Sunteți pe pagina 1din 16

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR

CLUJ NAPOCA COALA DOCTORAL

FACULTATEA DE MEDICIN VETERINAR

SCURTU IULIU CLIN

REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT


Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

CONDUCTOR TIINIFIC PROF. UNIV. DR. dr. h.c. ALECSANDRU IOAN BABA
Membru titular al Academiei de tiine Agricole i Silvice

CLUJ-NAPOCA
2011-

Introducere
1

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

La ora actual, este cunoscut implicarea radicalilor liberi i a stresului oxidativ n numeroase entiti patologice. Dintre acestea, putem s amintim de diabet, cancer, boala Alzheimer, boala Parkinson, scleroza lateral amiotrofic, afeciunile cardiovasculare, glaucom, mbtrnire, hipertensiune etc. Sursele de radicali liberi sunt extrem de numeroase i variate, putnd fi att endogene ct i exogene organismelor. n rile dezvoltate, mncarea de tip fast-food reprezint o important surs de radicali liberi. n urma prelucrrii necorespunztoare a uleiului, rezult produi de oxidare cum ar fi malonildialdehida i 4hidroxi-2 nonenal, care s-a dovedit c pot induce modificri mutagenice ADN-ului, avnd loc astfel iniierea procesului tumoral. Stresul oxidativ i peroxidarea lipidc sunt considerate a juca un factor cheie n carcinogeneza mediat prin nutriie. De asemenea, ingestia de grsimi care au suferit un proces de termo-oxidare s-a dovedit a fi implicate n inducerea, dezvoltarea i progresia afeciunilor cardiovasculare. S-a constat existena unui paralelism ntre cantitatea de lipide oxidate preluate prin hran i concentraia acestora de la nivelul limfonodurilor mesenterice. Deteriorarea oxidativ a crnii duce la pierderea caracteristicilor nutritive i de calitate a acesteia. Efectele negative ale radicalilor liberi i al produilor de oxidare lipidic sunt combtute prin administrarea de antioxidani. -tocoferolul este unul dintre cele mai importante substane liposolubile care ntrerupe lanul de formare a peroxizilor lipidici. Vitamina E este ncorporat la nivel subcelular, la nivel de membrana celular, unde exist o concentraie ridicat de acizi grai polinesaturai, elemente care sunt extrem de sensibile la atacurile oxidative. De asemenea, seleniul, intr n structura GPx, enzim implicat n neutralizarea apei oxigenate i a peroxizilor lipidici. Malonildialdehida (MDA) este un produs final de oxidare al lipidelor, i este folosit ca barometru al nivelului de oxidare lipidic. Determinarea valorii MDA, este una dintre cele mai vechi metode de apreciere a gradului de oxidare al lipidelor i totodat unul dintre markerii stresului oxidativ cei mai utilizai [15]. Creterea valorii MDA, este n legtur direct cu creterea nivelului de oxidare lipidic. Nivelul MDA este ntotdeauna o expresie a mai multor factori: sinteza MDA, capacitatea organismului de a elimina acest produs final ct i nivelul substanelor cu rol antioxidant. Cnd nivelul oxidrii lipidice, depete capacitatea antioxidant a organismului, apar distrugerile celulare. Proteinele prin structura lor complex, prezint numeroase puncte unde pot suferi atacuri oxidative, fcndu-le una dintre primele inte ale radicalilor liberi. Oxidarea proteinelor poate duce la formarea unor legturi disulfhidrice, reversibile, sau poate determina formarea unor derivai non-biologic reductibili (baza Schiff). Aldehidele pot reaciona cu gruprile sulfidril (SH) sau amino (NH2) formnd diferite legturi intramoleculare sau formeaz puni de legtur intermoleculare. Structurile rezultate dup aceste atacuri oxidative au de obicei funcia pierdut [9]. Degradarea oxidativ a proteinelor, duce la diverse consecine fucionale, cum ar fi inactivarea unor enzime, creterea susceptibilitii la agregare i proteoliz. Carnea de pasre este foarte sensibil la atacurile oxidative, datorit coninutului ridicat al acizilor grai polinesaturai. Modificrile consecutive aciunii radicalilor liberi, pot s apar att n timpul refrigerrii, congelrii sau preparrii produselor din carne. Scop. Prin lucrarea de fa ne-am propus evidenierea modificrilor morfologice i biochimice induse prin administrarea de ulei oxidat la puii de carne. Administrarea de ulei oxidat este o form de a induce stres oxidativ, dar sursele ce pot iniia formarea de radicali liberi sunt extrem de numeroase. n condiiile n care, asupra puilor acioneaza elemente capabile s induc stres oxidativ (stres caloric, alimentar, presiunea infecioas, deficitul n substane cu rol antioxidant etc.) produsele i subprodusele din carne provenite de la aceti indivizi se constitue n elemente toxice sau potenial toxice asupra sntii oamenilor. De asemenea ne-am propus testarea eficienei unor antioxidani (combinaia dintre vitamina E i seleniu) de a limita modificrile determinate de radicalii liberi la puii de carne. Condiii experimentale. Material i metod Prin protocolul experimental conceput, ne-am propus evidenierea modificrilor induse de radicalii liberi la puii de carne. De asemenea, alt obiectiv a fost testarea eficienei unor antioxidani, n reducerea efectelor nocive induse de speciile reactive ale oxigenului. Ca i surs de radicali liberi am folosit uleiul de floarea soarelui oxidat termic. Astfel, ncepnd cu ziua a II-a de via, puilor din lotul UO li s-a administrat ulei oxidat de floarea soarelui, ntr-o proporie de 20 %. La subiecii din lotul UO+A, pe lng uleiul oxidat, au primit un surplus de antioxidani (seleniu organic 200 g/t furaj i vitamina E 300 mg/kg furaj). De asemenea, pe lng loturile UO i UO+A experimentul a cuprins i un lot martor. Toate condiiile de microclimat, alimentaie, tratamente au fost conforme cu normele n vigoare.
2

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

Markerii determinai pentru caracterizarea efectelor radicalilor liberi i a antioxidanilor asupra puilor broiler au fost: greutatea puilor n zile diferite de via, nivelul MDA plasmatic i tisular, nivelul PCO plasmatic i tisular, nivelurile SOD, GPx, CAT i TAS plasmatice i tisulare ct i modificarile morfologice tisulare. Uleiul de floarea soarelui a fost oxidat prin meninerea la o temperatur de 130 C timp de 48 ore [6], rezultnd o cretere a nivelului de oxidare lipidic, de la 0,2 x 10-9 MDA/ml la 2,4 x 10-9 MDA/ml. Omogenizarea uleiului cu furajul i/sau cu antioxidanii s-a realizat tot la dou zile Aprecierea grutii puilor Rezultate i discuii Pentru aprecierea diferenelor de greutate ntre cele trei loturi, am urmrit evoluia greutii puilor la vrsta de 10, 20, 30 i 38 de zile. La vrsta de 10 zile, media greutii puilor a fost de 203,618,17 g la lotul UO, de 206,818,21 g la lotul UO+A, iar la lotul martor de 207,577,34 g. La vrsta de 10 zile, nu s-au constatat diferene asigurate statistic ale greutii puilor ntre cele trei loturi. La vrsta de 20 de zile, greutatea puilor la lotul UO a fost de 631,1215,20 g, la lotul UO+A a fost de 640,8511,62 g , iar la lotul martor a fost de 681,7110,95 g. Nici la aceast vrst, nu s-au constatat diferene asigurate statistic la cele trei loturi. Aprecind greutatea puilor la vrsta de 30 zile, constatm lipsa diferenelor semnificative ntre cele trei loturi. Greutatea puilor la lotul martor a fost de 1440,8422,06 g, la lotul UO+A a fost de 1400,1515,06 g, iar la lotul UO a fost de 1385,5722,16 g. Cntrind pui la vrsta tierii constatm lipsa unei diferene asigurate statistic ntre cele trei loturi. Greutatea puilor la 38 zile la lotul martor a fost de 2244,94117,85 g, la lotul UO+A a fost de 2053,6795,24 g, iar la lotul UO a fost de 1992,0781,58 g. Rezultate asemntoare constat i Racanicci [21], care adminstreaz grsime oxidat puilor de carne, i nu evideniaz nicio diferen ntre cele dou loturi n ce privete greutatea la tiere, greutatea carcasei, greutatea membrelor i greutatea pieptului. Concluzii Administrarea de antioxidani i ulei oxidat nu a evideniat nicio diferen asigurat statistic ntre cele trei loturi, la niciun palier de msurare a greutii. Aprecierea stresului oxidativ plasmatic i tisular Material i metod Markerii stresului oxidativ evaluai n experimentul desfurat de ctre noi, au fost MDA (plasmatic i tisular) i PCO (plasmatice i tisulare). Evaluarea MDA s-a fcut n dinamic n cazul esuturilor. Astfel, n cazul esuturilor am determinat valoarea MDA n ziua sacrificrii, la cinci zile de meninere a carcasei la temperatura de 5 C (ziua5), i dup 90 zile (ziua90) de meninere a carcasei la temperatura de -18 C. MDA plasmatic, ct i PCO plasmatice i tisulare s-au determinat doar din probele prelevate n ziua sacrificrii. Pentru determinarea MDA am folosit metoda cu acid tiobarbituric, iar pentru determinarea PCO am utilizat metoda cu 2,4-dinitrofenil-hidrazina. Rezultate i discuii Valoarea MDA de la nivel plasmatic, a suferit variaii consecutiv administrrii de ulei oxidat i antioxidani. Valoarea MDA la lotul martor a fost de 0,6250,315 nmol/ml plasm, la lotul UO+A a fost de 1,9550,291 nmnol/ml plasm, iar la lotul UO de 2,5950,219 nmnol/ml plasm. Administrarea de substane antioxidante, determin o reducere asigurat statistic (p<0,0007) a nivelului stresului oxidativ plasmatic, valoarea MDA fiind redus la lotul UO+A comparativ cu lotul UO. Uurina inducerii stresului oxidativ la nivel plasmatic este subliniat de numeroi autori. Lin [17] induce stres oxidativ la puii de carne prin meninerea lor la o temperatur de 32 C la vrsta de cinci sptmni. Comparativ cu lotul meninut la o temperatur termoneutr, Lin [17] constat o diferen asigurat statistic (p<0,05). Aydemir [4] constat eficiena crescut a combinaiei dintre vitamina E i seleniu n reducerea MDA plasmatic, comparativ cu lotul martor. Yen [32] constat nivele crescute ale MDA plasmatic la obolani a cror diet a fost suplimentat cu ulei oxidat, comparativ cu lotul martor. Diferena dintre aceste loturi fiind asigurat statistic (p<0,05). La nivelul musculaturii albe, suplimentarea dietei cu antioxidani, determin o reducere a nivelului MDA la lotul UO+A n ziua sacrificrii, comparativ cu lotul UO. Aceast reducere este asigurat statistic, p<0,02. n cazul lotului UO nivelul MDA din musculatura alb, n ziua sacrificrii este de 0,1170,07 nmol/mg protein, comparativ cu lotul UO+A la care valoarea este de 0,050,02 nmol/mg protein. Valoarea MDA din musculatura alb, din ziua sacrificrii la lotul martor este de 0,0130,005 nmol/mg protein.
3

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

Evalund valoarea MDA n cazul musculaturii albe, dup cinci zile de meninere a carcasei la temperatura de refrigerare, constatm c valoarea MDA la lotul martor este de 0,0150,006 nmol/mg protein, la lotul UO+A este de 0,0450,02 nmol/mg protein, iar la lotul UO este de 0,1440,07 nmol/mg protein. Diferena dintre loturile UO+A i UO este asigurat statistic, (p<0,003). Aadar, suplimentarea dietei cu antioxidani, determin o protecie antioxidant i dup o period de cinci zile de refrigerare a carcasei. Valoarea MDA nregistrat la cele trei loturi n musculatura alb, dup 90 zile de congelare, a fost la lotul martor de 0,0340,007 nmol/mg protein, la lotul UO+A de 0,0820,06 nmol/mg protein iar la lotul UO de 0,4280,133 nmol/mg protein. Procesele de lipoperoxidare sunt prezente i la temperatura de congelare, sunt mult mai intense la lotul UO, comparativ cu lotul UO+A, diferenele fiind asigurate statistic (p<0,001). Evalund valoarea MDA n cazul musculaturii roii, n ziua sacrificrii, constatm n cazul lotului martor o valoare de 0,0650,034 nmol/mg protein, n cazul lotului UO+A nivelul MDA a fost de 0,1360,051 nmol/mg protein, iar la lotul UO a fost de 0,1690,061 nmol/mg protein. Dac facem o comparaie ntre valoarea MDA din ziua 0 n cazul musculaturii albe i valoarea MDA din ziua 0 n cazul musculaturii roii, constatm rezultate mult mai mari la nivelul musculaturi roii. Procesul de lipoperoxidare este continuu i n musculatura roie, la cinci zile de meninere a esuturilor la temperatura de refrigerare. n ziua cinci de determinare a MDA din musculatura roie, constatm o valoare de 0,1360,046 nmol/mg protein la lotul martor, valoarea MDA la lotul UO+A este de 0,1540,024 nmol/mg protein, iar la lotul UO de 0,3420,175 nmol/mg protein. Administrarea de antioxidani, determin o scdere asigurat statistic (p<0,007) a MDA la nivelul musculaturii roii la lotul UO+A comparativ cu lotul UO n ziua cinci de refrigerare. La 90 zile, dup meninerea carcasei la temperatura de congelare, valoarea MDA din musculatura roie la lotul martor este de 0,3010,094 nmol/mg protein, la lotul UO+A este de 0,3810,08 nmol/mg protein, iar la lotul UO este de 0,9690,283 nmol/mg protein. Diferena dintre lotul UO+A, lotul cu antioxidani, i lotul UO, este asigurat statistic, p<0,001. Compararnd nivelul MDA din musculatura roie, cu nivelul MDA din musculatura alb, constatm valori crescute la nivelul musculaturii roii. Aceste rezultate pot fi explicate prin procentul de acizi grai polinesaturai net superior n cazul muchiului rou, acizi care sunt mai susceptibili la peroxidare comparativ cu acizi grai monnesaturai, prin prezena n cantitate crescut a elementelor cu efect pro-oxidant cu origine la nivelul mioglobinei (fierul) ct i densitatea crescut a mitocondrilor, la care se adaug catena de respiraie. Evalund MDA-ului din esutul hepatic, n ziua sacrificrii, constatm la lotul martor o valoare de 0,0060,005 nmol/mg protein, la lotul UO+A este de 0,0560,018 nmol/mg protein, iar la lotul UO este de 0,0680,033 nmol/mg protein. Administrarea de antioxidani nu determin nicio diferen asigurat statistic ntre lotul UO+A i lotul UO. Monitorizarea valorii MDA la nivel hepatic i n ziua cinci, confirm continuarea proceselor de lipoperoxidare. Astfel, n cazul lotului martor valoarea MDA este 0,0070,017 nmol/mg protein, n cazul lotului UO+A de 0,1100,036 nmol/mg protein, iar la lotul UO de 0,1620,027 nmol/mg protein. Administrarea de antioxidani determin o reducere a nivelului MDA la nivelul ficatului dup cinci zile de refrigerare, diferena dintre lotul UO+A i lotul UO fiind asigurat statistic (p<0,005). La nivelul esutului hepatic, valoarea MDA dup 90 zile de congelare, n cazul lotului martor, este de 0,0620,034 nmol/mg protein, n cazul lotului UO+A este de 0,4750,263 nmol/mg protein, iar la lotul UO de 0,8720,141 nmol/mg protein. Diferena dintre nivelul MDA, la lotul OU+A i lotul UO, la nivelul ficatului, la 90 zile de congelare, este asigurat statistic (p<0,002). La nivel plasmatic, valoarea proteinelor carbonilate la lotul martor este de 0,4050,22 nmol/mg protein, la lotul UO+A este de 2,1230,82 nmol/mg protein, iar la lotul UO de 3,4150,800 nmol/mg protein. Constatm existena unei creteri asigurate statistic a valorii proteinelor carbonilate la lotul UO comparativ cu lotul UO+A (p<0,01). Nivelul sczut al PCO la nivel plasmatic la lotul UO+A este consecutiv administrrii antioxidanilor. n cazul musculaturii albe, valoarea PCO la lotul martor a fost de 0,7310,499 nmol/mg protein, la lotul UO+A nivelul PCO a fost de 1,0820,863 nmol/mg protein, iar la lotul UO valoarea PCO este de 2,4650,927 nmol/mg protein. Diferena dintre loturile UO i UO+A este asigurat statistic, p<0,006.

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

La nivelul musculaturii roii, valoarea PCO la lotul martor a fost de 0,7640,260 nmol/mg protein, la lotul UO+A a fost de 1,8950,679 nmol/mg protein, iar la lotul UO valoarea PCO a fost de 2,0140,672 prot nmol/mg protein. Dei ntre loturile UO i UO+A exist o diferen, aceasta nu este asigurat statistic. Suplimentarea dietei cu substane antioxidante, nu determin o scdere asigurat statistic a PCO la nivelul musculaturii roii ntre loturile UO i UO+A. Valoarea proteinelor carbonilate tisulare hepatice la lotul martor este de 1,7280,483 nmol/mg protein, la lotul UO+A este de 2,7580,801 nmol/mg protein, iar la lotul UO este de 3,880,944 nmol/mg protein. Suplimentarea dietei cu antioxidani determin o reducere asigurat statistic (p<0,01) a PCO la lotul UO+A comparativ cu lotul UO. Administrarea de seleniu i vitamina E determin n general o reducere a nivelului stresului oxidativ plasmatic i tisular la lotul UO+A comparativ cu lotul UO. De asemenea, dac lum n discuie stresul oxidativ la nivelul musculaturii albe i roii, constatm nivele net superioare ale acestuia n musculatura roie. Tipul muscular rou este caracterizat de nivele crescute ale stresului oxidativ, datorit coninutului ridicat n AGPN, a prezenei unei cantiti crescute de fier, elemente implicate n formarea radicalilor liberi. De asemenea, o surs important de radicali liberi n cazul musculaturii roii o constitue catena de respiraie. Carnea de pasre este extrem de sensibil la oxidare datorit coninutului ridicat n acizi grai polinesaturai. Creterea gradual a nivelului MDA dup sacrificare o constat i Alasnier [2]. Dac n ziua sacrificrii, nivelul MDA din musculatura alb a fost de 0,03 mg MDA/kg esut, la 14 zile dup sacrificare constatm o valoare de 0,10 mg MDA/kg. Valoarea MDA din musculatura roie din ziua sacrificrii a fost de 0,07 mg /kg esut, iar la 14 zile dup sacrificare constatm o valoare de 0,30 mg MDA/kg. Nam [19] constat eficiena vitaminei E, la puii de carne, ca i antioxidant, pentru reducerea nivelului MDA. Diferena dintre lotul cu vitamina E i lotul martor este asigurat statistic (p<0,05). De asemenea, Russell [22] constat eficiena dependent de doz a vitaminei E ca i substan cu aciune antioxidant. Russell [22] evideniaz existena unei diferene asigurate statistic (p<0,05), ntre nivelul MDA din musculatura membrelor i musculatura pieptului la lotul care a primit un supliment de vitamina E de 20 mg/kg, comparativ cu lotul care a primit un suplimet de 400 mg/kg furaj vitamina E. Guo [12] suplimentnd furajul puilor cu doze mici de vitamina E, obine o corelaie negativ (R20,93) ntre doza de vitamina E suplimentat i nivelul de lipoperoxidare. Pentru stabilirea exact a necesarului de vitamina E i seleniu din furaj, trebuie s renunm la aspectele legate doar de sporul zilnic al puilor sau de gradul de conversie al furajului. Valoarea MDA tisular i seric ar fi un indice bun pentru aprecierea necesarului, ntruct obinerea unui produs sntos care s nu pun n pericol sntatea consumatorului trebuie s fie prioritar. Experimentele noastre au artat c administrarea de vitamina E i seleniu asigur o protecie antioxidant eficient att la nivel plasmatic i tisular. De asemenea, aceti antioxidani determin o bun protecie antioxidant la nivel tisular, att n condiiile pstrrii carcasei la temperatura de refrigerare ct i la temperatura de congelare. Aprecierea nivelului enzimelor antioxidante i TAS sanguine i tisulare n cursul evoluiei, organsimele i-au dezvoltat un sistem de aprare antioxidant care face posibil viaa n mediul aerob. Din acest sistem fac parte i SOD, GPx i catalaza. Aceste enzime sunt implicate n reducerea diferitelor substrate cu rol pro-oxidant, activitatea lor fiind interconectat. Material i metod Pentru determinarea activitii SOD, GPx i TAS am folosit kiturile produse de ctre firma RANDOX, respectnd specificaiile productorului, iar pentru determinarea catalazei am utilizat metoda Bach Zubkova. Rezultate i discuii Valoarea SOD la nivel eritrocitar la lotul martor este 2092481,118 U/g protein, la lotul UO+A valoare SOD este de 9410,6671036,814 U/g protein iar la lotul UO valoare SOD este de 8153,5671225,411 U/g protein. Administrarea de antioxidani determin o cretere asigurat statistic (p<0,001) a SOD la nivel eritrocitar la lotul UO+A comparativ cu lotul UO. Valoarea SOD, n cazul musculaturii albe, la lotul UO+A este de 708,714122,061 U/g protein iar la lotul UO este de 617,522247,857 U/g protein, iar la lotul martor a fost de 119,31453,980 U/g protein. n cazul musculaturii albe, dei ntre nivelul SOD la lotul UO i lotul UO+A exist o diferen, aceasta nu este asigurat statistic. Lipsa unei diferene asigurate statistic ntre loturile UO+A i UO o constatm i la nivelul musculaturii roii. Nivelul SOD la lotul UO este de 1665,89279,625 U/g
5

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

protein, la lotul UO+A este de 1834,857139,693 U/g protein iar la lotul martor este de 528,210160,307 U/g protein. Lipsa unor diferene asigurate statistic ntre loturile UO i UO+A n cazul esuturilor musculare, este consecina existenei anionul superoxid n concentraii relativ egale la cele dou loturi. Valoarea SOD de la nivelul esutului hepatic n cazul lotului martor a fost de 1528335,564 U/g protein, la lotul UO+A a fost de 6767,571419,983 U/g protein iar la lotul UO a fost de 5620,266563,603 U/g protein. Administrarea de antioxidani, a determinat un nivel crescut de sintez enzimatic n esutul hepatic a SOD, astfel, ntre loturile UO i UO+A exist diferene asigurate statistic (p<0,001). Administrnd seleniu la puii de carne (Sel-Plex 1 mg/kg diet), Plancha [20] a constatat o cretere a SOD eritrocitar, (dei SOD nu este o enzim care conine seleniu) asigurnd o protecie eficient mpotriva stresului oxidativ. Efectul vitaminei E i al seleniului, n creterea nivelului eritrocitar al SOD a fost demonstrat i la obolani. Konar [15] induce stres oxidativ prin administrarea de clorur de cadmium (1 mg/kg s.c.) i constat la nivel eritrocitar o scdere asigurat statistic (p<0,05) a SOD comparativ cu lotul care a primit pe lng clorura de cadmiu i vitamina E i seleniu. Variaii ale SOD la nivel muscular constat i Shireen [25]. Autorul determin activitatea SOD la oarice, n dou tipuri musculare diferite, unul oxidativ, muchi rou (sartorius) i unul glicolitic, muchi alb (pectoralis), i constat c diferenele dintre acestea sunt asigurate statistic (p<0,05), valorile fiind net superioare n musculatura roie. La toate cele trei loturile luate n discuie valorile cele mai mari ale SOD sunt nregistrate la nivel eritrocitar>hepatic>muchi rou>muchi alb. Aceaste diferene ntre loturi, nu sunt numai expresia stresului oxidativ, indus de anionul superoxid mai intens la nivelul unui esut comparativ cu altul, ci pot s fie consecutiv unor variaii tisulare ale SOD. Hernandez [13] constat variaii asigurate statistic (p<0,05) ale SOD muscular, la porci din rase diferite. n timp ce valoarea SOD n muchiul psoas major este de 636 U/g esut la marele alb iar la metisul Iberain x Duroc valoarea SOD este de 928 U/g esut. Administrarea de vitamina E i seleniu infleuneaz nivelul GPx eritrocitar. Valoarea GPx n cazul lotului martor este de 0,7050,271 U/g protein, la lotul UO+A este de 18,6913,326 U/g protein, iar la lotul UO valoarea GPx este de 2,5900,691 U/g protein. Constatm astfel, existena unei diferene asigurate statistic (p<0,001) ntre lotul UO+A i lotul UO. n musculatura alb, evoluia GPx urmrete acelai tipar ca i la nivel eritrocitar, diferena dintre loturile UO+A i UO fiind asigurat statistic (p<0,006). Astfel, valoarea GPx n cazul lotului martor a fost de 0,84 U/g protein, n cazul lotului UO+A a fost de 3,84 U/g protein iar la lotul UO de 2,2 U/g protein. n cazul musculaturii roii valoarea GPx la lotul martor este de 1,0310,357 U/g protein, la lotul UO+A este de 5,091,156 GPx U/g protein, iar la lotul UO de 2,8470,970 U/g protein, diferena dintre lotul cu antioxidani i cel fr antioxidani fiind asigurat statistic (p<0,001). La nivelul esutului hepatic, valoarea GPx la lotul martor a fost de 5,4102,090 U/g protein, lotul UO+A a fost de 37,2004,450 U/g protein, n timp ce la lotul UO a fost de 15,5403,015 U/g protein. ntre valoarea GPx de la lotul OU i valoarea GPx de la lotul UO+A exist diferene asigurate statistic (p<0,001). Constatm astfel, existena unor diferene asigurate statistic ntre lotul UO i lotul UO+A. Aceste diferene sunt rezultatul administrrii de seleniu, element care este co-factor la nivelul prii active a GPx. Corelaia pozitiv dintre nivelul seleniu i GPx la nivel eritrocitar o realizeaz i Urek [29], care obine o cretere semnificativ (p<0,05) a GPx la lotul care a primit un supliment de seleniu n hran, comparativ cu lotul martor. Chang [7] administrnd puilor de carne seleniu (0,2 ppm selenit de sodiu) sau o combinaie dintre seleniu i vitamina E (100 UI/kg) constat nivele crescute (semnificative statistic) ale GPx la nivel eritrocitar, la loturile cu seleniu compartiv cu lotul martor. Wang [31] insist pe importana tipului sursei de seleniu pentru modularea nivelului GPx plasmatic i hepatic. Wang [31] obine valori crescute, asigurate statistic, ale GPx n urma suplimentrii dietei puilor cu seleniu organic, comparativ cu suplimentarea dietei puilor cu seleniu anorganic. Comparnd nivelul GPx n cele dou tipuri musculare, constatm valori crescute n cazul musculaturii roii. Acest lucru se explica prin capacitatea crescut a muchiului oxidativ, rou de a fixa seleniul ntr-o concentraie mai ridicat. Legtur dintre seleniu i GPx la nivel hepatic o face Urek [29]. Suplimentnd dieta puilor cu seleniu, obine valori crescute ale GPx la nivel hepatic comparativ cu lotul martor (p<0,001).

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

Suplimentarea dietei cu seleniu, determin creterea activitii GPx. Nivelul tisular al seleniului difer foarte mult n funcie de forma de prezentarea a seleniului. Nivelele cele mai mari ale GPx, la nivel sanguin i tisular, sunt asigurate n condiiile utilizrii sursei organice de seleniu comparativ cu sursa anorganic. Nivelul cel mai ridic al GPx, n ordinea afiniii pentru esuturi constatat de noi este ficat>snge>muchi rou>muchi alb. Administrarea de ulei oxidat i antioxidani a determinat variaii ale nivelului catalazei la nivel eritrocitar. La lotul martor, catalaza eritrocitar este de 43,29320,071 U/g protein, la lotul UO+A este de 223,27869,850 U/g protein, iar la lotul UO este de 156,45157,575 U/g protein. Administrarea de antioxidani, determin o cretere asigurat statistic (p<0,05), a catalazei la lotul UO+A comparativ cu lotul UO. La nivelul musculaturii albe, catalaza are o valoare de 82,40832,810 U/g protein la lotul UO, n timp ce la lotul UO+A valoarea catalazei este de 104,89257,537 U/g protein, iar la lotul martor catalaza are o valoare de 23,88112,662 U/g protein. n cazul musculaturii albe, administrarea de vitamina E i seleniu nu asigur o diferen statistic ntre loturile UO i UO+A. Pentru musculatura roie, valoarea catalazei la lotul martor este de 62,06831,960 U/g protein, la lotul UO+A catalaza este 280,541110,332 U/g protein, iar la lotul UO de 206,56774,152 U/g protein. i la nivelul musculaturii roii, administrarea de substane antioxidante nu determin o valoare asigurat statistic a CAT la lotul UO+A comparativ cu lotul UO. n situaia esutului hepatic, valoarea catalazei la lotul martor a fost de 498,837198,629 U/g protein, la lotul UO+A a fost de 2028,614137,793 U/g protein, iar la lotul UO a fost de 1604,520324,207 U/g protein. Administrarea de antioxidani determin o cretere asigurat statistic (p<0,01) a catalazei hepatice la lotul UO+A comparativ cu lotul UO. Efectul benefic al vitaminei E pentru creterea nivelului CAT este semnalat i de Srilatha [26]. Autorul administrnd puilor vitamina E n doz de 50 mg/kg, constat valori semnificativ crescute ale catalazei eritrocitare (p<0,01), fa de lotul martor (fr vitamina E). Nivelul hepatic al catalazei este influenat de administrarea de vitamina E i la oareci. Vitamina E determin o cretere asigurat statistic (p<0,01) a catalazei hepatice, n urma inducerii stresului oxidativ cu formaldehid [11]. Chen [8] prin manipulare genetic obine oareci transgenici care prezint o activitate a CAT de pn la 600x mai mare la nivelul musculaturii cardiace, esut care a prezentat o rezisten la efectul citotoxic indus de doxorubicin, la alternana ischemie-reperfusie i hipoxie-reoxigenare [8, 14]. Administrarea de seleniu, determin reducerea stresului oxidativ i creterea CAT la nivelul SNC, n urma inducerii stresului oxidativ cu metamizol. Diferenele ntre loturile cu metamizol la care s-a adugat sau nu seleniu, prezint diferene semnificative, nivelul catalazei fiind crescut la lotul cu seleniu [3]. Ordinea activitii tisulare a CAT la puii de carne constatat de ctre noi este ficat>muchi rou>eritrocite>muchi alb. Urmare a administrrii de vitamina E i seleniu constatm creteri semnificative ale nivelului TAS la nivel sanguin. Valoarea TAS la nivel plasmatic la lotul UO+A este de 1,6860,448 mol/ml plasm, iar la lotul UO este de 0,9990,253 mol/ml diferen care este asigurat statistic (p<0,04). Administrarea de vitamina E i seleniu a determinat creterea valorii TAS la nivelul musculaturii albe la lotul UO+A i implicit o protecie antioxidant mai eficient. Dac la lotul UO+A valoarea TAS din musculatura alb este de 0,0840,027 mol/mg protein, la lotul UO valoarea TAS este de 0,0570,005 mol/mg protein, astfel, ntre lotul UO+A i UO este o diferen asigurat statistic (p<0,01). Nivelul TAS din musculatura roie n cazul lotului UO a fost de 0,07780,012 mol/mg protein, iar la lotul UO+A a fost de 0,1380,040 mol/mg protein, diferena dintre aceste loturi fiind asigurate statistic (p<0.001). Dac comparm nivelul TAS din musculatura alb cu nivelul TAS din musculatura roie constatm existena unei diferene asigurate statistic. Aceste diferene ale valorii TAS n favoarea muchiului rou sunt n legtur pe de o parte cu capacitatea ridicat a muschiului rou de a fixa vitamina E i seleniu (probabil i ali antioxidani preluai prin hran) ntr-o concentraie mai mare dect musculatura alb, i pe de alt parte, datorit unei valori nativ mai mari a statusului antioxidant total la nivelul musculaturii roii. Comparnd nivelul TAS la porc n dou tipuri musculare, unul glicolitic i unul oxidativ, n urma administrrii de seleniu, Zhan [33] constat existena unei diferene asigurate statististic, valoarea TAS n

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

muscultura roie fiind net superioar fa de nivelul TAS din musculatura alb, aspecte confirmate i n experimentul nostru la puii de carne. n concluzie putem afirma c, administrarea de vitamina E i seleniu, determin o protecie antioxidant eficient. Aproape n toate situaiile luate n discuie, att la nivel sanguin ct i la nivel tisular, valorile elementelor cu rol antioxidant luate n discuie, au prezentat nivele crescute, asigurate statistic, la lotul care a primit un surplus de vitamina E i seleniu n hran. Aprecierea modificrilor tisulare n momentul sacrificrii puilor am efectuat examenul necropsic general, aprecindu-se modificrile macroscopice, dup care s-au prelevat probe de esut pentru caracterizarea modificrilor histologice. Modificri tisulare aprute la pui n urma administrrii de ulei oxidat (UO) Administrarea de ulei oxidat a determinat apariia de leziuni localizate la nivelul diferitelor organe. Cele mai evidente modificri s-au conturat la nivel muscular, cu gravitate mai mare n musculatura intern a coapsei, dar i n musculatura pectoral. De asemenea, modificri au fost ntlnite i n sistemul nervos central (SNC), miocard, la nivel os, hepatic, sau n esutul conjunctiv subcutanat. Modificri ale musculaturii striate (scheletice) Modificri macroscopice musculare Musculatura intern a coapsei (m. gracillis) prezenta o alternan de fascicule musculare normale cu fascicule musculare de culoare alb-glbuie, care erau n numr mult mai mare. Pe seciune zonele cu fibre decolorate aveau o consisten crescut, fiind ceroase i seci. Unii subiecii aveau poriuini mari (chiar jumtate din muchiul gracilis) cu aspect omogen, dens, ceros care contrasta fa de fibrele normale (figura 1). Musculatura pieptului (m. pectoralis major) a prezentat zone cu striaiuni de culoare alb-glbuie, ceroas, paralele cu fibrele musculare nemodificate (figura 2). La palpaia superficial i profund muchiul aveau o consisten mai crescut. Modificri microscopice musculare La nivel muscular (musculatura intern a coapsei i musculatura pectoral) se constat la examinarea cu microscopul optic, n faz iniial deformri cu segmente mai groase, alternnd cu altele mai nguste la nivelul miofibrilelor, cu pierderea striaiunilor i omogenizarea citoplasmei. Leziunile avansate se traduceau prin ntreruperea fibrelor cu apariia blocurilor de hialin i/sau zone cu necroz (figura 3, figura 4). n cazul miocardului, cu toate c macroscopic nu au fost observate modificri, microscopic au fost constatate: aspectul granular al fibrelor musculare cu ntreruperea acestora. Modificri ale sistemului nervos central (SNC) la lotul cu ulei oxidat Modificri macroscopice n cazul SNC se constat prezena de edem i congestie, mai ales la nivelul cerebelului dar i n meninge i encefal. Cerebelul apare turgescent, umed, cu circomvoluiunile umflate i tergerea sulcusurilor. S-a constatat existena de hemoragii punctiforme sau radiare n substana nervoas a cerebelului (figura 5). Microscopic se evideniaz vacuole de edem localizate n toate structurile cerebelului: zona molecular, zona granular i n jurul celulelor Purkine. Modificrile celulelor Purkine constau n condensarea cu aspect picnotic, atrofie de compresiune; din loc n loc hemoragii i zone de necroz de lichefiere. La baza acestor alteraii grave stau microtronbozele hialine din lamele vermisului cerebelos, cu ischemie, micronecroze litice punciforme ce pot fi confluente, expansive i hemoragii (figura 6). Modificri osteoarticulare Macroscopic. Oasele membrelor inferioare erau moi, ndoindu-se cu uurin, fr a pocni, capetele articulare, epifizele erau groase iar periostul era gros i bine vascularizat (figura 7). Microscopic am constatat invazia cartilajului de cretere de ctre capilare cu lumen larg i traiect neregulat, nedegenerarea condrocitelor cu persistena insulelor de cartilaj nconjurate de osteoid nemineralizat la distan de linia de eroziune. Osul compact din corticala osoas incomplet mineralizat i hiperplazia periostului i endostului (figura 8). Modificrile macroscopice i microscopice denot prezena rahitismului. Modificri tisulare hepatice ca urmare a administrrii de ulei oxidat Unii subieci din lotul care a primit doar ulei oxidat au prezentat, microscopic, n spaiile portobiliare infiltrat limfo-histiocitar i/sau fibroz, ceea ce indic o suferin hepatic (figura 9, figura 10).
8

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

esutul conjunctiv subcutanat prezenta o infiltraie edematoas. Pe seciune la comprimarea acestuia, se exprima un lichid citrin, limpede care nu a coagulat la contactul cu aerul. De asemea acelai tip de lichid cu aspect citrin s-a regsit i la unii indivizi la nivelul sacului pericardic. Modificri tisulare la lotul cu ulei oxidat i antioxidani (UO+A) Administrarea de antioxidani (vitamina E i seleniu) determin o reducere semnificativ a leziunilor induse de uleiurile oxidate la nivel tisular. La nivel muscular am constatat lipsa unor modificri macroscopice n musculatura pieptului, iar n cazul musculaturii interne a coapsei, intensitatea leziunilor era net mai discret comparativ cu cea gsit la lotul UO. Totui, histologic am pus n eviden leziuni miodistrofice discrete, mai ales la nivelul musculaturii interne a coapsei. La nivelul musculaturii pectorale prezena unor leziuni miodistrofice a fost ntmpltoare. n SNC nu am constat leziuni macroscopice caracterizate prin edem i/sau congestie meningeal. De asemenea, la examenul microscopic, nu am evideniat leziuni de malacie la nivel cerebelos. Leziunile osteoarticulare au fost mai discrete comparativ cu cele gsite la lotul UO. Modificrile esutului conjunctiv subcutanat ntlnite n cazul lotului UO nu au mai fost evideniate i la lotul UO+A. Discuii Administrarea de ulei oxidat determin la lotul UO apariia unor leziuni la nivelul sistemul nervos central, muscular, osos i hepatic. Suplimentarea dietei cu ulei oxidat aduce un aport consistent de radicali liberi care stau la baza leziunilor aprute. Aceleai tip de leziuni sunt prezentate i de ali cercetri i sunt puse pe seama fie a excesului de radicali liberi, fie a deficitului de substane cu rol antioxidant. Cel mai probabil, apariia acestor modificri este consecina dezechilibrului dintre substanele cu aciune antioxidant i elementele prooxidante. Van Vleet [30] constat n caz de caren de vitamina E i seleniu prezena unor fibre musculare care au suferit o degenerare de tip hialin, iar Baba [5] prezint acelei tip de leziuni constate de noi, ca fiind una dintre manifestrile hiposelenozei i hipovitaminozei E la puii de carne. Adameteanu [1] face referire la implicarea vitaminei E n protecia muscular mpotriva miodistrofiei Zenker, ct i faptul c acest tip de leziune poate s fie reprodus prin administrarea de substane capabile s induc o hipovitaminoz E. Apariia encefalomalaciei la puii de carne este considerat ca fiind una dintre cele mai importante manifestri ale deficitului de antioxidani (mai ales vitamina E i seleniu), n condiiile administrrii unei diete bogate n acid linoleic i/sau arahidonic, acizi grai polinesaturai care sunt extrem de sensibili la atacurile oxidative [18]. Fuhrman [10] constat c apariia leziunilor caracteristice encefalomalaciei este consecina scderii concentraiei vitaminei E de la nivelul cerebelului, asociat cu creterea concentraiei acidului linoleic, acid gras care este extrem de sensibil atacului radicalilor liberi. De asemenea Fuhrman [10] susine rolul important jucat de produi de oxidare ai acidului arahidonic n apariia encefalomalaciei. Putem astfel concluziona c apariia encefalomalaciei este rezultatul stresul oxidativ, consecina scderii aprrii antioxidante. Rolul protectiv al combinaiei dintre vitamina E i seleniu n limitarea apariiei encefalomalaciei este dovedit de Surai [27], aspecte confirmate i n lucrarea de fa. Implicarea stresului oxidativ n distrugerea membranelor celulare rezultnd o structur cu funcie alterat nu mai prezint niciun dubiu. Totui pentru clarificarea mecanismului intim de apariie a miodistrofie ct i a encefalomalaciei sunt necesare cercetri suplimentare. Prezena aspectelor caracteristice rahitismului la lotul UO poate fi o consecin a stresului oxidativ crescut. Date foarte recente realizeaz o punte de legtur ntre stresul oxidativ i rahitism [28]. Administrarea injectabil de fier la oareci determin de o manier doz-dependent creterea stresului oxidativ i resorbie osoas. Administrarea de antioxidani (N-acetil-cistein) determin reducerea stresului oxidativ ct i a modificrilor osoase. n urma experimentelor desfurate putem concluziona c, administrarea de elemente prooxidante determin apariia unor leziuni tisulare caracteristice. Suplimentarea dietei cu antioxidani limiteaza apariia i intensitatea lezional, astfel c putem sublinia rolul vitaminei E i al seleniului n limitarea aciunii distructive cauzate la radicalii liberi.

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

Figura 1. Muchi gracilis (UO) cu aspect decolorat i striat

Figura 2. Muchi pectoral (lot UO) uor decolorat, cu numeroase striaiuni

10

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

Figura 3. Muchi gracilis (lot UO) fibre musculare: aspect tulbure, dispariia striaiunilor

Figura 4. Muchi gracilis (lot UO) fragmentarea fibrelor musculare, formarea blocurilor de hialin, HE200

11

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

Figura 5. Sistem nervos central (lot UO) aspect edematos

Figura 6. Cerebel (lot UO) edem i necroza celulelor Purkinje, HE200

12

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

Figura 7. Hipertrofia cartilajului de cretere la lotul UO

Figura 8. Tibie (lot UO) insule cartilaginoase n osteoidul nemineralizat, HE200

13

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne

Figura 9. Ficat (lot UO) fibroz i infiltrat limfo-histiocitar perilobular, HE200

Figura 10. Ficat (lot UO) fibroz i infiltrat limfo-histiocitar perilobular, HE200

Bibliografie
1. ADAMETEANU I., 1957, Patologia medical a animalelor domestice, Ed. Agro-Silvic de Stat.

14

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne 2. 3. 4. ALASNIER C., MEYNIER A., VIAU M., GANDEMER G., 2000, Hydrolytic and oxidative changes in the lipids of chicken breast and tigh muscle during refrigerared storage, J of Food Sci, 65(1):9-14. AMARA I.B., FETOUI H., GUERMAZI F., 2009, Dietary selenium addition improves cerebrum and cerebellum impairments induced by methimazole in suckling rats, Int. J. Devl. Neu, 27:719-726. AYDEMIR T., ORTURK R., BOZKAYA L.A., TARHAN L., 2000, Effects of antioxidant vitamins A,C,E and trace elements Cu, Se, on CuZn SOD, GSH-Px and LPO levels in chickens erytrocytes, Cell Biochem and Funct, 18:109-115. 5. 6. BABA A.I., CTOI, C., 2003, Morfopatologie general, Ed. Academicpres, Cluj-Napoca; 68-80,154156. BRANDSCH C., EDER K., 2004, Effects of peroxidation products in thermoxidised dietary oil in female rats during rearing, pregnancy and lactation of their reproductive performance and antioxidative status of their offspring, Brit J of Nutr, 92:267-275. 7. CHANG W.P., COMBS G.F., SCANES G.C., MARSH J.A., 2005, The effects of dietary vitamin E and selenium deficiencies on plasma thyroid and thymic hormone concentrations in the chickens, Develop and compar immuno, 29:265-273. 8. 9. CHEN X., LIANG H., REMMEN H., VIJG J., RICHARDSON A., 2004, Catalase transgenic mice: characterization of sensitivity to oxdative stress, Arch of Biochem and Biophy, 422:197-210. DEJICA D., 2000, Stresul oxidative in bolile interne, Ed. Casa Crii de tiin, Cluj-Napoca, 30-60. tocopherols in chicken as assessed by haemolysis test and microsomal pentane production, British J of Nutr, 71:605-614. 11. GULEC M., GUREL A., ARMUTVU F., 2006, Vitamin E protects against oxidative damage caused by formaldehide in the liver and plasma of rats, Molec and Cell Biochem, 290:61-67. 12. GUO Y., TANG Q., YUAN J., JIANG Z., 2001, Effects of supplementation with vitamin E on the performance and tissue peroxidation of broiler chickes and the stability of thight meat against oxidative deterioration, Animal Feed Science and Technology, 89:165-173. 13. HERNANDEZ P., ZOMENO L., ARINO B., BLASCO A., 2003, Antioxidant, lipolytic and proteolytic enzymes activities in pork meat from different genotypes, Meat Science, 66:525-529. 14. KANG Y.J., CHEN Y., EPSTEIN P.N., 1996 , Uppression of doxorubicin cardiotoxicity by overexpression of catalase in the heart of transgenic mice, J. Biol. Chem. 271:1261012616. 15. KONAR V., KARA K., YILMAZ M., DAYANGAC A., KARATAS F., 2007, Effects of selenium and vitamin Ein addition to melatonin against oxidative stress caused by cadmium in rats, Biol Trace Elem Res, 118:131-137. 16. LADIKOS D, LOUGOVOIS V., 1990, Lipdi oxidation in muscle foods. Food Chem, 35:295314. 17. LIN H., DECUYPERE E., BUYSE J., 2006, Acute heat stress induces oxidative stress in broiler chickens, Comp Biochem and Physiol, 144:11-17. 18. MARTHEDAL H.E., 1973, Encephalomalacia in chicks with special reference to frequency and the occurrence of pathological and anatomical changes, Acta Agri Scand, Supp, 19:58-63. 19. NAM KI-TAEG, LEE HUI-AE, BANG SIK MIN, CHANG-WON KANG, 1997, Influence of dietary supplementation with linseed and vitamina E on fatty acids, tocopherol and lipid peroxidation in muscles of broiler chicks, Anim Food Sci Tech, 66:149-158. 15 10. FUHRMANN H., BALTHAZARY S.T., SALLMANN H.P., 1994, Bioefficiency of different

Modificri morfologice i biochimice induse prin administrarea de uleiuri peroxidate la puii de carne 20. PLACHA I., BORUTOVA L., GRESAKOVA L., PETROVIC V., FAIX S., LENG L., 2009, Effects of excesive selenium supplementation to diet contaminated with deoxynivalenol on blood phagocytic activity and antioxidative status of broilers, J of Anim Physiol and Anim Nutr, 93:695-702. 21. RACANICCI A.M.C, MENTEN J.F.M, REGITANO-DARCE M.A.B., TORRES E.A.F.S., PINO L.M., PEDROSO A.A., 2008, Dietary oxidizez poultry offal fat: broiler performance and oxidative stability of thight meat during chilled storage, Rev Bras de Cien Avicola, 10(1):1-11. 22. RUSSELL E.A., LYNCH P.B., OSULLIVAN K., KERRZ P.J., 2004, Dietary supplementation of tocopherol levels in duck tissues and its influence on meat storage stability, Inter J of Food Sci and Tech, 39:331-340. 23. SCURTU I., SANDA ANDREI., ELENA ZINVELIU, GIURGIU G., 2007, Organic selenium its antioxidant role test in vivo, Buletin USMV-CN, 64:531-535. 24. SCURTU I., GIURGIU G., MIRCEAN M., SPANU M., SANDRU D., M. NICULAE, L. LIVITCHI, 2010, Effect of a pro-oxidant dietary supplement on cell mediated immunity in broillers, Proc of Nutr Soc, 69 (OCE3): E314. 25. SHIREEN K .F., PACE R.D., MAHBOOB M., KHAN A.T., 2008, Effects of dietary vitamin E, C and soybean oil supplementation on antioxidant enzyme activities in liver and muscle of rats, Food and Chemical Toxicology, 46:3290-3294. 26. SRILATHA T., REDDY RAVINDER V., QUDRATULLAH S., RAJU M.V.L.N., 2010, Effect of alpha-lipoic acid and vitamina E in diet on the performance antioxidantion and immune response in broiler chicken, Intern J of Poultry Scie, 9(7):678-683. 27. SURAI P.F., IONOV I.A., SAKHATSKY N.I., YAROSHENKO F.A., 1994, Vitamin E and chicken meat quality, Ukraine, Donetsk. 28. TSAY J., YANG Z., ROSS P., SUSANNA CUNNINGHAM-RUNDLES, LIN H., RHIMA COLEMAN, MAYER-KUCKUK P., DOTY S., GRADY R.W., PATRICIA J. GIARDINA, ADELE L. BOSKEY,MARIA G. VOGIATZI, 2010, Bone loss caused by iron overload in a murine model: importance of oxidative stress, Blood, 116(14):2582-2589. 29. UREK R.O., BOZKAYA L.A., TARMAN L., 2001, The effects of some antioxidant vitamin and trace element supplemented diets on activities of SOD, CAT, GSH-Px and LPO levels in chicken tissues, Cell Biochem Funct, 19:125-132. 30. VAN VLEET J.F., FERRANS V.J., 1976, Ultrasctructural changes in skeletal muscle of seleniumvitamin E-deficien chicks, American J of Vet Res, 37:1081-1089 31. WANG YAN-BO, BAO-HUA XU, 2008, Effect of different selenium source (sodium selenite and selenium yeast) on broiler chickens, Anim Feed Sci and Tech, 144:306-314. 32. YEN PEI-LING, BING-HUEI CHEN, FEILI LO ZANG, 2009, Effects of deep-frzing oil on blood pressure and oxidative stress in spontaneously hypertensive and normotensive rats, Nutrition, 26:331-336. 33. ZHAN X., QIE Y., WANG M., LI X., YHAO R., 2010, Selenomethionine: an effective selenium source for sow lto improve Se distribution, antioxidant status and growth performance of pig offspring, Biol Trace Elem Res, 10:1007-1018. UNIVERSITY OF AGRICULTURAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE CLUJ NAPOCA PhD SCHOOL 16