UTILIZAREA MEDIULUI DE CULTUR DREW LA CULTIVAREA ALGEI AZOT FIXATOARE ANABAENOPSIS SP.

Dobrojan Sergiu, Stratulat Irina, Dobrojan Galina, Popescu Tudor, Negara Corina Catedra Ecologie, Botanic i Silvicultur Abstract: Cultivation of algae Anabaenopsis sp on Drew medium is efficient for maintaining in laboratory condition, can obtain a maximal biomass of 1,040,05 g/l in 11-12 days. Growth phases for algae Anabaenopsis sp cultured on Drew medium is: one day for lag phase, one day log phase, 7 days exponential phase and one day stationary. The higher specific growth speed is in log phase, and for exponential is 0.0100,004 days-1. INTRODUCERE La moment, se cunosc mai multe medii de cultur utilizate la cultivarea algelor. Mediile de cultivare se selecteaz n funcie de specificul cultivrii i scopul experimentului. Pentru cultivarea algelor, n scopul obinerii biomasei se utilizeaz mediile lichide, care permit studierea caracteristicilor fiziologice, morfologice, citologice, biochimice etc. [7]. Un rol deosebit att n natur ct i n viaa omului l au algele cianofite, care de fapt sunt cultivate mai frecvent n scopuri industriale i tiinifice. Unii reprezentani ai ncrengturii Cyanophyta au capacitatea de fixare a azotului n sol, fapt care sporete mult interesul cultivrii lor. Pentru obinerea biomasei de alge cianofite azotfixative se utilizeaz mai multe medii de cultur cum ar fi de exemplu: Bristol; Gusev, Telitcenco, Fedorov nr. 1-2; Fogga; Beneche; Drew etc., care ns difer n funcie de specia algal [5]. Din mediile sus menionate, cel mai ieftin i uor de preparat este mediul Drew, deoarece este compus din patru sruri care nu depesc cantitatea de 0,2 g/l, dar care nu asigur ns obinerea biomasei algale n cantiti mari. Mediul Drew este utilizat, att pentru cultivarea algelor n scopul obinerii biomasei ct i la studierea calitativ i cantitativ a algoflorei unor soluri [8, 9]. Rezultatele unor cercetri atest c mediul de cultur Drew poate fi utilizat la cultivarea algei Anabaenopsis sp,ns caracteristicile fiziologice ce indic creterea biomasei lipsesc [3]. Un interes major fa de cultivarea algei Anabaenopsis sp se exprim prin coninutul chimic valoros. Unele cercetri arat c tulpina algei Anabaenopsis sp. (Albufera), cultivat pe mediul de cultur Arnon cu adaos de 30 mM NaCl, prezint o surs important de ficobiliproteine: proteine 52,22,5%; c-ficoeritrina 0,80,1%; c-ficocianina 13,00,9%; aloficocianina 6,30,2%[2], ce sporete interesul cultivrii n deosebi n scop farmaceutic. Alte investigaii accentueaz c alga Anabaenopsis sp. (Albufera), cultivat pe mediul de cultur

Arnon cu adaos de 30 mM NaCl i 10 mM NaHCO 3, conine cantiti semnificative de pigmeni (clorofila a- 1,4%; caroten 0,4%, c-ficoeritrina 1,6%, c-ficocianina 12,2% i aloficocianina 5,4%) care reprezint surs de colorani naturali, antioxidani, vitamine etc. [1]. Cercetrile menionate scot n eviden rezultatele obinute la cultivare unei tulpini ai algei Anabaenopsis sp. cultivat pe mediul de cultur Arnon, care ns este cu mult mai costisitor dect mediul Drew. De aceea n prezenta lucrare ne-am propus drept scop s studiem procesul de cretere a alga Anabaenopsis sp. cultivat pe mediul de cultur Drew. MATERIALE I METODE n experimente a fost antrenat tulpina algei Anabaenopsis sp. care se depoziteaz, n cultur pur, n colecia LC Algologie. Alga Anabaenopsis sp. a fost cultivat, dup metoda de cultivare periodic [6], pe mediul de cultur Drew, preparat pe baza apei distilate, cu urmtoarea componen (g/l): K2HPO4 0,2; MgSO47H2O 0,2; CaCl2urme; FeCl3 urme [5]. Mediul de cultur obinut a fost sterilizat prin metoda fizic. Cultivare s-a efectuat n baloane Erlenmeyer cu volum de 250 ml. n calitate de inocul s-a utilizat alga Anabaenopsis sp.cultivat pe mediul lichid care se afla n faza exponenial de cretere, obinut conform metodologiei [7], densitatea culturii inoculate era de 0,4 g/l. Experienele au demarat n condiii de laborator la temperatura de 28-30 C i intensitatea luminii - 4000 luci. Creterea biomasei a fost determinat dup formula: (AnA0)/n, unde An cantitatea de biomas obinut peste n zile, A 0 cantitatea iniial de biomas, n - perioada analizat (zile). Productivitatea algal a fost stabilit conform procedeelor propuse n literatura de specialitate [4]. Indicele pH ului a fost stabilit cu ajutorul aparatului multifuncional Consort C944. Calculul statistic a rezultatelor a fost efectuat utiliznd programa Statistica 6, cu determinarea mediei aritmetice (M) i erorii standarde (m). Experimentele au fost efectuate n 6 repetri. REZULTATE I DISCUII Dup cum am menionat, mediul de cultur Drew are un avantaj economic n aplicare, dar pe lng aceasta considerm c este incomplet, deoarece lipsesc multe microelemente, sursa de CO2, Na etc., care contribuie la creterea biomasei algale i acumularea substanelor biologic active n celule. Cantitatea biomasei algei Anabaenopsis sp. obinut la cultivarea pe mediul de cultur Drew este prezentat n figura 1.

Fig. 1. Productivitatea algei Anabaenopsis sp. cultivat pe mediul de cultur Drew Datele prezentae n figura 1 atest c biomasa algei crete pn la a 12-a zi atignd 1,0420,05g/l dup care descrete pn la valoarea iniial (0,40,02 g/l). Aceast cantitate de biomas obinut ns nu este suficient i nu permite de-a utiliza acest mediu la cutivarea industrial a algei, dar poate fi utilizat n form solid pentru meninerea algei Anabaenopsis sp. n colecia laboratorului. Tabelul 1. Creterea biomasei algei Anabaenopsis sp. n funcie de pH-ul i temperatura mediului de cultur Perioada analizat, zile Indicii examinai temperatura mediului pH-ul mediului de Creterea biomasei, de cultur, C cultur g/l/zi Mm Mm Mm 1 18,000,11 7,1670,018 0 3 31,300,32 7,390,052 0,0710,003 6 32,750,47 7,440,027 0,0560,002 9 30,700,30 8,040,01 0,0400,002 12 29,360,48 7,740,062 0,0530,002 15 26,670,23 7,760,089 0 Datele prezentate n tabelul1 denot c temparatura mediului de cultur este n cretere,

iniial temperatura era de 18,000,11 C, la a 6-a zi, de exemplu, atingea 32,750,47 C, iar la finele experimentelor se situa ntre 26,670,23 C, care este favorabil pentru creterea algei Anabaenopsis sp. pH-ul mediului de cultur crete pn la a 9-a zi (8,040,01) dup care se observ o descretere lent. Biomasa a crescut cel mai mult de la 1-a la a 3-a zi fiind egal cu 0,0710,003, urmat de o cretere puin mai redus n intervalul 3-6 zile (0,0560,002), iar dup a 6-a zi se observ o descretere, astfel c la a 15-a zi se reduce pn la 0 (tab.1). Analiza

raportului dintre pH:biomas denot c pn la a 6-a zi odat cu creterea biomasei se mrete i pH-ul, iar la a 9-a zi pH-ul crete, iar valorile creterii biomasei se reduce dup care se observ oscilri ale pH-ului iar indicele de cretere se reduce. Un lucru important n demararea cultivrii periodice este i determinarea fazelor de cretere, care ar indica, conform uneia din metodologii, timpul i cantitatea de biomas obinut la cultivare continu a algei (unde se va realiza n flux continuu a fazelor liniare i de ncetinire) (fig. 2).

Fig. 2. Fazele de cretere a algei Anabaenopsis sp. la cultivarea periodic pe mediul de cultur Drew Determinarea fazelor de cretere este destul de complicat, uneori este necesar stabilirea cantitiide biomasntr-un interval de 2-24 ore sau 24-168 ore, n funcie de faza de cre tere, condiiile de temperatur, iluminare, agitare, coninutul mediului de cultur etc. La cultivarea algei Anabaenopsis sp. pe mediul dat durata fazelor a fost: lag-1 zi, log-1 zi, liniar 7 zile, staionar 1 zi, declin 3 zile, datele fiind incluse n figura 2. Cea mai esenial caracteristic a creteri microalgelor este viteza de cretere, care determin procesele de fotobiosintez i depinde de viteza de sintez a biomasei [6]. Viteza specific de cretere, ns difer dela o faz la alta, lucru remarcat i de ali cercettori. Tabelul 2. Caracteristica cinetic a creterii algei Anabaenopsis sp. cultivat pe mediul de cultur Drew Fazele de cretere Lag Log Liniar ncetinire Staionar Declin Cantitatea de biomas, g/l 0,380,01 0,6140,02 0,9650,03 1,040,05 1,040,051 0,400,015 Productivitatea maxim 0,0500,002 0,0380,0016 0 -0,2130,012 Viteza specific de cretere, zile-1 0,4790,015 0,0100,004 0,0180,00085 0 -0,3180,001

Conform metodologiei utilizate, pentru faza lag nu se indic modalitatea de determinare a vitezei specifice i productivitii maxime, aceasta se stabilete ncepnd cu faza log. Valorile vitezei de cretere sunt cele mai nalte n cazul log fazei (0,4790,015 zile -1) deoarece se determin dup un alt mod, pentru faza liniar are valori de 0,0100,004 zile -1 care sunt relativ mici, iar pentru cea de ncetinire se atest 0,0180,00085 zile -1, acelai lucru este specific i pentru productivitatea maxim. n cazul fazei staionare viteza de cretere i productivitatea maxim este 0, iar n cazul fazei de declinse reduce substanial cantitatea de biomas, productivitatea maxim i viteza decretere (tab. 2).n urma rezultatelor obinute putem constata c exist un raport direct dependent ntre vitezaspecific de cretere i pH-ul. Concluzii Alga Anabenopsis sp. poate fi cultivat pe mediul Drew, ns aceasta permite obinerea a maxim 1,040,05 g/l n decursul a 11-12 zile, ceea ce este puin pentru iniierea cultivrii industriale, iar pentru meninerea culturii n stare pur (pe mediul solid) este suficient. Timp de 15 zile alga cultivat pe mediul Drew parcurge toate fazele de cretere (ncepnd de la log i terminnd cu declin). pH-ul mediul este n raport direct propoional de vitezaspecific de cretere i invers proporional cu creterea biomasei. Cele mai mari valori ale vitezei specifice a fazei liniare atingeau 0,0100,004 zile-1, ceea ce indic c creterea algei este redus i respectiv cantitatea de biomas este mic. BIBLIOGRAFIE 1. H. Rodriguez, J. Rivas, M. Guerrero, M. Losada. Nitrogen-fixing Cyanobacterium with a high phycoerythrin content. In: APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, 1989, p. 758-760 2. J. Moreno, H. Rodriguez, M. Angeles Vargas, J. Rivas, M. G. Guerrero. Nitrogen-fixing cyanobacteria as source of phycobiliprotein pigments. Composition and growth performance of ten filamentous heterocystous strains. In: Journal of Applied Phycology 7: 17-23, 1995, p. 17 -23. 3. Trofim A., alaru V., Dobrojan S. Rolul algelor Cylindrospermum licheniforme f. alatosporum (KONDRAT) i Anabaenopsis sp. n procesul de epurare a apelor reziduale de la complexele zootehnice. In: Conferina tiinific naional cu participare internaional Probleme actuale ale microbiologiei i biotehnologiei, 2009, p. 178-179. 4. . , . . , . . , . . , . . , . . , . . , . . , . . , . . , . . . - . : , 1975. 241 .

5. . . , . . , . . . . : - , 2008. 152. 6. . . 1. . B: . 2005, . 67, c. 89 97. 7. . .. . .: , 1978. 33 . 8. . . , . . . (). B: II : , , 2009. c. 170 173. 9. . . . , . , . B: : , 2010, c.46-48.