Acizii nucleici

Obiectivele:
1. 2. 3. 4.

5. 6.

Tipurile de acizi nucleici, funciile i repartizarea lor n celul. Constituienii acizilor nucleici; bazele azotate, pentozele, acidul fosforic. Nucleozidele i nucleotidele. 3, 5- cAMP Structura primar, secundar i teriar a acizilor dezoxiribonucleici Cromatina. Nucleosomul. Structura acizilor ribonucleici (tRNA, mRNA, rRNA). Denaturarea i hibridizarea acizilor nucleici.

Acizi nucleici

1. 2.

Acizi nucleici sunt polinucleotide, alctuite din mononucleotide, unite prin legturi 3, 5-fosfodiesterice. ADN - acidul dezoxiribonucleic; ARN - acidul ribonucleic.

ADN
a. b.

Localizarea: 97-99% - concentrat n nucleu 1-3% - situat n mitocondrii. Rolul: pstreaz i transmite informaia genetic de la ADN parental la ADN fiic sau ARN.

ARN

1. 2. 3.

Localizarea: 11% - n nucleu 15% -n mitocondrii 50% - n ribosomi 24% - n hialoplasm Deosebim:i: ARN mesager ARN ribozomal ARN de transport ARN cromosomial ARN nuclear

ARN mesager (mARN) constituie 25% din totalul ARN-lui. Localizat -n nucleu i citozol. Prezint copia sectorului de ADN i conine informaia despre structura catenei polipeptidice a proteinei. Rolul:Transmite informaia de la ADN spre ribozomi, sediul de sintez a proteinei. ARN ribozomal (rARN) constituie 60% din totalul ARN-ului. Localizat- n ribozomii citoplasmei. Rolul - formeaz scheletul ribozomilor. Joac un rol auxiliar n procesul de asamblare a proteinelor.

ARN de transport (tARN) constituie 15% din totalul ARN-lui. Localizat: n citoplasm, ribosomi, mitocondrii. Rolul: particip la activarea i transportul AA spre ribozomi i asamblarea lor n polipeptide. ARN cromosomial activarea genelor ADN ARN nuclear formarea scheletelor particulei proteice care transport ARN din nucleu n citoplasm

Structura chimic aAN

La hidroliz AN degradeaz n mononucleotide, care la rndul lor, la hidroliza complet degradeaz n BA, pentoze i acid fosforic. ADN----A; G; C; T+dR+H2PO3 ARN----A; G; C; U+ R+H2PO3

Bazele azotate
a. BA se clasific n : 1. majore: purinice: A, G i pirimidinice: C,T,U 2. minore:purinice (2metil A; 1 metilG) i pirimidinice (5 metil C;5 hidroximetil C) b. Sunt slab solubile n H2O c. Prezint fenomenul de tautomerie (forme lactimlactam) d. Sunt responsabile de informaia genetic e. BA purinice- au structur plan; cele pirimidinice- aproape plan, puin plat j. Max capacitii de absorbie n ultraviolet este ntre 260-280 nm

Bazele purinice

Bazele pirimidinice

Molecular Biology

C1 Nucleic Acid Structure-1

Bases
Bicyclic Purines:

Monocyclic pyrimidine:

Thymine (T) is a 5-methyluracil (U)

Structura BA minore

Molecular Biology

C1 Nucleic Acid Structure-2

Nucleosides

The structures of pentose sugar

Nucleozidul
const dintr-o BA ( purinic sau Pirimidinic ) + opentoz (ribozasaudezoxiriboza) atomul C-1 al pentozei este unit cu N9 al purinei sau N-1 al pirimidinei leg. N glicozidic.

n funcie de pentoz: dezoxi i ribonucleozide BA purinice +R(dR) --ozin (adenozin, guanozin sau dezoxiadenozin, dezoxiguanozin) BA pirimidinice +R (dR) --- idin (citidin, timidin, uridin sau dezoxicitidin)

Unite ntre ele prin leg tura N glucozidic

Nucleozidele

Proprietile: Mai solubile n H2O dect BA Mai stabile n soluii alcaline Uor se hidrolizeaz la nclzire cu acid

NUCLEOTIDE - compuialc tuiidinnucleozideirestde acid fosforic Nucleozid mono-; di-; trifosfafat

Rest al
acidului fosforic

Nucleozid

Nucleotide - Rolul
1. 2.

3.
4.

5.

Element structural al AN Intermediari energetici (ATP- purttorul energiei chimice n organism) Intr n componena Co Servesc ca activatori ai unor molecule (UDP-Gl; CDP-colina) Servesc ca mesageri secunzi intracelulari ai hormonilor (AMPc; GMPc)

Molecular Biology

C1 Nucleic Acid Structure-3

Nucleotides
A nucleotide is a nucleoside with one or more phosphate groups bound covalently to the 3-, 5, or ( in ribonucleotides only) the 2position. In the case of 5-position, up to three phosphates may be attached. Phosphate ester bonds

Deoxyribonucleotides (containing deoxyribose)

Ribonucleotides (containing ribose)

Structurachimic

Structuraprimar aAN

Reprezint secvena mononucleotidelor n lanul polinucleotidic liniar, legate ntre ele prin legturile 3' - 5' fosfodiesterice Catenele au dou capete: 5 nucleozid tri fosfatul; 3 gr. OH liber

Structurasecundar aADN

Watson i Crick (1953) au postulat modelul structural al moleculei de DNA - dublul helix (spiral dubl) Caracteristicile dublei spirale:
2 lanuri polidezoxiribonucleotidice se rsucesc helicoidal n jurul unui ax comun, formnd o dubl helice cu orientare spre dreapta;

1.

2.

Cilindrul ce ncadreaz dublul helix are d=2nm

3. lanurile sunt antiparalele (unul are direcia 53, altul 35) 4. complimentaritatea (A i corespunde T; iar G-C). 5. Stabilitatea dublului helix este asigurat att de interaciunile hidrofobe dintre BA, ct i de legturile de hidrogen ntre BA (A=T formeaz 2 legturi de hidrogen, iar G C trei legturi). 6. BA hidrofobe sunt situate n interiorul spiralei duble i aranjate sub form de stive, pe cnd complexul pentozofosfat este situat la exteriorul spiralei duble, bine interacioneaz cu apa, de aceia molecula gigant de DNA se dizolva n ap. 7. Spiral este regulat (fiecare spir cuprinde 10 nucleotide). Distana dintre BA nvecinate este de 0,34 nm, perioada de identitate (pasul) 3,4 nm. 8. La pH=7 grupele fosfat sunt ionizate, poarta sarcini negative, deaceia DNA prezint acid puternic. 9. Dublul helix este de tip plectonemical, dar nu paranemical

Structurasecundar aADN

1.

2.

3.

4.

5. 6.

7.
8. 9.

Coninutul adeninei este egal cu al timinei, iar al guaninei cu al citozinei (A=T, iar G=C) n orice preparat de DNA independent de specie suma bazelor purinice este egal cu cea a bazelor pirimidinice (A+G=T+C) Preparatele de DNA separate din diferite esuturi a uneia i aceeia specie de organisme sunt absolut identice privind componena nucleotidic. Componena nucleotidic a DNA la aceeai specie nu se modific odat cu vrst, nu depinde de regimul alimentar i modificrile mediului. dac A+T este mai mare dect G+T avem DNA de tip AT dac G+T este mai mare dect A+T avem DNA de tip GT t de topire este mai mica cnd predomin perechile A-T t de topire este mai mare cnd predomin perechile G-C la eucariote DNA mitocondrial este circular

Legit ileluiChargaff

Exist diferite forme de DNA

care sunt determinate de gradul de dehidratare a acizilor nucleici: A,B i Z. Modificrile n dublul helix sunt dependente de anturajul extern ai moleculei de DNA. Dublul helix posed dinamism. forma A: conine 11 resturi la o spir, este rsucit spre dreapta. forma clasica B: conine 10 mononucleotide la o spir. este rsucit spre dreapta. - 10 nucleotide ocup 34 A (3,4 nm). - o nucleotid cuprinde 3,4A (0,34 nm). conformatia Z spre deosebire de A i B este rsucit spre stnga.
-

Structurateriar

Reprezint superspiralizarea dublului helix la care particip proteinele histonice i formeaz cromatina Unitatea structural a cromatinei este nucleosomul Nucleosomul este un octamer histonic (2H2A; 2H2b; 2H3; 2H4) nfurat de aproximativ de 2 ori de dublul helix cu o lungime de 146 perechi de nucleotide. ntre 2 nucleosmi se conin poriuni de ADN alctuit din 20-60 perechi de nucleotide asociate cu H1 Lanul polinucleosomic formeaz un superhelix (solenoid), fiecare spir are 10 nucleosomi, d=30nm i pasul de 10nm

DNA

Compactizarea cromatinei
Firul de cromatin? ~ 1,000

30 nm Solenoid ~40 / 50

Nucleosoma = ctamer de histone H2a, H2b, H3, H4 146 / 200 bp DNA Compactizare ~10 ori

Cromosoma metafazic/ cromatina interfazic ~ 10,000

Structurasecundar iteriar a ARNm

ARNm fiecrei gene i corespunde molecula sa de ARNm, de aceea el este foarte heterogen Elementul de codificare al ARNm este tripletul nucleotidic numit codon. Fiecare codon corespunde unui anumit AA Structura secundar a ARNm o caten curbat Structura teriar se aseamn cu un fir nfurat pe bobin, rolul creia l ndeplinete o protein de transport numit informer

Structura secundar a t-RNA

1.

2.

3.

4.

are infiarea unei "frunze de trifoi" - se formeaz n urma imperecherii complementare intracatenare a nucleotidelor anumitor sectoare. Sectoarele, care nu sunt ncadrate n formarea legturilor de H formeaz lanuri sau bucle Sectorul de acceptare (4 nucleotide, 3 din care au aceeai succesiune- CCA cu hidroxilul 3OH liber la care se fixeaz grupa COOH al AA. Bucla anticodonic - format din 7 nucleotide. Conine un triplet nucleotidic specific pentru fiecare t-RNA numit anticodon. Anticodonul t-RNA dup principiul complementarittii se mperecheaz cu codonul respectiv din RNAm. Interaciunea codon-anticodon determin ordinea aranjrii aminoacizilor n catena polipeptidic. Bucla pseudouridilic - const din 7 nucleotide (restul acidului pseudouridilic este obligatoriu), particip la interaciunea cu ribozomii. Bucla dihidrouridinic - const din 8-12 resturi nucleotidice ( resturi de dihidrouridin ), interactiuneaz cu E- aminoacil-RNAt-sintetaza, care contribuie la recunoaterea de ctre aminoacid a ARN-t specific.

Structurateriar atRNA

Are forma L Include 2 segmente de dublu helix situate perpendicular (fiecare helix10 perechi de baze) n afara spiralei bazele formeaz legturi de hidrogen. Interaciuni apar ntre bazele necomplementare (A-A; A-C).Multe baze sunt aranjate n stive (hidrofobe)

Structurateriar atRNA

Are forma L Include 2 segmente de dublu helix situate perpendicular (fiecare helix10 perechi de baze) n afara spiralei bazele formeaz legturi de hidrogen. Interaciuni apar ntre bazele necomplementare (A-A; A-C).Multe baze sunt aranjate n stive (hidrofobe)

ARNr

Structura secundar e prezentat prin sectoare spiralate unite ntre ele cu ajutorul unei catene curbate Structura teriar prezint scheletul ribosomului. Are forma unui bastona sau ghem pe suprafaa cruia sunt nfurate proteinele ribosomului.

Propriet ile fizico-chimice ale acizilor nucleici

- masa molecular mare. - proprietatile coloidale si osmotice, tipice pentru toi compuii macromoleculari. - Proprietile lor hidrofile depind de fosfai. - viscozitatea i densitatea nalt a soluiilor, capacitatea de denaturare. - la pH fiziologic toti AN sunt polianioni (-)

Denaturarea sub aciunea temperaturii, mediului PH, substanelor chimice are loc ruperea legturilor de hidrogen i forelor hidrofobe ce stabilizeaz structura secundar i teriar a DNA. La denaturare DNA i pierde proprietile biologice. Ex. nclzirea DNA-duce la desfacerea spiralei duble n dou catene ( are loc transformarea spiral - ghem). Degradarea unei jumti de structur de ADN are loc la temperatura de topire. ADN bogat n C i G au o t mai nalt dect cele bogate n A i T. La rcirea treptat catenele din nou se reunesc dup principiul complementarittii, formnd spirala dubl nativ. Acest fenomen se numete renaturare (atunci cnd t e mai mic dect cea de topire). La racirea brusc renaturarea nu are loc.

Denaturarea i renaturarea

1. 2.

3.

Pe capacitatea de renaturare a AN este bazat metoda de determinare a gradului de nrudire a AN, care poart denumirea de hibridizare molecular. La baza ei st mperecherea complementar a sectoarelor unicatenare ale AN cu formarea unui heteroduplex Hibridizarea se efectueaz n felul urmtor: AN se denatureaz separat; se incubeaz mpreun ambele tipuri de DNA (ori DNA i RNA). n condiiile unui grad relativ crescut de complementaritate a acestora se formeaz moleculele hibride (DNA-DNA sau DNA-RNA). Aceste molecule constau din sectoare spiralate i nespiralate. Cu ct gradul de nrudire este mai nalt, cu att hibridizarea este mai complect.

Hibridizarea AN

Aceast metod a permis descoperirea particularitilor structurii primare a DNA. S-a stabilit, c n componena DNA a animalelor se afl sectoare cu o succesiune nucleotidic identic, care de multe ori se repet. Hibridizarea decurge foarte repede. Restul DNA este prezentat printr-o succesiune unical a nucleotidelor, care nu se dubleaz.

Obiectivele:

Dogma central a geneticii moleculare. Concepia: o gen - un polipeptid. Replicarea ADN- mecanismul, substratele, matricea, enzimele i factori proteici, etapele biosintezei ADN. Telomeraza. Rolul i structura.. Reparaia ADN. Transcripia sau biosinteza ARN: matricea, substratele, enzimele, mecanismul Trsanscripia invers. Biosinteza ARN pe matrice de ARN Modificrile posttranscripionale (processing) Inhibitorii sintezei acizilor nucleici. Ingeneria genetic i semnificaia ei practic. Sinteza anticorpilor

Dogma central a geneticei moleculare

Postulatul de baz a geneticei moleculare a fost formulat de Watson i Crick (Meselson, Stahl): este transmiterea informaiei genetice de la ADN la protein. Snt ncluse trei procese: replicarea; transcripia; translaia. Primele dou procese au loc n nucleu, iar al treilea n citozol. Procesul de transcripie este reversibil. Enzima care catalizeaz transcripia invers se numete revertaza (reverstranscriptaza) i a fost descoperit la oncovirui. Sinteza ARN-ului pe baza ARN se numete replicarea ARN, ea are loc la virui, care nu au ADN. Procesul de translaie este ireversibil i se numete biosinteza proteinei.

Dogma central a geneticii moleculare

DNA

RNA

Protein

Structura genelor- dimensiuni, GS; GR

1. 2.

Gene- poriunile ADN ce conin informaia genetic cu privire la sinteza unei proteine Fiecrei gene i corespunde un lan polipeptidic- de aici i conceptul: o gen un lan polipeptidic GS- genele ce codeaz polipeptide i ARN. Poriunile GS ce conin informaie (transductibile) exoni; iar secvenele ce nu sunt traduse n ARNm introni GR segmente de ADN, repetabile, relativ mici ce au un rol reglator. Rolul lor: Pot fi semnale ce ne arat nceputul i sfritul GS Particip n iniierea i terminarea transcripiei GS Dimensiunile genelor f. variabile. Ex. Proteina ce conine 350 AA--- 350X3=1050 nucleotide. tiind c BA sunt localizate la 0,34 nm_---0,34 nm X 1050=357 nm =0,36m

Replicarea
Replicarea transmiterea informaiei genetice de la ADN parental la ADN fiic. Caracteristicile: 1. Se petrece n nucleu 2. Proces semiconservativ 3. se desfoar n trei etape : iniiere, elongare, terminare 4. prezena praimerului este obligatorie 5. replicarea este cuplat cu desfurarea DNA parental (necesit energie) 6. replicarea decurge n ambele direcii cu aceeai vitez. 7. Pe catena ntrziat se sintetizeaz fragmentele Okazaki. 8. Este bazat pe mpachetarea complementar a BA 9. Catena-fiic este antiparalel cu catena parental dar nu identic dup secvena nucleotidic 10. Fora motrice a procesului este hidroliza pirofosfatului 11. angajeaza simultan intregul cromozom.

1.

Matri - ADN bicatenar

Componentelenecesarereplic rii:

2.

3. 4. a.

b.

c.

Substrat: dATP, dTTP, dGTP, dCTP; ATP, GTP, CTP, UTP prezena ionilor de Mg, Mn; Zn Sistemul multienzimatic complex: Helicaza-desfacerea dublului helix, treptat, pe poriuni mici. Cele 2 catene rmn separate ca urmare a interveniei proteinelor de stabilizare (SSB). Topoizomerazele I i II nltur supertorsiunile ADN, rezolv problemele topologice aprute n cursul desfacerii lui. (I introduce supertorsiuni negative; II scindeaz o leg. fosfodiesteric pe una din catene i permite celor 2 catene s se roteasc una fa de alta) ARN primaz - sintetizeaz primerul n direcia 5'3 .

d. ADN polimeraza ( ADNp I, II, III)sinteza catenei fiice n direcia 5'3' . ADN p III: aciune polimerazic (5'- 3) sintetizeaz n direcia 5- 3' lanul polidezoxiribonucleotidic, prelund instrucii de la ADN-matri, - aciune exonucleazic (3'- 5) - ADN pII - rol neclar. ADN pI - posed activitate 5'- 3 exonucleazic, nltur primerul i-l nlocuiete cu fragmente de ADN e. ADN ligaza- unete fragmentele Okazaki de pe catena ntrziat. Catalizeaz formarea unei legturi fosfat diesterice ntre 3'-OH a unui fragment de ADN i extremitatea 5' monofosfat al altuia.

Mecanismulreplic rii
a.

3 etape: iniierea, elongarea, terminarea Originea replicrii este reprezentat de o secven specific de nucleotide secvena ori. Replisoma (complex proteic) recunoate punctul de origine. Iniierea parcurge dou etape: Formarea furcii de replicaie- ataarea replisomului la punctul de origine al replicrii i sub aciunea helicazelor are loc desfacerea duplexului parental pe anumite poriuni replicatori (la scindarea leg. de H dintre BA - se utilizeaz min 2 mol. de ATP). La desfacerea duplexului parental apar regiuni superhelicoidale, care se regleaz cu ajutorul girazei (topoizomerazei). Topoizomeraza efectueaz rupturi monocatenare apoi sudeaz legtura fosfodiesteric i favorizeaz relaxarea structurii DNA

b. Sinteza primerului sub aciunea primazei se sintetizeaz o poriune mic de ARN n direcia 5'- 3'. Primerul este format din 5-10 ribonucleotide. Cruparea 3OH e un iniiator al sintezei de ADN.

Elongarea

ADN polimeraza III unindu-se la captul 3' OH al primerului ncepe sinteza ADN fiic. Reacia decurge prin atacul nucleofil al grupei 3' OH al primerului asupra unui dRNTP complementar catenei de ADN matri. Se formeaz legtura fosfodiesteric i se elibereaz PP; hidroliza PP determin polimerizarea propriu zis. Elongarea decurge n direcia 5' 3, i parcurge cu aceeai vitez pe ambele catene Catena de baz se va sintetiza continuu, iar cea ntrziat discontinuu: va fi format din fragmente Okazaki (dimensiuni de 1000 2000 nucleotide la procariote i 150-200 la eucariote). ADN polimeraza I exclude primerii i sintetizeaz complementar ADN. Fragmentele snt unite cu enzima ADN ligaza (necesit ATP la eucariote i NAD la procariote).

Terminarea

Terminarea replicrii are loc atunci, cnd cele dou bifurcaii de replicare se ntlnesc ntr-o regiune opus regiunii "ori". Proteinele speciale semnalizeaz oprirea repilcrii prevenind aciunea helicazelor.

Particulariti: ADN polimerazele: - implicat n replicarea ADN nuclear- responsabil de sinteza catenei ntrziat sinteza primerilor rspunde de sinteza catenei lider. Ea manifest aciune exonucleazic implicat n reparaia ADN - implicat n replicarea ADN mitocondrial, aciune exonucleazic Bifurcaia replicii este de 3000 baze pe minut comparativ cu 16.000 la procariote Pe o molecul de ADN exist mai multe origini de

Replicarea la eucariote

replicare (3X104 - 3X105 separate prin perechi de baze). n aceste origini multiple de replicare se organizeaz bifurcaii- ce se deplaseaz biderecional pe cromosomul eucariot n curs de replicare. Fragmentele Okazaki 150-200 nucleotide

Telomer Telomeraza

Replicarea capetelor 5 ale catenelor este incomplet (teoria lui Olovnicov, 1971), deoarece dup nlturarea primerului ultimului fragment Okazaki, ADN p I nu e e capabil s completeze aceste goluri. Astfel la fiecare replicare, capetele ADN se scurteaz. Aceasta nu afecteaz informaia genetic deoarece catenele conin fragmente repetitive neinformative telomere. Telomerele sunt replicate de o E specific telomeraza Telomeraza - reprezint o ribonucleoproteid: ARN i protein Subunitatea proteic TRT (telomeraze revers transcriptase) posed activitate catalitic

Telomeraza fiind o revertaz (ADN polimeraza ARN dependent) folosete ca matri propria coenzim un fragment de ARN. I etap are loc asocierea telomerazei la captul 3 al catenei lider din regiunea telomericTTAGGG II E extinde catena, utiliznd ca matri ARN telomeric (se repet) III Catena complementar a ADN telomeric e sintetizat dup principiul catenei ntrziate de ADNp

Mecanismul elongrii capetelor cromozomului la eucariote

Mecanismul elongrii capetelor cromozomului la eucariote

cromozoma Fixarea telomerei elongarea

GGGTTAG 3 AUCCCAAUC 5 TTAGGG GGGTTAGGGTTAG 5 AUCCCAAUC

translocarea

GGGTTAGGGTTAG 5 AUCCCAAUC

Structura i funcia RNA telomerazice. Structura primar: la majoritatea RNA telomerice, regiunea matricial se afl la deprtarea de 50 nucleotide de la captul 5, i are urmtoarea succesiune de nucleotide 5-CUAACCCUA-3. Structura secundar e compus din 4 bucle i un fragment unicatenar, ce conine matria pentru sinteza DNA telomerice.

Inhibitorii telomerazei

oligonucleotidele modificate, complementare regiunii matrice a RNA telomerazice. Aa nucleotide specific se fixeaz de matria RNA telo a omului, inhibnd activitatea telomerazic in vitro. In vivo apare problema transportului inhibitorilor prin membrana celular i micarea dirijat n nucleul celular. Ca inhibitori au fost testai i inhibitorii reverstranscriptazelor azidotimidina, didezoxiguanozina.

La om telomeraza e activ numai n celulele embrionale, n epiteliul intestinului, spermatozoizi i celule canceroase.

Numrul telomerilor determin durata vieii fiecrei celule i condiioneaz reducerea critic a numrului lor, induce moartea programat a celulei deci pierderea motivelor telomerice este cauza imbtrnirii (telomera conine mii de motive TTAGGG). lungimea telomerei este marcherul biologic al mbtrnirii.

ReparaiaADN

1. 2. 3. 4.

Erorile n timpul replicrii sunt reduse la minimum datorit DNA polimerazei ce posed funcie endonucleazic Tipuri de deteriorri: Formarea de bree Modificarea BA Pierderea de BA Formarea dimerilor de pirimidin sub aciunea razelor ultraviolete

ReparaiaADN

Incizia dimerului sub aciunea endonucleazelor Peticirea sub aciunea ADN polimerazei I Excizia fragmentului lezat sub aciunea exonucleazei Sudarea sub aciunea ADN ligazei

Reparaia prin excizia dimerului

Reparaieprinfotoreactivare

Reparaieprinrecombinare

Transcripia

biosinteza ARN pe matri de ADN Particulariti: Matri - DNA dublu helicoidal (prezena catenei anticodogene de ADN) (catena+), Substrat - ribonucleozidtrifosfai (ATP, GTP, CTP, UTP) Sinteza are loc n direcia 53 Este asimetric copierea catenei necodifictoare Este incomplet are loc copierea doar a unei poriuni de ADN (transcripton: promotor, operator, GS, terminator) Fora motrice a procesului e hidroliza PP Enzima - ARN polimeraza

ARN polimeraza
este o holoenzim 2. la procariote - este oligomer din 5 protomeri (2, , 1 i sigma ). subunitile centre catalitice; - fixeaz substratul; 1 se leag de ADN, - are rol n recunoaterea secvenelor matriei numit promotor, unde ader enzima la eucariote: 1. RNApI sintetizeaza RNA ribozomal (28S si 18S) 2. RNApII sintetizeaza RNAm 3. RNApIII sintetizeaza RNAt, RNAr 5S i molecule mai mici
1.

3. Nu necesit prezena primerului 4. Nu posed funcie nucleazic, doar polimerazic 5. ADN polimeraza conine Zn2+ i necesit prezena n mediu a ionilir de Mg2+, Mn2+

Etapeletranscripiei

Sinteza decurge n 3 etape: iniierea, elongarea, terminarea. Iniierea ncepe n anumite secvene de ADN numite promotor (P 40 nucleotide). Pe P deosebim 2 locusuri: de recunoatere (depistat cu ajutorul sigmei) i locusul de legare lax a ARN polimerazei. Locusul de recunoatere e situat la o distan de 25 nucleotide de locusul de legare i 10 nucleotide de la punctul de iniiere (+1) Toi P bacterieni au 2 secvene consens situate pe catena codifictoare: Caseta Pribnow (-10) 5 TATAAT 3 responsabil de iniierea denaturrii locale a ADN Caseta -35 5 TTGACA 3 - la care are loc asocierea primar a ARN polimerazei subunitatea recunoate caseta -35 i se leag la ea. E. alunec de-a lungul ADN i n jurul casetei -10 (Pribnow) deschide dublul helix formnd complexul deschis de iniiere ARN p catalizeaz formarea primei leg. fosfodiesterice ntre nucleotidul +1 i +2 - disociaz, iar E-cor continu sinteza.

Fig. 5.4

Etapeletranscripiei
Iniierea ncepe n anumite secvene de ADN numite promotor (P 40 nucleotide). ARN polimeraza recunoate cu ajutorul sigma Toi P bacterieni au 2 secvene consens situate pe catena codifictoare: 1. Caseta Pribnow 5 TATAAT 3 2. Caseta 35 5 TTGACA 3 P la eucariote: 1. GC casete GGGCG 2. CAAT casete CCAAT 3. Caseta Hogness TATAT/AT Primele 2 sunt responsabile de frecvena transcripiei (cnd ncepe), a 3 - implicat n iniiere semnal (unde). Toate sunt responsabile de exacitatea iniierii Pe P deosebim 2 locusuri: de recunoatere (depistat cu ajutorul sigmei) i locusul de legare lax a ARN polimerazei. Locusul de recunoatere e situat la o distan de 25 nucleotide de locusul de legare i 10 nucleotide de la punctul de iniiere (+1)

Sinteza decurge n 3 etape: iniierea, elongarea, terminarea.

Sigma subunitatea gsete punctul de iniiere i: 1. Activeaz identificarea secvenelor de RNA polimeraz 2. Ia parte la desfacerea dublului helix de ADN 3. Ia parte la formarea primei legturi fosfosiesterice Astfel complexul de iniiere este format, sigma subunitatea e disociat de la holoenzim i ia parte la iniierea unui alt ciclu de transcriere.

ElongareaiTerminarea

Elongarea - alunecarea ARN polimerazei pe matra de ADN sinteza transcriptului (50 nucleotide pe secund) . RNAp nu controleaz catena sintetizat erorile sunt mai multe fa de replicare. Pe msur naintrii ARNp are loc desprinderea ARN de la ADN i refacerea dublului helix Terminarea RNAp recunoate secvenele nucleotidice specifice de pe ADN, ce conin un numr mare de G, C . Proteina - se asociaz la E i se mic mpreun cu ea, ns la identificarea semnalelor de terminare coboar de pe matri i ncetinete aciunea E,producnd transcriptul cu folosirea energiei ATP

Transcripialaeucariote
RNA p alctuit din 9-11 subuniti 2. Folosesc mai multe tipuri de ARN p: a. ARN polimeraza I ARNr (18S, 28S, 5,8S; 45S) n nucleoli; b. ARN polimeraza II ARNm; c. ARN polimeraza III ARNt i ARNr (5S) d. ARN polimeraza IV (mitocondrial)- toate tipurile de ARN mitocondrial P la eucariote: GC casete GGGCG (-90) CAAT casete 5-GGCCAATCT -3 (-75) Caseta Hogness TATAT/AT (-35) Primele 2 sunt responsabile de frecvena transcripiei (cnd ncepe), a 3 - - implicat n iniiere semnal (unde). Toate sunt responsabile de exacitatea iniierii Secvenele alctuite din 10-20 nucleotide enhancers i silencers cresc i scad respectiv V transcrierii; pot fi situate la distane mari de gena transcris.
1.

Procesingul

Toi precursorii de ARN n nucleu trec etapa de maturizare posttranscripional. Pe parcursul procesingului - pre-ARN se transform n ARN matur. Procesingul nclude: 1. Modificarea fragmentelor terminale 5 i 3 ale ARN: a. Cap-area: la captul 5 -este adiionat guanozina metilat (5- 5 trifosfat - protejarea mARN de atacul 5-exonucleazelor i pentru recunoaterea de ctre ribosomi ca semnal de iniiere); b. la captul 3 se adaug o secven mare de poli A (200 A -coad). Ea servete la exportul moleculelor de ARN din nucleu n citoplasm.

Fig. 5.11

2.Splisingul - excizia intronilor i sudarea exonilor. Aa numitul splising are loc n nucleul celulei. a.ARN nuclear (ARN U) identific secvenele de baze la jonciunea intron exon, b. se fixeaz complementar la ele, bucleaz intronul, astfel apropiind capetele exonilor. c. Are loc scindarea legturilor fosfodiesterice dintre exoni i introni, capetele exonilor sunt juxtapuse, apoi sudate de RNA ligazele

Fig. 5.13

e.g., Fig. 5.13

Transcripiainvers
sinteza ADN pe catena de ARN Matria ARN Substrat dRNTP:dATP, dGTP, dCTP, TTP Enzima revers transcriptaza Caracteristic viruilor oncogeni Mecanismul: a. Revers transcriptaza sintetizeaz pe ARN viral catena de ADN- hibrid: ADN_ARN b. Scindarea ARN viral de o nucleaz c. Autoreplicarea ADN cu formarea unui duplex de ADN

Codul genetic Translaia Reglarea sintezei proteinei

Obiectivele:

Codul genetic. Proprietile. Ribozomii - sediul sintezei proteinelor, structura lor. Procesul de translare (sinteza proteinelor). Modificrile posttranslaionare ale proteinelor. Reglarea biosintezei proteinelor. Inducia i represia enzimelor. Inhibitorii sintezei proteice. Polimorfismul proteinelor (variantele hemoglobinei, enzimelor, grupelor sanguine). Bolile ereditare i diagnosticul lor biochimic.

Codul genetic

Informaia genetic referitor la biosinteza proteinelor se transmite cu ajutorul codului genetic - dicionar ce traduce secvena nucleotidelor din ADN n succesiunea AA din lanul polipeptidic.

Proprietile codului genetic

Este triplet -64 codoni: 3 nonsens:UAG; UGA; UAA; 61 codific AA corespunztori este degenerat - unui AA poate s-i corespunda mai muli codoni (Ex. Arg, Leu, Ser - codificate de 6 codoni; Met- i Trp - un codon). Codonii unui aminoacid sint sinonime. Specificitatea codonului e determinat de primele dou litere. Degenerarea se refer la nivelul nucleotidului 3 din codon sau 1 din anticodon care oscileaza. nu este ambiguu- acelai triplet nu semnific 2 AA diferii Are o structur liniar (colinear) o concordan liniar ntre gen i proteina codifictoare Nu se suprapune (excepie- viruii)

1.

2.
3. 4. 5.

6.

Este universal toate veuitoarele utilizeaz acelai mecanism de traducere (abatere prezint codul genetic al mitocondriilor); nu are virgule, semne de punctuatie - ce ar indica nceputul i sfritul fiecarui codon. AUG - este codonul de initiere UAG, UAA,UGA - codoni stop (non sens) Toi codonii cu U (n pozitia 2) codifica AA hidrofobi codonii cu A n pozitia -2 codific AA polari Uracilul n poziia 1 prezint codonul nonsens dac n anticodon n directia (5'->3') prima baz nucleotidic e: a) Citozina sau Adenina, el va citi un singur codon; b) Uracilul sau Guanina el va citi 2 codoni; c) inozina - respectiv va citi 3 codoni

Ribozomii

Reprezint sediul de traducere a ARNm i sinteza proteinelor. Structura- complexe ribonucleoproteice i sunt formai din dou subuniti de mrime inegal (mare i mic) Structura ribozomilor procariotici: subunitatea 30 S conine ARNr 16S i 21 proteine. subunitatea 50S ARN r 5S, 23S i 31 proteine. Sinteza ARNr i formarea subunitilor are loc n citoplasm. Structura ribosomilor eucariotici: subunitatea 40S ARNr 18S i 33 proteine. subunitatea 60S ARN r 5S, 5,8S, 28S i 49 proteine. ARNr se formeaz n nucleol. Ribozomul va avea constanta de sedimentare 70S la procariote si 80S la eucariote. S este coeficientul de sedimentare Svedberg, care depinde de forma, densitatea i dimensiunea particulelor.

Centrele catalitice ale ribosomilor

Situsul A - aminoacil responsabil de unirea complexului aminoacil- ARNt Situsul P peptidil gzduiete ARNt legat de un lan polipeptidic deja sintetizat Situsul E e responsabil de eliminarea ARNt Procesul de sintez proteic poate fi schiat sumar prin interaciunea celor 3 tipuri de ARN informaia din ARNm este citit in ribozom si transpus n proteine, AA necesari fiind adui de ARNt. n starea complet nedisociat ribozomii sunt activi. Deplasarea lber a ribozomilor n diferite sectoare ale celulei, sau combinarea lor n diferite locuri cu membranele reticulului endoplasmatic ofer posibilitatea de asamblare a proteinei n celul.

Mai muli ribozomi pot citi simultan acela ARN mesager pe care il parcurg in acela sens. Se constituie astfel un poliribozom, structur ce permite accelerarea sintezei proteice.

Translaia
1.

2.
3.

4.
5.

6.

Translaia sau biosinteza proteinelor propriu zis. Bazele moleculare ale translaiei: m-RNA ca matri genetic, programul creia determin succesiunea AA n protein; aminoacil tRNA; ribozomii ca maini moleculare pentru unirea succesiv a AA n catena polipeptidic conform programului mRNA; GTP ca surs de energie; factorii proteici care vin n ajutor n diferite etape ale asamblrii proteinei n ribozomi; unii ioni ca cofactori (Mg 2+, K+).

Etapele
se realizeaza in 5 etape: Activarea AA. Iniierea lanului polipeptidic. Elongarea lanului polipeptidic. Terminarea lanului polipeptidic si eliberarea acestuia. Prelucrri post traducere ale proteinei sintetizate.

Activarea AA
1. 2. 3. 4.

a. b. c. d.

are loc n citozol Sunt necesare: AA (procariote Nformil-Met; la eucariote Met) ARNt ATP, Mg, K E aminoacil ARNt sintetaza (exist nu mai puin de 20 indentificate 32 de tipuri de ARNt): Posed 4 centre: pentru AA, ATP, ARNt, H2O Specificitatea E e determinat de structura ARNt Fidelitatea e asigurat de capacitatea de autocontrol Conine grupri libere sulfhidrilice

e.

sunt ligazele, care au o specificitate absolut.

Activarea AA

Se desfoar n dou etape:

ATP
I

PPi

1. NH2-CH-COOH R 2. NH2-CH-CO O-AMP+ARNt

I

NH2-CH-CO O-AMP
I

R
Aminoiacil ARNt sintetaza

Aminoacil Adenilat

NH2-CH-CO O-RNAt +AMP

I

Aminoacil RNAt

I etap - AA reacioneaz cu ATP rezultnd aminoacil-AMP. PP eliberat este hidrolizat i in acest fel reacia ireversibil. II etap - complexul cedeaz AA moleculei de ARNt, specific acelui AA

Activarea AA

Parcurge n 2 etape:

Activarea AA

Esena procesului de activare este fixarea AA la ARNt propriu acestui AA, n zona acceptorie la 3' CCA OH (sau 2' OH) al ribozei restului adenilic

Enzima poate recunoaste daca un AA gresit s-a fixat pe ARNt, situatie in care il elimina si il inlocuieste cu AA corespunzator deoarece prezinta si un locus hidrolitic.

Activarea AA

Activarea AA consum 2 legturi macroergice ARNt pe calea difuziunii simple transfer AA adiionat la el - la ribozomi, unde are loc asamblarea proteinei din AA.

Translaiapropriuzis

Citirea ARNm se face n direcia 5- 3' iar proteina se sintetizeaz de la captul Nterminal la C terminal se desting trei etape: Iniierea Elongarea terminarea.

 1.

Iniierea

2.

3. 4. 5.

Necesar: ARNm (AUG) Ribosomul cu subunitile disociate ARNt f-met (Met) GTP, Mg IF1, IF2, IF3 Scopul: formarea complexului de iniiere

Formarea complexului de iniiere:

Subunitatea mic leag IF3 i previne reasocierea ribosomilor La subunitate adiioneaz ARNm (AUG) fixarea codonului e determinat de un fragment de pe ARNm compus din 6-8 resturi de A-G i este complementar cu succesiunea OH al ARNr La complex adiioneaz IF1, mai apoi IF2 legat de GTP i formil Met-ARNt ndat cum are loc fixarea anticodonului fMet-ARNt cu codonul AUG (ARNm), are loc hidroliza GTP, eliberarea FI i unirea subunitilor Formil Met-ARNt e fixat n centrul P

FI2

30S

FI3

P FI1

50S

Elongarea

1.
2. 3.

4.
1. 2. 3.

Necesar: ARNm cu urmtorul codon ARNt cu urmtorul AA GTP FE: Tu, Ts, G Elongarea translaiei include trei etape: Legarea aminoacil ARNt; Transpeptidarea- formarea legturii peptidice, Translocarea (deplasarea ARNm cu un codon).

1. Adaptarea (legarea)AA

are loc dup principiul codonanticodon n centrul A a. Aminoacil-ARNt se fixeaz cu Tu+GTP adiioneaz la complexul de iniiere. b. AA se fixeaz n centrul A. Simultan are loc hidroliza GTP n GDP i P Tu-GDP+GTP-Ts------Tu-GTP

2. Transpeptidarea

este formarea legturii peptidice ntre doi aminoacizi. AA din centrul P sub aciunea peptidiltransferazei trece n centrul A. Se formeaz dipeptida n centrul P rmne ARNt liber

3. Translocarea

deplasarea ARNm cu un triplet n direcia 5- 3' . Dipeptida din centrul A trece n centrul P sub aciunea factorului G (translocazei) i GTP ARNt din P prsete ribosomul

noului Aminoacil ARNt complexul: aminoacil-ARNt, factorul de elongare T (FE-T) i GTP. se fixeaz pe situsul A, dup ce are loc hidroliza GTP la GDP care se elibereaz mpreun cu FE-T. 2. formarea legturii peptidice. Enzima peptidil-transferaza catalizeaz formarea legturii peptidice ntre doi AA din situsul A i P.Peptida rmne ataat de RNAt de pe situsul A. translocaia ribozomul se deplaseaz la urmtorul codon de pe ARNm i peptidilARNt trece de pe situsul A pe P aceast etap necesit factorul de elongare G (FE-G) i GTP (necesar pentru realizarea modificrilor conformaionale care deplaseaz ribozomul).

Elongarea Decurge n 3 etape :1 fixarea

FE-G

30S

50S

A FE-T

E-PT FE-T

Terminarea

are loc cnd sunt ntlnii codonii UAA, UGA, UAG i factorii proteici de terminare: R1, R2, S. Nici un tRNA nu se poate lega cu codonii de terminare. Factorii de terminare: elibereaz lanul polipeptidic Elimin ARNt din centrul P Disocierea ribosomului n subunitile respective

La formarea unei legturi peptidice se consum patru legturi macroergice: 2 n etapa de activare a AA (ATP) i 2 n elongare: legare i translocare GTP.

Prelucr rileposttraducere

1.

2. 3. 4. 5.

Modificarea captului N- i C-terminal; captul N se acetileaz; ndeprtarea secvenei semnalizante cu ajutorul unei peptidaze; modificarea unor AA: hidroxilarea enzimatic a Pro, Lyz obinerea hidroxiprolinei, hidroxilizinei . Metilarea (Lyz n muchi) Carboxilarea Glu - -carboxil-glutamatului (protrombin) oxidarea reziduuriilor de Cis - cistinei; iodurarea reziduurilor de Tir ale tireoglobulinei. ataarea unor gr. funcionale: fosfat, glicozil, metalelor pentru formarea fosfoproteinelor,glicoproteinelor, metaloproteinelor .a. Formarea punilor disulfurice Proteina se autoasambleaz formnd conformaia nativ structura tridimensional

Inhibitori ai sintezei proteinei

1.

la nivelul replicrii:
Mitomicina mpiedica separarea catenelor de ADN Acid nalidixic inhiba ADN giraza

2.

la nivelul transcriptiei:

- Actinomicina D - se fixeaza pe ADN Rifampicina - inhiba ARN polimeraza

Inhibitorii sintezei proteinei

la nivelul translatiei:
Streptomicina inhiba legarea ARNt initiator la subunitatea 30S Cloramfenicol -inhiba peptidil transferaza Tetraciclina - inhiba legarea ARNt la ribozomi Eritromicina,Azitromicina blocheaza subunitatea 50S Puromicina blocheaza elongarea inhibnd competitiv ARNt Streptomicina - interfer cu legarea formil-MetARNt la locul de iniiere. Neomicina, Kanamicin - erori n reproducerea codului genetic Toxina difteric - inhib translocaza

Reglarea sintezei proteinelor

1.

2.

3.

Sinteza proteinelor nu e constant ea trebuie s se adapteze cerinelor vitale Celulel dispun de 3 tipuri de enzime : Constitutive - se sintetizeaz n celul cu o vitez constant. Inductible - sunt E a cror concentraie depinde de prezena sau absena din mediu a unui compus denumit inductor. Sunt implicate n cile catabolice, Represible - sunt E a cror concentraie depinde de prezena sau absena din mediu a unui compus denumit corepresor. Sunt implicate n cile anabolice. n mod normal cantitatea de E inductibile n celule este foarte mic,dar ea poate crete atunci cnd apare necesitatea utilizrii substratului E respective ( S care se comport ca inductor).

Teoria lac-operonului

Schema reglrii biosintezei proteinei la procariote a fost descris n 1961 de ctre Jacob i Monod poart denumirea de teoria lac-operonului . Modelul e bazat pe studiul reglrii mtabolismului lactozei n Escheria coli. Exprimarea GS (conin informaia cu privire la biosinteza E impicate n utilizarea lactozei:galactozidaza, permeaza i transacetilaza 1,2,3) e controlat de un fragment de ADN denumit gen reglatoare (GR) - codific represorul (R). R se leag de un fragment de ADN denumit operator (O). Legarea R la O blocheaz accesul ARN polimerazei la promotor avnd ca rezultat suprimarea transcrierii GS.

Ce se ntmpl dac bacteria dispune simultan de glucoz i lactoz? Bacteria nu consum energie pentru sinteza lac-operonului, atta timp ct dispune de glucoz. Bacteria crete pe seama glucozei - i numai atunci cnd c% acesteea devine minim ncepe s utilizeze lactoza. Metabolizarea simultan a glucozei i lactozei sunt excluse. Cum se comut activitatea bacteriei pe utilizarea lactozei cnd c% glucozei scade?

Bacteriaarecasurs glucoza

Reglareasintezeiproteineiprininducie

n prezena lactozei: Inductorul (n acest caz lactoza) se leag specific la R, ca urmare are loc desprinderea acestuia de la operator. n aceast situaie, ARN p se leag la promotor, iniiind transcrierea GS, adc a ARNm care codific E implicate n catabolismul lactozei.

Bacteriaarecasurs lactoza

n lipsa glucozei se mrete c% AMPc ce reprezint semnalul foamei la bacterii. Ca urmare, AMPc se leag de o protein receptoare specific (proteina activatoare a genei catabolice CAP) - formeaz complex (CAP- AMPc), apt s se lege de promotor (p-locus) Acest proces favorizeaz ptrunderea ARNp n locusul de reglare. Dac lactoza este prezent n mediu, operatorul este liber i ARNp efectueaz transcrierea genelor lac. CAP dispune de 2 centre: pentru AMPc i pentru ADN

Reglarea lac-operonului ntr-un mediu ceconineglucoz

Cu ct c% glucozei e mai mare, c%AMPc e mai mic. Lipsete i complexul CAPAMPc. n final ARNp nu se leag de P i GS nu sunt transcrise, indiferent dac exist sau nu lactoz, indiferent de faptul dac operatorul este sau nu ocupat de R.

Ilustrarea mecanismului de reglare a sintezei proteinei prin represie Teoria operonului explic i represia prin produs final al biosintezei E Ex: sinteza His: la c% mari de His (corepresor) se leag de R, modificndu-i conformaia activndu-l n rezultat favorizeaz legarea R la O. His produs final, CoR- sisteaz transcrierea genelor ce codific E implicate n propria sa sintez

Ilustrarea mecanismului de reglare a sintezei proteinei prin represie

REZUM M:

GR controleaz exprimarea anumitor GS prin intermediul unei proteine R Ra suprim sinteza de ARNm, deci de proteine; R inactivat permite transcrierea GS i sinteza proteinei E inductibile Ra nu are loc transcrierea. Cnd n mediul apare I R se inactiveaz are loc sinteza ARNm- proteinei E represibile R este inactiv are loc transcripia i translaia. Cnd n mediu se acumuleaz produsul final al cii anabolice (CoR)- R se activeaz, formarea complexului R-CoR i sistarea transcripiei i translaiei.

Reglarea sintezei la eucariote

Att la nivelul transcripiei ct i la nivelul translaiei Reglarea hormonal (cortizol- sinteza E gluconeogenezei; estrogenii, androgenii, vitamina D sintez de proteine specifice) Reglarea exspresiei genetice prin moleculele proteice legate de ADN (histonele) sinteza ARN pe ADN e inhibat prin adaosul de histone Reglarea proteinei la nivelul translaiei e posibil prin aciunea factorilor proteici, care contribuie iniierea, elongarea, terminarea.

Ingineria genetic

tiinta, preocupat de crearea noilor fenotipuri prin transplantarea genei unui organism n genomul altuia n scop de a lichida defectele ereditare ale genomului, adic tratarea afectiunilor ereditare (gena ntrodus nu gureaz n patrimoniul ereditar al genomului gazd) Se obtin molecule hibride (himerice) n linii marl procedura include etapele: 1. Cptarea genei 2. Cptarea ADN-ului recombinat 3.Clonarea ADN-ului recombinat Cptarea genei:Stiind structura primar a proteinei n laborator se poate obline gena respectiv (se oblin gene pn la 250 codoane)- mai greu e obtinerea genei din genomul celulei (genele se despart prin introni)- mai uor e cptarea genelor din virusuri cu enzima revertaza.

C p tareaADN-ului recombinat

gena necesar se ntroduce n celul pentru a se integra cu genomul acestuia. Pentru aceastan vitro gena se unete cu ADNvector(plasmide ce conin ADN inelar (cteva gene). De regul se folosete E Coli, ce contine un cromozom i plasmide, ce plutesc n citozol (plasmida este de 1000 ori mai mica dect cromozomul). Plasmidele se replica independent de replicarea materialului genetic. Unele plasmide se pot include n cromozom i apoi din nou s-l prseasc. Plasmidele pot trece dintr-o celul n alta n procesul deconjugare. Plasmidele se separ din E.Coli i li se nltur o parte de ADN inelar cu ajutorulenzimelor restrictaze, care recunosc i taiediferite sectoare. Folosind restrictaze diferite se poate de tiat ADN n locusurile necesare. Inrezultat se formeaz capete lipicioase (sectoaremonocatenare, capabile de a uni nucleotide complimentare. La fel se procedeaz i cu gena,care trebuie ntrodus (se formeaz capete lipicioase complimentare capetelor plasmidei). Dac se amestec gena i plasmida ele se vor uni cu capetele lipicioase. Enzima ligaza va uni capetele i se va cpta molecula ADN inelara, care contine gena menit pentru transplantare.

3.Clonarea

ADN-ului recombinat- obtinerea cantitilor dorite de protein codificat de gena eucariot ntrodus n plasmid. Dac n cultura E.Coli se ntroduc plasmide recombinate, se formeaz bacterii recombinate. In celul plasmidele se replic. Bacteriile nmulindu-se formeaz celule, care conin aceste plasmide. Acum din masa bacterian se poate de capatat cantitti sufuciente de ADN recombine

Ranadamentul sintezei bacteriene este impresionabil: Ex- 100 celule E.Coli produc prin clonare 5 mg somatostatin (cantitate, ce se obine prin prelucrarea a 100 tone de creier de bovine). Prin tehnica ingineriei genetice sau obtinut cantiti mari de insulin (Humulun), Interferon, vaccine. Diversitatea formelor n Iimita uneia i aceai specie se datorete mutaiilor i ntr-o msura mai mare recombinrii genetice.

Mutaiile.

Modificrile genomului organismului, care se pstreaz i se transmit prin ereditate se transmit apoi de la o generaie la alta. Modificrile pot interesa o pereche de baze (mutatii punctiforme) sau un grup de baze pe una sau pe ambele catene ale unei molecule de DNA.

Mutatiile punctiforme: pot decurge prin: l. substitutie (misens mutatii, unde deosebim 2 tipuri): a. Tranzitie - o BA purinic este nlocuit tot cu una purinc, una pirimidinic -tot cu una pirimidinic. b.Transversie - o pereche de baze purinice este nlocuit cu una pirimidinic sau invers. 2. Inserie - acest mecanism const n ntroducerea unei perechi de baze suplimentare n catena de DNA. 3. Deleia const n excluderea unei perechi de baze n aa mod ca ea nu mai poate f complementar i la replicare apare "golul" n ambele catene. Unele modificri n secventa nucleotidic pot duce la formarea codonului sinonim i succesiunea aminoacizilor nu se va schimba (mutatii benigne). La afectarea segmentelor mari de gen apar mutatii ntinse. In dependent de consecinele modificrilor deosebim mutaie benign, neutr, nociv. Agenii mutageni pot provoca mutaiile spontane ct i mutaiile induse.

constituiti din:- 2 lanturi polipeptidice grele identice (H446 AA)

Anticorpii sunt
idou uoare(L-214AA),

fiecare dintre ele continciteoporiune: varabil V".

i una constant C"

Secvena de AA n poriunea variabil este diferit pentru fiecare anticorp. Lanurile sunt unite ntre ele prin legturi disulfidice. Genele ce corespund poriunilor V" i C ale unui anumit tip de lan uor sunt foarte apropiate n ADN al imunocitelor care produc acest tip de lan uor, dar se gsesc departe una de alta n ADN al celulelor ce produc alte tipuride anticorpi. De aici reiese, c n imunocit se selecteaz un anumit segment de ADN, ce codific poriunea variabil a unui anumit lant uor, care se transfer prin transpoziie n vecintatea secvenei codificatoare a poriunii constante a lantului uor. Deci ADN ce codific sectoarele V" ale lanurilor H" i "L" const din cteva gene de tip diferit care-i pot schimba locurile proprii i asocia cu formarea imenselor combinaii.

Sinteza Anticorpilor

Fiecare dintre milioanele de anticorpi produi leag unul dintre milioanele de antigene posibile. Este greu de crezut c organismul are n patrimoniul su genetic cte o gen pentru fiecare anticorp pe care-l produce ntruct aceasta ar presupune o supradimensionare a genomului eucariot.

Gradul de diversificare n obinerea lanurilor H" i L" este crescut prin faptul c o poriune variabil este rezultatul asamblrii a 3 regiuni. Deci ADN ce determin poriunea variabil a anticorpului este constituit din: 1. Poriunea variabil (V) constituit din - 400 de gene. 2. Poriunea de diversitate (D) ce cuprinde -12 gene 3. Portiunea de articulare sau jonciune (J) - 4 gene Asamblarea acestor gene n diferite combinaii permite construirea a 20000 de sectoare V fapt ce asigur extrema varietate a anticorpilor.