractului urinar: infecii bacteriene (cistite, uretrite, pielonefrite acute i cronice), infecii abacteriene cauzate de virusuri i levuri, infecii parazitare, glomerulopatii, intoxicaii. De asemenea, prezena leucocitelor n urin poate fi cauzat i de o contaminare cu secreii din cile genitale, dar n marea majoritate a cazurilor, pozitivarea testului pentru leucocite semnific prezena unei infecii bacteriene de tract urinar. Uneori, n cazul inflamaiilor cronice, se observ o puternic reacie leucocitar n absena bacteriilor, cunoscut sub numele de leucociturie abacterian. Aceast situaie este observat adesea ca simptom unic n pielonefritele cronice, tuberculoz, diverse tumori. d) Nitriii Principiu Nitriii sunt detectai pe baza principiului testului Griess: orice nitrat prezent n urin e transformat prin reducere de ctre bacterii ntr-un nitrit: Nitrat reducere bacterian Nitrit Amina aromatic a sulfanilamidei reacioneaz cu nitritul n prezena unui tampon acid formnd o sare de diazoniu care se cupleaz cu 3-hidroxi-1,2,3,4tetrahidrobenzo-(h)-chinolin formnd un derivat azo de culoare roie. Intensitatea culorii este direct proporional cu concentraia nitriilor dar fr nici o legtur cu severitatea infeciei.

H2N SO2
Sulfanilamida

NH3++ NO2Nitrat

H+

H2N SO2
Sare de diazoniu

N+ N+2H2O

OH H2N SO2 N
+

H H2N SO2 N+ N N H
Derivat azo (rosu)

N+ N H
Component de cuplare

OH

Sare de diazoniu

Surse de eroare - rezultatele fals pozitive se datoreaz: poliuriei care spal cile urinare, alimentaiei parenterale, dietei carnale, timpului ndelungat scurs pn la efectuarea testului (peste 4 ore), utilizarea de recipiente nesterile (n aceast situaie nu se interpreteaz testul pentru nitrii). - rezultatele fals negative se datoreaz: contaminrii bacteriene a urinei, tratament cu substane ce conin fenazopiroclor. Semnificaii clinice Reacia pentru nitrii este specific pentru prezena bacteriuriei; reacia este independent de pH. Un singur test negativ nu exclude o infecie de tract urinar deoarece numrul bacteriilor i coninutul de nitrai poate varia. Absena culorii la teste repetate nu exclude o infecie deoarece nu toate microorganismele formeaz nitrii. n mod normal, urina nu conine nitrii. Administrarea de tratamente ce au n componena lor nitrii nu se concretizeaz prin excreia de nitrii. Orice nitrit excretat urinar este de natur exclusiv bacterian. n prezena unui tratament antibiotic sau a chimioterapiei, metabolismul enzimatic i populaia microbian sunt inhibate, deci vom avea un test negativ. Din aceast cauz, orice tratament antimicrobian trebuie ntrerupt cu cel puin 3 zile nainte de efectuarea testului. e) Proteinele (albuminele) Principiu Reacia se bazeaz pe aa numita eroare proteic a indicatorilor de pH. Zona reactiv conine un amestec tampon i un indicator care i schimb culoarea de la galben la verde n prezena proteinelor, independent de pH.

Cl O

Cl OH O

Cl

Cl O-

Cl Br SO3
-

Cl

Proteine -H
+

Cl Br SO3-

Cl

Br Br galben

Br

Br

Br

3'3",5'5"tetraclorofenol3,4,5,6-tetrabromsulfonftaleina (forma neutra)

Br verde Anionul acestui compus

Surse de eroare - rezultate fals pozitive sunt obinute n urmtoarele condiii: administrare de polivinilpirolidona (un substitut de snge), prezena unor reziduuri de dezinfectani ce conin grupri cuaternare de amoniu sau clorhexidin, medicaie ce conine fenazopiridin - medicamente ca i chinina, chinidina, clorochina, sulfonamidele, penicilina nu interacioneaz cu reacia de pe strip. Semnificaii clinice Indicatorul este foarte sensibil la albuminele cu mas molecular mic excretate n cazul afectrii renale. Sensibilitatea la alte proteine este sczut (proteina Bence-Jones, -globuline, peptone, mucoproteine) Urina normal conine cantiti extrem de mici de proteine (50-100 mg/24 ore sau 10-30 mg/dl pentru prima urin de diminea), ce nu pot fi evideniate prin reaciile de recunoatere obinuite. n mod patologic urina poate conine ns cantiti mai mari sau mai mici de substane proteice: ele constituie aa numita proteinurie. Proteinuria este frecvent un semn de boal renal dar este nespecific. Prezena ei nu demonstreaz o nefropatie dar nici absena ei nu o exclude. Depistarea unei proteinurii necesit un diagnostic diferenial. Proteinuria benign. La unele persoane sntoase, fr afectare renal se poate observa uneori o proteinurie ce apare mai frecvent n jurul vrstei de 30 ani. Cauzele cele mai incriminate sunt: stresul fizic i emoional, ortostatismul prelungit, lordoza. Proteinuriile asociate hipotermiei, supranclzirii organismului, sarcinii sau folosirii medicamentelor vasoconstrictoare sunt, de asemenea, considerate benigne. Proteinuria extrarenal. Proteinele pot aprea n urin n majoritatea situaiilor cu tablou acut, cum ar fi: colicile, crizele epileptice, infarctele, accidentul vascular cerebral, traumatisme craniene, postoperator. Aceste proteinurii dispar imediat ce cauza extrarenal a fost eliminat. Proteinuria de cauz renal. O cretere a permeabilitii capilarelor glomerulare datorit modificrilor patologice de la acest nivel conduce la dezvoltarea proteinuriei renale. Aceast proteinurie este persistent i este observat pe tot parcursul zilei i a nopii. Cele mai pronunate proteinurii sunt observate n nefroze. n glomerulonefrite excreia proteic este de obicei situat n jurul valorii de 200-300 mg/dl i nsoit de alte cteva simptome, fiind acompaniat aproape constant de microhematurie.

Proteinuria de origine tubular se datoreaz leziunilor celulelor tubulare i/sau tulburrilor de absorbie tubular a proteinelor din filtratul glomerular. Acest tip de proteinurie se ntlnete n cazul pielonefritelor, nefritelor, chistelor renale, rinichiului polichistic. Excreia intermitent de proteine apare adesea n pielonefritele cronice. Proteinuria postrenal nsoete procesele inflamatorii de la nivelul vezicii urinare, prostatei i hemoragiile tractului urinar. f) Glucoza Principiu Testul de punere n eviden a glucozei se bazeaz pe reacia specific cu glucozoxidaz-peroxidaz n care D-glucoza este oxidat enzimatic de ctre oxigenul atmosferic la -D-gluconolacton. Apa oxigenat rezultat este utilizat ntr-o reacie de culoare. Astfel sub aciunea peroxidazei apa oxigenat de descompune n ap i oxigen atomic care oxideaz tetrametilbenzidina la un derivat colorat n verdealbastru.
CH2OH H OH HO H OH Glucoza O OH +O2 GOD H OH HO OH Gluconolactona NH2 + H2O2 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina POD H2O + Derivat colorat verde-albastru CH2OH O O + H2O2

H2N

Surse de eroare - datorit reaciei enzimatice, interferentul major, vitamina C, a fost eliminat. - testul este independent de pH i de prezena corpilor cetonici. - rezultate fals pozitive pot aprea la utilizarea dezinfectanilor care conin ap oxigenat Semnificaii clinice Urina normal conine o cantitate foarte mic de glucide (350-500 mg/24 ore sau 15 mg/dl n urina de diminea), cantitate neidentificabil prin metodele uzuale. Determinarea glucozei n urin are o valoare diagnostic mare pentru depistarea diabetului zaharat ct i pentru posibilitatea de autocontrol a acesteia de ctre pacieni. Pe de alt parte, absena glicozuriei nu exclude o alterare a metabolismului glucidic, n particular, nu exclude un diabet zaharat. De asemenea, glicozuria poate fi cauzat i de ali factori. Glicozuria apare atunci cnd reabsorbia tubular (tubul proximal) la nivel renal a glucozei este depit, la o valoare a glicemiei de peste150-180 mg/dl (prag renal de eliminare a glucozei). Glicozuria din diabetul zaharat. Majoritatea pacienilor diabetici prezint glicozurie, dependent de severitatea bolii i de integritatea funciei renale. Determinarea glicozuriei postprandial este mai eficient pentru depistarea diabetului dect cea efectuat folosind prima urin de diminea.

Glicozuria renal (diabetul renal) reprezint o tulburare congenital benign caracterizat prin prezena unei glicozurii, constante sau intermitente, n timp ce glicemia are valori normale sau sczute. n aceast situaie, reabsorbia tubular a glucozei este limitat, fapt care duce la pierderea de glucoz prin urin. g) Corpii cetonici Principiu Depistarea corpilor cetonici se bazeaz pe principiul reaciei Legal. Acidul acetoacetic i acetona reacioneaz cu nitroprusiatul de sodiu i glicina n mediu alcalin conducnd la un compus violet. Reacia este specific doar pentru cei doi corpi cetonici; acidul -hidroxibutiric nu reacioneaz. Na2[Fe(CN)5NO] Nitroprusiat de sodiu + CH3 - C - R O Corp cetonic Na3[Fe(CN)5N = CH - C - R] + H2O OH O Complex colorat violet

Semnificaii clinice Corpii cetonici (acidul acetoacetic, acidul -hidroxibutiric i acetona) sunt prezeni n urin atunci cnd exist o degradare a acizilor grai datorit unui aport insuficient de energie sub form de glucoz. Predominana lipolizei conduce la creterea nivelului acizilor grai liberi n ser urmat de degradarea lor la nivel hepatic pn la acetil-Coenzima A, form sub care pot fi utilizai n continuare n alte procese metabolice. Acest exces va fi convertit n acid acetoacetic ce va fi transformat parial n acid -hidroxibutiric i doar o mic parte n aceton. Cetonuria din diabetul zaharat. Prezena corpilor cetonici n urin este semnalat atunci cnd diabetul zaharat este decompensat. Starea comatoas i precomatoas sunt ntotdeauna acompaniate de cetoacidoz, cu excepia comei hiperosmolare. Deficitul relativ sau absolut de insulin determin reducerea utilizrii glucozei de ctre esutul adipos i celula muscular, avnd ca rezultat intensificarea lipolizei. Corpii cetonici rezultai mpreun cu alte modificri fiziopatologice (deshidratare, pierdere de electrolii) au ca i consecin instalarea comei. Cetonuria de cauz nediabetic. Exist i alte situaii n care apar corpii cetonici n urin: inaniie, vrsturi incoercibile la copii mici, febr n special atunci cnd nsoete o boal infecioas, vrsturile din primele luni de sarcin, boli metabolice congenitale. h) Urobilinogenul Principiu Fluoroboratul de p-metoxibenzendiazoniu, o sare de diazoniu stabil, formeaz un compus azo de culoare roie n prezena urobilinogenului n mediu acid.

H3C

O
Sare de diazoniu

N+ N

BF4- + Urobilinogen

Mediu acid

Compus azo (rosu)

Surse de eroare:

rezultate fals negative se ntlnesc n urmtoarele condiii: timpul ndelungat scurs de la recoltare pn la efectuarea testului i expunerea probei la lumin determin oxidarea urobilinogenului; terapia cu hexametilentetramin, conservarea probei de urin cu formol. - rezultatele fals pozitive se pot datora medicaiei care coloreaz urina n rou sau prezint o culoare roie n mediu acid. - testul este specific, nefiind supus interferenelor care apar n cazul reaciei Ehrlich Semnificaii clinice Urobilinogenul se formeaz prin reducerea de ctre bacteriile intestinale a bilirubinei care este secretat n intestin prin bil. Acesta aste reabsorbit i ajunge la ficat dar o mic parte se excret prin urin. Suprancrcarea capacitii funcionale hepatice . Cnd sunt prezente cantiti mari de bilirubin, i de asemenea i urobilinogen, ca rezultat al degradrii excesive a hemoglobinei, capacitatea funcional hepatic poate fi depit, chiar dac ficatul prelucreaz de 2-3 ori mai mult urobilinogen dect n mod normal. Urobilinogenul neprelucrat ajunge n torentul sangvin i n final este excretat renal. Cauzele suprancrcrii capacitii funcionale hepatice sunt: anemii hemolitice, anemie pernicioas, hemoliz intravascular ca i consecin a unor intoxicaii, boli infecioare sau accidente transfuzionale, policitemie. Alterarea capacitii funcionale hepatice . Bolile hepatice au drept consecin alterarea capacitii funcionale a ficatului. Urobilinogenul ce intr prin vena port nu este complet metabolizat i se elimin ca atare la nivel renal. Aceast alterare se ntlnete n urmtoarele situaii: hepatite virale, hepatite cronice, ciroz hepatic, intoxicaii cu lezarea parenchimului hepatic, tumori hepatice. Scurtcircuitul hepatic. n unele situaii patologice (de exemplu, n ciroza hepatic cu hipertensiune portal, tromboz de ven port, ocluzia venei hepatice) fluxul sangvin la nivelul venei porte este redus iar o parte din urobilinogen trece direct n snge fiind excretat renal. Absena urobilinogenului din urin . Urobilinogenul este absent n urin n situaia produciei insuficient de bil de ctre celulele hepatice, alterarea capacitii de secreie a bilei n intestin i absena reducerii bilirubinei la nivel intestinal. Cauze: obstrucia complet a ductului biliar comun n absena infeciei de tract biliar, stoparea complet a produciei de bil de ctre ficat (hepatite virale severe, intoxicaii cu afectare hepatic sever), absena florei intestinale (fiziologic la nou-nscui i ntlnit rar dup un tratament antibioterapic intensiv). i) Bilirubina Principiu Reacia se bazeaz pe cuplarea bilirubinei cu o sare stabil de diazoniu (2,6diclorobenzendiazoniu difluoroborat) n mediu acid cu formarea unui derivat azo de culoare violet.
Cl N+ N Cl
Sare de diazoniu

BF4- + Bilirubina

Mediu acid

Compus azo (violet)

Surse de eroare

sensibilitatea este alterat de cantiti mari de acid ascorbic sau nitriii din urin. - rezultate fals negative se ntlnesc n urmtoarele condiii: timpul ndelungat scurs de la recoltare pn la efectuarea testului i expunerea probei la lumin determin oxidarea bilirubinei. - rezultatele fals pozitive se pot datora medicaiei care coloreaz urina n rou sau prezint o culoare roie n mediu acid (de exemplu, fenazopiridina). Semnificaii clinice Ca rezultat al conjugrii (esterificrii) cu acid glucuronic, bilirubina devine hidrosolubil i astfel susceptibil de a fi excretat renal. Bilirubina prezent n urin este ntotdeauna bilirubin conjugat (direct). n toate procesele patologice n care avem o cretere a concentraiei bilirubinei conjugate n plasm, avem i nivele considerabile ale bilirubinei urinare. Bilirubina conjugat este prezent n cantiti mari n plasm n urmtoarele situaii: creterea presiunii intracanaliculare datorit obstruciei intra- sau extrahepatice, inflamaie sau fibroz periportal, necroz hepatic. j) Hematiile (eritrocitele) Principiu: Testul se bazeaz pe activitatea de tip peroxidazic al hemoglobinei i mioglobinei care catalizeaz oxidarea unei substane indicator (3,3,5,5tetrametilbenzidin) de ctre un hidroperoxid organic (2,5-dimetilhexan-2,5hidroperoxid) conducnd la un compus verde-albastru. Exist dou scale pentru determinarea hemoglobinei i a eritrocitelor libere. Sensibilitatea testului este de 5 eritrocite/l ceea ce corespunde la 0,015 mg hemoglobin/dl urin. Aceast sensibilitate mare este dat de adugarea unui activator n amestecul de reacie.
+ H2N

NH2 + Hemoglobina 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina

OOH

OOH

2,5-dimetilhexan 2,5-dihidroperoxid

+ OH OH

Compus verde-albastru

Surse de eroare prezena vitaminei C nu interfer cu reacia de pe strip. o concentraie a nitriilor de peste 2,2 mmol/L (10 mg/dl) (valori foarte rar ntlnite n infeciile de tract urinar) scade sensibilitatea reaciei. nu se recomand conservarea urinei cu formol deoarece conduce la rezultate fals negative rezultate fals pozitive se pot obine dac urina conine urme de detergeni oxidani proteinuria peste 5 g/L (500 mg/dl) poate atenua reacia de culoare a hemoglobinei. Semnificaii clinice

Hematuria, excreia eritrocitelor n urin, este ntlnit n multe situaii patologice i din acest motiv este necesar clarificarea originii sngerrii. n aceast situaie, cele mai multe date sunt oferite de examinarea morfologiei hematiilor din sedimentul urinar. Cauzele hematuriei: - calculii renali. Prezena lor provoac dureri colicative renale acute nsoite adesea de hematurie. - tumori ale tractului urinar. Microhematuria de cauz neprecizat ca manifestare unic de boal este adesea de origine tumoral, deoarece majoritatea tumorilor sunt asimptomatice o perioad lung de timp. - glomerulonefritele. n acest caz hematuria adesea microscopic, este nsoit de proteinurie i hipertensiune arterial. Dismorfismul eritrocitar are, n acest caz, un rol diagnostic important. - pielonefritele n care hematuria este prezent doar la o treime din pacieni. Metode clasice utilizate la examenul biochimic al urinei Unele laboratoare utilizeaz nc unele metode de determinare a ctorva parametrii biochimici ai urinei a) Densitatea urinar Densitatea urinei se determin cu urodensimetrul folosind un eantion din urina colectat n 24 de ore. Urodensimetrul este un densimetru etalonat pentru determinarea densitii de lichide cuprinse ntre 1,000-1,060 g/cm 3 la 15C. De aceea, n cazul n care determinarea densitii urinei se face la alt temperatur i urina conine glucoz este necesar corectarea ei. Corectarea se face folosind tabelul Buchardat. Mod de lucru ntr-un cilindru gradat de 50 ml se aduc aproximativ 40 ml urin evitnd formarea spumei; dac spuma totui s-a format, ea se ndeprteaz cu o hrtie de filtru. Se cufund apoi urodensimetrul n cilindrul cu urin, iar cnd acesta nu mai oscileaz se citete densitatea corespunztoare diviziunii de pe tija aflat la suprafaa urinei, avnd grij ca urodensimetrul s nu fie lipit de pereii cilindrului. b) pH-ul urinar Determinarea pH-ului cu hrtie indicator Reactivi: - pachete cu benzi de hrtie i o scala de culori corespunztoare. Mod de lucru Se introduce n urina proaspt emis, timp de 1-2 secunde o band de hrtie indicator universal. Dup 30 de secunde se stabilete valoarea pH-ului comparnd culoarea hrtiei cu cea a scalei de culori care nsoete pachetul. c) Proteinele Recunoaterea global a proteinelor din urin Apariia proteinelor n urin se evideniaz prin precipitarea lor sub aciunea unor ageni de precipitare ca: acidul sulfosalicilic, picric, acetic etc. Mai folosit este primul pentru c: - este foarte sensibil, reuind s deceleze cele mai fine urme de proteine prezente; - precipit toate tipurile de proteine, cu excepia peptonelor; - reacia are loc la rece.

Proba cu acid sulfosalicilic Principiu n prezena proteinelor existente n urin, acidul sulfosalicilic determin apariia unei turbiditi sau chiar a unui precipitat, n funcie de proteinurie. Reactivi Acid sulfosalicilic 20%. Mod de lucru ntr-o eprubet se msoar aproximativ 3 ml urin, centrifugat, peste care se toarn 2-3 picturi de acid sulfosalicilic. Se agit i se urmrete apariia turbiditii pe un fond negru, n comparaie cu o eprubet care conine numai urin. Rezultat - urina rmne limpede: lipsesc proteinele n urin, rezultat negativ (-); - urina prezint opalescen uoar = urme de proteine (): - opalescen evident = pozitiv (+); - opalescen intens = pozitiv (++); - precipitat uor = intens pozitiv (+++): - precipitat granular sau cazeinos abundent = intens pozitiv (++++). Cauze de eroare Unele medicamente, aflate n urin, pot da cu acidul sulfosalicilic o opalescen mai mult sau mai puin intens. Recunoaterea albuminelor termosolubile (Bence-Jones) Mod de lucru ntr-o eprubet se nclzesc 10 ml urin la temperatura de 60C. Prezena albuminei termosolubile se manifest prin apariia unui coagul sau a unei tulbureli, care dispare dac ridicm temperatura. Natura chimic a albuminelor tip BenceJones este diferit. Determinarea proteinelor din urin (Metoda Esbach) Reactivi Reactiv de precipitare: 10 grame acid picric i 20 grame acid citric se dizolv n ap i se aduc la un volum final de 1000 ml. Mod de lucru n albuminometrul Esbach se toarn urina filtrat pn la semnul U i reactiv pn la semnul R. Se amestec i se las n repaus 24 de ore, dup care se citete nlimea precipitatului depus. Gradaiile albuminometrului indic direct grame de proteine/1000 ml urin. Dac urina are o densitate mai mare de 1,008, se va dilua cu apa de dou ori, iar pentru densitatea de 1,020 se va dilua de 3 ori. Rezultatele obinute se nmulesc cu diluia. n unele cazuri, albumina precipitat nu se depune la fundul tubului. Ea rmne n suspensie. n aceste cazuri avem de-a face cu albumina neretractibil descris de Bouchardat. d) Glucidele Recunoaterea glucidelor reductoare Toate glucidele eliminate au proprieti reductoare fa de anumii reactivi care conin sruri de cupru, argint sau bismut, datorit prezenei n molecula lor a unei funciuni carbonilice libere. Excepie face zaharoza, care are funciunile carbonilice blocate, dar prin hidroliz elibereaz produi cu aciune reductoare. Reducerea reactivilor poate fi dat i de alte substane cu caracter reductor coninute n urina, motiv pentru care este normal s se indice existena corpilor reductori.

Metoda Botger-Nylander Principiu Azotatul bazic de bismut, n mediu alcalin, la cald este redus de ctre un glucid reductor la bismut metalic de culoare neagr: 100C Bi(OH)2NO3 + NaOH Bi(OH)3 + NaNO3

2Bi(OH)3 + 3 H (H

C C CH2

O OH )4 OH

2Bi + 3 COOH + 3H2O (H C CH2 OH )4 OH

Reactivi 1. Reactiv Nylander: - Hidroxid de sodiu 100 g; - Sare Seignette (tartrat dublu de sodiu i potasiu) 40 g; - Azotat bazic de bismut 20 g, - Ap distilat ad. 1000 ml. Mod de lucru Se msoar ntr-o eprubet un ml urin i o pictur de reactiv Nylander. Se menine eprubeta, n baia de ap la fierbere, timp 5 minute. Apariia unui precipitat negru indic un rezultat pozitiv. Pot aprea rezultate fals pozitive datorit apariiei unui precipitat negru de sulfur de bismut produs de aminoacizi cu sulf din albuminele urinare. n aceste cazuri se repet proba cu un reactiv cu sulfat de cupru (Benedict). Reacia este sensibil i are valoare diagnostic deosebit cnd rezultatul este negativ.

Metoda Benedict (semicantitativ) Principiu Monozaharidele, n mediu alcalin, la cald, reduc srurile cuprice complexate la oxidul cupros rou-crmiziu. Complexarea ionilor de cupru n mediu alcalin (pentru a mpiedica formarea hidroxidului cupric) se face cu citrat de sodiu. Reactivi Reactiv Benedict: - Citrat de sodiu 173 g - Carbonat de sodiu anhidru 100 g - Sulfat de cupru 17,3 g - Ap distilat ad 1000 ml Mod de lucru ntr-o eprubet se msoar: un ml reactiv Benedict i o pictur urin. Se menine eprubeta n baia de ap la fierbere, timp de 5 minute. Rezultat Modul n care este interpretat reacia este redat n tabelul urmtor: Culoarea Neschimbat Citirea reaciei negativ Concentraia glucidului (g/1000 ml) 0

Verde fr precipitat Verde cu precipitat Verde msliniu Portocaliu Rou-crmiziu

+ + ++ +++ ++++

0,2-0,3 0,5 1,0 1,5 peste 2,0

Deoarece reacia de reducere este dat i de alte glucide n afar de glucoz, pentru a stabili exact natura glucidului identificat, se utilizeaz reacia cu fenilhidrazin sau o reacie enzimatic. e) Corpi cetonici Reacii de recunoatere La recunoaterea lor se folosesc reaciile de culoare pe care acidul acetilacetic i acetona le dau cu: nitroprusiatul de sodiu, aldehida salicilic, clorura feric. Redm n continuare cteva modaliti de recunoatere a corpilor cetonici bazate pe reacia de culoare cu nitroprusiatul de sodiu. Reacia Legal-Imbert Principiu Corpii cetonici menionai reacioneaz cu reactivul Legal-Imbert n prezena amoniacului, dnd natere unui produs de culoare violet. Reactivi 1. Reactiv Legal-Imbert (nitroprusiat de sodiu 5 g, acid acetic glacial 50 ml, completare cu ap distilat la 100 mI). Se conserv n sticle brune. 2. Amoniac concentrat 25%. Mod de lucru ntr-o eprubet se aduc 2-3 ml urin filtrat i 4-6 picturi de reactiv LegalImbert i se omogenizeaz. Pe pereii eprubetei se prelinge circa un ml de amoniac 25%, n aa fel ca acesta s formeze un strat superior, apoi se las n repaus 15 minute. Urina normal nu d nici o reacie. n prezena corpilor cetonici apare un inel violet la limita de contact al celor dou straturi de lichide. Reactivi sub forma solid Deoarece reactivul Legal-Imbert, aflat sub form de soluie, se altereaz cu timpul, poate fi nlocuit cu reactivi n stare solid care, sub form de pulbere sau de pastile, sunt mai stabili. a. Reactivul sub form de pulbere. Se obine prin amestecarea urmtoarelor substane n proporiile indicate (nitroprusiat 0,5 g, sulfat de amoniu 10,0 g, carbonat de sodiu anhidru 10,0 g) Mod de lucru Pe o plac de porelan se pune un vrf de spatul de pulbere peste care se adaug 2-3 picturi de urin i se amestec cu o baghet sau cu colul unei lame de microscop. Dac urina conine corpi cetonici apare o culoare violet mai mult sau mai puin intens. n absena corpilor cetonici culoarea violet nu apare. b. Reactiv sub form de pastil. Se gsete n comer, sub denumirea de "acetotest", nsoit de modul de lucru, care fiind foarte simplu, poate fi efectuat chiar de ctre bolnavul neinternat n spital. Mod de lucru ntr-o eprubet se introduc aproximativ 5 ml de urin proaspt peste care se adaug pastila i se ateapt cteva minute. Prezena corpilor cetonici face ca

pastila s se coloreze n violet, cu nuane i intensiti de culoare dependente de cantitatea de corpi cetonici. Cauze de eroare La concentraii mari i creatinina d, n aceleai condiii, culoare violet. Importana diagnostic a reaciei n mod curent, n strile de acidocetoz, eliminarea corpilor cetonici n urin crete apreciabil. Aceast situaie se ntlnete n afeciuni care cresc cetogeneza hepatic sau scad utilizarea corpilor cetonici n esuturile extrahepatice (esut muscular, rinichi) i anume: efort muscular intens, inaniie sau regim alimentar dezechilibrat (bogat n lipide i proteine, srac n glucide); tulburri gastrointestinale acute sau cronice, n special la copii (dispepsie acut, toxicoz); vrsturi accentuate de sarcin, diabet zaharat. f) Urobilinogenul n urina normal, urobilinogenul se afl n cantiti mici dar decelabile; lipsete sau apare crescut n stri patologice. Recunoaterea urobilinogenului cu reactiv Ehrlich Principiu Urobilinogenul se condenseaz cu p-dimetilaminobenzaldehida n mediu acid dnd natere unui produs de culoare roie. Reactiv Ehrlich Se dizolv 2 g p-dimetilaminobenzaldehida n 100 ml acid clorhidric 20 %. Mod de lucru ntr-o eprubet se aduc aproximativ 2 ml urin proaspt (dar rece) i 1-2 picturi de reactiv Ehrlich; dac nu apare imediat o coloraie roie se nclzete la flacr sau n baia de ap. Rezultate: Urobilinogenul normal: coloraia roie nu apare dect prin nclzire. Urobilinogenul crescut: coloraia roie apare chiar la rece (temperatura camerei). Urobilinogen absent: coloraia roie nu apare nici la cald. Urobilinogenul are valori crescute n icterul hemolitic i parenchimatos (hepatic), tumori maligne hepatice, steatoza hepatic, abces hepatic i lipsete n icterele mecanice (prin obstrucie). g) Pigmenii sanguini din urin pot fi reprezentai de hemoglobina liber i cea coninut n eritrocite. n primul caz, n sedimentul urinar nu sunt prezente hematii, n cel de-al doilea caz, n sedimentul urinar apar structuri hematice. Reacii de recunoatere Recunoaterea pigmenilor sanguini se poate face spectroscopic sau prin reacii chimice. Spectral, hemoglobina se recunoate prin benzile caracteristice pe care le prezint, iar chimic prin activitatea sa pseudoperoxidazic, ce o exercit asupra apei oxigenate. Metoda descris mai jos mai are aplicabilitate practic doar pentru examenul scaunului pentru decelarea hemoragiilor oculte Metoda Adler Principiu Hemoglobina descompune H202 cu eliberare de oxigen atomic, care oxideaz benzidina la un compus de tip chinoidinic. Acesta, condensndu-se cu o nou molecul de benzidin, formeaz albastrul de benzidin. Reactivi

benzidin pur; acid acetic glacial: ap oxigenat 3 g/100 ml (12 ml perhidrol/100 ml). Mod de lucru ntr-o eprubet se introduc cteva cristale de benzidin, 5-10 picturi de acid acetic glacial i se agit pn la dizolvare complet. Apoi se adaug 1-2 ml urin, cteva picturi de ap oxigenat i se agit pentru omogenizare. n prezena pigmenilor sanguini apare o culoare verde care trece n albastru. 3. Examenul microscopic al sedimentului urinar Mod de lucru: ntr-o eprubet de centrifug se introduc aproximativ 10 ml de urin care se centrifugeaz 10 minute la 2000 rotaii/minut. se arunc supernatantul i se efectueaz un preparat nativ (ntre lam i lamel) pe o lam 76 x 26 mm se pune o pictur din sedimentul urinar se acoper cu o lamel 20 x 20 mm se examineaz la microscop cu obiectivul 20X i apoi cu 40X. Ocularele recomandate sunt cele de 10X Clasificarea sedimentului urinar: sedimentul urinar organizat sedimentul urinar neorganizat a) Sedimentul urinar organizat cuprinde: 1) Celulele sedimentului urinar Leucocitele sunt cele mai frecvent ntlnite elemente de sediment. Majoritatea sunt reprezentate de granulocitele neutrofile; mai rar, se ntlnesc i alte tipuri de leucocite:eozinofile, monocite, macrofage, limfocite, histiocite. Valori normale: < 5 celule/cmp de putere mare (obiectiv 40X) Leucocitele se prezint n urin sub form de globule sferice granulate, cu un nucleu de form i mrime diferit. Pe preparatele necolorate nu se poate face distincia ntre diferitele tipuri de leucocite dar pot fi identificate cu coloraii specifice. Nu exist ntotdeauna o concordan ntre numrul de leucocite/cmp i gravitatea leziunilor inflamatorii. Hematiile. n sedimentul proaspt hematiile apar ca nite discuri biconcave, cu diametrul mediu n jur de 6 m; n urinile concentrate hematiile ncep s se ratatineze. Valori normale: < 5 celule/cmp de putere mare (obiectiv 40X) n funcie de aspectul morfologic al hematiilor, putem diferenia o sngerare de origine glomerular de una neglomerular. - dac avem de-a face cu o sngerare neglomerular, hematiile vor fi eumorfe - dac sngerarea este glomerular hematiile eumorfe vor deveni dismorfe. Aceste modificri apar prin reversibilitatea sau ireversibilitatea rspunsului fa de varietatea influenelor pH-ului urinar, hipertonicitii medularei renale sau prezena acizilor grai, lizolecitinei, acizilor biliari i eventual a barbituricelor i salicilailor. Celulele epiteliale ale cilor urinare sunt de obicei absente sau rare ntr-un sediment normal. Aspectul acestor celule difer mult de cel al esutului de origine. Datorit pierderii legturilor tisulare, ele adopt o form rotund i prezint diferite

tipuri de transformri degenerative deoarece celulele moarte nu pot rezista atacului osmotic al urinei. n funcie de originea lor, exist 3 tipuri de celule epiteliale 1. Celulele scuamoase care de obicei nu provin din tractul urinar ci de la nivelul tractului genital, i rareori sunt semnificative . 2. Celulele tubulare renale provin de la nivelul tubilor renali i apar n afeciunile care intereseaz parenchimul renal. 3. Celulele tranziionale (uroteliale) provin de la nivelul uroteliului care cptuete tractul urinar de la bazinet pn la prima poriune a uretrei; apar n urin atunci cnd avem de-a face cu un proces inflamator urotelial. 2) Cilindrii urinari sunt formaiuni cilindrice bine conturate, cu capetele rotunde sau rupte care se formeaz la nivelul tubului contort distal i colector. Proteinele sangvine care trec prin membrana glomerular lezat se coaguleaz i se muleaz pe tubii uriniferi. Proteina Tamm-Horsfall (o glicoprotein secretat de ctre braul gros ascendent al ansei Henle) reprezint substana fundamental a cilindrilor. Tipuri de cilindri urinari: 1. Cilindrii hialini sunt formai n absena celulelor n lumenul tubilor i conin numai protein Tamm-Horsfall, ceea ce la confer un indice de refracie sczut. Aceti cilindrii nu indic o afectare renal atunci cnd sunt prezeni n numr mic. 2. Cilindri granuloi au suprafaa acoperit cu granulaii care au forme i mrimi diferite. Aceti cilindri sunt considerai o form de degenerare a cilindrilor celulari. 3. Cilindri ceroi se numesc astfel deoarece au un aspect asemntor cu ceara topit. n condiiile unui flux urinar sczut, un cilindru va rmne mai mult timp n interiorul tubilor, lund un aspect ceros. Prezena acestora indic ntotdeauna o afectare tubular de natur cronic, i, spre deosebire de cilindri hialini i granuloi, au ntotdeauna o semnificaie patologic. 4. Cilindri celulari apar la pacienii ce prezint o scdere a perfuziei renale i indic ntotdeauna o afectare tubular acut, dar nu indic extinderea sau reversibilitatea acestei afectri. b) Sedimentul urinar neorganizat cuprinde: 1) Cristalele. Urina este un mediu complex care influeneaz procesul de cristalizare, aceeai substan putnd cristaliza n diferite forme dependent de compoziia urinii. Studiul cristalelor se efectueaz att n microscopie obinuit ct i n lumin polarizat. Cristalele se exprim sub form de: rare, prezente, frecvente, semnalndu-se de asemenea prezena de macrocristalelor sau a microcristalelor. Principalele cristale ntlnite n sedinmentul urinar sunt: 1. Cristalele de acid uric. n microscopia optic obinuit cristalele de acid uric se prezint sub form de butoia sau lmie avnd o culoare galben-brun; n microscopia cu lumin polarizat aceste cristale sunt intens birefringente avnd o palet larg de culori, de la albastru-verzui la rou sau galben, n funcie de grosimea lor. 2. Cristalele de oxalat de calciu sunt slab birefringente i se prezint sub dou forme: dihidrat sau plic de scrisoare i monohidrat sau trunchi de copac, 3. Cristalele de fosfat amoniaco-magnezian apar adesea n urinile vechi i conservate necorespunztor datorit fermentaiei amoniacale bacteriene. Prezena lui n urina proaspt de dimineaa semnific o infecie urinar. Este birefringent i are un aspect de capac de sicriu.

2) Bacteriile i levurile. Prezena lor semnific o infecie urinar i n majoritatea cazurilor sunt nsoite i de o reacie leucocitar. Buletin de analiz Rezultatele examenului sumar de urin se nscriu ntr-un Buletin de analiz ca n modelul alturat. Un buletin de analiz care d relaii normale privind examenul sumar de urin se prezint astfel: Densitate................................. 1,015 g/ml pH................. ............................ 5 Nitrii.......................................... absent Proteine................................... absent Glucoza................................... absent Corpi cetonici........................... absent Urobilinogen............................ normal Bilirubin.................................. absent Sediment: 1-2 hematii/cmp, 1-2 leucocite/cmp, rare epitelii plate de tip scuamos.