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Villa Mara College Genoma, Subsector de Biologa Profesora: Luz Marcela Osorio

genes e ingeniera gentica

El conocimiento de que la expresin de un gen determina la formacin de protenas que se relaciona con la manifestacin de un fenotipo en particular, hizo que en el mundo cientfico surgiera la interrogante acerca de cul es la naturaleza de los genes. La respuesta a esta interrogante se relaciona con una serie de investigaciones experimentales. Una de las primeras que entreg antecedentes fue realizada por F. Griffith (1928) en neumococos, bacteria que provoca la neumona. La cepa capsulada produce la enfermedad y la cepa no capsulada no la provoca. Este trabajo experimental aport la idea de un factor transformante que converta las bacterias no capsuladas en capsuladas. La secuencia de trabajo experimental de Griffith se resume en la siguiente imagen (fig. 1).

Fig. 1: Experimentos de Griffith Composicin qumica del ADN El ADN (cido desoxirribonucleico) es un polmero de alto peso molecular formado por la combinacin de cuatro monmeros (nucletidos). Cada nucletido est conformado por molculas ms pequeas: una base nitrogenada (purina o pirimidina), un azcar (desoxirribosa) y un grupo fosfato (Fig. 2). Los cuatro tipos de nucletidos difieren solamente en el tipo de base nitrogenada, la cual puede ser una de las purinas (adenina o guanina) o una de las pirimidinas (citosina o timina).

Fig. 2: Esquema de un nucletido El conocimiento de los componentes del ADN y otros antecedentes permiti a los cientficos Watson y Crick construir un modelo tridimensional de la molcula. Este modelo propone la presencia de dos cadenas de nucletidos entrelazadas en forma de doble hlice. Cada una de estas hebras se une por las bases nitrogenadas mediante puentes de hidrgeno, siguiendo un patrn fijo: la adenina se une a la timina y la guanina a la citosina (Fig. 3).

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Fig. 3: a. Modelo de la doble hlice del ADN; b. Disposicin de los nucletidos en el ADN El modelo descrito permite explicar cmo se pueden sintetizar nuevas molculas de ADN: la ruptura de los puentes de hidrgeno permite que una de las cadenas sirva de molde para formar una cadena complementaria. En este proceso participa una serie de enzimas, una de ellas es la ADN polimerasa, que controla el enlazamiento de los nucletidos en las cadenas complementarias. El ADN es capaz de determinar el fenotipo de un organismo a travs de un proceso denominado expresin gnica. Mediante dicho proceso la informacin contenida en el ADN es utilizada para especificar la constitucin de las protenas de la clula. Las protenas que se sintetizan influyen en el fenotipo, desde rasgos visibles hasta otros, slo observables bioqumicamente. El proceso que permite sintetizar protenas a partir del ADN no es directo; se requiere la participacin del ARN (cido ribonucleico), el cual se diferencia del ADN en que el nucletido posee un uracilo en vez de timina y que el azcar es una ribosa (similar a la desoxirribosa pero con un grupo hidroxilo extra). Para que se sintetice una protena se requieren los siguientes eventos (Fig. 4):

Fig. 4: Esquema del proceso de transcripcin y traduccin 1. Transcripcin: la informacin contenida en el ADN se copia en el ARN mensajero (ARNm). De esta manera es el m ARN el que sale del ncleo y posibilita que se sinteticen las protenas en el citoplasma (Fig. 5).

Fig. 5: Esquema de la transcripcin 2. Traduccin: la informacin transcrita en el ARNm se utiliza para determinar la secuencia de aminocidos de una protena. Una secuencia de tres bases consecutivas del ARNm, especfica para un aminocido, se denomina codn. Los ribosomas se unen al ARNm y lo recorren, lo cual permite que el ARNt (ARN de transferencia) se una en secuencia y coloque de manera adecuada los aminocidos (Fig. 6).

Fig. 6: Esquema de la traduccin El cdigo gentico Durante el proceso de expresin gnica, los aminocidos son ensamblados en funcin de las instrucciones de codificadas en la secuencia de nucletidos en el ARNm. El cdigo gentico es el

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trmino que describe las reglas que relacionan cmo una secuencia de bases nitrogenadas en los nucletidos corresponde a un aminocido particular. En el cdigo gentico, tres nucletidos adyacentes ("letras") de ARNm especifican un aminocido ("la palabra") en un polipptido. Cada secuencia de tres nucletidos de ARN mensajero que codifica un aminocido o una seal de inicio o detencin se llama codn. El siguiente cuadro ilustra los 64 codones de ARNm y los aminocidos que codifican en la mayora de los organismos.

Por ejemplo, el codn GCU especifica el aminocido alanina en el cdigo gentico. El cdigo gentico es prcticamente universal para todas las formas de vida en la tierra y apoya la idea de que todos los organismos comparten a un ancestro comn. Algunos aminocidos son codificados por dos, tres o ms codones diferentes, como se muestra en el cuadro. Estos codones a menudo difieren entre s por un slo nucletido.. Un codn especial, AUG, acta como codn de inicio. Un codn de inicio es una secuencia especfica de nucletidos de ARN mensajero que indica dnde debe comenzar la traduccin. El codn de inicio codifica el aminocido metionina. Ciertas secuencias de nucletidos de ARN mensajero (UAA, UAG o UGA), llamadas codones de detencin, no codifican para aminocidos, ya que en su lugar son la seal para poner fin a la traduccin. El Proyecto Genoma Humano El Proyecto Genoma Humano (PGH) fue un proyecto internacional de investigacin cientfica con el objetivo fundamental de determinar la secuencia de pares de bases nitrogenadas que componen el ADN e identificar y cartografiar los aproximadamente 20.000-25.000 genes del genoma humano desde un punto de vista fsico y funcional. El proyecto, fue fundado en 1990 en el Departamento de Energa y los Institutos Nacionales de la Salud de los Estados Unidos (NIH), bajo la direccin de James D. Watson. Desde el principio de la investigacin, se propuso desarrollar el PGH a travs de dos vas independientes, pero relacionadas y ambas esenciales: Secuenciacin: se trataba de averiguar la posicin de todos los nucletidos del genoma (cada una de las cuatro posibles bases nitrogenadas tpicas del ADN). Cartografa o Mapeo Gentico: consista en localizar los genes en cada uno de los 23 pares de cromosomas del ser humano. Luego de concluido el anlisis de todo el genoma, en 2005, la cifra final de genes result de alrededor 28.000, muy cercana a la de muchos organismos inferiores (y muy inferior a la cifra que se supona en un comienzo). Los conocimientos generados a partir del genoma humano y el uso de las herramientas del ADN recombinante permitiran desarrollar tcnicas de diagnstico prematuro para diferentes enfermedades, as como la prediccin de posibles sndromes relacionados con predisposiciones genticas. Esto provee una herramienta eficaz para la cura o el tratamiento dirigido especficamente a la causa de la enfermedad. El descubrimiento de los diferentes genomas permitir, en un futuro, disear frmacos a medida, no slo para enfermedades especficas, sino para enfermos. La biotecnologa dejar de optimizar procesos, y de redisear rutas de obtencin de protenas, para pasar al diseo de novo de enzimas, protenas, o frmacos.

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Principios bsicos de ingeniera gentica y sus aplicaciones productivas Los cientficos manipulan el ADN para muchos propsitos prcticos mediante el uso de tcnicas llamadas colectivamente la tecnologa del ADN. Por ejemplo, la tecnologa de ADN puede utilizarse como prueba en un causa penal al proporcionar la identificacin positiva de ADN dejado en la escena de un crimen. Los cientficos tambin utilizan tecnologa de ADN para mejorar los cultivos de alimentos, para determinar si una persona tiene la informacin gentica para determinadas enfermedades antes de que aparezcan los sntomas, y a la investigacin sobre tratamientos y curas para las enfermedades genticas. ADN recombinante En los ltimos aos, se han desarrollado tcnicas que han permitido abordar el anlisis y la manipulacin del ADN en una forma antes no imaginada. La tecnologa del ADN recombinante ha hecho posible investigar ms a fondo la estructura y funcin de los genes, especialmente de los genes eucariticos que eran inaccesibles por otros mtodos. Estas investigaciones permanentemente generan nuevos interrogantes e inquietudes, muchos de los cuales tienen profundas implicancias ticas. Las tcnicas ms importantes son: a) Mtodos de obtencin de fragmentos especficos de ADN : que permiten el anlisis, aislamiento y manipulacin de genes individuales. b) Mtodos de obtencin de mltiples copias de fragmentos idnticos de ADN: como la clonacin y la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). La clonacin se realiza por medio de transportadores (vectores) por medio de los cuales el fragmento de ADN de inters puede ser incorporado al interior de las clulas bacterianas o partculas virales. A medida que la clula y los vectores se replican, se obtienen mltiples copias del fragmento. c) Localizacin e identificacin de fragmentos especficos de ADN, o de ARN , por hibridacin de cidos nucleicos, mtodo que tambin permite estimar similitudes entre cidos nucleicos de orgenes diferentes. Esta tcnica aprovecha las propiedades de apareamiento de las bases de los cidos nucleicos. d) Secuenciacin del ADN, es decir, determinacin del orden exacto de los nucletidos en un segmento de ADN, lo que permite, en consecuencia, una lectura directa de la informacin gentica codificada. e) Ingeniera del ADN o ingeniera gentica, mediante la cual es posible modificar una secuencia de ADN para generar nuevas versiones de genes que pueden ser luego reintroducidas en una clula u organismo. Transgnico: La metodologa del ADN recombinante, permite transferir genes tanto a clulas procariticas como a clulas vegetales y a otros organismos eucariotas. La tecnologa del ADN ha sido utilizada para muchos propsitos. Por ejemplo, la identificacin de ADN ha sido utilizada en anlisis forense para identificar a criminales y para liberar a los condenados injustamente. El ADN tambin se ha utilizado para identificar restos humanos. Tcnicas de ADN recombinante dan a microorganismos nuevas capacidades para distintas aplicaciones tiles. El primer producto de ADN recombinante a utilizarse comercialmente fue la insulina humana en 1982. Una molcula de ADN recombinante se hizo mediante la insercin de un gen humano para la insulina en un plsmido bacteriano. Desde 1982, ms de 30 productos elaborados utilizando la tecnologa de ADN han sido aprobados y se utilizan todo el mundo. Estas protenas se prefieren a las drogas convencionales, porque son ms especficos y tienen menos efectos secundarios. Las protenas importantes desde el punto de vista mdico, incluyen factores para tratar la anemia y las deficiencias del sistema inmunolgico. Factores de coagulacin para las personas con hemofilia, hormona del crecimiento humano para las personas con defectos de crecimiento, los interferones para infecciones virales y cncer, y protenas, tales como factores de crecimiento para el tratamiento de quemaduras y lceras, son algunas de las medicinas obtenidas mediante ingeniera gentica, en uso hoy en da. Ejercicios ( 2 pts c/u) 1. Qu molculas forman un nucletido? 2. Qu tipos de enlaces qumicos estn presentes en el ADN? 3. Si una cadena de ADN est conformada por las siguientes secuencias de bases nitrogenadas: ATCGAA, cul es la cadena complementaria? 4. A partir de la siguiente cadena de ADN: A A T C C G C A T construye la molcula de ARNm. 5. Menciona y describe los distintos tipos de ARN. 6. Qu significa que el cdigo gentico sea universal y degenerado? 7. Qu funcin cumplen los tripletes sin sentido? 8. A continuacin se indica la secuencia de bases nucleotdicas para un ARNm: ARNm 5 A G C G U U C U A A G C G C C - 3 Indica el nmero de codones de este ARNm. Cuntos aminocidos tendra el polipptido que codifica?

Lee atentamente cada enunciado y selecciona la alternativa correcta ( 2 pts c/u)

1. Se presenta un codn y su anticodn complementario

Al respecto es correcto afirmar que I) el anticodn de izquierda a derecha necesariamente va de 3 a 5 II) el aminocido que trae el ARN de transferencia est codificado en el ARN mensajero. III) las bases complementarias del codn y anticodn se unen por puentes de hidrgeno. A) Solo I. B) Solo II. C) Solo I y III. D) Solo II y III. E) I, II y III. 2. Cul de los siguientes procesos ocurre en los cloroplastos y no en las mitocondrias? A) Formacin de ATP. B) Replicacin del DNA. C) Sntesis de protenas. D) Transcripcin de genes. E) Liberacin del oxgeno 3. El siguiente diagrama representa el proceso de transcripcin. Con los nmeros, se indican diferentes estructuras. Seale la alternativa incorrecta A) I: RNA en transcripcin. B) II: cadena de DNA molde. C) III: doble cadena hbrida. D) IV: codn de inicio AUG. E) V: cadena codificadora.

4. En el proceso de transcripcin de las clulas eucariontes, el transcrito primario de ARN I) posee exones e intrones. II) siempre se elonga por el extremo 3. III) sale al citoplasma una vez que ha madurado. A) Solo I. B) Solo II.

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C) Solo III. D) Solo I y III. E) I, II y III. 5. Si el cdigo gentico estuviese especificado por codones constituidos por secuencias de dos nucletidos, cuntos aminocidos, como mximo, podran ser especificados en tal lenguaje gentico? A) 64 aminocidos. B) 61 aminocidos. C) 20 aminocidos. D) 16 aminocidos E) 4 aminocidos. 6. En cul clula es posible que NO se realice el proceso de transcripcin? A) neurona. B) clula heptica. C) clula muscular. D) clula pancretica. E) glbulo rojo maduro. 7. En una clula eucaritica no se sintetiza en el citoplasma A) ARN polimerasa. B) ADN polimerasa. C) histonas bsicas. D) ARN de transferencia. E) protenas estructurales. 8. Si el codn del ARN mensajero es 5 CGU 3, el anticodn complementario es A) 5 GCA 3 B) 5 GCT 3 C) 3 GCA 5 D) 3 CGU 5 E) 3 GCT 3 9. El cdigo gentico es degenerado porque ms de un A) codn codifica para el mismo aminocido. B) aminocido es codificado por el mismo codn. C) codn codifica para el fin de la transcripcin. D) codn codifica para el fin de la traduccin. 10. La secuencia de una hebra codificadora es 5 CGC AAA TCT GCA 3 Al respecto la secuencia en el transcrito primario (ARN) debera ser A) 5 GCG UUU UCU CGA 3 B) 5 CGC AAA UCU GCA 3 C) 3 CGC UUU UCU GCA 5 D) 3 GCG TTT AGA CGT 5 E) 3 CGC AAA UCU GCA 5 11. Cul(es) de las siguientes molculas est relacionada con la transcripcin? I) ARN mensajero. II) ADN polimerasa. III) ARN polimerasa. A) Solo I. B) Solo II. C) Solo I y II. D) Solo I y III. E) I, II y III. 12. Se estudi la expresin de un gen bacteriano que codifica para una enzima oxidativa,determinando la cantidad de su RNA mensajero sintetizado en diferentes condiciones de aerobiosis y en anaerobiosis, segn muestran los siguientes resultados:

A partir de estos resultados se puede concluir correctamente que I) a mayor temperatura mayor sntesis de ARN. II) la enzima oxidativa formada tiene mayor actividad en anaerobiosis. III) en presencia de un 100% de O2 la velocidad de transcripcin es menor. A) Solo I. B) Solo II. C) Solo III. D) Solo I y III. E) I, II y III. 13. Cmo se llama la mutacin en que un cromosoma pierde parte de su estructura y contenido gnico? A) adicin. B) delecin. C) inversin. D) sustitucin. E) translocacin. TABLA DE RESPUESTAS

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