Sunteți pe pagina 1din 4

Determinarea vitaminei C din sucurile de fructe prin cromatografia lichid de nalt performan ( HPLC )

Vitamina C, acidul ascorbic, este un acid organic cu proprieti antioxidante, implicat ntr-o serie de procese care se desfoar n celulele vii. n organismul uman vitamina C deine un rol complex i important; protejeaz compuii biologic activi de degradri oxidative, ntrete sistemul imunitar, stimuleaz procesele de biosintez a colagenului, hormonilor steroidici i a unor neurotransmitori. Doza de 10 mg/zi previne avitaminoza C, ns raia zilnic recomandat pentru un adult este de 60 mg. Lipsa vitaminei C din organism conduce la scorbut, denumit i boala marinarilor, caracterizat prin gingivite (gingii cavernoase i inflamate), paradontoze, pierderea dinilor, vase de snge fragile, neelastice, inflamarea articulaiilor i anemie.Sub denumirea de vitamina C este, de fapt, cunoscut izomerul levo al acidului ascorbic. Vitamina C este o substan usor oxidabil, degradarea sa fiind accelerat de cldur,lumin i de prezena cationilor metalelor grele. Pierderile de acid ascorbic ce au loc n decursul procedeelor tehnologice ce sunt parte a procesrii sucurilor de fructe, pot depi 50%. Din acest motiv,adeseori,fabricanii adaug vitamina C pentru a mbunti valoarea nutritiv i de a prelungi timpul de via al produselor.Metodele de determinare a coninutului de acid ascorbic sunt diverse, toate bazndu-se pe caracterul reductor al analitului. Cele mai cunoscute sunt metodele titrimetrice bazate pe titrare cu o soluie oxidant (diclorofenol indofenol, iodat de potasiu sau bromat de potasiu)cromatografice (HPLC), fluorimetrice sau amperometrice, bazate pe biosenzori.In special,metodele cromatografice sunt foarte eficiente in determinarea acidului ascorbic prin analiza cantitativa a materialelor complexe,cum ar fi sucurile de fructe, legume si bauturile.

Prin aceast metod se pot separa,identifica si cuantifica majoritatea acizilor organici din sucurile naturale de fructe folosind HPLC ,care va identifica compuii, nu doar cu timpii lor de retenie,ci i cu spectrele lor individuale. Materiale i metode Sucul de citrice se centrifugheaz la 3000 de rotaii timp de 10 minute ,iar supernantantul se dilueaz n raport 1:50 pentru determinarea acidului citric i n raport 1:5 pentru ali acizi.Diluiile sunt filtrate printr-o membran nainte de injectare.Se analizeaz 2 eantioane n duplicat. Se prepar o soluie standard mixt ce conine 1000mg/l acid citric,2000mg/l acid malic ,300mg/l acid oxalic si acid ascorbic ,700mg/l acid tartric i 400mg/l acid lactic.Soluia standard si diluiile corespunzatoare sunt preparate cu ap distilat i sunt pstrate n locuri ntunecoase ,la temperatur joas (+4oC). Analiza HPLC Acizii organici din probe sunt separai prin cromatografie cu faz invers ,i determinai cu ajutorul absorbanei,apoi cuantificai cu graficele de calibrare externe.Pentru detectarea simultan a 6 probe,detectorul este setat la lungimea de und =254nm pentru acidul ascorbic i =214nm pentru ali acizi organici. Timpii de retenie,gradul de concentraie si limita de detecie pentru acizi organici standard Acizi organici Timp de Grad de Limita de (nm) retenie(min) cocentraie(mg/l) detecie(mg/l) Acid oxalic 214 4,122 0,2-300 0,1 Acid tartric 214 4,834 1-700 0,5 Acid malic 214 6,186 20-2000 10 Acid lactic 214 6,890 40-400 20 Acid ascorbic 254 7,353 1-300 0,5 Acid citric 214 12,538 16-1000 8,0 Determinrile se fac la 10oC folosind o faz mobil format din soluie de fosfat (se dizolv 6,8g dihidrogenofosfat de potasiu n 900ml ap; pH-ul se ajusteaz cu acid fosforic pn la pH=2,8 apoi se completeaz cu ap pn la

1000 ml),ce se filtreaz printr-o membran de poliamid i este introdus la vid.Rata de curgere a fazei mobile este de 0,7ml/min pentru toate separrile cromatografice.Coloana de separare este echilibrat cu faza mobil nainte ca linia de baz s se stabilizeze.La acest nivel se fac pipetri cu volume de 5 l pentru fiecare prob preparat sau soluie standard. Valorile abaterilor standard relative variaz de la 0,154 la 3,18% indicnd c aceast metod este precis ,cu un grad mare de repetabilitate ,n special pentru acidul citric,ascorbic,lactic i oxalic .Recuperarea acizilor organici din sucurile de citrice variaz ntre 95,8 si 102,1% confirmnd precizia de separare si condiiile de analiz. Aceast metod contribuie la dezvoltarea procedurii HPLC,fiind rapid i precis,pentru determinarea cantitativ a acizilor organici din sucurile de fructe,n condiiile de faz invers.Acizii oxalic,tartric,malic,lactic,citric i ascorbic sunt determinai simultan i eluate din coloan n timp de 20 de minute. Avnd n vedere uurina i concizia de pregtire a probei,aceast metod poate fi considerat eficient,precis i rapid pentru determinarea acizilor organici.Se mai pot folosi i alte metode de determinare a vitaminei C, ns au anumite dezavantaje,consum mult timp i au reproductibilitate mai mic.