DISEO Y ANLISIS DE REACTORES BIOLGICOS

FERMENTADORES
Parte I: Aspectos tecnolgicos: clasificacin y descripcin de fermentadores

Dr. Carlos Villanueva Aguilar

2002-03-04 Ingeniera Bioqumica 1

Temario
1.0 Introduccin: definiciones y conceptos bsicos 2.0 Aspectos tecnolgicos: clasificacin y descripcin de fermentadores 2.1 Cultivo en medio lquido 2.2 Cultivo en fase slida 3.0 Metodologa 3.1 Criterios para la seleccin de un fermentador 3.2 Variables, parmetros y ecuaciones 4.0 Ecuaciones generales 4.1 Ecuaciones de balance de materiales 4.2 Ecuaciones cinticas 4.3 Ecuaciones termodinmicas 5.0 Anlisis de fermentadores 5.1 Fermentador continuo tipo tanque agitado 5.2 Fermentador continuo con re-alimentacin celular 5.3 Fermentador continuo con clulas inmovilizadas 5.4 Fermentador de lotes alimentados (fed-batch)

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1.0 Introduccin El reactor biolgico o biorreactor es el dispositivo fsico donde se efecta un proceso biolgico bajo condiciones ambientales controladas. Fermentador: se utilizan clulas. Reactor enzimtica: se utilizan enzimas.

En un proceso biolgico interactuando: Sistema biolgico Medio ambiente

se

tiene

dos

sistemas

El diseo y la operacin del reactor son responsables de suministrar, asegurar y mantener el medio ambiente adecuado.
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Ingeniera Gentica Microbiologa Industrial

Bioqumica

BIOTECNOLOGI A

Ingeniera Qumica

REACTORES BIOQUIMICOS

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! EL CEREBRO !

Biorreactor
Software Hardware

Es el corazn de cualquier proceso de fermentacin o conversin enzimtica

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BIOREACTORES
TIPOS Y FUNCIONAMIENTO
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Tipos de biorreactores

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PREPARACIN DEL MEDIO ESTERILIZACIN DEL MEDIO

PREPARACIN DEL INCULO

RECUPERACIN DE CLULAS RECUPERACIN DE PRODUCTO

CONTROL DEL BIOPROCESO TRATAMIENTO Y DISPOSICIN FINAL DE RESIDUOS

ESTERILIZACIN DE AIRE
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AIRE
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SU FUNCION PRINCIPAL
Proveer un medio controlado para alcanzar el crecimiento y formacin de productos ptimos Su funcionamiento: depende bsicamente de : 1. 2. 3. 4. 5. Biomasa: concentracin Condiciones estriles: mantenimiento Agitacin: efectiva Calor: eliminacin Corte: condiciones correctas
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2.0 Aspectos tecnolgicos: clasificacin y descripcin de fermentadores Modo de operacin Continuo Rgimen estacionario o no estacionario Discontinuo (por lotes, tachadas, batch) Lote alimentado (fed-batch, zulauf) Semi-continuo (secuencial, lotes repetidos, cclicos)

Tipo de medio Lquido Lquido con alto concentracin de slidos (barro, slurry) Substrato slido (fase slida)
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Tipo de flujo

Mezcla completa

Flujo pistn

Vertical Ascendente Descendente

Horizontal
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Movilidad de la biomasa
Clulas nicas libres en suspensin Clulas aglomeradas libres en suspensin

Clulas inmovilizadas a soportes inertes

Soporte fijo
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Soporte en movimiento
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Geometra

Tanque (largo/dimetro = 1 a 3)

Columna (largo/dimetro mayor que 6)

Otras: anular, canal, etc.

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Ingeniera de Biorreactores
Configuracin Tamao Condiciones del proceso Modo de operar
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Biorreactores: configuracin
Tanque agitado (agitacin mecnica) Columna de burbujeo Air lift (de elevacin con aire) Lecho empaquetado Lecho fluidizado Lecho de goteo Fibra hueca
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2.1. Cultivo en medio lquidos

Tanque agitado

Discontinuo Simple Repetido (secuencial, cclico) Continuo (en estado estacionario: quimiostato) Simple Multietapa Con recirculacin de clulas Con retencin (confinacin de clulas) Lotes alimentados (fed-batch) Simple Repetido o secuencial Alimentacin intermitente o incremental Alimentacin continua Velocidad constante Velocidad exponencial
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Reactor de Tanque Agitado

Typical stirred-tank fermenter for aerobic culture
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Tanque agitado

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Tanque agitado

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BIOREACTOR DE TANQUE CON AGITACION MECANICA

Salida de gas

agitad or

Relacin variable, la mas barata es 1

Salida de agua de refrigeracin altura / dimetro:

Sellado asptico Separador de espuma Serpentn de refrigeraci

n

Enfriamiento: serpentines internos. De acero inoxidable > 20 L.

Poseen rodetes (agitadores)

Deflecto res

Capacidad: se utiliza solo al 7080 % para dar espacio a espuma.

Uso: El mas utilizado en la industria por bajos costos de operacin. Reacciones con enzimas libres e inmovilizadas, Cultivo de clulas en suspensin e 2002-03-04 inmovilizadas.

Turbina de palas planas Entrada de aire

EntradaBioqumica del agua Ingeniera de refrigeracin

Difus or

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Tanque agitado con recirculacin de clulas (reactor de lodos activados con recirculacin)

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Mezclado
Combinacin de componentes solubles. Dispersin de gases en pequeas burbujas. Mantenimiento en suspensin de partculas slidas (clulas). Dispersin de lquidos inmiscibles para formar emulsin o suspensin fina. Mejora de la transferencia de calor hacia y desde el lquido.

Difusores
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Porosos. De orificios De boquilla

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Baffles

Impeller
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Baffle arrangements.
(a) Baffles attached to the wall for low. viscosity liquids.

(b) Baffles set away from the wall for moderateviscosity liquids.
(c) Baffles set away from the wall and at an angle for high-viscosity liquids.
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Impeller designs.

Anchor

Propeller

6-flat-blade dise turbine

Paddle

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Gate Anchor

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Helical screw

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Viscosity impellers.

ranges

for

different

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Tipos De Flujo
Circular
Circular flow in an unbaffled stirred tank viewed from above.

Axial Radial. Depende de:

Diseo de la paleta. Propiedades el fluido. Tamao y proporciones del recipiente, bafles y agitador.

Circular flow: formation of vortex

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Radial-flow impeller :
Flow pattern produced by a in a baffled tank.

(a) side view

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(b) bottom view.

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Axial-flow impeller:
Flow pattern produced by an in a baffled tank

(a) side view

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(b) bottom view

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Transmisin de Calor
Calentamiento (vapor). Enfriamiento (agua de refrigeracin).

Equipos de Transmisin de Calor

Intercambiadores de tubos concntricos (operacin en contracorriente y cocorriente).
Intercambiadores de carcasa y tubos.
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Jacketed vesel

External coil

Internal helicoidal coil

Internal baffle2002-03-04 type coil

External heat Ingeniera exchanger Bioqumica

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Reactor de Columna
Column Bioreactor

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Reactor de columna

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Torre

Columna de burbujeo (bubble - column) Con clulas inmobilizadas Con clulas floculadas o pellets

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Salida de gas

BIOREACTOR DE COLUMNA DE BURBUJAS

El flujo depende de:

Caudal de aire. Diseo del difusor. Dimetro de la columna.

Propiedades del lquido.

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Suministro de aire

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BIORREACTOR DE COLUMNA DE BURBUJAS

Estructura sencilla: cilindros: alturas dobles al dimetro.
Agitacin, aireacin y mezcla; inyeccin de gas (aire) con difusor. Estructuras internas No presentan. Costo: baratos, sin partes mviles. Rendimiento: adecuado en la transferencia de materia y transmisin de calor. Usos: produccin de levaduras, cerveza, vinagre y tratamiento de aguas residuales. HETEROGENEOUS FLOW IN
2002-03-04 Ingeniera Bioqumica 38 A BUBBLE COLUMN

por

Biorreactores de clulas inmovilizadas

Lecho de clulas fijo (lecho empacado) Verticales Flujo ascendente Flujo descendente Horizontales

Lecho de clulas fluidizado (expandido)

Lecho de clulas de disco rotatorio (biodisco)

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Lecho fijo

Lecho fluidizado

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Reactor de Lecho Empaquetado

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BIORREACTOR DE LECHO EMPAQUETADO

Salida de gas Medio recirculado

Aire
LECHO RELLENO DE PARTICULAS DE CATALIZADOR

Recipiente agitado

Agitador Difusor

Packed-bed reactor with medium recycle.

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Bomba

BIOREACTOR DE LECHO EMPAQUETADO

Estructura: tubos verticales rellenos empaquetados con biocatalizadores inmovilizados o en forma de partculas. Las partculas deben ser incompresibles.
Medio de recirculacion: debe ser lmpido.Se alimenta por la parte superior o inferior y se recircula. Pantallas: a la salida para evitar la salida de partculas.

La agitacin y aireacin: en recipientes separados. La aireacin no debe realizarse en el lecho empaquetado (columna). Uso: No apta para procesos productores de gas. Clulas y enzimas inmovilizadas para producir aspartato y fumarato. Conversin de penicilina a 6 - aminopenicilnico. Resolucin de ismeros de aminocidos.
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Reactor de Lecho Fluidizado

Fluidised-bed reactor
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Catalizadores empaquetados se mantienen en suspensin por movimiento ascendente del liquido impulsado por gas. El medio es recirculado Modificacin del biorreactor de lecho empaquetado. Uso: tratamiento de residuos con arena o material similar que soporta mezclas de poblaciones microbianas. Uso organismos floculantes en la fabricacin de cerveza y vinagre.
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Salida de gas
BIOREACTOR DE LECHOS FLUIDIZADOS

Recirculacin de liquido

Entrada de gas

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pump

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Biodisco

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Reactor de Lecho de Goteo

Trickle-bed reactor
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Salida de gas
Distribuidor por nebulizacin o spray Liquido: se roca (spray) sobre la parte superior del empaquetado y las gotas descienden a travs del lecho como pequeas corrientes. Aire o gas: se introduce por la base y sube con facilidad ya que la fase liquida no es continua a travs de la columna.

BIOREACTOR CON LECHOS DE GOTEO

Recirculacin de liquido

Modificacin del biorreactor de lecho empaquetado.

Uso: tratamiento Entrada aerobio dede
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gas

pump

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Reactor Air Lift

BIOREACTOR DE ELEVACION CON AIRE

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Air-lift (agitacin por aire)

Con reciclo interno

Con reciclo externo (loop)

(tubo de tiraje, draugh/draft tube)

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Gas exhaust

Gas exhaust

Gas exhaust

Draft tube Downcomer Riser Riser

Downcomer

sparger
sparger

Air 2002-03-04

Ai Air Ingeniera Bioqumica Airlift reactor configurations r

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Estructura sencilla Agitacin: por inyeccin de aire Bajo shear Rasgo caracterstico: separacin fsica de corrientes (flujo liquido) ascendente y descendente) El gas se inyecta por el riser y baja a travs del downcomer por diferencia de densidad. Tipos: de bucle interno y bucle externo (el mas efectivo). Relacin altura dimetro: 10.1

Usos: produccin de protena unicelular de metanol y gasoil, cultivo de clulas animales, vegetales, tratamiento de aguas, 52 2002-03-04 con catalizadores Ingeniera Bioqumica procesos inmovilizados

A Comparison of Mechanically and Pneumatically Agitated Bioreactors

Mechanical agitation (Stirred Tank) 1) 2) 3) 4) 5) Pneumatic Agitation (Airlifts, Bubble Columns) Mechanically complex (stirrers, shaft, seals, Mechanically simple and robust bearings) Often high shear Gentle, low shear levels (suitable for tissue culture, plant cells, fragile genetically engineered microorganisms) Gas throughput limited by impeller flooding High gas throughputs possible (particulary in airlift devices) Difficult to clean due to mechanical Easy to clean. Extended asceptic operation complexity; greater possibility of possible (useful in continuous operation) contamination over extended operation Turbulence confined to impeller zone en More uniform distribution of turbulence viscous on-Newtonian media. Gas channels througth the impeller zone while the rest of reactor remains stagnant Operationally flexible (controlled by impeller Limited operational flexibility. Require more speed and by gas flow rate) careful design.
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6)

Reactor de Fibra Hueca

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inoculation port

water jacket

product

nutrient s

product

nutrients

cells in annula r space

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lumen

inner membrane outer membrane

Hollow fiber perfusion bioreactor

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Reactores con cultivo en medio lquido con alta concentracin de slidos (fase barro, slurry)

Tanque agitado

Laguna
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2.2. Cultivo en fase slida

Biorreactor de bandejas Lecho empacado

Tambor rotatorio
Tanque agitado Horizontal

Vertical

Lecho fluidizado aire - slido Biopilas

Tratamiento en tierra (land farming)

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Biorreactor de bandejas

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Tratamiento en suelo

Biopilas

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 Se utilizan tres grupos de biorreactores en la bioindustria.

1. No agitados sin aireacin 2. No agitados con aireacin 3. Agitados con aireacin 86 % 11 % 13 %

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Parameters Measured or Controlled in Biorreactors

Physical Temperature Pressure Reactor weight Liquid level Foam level Agitator speed Power consumption Gas flow rate Medium flow rate Culture viscosity Gas hold - up
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Chemical PH Dissolved O2 Dissolved CO2 Redox potential Exit gas composition Conductivity Broth composition (substrate, product, ion, concentrations, etc.)
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Biological Biomass concentration Enzyme concentration Biomass composition (such as DNA, RNA, protein, ATP/ADP/AMP NAD/NADH levels) Viability Morphology

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Los Dispositivos de medida usados en la Industria tienen que cumplir los siguientes requisitos:

Precisin dentro del 1 - 2 % de la escala completa. Operacin fiable durante al menos 80 % del tiempo. Bajo costo de mantenimiento. Esterilizables por vapor. Sencillez de manejo.
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Bibliografa
1. Doran, P. (1988) Bioprocess Engineering Principles. Academic Press Limited. London

2. Scragg, A. (ed). (1966) Biotecnologa para ingenieros. Sistemas biolgicos en procesos tecnolgicos. Editorial Limusa S.A. De C.V. Mxico
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Gracias

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Parameters and Other Factors in rDNA Fermentation

Inoculum preparation
Stable maintenance of recombinant cells during inoculum development.

Media desing
Medium desing for maintenance of recombinant cells

Oxygen transfer
Increased oxygen demand Sensitivity to oxygen perturbation.

Process control and optimization

Fine control of process variables (pH, temperature, DO level, etc.)

Other
Reduced shear rate when protein is secreted into medium. Optimization of dilution rate in continuous fermentation Biosafety guidelines
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