Sunteți pe pagina 1din 3

1

Masurarea concentratiei unei


solutii cu ajutorul
spectrofotometrului
Catedra de Biofizica
Dr. Magda Mocanu
UMF
Carol Davila, Bucuresti
2
Sumar
Notiuni introductive
Spectrul electromagnetic spectrul vizibil
Interactia radiatiei cu materia
Spectrofotometrie L. Lambert-Beer
Importanta medicala
Aplicatie practica
Scopul experimentului
Spectrofotometrul
Principiul metodei
3
Prefixe pentru unitati de masura
Y yotta 10
24
y yocto 10
-24
Z zetta 10
21
z zepto 10
-21
E exa 10
18
a atto 10
-18
P peta 10
15
f femto 10
-15
T tera 10
12
p pico 10
-12
G giga 10
9
n nano 10
-9
M mega 10
6
micro 10
-6
k kilo 10
3
m milli 10
-3
h hecto 10
2
c centi 10
-2
da deca 10 d deci 10
-1
Simbol Prefix Factor Simbol Prefix Factor
4
Spectrul electromagnetic
Frecventa (Hz)
radio microunde infrarosu vizibil ultraviolet raze X raze gamma
Lungimea de unda (m)
5
Spectrul electromagnetic
Lungimea de unda, =distanta dintre doua varfuri de unda
(m)
Frecventa, v =numarul de succesiuni ciclice ale lungimii de
unda care trec prin punct fix in unitatea de timp (Hz)
Perioada, T =inversul frecventei (s)
Amplitudine, A =amploarea oscilatiei
Lungime de unda
Amplitudine
6
Spectrul electromagnetic
Spectrul vizibil:
Culoare (nm)
violet 380450 nm
indigo 420450 nm
albastru 450495 nm
verde 495570 nm
galben 570590 nm
portocaliu 590620 nm
rosu 620750 nm
Unghi de
dispersie
Prisma
Lumina
alba
2
7
Interactia radiatiei cu materia
Interactia cu sistemele atomice
Interactia cu sistemele moleculare
atom
1
+atom
2
++atom
n
=molecula
molecula
1
+molecula
2
++molecula
n
=macromolecula ( >5000 Da)
Molecula de zahar
(sucroza)
Glucoza
Fructoza
8
Interactia radiatiei cu materia
Absorbtia =are loc atunci cand un atom absoarbe energie, iar
electronii trec de la un nivel fundamental de energie la un
nivel energetic superior; are loc excitarea atomului.
Emisia =are loc atunci cand electronii trec de la un nivel
energetic superior la un nivel energetic fundamental;
are loc dezexcitarea atomului.
Absorbtie Emisie
foton
foton
9
Interactia radiatiei cu materia
Spectre atomice =totalitatea lungimilor de unda sau a
frecventelor pe care le poate absorbi/ emite un atom
Spectre moleculare =formate din benzi de absorbtie
(cuprind tranzitii electronice/ spectrul UV, vizibil, tranzitii
vibrationale/ spectrul IR, tranzitii rotationale/ spectrul IR)
C
o
e
f
i
c
i
e
n
t
m
o
l
a
r

d
e

a
b
s
o
r
b
t
i
e
(
l
/

m
o
l

c
m
)
Lungime de unda (nm)
576
540
414 Vizibil
275 UV
(nm) domeniul
HbO
2
10
Interactia radiatiei cu materia
Cromofor
(lb gr chroma = culoare, phorein =a
purta)
=o grupare ce produce
culoare.
268 Benzen
200, 275 N=O
345 N=N
270, 290 C=O
171 C=C
180 CC
(nm) Cromofori
-caroten
(morcovi)
11
Interactia radiatiei cu materia
Fotoluminiscenta =procesul prin care o
substanta absoarbe fotoni (radiatie EM) si
apoi emite fotoni
Absorbtie
Emisie
12
Interactia radiatiei cu materia
Fluorescenta =emisia se opreste in momentul in
care excitatia este stopata
Fosforescenta =emisia este mentinuta si dupa ce
excitatia este stopata
Celule marcate fluorescent Sulfura de zinc vs aluminat de strontiu
http://en.wikipedia.org/
3
13
Spectrofotometrie
Spectroscopie =studiaza interactia dintre
radiatie (EM si corpusculara) si materie.
Spectrometrie =inregistrarea si masurarea
spectrelor EM.
Spectrofotometrie =inregistrarea si
masurarea spectrelor din domeniile EM:
UV, vizibil, IR.
14
Legea Lambert-Beer
I
0
d
I
I
0
d
I
cd
I I
c
= 10
0
cd
I
I
T
c
= = 10
0
| | 1 , 0 e T
cd A
T
A
c =
=
1
lg
| | e , 0 A
I = intensitatea luminii emergente
I
0
= intensitatea luminii incidente
= coeficient de absorbtie
c = concentratia
d = grosimea stratului de solutie
T = transmisie
A = absorbanta (extinctie, densitate optica)
15
Care este diferenta dintre
absorbanta si transmisie?
Absorbanta =masoara cantitatea de lumina; A ~ c
Transmisie =este raportul dintre si intensitatea luminii
care paraseste proba de analizat si intensitatea luminii care patrunde
in proba de analizat, T =I
out
/ I
in
.
concentratie concentratie
a
b
s
o
r
b
a
n
t
a
16
Importanta medicala
Informatii cantitative:
identificarea compusilor dintr-
o proba pe baza spectrului de
absorbtie
Informatii calitative: calcularea
concentratiei unui compus
dintr-o proba (acizi nucleici,
glucoza, nitriti, nitrati,
detergenti etc)
Aplicatie: analiza toxicologica a
apei, produselor farmaceutice,
fluidelor biologice, alimentelor
A
b
s
o
r
b
a
n
t
a
Lungime de unda (nm)
17
Spectrofotometrul
Scop: calcularea concentratiei unei solutii
de acridine-orange pe baza analizei
spectrelor de absorbtie
Lumina
Prisma
Monocromator
Proba
Lumina monocromatica incidenta
Fotodetector
Aparat de inregistrare/
Computer
Lumina
transmisa
http://4e.plantphys.net/article.php?ch=7&id=66
18
Principiul metodei
Spectrofotometrul permite trecerea luminii
printr-o proba si masoara intensitatea
luminii care ajunge la detector.