Sunteți pe pagina 1din 44

GENETICA BACTERIAN

Ereditatea: nsuirea tuturor vieuitoarelor de a transmite caracterele specifice speciei la urmai Variabilitatea: apariia unor caractere diferite de cele ale genitorilor. Suportul material al ereditii: ADN. Structura i replicarea acestuia este similiar cu cea de la celulele eucariote.
Proporia de baze complementare este constant n cadrul unei specii. Raportul adenin-timin/guanincitozin (AT/GC) servete drept criteriu taxonomic de baz n clasificarea modern a bacteriilor.

Repliconi = formaiuni genetice ce se replic independent

I. Organizarea materialului genetic la bacterii

cromozomul bacterian elementele genetice extracromozomiale


plasmidele genomul bacteriofagilor

elementele genetice transpozabile


fragmentele de inserie transpozonii).

1. Cromozomul bacterian haploid = echivalent nuclear


codific informaiile absolut necesare supravieuirii speciei n condiii normale organizarea supercoil sau supertwist a ADN (dublu spiralat spre dreapta i suprahelicat spre stnga) asigur mpachetarea economic a ADN i o configuraie optim activitii funcinale a ADN (replicare, transcripie, recombinare).

2. Formaiunile genetice extracromozomiale 2.1 Plasmidele : molecule circulare de ADN


autonome, libere n citoplasm care se replic independent de cromozom

conjugative - se pot transfera singure la alte bacterii (plasmidele R)

neconjugative - care nu pot prsi ele nsi bacteria de origine, ci numai prin intermediul unui alt plasmid conjugativ sau a unui bacteriofag (de exemplu plasmidul care codific secreia de beta-lactamaz la S.aureus)
episomi, care se pot integra prin recombinare n cromozomul bacterian, pierzndu-i autonomia de replicare (plasmidul F sau factorul de fertilitate).

Contin:

determinanii genetici eseniali ai plasmidelor codific informaiile legate de replicarea lor autonom determinanii accesori codific caractere fenotipice neeseniale supravieuirii celulei bacteriene n condiii naturale gene de transfer (tra), gene de rezisten la antibiotice (factorul R), gene de secreie a unor toxine etc.

Plasmide de interes medical

A. Plasmidele de virulen poart determinanii genetici ai unor factori de virulen secreia de enterotoxina (termolabil i termostabil) factorul de colonizare la Escherichia coli, hemolizina la Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis i E.coli exfoliantina la S. aureus gena de invazivitate la Shigella

B. Plasmidele R -de rezisten (Factorul R) sunt molecule circulare de ADN care constau n esen din dou regiuni genetice: genele care codific rezistena la antibiotice R, unice sau multiple (prin aglomerarea mai multor gene de rezisten R, pe acelai plasmid, prin fenomenul transpoziiei repetate de material genetic) genele FTR care confer plasmidului capacitatea de a se transfera RTF

R determinant

Peste 90% din tulpinile de spital prezint o rezisten de tip plasmidic: familia Enterobacteriaceae, genurile:Escherichia, Salmonella, Shigella,

Proteus, Providencia, Klebsiella, Serratia


Yersinia, Pasteurella, Campylobacter, Haemophilus, Neisseria, Bacteroides, Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus, Clostridium, i Corynebacterium.

genurile Pseudomonas, Acinetobacter, Vibrio,

Plasmidele prezente la bacilii gram-negativi sunt mai mari dect cele evideniate la bacteriile gram-pozitive.

C. Plasmidul F plasmid de de sex factor de

fertilitate i conine genele de transfertra -se pot transmite prin conjugaremediaz transferul de gene de la o celul donor la una receptor -n funcie de prezena factorului bacterii F- lipsite de factorul F, denumite celule femele i care sunt receptoare de material genetic, bacterii F+, masculine, care au factorul F+, autonom, ca plasmid n citoplasm i care sunt celule donoare, bacterii Hfr care au factorul F+ integrat n cromozom, de asemenea masculine, bacterii F care au factorul F+ ca plasmid autonom, dup ce acesta a fost integrat n cromozom i l-a prsit rupnd un fragment ADN din cromozom.

Principalele caracteristici ale plasmidelor

2.2 Bacteriofagii
virusuri care pazariteaz bacteriile Morfologie. un cap hexagonal alctuit dintr-un nveli proteic caracteristic virusurilor (capsida) i adpostete ADN un gt o prelungire numit picior (coad). Coada este un cilindru rigid nvelit ntr-un manon proteic asemntor miozinei i se termin cu o plac hexagonal ce conine o enzim de tipul lizozimului. De placa bazal se aprind 6 fibre cu rol n fixarea bacteriofagului pe suprafaa bacteriei.

Structura bacteriofagului

Cap, capsid

Manon contractil Fibrele

Coa d

Placa bazal

Infecia celulei gazd cu bacteriofag

Adsorbia fagului

Ataarea ireveversibil-prin

existena unor receptori de perete specifici

Contracia manonului Injectarea acidului nucleic

Tipuri de bacteriofagi

Genomul fagic ptruns n celul duce la sinteza unor bacteriofagi identici cu cei din care a provenit ADN. ADN-ul se replic ribozomii bacterieni vor sintetiza proteinele capsidale i ale cozii Asamblarea noilor componente bacteriofagul prsete celula= bacteriofagi litici sau viruleni fagi care se multiplic n interiorul celulei gazd, lizeaz celula i elibereaz fagii progeni=ciclu litic lizogeni sau temperai: fagi care se integreaz n cromozomul celulei gazd dar care pot iniia oricnd un ciclu litic, expresia majoritii genelor fagice fiind reprimat : profag sau fag lizogen

Consecinele lizogeniei
profagul codific el nsui unele caractere pe care le dobndete bacteria lizogen. toxigeneza la bacilul difteric care este codificat de un profag ce se afl n cromozomul bacterian. Tulpinile de bacili difterici care nu sunt lizogenizate de acest profag, nu sunt capabile s secrete toxina i sunt, deci, nepatogene, transducia- transmiterea de material genetic prin intermediul bacteriofagilor

Barbara Mc Clintock, 1931, 1952, 1983(gene sltree) Fragmentele de inserie (IS)


ABCDEFG

2.3 Elemente genetice transpozabile

Transpozaz

GFEDCBA

fragmente mici de ADN (fac parte in mod normal din plasmid/cromozom) cu limite structurale bine precizate se pot integra repetat n mai multe situsuri dintr-un genom. Transpozoni (Tn) Constau in 2 IS conin i alte gene dect cele ce codifica transpoziia Gene de rezisten IS IS
IS Gene de rezisten IS

II. Variabilitatea la bacterii


Este o latur a geneticii -important n medicina practic Mutaia Transfer de material genetic Transformare Transducie Conjugare Transpoziie

1. Mutaia

Modificri spontane ale genomului (modificri ale secvenei de nucleotide din gen)produse de : raze X, UV, ageni alchilani, etc. Punctiform afecteaz 1 nucleotid Inseria (adugare a sute de nucleotide) Deleia (pierdere ) Asigur:

Dpdv medical:

rezistena la chimioterapice, structur antigenic modificat, pierderea unor receptori specifici pentru bacteriofagi, pierderea capacitii de sintez a unui metabolit one-step:rezistena brusc la AB multi-step:bacteria devine rezistent prin mutaii succesive

2. Transferul de material genetic

2.1 Transformarea : Reprezint transferul de material genetic de la o celul donor la una receptor sub forma de ADN pur, eliberat fie prin liza celulei donor, fie prin extracie chimic 1928 Frederick Griffith.

2. Transferul de material genetic

2.1 Transformarea Streptococcus, Haemophilus, Bacillus, Neisseria,

Salmonella

se petrece nu numai ntre tulpinile aceleiai specii, ci i ntre specii diferite stare de competen - se modific structura peretelui celular, care devine mai poros, ncrcat electropozitiv, favoriznd legarea ADN-lui strin are loc n medii unde triesc mai multe specii bacteriene(colon) i sunt puse n libertate cantiti mai mari de de ADN Se practic azi n tehnici de inginerie genetic

2.2 Transducia :

transfer de gene cromozomiale de la o celul bacterian la alta, mediat de bacteriofagi 2.2.1.Transducia generalizat este mediat de fagii viruleni, litici, care dup ptrunderea n celula bacterian se multiplic i determin liza celulei gazd. n timpul lizei celulei bacteriene cromozomul acesteia se fragmenteaz ocazional: un fragment cu o dimensiune apropiat de cea a genomului fagic, n locul genomului fagic. se integreaz n capsida bacteriofagului aceti fagi pot ptrunde n alte celule bacteriene injectndule ADN-ul, ce provine de fapt din genomul celulei donoare. ADN-ul se va integra n cromozomul celulei receptoare prin recombinare, conferindu-i acesteia caractere noi: rezistena la chimioterapice, proprieti ce in de patogenitatea bacteriei etc

Transducia specializat:

mediat de fagii temperai. Dup ptrunderea n celula bacterian a ADN-lui bacteriofagului temperat, acesta se inser n cromozom prin recombinare sub forma de profag n anumite condiii are loc un proces de derepresie i genomul bacteriofagic prsete cromozomul bacterian devenind din nou autonom si iniiaz un ciclu litic cnd prsete cromozomul bacterian poate detaa din acesta un fragment de ADN care va r mne legat de genomul bacteriofagic bacteriofagul va putea intra n alt celul integrndu-se n cromozomul acesteia tot sub forma de profag. Fragmentul provenit de la prima celul bacterian poate s codifice diferite caractere rezistena la antibiotice, secreia unor enzime, toxine etc., ce se vor manifesta fenotipic la noua bacterie gazd.

2.3 Conjugarea

transferul de material genetic de la o bacterie donoare la una receptoare printr-un proces de mperechere, ce se realizeaz prin contactul direct dintre cele dou celule. Prin conjugare se pot transmite plasmide, precum i gene cromozomiale (prin intermediul factorului F+) .

Conjugarea la BGN
Factorul F+ poate fi situat pe:

plasmid transfer conditionat de existenta genelor tra, responsabile de sinteza sex-pilului si transferul plasmidului
sau pe cromozom-transfer de gene cromozomale. Aceste celule , care au factorul F integrat in cromozom, numite Hfr (frecenta mare a recombinarii genelor de la celula donoare cu cele de la celula receptoare).

F+

F+

Hfr

F
+

F-

F
+

F-

Hf r

F-

Hf r

F-

F
+

F
+

F
+

F
+

Hf r

F-

Hf r

F-

Transferul prin conjugare a plasmidelor

la bacilii gram negativicondiionat de prezena genelor de transfer tra incepe cu sinteza sex-pilului care va adera de receptori specifici prezeni pe peretele celular al bacteriei receptoare apoi - replicarea de transfer a plasmidului o caten parental de ADN va rmne n celula donor, iar a doua va trece n celula receptoare, pe tiparul lor sintetizndu-se catene complementare.

Dpdv medical importante sunt plasmidele conjugative de rezisten R. Proprieti:

Acest transfer are loc i n laborator i n macroorganism. (s-a descris transferul de plasmide de la bacilul coli nepatogen la salmonele sau shigelle. Nu s-a observat ns transferul plasmidelor de la BGN la BGP); determinanii de rezisten R: caracteristici pentru plasmidele conjugative sunt determinanii de rezisten multipli. S-au evideniat astfel la tulpinile izolate din spital plasmide ce au factori de rezisten fa de toate chimioterapicele uzuale (ampicilina, cefalosporine, streptomicina, tetraciclina, cloramfenicol, kanamycina, gentamicina, sulfonamide).

spectrul de gazde: circul ntre specii diferite.

Conjugarea la bacterii gram-pozitive

procese de mperechere i la bacteriile grampozitive Streptococcus, Streptomyces, Clostridium celula receptoare produce un peptid cu mol. mic (GM=1000 daltoni) care determin sinteza unor substane proteice de agregare de ctre celula donoare cu afinitate pentru unele substane adezive de pe suprafaa receptorului se produce astfel o legtur strns ntre receptor i donor cu formarea unei puni intercelulare care permite transferul de material genetic.

2.4. Transpoziia integrarea ntr-un genom al unui elemente genetic transpozabil din aceeai molecul de ADN sau din alta prezent n aceeai celul . Clasa I-transpoziia se face pe baza translocrii conservative(secvena se mut de la donor la receptor fr reduplicarea Tn) IS au n jur de 1000 baze i fac parte n mod normal din cromozom sau plasmide sunt prezente n mai multe copii i flancate la cele 2 capete ale aceleiai baze, dar n ordine invers Nu confer caracter nou celulei-pot produce modificri n expresia genelor Tn compui = 2 Is i delimiteaz determinani de rezisten sau alte caractere Clasa II Clasa III

Inseria oricrei gene ntre dou elemente transpozabile face posibil transferul ei prin recombinare neomolog, n aceeai celul pe o molecul de ADN nenrudit structural. Astfel, prin transpoziie se pot produce deleii, inversii, transpuneri de determinani genetici de pe un plasmid pe altul sau chiar fuzionarea stabil a unor repliconi complei, de pild a dou plasmide. Evoluia rezistenei la antibiotice a bacteriilor nu poate fi conceput astzi fr fenomenul de transpoziie. Mecanismele transpoziiei sunt responsabile de formarea plasmidelor cu multirezisten, prin inserarea succesiv pe un plasmid a determinanilor genetici de rezisten situai ntre dou elemente transpozabile de pe alte plasmide.

Integronii

Definitie: sisteme de captura si expresie a genelor sub forma de casete. Casetele sunt elemente mobile capabile sa fie integrate sau excizate printr-un mecanism de recombinare specifica, mediat de o integraza.

Integronii

Structura: incapabili de autoreplicare, integronii sunt purtati pe cromozom sau plasmid, sau pot fi vehiculati printr-un element transpozabil. Sunt constituiti dintr-o regiune 5' inclusiv o gena intI care codeaza o integraza , un site de atasament attI si un promotor.

Integronii

Exista mai multe clase de integroni definite in functie de natura genelor care codifica integraza. Trei dintre ele (clasele 1, 2 ,3) sunt bine caracterizate si sunt implicate in diseminarea rezistentei la antibiotice.

Integronii
Integronii difera de transpozoni prin mai multe caracteristici: Casetele nu contin gene care sa codifice proteinele responsabile de mobilitatea lor, recombinaza este prezenta pe partea imobila a integronului Casetele nu sunt flancate la extremitati de secvente repetitive

Au fost descrise peste 60 de casete implicate in rezistenta la antibiotice sau antiseptice :

Studii epidemiologice demonstreaza raspandirea integronilor de clasa 1 la diferite bacterii Gram-ngative : Entrobacterii, Pseudomonas, Vibrio, Acinetobacter, Campylobacter.

Ingineria genetic
Existena vectorilor (plasmide, bacteriofagi i n ultimul timp descoperirea existenei unor transpozoni ce se pot transmite de la o celul bacterian la alta) permite transferul de gene celulei bacteriene, ceea ce consituie baza ingineriei genetice. Bacteria preferat a ingineriei genetice este E.coli, care n mod natural nu este capabil de transformare, dar creia prin clonare i s-au introdus n genom cei mai diveri determinani genetici provenind de la organisme ndeprtate filogenetic, cum sunt omul i animalele. Prin aceast tehnic se introduc n genomul bacterian gene care codific sinteza unor substane ca, de exemplu, interferoni, insulin, STH etc., a cror obinere pe cale chimic ar fi fie imposibil, fie

Aplicaiile biotehnologiei moleculare n diagnosticul clinic

Au permis apariia unei noi discipline: diagnosticul molecular reprezentnd utilizarea probelor de acizi nucleici n diagnosticul bolilor boli infecioase, neoplasme, boli ereditare O alt aplicaie : amprenta ADN permite diferenierea indivizilor prin utilizarea unor fragmente minuscule de esut sau probe de snge

S-ar putea să vă placă și