Sunteți pe pagina 1din 27

VIII.

VITAMINE I COENZIME
Celulele vii conin pe lng componentele lor majore - proteine, acizi nucleici, hidrai de carbon i lipide - anumite substane organice, active la concentraii foarte mici (vitamine), care sunt vitale pentru multe forme de via, importana lor biologic fiind recunoscut prima dat datorit faptului c unele organisme nu le pot sintetiza i trebuie s le obin din surse exogene. Istoria vitaminelor, unul din cele mai importante episoade din istoria biochimiei, a avut un impact profund asupra sntii i a strii de confort, ca i nelegerii proceselor catalitice ce au loc n metabolismul organismului uman. Perioada cea mai fertil a fost ntre anii 1930 i 1940, cnd s-au izolat primele vitamine i li s-a stabilit structura molecular, realizri de proporii eroice pentru acele timpuri, deoarece, pentru a obine cantiti de miligrame de substan pur, era nevoie de sute de kilograme, chiar tone, de material brut. n decurs de civa ani s-au identificat tiamina (vitamina B1, substana antiberiberi), riboflavina (vitamina B2) i acidul nicotinic (factorul antipelagr). Ulterior s-a dovedit c aceste vitamine sunt elemente constitutive ale coenzimelor. De exemplu, enzima numit piruvat decarboxilaz, care catalizeaz reacia de decarboxilare a acidului piruvic la acetaldehid i dioxid de carbon, etap a fermentaiei alcoolice a zahrului de ctre drojdie, necesit un cofactor termostabil, numit cocarboxilaz. K. Lohmann i P. Schuster au reuit s izoleze cocarboxilaza n 1936. n cteva luni, ei au constatat c acest cofactor conine o molecul de tiamin sau vitamina B1. Imediat dup aceea s-a descoperit c riboflavina i acidul nicotinic sunt componente importante a altor coenzime implicate n oxidarea enzimatic a monozaharidelor. Aceste descoperiri au avut nu numai meritul c au demonstrat rolul biologic al multor vitamine i au artat de aceste substane sunt necesare doar n cantiti foarte mici, dar ele au deschis calea

95

nelegerii moleculare a mecanismului prin care coenzimele i enzimele catalizeaz reaciile chimice. n acest capitol, descriem vitaminele majore cunoscute azi, natura efectelor biologice, coenzimele n care vitaminele sunt componente eseniale i exemple ale rolului coenzimelor n reacii metabolice catalizate de enzime specifice. Tabel nr. VIII.1. Vitaminele i formele lor de coenzime Tipul Forma activ sau coenzima Funcia Hidrosolubile
tiamina riboflavina tiamin-pirofosfat (TPP) flavin mononucleotid (FMN) flavin adenin dinucleotid (FAD) acidul nicotinic nicotinamid adenin dinucleotid (NAD) nicotinamid adenin dinucleotid fosfat (NADP) coenzima A (Co-A) piridoxal-fosfat biocitina acid tetrahidrofolic coenzima B12 lipoillizina transferul grupei aldehid transferul atomului de hidrogen (electron) transferul atomului de hidrogen (electron) transferul atomului de hidrogen (electron) transferul atomului de hidrogen (electron) transferul grupei acil transferul grupei amino transferul carboxilului transferul unei grupe cu un atom de carbon deplasarea 1,2 a atomilor de hidrogen transferul atomilor de hidrogen i al grupei acil cofactor de hidroxilare ciclul vizual mecanismul calciului fosfatului antioxidant biosinteza protrombinei

acidul pantotenic piridoxina biotina acidul folic vitamina B12 acidul lipoic acidul ascorbic

Liposolubile
vitamina A vitamina D vitamina E vitamina K 1-cis-retinal 1,25-dihidroxicolecalciferol i a

Vitaminele se clasific n dou grupe mari, hidrosolubile i liposolubile.(tabelul nr. VIII.1.) Cu excepia vitaminei C, celelalte vitamine hidrosolubile au funcii de coenzime, bine lmurite. n plus, alte cteva substane hidrosolubile sunt necesare ca factori de cretere pentru unele organisme, dar concentraia lor este mai mare dect cea a vitaminelor; din acest grup fac parte: inozitolul, colina i carnitina.

96

Vitaminele liposolubile includ vitaminele A, D, E i K. Dintre toate organismele, numai animalele superioare par s aib nevoie de aceste vitamine din surse exogene; nu s-a stabilit nc exact care este rolul esenial al vitaminelor liposolubile n plante i microorganisme. Ele nu par s fie componente ale coenzimelor, dar funcioneaz pe alte ci, care necesit aceste substane doar n cantiti foarte mici. VIII.1. VITAMINE HIDROSOLUBILE VIII.1.1. Tiamina (vitamina B1) i tiamin-pirofosfatul Tiamina este necesar n alimentaia majoritii vertebratelor, ca i pentru unele microorganisme. Carena n tiamin provoac beri-beri la om i polinevrit la psri. Dup marele succes al lui Funk, care a separat un concentrat de factor anti-beri-beri, n 1925, B. C. P. Jansen a obinut produsul n stare cristalin; structura lui cristalin a fost stabilit de biochimistul american R. R. Wiliams. Tiamina este format dintr-o pirimidin substituit, legat printr-o punte metilenic de un tiazol substituit. Cea mai mare parte a tiaminei se afl n celul n forma sa activ, tiaminpirofosfat, denumit iniial cocarboxilaz. NH2 N H3C N CH2 N S tiamina
+

CH3 CH2-CH2OH

Tiaminpirofosfatul funcioneaz drept coenzim pentru dou clase de reacii catalizate enzimatic, din metabolismul hidrailor de carbon, n care gruparea aldehidic este ndeprtat i/sau transferat. 1) decarboxilarea cetoacizilor i 2) formarea sau degradarea -cetolilor. n aceste reacii, ciclul tiazolic al tiaminpirofosfatului servete drept transportor tranzitoriu al gruprii aldehidice active legate covalent. De asemenea este necesar prezena ionului de magneziu ca i cofactor.

97

NH2 N H3C N CH2 N S


tiamina
+

CH3

O O-

O O-

CH2-CH2-O-P-O-P-Opirofosfat

coenzima (B1)

Dac din dieta animalelor de experien lipsete tiamina, se constat o scdere a capacitii de utilizare a piruvatului, diferit de la esut la esut, ceea ce arat c unele esuturi mai srace n tiaminpirofosfat, pe care-l pierd rapid prin degradare metabolic sau excreie, n timp ce alte esuturi sunt bogate n coenzim, pe care o rein ntr-o form strns legat. La porumbei, de exemplu, lipsa tiaminei din alimentaie este cel mai puternic resimit n creier n timp ce activitatea esutului muscular este doar uor afectat. Aceast diferen ntre esuturi explic de ce primele simptome de deficien tiaminic la porumbei sunt la nivelul sistemului nervos, legate de poziie i coordonare (de aici termenul de polinevrit folosit pentru deficiena tiaminic la psri). Aceste diferene sunt evidente i la alte vitamine hidrosolubile, esutul cel mai sensibil la lipsa vitaminei variind de la vitamin la vitamin i de la o specie la alta. n general, alimentaia obinuit a omului asigur necesarul de tiamin la limita sa inferioar i, de aceea, unele alimente, ca, de exemplu, pinea alb sunt suplimentate cu tiamin. VIII.1.2. Riboflavina (vitamina B2) i flavinnucleotidele Pigmenii galbeni, care acum se tie c sunt identici sau nrudii cu riboflavina, au fost izolai iniial din esutul animal, ou i lapte. Pigmentul izolat din lapte, denumit iniial lactoflavin i ulterior riboflavin, este un factor de cretere necesar pentru cini i alte mamifere. n anul 1935 R. Kuhn i P. Karrer au stabilit structura riboflavinei, care este un derivat al izoaloxazinei. Riboflavina este sintetizat de toate plantele i de microorganisme, dar nu de ctre animalele superioare. H. Theorell, n Suedia i O. Warburg n Germania, au artat c piridin nucleotidele reduse sunt oxidate de o enzim ce conine o grupare prostetic galben, pe care Theorel a identificat-o ca riboflavin-5-fosfatul, sau flavin mononucleotidul (FMN). Mai trziu, n 1938, Wartburg a gsit o a doua

98

formul de coenzim a riboflavinei, flavin adenin dinucleotidul (FAD). FMN nu este un nucleotid adevrat, deoarece n locul unei pentoze conine, ca i FAD, alcoolul glucidic ribitol. O H3C H3C N N CH2 HCOH HCOH HCOH CH2OH riboflavina Flavin nucleotidele funcioneaz ca grupri prostetice ale enzimelor oxido-reductoare, aa numitele flavoenzime sau flavoproteine. Aceste enzime intervin n degradarea oxidativ a piruvatului, a acizilor grai i a aminoacizilor ca i n transportul electronilor. O H3C H3C N N CH2 HCOH HCOH HCOH CH2-O-PO3-2 FMN flavinmononucleotid N NH O N NH O

99

n majoritatea flavoenzimelor, flavin nucleotidul se leag strns dar nu covalent, de protein; O excepie fiind succinatdehidrogenaza n care flavin adenin nucleotidul, FAD, este legat covalent de un rest histidinic din lanul polipeptidic. Metaloflavoproteinele conin unu sau mai multe metale cofactori suplimentari. n ciclul catalitic a flavoproteinelor, izoaloxazina din flavin nucleotide este redus reversibil cu formarea nucleotidelor reduse FMNH2 i FADH2. NH2 N O
-O-P-O

N N N

O
-O-P=O

OH

OH

O CH2 HCOH HCOH HCOH H3C H3C CH2 N 10


5

8 7

9 6

1 2 3 4 NH

O FAD flavinadenindinucleotid Formele oxidate ale diferitelor flavoenzime sunt intens colorate; ele sunt galbene, roii sau verzi, datorit puternicii absorbii n domeniul vizibil. Prin reducere, flavoenzimele se decoloreaz, cu modificarea caracteristic a spectrului de absorbie, proprietate util pentru msurarea activitii lor.

100

VIII.1.3. Acidul nicotinic (niacina) i piridinnucleotidele Deficiena n acid nicotinic duce la la bolile pelagr, la om, i limba neagr la cine. ntre 1915 - 1920 ca urmare a unor studii de nutriie ntreprinse n zilele de orfani de ctre Joseph Goldberger, s-a stabilit c aceast boal era o boal de caren alimentar. Goldberger a artat c boala nu era infecioas, c ea era asociat unei alimentaii cu amidon degradat i putea fi prevenit prin suplimentarea hranei cu carne, ou i lapte. Totui, factorul alimentar responsabil nu a fost recunoscut, pn n 1937, ca fiind acidul nicotinic. Aceasta s-a realizat prin cercetri complet independente, ncepute n 1904, cnd biochimitii englezi A. Harden i W. J. Young au descoperit c pentru fermentaia alcoolic de ctre extractele de drojdie este nevoie de un cofactor termostabil, dializabil. Acest cofactor, numit iniial cozimaz sau coenzim I, a fost izolat de H. von Euler, n Suedia, n 1933. n 1934 Warburg i W. Christian au izolat o alt coenzim, foarte asemntoare cu coenzima I, care a fost numit coenzima II. Puin dup aceea, ei au gsit c ambele coenzime au drept component nicotinamida, amida acidului nicotinic. Numele acidului nicotinic vine de la faptul c el este un component al nicotinei, un alcaloid toxic din tutun, el mai este denumit i niacin, fr vreo semnificaie special. COOH N acid nicotinic CONH2 N nicotinamida

De fapt, plantele i majoritatea animalelor pot sintetiza acid nicotinic din ali precursori, ndeosebi din triptofan, un aminoacid. Dac animale sunt hrnite din abunden cu proteine bogate n triptofan, ele nu manifest nici o caren atunci cnd din alimentaie li se scoate acidul nicotinic. Dac ns coninutul n triptofan al proteinelor alimentare este mic, nu se mai asigur cantitatea necesar pentru sinteza niacinei i astfel apar semnele de caren. Pelagra este, n primul rnd, rezultatul lipsei acidului nicotinic, dar de fapt, este consecina unei sume de carene n diferite vitamine i n acizi grai eseniali.

101

NH2 N N N OH HO O N O OO O-

nicotinamida

CONH2 CH2-O-P-O-P-O-CH2 N O
+

adenozin mononucleotid

OH

OH

nicotinamid mononucleotid

NAD+ nicotinamidadenin dinucleotid n formula de mai sus am prezentat structura nicotinamid adenin dinucleotidului (NAD). Cea de a doua coenzim nicotinamid adenin dicleotid fosfat (NADP) se deosebete de prima prin faptul c hidroxilul din poziia 3 a ribozei care se leag de nucleul adeninic este esterificat cu acid fosforic. Aceste coenzime se mai numesc i piridin coenzime sau piridin nucleotide, deoarece nicotinamida este un derivat piridinic. Piridin nucleotidele, sunt coenzime a unui mare numr de oxidoreductaze, denumite generic piridin-dehidrogenaze. n timpul ciclului catalitic aceste coenzime se leag de molecula proteic relativ slab, deci ele se comport mai curnd ca substraturi, dect ca grupri prostetice. n cursul ndeprtrii enzimatice a atomilor de hidrogen din moleculele substratului specific, coenzimele funcioneaz ca acceptori de electroni. Un atom de hidrogen din substrat este transferat ca ion de hidrur pe nicotinamida din formele oxidate ale acestor coenzime (NAD + i NADP+), reducndu-le (NADH i NADPH); cellalt atom de hidrogen al substratului se elibereaz sub form de proton. Un exemplu de reacie catalizat de o dehidrogenaz cu piridin este oxidarea malatului la oxalilacetat, catalizat de malat dehidrogenaz, o etap important n oxidarea hidrailor de carbon pe calea ciclului acidului tricarboxilic. Malat dehidrogenaza din ficat are drept coenzim specific NAD+ i nu accept NADP+ . n general dehidrogenazele cu piridin sunt specifice fie pentru NAD+ fie pentru NADP+ ,dar unele cum este glutamat dehidrogenaza accept ambele coenzime.

102

COOHO-C-H CH2 COOmalat +

H CONH2 N R NAD+

COOC=O CH2
-

H +

H CONH2 + H+

COO oxalilacetat

N R NADH

VIII.1.4. Acidul pantotenic i coenzima A Acidul pantotenic a fost pentru prima dat recunoscut ca factor de cretere a drojdiei de bere de ctre A. J. Williams. Este sintetizat de plante i microorganisme, dar este necesar s fie prezent n alimentaia vertebratelor. Puin timp de la descoperirea sa, acidul pantotenic a fost identificat n esuturi ca fcnd parte dintr-o combinaie cu mas molecular mic, care a fost denumit coenzima A. Aceast descoperire aparine lui N. O. Kaplan i F. Lipmann, care, anterior, artase c anumite acetilri enzimatice necesit o coenzim termostabil. CH3 O

HO - CH2 - C - CH - C - NH - CH2 - CH2 - COOH CH3 OH acid pantotenic


NH2 N N N N O O OO PO3-2 coenzina A O OCH3 CH3 OH

CH2-O-P-O-P-O-CH2 - C - CH - CO-NH-CH2-CH2-CO-NH-CH2-CH2- SH

OH

Funcia coenzimei A este de a transporta gruprile acil n oxidarea enzimatic a acizilor grai, n oxidarea enzimatic a piruvatului, n acetilri
103

biologice i n sinteze de acizi grai. Mecanismul exact prin care coenzima A transport gruprile acil a fost stabilit de ctre biochimistul german F. Lynen n 1951. El a izolat, din drojdie, o form activ de acetat i a artat c ea este alctuit dintr-un tioester al acidului acetic cu gruparea tiol (sulfhidril) a coenzimei A. Coenzima A se prescurteaz CoA (sau CoA-SH, pentru a se evidenia gruparea tiol). Acetilcoenzima A (Acetil-CoA) se formeaz prin oxidarea enzimatic a piruvatului i a acizilor grai; ea poate aprea i ca urmare a aciunii cu acetil-CoA-sintetazei asupra acetatului liber: ATP + CoA + AcOAMP + Ac-CoA + PP

Acetil-CoA astfel format poate apoi s reacioneze enzimatic cu un acceptor de grupri acil, cum este colina, formnd acetil-colina. VIII.1.5. Vitamina B6 i piridoxin coenzimele Pridoxal 5-fosfatul este coenzima provenit de la vitamina B6 i are structura de mai jos. Vitamina B6 se refer, n realitate asupra unui grup de produi nrudii ntre ei i anume piridoxolul (piridoxina), piridoxamina (coenzima se numete piridoxamin-5-fosfat) i piridoxalul (cu coenzima piridoxal 5 fosfat). Vitamina B6 care se mai numete i adermin face parte din grupa vitaminelor hidrosolubile, cu aciune asupra pielii. Vitamina B6 poate vindeca pelagra obolanilor dac este nsoit de acidul pantotenic. Aceast vitamin s-a izolat n stare cristalin din cojile de orez i drojdie. Numele de adermin a fost propus de ctre Kuhn i Wendt; autorii americani au denumit-o piridoxin Piridoxina se gsete n drojdie, coji de orez, extracte de ficat, melas, porumb, lapte, albu de ou etc. n celule adermina este legat de proteine, de care poate fi desfcut prin fierbere cu ap. Este stabil fa de cldur, alcalii i acizi. Un regim lipsit de piridoxin produce obolanilor o dermatit localizat, n deosebi pe labe, nas i urechi. 10 g pe zi poate vindeca aceast afeciune.

104

CH2OH HO H3C CHO HO H3C CH2OH N piridoxal CH2OH HO H3C CH2NH2 HO H3C HO H3C CH2OH N piridoxina CHO OCH2-O-P-OO

N piridoxalfosfat CH2NH2

O-

CH2-O-P-O-

N piridoxamina

O N piridoxaminfosfat

Piridoxal 5 fosfatul este implicat n mai multe reacii din metabolismul aminoacizilor incluznd transaminrile, -decarboxilrile, racemizrile, ,eliminrile, ,-eliminrile, aldolizrile i -decarboxilarea acidului aspartic. Reaciile de mai jos arat cum au loc aceste transformri n care rolul principal revine piridoxal fosfatului. A.Braunstein emite ipoteza dup care piridoxalfosfatul funcioneaz drept coenzim datorit capacitii gruprii sale aldehidice de a reaciona cu gruparea amino a uni aminoacid, cu formarea unei baze Schiff ntre aminoacizi i piridoxalfosfatul legat de enzim. Apoi, gruparea amino se desface de pe aminoacid acesta transformndu-se n -cetoacid. Piridoxaminfosfatul rezultat, legat de proteina enzimatic reacioneaz cu un alt -cetoacid, acceptor al gruprii amino, printr-o reacie invers celei descrise mai sus astfel nct s se formeze un nou aminoacid i piridoxalfosfatul regenerat.
R1 - CH - NH2 + O = CH - E COOH
-H2O +H2O

[R1 - CH - N = CH - E COOH

105

R1 - C = N - CH2 - E] COOH

-H2O +H2O

H2N - CH2 - E + R1 - CO - COOH

VIII.1.6. Biotina i bioticina Biotina a fost izolat prima dat de ctre biochimistul olandez F. Kgl, n 1935, dintr-un concentrat de ficat despre care se tia c are n compoziie factori de cretere pentru drojdie. V. du Vigneaud i colaboratorii i-au stabilit structura. Biotina conine un ciclul imidazolic condensat cu unul tiofenic. Biotina protejeaz animalele mpotriva toxicitii provocate de hrnirea cu albu de ou crud. Ea este sintetizat i de bacteriile intestinale, de aceea o alimentaie fr biotin nu provoac o caren n biotin. Albuul de ou crud provoac ns carena n biotin deoarece el conine o protein, ovidina, care leag specific i foarte strns biotina i mpiedec absorbia ei din intestin. Aa se explic simptomele datorit carenei n biotin la cei ce consum cantiti mari de ou crude. O HN NH (CH2)4-COOH HN O NH CH2-CH2-CH-COOH

biotina izolata din ficat O HN NH

CH3 biotina izolata din ou

(CH2)4-CO-NH-(CH2)4-CH-COOH NH2 biocitina produsa de levuri

106

Muli ani modul de aciune al biotinei a rmas necunoscut, dar n cele din urm s-a constatat c biotina particip la transferul sau ncorporarea enzimatic a dioxidului de carbon. Ulterior s-a gsit c biotina face parte din gruparea prostetic legat covalent a propionil-CoA carboxilazei. Molecula de biotin se leag, dnd o amid substituit, cu gruparea -amino a unui rest de lizin din proteina enzimatic, iar compusul rezultat se numete biotinillizina sau biocitin. Biotina legat servete drept transportor al dioxidului de carbon n aciunea unor enzime carboxilante, de exemplu, propionil-CoA carboxilaz i acetil-CoA carboxilaza, sub forma derivatului carboxibiotina foarte instabil. Desfurarea general a acestor reacii de carboxilare este indicat de ecuaia:
ATP + HCO3- + biotinil-enzim
carboxibiotinil-enzim + substrat

ADP + P + carboxibiotinil-ebzim
biotinil-enzim + substrat carboxilat

VIII .1.7. Acidul folic i formele sale de coenzim Acidul folic (n l. latin folium frunz) s-a gsit prima dat n frunzele de spanac, dar n general, este foarte rspndit n plante; carena n acid folic ntlnit la animale duce la ncetinirea creterii i la diferite forme de anemie. Acidul folic conine trei elemente constitutive: 1) o pteridin substituit, 2) acid p-aminobenzoic i 3) acid glutamic. Acidul folic mai este denumit i acid pteroilglutamic sau folacin. Pteridina este compusul biciclic azotat de la care deriv pterinele, care sunt derivai ai 2-amino-4-hidroxi-pteridinei. Unele pterine, ca xantopterina, fac parte din pigmenii ochilor i aripilor unor insecte. Pterina din acidul folic este 6-metilpterina. n unele specii acidul folic este legat prin gruparea -carboxil a acidului glutamic de una sau mai multe resturi de acid glutamic suplimentar, legate prin legturi peptidice prin gruparea -carboxil a resturilor de acid glutamic. Unele organisme au nevoie doar de poriunea de acid p-aminobenzoic a acidului folic nu de ntreaga molecul de acid folic; ele i pot sintetiza singure acidul folic, dac li se asigur aportul de acid paminobenzoic. Cel mai evident simptom biochimic al carenei n acid folic este inhibarea biosintezei purinelor i a pirimidinei timina. Studii enzimatice i metabolice au artat c, n form de coenzim acidul folic funcioneaz n transferul unor grupri cu un atom de carbon ce are loc n biosintezele menionate, ca i n altele. Acidul folic este transformat prin reducere n dou
107

etape la forma sa de coenzim acidul tetrahidrofolic. Tetrahidrofolatul, abreviat deseori FH4, este un transportor intermediar al gruprilor hidroximetil (-CH2OH), formil (-CHO) sau metil (-CH3), ntr-un mare numr de reacii enzimatice n care aceste grupri sunt transferate de la un metabolit la altul, sau sunt interconvertite. OH N H2N N N N CH2-NH CO-NH-CH-CH2-CH2-COOH COOH
acid glutamic

acid p-aminobenzoic

2-amino-4-hidroxi -6-metilpteridina acid pteroic

acid pteroilglutamic (acid folic) OH N 3 H2N


2 4 1

H N N H

5 6 8 7

CH2-NH

10

CO-NH-CH-CH2-CH2-COOH COOH

acid tetrahidrofolic VIII.1.8. Acidul lipoic Acidul -lipoic este disulfura intern a acidului 6,8-ditiooctanoic. CH2CH2CH2CH2COOH S S acid lipoic (forma oxidata)

108

HSCH2CH2CHCH2CH2CH2CH2COOH SH acidul lipoic (forma redusa) Acidul lipoic particip ca i acceptor de electroni ntr-o serie de reacii de dehidrogenare cum ar fi reacia catalizat de piruvatdehidrogenaz, care transform acidul piruvic n acetil-coenzim A. n urma acestei reacii echivalentul de reductor se cumuleaz sub form de NADH R-CO-COO- + NAD+ + CoASH CO2 + NADH + R-CO-SCoA

Rolul acidului lipoic n aceast reacie este de a intermedia transferul de electroni spre forma oxidat a NAD-ului. La acest proces mai particip ca i cofactor i tiaminpirofosfatul. n esuturile animale, vegetale i n culturile de microorganisme acidul lipoic se gsete sub form legat cu proteinele. Legtura de tip amidic este realizat ntre gruparea carboxilic a acidului lipoic i gruparea -amino din restul de lizin, rest specific pentru enzima dihidrolipoil-trans-acetilaz. Necesitile minime de acid lipoic pentru organismul uman nu se cunosc pentru c nu s-a putut produce pe cale experimental o caren a acestei vitamine. VIII.1.9. Vitamina B12 i coenzimele B12 Vitamina B12 particip, dup cum se pare, ntr-o serie de reacii biochimice de izomerizare a catenelor.. Reaia fost studiat la Clostridium tetanomorphum, n care s-a i descoperit coenzima, prin formarea acidului metilaspartic din acid glutamic. n mod asemntor vitamina B12 particip la interconversia succinilCoA la metil-malonil-CoA. n aceste reacii se pare c are loc o transpoziie a gruprii carboxil. Cobalamina particip i la dismutarea alcoolilor dihidroxilici vicinali cu formarea unei combinaii carbonilice. CH3CHOHCH2OH CH3CH2CHO

109

OH

OH

CH2 O N N H2C-OC-H2C-H2C H2N-OC-H2C H3C H3C H2N-OC-H2C A CH3 N Co D N N CH3 C CH3 N N N

NH2 CH3 CH2-CO-NH2 B CH2-CH2-CO-NH2

HN-OC-H2C-H2C CH2 CH-CH3 O O P OO N HO N

CH3

CH2-CH2-CO-NH2 CH3 CH3

HO-CH2 O vitamina B12 n structura vitaminei B12 se remarc prezena unui nucleu porfirinic n centrul cruia exist un ion de cobalt. Patru coordinaii ale cobaltului sunt satisfcute de cei patru atomi de azot porfirinici, a cincea coordinaie de un atom de azot dimetilpurinic i a asea coordinaie de o molecul de adenozin.
110

COOH HCNH2 HCH HCH COOH acid glutamic

COOH HCNH2 HCCOOH CH3 acid metilaspartic

VIII.1.10. Vitamina C Vitamina C sau acidul ascorbic, a fost izolat prima dat, n stare pur cristalin, din sucul de lmie, de ctre biochimitii americani C. G. King i N. A. Waugh n 1932. Este vitamina cu una din cele mai simple structuri, fiind lactona unui acid glucidic. Acidul ascorbic este necesar n alimentaia ctorva vertebrate: omul, maimua, cobaiul i civa peti. Unele insecte i alte nevertebrate au, de asemenea, nevoie de acid ascorbic, dar majoritatea celorlalte animale i plante superioare pot sintetiza acid ascorbic din glucoz i ali precursori. Acidul ascorbic nu se gsete n microorganisme i nici nu par a fi necesare pentru ele. Acidul ascorbic este un reductor puternic, ce pierde uor atomii de hidrogen, transformndu-se n acid dehidroascorbic, care are, de asemenea, aciune vitaminic. Activitatea vitaminic se pierde cnd ciclul lactonic al acidului dehidroascorbic este hidrolizat, cu formarea acidului dicetogulonic. Acidul ascorbic din alimente se distruge n mare msur n timpul gtitului. n esuturile animale i vegetale sunt prezente cantiti de acid ascorbic relativ mari n comparaie cu alte vitamine hidrosolubile. n plasma sangvin uman se gsete cca l mg acid ascorbic n 100 ml snge. Acidul ascorbic este prezent
n deosebi n citrice i n tomate. Pentru prevenirea scorbutului sunt suficiente 20 mg acid ascorbic pe zi; dar exist dovezi c pentru asigurarea unei funcii biologice complet normale sunt necesare cantiti mult mai mari.

111

HO-C HO-C HO-C HC HO-CH CH2OH O

HO-C O=C O=C HC HO-CH CH2OH O

COOH O=C O=C HO-CH HO-CH

CH2OH acid L-ascorbic acid L-dehidroascorbic acid L-dicetoascorbic

n ciuda concentraiei relativ mari a acidului ascorbic n esuturi i structurii sale relativ simple, funcia sa fiziologic nu este nc cunoscut. Vitamina C este un cofactor n hidroxilarea enzimatic a prolinei la hidroxiprolin i la alte hidroxilri, dar ea nu este specific pentru aceste reacii i poate fi nlocuit de ali ageni reductori, care nu au activitate antiscorbutic. VIII.2. VITAMINE LIPOSOLUBILE VIII.2.1. Vitamina A Stepp n 1909 i apoi Hopkins i McCollum, au observat c la oarecii i obolanii hrnii cu alimente din care s-au ndeprtat substanele solubile n eter-alcool, se produce xeroftalmia, iar animalele tinere nceteaz din cretere. La nceput se confunda aceast activitate ce aciunea vitaminei D. Steenbock i McCollum gsesc c trecndu-se un curent de aer prin untura de pete, se menine proprietatea antirahitic dar dispare factorul de cretere. n 1919 Steenbock stabilete c exist un paralelism ntre coninutul de carotinoide al uleiurilor vegetale i activitatea vitaminic A, carotina poate chiar vindeca avitaminoza A. Se stabilete astfel c provitamina A este carotina. Vitamina A i exercit aciunea sa asupra esuturilor epiteliale i octodermului. n primul rnd sunt sensibile organele genitale (mucoasa vaginal i testiculele), apoi ochii (hemeralopie, xeroftalmie, cheratomalacie) i organele de absorbie. Rezistena organismului la infecii scade; creterea animalelor tinere nceteaz. Se produc, de asemenea tulburri n creterea dinilor, pietre n cile urogenitale, tulburri nervoase i tulburri ale vederii.

112

Rol de provitamine A au -, - i -carotinele.

alfa-carotina

Din -carotin , prin oxidare, sub influena -carotenazei din ficat, vor rezulta 2 moli de vitamina A1. Vitamina A a fost gsit numai n organismele animale. Acestea nu se pot sintetiza n totalitate, ci se obin prin transformarea provitaminelor A n ficat.

CH2OH vitamina A Necesarul de vitamina A al omului, mai puin de 1 mg pe zi este asigurat, n general, de ctre vegetalele verzi i galbene ca: spanacul, salata, morcovii etc. Abuzul de vitamina A provoac fenomene toxice i determin la copii o foarte mare fragilitate i fracturi ale oaselor, precum i o dezvoltare anormal a ftului. Dintre numeroasele funcii biologice ale vitaminei A, bine cunoscut este doar rolul su n ciclul vizual al vertebratelor, i anume secvena desfurrii evenimentelor moleculare n: 1) absorbia energiei luminoase de ctre pigmentul celulelor fotoreceptoare din retin, cu formarea unui produs fotochimic specific, 2) iniierea unui impuls nervos de ctre fotoprodus i 3) regenerarea formei fotosensibile a pigmentului vizual. Retina uman ca i cea a altor animale, conine dou tipuri de celule fotoreceptoare sensibile. Celule n form de bastona, sesizeaz intensiti luminoase mici, dar nici o culoare; ele sunt celule care particip la vederea pe ntuneric i a cror activitate este afectat de carena n vitamina A. Celulele n form de con, care sesizeaz culorile, sunt adaptate pentru intensiti luminoase mari. Ciclul vizual al celulelor bastona a fost studiat intensiv de ctre G. Wald de la Universitatea Harvard, care a trasat liniile

113

directoare ale cunotinelor noastre actuale asupra rolului vitaminei A n acest ciclu. Celulele bastona din retin conin multe vezicule discoide aezate compact, paralel cu suprafaa fotoreceptoare a retinei. Aproape jumtate din membrana acestor vezicule este reprezentat de proteina conjugat fotoabsorbant, rodopsina, cu o greutate molecular de cca. 28.000. Rodopsina este insolubil n ap, dar poate fi extras din vezicule cu ajutorul detergenilor. Rodopsina este format din proteina opsin, strns legat de 11-cis-retinal, aldehida vitaminei A, care conine n catena lateral patru legturi duble: trei dintre acestea sunt forme trans, iar a patra, n poziia 11,12 este n form cis.

ciclul vizual al bastonaselor Expus la lumin, 11-cis-retinalul este transformat n per-transretinal, ceea ce provoac modificri substaniale n geometria moleculei. Aceast reacie se desfoar neenzimatic, ea este o simpl reacie fotochimic care poate avea loc chiar i la temperatura azotului lichid. Dup izomerizare, sufer o serie de alte modificri care, n final, duc la disocierea rodopsinei decolorate cu formare de opsin liber i per-trans-retinal, care este declanatorul impulsului nervos.

114

11 cis-retinal

O O H

per-trans-retinal Regenerarea rodopsinei din opsin i per-trans-retinal presupune o nou izomerizare n sens invers, n 11-cis-retinal. Aceasta pare s aibe loc ntr-o succesiune de reacii enzimatice, catalizate de dou enzime: 11-cis-retinol + NAD+ 11-cis-retinal + NADH + H+
(retinal reductaz)

per-trans-retinal + NADH + H+ per-trans-retinol + NAD+ (retinal reductaz) per-trans-retinol 11-cis-retinol


(retinol izomeraz)

11-cis-Retinalul astfel format se poate recombina cu opsina, pentru a da rodopsin, completnd astfel ciclul vizual. Punctul crucial al ciclului vizual este mecanismul prin care decolorarea rodopsinei iniiaz impulsul nervos pe retin, astfel nct lumina s fie perceput n creier. Cercetri recente arat c absorbia luminii de ctre veziculele discoidale din celulele bastona provoac, pe lng izomerizarea 11-cis-retinalului n per-trans-retinal, i o modificare a conformaiei moleculei de rodopsin. Aceast modificare conformaional afecteaz permeabilitatea membranelor veziculelor, mai exact diferena de potenial a acesteia, astfel nct ionii de calciu ies din vezicule, declannd impulsul nervos. Ionul de calciu este un mesager sau mediator care cupleaz activitatea sistemului

115

receptor cu sistemul excitant, aa cum cupleaz sistemul contractil al muchiului cu impuls nervos excitant. Deoarece carena de vitamina A afecteaz toate esuturile mamiferelor i nu numai retina, descoperirea rolului retinalului n ciclul vizual nu a epuizat nici pe departe problema funciilor biologice a vitaminei A. Se pare c, n general, vitamina A este implicat n transportul ionului de calciu prin anumite membrane, analog cu mecanismul din celulele bastona; un asemenea rol ar explica efectele carenei i abuzului de vitamin A asupra esutului osos i conjunctiv. VIII.2.2. Vitamina D Se tie de mult vreme c rahitismul, o boal a oaselor n cretere, care provoac arcuirea picioarelor, este frecvent n zonele cu ierni lungi, unde copiii sunt puin expui la soare, i c uleiurile din ficat de pete pot preveni simptomele de mbolnvire. Pornind de la aceste date, s-a ajuns la izolarea i identificarea ctorva substane cu activitate real sau potenial de vitamina D. cele mai importante sunt vitamina D2, sau ergocalciferolul, i vitamina D3 sau colecalciferolul, forma existent n mod normal la mamifere. Aceti compui pot fi considerai steroizi cu ciclul B desfcut. Iradierea cu lumin ultraviolet a unor alimente duce la formarea unor substane cu activitate vitaminic D; cercetarea precursorilor vitaminei D a artat c 7dehidrocolesterelul, o substan prezent n mod obinuit n esuturile animale, se transform prin iradiere n colecalciferol. n mod asemntor, ergosterolul, un sterol din drojdie se transform prin iradiere n ergocalciferol. Aceasta a dus la concluzia c precursorul natural al colecalciferolului la om este 7-dehidrocolesterolul prezent n piele; transformare lui n vitamina D3 activ necesit iradierea pielii cu lumin solar. Aceasta este calea obinuit prin care oamenii dobndesc vitamina D. Majoritatea alimentelor naturale conin puin vitamin D sau deloc; vitamina D preformat provine din uleiurile din ficat de pete sau din surse naturale iradiate. Preparatele comerciale de vitamina D se obin prin iradierea cu lumin ultraviolet a ergosterolului din drojdie. Un adult are nevoie de cca 20 g vitamin D pe zi. Vitamina poate fi depozitat n cantiti suficiente n ficat, astfel nct se poate administra o doz pentru cteva sptmni. Abuzul de vitamin D provoac, dup cum am vzut i la vitamina A, o fragilitate a oaselor i fracturi multiple, ceea ce sugereaz c cele dou vitamine au rol n transportul i depunerea biologic a calciului.

116

iradierea pielii

HO 7-dehidrocolesterol

HO vitamina D3 (calciferol)

Primele date importante n cercetare s-au obinut din studiul transformrilor metabolice ale colecalciferolului sintetic radioactiv, cu activitate specific foarte mare, ce s-a injectat la animale n dozele n care vitamina are activitate biologic. Dup injectarea colecalciferolului radioactiv, n snge i esuturi a fost identificat un derivat radioactiv al acestuia, 25-hidroxicolecalciferolul. Acest compus are o activitate biologic mai mare dect a colecalciferolului i, dup cum s-a constatat ulterior este forma cea mai frecvent de vitamin D n animale, rezultat ca urmare a transformrii colecalciferolului n ficat. Intr-o alt serie de experiene, 25-hidroxicolecalciferolul radioactiv a fost injectat la animale i s-a constatat c el este metabolizat n 1,25dihidroxicolecalciferol. Acest compus este mult mai activ biologic; administrarea lui produce stimularea rapid a absorbiei ionului de calciu de ctre intestin. Experienele lui E. Kodicek au artat c rinichiul este locul de formare a 1,25-dihidroxicolecalciferolului care pare s fie forma biologic activ a vitaminei D, capabil s acioneze direct asupra intelor majore, intestinul subire i oasele.

iradierea

HO ergosterol

HO vitamina D2

117

OH
ficat rinichi

HO

HO
colecalciferol 25-hidroxicolecalciferol

OH

OH

HO

1,25-dihidroxicolecalciferol

VIII.2.3. Vitamina E Vitamina E a fost identificat pentru prima dat n uleiurile vegetale ca factor care restabilete fertilitatea la obolanii hrnii exclusiv cu lapte de vac. Ea a fost izolat din germenii de gru i a fost numit tocoferol (n l. greac tokos naterea unui copil). n plante s-au identificat civa tocoferoli cu activitate vitaminic E; cel mai activ i mai abundent este -tocoferol.
CH3 HO H3C CH3 O CH3 vitamina E (tocoferol) CH3 CH3 CH3

CH2-CH2-CH2-CH-CH2-CH2-CH2-CH-CH2-CH2-CH2-CH-CH3

Nu se cunoate nc funcia biologic a vitaminei E. Un motiv este acela c lipsa vitaminei E provoac, pe lng sterilitate, multe alte simptome la obolanii masculi i femele, cum ar fi degenerarea rinichilor, pigmentarea brun a lipidelor de depozit, necroza ficatului, distrofia muchilor scheletici, ndeosebi la animalele ierbivore, cum este cobaiul. Nu se tie nc dac lipsa tocoferolului provoac sterilitate i la om.

118

Tocoferolii au o activitate antioxidant, adic ei previn autooxidarea acizilor grai foarte nesaturai, cnd acetia sunt expui la oxigen molecular. Aceast autooxidare duce la polimerizarea acizilor grai nesaturai, un proces similar celui care are loc la uscarea uleiului de in, cu formarea unui polimer dur, insolubil. Unele simptome ale carenei n tocoferol la animale pot fi prevenite de ali compui cu activitate antioxidant, ca N,N-dimetil-pfenililendiamin, care nu se nrudesc structural cu tocoferolul i nu se gsesc n natur. Una din funciile tocoferolului ar putea fi protejarea acizilor grai nesaturai din lipidele membranelor biologice mpotriva aciunii oxigenului molecular. n mod normal n esuturi nu gsim produi de autooxidare ai grsimilor nesaturate, dar ei au fost detectai n depozitele de grsime, n ficat i alte organe, n cazurile de caren n tocoferol. Totui este puin probabil ca aceasta s fie singura funcie a tocoferolului. Coenzima Q i unii derivai ai si au, de asemenea, o activitate tip tocoferol. VIII.2.4. Vitamina K Vitamina K (K de la Koagulation, n limba danez) a fost descoperit pentru prima dat de H. Dam n Danemarca, ea fiind un factor de nutriie necesar pentru asigurarea unui timp normal de coagulare a sngelui la psrile alimentate cu o hran care determina o tendin de hemoragie. Ea a fost izolat i s-a stabilit structura n 1939 de E. A. Doisy i colaboratorii. Se cunosc cel puin dou forme de vitamina K. Se pare c forma activ este vitamina K2. Menadiona, sau vitamina K3, un produs sintetic, nu are catena lateral. Carena n vitamina K este greu de provocat la obolan sau la om, ntruct aceast vitamin este sintetizat i de flora intestinal. O CH3 CH2CH=CCH2-CH2CH=CCH2-CH2CH=CCH2-CH2CH=CCH3 O CH3 CH3 CH3 CH3

119

O CH3 (CH2CH=CCH2)nH O vitamina K2 (n poate fi 6, 7, 8, 9, sau 10 in functie de specie) CH3

O CH3

O vitamina K3 (medadiona)

Singurul efect molecular cunoscut al carenei n vitamina K este imposibilitatea ficatului de a sintetiza enzima proconvertina. Aceast enzim catalizeaz o etap din complexa secven de reacii ale formrii pretrombinei, precursor al trombinei, o proteine care accelereaz conversia fibrinogenului n fibrin (proteina insolubil ce reprezint partea fibroas a cheagului sanguin). Dicumarolul, analog al vitaminei K, produce la animale simptome similare carenei vitaminei K; se pare c el blocheaz aciunea vitaminei K. Dicumarolul este folosit n clinic pentru a preveni coagularea n vasele sanguine. Deoarece vitamina K este sintetizat de multe microorganisme i de majoritatea plantelor i se afl n esuturile tuturor organismelor, s-a pus ntrebarea dac ea nu are o funcie biologic mai general dect cea OH CH2 O O O O OH

antihemoragic, deja cunoscut. Exist unele dovezi c vitamina K poate fi coenzim ntr-o cale metabolic specializat pentru transportul electronilor n esuturile animale; vitamina K este o chinon care poate fi redus reversibil la chinol, deci poate fi un transportor de electroni.

120

95