Sunteți pe pagina 1din 39

UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR CLUJ-NAPOCA coala Doctoral Facultatea de Horticultur

Ing. VESCAN Liviu-Adrian

REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT Selecia i nmulirea prin metode clasice i micropropagare a unor genotipuri valoroase de ctin alb (H. rhamnoides ssp. carpatica) din flora spontan a Romniei

CONDUCTOR TIINIFIC
Prof. univ. dr. ing. PAMFIL Doru Cluj-Napoca, 2011

INTRODUCERE.................................................................................................................................. 5 MOTIVAIA I OPORTUNITATEA TEMEI ALESE...................................................................... 7 PRINCIPALELE OBIECTIVE URMRITE...................................................................................... 8 1. DATE DIN LITERATURA DE SPECIALITATE...................................................................... 9 1.1. Caracterizarea genului Hippophae L.................................................................................... 9 1.1.1. Clasificarea botanic .................................................................................................... 9 1.1.2. Caracteristici morfologice ............................................................................................ 9 1.1.3. Caracteristicile biologice i genetice.......................................................................... 10 1.1.4. Condiii pedo-climatice .............................................................................................. 10 1.2. Rspndirea speciei ............................................................................................................ 10 1.2.1. Aria de rspndire a formelor slbatice...................................................................... 10 1.2.2. Zone cultivate cu ctin n lume ................................................................................ 10 1.2.3. Cultivarea ctinei n Romnia .................................................................................... 10 1.3. Domeniul de importan ..................................................................................................... 11 1.3.1. Importana alimentar ................................................................................................ 11 1.3.2. Importana terapeutic ................................................................................................ 11 1.3.3. Importana economic ................................................................................................ 11 1.3.4. Importana ecologic .................................................................................................. 11 1.3.5. Importana ornamental.............................................................................................. 11 1.4. Metode de nmulire la ctina alb ..................................................................................... 11 1.4.1. nmulirea prin semine .............................................................................................. 11 1.4.2. nmulirea vegetativ prin metode convenionale ...................................................... 12 1.4.2.1. nmulirea prin butai ............................................................................................. 12 1.4.2.1.1. Butirea n verde................................................................................................... 12 1.4.2.1.2. Butirea n uscat ................................................................................................... 12 1.4.3. nmulirea in vitro prin micropropagare..................................................................... 13 1.4.3.1. Micropropagarea utilizat ca metod de nmulire la plantele horticole................ 13 1.4.3.2. Rezultate din literatur cu privire la micropropagarea la ctin ............................ 13 2. MATERIALE I METODE....................................................................................................... 15 2.1. Materialul biologic ............................................................................................................. 15 2.1.1. Localizarea i descrierea general a populaiilor de ctin (H. rhamnoides ssp. carpatica) din care s-a efectuat selecia ..................................................................................... 15 2.1.2. Vigoarea de cretere i nlimea plantelor ................................................................ 15 2.1.3. Capacitatea de drajonare ............................................................................................ 15 2.1.4. Gradul de spinozitate.................................................................................................. 15 2.1.5. Caracteristicile frunzelor ............................................................................................ 15 2.1.6. Culoarea fructelor....................................................................................................... 15 2.1.7. Forma fructelor........................................................................................................... 15 2.1.8. Productivitatea potenial ........................................................................................... 15 2.1.9. Masa a 100 fructe ....................................................................................................... 16 2.1.10. Numrul de fructe per mugure ................................................................................... 16 2.1.11. Dimensiunea fructelor ................................................................................................ 16 2.1.12. Lungimea pedunculului i uurina desprinderii fructelor ......................................... 16 2.1.13. Masa a 100 semine .................................................................................................... 16 2.1.14. Caracteristici legate de raportul dintre fructe i semine............................................ 16 2.1.15. Selecia genotipurilor elit pe baza notelor de bonitare acordate diferitelor caracteristici ............................................................................................................................... 16 2.2. Caracteristicile biochimice ale principalelor genotipuri de ctin (H. rhamnoides ssp. carpatica) selecionate pentru acest proiect ................................................................................... 16 2

2.2.1. Potenialul furajer al diferitelor componente ale ctinei ............................................ 16 2.2.2. Determinarea coninutului de minerale din fructe i semine .................................... 17 2.2.3. Determinarea refractometric a substanei uscate solubile ........................................ 17 2.2.4. Determinarea aciditii totale i a pH-ului din fructele de ctin ............................... 17 2.2.5. Determinare coninutului de vitamina C (acidului ascorbic) din fructe..................... 17 2.2.6. Determinarea coninutului de carotenoide totale din fructe ....................................... 17 2.2.7. Determinarea unor componente lipofilice din fructe i semine ................................ 17 2.3. nmulirea prin semine ...................................................................................................... 18 2.3.1. Determinarea ratei de germinaie in vitro .................................................................. 18 2.3.2. Determinarea ratei de germinaie ex vitro i caracterizarea plantelor obinute.......... 18 2.4. nmulirea prin butire n uscat......................................................................................... 18 2.4.1. Butirea la ghiveci n spaiu protejat ........................................................................ 18 2.4.2. Butirea mixt i evaluarea plantelor rezultate......................................................... 18 2.5. nmulirea in vitro prin tehnici de micropropagare ............................................................ 18 2.5.1. Pregtirea mediilor de cultur. Tipurile de vase de cultur utilizate.......................... 18 2.5.2. Iniierea culturilor....................................................................................................... 19 2.5.3. Pregtirea probelor. Presterilizarea i sterilizarea ...................................................... 19 2.5.4. Inocularea ................................................................................................................... 19 2.5.5. Multiplicarea .............................................................................................................. 19 2.5.6. nrdcinarea .............................................................................................................. 19 2.5.7. Aclimatizarea ............................................................................................................. 19 2.6. Interpretarea statistic a rezultatelor .................................................................................. 19 3. REZULTATE I DISCUII ...................................................................................................... 21 3.1. Caracteristicile morfologice i biometrice ......................................................................... 21 3.1.1. Vigoarea de cretere i nlimea plantelor ................................................................ 21 3.1.2. Capacitatea de drajonare ............................................................................................ 21 3.1.3. Gradul de spinozitate.................................................................................................. 21 3.1.4. Caracteristicile frunzelor ............................................................................................ 21 3.1.5. Culoarea fructelor....................................................................................................... 21 3.1.6. Forma fructelor........................................................................................................... 22 3.1.7. Productivitatea potenial ........................................................................................... 22 3.1.8. Masa a 100 fructe ....................................................................................................... 22 3.1.9. Numrul de fructe per mugure ................................................................................... 22 3.1.10. Dimensiunea fructelor ................................................................................................ 22 3.1.11. Lungimea pedunculului i uurina desprinderii fructelor ......................................... 22 3.1.12. Masa a 100 semine .................................................................................................... 22 3.1.13. Caracteristici legate de raportul dintre fructe i semine............................................ 23 3.1.14. Selecia genotipurilor elit pe baza notelor de bonitare acordate diferitelor caracteristici. .............................................................................................................................. 23 3.2. Caracteristicile biochimice ale principalelor genotipuri de ctin (H. rhamnoides ssp. carpatica) selecionate pentru acest proiect ................................................................................... 23 3.2.1. Potenialul furajer al diferitelor componente ale ctinei ............................................ 23 3.2.2. Determinarea coninutului de minerale din fructe i semine .................................... 23 3.2.3. Determinarea refractometric a substanei uscate solubile ........................................ 24 3.2.4. Determinarea aciditii totale i a pH-ului din fructele de ctin ............................... 24 3.2.5. Determinare coninutului de vitamina C (acidului ascorbic) din fructe..................... 25 3.2.6. Determinarea coninutului de carotenoide totale din fructe ....................................... 26 3.2.7. Determinarea unor componente lipofilice din fructe i semine ................................ 26 3.2.7.1. Coninutul de ulei ................................................................................................... 26 3

3.2.7.2. Compoziiei acizilor grai din uleiul de ctin ....................................................... 27 3.2.7.3. Analiza cantitativ i calitativ a tocoferolilor din uleiul de ctin ....................... 27 3.3. nmulirea prin semine ...................................................................................................... 28 3.3.1. Determinarea ratei de germinaie in vitro .................................................................. 28 3.3.2. Determinarea ratei de germinaie ex vitro i caracterizarea plantelor obinute.......... 28 3.4. nmulirea prin butire n uscat......................................................................................... 30 3.4.1. Butirea la ghiveci n spaiu protejat ........................................................................ 30 3.4.2. Butirea mixt i evaluarea plantelor rezultate......................................................... 31 3.5. nmulirea in vitro prin tehnici de micropropagare ............................................................ 32 3.5.1. Iniierea culturilor....................................................................................................... 32 3.5.1.1. Sterilizarea materialului n funcie de tipul de inocul ............................................ 32 3.5.1.2. Iniierea din meristeme........................................................................................... 33 3.5.1.2.1. Coninutul cantitativ i calitativ al sursei de carbon ....................................... 33 3.5.1.2.2. Influena agenilor de gelifiere. Rata de vitrificare ......................................... 33 3.5.1.2.3. Influena mediilor bazale................................................................................. 33 3.5.1.2.4. Diferenele ntre genotipuri la utilizarea mediului general ............................. 33 3.5.1.2.5. Morfologia i vigoarea lstarilor rezultai (inclusiv vitrificarea) .................... 34 3.5.1.3. Iniierea din minibutai....................................................................................... 34 3.5.1.4. Iniierea din muguri............................................................................................ 34 3.5.2. Etapa de multiplicare.................................................................................................. 34 3.5.2.1. Influena vaselor de cultur asupra multiplicrii................................................ 34 3.5.2.2. Influena mediilor din subculturile precedente................................................... 34 3.5.2.3. Influena numrului de subculturi ...................................................................... 34 3.5.2.4. Influena agenilor de gelifiere asupra multiplicrii i sensibilitatea la vitrificare 34 3.5.2.5. Influena genotipurilor, mediilor de cultur i a hormonilor.............................. 34 3.5.2.6. Multiplicarea genotipurilor din Delta Dunrii Sf. Gheorghe (DF) .................... 35 3.5.2.7. Multiplicarea genotipurilor provenite din Delta Dunrii, zona Sulina............... 35 3.5.3. Regenerarea din frunze............................................................................................... 35 3.5.4. nrdcinarea in vitro ................................................................................................. 37 3.5.5. nrdcinarea ex vitro i aclimatizarea ....................................................................... 37 4. CONCLUZII .............................................................................................................................. 38 4.1. Concluzii privitoare la etapa de selecie............................................................................. 38 4.2. Concluzii referitoare la caracteristicile bio-chimice ale seleciilor .................................... 38 4.3. Concluzii referitoare la nmulirea prin metode convenionale i micropropagare............ 38 BIBLIOGRAFIE SELECTIV ......................................................................................................... 39

INTRODUCERE
Ctina alb este un arbust fructifer spinescent dioic anemofil, cu frunze cztoare, cu o valoare economic ridicat. Genul Hippophae L. a fost nregistrat nc din anul 1753 n Species Plantarum de ctre C. Linnaeus, prima specie catalogat fiind H. rhamnoides (Lian et al., 2003). Din numrul mare de subspecii care compun specia H. rhamnoides, n Romnia se regsete ssp. carpatica (Fig. 1). Datorit spectrului larg de utilizri, de la domenii ca ecologic i ornamental Fig. 1. Ctina alb, subsp. carpatica, Delta pn la cel terapeutic, ctina se dovedete o Dunrii specie multivalent, cu importan foarte Romanian seabuckthorn, ssp. carpatica, Danube Delta ridicat. n scop comercial doar n Canada se utilizeaz plante obinute din semine, datorit stabilitii n descenden a soiului utilizat i a costurilor reduse (Li, 2008). Pentru pstrarea nealterat a trsturilor soiurilor de ctin se utilizeaz exclusiv multiplicarea vegetativ. Dac la scar mic se folosesc drajonii i metode ca marcotajul i altoirea, la scar mare se folosete cu rezultate foarte bune butirea, att n verde ct i n uscat. Pe plan tiinific s-a testat multiplicarea in vitro pentru diferite specii i subspecii de ctin ns, datorit rezultatelor nesatisfctoare, nici o plantaie nu a fost momentan nfiinat cu material provenit din aceast metod. Majoritatea cercettorilor au ntmpinat probleme mari privind iniierea culturilor i n puine cazuri plantele obinute au fost aclimatizate ex vitro. Nu se prezint cazuri de plantaii de ctin nfiinate cu material sditor obinut in vitro, motiv pentru care nu exist date referitoare la comportarea n cultur a plantelor obinute n acest fel. Ca o introducere n studiul de fa, se vor face cteva meniuni referitoare la abordarea temei analizate. Dac indivizii unor populaii locale din Transilvania sunt relativ omogeni, n zona Deltei Dunrii s-a observat o variabilitate foarte ridicat chiar i n cadrul acelorai populaii, fapt care a condus la intensificarea muncii de selecie n aceast zon. Unii indivizi s-au difereniat foarte mult fa de indivizii considerai ca tipici pentru aceast subspecie, prin vigoarea de cretere, nlimea maxim, forma i mrimea fructelor i seminelor etc. Cu toate c s-au descoperit exemplare foarte interesante din punct de vedere al variabilitii morfologice, selecia a fost direcionat pe valoarea cultural i ameliorativ, cu privire la potenialul productiv, masa fructelor, vigoare, numr de spini, culoarea fructelor s.a. Toi indivizii selecionai au fost catalogai, etichetai i poziionai prin sistemul GPS. Unele msurtori au fost efectuate n teren (ex. vigoare, numr spini) iar altele n laborator (ex. dimensiuni fructe, mas fructe i semine). Pentru toate exemplarele luate n studiu s-au prelevat mostre de fructe i semine pentru msurtori, analize biochimice, determinarea ratelor de germinaie i obinerea unor descendeni viabili. Pentru plantele foarte valoroase s-au luat butai pentru trecerea lor n colecie i eventuala omologare ca soiuri dup testare. Din punct de vedere al analizelor bio-chimice s-a insistat n special pe determinarea coninutului de elemente cu impact nutritiv i terapeutic ridicat din fructe i semine: substana uscat i substana uscat solubil, aciditatea total titrabil, vitaminele C i E, carotenoidele totale, 5

minerale, ulei, acizi grai, tocoferoli i diferite alte componente care dau i valoare furajer ridicat pentru alte componente ale plantei (frunze, lstari). O parte din analizele efectuate au un caracter de noutate la nivelul subspeciei carpatica. Toate rezultatele obinute, unde a existat posibilitatea, au fost comparate cu cele ale altor soiuri omologate att pe plan naional ct i internaional. Materialului bibliografic referitor la nmulirea prin semine la ctina romneasc, i n special cu menionarea diferenelor ntre proveniene pe diferii genitori, este extrem de redus iar rata de germinaie menionat este foarte sczut (~ 50%, Rai i Rai, 2003). Din aceast cauz, neam propus n acest studiu determinarea ratei de germinaie a seminelor recoltate separat de la diferite selecii i s-a urmrit comportamentul plantelor obinute pentru a se determina capacitatea de aclimatizare la noile condiii de mediu din Transilvania. Pe lng experienele efectuate ex vitro, s-a testat i rata de germinaie in vitro, pentru a stabili potenialul maxim al genotipului martor. De asemenea s-a urmrit dac exist diferene semnificative ntre germinaia seminelor pstrate diferite perioade de timp. Ca element de noutate, s-a determinat capacitatea de germinare a seminelor extrase din fructe congelate. Acest aspect este foarte important datorit faptului c aproape n totalitate fructele de ctin se recolteaz prin congelarea ramurilor de rod. Pentru multiplicarea clonal s-au utilizat att metodele convenionale ct i cele de multiplicare in vitro. Cea mai utilizat metod de multiplicare a ctinei la scar mare este butirea. Datorit numrului redus de butai disponibili (unicitatea fiecrei selecii) s-au testat dar dou metode de butire n uscat: la ghiveci, n spaiu protejat i butirea mixt, cu nrdcinare n substrat preparat i trecerea ulterioar a butailor n sol. Pentru butirea la ghiveci s-au testat diferite variante hormonale i de substrat, care ofer un caracter de noutate ct privete mbuntirea metodei. Plantele obinute au fost inute sub observaie doi ani iar clonele valoroase au fost trecute n procesul de testare pentru omologare. innd cont de faptul c multiplicarea unor selecii (plante unicat) prin metode clasice necesit o perioad lung de timp pentru introducerea n cultur, se impune utilizarea metodelor de micropropagare pentru o rapid multiplicare la scar industrial, cu pstrarea trsturilor valoroase ale plantelor donatoare de explante. n acest studiu s-a insistat mai mult pe iniierea culturilor pornind de la meristeme preformate, datorit unor avantaje ca: sterilizarea relativ simplificat, garania strii fito-sanitare, rejuvenilizarea i pstrarea intact a trsturilor plantei mam. Cu toate acestea s-au derulat i experimente legate de proliferarea adventiv i regenerare din frunze care datorit utilizrii unor noi variante hormonale dau un caracter de noutate acestei pri din lucrare. S-a insistat doar asupra micropropagrii celor mai valoroi indivizi, mai ales acolo unde a fost material de iniiere suficient. innd cont de faptul c s-a pornit de la cte un singur genitor, o parte din experimente nu au putut fi repetate iar pentru genotipurile cu vigoare foarte redus, nu s-a dispus de suficient material pentru iniierea n mas a culturilor, rezultatele fiind mai puin consistente. Cu toate acestea, s-a obinut material suficient prin butire clasic la trei din clonele selectate (SF4-Golden Abundent, SF7-Carmen i SF8-Colosal) care au fost introduse n circuitul de testare i omologare al soiurilor. Acestea, mpreun cu alte dou genotipuri (SF6 i CF2), ofer o baz material important i suficient pentru viitoare testri ct privete potenialul de multiplicare prin metode biotehnologice.

MOTIVAIA I OPORTUNITATEA TEMEI ALESE


Datorit cererii ridicate pe diferite segmente ale pieei internaionale, tot mai muli fermieri din Asia, Europa i America de Nord se orienteaz nspre cultura la scar mare a ctinei. Odat cu creterea suprafeelor cultivate cu ctin a aprut o cretere constant a cererii de material sditor de calitate. Cu toate c exist mai multe soiuri de ctin omologate n Romnia, puine au trsturi valoroase, nefiind competitive pe plan internaional. Datorit acestui motiv i a variabilitii ridicate a subspeciei carpatica apare necesitatea unui proces intens de selecie n cadrul florei spontane direcionat pe componente conforme cererii actuale din pia. Ctina i n special fructele acestei specii sunt recunoscute pe plan mondial ca avnd proprieti nutriionale i terapeutice multiple. Rezultatele cu privire la analiza difereniat pe mai multe genotipuri de ctin alb, att ct privete morfologia ct i componente bio-chimice sunt aproape inexistente. Astfel apare ca oportun compararea diferitelor componente ale ctinei din Romnia cu alte subspecii sau specii ntlnite pe plan mondial. Pe baza seleciei i analizelor morfologice i biochimice apare ca oportun introducerea n cultur a elitelor obinute efectundu-se n paralel procese de ameliorare pornind de la toate plantelor selecionate. Datorit sistemului radicular puternic i a capacitii de asimilare a azotului atmosferic, ctina poate fi introdus pe scar mare pe terenurile degradate. Din acest motiv s-a considerat oportun testarea capacitii de germinaie a seminelor i evoluia plantelor timp de un an de la semnare. De asemenea, datorit caracteristicilor cu potenial ameliorativ, plantele rezultate pot fi uor introduse ntr-un proces de ameliorare clasic, cu potenial de producere a unor descendeni superiori, competitivi pe plant internaional. Datorit numrului redus de productori locali de material sditor prin butire i a capacitii limitate de producie, a aprut ca oportun testarea butirii n uscat utilizndu-se diferite variante hormonale i substraturi, urmnd ca cea mai bun variant s fie propus pentru introducerea n cultur pe scar larg de ctre pepinierele locale. n cazul n care se selecioneaz indivizi valoroi din flora spontan, materialul iniial nu poate asigura volumul necesar pentru nmulirea tradiional i nici o rat de multiplicare satisfctoare pentru introducerea rapid n cultur. Acest neajuns poate fi nlturat prin tehnici de multiplicare in vitro. Pe plan internaional exist experien redus i rezultate modeste cu privire la micropropagarea acestei specii. Ctina s-a dovedit n majoritatea cazurilor dificil de multiplicat in vitro, cu rezultate n general modeste dar promitoare att pe plan internaional ct i naional, ceea ce impune aprofundarea acestui subiect. Astfel a aprut necesitatea elaborarea unui protocol de micropropagare eficient. n cazul n care costurile de producie a materialului sditor prin metode biotehnologice se vor dovedi foarte ridicate, puin competitive, apare totui posibilitatea nfiinrii de plantaii mam destinate producerii de butai destinai multiplicrii tradiionale. Datorit impactului economic ridicat al acestei specii pe plan mondial, a numrului redus de soiuri romneti competitive pe plan internaional i a volumului redus de studii cu caracter aplicativ ct privete caracteristicile morfo-biochimice i capacitatea de nmulire la ctin alb din Romnia, apare ca oportun efectuarea unui studiu amplu pe direciile menionate anterior, n cadrul unei teze de doctorat.

PRINCIPALELE OBIECTIVE URMRITE


a. Selectarea unor genotipuri valoroase de ctin alb din flora spontan, att pentru introducerea direct n cultur ct i pentru crearea unei baze genetice necesare pentru studii ulterioare de ameliorare. b. Analiza fenotipic, biometric i bio-chimic a seleciilor. c. Pe baza diferitelor caracteristici (ex. mrime fruct, culoare fruct, numr de spini, vigoare, drajonare etc.) se vor selecta elitele cu potenial de introducere direct n cultur ca soiuri nou omologate. d. Multiplicarea materialului selectat prin butire n uscat pentru asigurarea unui numr suficient de mare de plante pentru testare. Testarea butirii la ghiveci utiliznd diferite tratamente hormonale i substraturi de cultur. e. nmulirea prin semine pentru determinarea ratei de germinare in vitro i ex vitro. Se va determina de asemenea influena modalitii de pstrare a seminelor i rata de aclimatizare la noile condiii climatice. Plantele rezultate vor constitui baza material a unui proces de ameliorare ulterior. f. Stabilirea unor protocoale generale de micropropagare a subspeciei carpatica i individualizarea mediilor pentru fiecare selecie urmrindu-se n principal proliferarea axilar. Se va testa de asemenea capacitatea de regenerare din frunzele obinute in vitro. Toate obiectivele de mai sus se pot formula simplificat prin selecia i multiplicarea unor genotipuri de ctin alb valoroase (H. rhamnoides L. subsp. carpatica) din flora spontan n scopul introducerii n cultur i a crerii unei baze genetice pentru ameliorare.

1.

DATE DIN LITERATURA DE SPECIALITATE

1.1. Caracterizarea genului Hippophae L. 1.1.1. Clasificarea botanic

Ctina alb, numit i ctin de ru, este reprezentat de genul Hippophae, nregistrat nc din anul 1753 n Species Plantarum de ctre C. Linnaeus, prima specie catalogat fiind H. rhamnoides (Lian et al., 2003). Din numrul mare de subspecii care compun specia H. rhamnoides, pentru Romnia cea mai important este subspecia carpatica, identificat n 1960 de Emil opa (Rai i Rai, 2003). Aceast subspecie se regsete nativ n Romnia, Ucraina, Serbia, Muntenegru, Ungaria, Austria i Germania. n aceste zone o putem ntlni n vile Alpilor i Carpailor, pe malurile Dunrii i n Delta Dunrii pn pe rmul mrii Negre. n anul 1971, clasificarea botanic a ctinei a devenit complex, odat cu introducerea de noi specii i subspecii de ctre cercettorul Arne Roussi. Una dintre cele mai noi clasificri este dup Lian et al. (2003), realizat pe baza nsuirilor morfologice ale seminelor i ale mugurilor floriferi (Fig. 2).

Fig. 2.

Clasificarea botanica a genului Hippophae Botanical classification

1.1.2.

Caracteristici morfologice

Ctina alb este un arbust fructifer, cel mai adesea cu spini numeroi i puternici, cu flori unisexuat dioice, cu formula floral K4-2C0A4MG (Rai i Rai, 2003). La plantele aflate pe rod, lstarii tineri se recunosc uor datorit mugurilor mici, comparativ cu mugurii mult mai mari de la plantele mascule. naintea apariia mugurilor florali este imposibil de difereniat cele dou tipuri de sexe pe baz morfologic. Fructul de ctin este o drup fals ce ia natere n urma creterii receptaculului care devine n timp crnos (Rai i Rai, 2003). Fructele au form de la sferice la ovoide i chiar cilindrice, de mrime diferit i culoare variat, de la galben deschis la portocaliu i chiar roiatic. Fructul adevrat al ctinei este smna din interiorul drupei false care are o capacitate de germinaie 2 ani, dup care aceasta scade accelerat (Rai i Rai, 2003). 9

1.1.3.

Caracteristicile biologice i genetice

Ctina este o specie dioic, diploida (2n=24), la care pn n acest moment nu s-a dezvoltat o tehnic sigur de determinare prematura a sexului, acesta determinndu-se doar n faza de apariie a mugurilor florali, diferii morfologic la cele doua sexe.

1.1.4.

Condiii pedo-climatice

Ctina alb se remarc printr-o capacitate de adaptare foarte ridicat, att n ceea ce privete factorii climatici ct i solul. Referitor la clim, ctina poate rezista la temperaturi extreme i la un nivel de precipitaii sczut, unul din singurii factori limitativi fiind lumina. Fa de sol, ctina se dovedete a fi o plant pionier pentru solurile srace i foarte degradate, reuind n scurt timp s mbunteasc att structura solului ct i compoziia chimic a acestuia, prin fixarea azotului atmosferic (Rai i Rai, 2003). .

1.2. Rspndirea speciei 1.2.1. Aria de rspndire a formelor slbatice

Se regsete nativ n aproximativ 30 de ri, fiind de asemenea introdus cu succes i pe continentul american. n Romnia, cea mai mare densitate de ctin se gsete n Delta Dunrii i Bazinul Buzului. Sporadic, ctina se mai gsete i n Transilvania, momentan fiind raportat n zonele colinare din judeul Cluj i Mure.

1.2.2.

Zone cultivate cu ctin n lume


Suprafaa cultivat cu c tin (ha)
China, 2000000 Rusia, 4000 Estonia , 700 America de Nord, 500 Lituania, 300 Romnia, 300 Other, 6473 Germania, 268 Finlanda, 150 Italia, 100 Letonia, 80 NIS Countries, 55 Suedia, 20

Principala ar cultivatoare de ctin din lume este China, urmat de Rusia (Fig. 3)

Fig. 3.

Repartizarea suprafeelor cultivate cu ctin pe plan mondial (dup Whling, 2008)

Distribution of cultivated seabuckthorn over the world (according to Whling, 2008)

1.2.3.

Cultivarea ctinei n Romnia

Numrul de soiuri de ctin la ora actual este de 15, din care unul este plant mascul (***Catalogul Oficial al soiurilor de plante de cultur din Romnia, Ediia complet 2011). innd cont de preurile relativ ridicate ale materialului certificat din soiurile omologate la noi, majoritatea fermierilor care au nfiinat ferme de dimensiuni mici i medii au apelat la procurarea materialului din flora spontan, rezultnd plantaii cu material neuniform, cu probleme la polenizare 10

i fructificare. La ora actual sunt peste 300 ha de plantaii de ctin rspndite pe tot teritoriul rii, dar majoritatea de dimensiuni reduse.

1.3. Domeniul de importan 1.3.1. Importana alimentar

Fructele i frunzele de ctin au un coninut ridicat de minerale, vitamine, uleiuri, carotenoine, acizi grai nesaturai etc.

1.3.2.

Importana terapeutic

Vitaminele C, E, carotenoidele etc. din fructele de ctin au aciune puternic oxidativ, contribuind la ncetinirea mbtrnirii Uleiul de ctin se administreaz alturi de tratamentele chimioterapeutice, contracarnd efectul toxic al medicaiei clasice. Administrarea de ulei de ctin pe rni ale pielii, fie leziuni mecanice fie arsuri, au grbit procesul de vindecare. Alte beneficii ale uleiului de ctin se refer la tratarea dermatitelor, ulcerului, diminuarea sclerozei arteriale, etc. Din scoar se fac extractecu efect presupus anticancerigen, alturi de care uleiul extras din semine a dovedit efecte antimutagene i de inhibare a multiplicrii celulelor tumorale. Multe studii indic faptul c uleiul de ctin lupt mpotriva bolilor cardiovasculare, ns momentan nu sunt argumentate suficient, fiind necesare mai multe studii. Studiile nu au artat nici un efect toxic al consumului regulat de ulei (Yang and Kallio, 2005b).

1.3.3.

Importana economic

n momentul de fa a crescut considerabil interesul n dezvoltarea unor noi produse pe baz de ctin, att n domeniul alimentar/nutriional, ct i n industria cosmetic i farmaceutic, att prin produse de factur bio ct i tradiional industriale. Produse pe baz de ctin au aprut n diferite ri (Germania, Rusia etc.), n industriile alimentar (sucuri gemuri, jeleuri etc.), farmaceutic (uleiuri etc.) i cosmetic (diferite creme) (ex. Albrecht, 2003).

1.3.4.

Importana ecologic

Datorit rusticitii sale, a sistemului radicular puternic cu capacitate ridicat de drajonare (Qinxiao and Hongyan, 2003; Rai i Rai, 2003) i a capacitii de fixare a azotului atmosferic, ctina este utilizat ca plant pionier n zonele cu terenuri foarte erodate sau n refacerea solurilor antropice din zone industriale i miniere.

1.3.5.

Importana ornamental

Ctina alba este o specie care se preteaz cu succes n scop ornamental, utilizndu-se cu precdere plantele femele, datorit fructelor frumos colorate i a frunziului argintiu.

1.4. Metode de nmulire la ctina alb 1.4.1. nmulirea prin semine

Viabilitatea seminelor este mai ridicat dac fructele se culeg la supracoacere (dup a doua jumtate a lunii septembrie), ncepnd din momentul n care seminele devin maronii (Eliseev, citat de Singh and Gupta, 2003). Viabilitatea ridicat, de 85-100%, se pstreaz pentru 2 ani, dup care aceasta scade. Se recomand utilizarea acestei metode de nmulire exclusiv n ameliorare i n scop ornamental (garduri vii, plcuri etc.) sau ecologic (fixarea terenurilor degradate, srturate etc.). Cu 11

toate acestea, obinerea de astfel de plante poate fi o soluie n cazul n care plantaia se va nfiina pe terenuri dificile, cu precipitaii reduse, caz n care sistemul radicular mai puternic al puieilor poate fi o alternativ recomandabil plantelor obinute prin butire. De asemenea, partea ameliorativ se poate combina cu cea comercial, prin nfiinarea cu puiei obinui din genitori valoroi a unor cmpuri experimentale cu ntindere mare.

1.4.2.

nmulirea vegetativ prin metode convenionale nmulirea prin butai

1.4.2.1.

1.4.2.1.1. Butirea n verde


Aceast metod prezint mai multe avantaje i dezavantaje care trebuie luate n considerare (Tabelul 1). Tab. 1 Avantaje i dezavantaje ale nmulirii prin butirea n verde la ctina alb Advantages and disadvantages of green cuttings propagation in seabuckthorn Avantaje Dezavantaje Advantages Disadvantages o numr ridicat de butai care se o cost ridicat necesit spaii protejate i sisteme performante pot recolta de irigat o rat ridicat de nrdcinare o costuri ridicate cu manopera o randament ridicat o ntrzierea cu un an la introducerea n cmp o pstreaz nealterate trsturile o nfiinarea de plantaii speciale destinate prelevrii butailor plantei mam o spaii medii ocupate de material pn n momentul transferrii n cmp Aceast metod se recomand pentru nfiinarea plantaiilor comerciale n cazul n care dispunem de suficiente plante pentru prelevarea butailor. Se recomand unitilor productoare de material sditor specializate

1.4.2.1.2. Butirea n uscat


Rai i Rai, 2003, recomand utilizarea butirii n uscat datorit uurinei lucrrilor, costurilor mai reduse, efectuare lucrri n lipsa instalaiilor de cea artificial ct i datorit procentului mai ridicat de prindere (a se ine cont totui de faptul c autorii au folosit n cazul butirii n verde sistemul clasic de irigare). Aceast metod prezint mai multe avantaje i dezavantaje (Tabelul 2). Aceast metod se recomand att unitilor productoare de material sditor specializate ct i fermierilor mai puin experimentai n momentul n care se dispune de un numr suficient de butai. Tab. 2 Avantaje i dezavantaje ale nmulirii prin butirea n uscat la ctina alb Advantages and disadvantages of hardwood cuttings propagation in seabuckthorn Avantaje Dezavantaje Advantages Disadvantages intrarea rapid pe rod necesar un numr ridicat de plante i plantaii speciale pentru prelevarea butailor metod de lucru simpl necesari butai de dimensiuni mari pentru rat medie-ridicat de nrdcinare reuita nrdcinrii costuri reduse cu fora de munc i spaii mari ocupate de material pn n echipamente momentul transferrii n cmp pstreaz nealterate trsturile plantei mam transmit uor n descenden diferite boli 12

1.4.3.

nmulirea in vitro prin micropropagare

1.4.3.1. Micropropagarea utilizat ca metod de nmulire la plantele horticole


Principalele aplicaii ale micropropagrii sunt multiplicarea vegetativ clonal rapid a unor forme de interes agronomic i devirozarea i meninerea n stare fitosanitar optim a acestora. Cu toate c micropropagarea poate fi pentru unele specii o alternativ viabil multiplicrii clonale clasice, datorit unor dificulti n aplicare i a unor costuri n general crescute, este n general mai puin utilizat la scar mare. n Tabelul 3 sunt prezentate pe scurt unele avantaje i dezavantaje ale metodei. Aceast metod se recomand pentru nfiinarea plantaiilor mam destinate recoltrii de butai sau direct pentru obinerea de material sditor pentru nfiinarea plantaiilor comerciale n cazul n care costurile de producie se dovedesc concureniale sau n cazul n care nu dispunem de material suficient pentru producerea puieilor prin metode clasice. Se realizeaz doar n institute supraspecializate. Tab. 3 Avantaje i dezavantaje ale micropropagrii utilizat n scop comercial Advantages and disadvantages of micropropagation used in commercial purposes
Avantaje Advantages o Se poate utiliza cu succes la o gam foarte diversificat de specii, inclusiv la unele reticente la metode clasice de multiplicare vegetativ o Iniierea si meninerea culturilor se poare realiza pe tot parcursul anului calendaristic; o Asigur multiplicarea rapid ntr-un timp scurt; o Necesar o cantitate redus de material pentru iniierea culturilor o Materialul obinut in vitro, n special la speciile lemnoase, ofer vigoare ridicat, fructificare abundent i fructe mai mari; o n funcie de direcia urmrit, se pot menine n descenden caracteristicile plantei mam sau se poate induce uor variabilitate genetic; o Se poate obine rejuvenilizarea materialului sditor; o Obinere material sntos; o Uureaz schimburile de material ntre laboratoare; o Asigur un mediu de lucru igienic i constant pe toat durata anului Dezavantaje i riscuri Disadvantages and risks o Necesare studii aprofundate specializate n scopul optimizrii protocolului de micropropagare pentru fiecare specie i chiar soi n parte; o Costuri destul de ridicate datorit spaiilor, aparaturii, substanelor, manipulrii etc. o Prin subculturi repetate pot aprea mutaii nedorite; o S-au semnalat cazuri n care plantele obinute au intrat cu un an mai trziu pe rod fa de plantele obinute prin metode tradiionale (Zimmerman and Steffens, 1996)

1.4.3.2.

Rezultate din literatur cu privire la micropropagarea la ctin

O sintez a tuturor rezultatelor notabile obinute pe plan internaional ct privete micropropagarea la ctin este prezentat n Tabelul 4. n Romnia sunt puine rezultate publicate cu privire la rezultate pozitive n legtur cu nmulirea in vitro la ctina alb i chiar mai puine cu aplicabilitate practic. Cu toate c s-a observat o clar influen n cadrul procesului de micropropagare a fiecrui genotip studiat, majoritatea autorilor testeaz protocoalele per ansamblu per subspecii sau chiar specii, puini focusndu-se pe experimente repetabile, prin utilizarea n experimente a soiurilor omologate sau a elitelor selecionate. Indiferent de specia i subspecia de ctin s-au obinut rezultate modeste dar cu potenial de mbuntire a protocoalelor utilizate, n special n direcia variantelor hormonale utilizate.

13

Tab. 4 Tabel centralizator al rezultatelor din literatur cu privire la micropropagarea la ctin Table summarising the results of the literature on seabuckthorn micropropagation
Sursa Explant iniial Reference Initial explant Montpetit and Semine Lalonde (1988) Burdasov and Sviridenko (1988) Nilov and Tretyakova (1993) Yao (1994) Specie/ Provenien Species/Provenience H. rhamnoides, subspecii necunoscute din Olanda, Canada, SUA Meristeme apicale H. rhamnoides, subspecii necunoscute H. rhamnoides, subspecii necunoscute din Finlanda i Rusia (probabil rhamnoides i mongolica) H. rhamnoides, subsp. rhamnoides i sinensis; China, Finlanda i Danemarca H. rhamnoides, subsp. sinensis (elite) i soiul Indian Summer Rezultate Results Maxim 3-5 lstari/explant. S-a reuit nrdcinarea i aclimatizarea plntuelor i inocularea cu succes cu Frankia. Plantele iniiate se nrdcinau direct, fr faz de multiplicare, rezultnd costuri foarte ridicate. Regenerare din calus, pn la 30 de muguri adventivi/explant. S-a reuit inducerea rizogenezei. Rat medie de multiplicare 2,5. Rezultate superioare la subsp. sinensis Rate ridicate de necrozri. Rat maxim de proliferare 5-6. Necesare cercetri privind nrdcinarea i aclimatizarea. Rat ridicat de infecii. Variante puine testate. Rezultate pozitive doar n cazul multiplicrii plntuelor provenite din semine. Embriogenez somatic. Rat ridicat de proliferare, majoritatea lstari adventivi. Regenerare din calus Regenerare din frunze i vrfuri de rdcini. Inducerea embriogenezei somatice cu rat ridicat de proliferare. Succes la nrdcinare i aclimatizare Observaii Observations Experimentul s-a desfurat n scopul obinerii de plante sntoase n scopul inoculrii; nu s-au urmrit pstrarea unor caracteristici valoroase. Foarte puine informaii legate de sterilizare, medii de cultur, provenien etc., ceea ce face dificil reproducerea experimentului Nu se precizeaz rata proliferrii, multiplicrii. Nu se specific rezultatele individualizat sau pe sexe. Componena mediului de cultur nu este menionat. Reproducerea experimentului dificil. Nu se specific rezultatele individualizat sau pe sexe. Reproducere experiment dificil Lucrare complex, foarte detaliat. Posibil reproducerea dar rezultate generale foarte modeste, necesitnd mbuntirea protocolului. Succes doar n cazul plantelor femele. Fr rezultate pozitive Rezultate modeste. Necesar mbuntirea protocolului de micropropagare. Lucrare pur teoretic; Reproducere experiment dificil datorit variabilitii ridicate din cadrul speciei. Protocol complex, detaliat. Nu se specific rezultatele individualizat sau pe sexe. Aplicabilitate doar n inducerea variabilitii Lucrare detaliat. Posibil reproducerea experimentului cu modificrile de rigoare pentru soiurile i seleciile locale.

Semine, muguri dorminzi i activi i meristeme apicale Meristeme apicale i vrfuri de cretere Muguri dorminzi

Lummerding (2001) Rai i Rai (2003) Vntu (2006, 2008) Liu et al. (2007) Singh and Gupta (2008) Purohit et al. (2009) Sriskandarajah and Lundquist (2009)

H. rhamnoides, subsp. carpatica, soiuri locale Semine i muguri H. rhamnoides, subsp. dorminzi carpatica Frunze, semine H. rhamnoides, subspecii germinate in vitro necunoscute Muguri activi i dorminzi Cotiledoane Frunze, rdcini, cotiledoane H. rhamnoides, subsp. turkestanika H. rhamnoides, India H. rhamnoides subsp. rhamnoides x mongolica, soiul Julia

Muguri dorminzi

14

2. 2.1. Materialul biologic

MATERIALE I METODE

2.1.1. Localizarea i descrierea general a populaiilor de ctin (H. rhamnoides ssp. carpatica) din care s-a efectuat selecia
Delta Dunrii - Regiunea 1. Aceast regiune este situat pe litoralul Mrii Negre n localitatea Sulina, populaia aferent fiind codificat cu M (plantele femele identificate ca MF iar plantele mascule ca MM). Din cadrul acestei populaii au fost selecionate 4 genotipuri femele (MF1-MF4) i unul mascul MM 1. Delta Dunrii - Regiunea 2. Aceast regiune este situat n apropierea localitii Cardon, populaia aferent fiind codificat cu C (plantele femele identificate ca CF iar plantele mascule ca CM). Din cadrul acestei populaii au fost selecionate 5 genotipuri femele (CF1-CF5) i o plant mascul CM 1. Delta Dunrii - Regiunea 3. Aceast regiune este situat n apropierea localitii Sfitofca, populaia aferent fiind codificat cu S (plantele femele identificate ca SF iar plantele mascule ca SM). Aceast populaie a nregistrat cel mai ridicat nivel de variabilitate fenotipic, ceea ce a condus la selecia a 13 genotipuri femele (SF1-SF13) i a 3 plante mascule CM 1. Podiul transilvan - Regiunea Chinteni. Aceast regiune este situat n apropierea localitii Chinteni, populaia aferent fiind codificat cu CH (plantele femele identificate ca CHF 1).

2.1.2.

Vigoarea de cretere i nlimea plantelor

Vigoarea de cretere a plantelor s-a evaluat pe o scar de la 1 la 5, n funcie de grosimea tulpinii, numrul i grosimea ramificaiilor i nlimea medie.

2.1.3.

Capacitatea de drajonare

Capacitatea de drajonare a plantelor s-a evaluat pe o scar de la 1 la 5, n funcie de numrul de drajoni aflai n imediata proximitate.

2.1.4.

Gradul de spinozitate

Pentru evaluarea gradului de spinozitate s-au numrat spinii de pe ramuri anuale aflai pe lungimea standard de 30 cm.

2.1.5.

Caracteristicile frunzelor

Pentru identificarea mai facil a genotipurilor, s-au efectuat msurtori ale limbului foliar i s-a fcut o descriere succint a formei, culorii i gradului de pilozitate.

2.1.6.

Culoarea fructelor

Toate fructele au fost ordonate n laborator, n acelai timp, n funcie de intensitatea culorii i au primit note de la 1 la 5 (1 punct s-a acordat fructelor galben-pal, 2 puncte galben intens, 3 - galben-portocaliu, 4 portocaliu i 5 portocaliu-roiatic).

2.1.7.

Forma fructelor

Forma fructelor s-a apreciat de la sferic la cilindric, n funcie de raportul dintre nlimea i diametrul fructelor.

2.1.8.

Productivitatea potenial

Plantele selectate au fost supravegheate pe parcursul a trei ani, astfel nct s se acopere i indivizii cu alternan de rodire. Pentru acest criteriu s-au acordat note de la 1-5 att la faa locului ct i la comparaia final dintre toi indivizii, pe baza abundenei numrului de fructe (1 15

punct s-a oferit pentru potenial productiv foarte sczut, 2 sczut, 3 mediu, 4 mare i 5 puncte pentru potenial productiv foarte ridicat). Pentru SF4 i CF 5 s-au recoltat toate fructele i s-au cntrit pentru analiza potenialului productiv pe unitatea de suprafa la introducerea n cultur.

2.1.9.

Masa a 100 fructe

Pentru fiecare prob s-au cntrit cte 100 fructe, s-au efectuat minim 3 cntriri i s-a fcut media. Pentru cteva genotipuri s-a evaluat influena anual cu privire la aceast caracteristic.

2.1.10. Numrul de fructe per mugure


S-au numrat fructele pentru cel puin zece muguri i s-a fcut media.

2.1.11. Dimensiunea fructelor


Dup cntrirea fructelor, acestea au fost msurate cu ajutorul unui micrometru mecanic.

2.1.12. Lungimea pedunculului i uurina desprinderii fructelor


Msurarea s-a efectuat cu ajutorul micrometrului. Uurina desprinderii fructelor a inut cont de mai multe aspecte: fora mecanic necesar desprinderii, lungimea pedunculului i de prioritatea desprinderii pedunculului de pe ramur fa de detaarea de pe fruct, care duce la pierderea unei pri din suc i deteriorarea rapid a fructelor. S-au acordat note de bonitare de la 1 pentru fructele care se desprind foarte greu, la 5 pentru fructele care se desprind foarte uor n cazul recoltrii manuale.

2.1.13. Masa a 100 semine


Fructele proaspete au fost secionate i seminele extrase. Acestea s-au lsat la zvntat i cntrite. S-au realizat trei repetiii iar o parte din semine s-au pstrat pentru teste de germinare i analize biochimice.

2.1.14. Caracteristici legate de raportul dintre fructe i semine


Pe lng msurtorile efective, s-au calculat mai muli indicatori valoroi n indicarea valorii culturale a diferitelor genotipuri sau n diferenierea acestora. Astfel, s-au calculat numrul de fructe, respectiv semine, per kg fructe proaspete, masa seminelor dintr-un kg de fructe proaspete, masa fructelor necesare pentru obinerea unui kg de semine, numrul de semine per kg semine i raportul dintre masa seminelor i cea a fructelor.

2.1.15. Selecia genotipurilor elit pe baza notelor de bonitare acordate diferitelor caracteristici
Pentru alegerea genotipurilor elit s-a creat o formul pe baza mai multor caracteristici. Caracteristicile de care s-a inut cont au fost: productivitatea potenial (I), masa a 100 de fructe (II), substana uscat a fructelor (III), culoarea fructelor (IV), vigoarea plantelor (V), gradul de spinozitate (VI), uurina desprinderii fructelor (VII), raportul mas semine per kg fruct (VIII) i capacitatea de drajonare (IX). Formula utilizat pentru punctajul total al notelor de bonitare a fost: Total punctaj bonitare = 8 I + 4 II + 2 III+ 2 IV+ 2 V+ 2 VI+ 2 VII + VIII + IX

2.2. Caracteristicile biochimice ale principalelor genotipuri de ctin (H. rhamnoides ssp. carpatica) selecionate pentru acest proiect 2.2.1. Potenialul furajer al diferitelor componente ale ctinei

Materialul biologic S-au utilizat patru tipuri de eantioane: frunze, lstari tineri, semine i fructe. Determinarea cenuii brute 16

Prin calcinare dup metoda propus de Sljan i colab. (1999). Determinarea coninutului de protein brut (PB) Pentru determinarea coninutului de PB s-a utilizat metoda semiautomatizat cu analizorul Kjeltec auto 1030 TECATOR (Criste i colab., 2003). Determinarea coninutului de grsime brut (GB) Pentru determinarea grsimii brute din probele de ctin s-a utilizat metoda semiautomatizat cu sistemul Soxtec HT 3 TECATOR, propus de Criste i colab. (2003).Solventul utilizat a fost eterul de petrol iar limita de detecie 0,2%. Determinarea mineralelor metodologia va fi descris la subcapitolul minerale.

2.2.2.

Determinarea coninutului de minerale din fructe i semine

Determinarea K, Ca, Mg, Zn i Fe s-a realizat n mod direct cu spectofotometrul cu absorbie atomic AA-6300. Fosforul a fost dozat colorimetric cu vanadat de amoniu, utiliznd metoda descris de Mrghita i Bluiu (1996). Pentru a se realiza un clasament al genotipurilor n funcie de coninutul n minerale s-a pornit de la ideea egalitii valorii elementelor. Pentru fiecare element/prob s-au creat cinci intervale egale, pornind de la coninuturile minime i maxime. n funcie de apartenena la unul din intervale, s-au acordat note de la 1 la 5, dup care punctajul total per elemente s-a adunat.

2.2.3.

Determinarea refractometric a substanei uscate solubile

S-a determinat substana uscat solubil la fructele de ctin recoltate att n octombrie 2009 ct i octombrie 2010 din Delta Dunrii i Transilvania, utiliznd un refractometru manual standard, gradat n Brix, cu temperatura de lucru de 20 C.

2.2.4.

Determinarea aciditii totale i a pH-ului din fructele de ctin

Determinarea aciditii totale s-a realizat prin titrare cu NaOH, dup o metod propus de Marca (1990) iar valoarea pH-ului s-a determinat cu un pH-metru cu senzor de temperatur

2.2.5.

Determinare coninutului de vitamina C (acidului ascorbic) din fructe

S-au analizat fructe recoltate la nceputul maturrii (proaspete) i supramaturate (refrigerate sau congelate timp de 6 sptmni). Pentru determinarea vitaminei C s-a utilizat metoda titrrii cu iodat de potasiu (Lazr, 2010; Stnil i colab., 2001).

2.2.6.

Determinarea coninutului de carotenoide totale din fructe

Metoda de lucru utilizat a cea recomandat de Parlog et al. (2009). Carotenoidele totale au fost extrase utiliznd o soluie metanol:acetat de etil:eter de petrol (1:1:1, v/v/v). Cantitatea total de carotenoide a fost calculat spectofotometric, utiliznd un spectofotometru Jasco V 530.

2.2.7.

Determinarea unor componente lipofilice din fructe i semine

Uleiul total a fost extras att din pulp ct i din semine utiliznd o metod chimic, modificat dup Folch et al. (1957), soventul utilizat fiindo soluie cloroform/metanol (2:1, v/v). Determinarea compoziiei acizilor grai din uleiul de ctin Acizii grai (AG) din uleiurile extrase din pulp i semine au fost analizai prin gaz cromatografie (GC) cu detector de ionizare n flacr (FID). Determinarea cantitativ i calitativ a tocoferolilor din uleiul de ctin Tocoferolii din uleiurile extrase din pukp i semine au fost analizai utiliznd un aparat Shimadzu VP Series liquid chromatograph. Peak-urile tocoferolilor au fost identificate prin compararea timpului de retenie al probelor standard (Sigma). Coninutul n tocoferoli a fost calculat prin calcularea ariei peak-urilor utiliznd datele generate de aceleai standarde menionate anterior. 17

2.3. nmulirea prin semine


Materialul biologic Proveniena fructelor din care au fost extrase seminele este att podiul Transilvaniei ct i Delta Dunrii, zona Sulina. Seminele au fost extrase manual din resturile obinute dup extragerea sucului din fructe. Seminele au fost cntrite i apoi puse la pstrat n pungi de hrtie la temperatura camerei pn n momentul utilizrii.

2.3.1.

Determinarea ratei de germinaie in vitro

Sterilizarea seminelor s-a realizat cu hipoclorit de sodiu 2%, cu cinci graduri ct privete durata de sterilizare: 5, 10, 15, 20 i 25 de minute. Mediul pentru iniierea germinaiei a constat n: 3/4 WPM (sruri plus vitamine), plant agar 7 g/l, zahr 20 g/l iar mediul a fost adus la un pH de 5,8 nainte de autoclavare Pentru germinaie s-au asigurat n camera de cretere urmtoarele condiii: temperatur de 24 C (1) i un regim de iluminare de 16 ore lumin /8 ore ntuneric.

2.3.2. Determinarea ratei de germinaie ex vitro i caracterizarea plantelor obinute


S-a comparat rata de germinaie a seminelor (CHF1) provenite din fructe pstrate la congelator cu cele extrase din fructe proaspete. S-a comparat, de asemenea, pe lng rata de germinaie, procentul de semine goale i gradul de mortalitate la stadiul de frunzulie cotiledonare pentru proveniene diferite. n primvara anului 2010 s-a efectuat semnarea n mas, cu un numr diferit de semine prelevate de la toate genotipurile selectate din Delta Dunrii n anul 2009, n scopul verificrii adaptabilitii la condiiile din Transilvania.

2.4. nmulirea prin butire n uscat 2.4.1. Butirea la ghiveci n spaiu protejat

S-au organizat dou experiene bifactoriale, n care variabilele au constat n: 1-genotipul (plante femele/mascule); 2-substratul; 3-tratamentul hormonal. Toi butaii au fost plantai n spaiu protejat n ghivece TEKU P9 (0,5 l) . Variantelor de substrat au fost: S1. 3:1 turba TS3 klassman+clay (argila) TS3 fin pentru rsaduri; S2. 1:1:2 cele 2 feluri de turb plus pmnt de grdin; Variantele hormonale utilizate au fost: V1. 250 ppm ANA (cltire a bazei); V2. 500 ppm ANA (cltire a bazei); V3. Radistim Nr. 2 (praf pe max. 5 cm);V4. varianta martor - cltire cu ap simpl.

2.4.2.

Butirea mixt i evaluarea plantelor rezultate

Partea bazal a butailor a fost imersat n soluie ANA 30 mg/l timp de 12 ore. Butaii au fost pstrai n paturi de butire (perlit plus turb neutr 2:1, la distana de 3x5 cm ntre plante, acoperite cu folie de polietilen) timp de o lun, dup care au fost trecui n pepinier.

2.5. nmulirea in vitro prin tehnici de micropropagare 2.5.1. Pregtirea mediilor de cultur. Tipurile de vase de cultur utilizate

Mediile de cultur au fost pregtite din soluii stoc sau medii semipreparate. Mediile bazale i alte substane utilizate se pot urmri din tabelul 5. Datorit riscului mai ridicat de infecie n vasele mari i a numrului limitat de explante sau utilizat n special ca vase de cultur eprubetele.

18

2.5.2.

Iniierea culturilor

Pentru iniiere s-au utilizat minibutai cu 1-2 muguri axilari dorminzi sau vrfuri de cretere, muguri ntregi crora li s-au ndeprtat primele dou straturi de foliole i meristeme apicale.

2.5.3.

Pregtirea probelor. Presterilizarea i sterilizarea

S-au utilizat butai proaspei sau statificai. Sterilizarea s-a realizat cu soluie de hipoclorit de sodiu, obinut cu ajutorul unui produs comercial (ACE NaClO 5%), cu sau fr adaos de TWEEN 20. n funcie de tipul de explant i starea acestuia, s-au utilizat concentraii de 20-60% ACE pe o perioad de 10-30 min.

2.5.4.

Inocularea

Indiferent de tipul de explant utilizat, toate iniierile s-au realizat n eprubete de sticl, n hota cu flux laminar. S-a lucrat n apropierea becului de gaz pe tot parcursul inoculrilor. La 6 sptmni de la inoculare s-a evaluat procentul de infecie, necrozare, vitrificare i explante care au regenerat lstari viabili pentru trecerea la etapa de multiplicare.

2.5.5.

Multiplicarea

Pentru etapa de multiplicare s-au testat dou tipuri de explante: microbutai ai lstarilor regenerai in vitro i frunze secionate de pe acetia, utilizate n scopul regenerrii adventive. Pentru multiplicarea prin microbutai s-au utilizat n general concentraii mai sczute de hormoni (0,15-2 mg/l BAP, Zeat, Kin, IBA, AIA), singure sau n diferite combinaii. S-a analizat att rata de multiplicare ct i cea de proliferare. S-a testat regenerare direct sau indirect din frunzele obinute in vitro, ca modalitate de mbuntire a ratei de multiplicare.

2.5.6. 2.5.7.

nrdcinarea Aclimatizarea

S-au utilizat att variante de medii fr hormoni,ct i cu auxinei. Pentru aclimatizare s-au utilizat att plantele nrdcinate in vitro ct cele trecute la nrdcinat ex vitro, ca metod combinat, fie n ap fie n substrat solid

2.6. Interpretarea statistic a rezultatelor


Analiza statistic i graficele s-au efectuat cu ajutorul soft-urilor GraphPad Prism, versiunea 5, pentru Windows i Excel, Microsoft Office.

19

Tab. 5

Substanele utilizate pentru prepararea mediilor de cultur Substances used for culture media preparation
Tip substan Type of substances 1 Mediu bazal Basal media Denumire Name 2 Andersons Rhododendron Medium - cu vitamine incluse DKW/Juglans Medium (Driver and Kuniyuki Medium) cu vitamine incluse Lloyd and McCown Woody Plant Medium cu vitamine incluse Murashige and Skoog Medium cu vitamine incluse Quoirin and Lepoivre Medium cu vitamine incluse Auxine/Auxins Citochinine Cytokinins Schenk and Hildebrandt Medium cu vitamine incluse Acid indolilbutiric Acidul beta indolilacetic Benziladenina (benzilaminopurina) Zeatina Kinetina Tidiazuron Ageni de gelifiere Gelling agents Surs de carbon Carbon sourse Plant agar, Gelrite, Agargel Sucroz, zahr comercial 3 AR DKW WPM MS i MS1/2 (macroelementele la jumtate) QL SH AIB AIA BAP Z Kin TDZ Prescurtare utilizat Abbreviation Etapa n care s-a utilizat/concentraia Stage/concentration 7 -iniiere -100% -multiplicare-100% -iniiere-100% -iniiere-75-100% -multiplicare -75-100% -nrdcinare--75%/100% -iniiere-50%/100% -multiplicare-100% -nrdcinare-25-50% -iniiere-100% -multiplicare-100% -multiplicare-100% -nrdcinare-1 mg/l -multiplicare-0,1-0,5 mg/l -iniiere-0,1-0,5 mg/l -multiplicare-0,15-1 mg/l -regenerare-0,5-1 mg/l -iniiere-1 mg/l -multiplicare-2 mg/l -regenerare-2 mg/l -multiplicare-0,3-20 mg/l -regenerare-20 mg/l -iniiere-0,1-0,2 mg/l -regenerare-0,5 mg/l 3-9 g/l 20-30 g/l

Toate substanele (cu excepia agargelului Sigma i zahrului comercial) au fost procurate de la Duchefa, Olanda. Compoziia mediilor a fost extras din Catalogul Duchefa (***Biochemicals, Plant Cell and Tissue Culture, Phytopathology, Duchefa, Catalogue 2006-2008) 20

3.

REZULTATE I DISCUII

3.1. Caracteristicile morfologice i biometrice 3.1.1. Vigoarea de cretere i nlimea plantelor

Dac plantele femele se caracterizeaz n general prin vigori medii, cu rare excepii foarte mici (ex. MF 1) sau mari (ex. SF 1), la plantele mascule avem n general vigoare cel puin medie, uneori cu mult peste valorile nregistrate n literatur. Pentru unii indivizi masculi s-au nregistrat valori de peste 7 m nlime, cu vigoare ridicat, specific arborilor. nlimea plantelor femele sa situat ntre 1 i 4 m, cu o medie de 2,38.

3.1.2.

Capacitatea de drajonare

Indivizii SF i SM s-au caracterizat n general prin capacitate redus de drajonare, CF i CM medie iar cei MF i MM prin capacitate ridicat.

3.1.3.

Gradul de spinozitate

Seleciile analizate au avut un numr mediu de 8,14 spini/30 cm, cu valori extreme ntre 2 i 15. Cinci seleii au nregistrat o medie a numrului de spini semnificativ negativ fa de a genotipului martor (Fig. 4). Numrul de spini a fost corelat negativ cu nlimea plantelor.

Fig. 4.

Gradul de spinozitate al diferitelor selecii de ctin

Spinescent degree of several seabuckthorn selections

3.1.4.

Caracteristicile frunzelor

Dimensiunea medie a frunzelor a fost de 6,08 cm lungime, 0,59 lime i o suprafa foliar aproximativ de 3,04 cm2. Fa de aspectul clasic al frunzelor, au fost unele excepii constnd ntr-un aspect pielos pe partea superioar i o culoare verde nchis (ex. CF3, SF 4) sau cu evidente pete argintii pe partea superioar a limbului. Majoritatea frunzelor au avut pete ruginii pe partea inferioar.

3.1.5.

Culoarea fructelor

Subspecia carpatica, reprezentat prin indivizii analizai n acest studiu, se caracterizeaz printr-o culoare portocaliu-deschis a fructelor (medie 3,05), cu rare excepii (MF1). Nu s-au descoperit genotipuri cu fructe roii. 21

3.1.6.

Forma fructelor

Fructele analizate au n general forma oval, dar cu excepii constnd n forme ca sferic, uor cilindric sau conic (ex. SF6). Forma oval s-a caracterizat prin uoare variaii, de genul alungit la ambele capete, doar la mucron, bombat etc.

3.1.7.

Productivitatea potenial

Indivizii populaiei M s-au caracterizat prin capacitate productiv sczut, cei ai populaiei C prin una medie iar pentru S medie-ridicat. Masa fructelor recoltate de pe genotipul CF5 a fost de 6,5 kg/plant (21,45 t/ha, 3300 plante/ha) iar la SF4 12 kg fructe/plant (26,4 t/ha, 2200 plante/ha).

3.1.8.

Masa a 100 fructe

Dac n cadrul populaiilor locale din Transilvania masa fructelor depete foarte rar 0,3 g, majoritatea genotipurilor selectate din Delta Dunrii au masa fructelor peste 0,4 g (Fig. 5, medie 45,8, limite 23,1-73,1 g). Masa fructelor a fost corelat pozitiv cu masa seminelor.

Fig. 5.

Masa fructelor i diferenele statistice fa de martor

Fruit weight and statistical differences from control

3.1.9.

Numrul de fructe per mugure

Avem un numr mediu de 4,7 fructe per mugure, cu valori medii extreme de 3-7. Cu toate acestea au fost descoperii muguri i cu peste 10 fructe. Numrul fructelor per mugure s-a corelat negativ cu masa fructelor i cu lungimea pedunculului i pozitiv cu potenialul productiv.

3.1.10. Dimensiunea fructelor


Dimensiunea fructelor seleciilor analizate a fost pentru anul 2009 de 10,7/8,4 mm, cu maxime ale lungimii (nlimii) de peste 13,2 mm i ale diametrului de 9,3 mm. Fructele genotipului martor au dimensiune mai redus fa de majoritatea genotipurilor.

3.1.11. Lungimea pedunculului i uurina desprinderii fructelor


S-au nregistrat valori ale lungimii pedunculului ntre 2 i 5 mm, cu o medie de 3,05 mm. Lungimea pedunculului a fost corelat pozitiv cu uurina desprinderii fructelor.

3.1.12. Masa a 100 semine


Seminele populaiei din Transilvania sunt cele mai mici, cu masa a 100 de semine de 0,96 g, de 3 ori mai mici dect seminele genotipului SF 8 (2,99 g). Media nregistrat pentru acest criteriu a fost de 2,24 g. 22

3.1.13. Caracteristici legate de raportul dintre fructe i semine


Dac pentru ctina din zona Transilvaniei pentru fiecare kg de fructe avem n jur de 40 g semine, pentru seleciile noastre avem o medie de 50 g, cu un maxim de aproape 70 g pentru SF 4 Dac la varianta martor (CHF 1) avem nevoie de aproximativ 26 kg fructe pentru a obine un kg de semine, pentru SF 4 avem nevoie doar de 14 kg. Dac n cazul probei martor avem peste 100.000 de semine, n cazul SF8 avem doar 33.000 . Dac avem un raport mediu dintre masa seminelor i a fructelor de aproximativ 5%, acesta variaz mult, ntre 3,66 i 6,97%.

3.1.14. Selecia genotipurilor elit pe baza notelor de bonitare acordate diferitelor caracteristici.
Pentru genotipurile selectate s-a obinut un total de maxim 90 puncte de bonitare (SF4) i un minim de 57 (MF1). Populaia martor a obinut un punctaj foarte redus, de doar 59 puncte.

3.2. Caracteristicile biochimice ale principalelor genotipuri de ctin (H. rhamnoides ssp. carpatica) selecionate pentru acest proiect 3.2.1. Potenialul furajer al diferitelor componente ale ctinei

Toate componentele analizate au un poteial furajer ridicat, cu excepia coninutului n fosfor, toate componentele fiind asemntare sau mai mari dect fa de alte furaje convenionale (Tab. 6). Tab. 6 Componentele nutriionale la ctin i alte furaje convenionale Nutritional components for seabuckthorn and other conventional fodder supplies
Componente Components Fructe/Fruits Semine/Seeds Frunze/Leaves Lstari tineri Young shoots Specii Species H. r. ssp. carpatica H. r. ssp. carpatica H. r. ssp. carpatica H. r. ssp. carpatica S.U. Dry weight (%) 18-29,8 92-96 25,1 26,3 25,7 85,5 89 87 Protein Grsime crud Crude fat Crude (% SU, protein DW) (% SU, DW) 13,1-17 * 24-42 23,2 12,7-17,3 23,8 3,5 19,87 5,4 16,3 30-50 7-13 3,13 0,7 2,5 16-25 3,5-4,5 Ca/P (% SU, DW) 0,03/0,01 0,01/0,001 0,39/0,03 0,42/0,04 0,49/0,09 1,25/0,23 0,25/0,55 0,02/0,21 Surse References

Vescan i colab. (2010); * Rai i Rai, (2003) Davidescu i Davidescu (1999); Hu and Guo (2006).

Lucern proaspt Furaje tradiionale Lucern uscat Conventional Soia boabe fodders Porumb boabe

3.2.2.

Determinarea coninutului de minerale din fructe i semine

Att n fructe ct i n semine s-au obinut valori foarte ridicate pentru potasiu (Tab. 7). Fa de alte subspecii, cele mai apropiate rezultate au fost raportate de Kallio et al (1999) pentru diferite proveniene din Asia. Tab. 7 Compoziia mineral a fructelor de ctina provenite din Delta Dunrii Mineral composition of seabuckthorn fruit originated from Danube Delta
Proba/Elemente Sample/Compounds (ppm) Limite/Limits Media Average K 2200-18100 12920 5376,76 Ca 169,54509,58 293,88 77,85 Mg P Zn 16,33-126,87 48,30 37,28 Fe 4,4757,75 25,01 14,78

238,05-311,82 13-350 258,68 25,40 112,73 127,10

Doar pentru potasiu s-au obinut unele diferene ntre mediile celor trei populaii de ctin studiate.

23

Ct privete coninutul de minerale din semine, apar discrepane mari att ct privete rezultatele din literatur ct i rezultatele prezentului studiu comparativ cu acestea (Tabelul 8). Tab. 8 Compoziia mineral a seminelor de ctina cu provenien diferit Mineral composition of the seabuckthorn seeds of different origin
Elemente Elements (ppm) CHF1 semine ssp. turkestanica Finlanda K 10900 6225-9350 6240-8520 Ca 99,15 480-1380 210-320 Mg 254,77 1080-1725 1130-1430 P 11 Zn 64,12 20,7-27,8 24-48 Fe 77,57 18,1-74,4 34-53 Referine / References Acest studiu Gupta and Sigh, 2005

Comparatic cu majoritatea fructelor de consum curent, fructele de ctin au un coninut ridicat de potasiu, un coninut mai sczut de P i un coninut mediu pentru celelalte elemente (***http://www.nal.usda.gov/fnic/foodcomp/search, 2011). Genotipul cu cel mai sczut aport de minerale s-a dovedit a fi SF6 (6 puncte bonitare) iar cel mai bun genotip SF10 (21 puncte)

3.2.3.

Determinarea refractometric a substanei uscate solubile

Avem o concentraie medie de 10,81 Brix de substan uscat solubil n fructele de ctin colectate din cele patru populaii distincte, cu limite ntre 7,97 i 12,77 (Fig. 6). Genotipul martor (CHF1) din Transilvania are un coninut ridicat al S.U. solubile din suc, cu diferene semnificativ pozitive fa de majoritatea celorlalte probe analizate. ntre substana uscat i substana uscat solubil exist o corelaie pozitiv clar ns masa mare a fructelor nu este un factor limitativ n obinerea unor soiuri cu fructe cu un coninut ridicat n S.U. solubil.

Fig. 6.

Substana uscat solubil per fiecare genotip Soluble dry weight per genotype

Pentru toate probele s.u. solubil a sczut n anul 2010, acest caracter fiind foarte influenabil de condiiile meteorologice (Fig 7).

3.2.4.

Determinarea aciditii totale i a pH-ului din fructele de ctin

S-au obinut valori ale pH-ului ntre 2,85 i 3,23, cu o medie 3,06. Din punct de vedere al aciditii, s-au obinut valori extreme de 1,41-4,2 g acid citric/100 g fruct. Doar fructele genotipului MF3 au avut o aciditate titrabil (exprimat n acid malic g/100 g fruct) semnificativ negativ fa de a genotipului martor. Interpopulaional, nu s-au obinut diferene semnificativ 24

ntre cele trei populaii (Fig. 8) ns anul recoltrii fructelor a influenat n mod semnificativ acest caracter (Fig. 8).

Fig. 7.

S:U. solubil - stnga influena anului recoltrii; dreapta influena provenienei fructelor

Soluble solids in fruits left - picking year influence; right influence of the fruit origin

Fig. 8.

Aciditate total titrabil stnga influena populaiilor; dreapta influena anului recoltrii

Total titratable acidity of the fruits population influence; right picking year influence

3.2.5.

Determinare coninutului de vitamina C (acidului ascorbic) din fructe

Ct privete coninutul de vitamina C din fructele supramaturate, cel mai mare se regsete n fructele de ctin pstrate la congelator, foarte semnificativ pozitiv fa de cel regsit n fructele refrigerate timp de 6 sptmni (***, p<0,0001, Two-way ANOVA; corelaie r=0,96). n cazul recoltrii fructelor la nceputul lunii septembrie, la debutul maturrii fructelor, sau nregistrat valori mult mai mari ale coninutului n vitamina C comparativ cu rezultatele obinute la fructele supramaturate (Fig. 9). 25

Fig. 9.

Coninutul de vitamina C al fructelor

Vitamin C content of seabuckthorn fruits

3.2.6.

Determinarea coninutului de carotenoide totale din fructe

Raportat la masa fructului proaspt, coninutul de carotenoide a variat destul de mult, pornind de la valori de 4,13 mg% pn la aproape 20 mg%, cu o medie de 10,93 mg%. Raportate la substana uscat, carotenoidele totale s-au ncadrat n intervalul 20,79-92,27, cu o medie de 52 mg%. Rezultate obinute n acest studiu concord cu cele obinute de ali cercettori pentru diferite subspecii de ctin, n special pentru coninutul total de carotenoide din fructele proaspete (Tabelul 9). Tab. 9 Coninutul de carotenoide totale din fructele diferitelor subspecii de ctin Total carotenoids in seabuckthorn fruits from different subspecies
Subspecie Subspecies (H. rhamnoides) caucasica turkestanica carpatica (aceeai regiune) carpatica Carotenoide totale/ Total carotenoids (mg% fruct proaspt/fresh fruit) 0,32-16,7 0,8-28,8 0,32-3,87 10,93 (4,13-19,68) Referine References Novruzov (2005b) acest studiu

Tab. 10 Coeficienii de corelaie dintre elemente morfologice i carotenoidele totale din fruct Correlation coefficients between morphological features and total carotenoids in fruit
Caracteristic morfologic Morphological feature Culoare fructe/Fruit color Masa a 100 fructe/Weight of 100 fruits (g) pH Carotenoide totale/ Total carotenoids (mg%) Valoarea p/p value (two-tailed, Coeficientul de corelaie intervalul de confiden/ confidence Correlation coefficient (r) range 95%) 0,81 <0,0001 -0,59 0,01 0,73 0,01

Cea mai strns corelaie, dup cum se poate observa i din Tabelul 10, este ntre culoarea fructelor i coninutul n carotenoide totale. 3.2.7. Determinarea unor componente lipofilice din fructe i semine Coninutul de ulei 3.2.7.1.

Diferene mari pot fi observate ntre probe att pentru uleiul din semine ct i cel din pulp (7,2-16,4% n semine cu o medie de 11,7% i 3,6-8,5% n pulpa proaspt, cu o medie de 6,2%). Media coninutului de ulei din fructul proaspt este 6,4% iar din fructul uscat 31,4%. 26

3.2.7.2.

Compoziiei acizilor grai din uleiul de ctin

n uleiul din semine AG dominani sunt acidul linoleic (40,1%), linolenic (26,3%) i oleic (17,9%). Uleiul din semine are un procentaj ridicat de acizi grai polinesaturai (PUFA) (66,4%) i mononesaturai (MUFA) (21,5%) comparativ cu cei saturai (SFA) (11,7%). Cnd se compar proba martor cu elitele, o diferen negativ clar este remarcat n cazul acizilor linoleic i linolenic (31,2%, respectiv 31,5%, n proba martor). n uleiul din pulp, cei mai importani AG sunt acidul palmitic (36,55%), oleic (30,9%) i palmitoleic (20,45%). MUFA (58,2%) i SFA (37,6%) sunt dominani n uleiul din pulp, comparativ cu PUFA (4,1%). Dup cum se poate vedea din figura 10, avem diferene semnificative ntre uleiurile provenite din pulp i cele din semine indiferent de clasa de AG analizat. Analiza uleiurilor de ctin pe componente sau pe baza diferitelor clase de acizi grai se dovedete o metod sigur de determinare a fraudelor ct privete mixurile de ulei.

Fig. 10.

Influena originii uleiului (semine, pulp) asupra diferitelor clase de acizi grai Oil influence depending on origin (seed, pulp) on several fatty acids groups

Rezultatele noastre sunt foarte apropiate de cele nregistrate pentru ssp. fluviatilis, dar diferene fa de media general pot fi remarcate pentru acizii palmitoleic, palmitic, oleic i linolenic. Raportul dintre acizii grai saturai i cei nesaturai la ctina romneasc este foarte asemntor cu media general a speciei.

3.2.7.3.

Analiza cantitativ i calitativ a tocoferolilor din uleiul de ctin

A fost observat un raport foarte asemntor ntre -tocoferol i + tocoferol n uleiul din semine; n schimb, uleiul din pulp s-a caracterizat prin cantiti foarte ridicate de -tocoferol (87,7% din totalul tocoferolilor analizai) comparativ cu + tocopferol. Dup cum se poate observa i din Fig. 11, sunt diferene semnificative (***, Two-way ANOVA, Bonferroni posttests) ntre cele dou componente majore ale tocoferolilor doar la uleiul din pulp. Metoda determinrii pe componente a tocoferolilor poate constitui o metod sigur de determinare a fraudelor ct privete mixurile de ulei de ctin. Valorile medii obinute pentru tocoferolii totali, att la uleiul din pulp ct i la cel din semine, se ncadreaz n limite descrise n literatura de specialitate (Cenkowsky et al. , 2006; Yang and Kallio, 2005a), pe cnd SF8 a prezentat valori mai mari (360 mg% n uleiul din semine) dect acestea.

27

Fig. 11.

Influena originii uleiului (semine, pulp) asupra componentelor tocoferolilor The influence of oil origin (seed, pulp) on tocopherol compounds

3.3. nmulirea prin semine 3.3.1. Determinarea ratei de germinaie in vitro

Indiferent de timpul alocat sterilizrii (5, 10, 15, 20 sau 25 min), nu s-a nregistrat nici o infecie i rata de germinare nu a fost influenat semnificativ, nregistrndu-se medie de 90%. Dup ase sptmni, majoritatea plntuelor au emis primele frunze adevrate.

3.3.2. Determinarea ratei de germinaie ex vitro i caracterizarea plantelor obinute


Rata medie de germinare testat ex vitro nu s-a difereniat semnificativ ntre seminele extrase din fructele congelate i cele din fructe proaspete, n primul caz nregistrndu-se o medie de 76,9% pe cnd n cazul al doilea de 73,3%, ns germinarea a ntrziat cu 2 sptmni n cazul utilizrii seminelor extrase din fructe congelate. Media ratei de germinare in vitro a fost semnificativ pozitiv comparativ cu cea ex vitro (Fig. 15)

Fig. 12.

Testarea ratei de germinare in i ex vitro

In vitro and ex vitro germination rates

28

Majoritatea plntuelor au avut o cretere viguroas i stare de sntate bun, indiferent de seminele din care au provenit (Fig. 13). Din punct de vedere statistic, nu s-au observat diferene semnificative ntre ratele de germinare ale seminelor pstrate unul sau doi ani. Seminele provenite de la genotipul martor au avut o rat medie de germinare semnificativ pozitiv doar fa de cele provenite de la SF12 (Fig. 13).

Fig. 13.

Stnga - rata de germinare n funcie de durata depozitrii seminelor; dreapta rata de germinare n funcie de proveniena seminelor

Left germination rate depending on storage period; right germination rate depending on seed origin

Un procent mai ridicat ct privete mortalitatea a fost nregistrat peste iarn ns unele genotipuri au avut o rat de supravieuire peste iarn mai mare dect individul martor unele chiar cu 0% mortalitate (Fig. 14). Ct privete rata general de supravieuire, s-a nregistrat un interval foarte mare, cu valori ntre 29 i 96%, la o medie de 73%.

Fig. 14.

Rata mortalitii puieilor n funcie de proveniena seminelor Seedling mortality depending on seed origin

29

Fig. 15.

nlimea puieilor la sfritul perioadei de vegetaie

Height of the seedlings at the end of the vegetation period

Nu s-a putut stabili la sfritul primului an o corelaie ntre nlimea puieilor (Fig. 15) i vigoarea plantelor genitoare (r=0,15-0,27). O corelaie pozitiv s-a nregistrat ntre rata de supravieuire a puieilor i media celor mai nalte plante (r=0,58, p=0,012. Nu s-au nregistrat corelaii ntre masa seminelor i ceilali parametri analizai.

3.4. nmulirea prin butire n uscat 3.4.1. Butirea la ghiveci n spaiu protejat

Dup cum se poate vedea n Tabelul 11 i Fig. 16, n cazul folosirii aceluiai substrat de nrdcinare S1, avem o rat de nrdcinare nesemnificativ diferit statistic, indiferent de sexul plantelor i varianta hormonal utilizat (One-way ANOVA, Tukeys multiple comparison test). Tab. 11 Randamentul de nrdcinare la butirea n uscat la ghiveci Rooting efficiency for hardwood cutting propagation in pots
Procentul de nrdcinare/ Rooting efficiency *(%) n=45 (butai pentru fiecare variant/ cuttings for each variant) CHF1 CHM1 S1V1 51,1 a 44,4 a S1V2 37,8 a 48,9 a S1V3 51,1 a 62,2 a S1V4 35,6 a 42,2 a Media/ Average(S1V) 43,9 49,43 S2V1 80,0 ab S2V2 82,2 a S2V3 71,1 ab S2V4 57,8 b Media/ Average (S2V) 72,8 Media/ Average (SV) 58,3 S1. 3:1 turb TS3 klassman+clay (argil) TS3 fin pentru rsaduri; S2 1:1:2 turb TS3 klassman+clay (argil), TS3 fin pentru rsaduri plus pmnt de grdin; V1. 250 ppm ANA (cltire a bazei); V2. 500 ppm ANA (cltire a bazei); V3. Radistim Nr. 2 (praf pe max. 5 cm); V4. varianta martor - cltire cu ap simpl. *mediile urmate de aceeai liter nu sunt diferite semnificativ (Tukeys multiple comparison test)

30

Ct privete diferenele generate de substratul de nrdcinare, substratul S2 (amestec turb cu pmnt de grdin) a generat o medie a butailor nrdcinai semnificativ pozitiv fa de cazul n care a fost utilizat doar turb (Fig. 18). Ct privete diferenele cauzate de tratamentele hormonale, fa de varianta martor, n care s-a utilizat ap, doar n cazul utilizrii substratului S2 s-a determinat o diferen semnificativ (*, Bonferroni posttests) a variantei cu 500 ppm (Fig. 18).

Fig. 16.

Stnga randamentul butirii n uscat la ghiveci n funcie de sexul plantei i varianta hormonal; dreapta influena substratului de cultur i a variantelor hormonale

Left the efficiency of hardwood cutting in pot propagation method depending on sex and hormonal treatment; right influnce of culture substrate and hormonal treatment

3.4.2.

Butirea mixt i evaluarea plantelor rezultate

Dup cum se poate observa din Fig. 17, patru genotipuri femele din Delta Dunrii (SF4, 6, 7 i 8) au avut un randament de prindere de aproximativ 40%, n situaia n care cea mai bun variant la ghiveci a fost de 82%. Rezultate mai slabe au fost obinute pentru plantele mascule, datorit deshidratrii rapide a creterilor anuale. Ct privete adaptabilitatea i ritmul de cretere al plantelor noi obinute, majoritatea au avut o cretere viguroas i au supravieuit temperaturilor sczute din timpul iernii (Fig. 17).

Fig. 17.

Stnga - randamentul i rata supravieuirii la butirea mixt; dreapta - nlimea plantelor obinute din butai la sfritul primului an de vegetaie

Left efficiency and survival rate of combined hardwood cutting propagation method; right height of the plants at the end of the first year of vegetation

31

3.5. nmulirea in vitro prin tehnici de micropropagare 3.5.1. Iniierea culturilor

Pentru majoritatea genotipurilor testate, ctina alb s-a dovedit o subspecie dificil de iniiat in vitro, n special pornindu-se de la meristeme. Cele mai bune rezultate au fost obinute n cazul utilizrii mugurilor proaspt recoltai de pe plantele genitoare. n cazul pstrrii ramurilor la frig, n pungi de polietilen, s-a constatat o foarte rapid deteriorare a mugurilor, n cele mai multe cazuri dup patru sptmni majoritatea fiind compromii. Indiferent de perioada n care ramurile au fost recoltate (noiembrie-martie), probele martor care au fost pstrate n ap au artat c aceast specie nu necesit o perioad de frig pentru a porni n vegetaie.

3.5.1.1.

Sterilizarea materialului n funcie de tipul de inocul

Hipocloritul de sodiu s-a dovedit a fi un agent eficient n sterilizarea mugurilor de ctin n situaia n care s-a dorit prelevarea meristemelor sau a mugurilor detaai, cu ndeprtarea primelor straturi de foliole, i ineficient pentru sterilizarea minibutailor inoculai ca atare. Datorit ratelor ridicate de viabilitate a meristemelor i a gradului sczut de infecie, majoritatea sterilizrilor s-au efectuat cu 2% hipoclorit de sodiu timp de 15 minute. Dup cum se poate vedea din Fig. 18, pentru mai multe genotipuri acest tip de sterilizare a generat 0% grad de infecii n condiiile unor rate de iniiere foarte ridicate.

Fig. 18.

Sterilizarea materialului vegetal n vederea prelevrii meristemelor Sterilization of the material for meristem prelevation

Utilizarea ca inoculi a minibutailor nu se recomand dect n cazul modificrii radicale a protocoalelor existente de sterilizare i n cazul utilizrii unui material pstrat n condiii controlate (ex. sere, cu control fito-sanitar constant). n funcie de genotipul utilizat, n cazul meristemelor se poate obine o rat de viabilitate de pn la 100%, n culturi total lipsite de infecii utiliznd protocolul propriu, cu concentraii de NaClO de 2% timp de 12-20 min. innd cont de simplitatea metodei i de procentul ridicat de regenerare a lstarilor din meristeme pentru o mare parte din genotipuri, acest tip de inocul se recomand la utilizarea unui material provenit din flora spontan, cu un grad ridicat de infecii endogene. 32

3.5.1.2.

Iniierea din meristeme

Cu toate c majoritatea explantelor au format un calus bazal abundent, doar n puine cazuri s-au observat scurgeri fenolice consistente care au aprut n general la baza lstarilor vitrificai, care erau oricum compromii. Nu s-au nregistrat cazuri n acest studiu n care scurgerile fenolice s inhibe dezvoltarea lstarilor. Indiferent de pH sau concentraiile de BAP, nu s-au obinut diferene semnificative ntre mediile ratelor de iniiere. Deoarece concentraiile de 0,1-0,2 au produs un procent asemntor de lstari, n experimentele ulterioare s-a utilizat cu precdere concentraia intermediar de 0,15 mg/l. Concentraiile de BAP mai mari de 0,2 ct i utilizarea TDZ au generat necrozare total. Cu toate c valori mai ridicate ale pH-ului au generat un procent de lstari mai ridicat, majoritatea au avut o vigoare mai redus i au avut un randament foarte sczut de multiplicare. Pentru genotipurile recalcitrante la BAP se poate recomanda testarea cu zeatin, care a dat rezultate foarte bune la genotipul SF6. Indiferent de mediile bazale utilizate pentru iniiere, n cazul utilizrii mediilor fr hormoni s-a produs necrozare total a inoculilor. 3.5.1.2.1. Coninutul cantitativ i calitativ al sursei de carbon Nu s-au observat diferene ntre utilizarea zahrului comercial i sucroza de laborator sau ntre concentraiile de 20 sau 30 g/l. 3.5.1.2.2. Influena agenilor de gelifiere. Rata de vitrificare Att n aceast etap ct i la multiplicare s-a testat influena mai multor ageni de gelifiere, utilizai individual sau n combinaii, cele mai bune rezultate fiind obinute pe mediile gelifiate cu plant agar. 3.5.1.2.3. Influena mediilor bazale Cel mai bun mediu utilizat la iniierea din meristeme la ctina alb a fost WPM. n funcie de necesitile individuale aprute pe parcursul experimentelor, s-a propus un mediu general de iniiere care a generat rezultate pozitive pentru majoritatea genotipurilor studiate. MG=3/4 WPM (macro-, micro-elemente i vitamine), 8 g/l plant agar, sucroz (zahr alimentar) 20 g/l, BAP 0,15, pH 5,4. 3.5.1.2.4. Diferenele ntre genotipuri la utilizarea mediului general Fa de media general, dup cum se poate vedea din Fig. 19, ct privete media numrului de lstari regenerai majoritatea genotipurilor au nregistrat diferene semnificative iar ct privete media vitrificrilor diferene nesemnificative.

Fig. 19.

Influena genotipurilor asupra iniierii i vitrificrii (mediul MG)

Genotype influence on culture establishment and hyperhidricit (MG media)

33

3.5.1.2.5. Morfologia i vigoarea lstarilor rezultai (inclusiv vitrificarea) Majoritatea genotipurilor au prezentat o vigoare sczut la 6 sptmni de la iniierea meristematic, cu o lungime a lstarilor de aproximativ 10 mm (max. 20 mm) i frunze foarte scurte. Genotipurile care au produs lstari cu aspect tipic nc din faza de iniiere au fost SF8, CF2, CM1 i SF11. O mare parte din lstarii rezultai au avut un aspect uor vitrificat, care n subculturile ulterioare s-a accentuat chiar dac s-au utilizat cantiti ridicate de agar.

3.5.1.3.

Iniierea din minibutai

Iniierea pornind de la minibutai cu vigoare redus s-a dovedit mai puin utilizabil n acest caz, datorit ratei de infecie foarte ridicat. Metoda de iniiere cu minibutai lungi direct n ap steril nu a fost regsit n literatur, avnd un caracter de noutate, caracterizndu-se prin costuri foarte reduse cu manopera i prin lipsa mediilor de cultur. Prin aceast metod s-au obinut lstari viguroi, tipici, pretabili la multiplicare.

3.5.1.4.

Iniierea din muguri

Pentru iniierea din muguri s-a nregistrat o rat de infecie mult mai mare dect n cazul meristemelor i o rat de regenerare mai redus. Cu toate acestea, majoritatea lstarilor rezultai au avut o vigoare mai mare dect a celor provenii din meristeme i au prezentat o tipicitate a speciei mai ridicat. n acelai timp, mugurii au dovedit o elasticitate mult mai mare ct privete mediul bazal utilizat.

3.5.2.

Etapa de multiplicare Influena vaselor de cultur asupra multiplicrii

3.5.2.1.

Rezultatele apropiate obinute pentru eprubete comparativ cu alte vase (diferene nesemnificative statistic) plus riscul redus de infecii la utilizarea acestui tip de recipient au ncurajat utilizarea exclusiv a acestuia n experimentele ulterioare. n situaia micropropagrii la scar mare a acestei specii, se recomand utilizarea vaselor tip Magenta GA7.

3.5.2.2.

Influena mediilor din subculturile precedente

Att pentru proliferare ct i ct privete vigoarea de cretere a lstarilor, nu au fost obinute diferene semnificative la testarea pe mediul MG clone provenite de pe trei tipuri de medii cu concentraii hormonale diferite.

3.5.2.3.

Influena numrului de subculturi

Nu au fost diferene semnificative ntre subculturi dect ct privete lungimea medie a lstarilor.

3.5.2.4. Influena agenilor sensibilitatea la vitrificare

de

gelifiere

asupra

multiplicrii

Chiar i n cazul utilizrii unor concentraii mai ridicate de plant agar (8-9 g/l), care au dus uneori la crparea mediilor, s-a generat un procent ridicat de vitrificri n anumite subculturi pentru genotipurile mai sensibile. Nivelul vitrificrii a fost n general mai redus n cazul utilizrii unor cantiti mai sczute de sruri minerale. 3/4 WPM a generat cel mai sczut nivel al vitrificrii.

3.5.2.5.

Influena genotipurilor, mediilor de cultur i a hormonilor

Asemenea iniierii, i n cazul multiplicrii s-au observat diferene foarte mari ct privete rata de multiplicare, proliferare, necrozare i vitrificare, att datorit influenei genotipurilor ct i a mediilor de cultur. Indiferent de genotipul utilizat, cel mai bun mediu bazal s-a dovedit a fi WPM, utilizat n diferite concentraii ale srurilor i vitaminelor, pornind de la 1/2 pn la integral. Mediile MS, AR, QL, SH i DKW au dat rezultate slabe, indiferent de concentraiile utilizate, rezultnd n procente ridicate de necrozare sau vitrificare.

34

3.5.2.6.

Multiplicarea genotipurilor din Delta Dunrii Sf. Gheorghe (DF)

Indiferent de genotipul utilizat i de varianta de mediu de cultur, nu s-a obinut o rat de proliferare medie mai mare de 3:1, cu maxime de 5 lstari/explant iniial.

3.5.2.7. Sulina

Multiplicarea genotipurilor provenite din Delta Dunrii, zona

Rezultatele semnificative pentru toate genotipurile sunt prezentate sintetizat n Tabelul 12 i Fig. 20. Indiferent de varianta hormonal utilizat, pentru nici unul din genotipurile analizate nu s-a obinut o diferen semnificativ ntre medii ct privete proliferarea axilar. Cu toate acestea, pentru unele variante s-au obinut maxime ale proliferrii cu valori ridicate (maximum 6 lstari/explant proliferare axilar, la SF6, i 15 la proliferare adventiv, la SF8). La utilizarea unor concentraii hormonale mai ridicate (ex. BAP 0,5-1 mg/l, zeatin 2 mg/l) lstarii rezultai au avut vigoare foarte mic i a fost necesar o subcultur suplimentar. Indiferent de genotipul testat, cea mai mare vigoare de cretere s-a nregistrat n cazul utilizrii mediului general, utilizat i la iniierea culturilor.

Fig. 20.

Stnga - vigoarea de cretere a lstarilor cu proveniene diferite multiplicai pe mediul general (MG); dreapta influena mediului bazal asupra multiplicrii SF8

Left growth vigor of the shoots depending on genotype, multipliend on general culture media (MG); right the influence of the basal media on SF8 multiplication

3.5.3.

Regenerarea din frunze

Mediile WPM, zahr 30 g/l, pH 5,8, agar 8 g/l, alturi de zeatin 2 mg/l plus AIA 0,1 mg/l i BAP:AIA 0,5, respectiv 0,1 mg/l, au generat un procent extrem de ridicat, de pn la 100% rat de regenerare. Dac la SF11 a fost o regenerare mixt la utilizarea zeatinei, att direct (majoritar) ct i din calus organogen, la SF8 zeatina alturi de AIA a produs doar regenerare din calus. Dei zeatina a produs o rat ridicat de regenerare, regeneranii au constat n muguri sau lstari de dimensiune foarte redus. La trecerea lor pe mediul general s-a reuit alungirea lstarilor i obinerea unor plntue cu aspect tipic. S-au obinut n medie 2 lstari viabili, tipici, per frunz la regenerarea direct pornind de la SF11 i zeatin cu AIA (2:0,1 mg/l). Mediul BAP:AIA a generat n cazul genotipului SF11 regenerare direct cu lstari bine definii (rat regenerare 100%), cu potenial de trecere n etapa de alungire n mod individual. Aceast metod necesit analize ulterioare cu privire la stabilitatea genetic i morfologic a plantelor rezultate, mai ales n cazul utilizrii ca material de iniiere soiuri.

35

Tab. 12 Cele mai bune rezultate obinute n etapa de multiplicare n funcie de mediile de cultur i genotipuri (seleciile Sulina)

Best results within multiplication stage depending on culture media and genotypes (Sulina selections)
Genotip Genotype SF4 SF5 SF6 SF7 SF8 CM1 CF2 CF3 MF3 CHF1 SF5 SF6 CF2 SF6 SF7 CF2 SF8
1 2

Mediu de cultur Culture media MG1 MG1 MG1 MG1 MG1 MG1 MG1 MG1 MG1 MG1 WP0,52 WP0,52 WP0,52 WPKB3 WPKB3 WPKB3 QL4

Proliferare Proliferation (nr.lstari> 2 mm:1) (shoots no.>2 mm:1) 1 1,5 1,5 2,2 1,2 1,7 1,1 1 1 1 1,6 2,8 2,0 2,7 1,9 1,4 1,5

Proliferare max. Max.proliferation (nr. lstari >2 mm:1) (shoots no.>2 mm:1) 1 3 4 6 3 3 3 1 1 1 2 7 4 6 4 2 3

Multiplicare Multiplication (nr. minibutai >2 mm:1) (microcuttings no.>2 mm:1) 1 1,5 1,8 1,7 1,3 2 1,6 2 1 1,2 1,1 1,4 1,9 2,7 1,4 2,0 2,2

L medie a lstarilor Average lenght of the shoots (mm) 11,6 13,3 19,8 11,1 26,1 15,8 23,9 21,3 13,8 14,8 5,1 6,4 9,8 16,3 11,8 16,7 17,7
3

Numrul de lstari analizai No. of shoots tested (n) 15 18 15 39 26 5 54,0 3 13 17 8 17 24,0 16 13 7,0 9

Deviaia Standard Standard deviation (mm) 5,9 10,7 8,5 7,1 18,4 11,1 10,5 9 8,2 11,5 3,4 7,7 9,8 9,6 9,6 20,2 13,4

Lungimea maxim Maximum lenght (mm) 22 42 29 39 68 30 44 30 30 52 10 30 45 35 28 57 36

nrdcinare spontan Rooting (%) 8 10 11 14,0 100

Vitrificare Vitrification (%)

17 10 20

10 20 10 20,0 17 0 10,0 20,0

3/4 WPM, 20 g/l zahr, 8 g/l plant agar, BAP 0,15, pH 5,4 3/4 WPM, 20 g/l zahr, 8 g/l plant agar, BAP 0,5 mg/l, pH 5,4

3/4 WPM, 20 g/l zahr, 8 g/l plant agar, Kin:BAP 0,3:0,2 mg/l, pH 5,4 4QL, 20 g/l zahr, 8 g/l plant agar, BAP 0,15, pH 5,4

36

3.5.4. nrdcinarea in vitro


Cele mai viguroase rdcini s-au obinut n cazul nrdcinrilor spontane pe parcursul etapei de multiplicare (Fig. 21). Acest tip de nrdcinare a fost n generat asociat cu lstarii cu vigoare cel puin medie, ceea ce a generat plante potrivite pentru aclimatizare.

Fig. 21. Stnga Influena mediilor de cultur (vezi Tabelul 5) asupra nrdcinrii; centru - plant de vigoare redus obinut n etapa de nrdcinare; dreapta plante nrdcinate spontan n etapa de multiplicare Left the culture media influence on rooting (see Table 5); middle low vigor plantlet obtained within rooting stage; right spontaneous rooted plantlets within multiplication stage

Majoritatea rdcinilor obinute n etapa dedicat special nrdcinrii au fost foarte puin viguroase i o mare parte s-au rupt odat cu splarea plntuelor sau la punerea n substratul de aclimatizare. n acelai timp, plante obinute au fost cu vigoare redus, cu anse mici de aclimatizare (Fig. 21).

3.5.5. nrdcinarea ex vitro i aclimatizarea


Doar plntuele viguroase au putut fi aclimatizate n amestec de turb i nisip, ns nu s-au nregistrat creteri. Cele mai slabe rezultate s-au obinut pentru lstarii semivitrificai i n cazul aclimatizrii n ap. n cazul utilizrii unor lstari viguroi, semilignificai, exist posibilitatea nrdcinrii directe ex vitro, care, prin mbinarea etapei de nrdcinare cu cea de aclimatizare, poate fi o alternativ viabil metodologiei clasice.

37

4.

CONCLUZII

4.1. Concluzii privitoare la etapa de selecie


Variabilitate fenotipic intrasubspecific foarte ridicat O parte din rezultate infirm rezultate anterioare pentru ssp. carpatica Trei genotipuri (SF4, SF7 i SF8) au prezentat valoare ridicat fiind introduse n procesul de testare, omologare i brevetare ca soiuri noi (Golden Abundent, Carmen i Colosal). Majoritatea seleciilor - valoare mult mai ridicat dect genotipul martor i asemntoare sau mai mare comparativ cu cele mai bune soiuri omologate pe plan naional Doar selecia din flora spontan nu poate asigura caracteristici superioare unor soiuri internaionale, recomandndu-se pornirea unui proces amplu de ameliorare

4.2. Concluzii referitoare la caracteristicile bio-chimice ale seleciilor


Potenial furajer ridicat, n special ca aditiv; recomandare n ferme bio (necesar adaos de P) Surs bogat de minerale i n special de K Raportul aciditate/S.U. solubil foarte sczut nici o selecie recomandat pentru consum n stare proaspt Coninut mediu de vitamina C dar peste fructele consacrate; se recomand pstrarea la congelator imediat dup recoltare Coninut mediu de carotenoide Coninut ridicat de ulei, n special n pulp Se recomand uleiul de semine pentru aport ridicat de acizi grai polinesaturai i uleiul de pulp pentru vitamine E Metodele de determinare a AG i tocoferolilor pot fi utilizate n depistarea fraudelor

4.3. Concluzii referitoare micropropagare


la

nmulirea

prin

metode

convenionale

Majoritatea plantelor obinute din semine provenite din Delta Dunrii s-au aclimatizat uor la condiiile climatice din Transilvania Randamentul nmulirii prin butai la ghiveci este independent de sexul plantelor dar semnificativ influenat de substratul de cultur Butirea n uscat - randamente ridicate i vigori mari ale plantelor cu trecerea direct n cmp dup un singur an O mare parte din genotipuri s-au iniiat cu succes in vitro pornind de la meristeme. Recomandm pentru iniiere mediul WPM (3/4 sruri i vitamine) alturi de 0,15 mg/l BAP, 0,8% Plant Agar, 2% sucroz i un nivel al pH-ului de 5,4. Regenerarea din frunze este posibil utiliznd concentraii hormonale sczute Ctina alb este dificil de micropropagat, genernd rate sczute de multiplicare, nrdcinare i aclimatizare, nerecomandndu-se ca o metod de multiplicare la scar industrial

Pe baza rezultatelor obinute i a contextului agricol al Romniei, se recomand continuarea muncii de selecie i debutul procesului de ameliorare la ctina alb, n scopul obinerii unor soiuri valoroase, competitive pe plan internaional.

38

BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. Brad, I., Ioana-Luminia Brad, Florica Radu, 2002, Ctina alb - o farmacie ntr-o plant, Ed. Tehnic, Bucureti. 2. Cenkowski, S., R. Yakimishen, R. Przybylski, W.E. Muir, 2006, Quality of extracted sea buckthorn seed and pulp oil. Canadian Biosystems Engineering, Volume 48, 3, 9-16. 3. Gupta, R.K. and V. Singh, 2003, Studies on Micro-propagation in Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L). Seabuckthorn (Hippophae L): A Multipurpose Wonder Plant, I, Indus Publishing Company, New Delhi, 338-344. 4. Gupta, R.K. and V. Singh, 2005, Mineral Composition of Seabuckthorn (Hippophae L). Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L): A Multipurpose Wonder Plant, II, Daya Publishing House, New Delhi, 272-284. 5. Lebeda, A.F., 2003, Correlationships of Biological Characteristics in Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L). Seabuckthorn (Hippophae L): A Multipurpose Wonder Plant, I, Indus Publishing Company, New Delhi, 84-96. 6. Lebeda, A.F., 2008, Propagation of Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L) in Ukrain. Seabuckthorn (Hippophae L): A Multipurpose Wonder Plant, III, Daya Publishing House, New Delhi, 22-26. 7. Li, T.S.C. and C. McLoughlin, 1997, Sea Buckthorn Production Guide, Canada Seabuckthorn Enterprises Limited. 8. Lu, R., 1992, Seabuckthorn: A Multipurpose Plant Species for Fragile Mountains, ICIMOD, Kathmandu, Nepal. 9. Lu, R., 2005, Biochemical characteristics of Seabuckthorn (Hippophae L). Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L): A Multipurpose Wonder Plant, II, Daya Publishing House, New Delhi, 98-107. 10. Lummerding, P., 2001, Micropropagation Protocol Development for Sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) Selections for Commercial Orchard Production. Agri-Food Innovation Fund Project #19980162, Final Report, Canada. 11. Rai, I.V. i Luminia Rai, 2003, Ctina alb n exploataii agricole, Ed. Anca, Urziceni. 12. Singh, V. and R.K.Gupta, 2008, Micropropagation of Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L). Seabuckthorn (Hippophae L): A Multipurpose Wonder Plant, III, Daya Publishing House, New Delhi, 3-13. 13. Singh, V., 2005c, Seabuckthorn (Hippophae L) in Traditional Medicines. Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L): A Multipurpose Wonder Plant, II, Daya Publishing House, New Delhi, 505-521. 14. Sriskandarajah, S. and P.O. Lundquist, 2009, High frequency shoot organogenesis and somatic embryogenesis in juvenile and adult tissues of seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L). Plant Cell, Tissue and Organ Culture, Springer Online. 15. Yang, B. and H.P. Kallio, 2001, Fatty Acid Composition n Sea Buckthorn (Hippophae rhamnoides L) Berries of Different Origins. J. Agric. Food Chem., 49, 1939-1947. 16. Yang, B., 2001, Lipophilic components of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) seeds and berries and physiological effects of sea bucktorn oil, PhD thesis, University of Turku, Finland. 17. Zadernowski, R., M. Naczk, R. Amarowicz, 2003, Tocopherols n Sea Buckthorn (Hippophae rhamnoides L) Berry Oil. JAOCS 80, 55-58. 18. Zubarev, Y.A., 2008, Commercial Cultivation of Seabuckthorn n Western Siberia, Russia. Seabuckthorn (Hippophae L): A Multipurpose Wonder Plant, III, Daya Publishing House, New Delhi, 49-60. 39