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Systme d'identification des Streptococcaceae et germes apparents INTRODUCTION ET OBJET DU TEST API 20 Strep est un systme standardis associant 20 tests biochimiques qui prsentent un grand pouvoir discriminant. Il permet de faire un diagnostic de groupe ou d'espce pour la plupart des streptocoques, entrocoques et pour les germes apparents les plus courants. La liste complte des bactries qu'il est possible d'identifier avec ce systme est prsente dans le Tableau d'Identification en fin de notice. PRINCIPE La galerie API 20 Strep comporte 20 microtubes contenant les substrats dshydrats pour la mise en vidence d'activits enzymatiques ou de fermentation de sucres. Les tests enzymatiques sont inoculs avec une suspension dense, ralise partir d'une culture pure, qui reconstitue les milieux. Les ractions produites pendant la priode d'incubation se traduisent par des virages colors spontans ou rvls par l'addition de ractifs. Les tests de fermentation sont inoculs avec un milieu enrichi (contenant un indicateur de pH) qui rhydrate les sucres. La fermentation des carbohydrates entrane une acidification se traduisant par un virage spontan de l'indicateur color. La lecture de ces ractions se fait l'aide du Tableau de Lecture et l'identification est obtenue l'aide du Catalogue Analytique ou d'un logiciel d'identification. PRESENTATION (Coffret de 25 tests) - 25 galeries API 20 Strep - 25 botes d'incubation - 25 ampoules d'API GP Medium - 25 fiches de rsultats - 1 notice COMPOSITION Galerie La composition de la galerie API 20 Strep est reporte dans le tableau de lecture de cette notice. Milieu API GP Medium 2 ml L-cystine 0,5 g Tryptone (origine bovine/porcine) 20 g Chlorure de sodium 5g Sulfite de sodium 0,5 g Rouge de phnol 0,17 g Eau dminralise qsp 1000 ml pH : 7,4 - 7,6 REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Ractifs / Instrumentation - API Suspension Medium, 2 ml (Rf. 70 700) - Ractifs : NIN (Rf. 70 491) VP 1 + VP 2 (Rf. 70 422) ZYM A (Rf. 70 494) ZYM B (Rf. 70 493) - Huile de paraffine (Rf. 70 100) - McFarland Standard (Rf. 70 900) point 4 ou DENSIMAT (Rf. 99 234) - Catalogue Analytique API 20 Strep (Rf. 20 690) ou logiciel d'identification apiweb TM (Rf. 40 011) (consulter bioMrieux) - Glose Columbia au sang (Rf. 43 041) - Bouillon Schaedler (ventuellement) Matriel - Ecouvillons - Pipettes ou PSIpettes - Portoir pour ampoules - Protge-ampoule - Jarre anarobie - Equipement gnral de laboratoire de bactriologie PRECAUTIONS D'UTILISATION x Pour diagnostic in vitro et contrle microbiologique. x Pour usage professionnel uniquement. x Ce coffret contient des composants d'origine animale. La matrise de l'origine et/ou de l'tat sanitaire des animaux ne pouvant garantir de faon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogne transmissible, il est recommand de les manipuler avec les prcautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingrer; ne pas inhaler). x Les prlvements, cultures bactriennes et produits ensemencs doivent tre considrs comme potentiellement infectieux et doivent tre manipuls de faon approprie par un personnel comptent et averti. Les techniques aseptiques et les prcautions usuelles de manipulation pour le groupe bactrien tudi doivent tre respectes tout au long de la manipulation ; se rfrer "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Rvision en vigueur". Pour informations complmentaires sur les prcautions de manipulation, se rfrer "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH Dernire dition", ou la rglementation en vigueur dans le pays d'utilisation. x Ne pas utiliser les ractifs aprs la date de premption. x Avant utilisation, sassurer de lintgrit de lemballage et des composants. x Ne pas utiliser de galeries ayant subi une altration physique : cupule dforme, sachet dshydratant ouvert, ... x Il est recommand de raliser un contrle qualit avant dutiliser chaque nouvelle ampoule de ractif ZYM B.

Les quantits indiques peuvent tre ajustes en fonction des titres des matires premires.

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x Ouvrir les ampoules dlicatement comme suit : - Placer l'ampoule dans le protge-ampoule. - Tenir l'ensemble verticalement dans une main (bouchon blanc vers le haut). - Bien enfoncer le bouchon. - Exercer une pression horizontale avec le pouce sur la partie strie du bouchon de faon casser l'extrmit de l'ampoule. - Retirer l'ampoule du protge-ampoule et conserver le protge-ampoule pour une utilisation ultrieure. - Enlever dlicatement le bouchon. x Les performances prsentes sont obtenues avec la mthodologie indique dans cette notice. Toute dviation de mthodologie peut altrer les rsultats. x L'interprtation des rsultats du test doit tre faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine du prlvement, des aspects macro et microscopiques de la souche et ventuellement des rsultats d'autres tests, en particulier de l'antibiogramme. CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries et milieux se conservent 2-8C jusqu' la date limite d'utilisation indique sur l'emballage. ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API 20 Strep ne doit pas tre utilis directement partir des prlvements d'origine clinique ou autre. Les microorganismes identifier doivent dans un premier temps tre isols sur un milieu de culture adapt selon les techniques usuelles de bactriologie. MODE OPERATOIRE Slection des colonies Aprs isolement et vrification de l'appartenance de la souche identifier la famille des Streptococcaceae (raction de Gram, catalase) : x Noter le type d'hmolyse sur la fiche de rsultats (21 test). x Prlever une colonie bien isole (Note 1) et la mettre en suspension dans 0,3 ml d'eau strile. Bien homogniser. x Inonder une bote de glose Columbia au sang de mouton (Note 2) avec cette suspension (ou couvillonner strilement toute la surface de la glose). x Incuber la bote 24 heures ( 2 heures) 36C 2C en anarobiose. NOTE 1 : Les Streptocoques -hmolytiques et les Entrocoques donnent des colonies de taille suffisante aprs 24 heures d'incubation. Pour les autres Streptocoques, il est prfrable de prlever des colonies de 48 heures. Pour les souches de culture difficile (trs petites colonies 48 heures) il est recommand d'oprer de la manire suivante : - Cultiver la colonie dans 1 ml de bouillon de Schaedler 36C 2C pendant 5 heures. - Inonder une bote de glose Columbia au sang de mouton avec la totalit de cette culture. Eliminer l'excdent. - Incuber la bote 18 24 heures 36C 2C en anarobiose.

NOTE 2 : Pour obtenir une pousse suffisante, il est prfrable de prparer 2 gloses quand la souche est susceptible d'tre un Pneumocoque. Prparation de la galerie x Runir fond et couvercle d'une bote d'incubation et rpartir environ 5 ml d'eau distille ou dminralise [ou toute eau sans additif ou drivs susceptibles de librer des gaz (Ex : Cl2, CO2 ...)] dans les alvoles pour crer une atmosphre humide. x Inscrire la rfrence de la souche sur la languette latrale de la bote. (Ne pas inscrire la rfrence sur le couvercle, celui-ci pouvant tre dplac lors de la manipulation). x Sortir la galerie de son emballage individuel. x Placer la galerie dans la bote d'incubation. Prparation de l'inoculum x Ouvrir une ampoule dAPI Suspension Medium (2 ml) comme indiqu au paragraphe "Prcautions dutilisation" ou utiliser un tube contenant 2 ml d'eau distille sans additif. x A l'aide d'un couvillon, prlever toute la culture pralablement prpare. x Raliser une suspension trs dense : opacit suprieure 4 de McFarland. Cette suspension doit tre utilise extemporanment. Inoculation de la galerie x Dans la premire moiti de la galerie (tests VP ADH) rpartir la suspension prcdente en vitant la formation de bulles (pour cela, incliner la bote d'incubation vers l'avant et placer la pointe de la pipette ou de la PSIpette sur le ct de la cupule) : - pour les tests VP LAP : environ 100 l dans chaque cupule. - pour le test ADH : remplir uniquement le tube. x Dans la deuxime moiti de la galerie (tests RIB GLYG) : - ouvrir une ampoule d'API GP Medium comme indiqu au paragraphe "Prcautions dutilisation" et y transfrer le reste de la suspension, soit 0,5 ml au minimum. Bien homogniser. - rpartir cette nouvelle suspension dans les tubes uniquement. x Remplir les cupules des tests souligns ADH GLYG avec de l'huile de paraffine en formant un mnisque convexe. x Refermer la bote d'incubation. x Incuber 36C 2C en arobiose pendant 4H00 - 4H30 pour une premire lecture et 24 heures ( 2 heures) si ncessaire pour une deuxime lecture. LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la galerie Aprs 4 heures d'incubation : x Ajouter les ractifs : - test VP : 1 goutte de VP 1 et VP 2. - test HIP : 2 gouttes de NIN. - tests PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP : 1 goutte de ZYM A et ZYM B (*). (*) Il est recommand de contrler chaque ampoule re de ractif ZYM B avant la 1 utilisation. Pour cela, il est recommand dutiliser la souche ATCC 700400 mentionne au paragraphe Contrle Qualit afin dexclure tout ractif dfectueux. x Attendre 10 minutes, puis lire toutes les ractions en se rfrant au Tableau de Lecture. Si ncessaire, exposer la galerie une lampe forte (1000 W) 10 secondes pour dcolorer le ractif en excs dans les tubes PYRA LAP.
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Une rincubation est ncessaire dans les cas suivants : - faible discrimination ; - profil inacceptable ou profil douteux ; - si, pour le profil obtenu, la note suivante est indique : IDENTIFICATION NON VALIDE AVANT 24 H D'INCUBATION Alors, relire aprs 24 heures les ractions ESC, ADH et RIB GLYG sans relire les ractions enzymatiques (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) et VP. Noter toutes les ractions sur la fiche de rsultats. Interprtation Lidentification est obtenue partir du profil numrique. x Dtermination du profil numrique : Sur la fiche de rsultats, les tests sont spars par groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indique pour chacun. En additionnant l'intrieur de chaque groupe les valeurs correspondant des ractions positives, on obtient 7 chiffres qui constituent le profil numrique.

x Identification : Elle est ralise partir de la base de donnes (V7.0) * l'aide du Catalogue Analytique : - Rechercher le profil numrique dans la liste des profils. * laide du logiciel d'identification apiweb TM : - Entrer manuellement au clavier le profil numrique 7 chiffres.

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

NOTE : La raction hmolytique constitue le 21 test ; la -hmolyse est considre comme positive et sa valeur numrique est 4. Toute autre raction hmolytique est considre comme ngative et sa valeur numrique est 0. Toutefois, ces caractres ont une valeur indicative pour l'identification de certaines espces.

CONTROLE DE QUALITE Les milieux, galeries et ractifs font l'objet de contrles de qualit systmatiques aux diffrentes tapes de leur fabrication. Un contrle bactriologique des tests de la galerie est de plus ralisable par lutilisateur avec la souche 1. Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 de prfrence ou la souche suivante : 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

* Ce rsultat peut varier en fonction du milieu de culture utilis. x Inoculum ajust entre 4,5 et 5,5 McF avec DENSIMAT. x Profils obtenus aprs : - 4 heures d'incubation pour les tests VP LAP - 24 heures d'incubation pour les tests ADH GLYG. x Souches cultives sur glose Columbia au sang de mouton. Il est de la responsabilit de l'utilisateur de s'assurer que le contrle de qualit est mis en oeuvre conformment la lgislation locale en vigueur. LIMITES DU TEST x Le systme API 20 Strep est destin l'identification des espces prsentes dans la base de donnes (voir Tableau d'Identification en fin de notice), et elles seules. Il ne peut tre utilis pour identifier d'autres microorganismes ou exclure leur prsence. x Certaines souches de Streptococcus porcinus peuvent tre identifies Streptococcus agalactiae. x Seules des cultures pures contenant un seul type de microorganisme doivent tre utilises. RESULTATS ATTENDUS Se rfrer au Tableau dIdentification en fin de cette notice pour les rsultats attendus des diffrentes ractions biochimiques. PERFORMANCES x Aprs 4 heures dincubation : 2336 souches de diverses origines et souches de collection appartenant aux espces de la base de donnes ont t testes : - 87,9% des souches ont t correctement identifies (avec ou sans tests complmentaires). - 5,7% des souches n'ont pas t identifies. - 6,4% des souches ont t mal identifies. x Aprs 24 heures dincubation : 3782 souches de diverses origines et souches de collection appartenant aux espces de la base de donnes ont t testes : - 93,4% des souches ont t correctement identifies (avec ou sans tests complmentaires). - 3,2% des souches n'ont pas t identifies. - 3,4% des souches ont t mal identifies. ELIMINATION DES DECHETS Eliminer les ractifs utiliss ou non utiliss ainsi que les matriels usage unique contamins en suivant les procdures relatives aux produits infectieux ou potentiellement infectieux. Il incombe chaque laboratoire de grer les dchets et les effluents qu'il produit selon leur nature et leur dangerosit, et d'en assurer (ou faire assurer) le traitement et l'limination selon les rglementations applicables.

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TABLEAU DE LECTURE
TESTS COMPOSANTS ACTIFS QTE (mg/cup.) REACTIONS/ENZYMES RESULTATS NEGATIF POSITIF

VP 1 + VP 2 / jusqu' 10 min (3) VP sodium pyruvate 1,9 production d'actone (Voges Proskauer) hydrolyse (acide HIPpurique) Incolore Rose-Rouge NIN / jusqu' 10 min HIP acide hippurique 0,4 Incolore/Bleu ple Gris-bleut 4h ESC esculine citrate de fer 1,16 0,152 hydrolyse -glucosidase (ESCuline) Incolore Jaune ple 24 h Incolore Jaune ple Gris clair Bleu fonc/Violet 4h Noir Gris 24 h Noir

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH

acide pyroglutamique-naphtylamide 6-bromo-2-naphtyl-DDgalactopyranoside acide naphtol-ASBIglucuronique 2-naphtyl-Dgalactopyranoside 2-naphtyl phosphate L-leucine--naphtylamide L-arginine

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9

PYRrolidonyl Arylamidase D-GALactosidase -GlUcuRonidase -GALactosidase Phosphatase ALcaline Leucine AminoPeptidase Arginine DiHydrolase

ZYM A + ZYM B / 10 min (PYRA LAP) (1) au besoin dcolor par clairement intense Incolore ou Orange Orange trs ple Incolore Incolore Incolore ou Violet trs ple Incolore ou Violet trs ple Incolore Jaune 4h 24 h Orange/ Rouge Orange/ Rouge Orange/ Rouge Orange/ Rouge Orange/ Rouge Orange/ Rouge Orange/ Rouge Orange/ Rouge Orange/ Rouge 4h Orange/ Jaune Orange/ Jaune Orange/ Jaune Orange/ Jaune Orange/ Jaune Orange/ Jaune Orange/ Jaune Orange/ Jaune Orange/ Jaune Violet Bleu Violet Violet Orange Rouge 24 h Jaune Jaune Jaune Jaune Jaune Jaune Jaune Jaune Jaune

RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG

D-ribose L-arabinose D-mannitol D-sorbitol D-lactose (origine bovine) D-trhalose inuline D-raffinose amidon (2) glycogne

1,4 1,4 1,36 1,36 1,4 1,32 5,12 3,12 2,56 1,28

acidification (RIBose) acidification (ARAbinose) acidification (MANnitol) acidification (SORbitol) acidification (LACtose) acidification (TREhalose) acidification (INUline) acidification (RAFfinose) acidification (AMiDon) acidification (GLYcoGne)

Rouge Rouge Rouge Rouge Rouge Rouge Rouge Rouge Rouge

Rouge ou Orange

Jaune franc

(1) Lors d'une deuxime lecture aprs 24 heures d'incubation, on peut remarquer un dpt dans les tubes o ont t ajouts les ractifs ZYM A et ZYM B. Ce phnomne est normal et ne doit pas tre pris en considration. (2) L'acidification de l'amidon est frquemment moins forte que celle des autres sucres. (3) Une coloration rose ple obtenue aprs 10 minutes doit tre considre ngative.

x Les quantits indiques peuvent tre ajustes en fonction des titres des matires premires. x Certaines cupules contiennent des composants dorigine animale, notamment des peptones.
METHODOLOGIE TABLEAU D'IDENTIFICATION p. p. I II BIBLIOGRAPHIE TABLE DES SYMBOLES p. III p. IV

bioMrieux, le logo bleu, API et apiweb sont des marques utilises, dposes et/ou enregistres appartenant bioMrieux SA ou lune de ses filiales. Les autres marques et noms de produits mentionns dans ce document sont des marques commerciales de leurs dtenteurs respectifs.

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Identification system for Streptococcaceae and related organisms SUMMARY AND EXPLANATION API 20 Strep is a standardized system combining 20 biochemical tests that offer widespread capabilities. It enables group or species identification of most streptococci and enterococci, and those most common related organisms. The complete list of those organisms that it is possible to identify with this system is given in the Identification Table at the end of this package insert. PRINCIPLE The API 20 Strep strip consists of 20 microtubes containing dehydrated substrates for the demonstration of enzymatic activity or the fermentation of sugars. The enzymatic tests are inoculated with a dense suspension of organisms, made from a pure culture, which is used to reconstitute the enzymatic substrates. During incubation, metabolism produces color changes that are either spontaneous or revealed by the addition of reagents. The fermentation tests are inoculated with an enriched medium which rehydrates the sugar substrates. Fermentation of carbohydrates is detected by a shift in the pH indicator. The reactions are read according to the Reading Table and the identification is obtained by referring to the Analytical Profile Index or using the identification software. CONTENT OF THE KIT (Kit for 25 tests) - 25 API 20 Strep strips - 25 incubation boxes - 25 ampules of API GP Medium - 25 result sheets - 1 package insert COMPOSITION Strip The composition of the API 20 Strep strip is given in the Reading Table of this package insert. Medium API GP Medium 2 ml L-cystine 0.5 g Tryptone (bovine/porcine origin) 20 g Sodium chloride 5g Sodium sulfite 0.5 g Phenol red 0.17 g Demineralized water to make 1000 ml pH : 7.4 - 7.6 REAGENTS AND MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED Reagents / Instrumentation - API Suspension Medium, 2 ml (Ref. 70 700) - Reagents : NIN (Ref. 70 491) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) ZYM A (Ref. 70 494) ZYM B (Ref. 70 493) - Mineral oil (Ref. 70 100) - McFarland Standard (Ref. 70 900) point 4 on the scale or DENSIMAT (Ref. 99 234) - API 20 Strep Analytical Profile Index (Ref. 20 690) or apiweb TM identification software (Ref. 40 011) (consult bioMrieux) - Columbia blood agar plates (Ref. 43 041) - Schaedler broth (optional) Material - Swabs - Pipettes or PSIpettes - Ampule rack - Ampule protector - Anaerobic jar - General microbiology laboratory equipment WARNINGS AND PRECAUTIONS x For in vitro diagnostic use and microbiological control. x For professional use only. x This kit contains products of animal origin. Certified knowledge of the origin and/or sanitary state of the animals does not totally guarantee the absence of transmissible pathogenic agents. It is therefore recommended that these products be treated as potentially infectious, and handled observing the usual safety precautions (do not ingest or inhale). x All specimens, microbial cultures and inoculated products should be considered infectious and handled appropriately. Aseptic technique and usual precautions for handling the bacterial group studied should be observed throughout this procedure. Refer to "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Current revision". For additional handling precautions, refer to "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Latest edition", or to the regulations currently in use in each country. x Do not use reagents past the expiry date. x Before use, check that the packaging and components are intact. x Do not use strips which have been damaged: cupules deformed, desiccant sachet open, etc. x It is recommended to perform a quality control test when a new ampule of ZYM B reagent is opened.

The quantities indicated may be adjusted depending on the titer of the raw materials used.

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x Open ampules carefully as follows : - Place the ampule in the ampule protector. - Hold the protected ampule in one hand in a vertical position (white plastic cap uppermost). - Press the cap down as far as possible. - Position the thumb tip on the striated part of the cap and press forward to snap off the top of the ampule. - Take the ampule out of the ampule protector and put the protector aside for subsequent use. - Carefully remove the cap. x The performance data presented were obtained using the procedure indicated in this package insert. Any change or modification in the procedure may affect the results. x Interpretation of the test results should be made taking into consideration the patient history, the source of the specimen, colonial and microscopic morphology of the strain and, if necessary, the results of any other tests performed, particularly the antimicrobial susceptibility patterns. STORAGE CONDITIONS The strips and media should be stored at 2-8C until the expiry date indicated on the packaging. SPECIMENS (COLLECTION AND PREPARATION) API 20 Strep is not for use directly with clinical or other specimens. The microorganisms to be identified must first be isolated on a suitable culture medium according to standard microbiological techniques. INSTRUCTIONS FOR USE Selection of colonies Once the microorganism to be identified has been isolated and verified to be a member of the family Streptococcaceae (Gram, catalase test) : x Note the type of hemolysis on the result sheet (21st test). x Pick a well-isolated colony (Note 1) and suspend it in 0.3 ml of sterile water. Homogenize well. x Flood a Columbia sheep blood agar plate (Note 2) with this suspension (or aseptically swab the entire surface of the agar). x Incubate the plate for 24 hours ( 2 hours) at 36C 2C in anaerobic conditions. NOTE 1 : -hemolytic streptococci and enterococci produce sufficiently large colonies after 24 hours of incubation. For other streptococci, it is preferable to select a colony after 48 hours of incubation. For fastidious strains (producing minute colonies after 48 hours), the following procedure is recommended : - Culture the colony in 1 ml of Schaedler broth at 36C 2C for 5 hours. - Flood a Columbia sheep blood agar plate with the entire culture. Remove any excess liquid. - Incubate the plate for 18-24 hours at 36C 2C in anaerobic conditions.

NOTE 2 : In the case of suspected pneumococci, it is advisable to prepare 2 agar plates in order to obtain sufficient growth. Preparation of the strip x Prepare an incubation box (tray and lid) and distribute about 5 ml of distilled water or demineralized water [or any water without additives or chemicals which may release gases (e.g. Cl2, CO2, etc.)] into the honeycombed wells of the tray to create a humid atmosphere. x Record the strain reference on the elongated flap of the tray. (Do not record the reference on the lid as it may be misplaced during the procedure.) x Remove the strip from its individual packaging. x Place the strip in the incubation box. Preparation of the inoculum x Open an ampule of API Suspension Medium (2 ml) as indicated in the paragraph "Warnings and Precautions" or use any tube containing 2 ml of distilled water without additives. x Using a swab, harvest all the culture from the previously prepared subculture plate. x Make a dense suspension with a turbidity greater than 4 McFarland. This suspension must be used immediately after preparation. Inoculation of the strip x In the first half of the strip (tests VP to ADH), distribute this suspension, avoiding the formation of bubbles (tilt the strip slightly forwards and place the tip of the pipette or PSIpette against the side of the cupule) : - For the tests VP to LAP : distribute approximately 100 l into each cupule. - For the ADH test : fill the tube only. x In the second half of the strip (tests RIB to GLYG) : - Open an ampule of API GP Medium as indicated in the paragraph "Warnings and Precautions" and transfer the rest of the suspension into it (appr. 0.5 ml). Mix well. - Distribute this new suspension into the tubes only. x Fill the cupule of the underlined tests (ADH to GLYG) with mineral oil to form a convex meniscus. x Place the lid on the tray. x Incubate at 36C 2C in aerobic conditions for 4 - 4 hours to obtain a first reading and for 24 hours ( 2 hours) to obtain a second reading if required. READING AND INTERPRETATION Reading the strip After 4 hours of incubation : x Add the reagents : - VP test : 1 drop of each of VP 1 and VP 2. - HIP test : 2 drops of NIN. - PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL and LAP tests : 1 drop of each of ZYM A and ZYM B (*). (*) It is recommended to control each ampule of ZYM B before using for the first time. To do this, it is recommended to use the strain ATCC 700400 indicated in the Quality Control paragraph in order to eliminate any defective reagents. x Wait 10 minutes, then read the reactions by referring to the Reading Table. If necessary, expose the strip to a strong light (10 seconds with a 1000 W lamp) to decolorize any excess reagents in tubes PYRA to LAP.

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Reincubation is necessary in the following cases : - low discrimination ; - unacceptable or doubtful profile ; - or if the following comment is given for the profile : IDENTIFICATION NOT VALID BEFORE 24 HOURS OF INCUBATION In this case, after 24 hours, reread the reactions ESC, ADH, and RIB to GLYG. Do not reread the enzymatic reactions (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) and VP. Record all the reactions on the result sheet. Interpretation Identification is obtained with the numerical profile. x Determination of the numerical profile : On the result sheet, the tests are separated into groups of 3 and a value of 1, 2 or 4 is indicated for each. By adding together the values corresponding to positive reactions within each group, a 7-digit profile number is obtained.

x Identification : This is performed using the database (V 7.0) * with the Analytical Profile Index : - Look up the numerical profile in the list of profiles. * with the apiweb TM identification software : - Enter the 7-digit numerical profile manually via the keyboard.

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

NOTE : The hemolytic reaction constitutes the 21st test ; -hemolysis is considered as positive with a numerical value of 4. All other hemolytic reactions are considered as negative with a numerical value of 0. Nevertheless, this test may be of discriminant value for the identification of certain species.

QUALITY CONTROL The media, strips and reagents are systematically controlled at various stages of their manufacture. For those users who wish to perform their own quality control tests with the strip, it is preferable to use the strain 1. Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 or else the following strain : 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

* This result may vary depending on the culture medium used. x Inoculum adjusted to between 4.5 and 5.5 McF using DENSIMAT. x Profiles obtained after : - 4 hours of incubation for tests VP to LAP - 24 hours of incubation for tests ADH to GLYG. x Strains cultured on Columbia sheep blood agar. It is the responsibility of the user to perform Quality Control in accordance with any local applicable regulations. LIMITATIONS OF THE METHOD x The API 20 Strep system is intended uniquely for the identification of those species included in the database (see Identification Table at the end of this package insert). It cannot be used to identify any other microorganisms or to exclude their presence. x Certain strains of Streptococcus porcinus may be identified as Streptococcus agalactiae. x Only pure cultures of a single organism should be used. RANGE OF EXPECTED RESULTS Consult the Identification Table at the end of this package insert for the range of expected results for the various biochemical reactions. PERFORMANCE x After 4 hours of incubation: 2336 collection strains and strains of various origins belonging to species included in the database were tested : - 87.9 % of the strains were correctly identified (with or without supplementary tests). - 5.7 % of the strains were not identified. - 6.4 % of the strains were misidentified. x After 24 hours of incubation: 3782 collection strains and strains of various origins belonging to species included in the database were tested : - 93.4 % of the strains were correctly identified (with or without supplementary tests). - 3.2 % of the strains were not identified. - 3.4 % of the strains were misidentified. WASTE DISPOSAL Dispose of used or unused reagents as well as any other contaminated disposable materials following procedures for infectious or potentially infectious products. It is the responsibility of each laboratory to handle waste and effluents produced according to their type and degree of hazardousness and to treat and dispose of them (or have them treated and disposed of) in accordance with any applicable regulations. WARRANTY bioMrieux disclaims all warranties, express or implied, including any implied warranties of MERCHANTABILITY AND FITNESS FOR A PARTICULAR USE. bioMrieux shall not be liable for any incidental or consequential damages. IN NO EVENT SHALL BIOMERIEUXS LIABLITY TO CUSTOMER UNDER ANY CLAIM EXCEED A REFUND OF THE AMOUNT PAID TO BIOMERIEUX FOR THE PRODUCT OR SERVICE WHICH IS THE SUBJECT OF THE CLAIM.

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READING TABLE
TESTS ACTIVE INGREDIENTS QTY (mg/cup.) REACTIONS/ENZYMES RESULTS NEGATIVE POSITIVE VP 1 + VP 2 / wait 10 min (3) Colorless Pink-Red

VP HIP

sodium pyruvate hippuric acid

1.9 0.4

acetoin production (Voges Proskauer) hydrolysis (HIPpuric acid)

NIN / wait 10 min Colorless/Pale blue Dark blue/Violet Bluish-grey 4 hrs. 24 hrs. 4 hrs. 24 hrs. Colorless Colorless Black Black Pale yellow Pale yellow Grey Light grey ZYM A + ZYM B / 10 min (PYRA to LAP) (1) if necessary, decolorize with intense light Colorless or Orange very pale orange Colorless Colorless Colorless or Very pale violet Colorless or Very pale violet Colorless Yellow 4 hrs. 24 hrs. Orange/ Red Red Orange/ Red Red Orange/ Red Red Orange/ Red Red Orange/ Red Red Orange/ Red Red Orange/ Red Red Orange/ Red Red Orange/ Red Red Violet Blue Violet Violet Orange Red 4 hrs. 24 hrs. Orange/ Yellow Yellow Orange/ Yellow Yellow Orange/ Yellow Yellow Orange/ Yellow Yellow Orange/ Yellow Yellow Orange/ Yellow Yellow Orange/ Yellow Yellow Orange/ Yellow Yellow Orange/ Yellow Yellow

ESC

esculin ferric citrate

1.16 0.152

-glucosidase hydrolysis (ESCulin)

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD

pyroglutamic acid-naphthylamide 6-bromo-2-naphthylDD-galactopyranoside naphthol ASBIglucuronic acid 2-naphthylD-galactopyranoside 2-naphthyl phosphate L-leucine--naphthylamide L-arginine D-ribose L-arabinose D-mannitol D-sorbitol D-lactose (bovine origin) D-trehalose inulin D-raffinose starch (2)

0.0256 0.0376 0.0537 0.0306 0.0244 0.0256 1.9 1.4 1.4 1.36 1.36 1.4 1.32 5.12 3.12 2.56

PYRrolidonyl Arylamidase D-GALactosidase -GlUcuRonidase -GALactosidase ALkaline Phosphatase Leucine AminoPeptidase Arginine DiHydrolase acidification (RIBose) acidification (ARAbinose) acidification (MANnitol) acidification (SORbitol) acidification (LACtose) acidification (TREhalose) acidification (INUlin) acidification (RAFfinose) acidification (AmiDon)

GLYG glycogen 1.28 acidification (GLYcoGen) Red or Orange Bright yellow (1) During a second reading after 24 hours of incubation, a deposit may be noticed in the tubes where the ZYM A and ZYM B reagents have been added. This phenomenon is normal and should not be taken into consideration. (2) The acidification of starch is frequently weaker than that of other sugars. (3) A pale pink color obtained after 10 minutes should be considered negative.

x The quantities indicated may be adjusted depending on the titer of the raw materials used. x Certain cupules contain products of animal origin, notably peptones.
PROCEDURE IDENTIFICATION TABLE p. p. I II LITERATURE REFERENCES INDEX OF SYMBOLS p. III p. IV

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20 Strep

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System zur Identifizierung von Streptococcaceae und verwandten Mikroorganismen EINFHRUNG UND TESTERKLRUNG API 20 Strep ist ein standardisiertes System zur Identifizierung der meisten Streptokokken und Enterokokken sowie der hufigsten verwandten Mikroorganismen. Der Streifen besteht aus 20 biochemischen Reaktionen, die aufgrund ihrer hohen Aussagekraft fr die Keimdifferenzierung ausgewhlt wurden. Die komplette Liste der mit dem System identifizierbaren Mikroorganismen finden Sie in der Prozenttabelle am Ende der Arbeitsanleitung. PRINZIP Der API 20 Strep Streifen besteht aus 20 Mikrorhrchen, die dehydrierte Substrate zum Nachweis der Enzymaktivitt oder Zuckerfermentation enthalten. Die enzymatischen Tests werden mit einer aus einer Reinkultur hergestellten, dichten Suspension beimpft, welche die Enzymsubstrate rekonstituiert. Die whrend der Inkubation entstehenden Stoffwechselprodukte bewirken Farbumschlge, die entweder spontan oder nach Zugabe von Reagenzien eintreten. Die Fermentationsreaktionen werden mit einem angereicherten Medium beimpft, das die Kohlenhydrate rehydriert. Die Fermentation der Kohlenhydrate bewirkt eine Suerung, die durch spontanen Farbumschlag des Indikators nachgewiesen wird. Die Ablesung der Reaktionen erfolgt anhand der Ablesetabelle, und die Identifizierung erfolgt mit Hilfe des Analytischen Profil Index oder der Identifizierungssoftware. PACKUNGSGRSSE (fr 25 Tests) - 25 API 20 Strep Streifen - 25 Inkubationswannen - 25 Ampullen API GP Medium - 25 Ergebnisbltter 1 Arbeitsanleitung ZUSAMMENSETZUNG Streifen Die Zusammensetzung des API 20 Strep Streifens finden Sie in der Ablesetabelle dieser Arbeitsanleitung. Medium API GP Medium 2 ml L-Cystin Trypton (Rind/Schwein) Natriumchlorid Natriumsulfit Phenolrot Demineralisiertes Wasser pH: 7,4-7,6 0,5 g 20 g 5g 0,5 g 0,17 g ad 1000 ml ZUSTZLICH ERFORDERLICHE REAGENZIEN UND MATERIALIEN Reagenzien / Gerte - API Suspensionsmedium, 2 ml (Best.Nr. 70 700) - Reagenzien: NIN (Best.Nr. 70 491) VP 1 + VP 2 (Best.Nr. 70 422) ZYM A (Best.Nr. 70 494) ZYM B (Best.Nr. 70 493) - Paraffinl (Best.Nr. 70 100) - McFarland Standard 4 (Best.Nr. 70 900) oder DENSIMAT (Best.Nr. 99 234) - API 20 Strep Analytischer Profil Index (Best.Nr. TM Identifizierungssoftware 20 690) oder apiweb (Best.Nr. 40 011) (bei bioMrieux anfragen) - Columbia Blutagar (Best.Nr. 43 041) - Schaedler Bouillon (wahlweise) Materialien - Wattetupfer - Pipetten oder PSIpetten - Ampullenstnder - Schutzhlle fr Ampullen - Anaerobiertopf - Allgemeine mikrobiologische Laborausrstung VORSICHTSMASSNAHMEN x Nur fr die in vitro Diagnostik und die mikrobiologische Kontrolle. x Nur fr die Verwendung durch Fachkundige bestimmt. x Dieser Kit enthlt Bestandteile tierischen Ursprungs. Da durch die Kontrolle der Herkunft und/oder des Gesundheitszustandes der Tiere nicht vllig gewhrleistet kann, dass diese Produkte keine bertragbaren pathogenen Agenzien enthalten, ist es empfehlenswert, diese als potenziell infektis zu betrachten und unter Beachtung entsprechender Vorsichtsmanahmen zu behandeln (nicht einnehmen, nicht einatmen). x Alle Proben, Mikroorganismen und beimpften Produkte mssen als potenziell infektis betrachtet und unter Beachtung geeigneter Vorsichtsmanahmen sachgem behandelt werden. Whrend der gesamten Testdurchfhrung mssen aseptische Arbeitsbedingungen und entsprechende Vorsichtsmanahmen fr die zu untersuchende Keimgruppe eingehalten werden, siehe CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline aktuelle Revision. Weitere diesbezgliche Informationen finden Sie in Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH Letzte Ausgabe oder in den jeweils gltigen Richtlinien. x Die Reagenzien nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr verwenden. x Vergewissern Sie sich vor Gebrauch, dass die Verpackung und die verschiedenen Bestandteile nicht beschdigt sind. x Streifen mit ueren Anzeichen einer Beschdigung (deformierte Vertiefungen, geffnete Trockenmittelbeutel etc.) nicht verwenden. x Es ist empfehlenswert, beim ffnen von jeder neuen Ampulle ZYM B Reagenz eine Qualittskontrolle durchzufhren.

Die angegebenen Mengen knnen je nach Konzentration der verwendeten Ausgangsmaterialien angeglichen werden.

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x ffnen Sie die Ampullen wie folgt vorsichtig: - Stecken Sie die Ampulle in die Schutzhlle der Ampulle. - Halten Sie die Ampulle in der Schutzhlle senkrecht (weie Verschlusskappe nach oben). - Pressen Sie die Verschlusskappe so weit wie mglich nach unten. - Drcken Sie mit dem Daumen gegen den gestrichelten Bereich der Verschlusskappe, bis die Ampullenspitze abbricht. - Nehmen Sie die Ampulle aus der Schutzhlle und bewahren Sie die Schutzhlle fr einen spteren Gebrauch auf. - Entfernen Sie vorsichtig die Verschlusskappe. x Die angegebene Performance wurde gem dem Verfahren der vorliegenden Arbeitsanleitung ermittelt. Jede Abweichung von diesem Verfahren kann die Ergebnisse beeinflussen. x Bei der Interpretation der Ergebnisse mssen der klinische Hintergrund oder andere Zusammenhnge, die Probenherkunft, Kolonie- und mikroskopische Morphologie des Stammes sowie gegebenenfalls die Ergebnisse anderer Tests, insbesondere das Antibiogramm, bercksichtigt werden. LAGERUNGSBEDINGUNGEN Die Streifen und Medien mssen bei 2-8C gelagert werden und sind bis zu dem auf der Verpackung angegebenen Verfallsdatum haltbar. PROBEN (ENTNAHME UND VORBEREITUNG) API 20 Strep darf nicht zur direkten Testung von klinischen oder anderen Untersuchungsmaterialien verwendet werden. Die zu identifizierenden Mikroorganismen mssen gem den blichen mikrobiologischen Verfahren auf einem geeigneten Kulturmedium isoliert werden. TESTDURCHFHRUNG Auswahl der Kolonien Nach der Isolierung des zu identifizierenden Stamms und berprfung, ob dieser zur Familie der Streptococcaceae gehrt (Gramfrbung, Katalase-Reaktion) gehen Sie wie folgt vor: x Notieren Sie die Art der Hmolyse auf dem Ergebnisblatt (21. Test). x Nehmen Sie eine Einzelkolonie ab (Anmerkung 1) und suspendieren Sie diese in 0,3 ml sterilem Aqua dest. Die Suspension gut homogenisieren. x berfluten Sie eine Columbia-Agarplatte mit Schafblut (Anmerkung 2) mit dieser Suspension (oder beimpfen Sie die ganze Oberflche des Agars aseptisch mit einem Wattetupfer). x Inkubieren Sie die Platte fr 24 h ( 2 h) bei 36C 2C unter anaeroben Bedingungen. ANMERKUNG 1: -hmolysierende Streptokokken und Enterokokken bilden nach 24-stndiger Inkubation ausreichend groe Kolonien. Bei anderen Streptokokken ist es empfehlenswert, 48 h zu inkubieren. Bei anspruchsvollen Keimen (sehr kleine Kolonien nach 48 h) empfiehlt es sich, folgendermaen vorzugehen: - Inkubieren Sie eine Kolonie in 1 ml Schaedler-Bouillon fr 5 h bei 36C 2C. - berfluten Sie eine Columbia-Agarplatte mit Schafblut mit der ganzen Kultur. Den berstand verwerfen. - Inkubieren Sie die Platte fr 18-24 h bei 36C 2C unter anaeroben Bedingungen.
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ANMERKUNG 2: Bei Verdacht auf Pneumokokken empfiehlt es sich, 2 Platten vorzubereiten, um ausreichendes Wachstum zu erhalten. Vorbereitung des Streifens x Stellen Sie eine Inkubationswanne mit Deckel bereit und geben Sie zur Herstellung einer feuchten Kammer ca. 5 ml destilliertes oder demineralisiertes Wasser [oder anderes Wasser ohne Zustze bzw. Derivate, die Gase freisetzen knnen (z.B. Cl2, CO2 ...)] in die Wanne. x Notieren Sie die Referenznummer des Stammes auf dem dafr vorgesehenen seitlichen Abschnitt der Inkubationswanne. (Die Referenznummer nicht auf dem Deckel notieren, da dieser whrend des Arbeitsablaufes verwechselt werden oder abhanden kommen kann). x Nehmen Sie den Streifen aus der Verpackung. x Legen Sie den Streifen in die Wanne. Vorbereitung des Inokulums x ffnen Sie eine Ampulle API Suspensionsmedium (2 ml), wie im Abschnitt "Vorsichtsmanahmen" dieser Arbeitsanleitung beschrieben, oder verwenden Sie ein anderes Rhrchen mit 2 ml Aqua dest. ohne Zustze. x Nehmen Sie die zuvor hergestellte Kultur mit einem Wattetupfer ganz ab. x Stellen Sie eine dichte Suspension her: Die Trbung muss hher als die des McFarland-Standards 4 sein. Diese Suspension muss sofort verwendet werden. Inokulation des Streifens x Erste Hlfte des Streifens: Die Tests VP bis ADH folgendermaen mit dieser Suspension beimpfen (um Blasenbildung zu vermeiden, halten Sie die Inkubationswanne leicht schrg und legen Sie die Pipette oder PSIpette am Rand des Bechers auf): - Fr die Tests VP bis LAP ca. 100 l in jeden Becher pipettieren. - Fr den ADH-Test nur das Rhrchen fllen. x Zweite Hlfte des Streifens (Tests RIB bis GLYG): - ffnen Sie eine Ampulle API GP Medium, wie im Abschnitt Vorsichtsmanahmen beschrieben, und berfhren Sie den Rest der Suspension (ca. 0,5 ml) in diese Ampulle. Gut homogenisieren. - Mit dieser neuen Suspension nur die Rhrchen fllen. x berschichten Sie die Becher der unterstrichenen Reaktionen (ADH bis GLYG) hoch mit Paraffinl. x Schlieen Sie die Inkubationswanne mit dem Deckel. x Die erste Ablesung erfolgt nach Inkubation fr 4 - 4 h bei 36C 2C unter aeroben Bedingungen, die zweite Ablesung erfolgt, falls erforderlich, nach 24 h ( 2 h). ABLESUNG UND INTERPRETATION Ablesung des Streifens Nach 4-stndiger Inkubation: x Die Reagenzien zugeben: - VP: je 1 Tropfen VP 1 und VP 2. - HIP: 2 Tropfen NIN. - PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL und LAP: je 1 Tropfen ZYM A und ZYM B (*). (*) Es ist empfehlenswert, jede Ampulle mit ZYM B Reagenz vor dem ersten Gebrauch zu kontrollieren. Es wird empfohlen, hierfr den im Abschnitt Qualittskontrolle angegebenen ATCC Stamm 700400 zu verwenden, um jegliche unbrauchbaren Reagenzien auszuschlieen. x Warten Sie 10 min und lesen Sie dann alle Reaktionen mit Hilfe der Ablesetabelle ab. Falls erforderlich, legen Sie den Streifen 10 s lang unter eine starke Lampe (1000 W), um das berschssige Reagenz in den Rhrchen PYRA bis LAP zu entfrben.
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Eine erneute Inkubation ist erforderlich: - schwacher Selektivitt; - bei einem nicht akzeptierbaren oder zweifelhaften Profil; - wenn der folgende Hinweis erscheint: IDENTIFIZIERUNG VOR 24 H INKUBATION NICHT MGLICH Lesen Sie in diesem Fall die Reaktionen ESC, ADH und RIB bis GLYG nach 24 h erneut ab. Die enzymatischen Reaktionen (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) und VP nicht erneut ablesen. Alle Reaktionen auf dem Ergebnisblatt notieren. Interpretation Die Identifizierung erhlt man anhand des numerischen Profils. x Erstellung des numerischen Profils: Die biochemischen Reaktionen auf dem Ergebnisblatt sind in 3-er Gruppen eingeteilt. Jede positive Reaktion erhlt den Wert 1, 2 oder 4, je nach Position des Tests innerhalb der Gruppe (1., 2. oder 3. Test). Durch Addieren der Zahlenwerte jeder Gruppe (negative Reaktion = 0) erhlt man das 7-stellige numerische Profil.

x Identifizierung: Die Identifizierung erfolgt anhand der Datenbasis (V 7.0) * mit dem Analytischen Profil Index: - Schlagen Sie das numerische Profil im Analytischen Profil Index nach. TM Identifizierungssoftware: * mit der apiweb - Geben Sie das 7-stellige numerische Profil manuell ber die Tastatur ein.

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

ANMERKUNG: Der 21. Test bezieht sich auf die Art der Hmolyse. -Hmolyse wird als positive Reaktion bewertet und erhlt den Zahlenwert 4. Alle anderen Arten der Hmolyse werden als negativ bewertet und erhalten den Wert 0. Die Hmolysereaktion ist fr die Identifizierung einiger Spezies von mageblicher Bedeutung.

QUALITTSKONTROLLE Die Medien, Streifen und Reagenzien unterliegen in den verschiedenen Stadien der Produktion systematisch durchgefhrten Qualittskontrollen. Die mikrobiologische Qualittskontrolle der API-Teststreifen im Labor kann vorzugsweise mit dem 1. Stamm Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 oder einem der folgenden Stmme durchgefhrt werden: 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC: American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

* Dieses Ergebnis kann je nach dem verwendeten Kulturmedium variieren. x Das Inokulum wurde mit DENSIMAT auf Werte zwischen 4,5 und 5,5 McF eingestellt. x Profile nach: - 4-stndiger Inkubation fr die Tests VP bis LAP, - 24-stndiger Inkubation fr die Tests ADH bis GLYG. x Anzucht der Stmme auf Columbia-Agar mit Schafblut. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, die Qualittskontrolle in bereinstimmung mit den jeweils gltigen Vorschriften durchzufhren. LIMITIERUNGEN x Das API 20 Strep System ist nur zur Identifizierung der in der Datenbasis enthaltenen Spezies bestimmt (siehe Prozenttabelle am Ende dieser Arbeitsanleitung). Andere Mikroorganismen knnen weder identifiziert noch ausgeschlossen werden. x Einige Streptococcus porcinus knnen als Streptococcus agalactiae identifiziert werden. x Es drfen nur Reinkulturen verwendet werden. ERWARTETE ERGEBNISSE Die erwarteten Ergebnisse der verschiedenen biochemischen Reaktionen entnehmen Sie der Prozenttabelle am Ende dieser Arbeitsanleitung. PERFORMANCE x Nach 4-stndiger Inkubation: 2336 Stmme unterschiedlicher Herkunft und Stmme aus Stammsammlungen, die zu den Spezies der Datenbasis gehren, wurden getestet: - 87,9% der Stmme wurden korrekt identifiziert (mit oder ohne Zusatztests). - 5,7% der Stmme wurden nicht identifiziert. - 6,4% der Stmme wurden falsch identifiziert. x Nach 24-stndiger Inkubation: 3782 Stmme unterschiedlicher Herkunft und Stmme aus Stammsammlungen, die zu den Spezies der Datenbasis gehren, wurden getestet: - 93,4% der Stmme wurden korrekt identifiziert (mit oder ohne Zusatztests). - 3,2% der Stmme wurden nicht identifiziert. - 3,4% der Stmme wurden falsch identifiziert. BESEITIGUNG DER ABFLLE Entsorgen Sie alle gebrauchten und nicht gebrauchten Reagenzien sowie kontaminierte Einwegmaterialien gem den fr infektise oder potenziell infektise Materialien geltenden Bestimmungen. Es liegt in der Verantwortung jedes Labors, die entstandenen Abflle und Abwsser gem der jeweiligen Risikogruppe zu behandeln und deren Entsorgung in bereinstimmung mit den gltigen gesetzlichen Bestimmungen sicherzustellen.

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ABLESETABELLE
TESTS AKTIVE BESTANDTEILE MENGE (mg/Vert.) REAKTIONEN/ENZYME ERGEBNISSE NEGATIV POSITIV VP 1 + VP 2 / bis 10 min (3) farblos NIN / bis 10 min HIP Hippursure 0,4 Hydrolyse (HIPpursure) farblos/blassblau blulich-grau 4h farblos blassgelb dunkelblau/violett rosa-rot

VP

Natriumpyruvat

1,9

Acetoinbildung (Voges Proskauer)

ESC

Aesculin Eisencitrat

1,16 0,152

-Glucosidase-Hydrolyse (AESCulin)

24 h 4h 24 h farblos schwarz schwarz grau blassgelb hellgrau ZYM A + ZYM B / 10 min (PYRA bis LAP) (1) bei Bedarf mit einer starken Lichtquelle entfrben farblos oder sehr hell-orange farblos farblos farblos oder sehr hell-violett farblos oder sehr hell-violett farblos gelb 4h rot rot rot rot rot rot rot rot rot 24 h orange/ rot orange/ rot orange/ rot orange/ rot orange/ rot orange/ rot orange/ rot orange/ rot orange/ rot 4h orange/ gelb orange/ gelb orange/ gelb orange/ gelb orange/ gelb orange/ gelb orange/ gelb orange/ gelb orange/ gelb orange violett blau violett violett orange rot 24 h gelb gelb gelb gelb gelb gelb gelb gelb gelb

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG

Pyroglutaminsure-naphthylamid 6-Bromo-2-naphthylDD-galactopyranosid Naphthol-ASBIglucuronsure 2-NaphthylD-galactopyranosid 2-Naphthylphosphat L-Leucin--naphthylamid L-Arginin D-Ribose L-Arabinose D-Mannitol D-Sorbitol D-Lactose (bovin) D-Trehalose Inulin D-Raffinose Strke (2) Glycogen

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9 1,4 1,4 1,36 1,36 1,4 1,32 5,12 3,12 2,56 1,28

PYRrolidonylarylamidase D-GALactosidase -GlUcuRonidase -GALactosidase ALkalische Phosphatase LeucinAminoPeptidase ArgininDiHydrolase Surebildung (RIBose) Surebildung (ARAbinose) Surebildung (MANnitol) Surebildung (SORbitol) Surebildung (LACtose) Surebildung (TREhalose) Surebildung (INUlin) Surebildung (RAFfinose) Surebildung (AMiDon) Surebildung (GLYcoGen)

rot oder orange

leuchtend gelb

(1) Bei einer zweiten Ablesung nach 24 h Inkubation kann sich in den Rhrchen, denen die Reagenzien ZYM A und ZYM B zugegeben wurden, ein Niederschlag bilden. Dies ist normal und fr die Identifizierung ohne Bedeutung. (2) Die Surebildung aus Strke ist hufig weniger stark als bei den anderen Kohlenhydraten. (3) Eine hellrosa Frbung nach 10 min ist negativ zu bewerten.

x Die angegebenen Mengen knnen je nach Konzentration der verwendeten Ausgangsmaterialien angeglichen werden. x Einige Npfchen enthalten Bestandteile tierischen Ursprungs, vor allem Peptone.
METHODIK PROZENTTABELLE S. I S. II LITERATUR SYMBOLE S. III S. IV

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20 Strep

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Sistema de identificacin de los Streptococcaceae y otros grmenes emparentados INTRODUCCIN Y OBJETO DEL ENSAYO La galera API 20 Strep es un sistema estandarizado que asocia 20 ensayos bioqumicos de un gran poder discriminante. Permite realizar un diagnstico de grupo o por especie de la mayora de los estreptococos, enterococos, y para los grmenes emparentados ms corrientes. La lista completa de las bacterias que es posible identificar con este sistema se puede ver en la Tabla de Identificacin al final de esta ficha tcnica. PRINCIPIO La galera API 20 Strep se compone de 20 microtubos que contienen los substratos deshidratados para la deteccin de actividades enzimticas o de fermentacin de azcares. Los ensayos enzimticos se inoculan con una suspensin densa realizada a partir de un cultivo puro que reconstituye los medios. Las reacciones que se producen durante el perodo de incubacin se traducen en variaciones de coloracin, espontneas o reveladas mediante la adicin de reactivos. Los ensayos de fermentacin se inoculan con un medio enriquecido (que contiene un indicador de pH), que rehidrata los azcares. La fermentacin de los hidratos de carbono trae consigo una acidificacin que se traduce en la modificacin espontnea del indicador de color. La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando la Tabla de Lectura, y la identificacin se obtiene con la ayuda del Catlogo Analtico o del software de identificacin. PRESENTACIN (Envase de 25 ensayos) - 25 galeras API 20 Strep - 25 cmaras de incubacin - 25 ampollas de API GP Medium - 25 hojas de resultados - 1 ficha tcnica COMPOSICIN Galera La composicin de la galera API 20 Strep puede verse en la Tabla de Identificacin de la presente ficha tcnica. Medio API GP Medium 2 ml L-cistina 0,5 g Triptona (origen bovino/porcino) 20 g Cloruro sdico 5g Sulfito sdico 0,5 g Rojo de fenol 0,17 g Agua desmineralizada c.s.p. 1.000 ml pH: 7,4 - 7,6 REACTIVOS Y MATERIAL NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Reactivos/Instrumentacin - API Suspension Medium 2 ml (ref. 70 700) - Reactivos : NIN (ref. 70 491) VP 1 + VP 2 (ref. 70 422) ZYM A (Ref. 70 494) ZYM B (ref. 70 493) - Aceite de parafina (ref. 70 100) - McFarland Standard (ref. 70 900) punto 4 o DENSIMAT (ref. 99 234) - Catlogo Analtico API 20 STREP (ref. 20 690) o Software de Identificacin apiweb TM (Ref. 40 011) (consultar con bioMrieux) - Agar Columbia con sangre (ref. 43 041) - Caldo Schaedler (eventualmente) Material - Escobillones - Pipetas o PSIpettes - Gradillas para ampollas - Protege-ampolla - Jarra de anaerobiosis - Equipo general de laboratorio de bacteriologa PRECAUCIONES DE UTILIZACIN x Para diagnstico in vitro y control microbiolgico. x Exclusivamente para uso profesional. x Este envase contiene compuestos de origen animal. La falta de control sobre el origen y/o el estado sanitario de los animales, no nos permite garantizar de forma absoluta que estos productos no contengan algn agente patgeno transmisible, por lo que se recomienda manipularlos mediante las precauciones de utilizacin relativas a los productos potencialmente infecciosos: (no ingerir, ni inhalar). x Todas las muestras, cultivos bacterianos y productos inoculados deben ser considerados como potencialmente infecciosos y ser manipulados de manera apropiada por personal competente.Durante toda la manipulacin, deben respetarse las normas de asepsia y tomar las precauciones habituales de manipulacin para el grupo de bacterias estudiadas; consultar: "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline Revisin en vigor". Para informacin complementaria sobre las precauciones de manipulacin, consultar: "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH Ultima edicin", o la reglamentacin vigente en el pas de utilizacin. x No emplear los reactivos despus de su fecha de caducidad. x Antes de su utilizacin, verificar la integridad del envase y de sus componentes. x No utilizar galeras que hayan sufrido una alteracin fsica: cpula deformada, bolsa del deshidratante abierta, ... x Se recomienda realizar un control de calidad antes de usar cada nueva ampolla de reactivo ZYM B.

Las cantidades indicadas pueden ajustarse en funcin de los ttulos de las materias primas.

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api 20 Strep

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x Abrir las ampollas con cuidado del modo siguiente: - Introducir la ampolla en el protege-ampolla. - Sujetar verticalmente el conjunto en una mano (tapn blanco hacia arriba). - Presionar a fondo el tapn. - Ejercer una presin horizontal con el pulgar en la parte estriada del tapn para romper la extremidad de la ampolla. - Retirar la ampolla del protege-ampolla y conservarlo para un prximo uso. - Retirar el tapn con cuidado. x Las prestaciones indicadas han sido obtenidas mediante la metodologa expresada en la presente ficha tcnica. Toda desviacin de dicha metodologa puede alterar los resultados. x La interpretacin de los resultados del ensayo debe ser realizada teniendo en cuenta un contexto clnico o de otro tipo, el origen de las muestras, los aspectos macro y microscpicos de la cepa y, eventualmente, los resultados de otros ensayos, particularmente del antibiograma. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Las galeras y los medios se conservan a 2-8C hasta la fecha lmite de utilizacin indicada en el envase. MUESTRAS (RECOGIDA Y PREPARACIN) La galera API 20 Strep no debe ser utilizada directamente a partir de muestras de origen clnico o de otro tipo. En una primera fase, los microorganismos a identificar deben aislarse sobre un medio de cultivo adaptado segn las tcnicas usuales en bacteriologa. MODO DE EMPLEO Seleccin de las colonias Despus de aislar y verificar la pertenencia de la cepa a identificar al gnero Streptococcaceae (reaccin de Gram, catalasa): x Anotar el tipo de hemlisis en la hoja de resultados (ensayo n 21). x Tomar una colonia bien aislada (Nota 1) y disolverla en suspensin en 0,3 ml de agua estril. Homogeneizar bien. x Inundar una placa de agar Columbia con sangre de cordero (Nota 2) con esta suspensin (o distribuirlo mediante un escobilln estril sobre toda la superficie del agar). x Incubar la placa 24 horas (r 2 horas) a 36C r 2C en anaerobiosis. NOTA 1: Los Estreptococos -hemolticos y los Enterococos generan colonias de tamao suficiente despus de 24 horas de incubacin. Para los otros Estreptococos, es preferible utilzar colonias a las 48 horas de incubacin. Para las cepas de cultivo difcil (colonias extremadamente pequeas a las 48 horas), se recomienda operar como sigue: - Cultivar la colonia en 1 ml de caldo de Schaedler a 36C r 2C durante 5 horas. - Inundar una placa de agar Columbia con sangre de cordero con la totalidad de este cultivo inicial en caldo. Eliminar el excedente. - Incubar la placa durante 18-24 horas a 36C r 2C en anaerobiosis. NOTA 2: Para obtener una cantidad suficiente, es preferible preparar 2 placas cuando la cepa sea susceptible de ser un Pneumococo.

Preparacin de la galera x Reunir fondo y tapa de una cmara de incubacin y repartir aproximadamente 5 ml de agua destilada o desmineralizada [o cualquier agua sin aditivos ni derivados susceptibles a liberar gases (Ej. Cl2, CO2 ...)] en los alvelos para crear una atmsfera hmeda. x Inscribir la referencia de las cepas en la lengeta lateral de la cmara. (No inscribir la referencia sobre la tapa, ya que sta puede extraviarse durante la manipulacin). x Sacar una galera de su envase individual. x Colocar la galera en la cmara de incubacin. Preparacin del inculo x Abrir una ampolla de API Suspension Medium (2 ml) como se indica en el prrafo "Precauciones de utilizacin" o bien utilizar un tubo que contenga 2 ml de agua destilada sin aditivo. x Con la ayuda de un escobilln, retirar todo el cultivo previamente preparado. x Realizar una suspensin muy densa: turbidez superior a 4 de McFarland. Esta suspensin debe ser utilizada de inmediato despus de su preparacin. Inoculacin de la galera x En la primera mitad de la galera (desde el ensayo VP al ADH), repartir la suspensin anterior, evitando la formacin de burbujas (para ello inclinar la cmara de incubacin hacia adelante y colocar la punta de la pipeta o PSIpette sobre el lateral de la cpula): - para los ensayos desde VP al LAP: agregar aproximadamente 100 l en cada cpula. - para el ensayo ADH: llenar nicamente el tubo. x En la segunda mitad de la galera (desde el ensayo RIB al GLYG): - abrir una ampolla de API GP Medium como se indica en el prrafo "Precauciones de utilizacin" y transferir all el resto de la suspensin, es decir, aproximadamente 0,5 ml como mnimo. Homogeneizar bien. - repartir esta nueva suspensin slo en los tubos. x Llenar las cpulas de las pruebas subrayadas desde la ADH a la GLYG con aceite de parafina, provocando un menisco convexo. x Volver a cerrar la cmara de incubacin. x Incubar a 36C r 2C en aerobiosis durante 4 - 4,5 horas para una primera lectura y 24 horas (r 2 horas) si fuera necesario para una segunda lectura. LECTURA E INTERPRETACIN Lectura de la galera Despus de 4 horas de incubacin: x Aadir los reactivos: - ensayo VP: 1 gota de VP 1 y VP 2 - ensayo HIP: 2 gotas de NIN - ensayos PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP: una gota de ZYM A ZYM B (*). (*) Se recomienda controlar cada ampolla de reactivo era ZYM B antes de la 1 utilizacin. Para ello, se recomienda utilizar la cepa ATCC 700400 mencionada en el prrafo Control de Calidad con el fin de excluir todo reactivo defectuoso. x Esperar 10 minutos para leer todas las reacciones, remitindose la Tabla de Identificacin. Si es necesario, exponer la galera a una lmpara de luz intensa (1000 W) 10 segundos para eliminar el exceso de reactivo de los tubos desde el PYRA al LAP.

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Es necesaria una reincubacin en los siguientes casos : - dbil discriminacin; - perfil inaceptable o perfil dudoso; - si, para el perfil obtenido, est indicada la siguiente nota: IDENTIFICACIN NO VLIDA ANTES DE 24 HORAS DE INCUBACIN En este caso, volver a leer despus de 24 horas las reacciones ESC, ADH y desde el RIB al GLYG sin releer las reacciones enzimticas (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) y VP. Anotar todas las reacciones en la hoja de resultados. Interpretacin La identificacin se obtiene a partir del perfil numrico: x Determinacin del perfil numrico: En la hoja de resultados, los ensayos se separan en grupos de 3 y se asigna para cada uno un valor 1, 2 4. Sumando en el interior de cada grupo los nmeros que corresponden a reacciones positivas, se obtienen 7 cifras que constituyen el perfil numrico.

x Identificacin: Se realiza a partir de la base de datos (V7.0). * Con la ayuda del Catlogo Analtico: - Localizar el perfil numrico en la lista de los perfiles. * Por medio del software de identificacin apiweb TM : - Introducir manualmente por teclado el perfil numrico de 7 cifras.

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

NOTA : La reaccin hemoltica constituye el ensayo n 21; la -hemlisis se considera como positiva y su valor numrico es 4. Cualquier otra reaccin hemoltica se considera como negativa y su valor numrico es 0. Sin embargo estos caracteres tienen un valor indicativo para la identificacin de ciertas especies.

CONTROL DE CALIDAD Los medios, galeras y reactivos son objeto de controles de calidad sistemticos durante las diferentes etapas de su fabricacin. El usuario puede realizar adems un control bacteriolgico de los ensayos de la galera, mediante la cepa: 1. Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 preferentemente, o la cepa: 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

* Este resultado puede variar en funcin del medio de cultivo utilizado. x Inculo ajustado entre 4,5 y 5,5 McF con DENSIMAT. x Perfiles obtenidos tras: - 4 horas de incubacin para los ensayos desde el VP al LAP - 24 horas de incubacin para los ensayos desde el ADH al GLYG. x Cepas cultivadas sobre agar Columbia con sangre de cordero. El usuario es responsable de cerciorarse de que el control de calidad haya sido realizado conforme a la legislacin local vigente. LMITES DEL ENSAYO x El sistema API 20 Strep est destinado a la identificacin de las especies presentes en la base de datos (ver Tabla de Identificacin al final de la presente ficha tcnica), y slo a ellas. No puede utilizarse para identificar otros microorganismos ni para excluir su presencia. x Algunas cepas de Streptococcus porcinus pueden ser identificadas como Streptococcus agalactiae. x Slo se deben utilizar cultivos puros que contengan un slo tipo de microorganismo. RESULTADOS ESPERADOS Consultar la Tabla de Identificacin que se incluye al final de esta ficha tcnica para aclarar los resultados esperados en las diferentes reacciones bioqumicas. PRESTACIONES x Despus de 4 horas de incubacin: Han sido ensayadas 2.336 cepas de diversos orgenes, as como cepas de coleccin pertenecientes a especies de la base de datos: - 87,9% de las cepas han sido identificadas correctamente (con o sin ensayos complementarios). - 5,7% de las cepas no han sido identificadas. - 6,4% de las cepas se han identificado incorrectamente. x Despus de 24 horas de incubacin: Han sido ensayadas 3.782 cepas de diversos orgenes, as como cepas de coleccin pertenecientes a especies de la base de datos: - 93,4% de las cepas han sido identificadas correctamente (con o sin ensayos complementarios). - 3,2% de las cepas no han sido identificadas. - 3,4% de las cepas se han identificado incorrectamente. ELIMINACION DE LOS RESIDUOS Eliminar los reactivos utilizados o no utilizados, as como los materiales de un solo uso contaminados siguiendo los procedimientos relacionados con los productos infecciosos o potencialmente infecciosos. Es responsabilidad de cada laboratorio la gestin de los desechos y efluentes que produce, segn su naturaleza y peligrosidad, garantizando (o haciendo garantizar) su tratamiento y eliminacin segn las reglamentaciones aplicables.

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TABLA DE IDENTIFICACIN
TESTS COMPONENTES ACTIVOS CANT (mg/cp.) REACCIONES/ENZIMAS RESULTADOS NEGATIVO POSITIVO VP 1 + VP 2 / hasta 10 min. (3) VP piruvato sdico 1,9 produccin de acetona (Voges Proskauer) hidrlisis (cido HIPrico) Incoloro Rosa-Rojizo NIN / hasta 10 min. HIP cido hiprico 0,4 Incolor/Azul plido Gris azulado 4h ESC esculina citrato de hierro 1,16 0,152 hidrlisis -glucosidasa (ESCulina) Incoloro Amarillo plido 24 h Azul oscuro /Violeta 4h 24 h

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH

cido piroglutmico-naftilamida 6-bromo-2-naftil-DDgalactopiranosida cido naftol-ASBIglucurnico 2-naftil-Dgalactopiranosida 2-naftil fosfato L-leucina--naftilamida L-arginina

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9

PIRolidonil Arilamidasa D-GALactosidasa -GlUcuRonidasa -GALactosidasa Fosfatasa ALcalina Leucina AminoPeptidasa Arginina DiHidrolasa

Incoloro Negro Negro Gris Amarillo plido Gris claro ZYM A + ZYM B / 10 min. (del PYRA al LAP) (1) decolorar en caso necesario mediante luz intensa Incoloro o Naranja Naranja muy plido Incoloro Incoloro Incoloro o Violeta muy plido Incoloro o Violeta muy plido Incoloro Amarillo 4h 24 h Naranja/ Rojo Naranja/ Rojo Naranja/ Rojo Naranja/ Rojo Naranja/ Rojo Naranja/ Rojo Naranja/ Rojo Naranja/ Rojo Naranja/ Rojo 4h Naranja/ Amarillo Naranja/ Amarillo Naranja/ Amarillo Naranja/ Amarillo Naranja/ Amarillo Naranja/ Amarillo Naranja/ Amarillo Naranja/ Amarillo Naranja/ Amarillo Violeta Azul Violeta Violeta Naranja Rojo 24 h Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo

RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG

D-ribosa L-arabinosa D-manitol D-sorbitol D-lactosa (origen bovino) D-trehalosa inulina D-rafinosa almidn (2) glicgeno

1,4 1,4 1,36 1,36 1,4 1,32 5,12 3,12 2,56 1,28

acidificacin (RIBosa) acidificacin (ARAbinosa) acidificacin (MANitol) acidificacin (SORbitol) acidificacin (LACtosa) acidificacin (TREhalosa) acidificacin (INUlina) acidificacin (RAFinosa) acidificacin (AlMiDn) acidificacin (GLIcgeno)

Rojo Rojo Rojo Rojo Rojo Rojo Rojo Rojo Rojo

Rojo o Naranja

Amarillo franco

(1) Durante una segunda lectura despus de 24 horas de incubacin, se puede observar un depsito en los tubos a los cuales se han aadido reactivos ZYM A y ZYM B. Este fenmeno es normal y no debe ser tomado en consideracin. (2) La acidificacin del almidn es con frecuencia menos intensa que la de otros azcares. (3) Una coloracin rosa plido obtenida despus de 10 minutos debe ser considerada negativa.

x Las cantidades indicadas pueden ser ajustadas en funcin de los ttulos de las materias primas. x Ciertas cpulas contienen componentes de origen animal, especialmente peptona bovina/porcina.
TECNICA TABLA DE IDENTIFICACIN p. p. I II BIBLIOGRAFA TABLA DE SMBOLOS p. III p. IV

bioMrieux, el logo azul, API y apiweb son marcas utilizadas, depositadas y/o registradas pertenecientes a bioMrieux SA o a cada una de sus filiales. Las otras marcas y nombre de productos mencionados en este documento son marcas comerciales de sus respectivos poseedores.

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IVD

Sistema di identificazione delle Streptococcaceae e dei germi correlati INTRODUZIONE E OBIETTIVI DEL TEST API 20 Strep un sistema standardizzato composto da 20 test biochimici ad elevata discriminazione. Permette di identificare a livello di gruppo o di specie la maggior parte degli streptococchi e degli enterococchi e degli altri germi pi comuni ad essi correlati. Lelenco completo dei batteri che si possono identificare con questo sistema, sono riportati alla fine della presente scheda tecnica. PRINCIPIO La galleria API 20 Strep costituita da 20 microprovette contenenti dei substrati disidratati per la rivelazione delle attivit enzimatiche o della fermentazione degli zuccheri. Per i test enzimatici linoculo costituito da una sospensione densa, ottenuta da una coltura pura, che consente la reidratazione del substrato enzimatico. Le reazioni prodotte durante il periodo di incubazione sono evidenziate da un viraggio cromatico spontaneo o successivo allaggiunta di reattivi ausiliari. Per i test fermentativi linoculo costituito da un terreno arricchito (contenente un indicatore di pH) che consente la reidratazione degli zuccheri. La fermentazione dei carboidrati comporta un processo di acidificazione che si traduce con un viraggio cromatico spontaneo dellindicatore. La lettura delle reazioni si effettua utilizzando la Tabella di Lettura e lidentificazione si ottiene consultando lIndice Analitico oppure utilizzando un software di identificazione. CONTENUTO DELLA CONFEZIONE (25 test) - 25 gallerie API 20 Strep - 25 vaschette di incubazione - 25 fiale di API GP Medium - 25 schede per la registrazione dei risultati - 1 scheda tecnica COMPOSIZIONE Gallerie La composizione della galleria API 20 Strep riportata nella Tabella di Lettura di questa scheda tecnica. Terreno API GP Medium 2 ml L-cisteina 0,5 g Triptone (origine bovina/suina) 20 g Cloruro di sodio 5g Solfito di sodio 0,5 g Rosso fenolo 0,17 g Acqua demineralizzata qsp 1000 ml pH : 7,4 - 7,6 REATTIVI E MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI Reattivi / Strumenti - API Suspension Medium, 2 ml (Cod. 70 700) - Reattivi : NIN (Cod. 70 491) VP 1 + VP 2 (Cod. 70 422) ZYM A (Cod. 70 494) ZYM B (Cod. 70 493) - Olio di paraffina (Cod. 70 100) - McFarland Standard (Cod. 70 900) punto 4 o DENSIMAT (Cod. 99 234) - Indice Analitico API 20 Strep (Cod. 20 690) o software di identificazione apiweb TM (Cod. 40 011) (consultare bioMrieux) - Piastre agar Columbia al sangue (Cod. 43 041) - Brodo Schaedler (se necessario) Materiale - Tamponi - Pipette o PSIpette - Porta-fiale - Proteggi-fiale - Giara per anaerobiosi - Materiale generico per laboratorio di batteriologia AVVERTENZE E PRECAUZIONI x Per diagnostica in vitro e per controllo microbiologico. x Unicamente per uso professionale. x Questa confezione contiene dei componenti di origine animale. Poich i controlli sullorigine e/o sullo stato sanitario degli animali non possono garantire in maniera assoluta che questi prodotti non contengano nessun agente patogeno trasmissibile, si raccomanda di manipolarli con le precauzioni duso relative ai prodotti potenzialmente infettivi (non ingerire, non inalare). x I prelievi, le colture batteriche ed i prodotti seminati devono essere considerati come potenzialmente infettivi e devono essere manipolati in maniera appropriata da operatori competenti e preparati. Le tecniche di asepsi e le precauzioni duso per il gruppo batterico studiato devono essere rispettate durante tutta la manipolazione; fare riferimento a "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Revisione in vigore". Per ulteriori informazioni sulle precauzioni di manipolazione, consultare "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories CDC/NIH - Ultima edizione", oppure fare riferimento alla normativa vigente nel Paese. x Non utilizzare i reattivi dopo la data di scadenza. x Prima delluso verificare lintegrit dellimballaggio e dei componenti. x Non utilizzare gallerie che abbiano subito una alterazione fisica : cupole deformate, sacchetto del disidratante aperto, x Si raccomanda di eseguire un controllo di qualit prima di utilizzare una nuova fiala di reattivo ZYM B.

Le quantit indicate possono essere aggiustate in funzione del titolo delle materie prime utilizzate.

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x Aprire le fiale delicatamente come indicato di seguito: - Inserire la fiala nel proteggi-fiala. - Impugnare la fiala in posizione verticale (cappuccio bianco rivolto verso l'alto). - Spingere bene in fondo il cappuccio. - Premere orizzontalmente con il pollice sulla parte striata del cappuccio fino a rompere l'estremit della fiala. - Estrarre la fiala dal proteggi-fiala e conservare il proteggi-fiala per una successiva utilizzazione. - Togliere delicatamente il cappuccio. x Le performance riportate di seguito sono state ottenute seguendo il procedimento indicato in questa scheda tecnica. Qualsiasi deviazione dal procedimento indicato pu alterare i risultati. x Linterpretazione dei risultati del test deve tener conto del contesto clinico o di altra natura, dellorigine del campione, degli aspetti macro e microscopici del ceppo ed, eventualmente, dei risultati di altri esami, in particolare dellantibiogramma. CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE Le gallerie ed i terreni si conservano a 2-8C fino alla data di scadenza indicata sulla confezione. CAMPIONI (PRELIEVO E PREPARAZIONE) I campioni clinici o di altra natura non possono essere utilizzati direttamente con lAPI 20 Strep. I microrganismi da identificare devono essere inizialmente isolati su un terreno di coltura appropriato secondo le normali tecniche batteriologiche. PROCEDIMENTO Selezione delle colonie Dopo lisolamento del microrganismo che deve essere identificato e dopo aver verificato che questo appartenga alla famiglia delle Streptococcaceae (reazione di Gram, catalasi) : x Annotare il tipo di emolisi sulla scheda per la registrazione dei risultati (21 test). x Prelevare una colonia ben isolata (Nota 1) e sospenderla in 0,3 ml di acqua sterile. Omogeneizzare bene. x Inondare una piastra di agar Columbia al sangue di montone (Nota 2) con questa sospensione (o strofinare in condizioni di sterilit lintera superficie dellagar con un tampone). x Incubare la piastra 24 ore ( 2 ore) a 36C 2C in anaerobiosi. NOTA 1 : Gli Streptococchi -emolitici e gli Enterococchi danno origine a colonie di sufficienti dimensioni dopo 24 ore di incubazione. Per gli altri streptococchi consigliabile prelevare colonie di 48 ore. Per i ceppi di difficile coltura (colonie di dimensioni molto ridotte dopo 48 ore) consigliabile procedere nel modo seguente : - Coltivare la colonia in 1 ml di brodo Schaedler per 5 ore a 36C 2C. - Inondare una piastra di agar Columbia al sangue di montone con lintera coltura. Eliminare la parte eccedente. - Incubare la piastra per 18-24 ore a 36C 2C in anaerobiosi. NOTA 2 : Allo scopo di ottenere una crescita sufficiente, consigliabile preparare 2 piastre di agar Columbia quando si presume che il ceppo da esaminare sia uno Pneumococco.
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Preparazione della galleria x Riunire fondo e coperchio di una vaschetta di incubazione e distribuire circa 5 ml di acqua distillata o demineralizzata [o semplicemente dell'acqua senza additivi o derivati che potrebbero liberare gas (ad es. Cl2, CO2 ...)] nei pozzetti per creare un ambiente umido. x Annotare il riferimento del ceppo sulla linguetta laterale della vaschetta. (Non annotare il riferimento sul coperchio, in quanto potrebbe essere spostato al momento della manipolazione). x Estrarre la galleria dal suo involucro. x Mettere la galleria nella vaschetta di incubazione. Preparazione dellinoculo x Aprire una fiala di API Suspension Medium (2 ml) come indicato al paragrafo Avvertenze e Precauzioni, o utilizzare una provetta contenente 2 ml di acqua distillata senza additivi. x Servendosi di un tampone, prelevare lintera coltura precedentemente preparata. x Preparare una sospensione piuttosto densa con opacit superiore al punto 4 di McFarland e utilizzarla immediatamente. Inoculo della galleria x Nella prima met della galleria (test da VP ad ADH): distribuire la sospensione preparata evitando la formazione di bolle (a tale scopo inclinare leggermente in avanti la vaschetta di incubazione ed appoggiare la punta della pipetta o della PSIpetta sul lato interno della cupola): - per i test da VP a LAP : distribuire circa 100 l in ciascuna cupola. - per il test ADH : riempire unicamente la provetta. x Nella seconda met della galleria (test da RIB a GLYG): - aprire una fiala di API GP Medium come indicato al paragrafo "Avvertenze e Precauzioni" e trasferirvi il resto della sospensione, ossia al minimo 0,5 ml. Omogeneizzare bene. - distribuire questa nuova sospensione solo nelle provette. x Riempire con olio di paraffina le cupole dei test sottolineati da ADH a GLYG fino a formare un menisco convesso. x Chiudere la vaschetta di incubazione. x Incubare a 36C 2C in aerobiosi per 4 - 4,5 ore per una prima lettura ed eventualmente, se necessario, per 24 ore ( 2 ore) per una seconda lettura. LETTURA ED INTERPRETAZIONE Lettura della galleria Dopo 4 ore di incubazione: x aggiungere i reattivi : - test VP : 1goccia di VP 1 e di VP 2. - test HIP : 2 gocce di NIN. - test PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP : 1 goccia di ZYM A e di ZYM B (*). (*) Si raccomanda di controllare ogni fiala di reattivo a ZYM B prima di utilizzarlo per la 1 volta. Per fare ci, per escludere ogni reattivo difettoso, si raccomanda di utilizzare il ceppo ATCC 700400 indicato nel paragrafo Controllo di Qualit. x Attendere 10 minuti, poi leggere tutte le reazioni riferendosi alla Tabella di Lettura. Se necessario, esporre la galleria ad una lampada potente (1000 W) per 10 secondi per decolorare il reattivo in eccesso nelle provette da PYRA a LAP.

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E necessario procedere ad una nuova incubazione: - in caso di debole identificazione; - profilo inaccettabile o dubbio; - quando in corrispondenza del profilo ottenuto compare il seguente messaggio: IDENTIFICAZIONE NON VALIDA PRIMA DI 24 ORE DI INCUBAZIONE A distanza di 24 ore eseguire nuovamente la lettura delle reazioni ESC, ADH e da RIB a GLYG senza rileggere le reazioni enzimatiche (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) e VP. Trascrivere tutte le reazioni sulla scheda dei risultati. Interpretazione Lidentificazione si ottiene partendo dal profilo numerico. x Determinazione del profilo numerico : Sulla scheda dei risultati, i test sono separati in gruppi di tre e ad ognuno viene attribuito un valore pari a 1, 2 o 4. Allinterno di ogni tripletta, vengono sommati fra di loro i valori corrispondenti alle sole reazioni positive, ottenendo cos, un profilo numerico a 7 cifre.

x Identificazione : Si ottiene partendo dalla base dei dati (V7.0) * Utilizzando lIndice Analitico : - Ricercare il profilo numerico nella lista dei profili. * Mediante il software di identificazione apiweb TM : - Digitare sulla tastiera le 7 cifre del profilo numerico.

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

NOTA : La reazione emolitica costituisce il 21 test; la -emolisi si considera positiva e ad essa viene attribuito il valore 4. Ogni altra reazione emolitica si considera negativa e ad essa viene attribuito il valore 0. Tuttavia, questo test pu assumere un significato discriminante ai fini dellidentificazione di alcune specie.

CONTROLLO DI QUALIT I terreni, le gallerie ed i reattivi sono sottoposti a controlli di qualit sistematici nelle diverse fasi del ciclo produttivo. Inoltre lutilizzatore pu effettuare un controllo batteriologico dei test della galleria utilizzando preferibilmente il ceppo : 1. Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 oppure in alternativa il ceppo seguente : 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + + ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + *

* Questo risultato pu variare in funzione del terreno di coltura utilizzato. x Inoculo aggiustato fra 4,5 e 5,5 McF con il DENSIMAT. x Profili ottenuti dopo: - 4 ore di incubazione per i test da VP a LAP - 24 ore di incubazione per i test da ADH a GLYG. x Ceppi coltivati sullagar Columbia al sangue di montone. E responsabilit dellutilizzatore assicurarsi che il controllo di qualit corrisponda a quanto previsto dalla legislazione vigente. LIMITI DEL METODO x Il sistema API 20 Strep destinato allidentificazione delle specie incluse nella base dei dati (vedere la Tabella di Identificazione alla fine della scheda tecnica) e solo di queste. Non pu essere utilizzato per identificare altri microrganismi o per escluderne la presenza. x Alcuni ceppi di Streptococcus porcinus possono essere identificati come Streptococcus agalactiae. x Devono essere utilizzate solo colonie pure, contenenti cio un solo tipo di microrganismo. RISULTATI ATTESI Per quanto i risultati attesi delle differenti reazioni biochimiche, fare riferimento alla Tabella di identificazione, riportata alla fine di questa scheda tecnica. PERFORMANCE x Dopo 4 ore di incubazione : sono stati testati 2336 ceppi di origine diversa e ceppi di collezione appartenenti alle specie incluse nella base dei dati : - il 87,9 % dei ceppi stato correttamente identificato (con o senza test complementari). - il 5,7 % dei ceppi non stato identificato. - il 6,4 % dei ceppi non stato correttamente identificato.
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x Dopo 24 ore di incubazione : sono stati testati 3782 ceppi di origine diversa e ceppi di collezione appartenenti alle specie incluse nella base dei dati: - il 93,4% dei ceppi stato correttamente identificato (con o senza test complementari). - il 3,2% dei ceppi non stato identificato. - il 3,4% dei ceppi non stato correttamente identificato. SMALTIMENTO DEI RIFIUTI Smaltire i reattivi utilizzati o non utilizzati ed i materiali monouso contaminati seguendo le procedure relative ai prodotti infettivi o potenzialmente infettivi. E responsabilit di ogni laboratorio gestire i rifiuti e gli effluenti prodotti a seconda della loro natura e della loro pericolosit ed assicurarne (o farne assicurare) il trattamento e lo smaltimento conformemente alla legislazione vigente.

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TABELLA DI LETTURA
TEST SUBSTRATI Q.TA
(mg/cup.)

REAZIONI/ENZIMI

RESULTATI NEGATIVO POSITIVO

VP 1 + VP 2 / Attendere 10 min (3) VP piruvato di sodio 1,9 produzione d'acetoina (Voges Proskauer) idrolisi (acido ippurico) Incolore Rosa-Rosso NIN / attendere 10 min HIP acido ippurico 0,4 Incolore/Blu chiaro Grigio bluastro 4 ore ESC esculina citrato di ferro 1,16 0,152 idrolisi -glucosidasi (ESCulina) Incolore Giallo pallido 24 ore Incolore Giallo pallido Grigio chiaro Blu scuro/Viola 4 ore Nero Grigio 24 ore Nero

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH

ac. piroglutammico-naftilamide 6-bromo-2-naftil-DDgalattopiranoside acido naftol-ASBIglucuronico 2-naftyl-Dgalattopiranoside 2-naftil fosfato L-leucina-naftilamide L-arginina

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9

PiRrolidonil Arilamidasi D-GALattosidasi -GLUcuRonidasi -GALattosidasi Fosfatasi ALcalina Leucina AminoPeptidasi Arginina Diidrolasi

ZYM A + ZYM B / 10 min (da PYRA a LAP) (1) se necessario decolorare per esposizione intensa alla luce Incolore o Arancione Arancione molto chiaro Incolore Incolore Incolore o Viola molto chiaro Incolore o Viola molto pallido Incolore Giallo 4 ore 24 ore Arancione/ Rosso Arancione/ Rosso Arancione/ Rosso Arancione/ Rosso Arancione/ Rosso Arancione/ Rosso Arancione/ Rosso Arancione/ Rosso Arancione/ Rosso 4 ore Arancione/ Giallo Arancione/ Giallo Arancione/ Giallo Arancione/ Giallo Arancione/ Giallo Arancione/ Giallo Arancione/ Giallo Arancione/ Giallo Arancione/ Giallo Viola Blu Viola Viola Arancione Rosso 24 ore Giallo Giallo Giallo Giallo Giallo Giallo Giallo Giallo Giallo

RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG

D-ribosio L-arabinosio D-mannitolo D-sorbitolo D-lattosio (origine bovina) D-trealosio inulina D-raffinosio amido (2) glicogeno

1,4 1,4 1,36 1,36 1,4 1,32 5,12 3,12 2,56 1,28

acidificazione (RIBosio) acidificazione (ARAbinosio) acidificazione (MANnitolo) acidificazione (SORbitolo) acidificazione (LAttosio) acidificazione (TREalosio) acidificazione (INUlina) acidificazione (RAFfinosio) acidificazione (AMiDo) acidificazione (GLicoGeno)

Rosso Rosso Rosso Rosso Rosso Rosso Rosso Rosso Rosso

Rosso o Arancione

Giallo acceso

(1) Nella seconda lettura dopo 24 ore di incubazione, si pu notare la presenza di un deposito nelle provette in cui sono stati aggiunti ZYM A e ZYM B. questo fenomeno del tutto normale e non deve essere preso in considerazione. (2) L'acidificazione dell'amido spesso meno intensa rispetto a quella degli altri zuccheri. (3) Una colorazione rosa pallido ottenuta dopo 10 minuti deve essere considerata negativa.

x Le quantit indicate possono variare in funzione dei titoli delle materie prime. x Certe cupole contengono dei componenti di origine animale, in particolare dei peptoni.
PROCEDIMENTO TABELLA DI IDENTIFICAZIONE p. I p. II BIBLIOGRAFIA TABELLA DEI SIMBOLI p. p. III IV

bioMrieux, il logo blu, API e apiweb sono marchi utilizzati, depositati e/o registrati di propriet di bioMrieux SA o di una delle sue filiali. Gli altri marchi e nomi di prodotti menzionati in questo documento sono marchi commerciali dei loro rispettivi detentori.

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Sistema de identificao dos Streptococcaceae e microrganismos semelhantes INTRODUO E OBJECTIVO DO TESTE O API 20 Strep um sistema padronizado que associa 20 testes bioqumicos que apresentam um elevado poder discriminatrio. Permite efectuar um diagnstico de grupo ou de espcie para a maioria dos estreptococos, enterococos e para os microrganismos semelhantes mais correntes. A lista completa das bactrias possveis de identificar com este sistema encontra-se no Quadro de Identificao no final do folheto informativo. PRINCPIO A galeria API 20 Strep comporta 20 microtubos que contm substratos desidratados para a deteco de actividades enzimticas ou de fermentao de acares. Os testes enzimticos so inoculados com uma suspenso densa, realizada a partir de uma cultura pura, que reconstitui os meios. As reaces produzidas durante o perodo de incubao traduzem-se por viragens coloridas espontneas ou reveladas por adio de reagentes. Os testes de fermentao so inoculados com um meio enriquecido (contendo um indicador de pH) que re-hidrata os acares. A fermentao dos carbohidratos leva a uma acidificao que se traduz por uma viragem espontnea da cor do indicador. A leitura destas reaces efectuada com o Quadro de Leitura e a identificao obtm-se com o Catlogo Analtico ou um programa de identificao. APRESENTAO (Embalagem de 25 testes) - 25 galerias API 20 Strep - 25 caixas de incubao - 25 ampolas de API GP Medium - 25 fichas de resultados - 1 folheto informativo COMPOSIO Galeria A composio da galeria API 20 Strep est indicada no quadro de leitura deste folheto informativo. Meio API GP Medium 2 ml L-cistina 0,5 g Triptona (origem bovina/porcina) 20 g Cloreto de sdio 5g Sulfito de sdio 0,5 g Vermelho de fenol 0,17 g gua desmineralizada q.b. 1000 ml pH : 7,4 - 7,6 REAGENTES E MATERIAIS NECESSRIOS MAS NO FORNECIDOS Reagentes / Aparelhos - API Suspension Medium, 2 ml (Ref. 70 700) - Reagentes : NIN (Ref. 70 491) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) ZYM A (Ref. 70 494) ZYM B (Ref. 70 493) - leo de parafina (Ref. 70 100) - McFarland Standard (Ref. 70 900) ponto 4 ou DENSIMAT (Ref. 99 234) - Catlogo Analtico API 20 Strep (Ref. 20 690) ou TM programa de identificao apiweb (Ref. 40 011) (consultar a bioMrieux) - Gelose Columbia de sangue (Ref. 43 041) - Caldo Schaedler (eventualmente) Materiais - Zaragatoas/swabs - Pipetas ou PSIpetas - Suporte para ampolas - Protector de ampola - Jarra de anaerobiose - Equipamento geral de laboratrio de bacteriologia PRECAUES DE UTILIZAO x Para diagnstico in vitro e controlo microbiolgico. x Unicamente para uso profissional. x Este dispositivo contm componentes de origem animal. O controlo da origem e/ou do estado sanitrio dos animais no podem garantir de maneira absoluta que estes produtos no contenham nenhum agente patognico transmissvel, recomendado manipul-los com as precaues de utilizao relativas aos produtos potencialmente infecciosos (no ingerir; no inalar). x As amostras, culturas bacterianas e produtos semeados devem ser considerados potencialmente infecciosos e manipulados de maneira apropriada. As tcnicas asspticas e as precaues habituais de manipulao para o grupo bacteriano estudado devem ser respeitadas durante toda a manipulao; consultar o "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Reviso em vigor. Para informaes complementares sobre as precaues de manipulao, consultar o "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories CDC/NIH ltima edio, ou a regulamentao em vigor no pas de utilizao. x No utilizar os reagentes aps a data de validade. x Antes da utilizao, assegurar-se de que a embalagem e os componentes no esto danificados. x No utilizar galerias que tenham sofrido uma alterao fsica: cpula deformada, saqueta do desidratante aberta, x aconselhado efectuar um controlo de qualidade antes de utilizar cada nova ampola de reagente ZYM B.

As quantidades indicadas podem ser ajustadas em funo dos ttulos das matrias-primas.

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x Abrir cuidadosamente as ampolas, como abaixo indicado: - Colocar a ampola no protector de ampola. - Segurar o conjunto verticalmente numa mo (tampa branca para cima). - Fechar bem a tampa. - Pressionar horizontalmente com o polegar a parte estriada da tampa de forma a partir a extremidade da ampola. - Retirar a ampola do protector de ampola e conserv-lo para uma posterior utilizao. - Retirar delicadamente a tampa. x O comportamento funcional apresentado obtido com o procedimento indicado neste folheto informativo. Qualquer desvio metodologia pode alterar os resultados. x A interpretao dos resultados do teste deve ser efectuada tendo em conta o contexto clnico ou outro, a origem da amostra, os aspectos macro e microscpicos da estirpe/cepa e, eventualmente, os resultados de outros testes, em especial, do antibiograma. CONDIES DE ARMAZENAMENTO As galerias e meios conservam-se a 2 - 8 C at data de validade indicada na embalagem. AMOSTRAS (COLHEITA/COLETA E PREPARAO) O API 20 Strep no deve ser utilizado directamente em amostras de origem clnica ou outras. Os microrganismos a identificar devem primeiro ser isolados num meio de cultura adaptado segundo as tcnicas habituais de bacteriologia. PROCEDIMENTO Seleco das colnias Aps o isolamento e verificao de que a estirpe/cepa a identificar pertence ao gnero Streptococcaceae (reaco de Gram, catalase) : x Anotar o tipo de hemlise na ficha de resultados (21 teste). x Colher/coletar uma colnia bem isolada (Nota 1) e coloc-la em suspenso com 0,3 ml de gua estril. Homogeneizar correctamente. x Inundar uma placa de gelose Columbia com sangue de carneiro (Nota 2) com esta suspenso (ou fazer uma sementeira estril em toda a superfcie da gelose). x Incubar a placa 24 horas ( 2 horas) a 36 C 2 C em anaerobiose. NOTA 1 : Os Estreptococos -hemolticos e os Enterococos apresentam colnias de tamanho suficiente aps 24 horas de incubao. Para os outros Estreptococos, prefervel colher/coletar as colnias de 48 horas. Para as estirpes/cepas de cultura difcil (colnias muito pequenas s 48 horas) aconselhvel proceder da seguinte maneira : - Cultivar a colnia em 1 ml de caldo de Schaedler a 36C 2C durante 5 horas. - Inundar uma placa de gelose Columbia com sangue de carneiro com a totalidade desta cultura. Eliminar o excesso. - Incubar a placa 18 a 24 horas a 36C 2C em anaerobiose.

NOTA 2 : Para obter um crescimento suficiente, prefervel preparar 2 geloses se se suspeitar que a estirpe/cepa um pneumococo. Preparao da galeria x Juntar fundo e tampa de uma caixa de incubao e distribuir cerca de 5 ml de gua destilada ou desmineralizada [ou qualquer gua sem aditivos ou derivados susceptveis de libertarem gases (Ex : Cl2, CO2 ...)] nos alvolos para criar uma atmosfera hmida. x Inscrever a referncia da estirpe/cepa na lingueta lateral da caixa. (No inscrever a referncia na tampa, esta pode ser movida durante a manipulao). x Retirar a galeria da embalagem. x Colocar a galeria na caixa de incubao. Preparao do inculo x Abrir uma ampola de API Suspension Medium (2 ml) como indicado no pargrafo "Precaues de utilizao" ou utilizar um tubo contendo 2 ml de gua destilada sem aditivo. x Utilizando uma zaragatoa/swab, colher/coletar toda a cultura previamente preparada. x Preparar uma suspenso bastante densa : opacidade superior a 4 de McFarland. Esta suspenso deve ser utilizada imediatamente aps a sua preparao. Inoculao da galeria x Na primeira metade da galeria (testes VP a ADH) distribuir a suspenso anterior evitando a formao de bolhas (inclinar ligeiramente a caixa de incubao para a frente e colocar a ponta da pipeta ou da PSIpeta de lado na cpula) : - Para os testes VP a LAP : distribuir cerca de 100 l em cada cpula. - Para o teste ADH : encher unicamente o tubo. x Na segunda metade da galeria (testes RIB a GLYG) : - abrir uma ampola de API GP Medium como indicado no pargrafo "Precaues de utilizao" e transferir o resto da suspenso, ou seja 0,5 ml no mnimo. Homogeneizar correctamente. - distribuir esta nova suspenso unicamente nos tubos. x Encher as cpulas dos testes sublinhados ADH a GLYG com leo de parafina formando um menisco convexo. x Fechar a caixa de incubao. x Incubar a 36C 2C em aerobiose durante 4H00 4H30 para uma primeira leitura e 24 horas ( 2 horas) se necessrio, para uma segunda leitura. LEITURA E INTERPRETAO Leitura da galeria Aps 4 horas de incubao : x Adicionar os reagentes : - teste VP : 1 gota de VP 1 e VP 2. - teste HIP : 2 gotas de NIN. - testes PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP : 1 gota de ZYM A e ZYM B (*). (*) aconselhado controlar cada ampola de reagente ZYM B antes da 1 utilizao. Para tal, aconselhado utilizar a estirpe/cepa ATCC 700400 indicada no pargrafo Controlo de Qualidade para excluir qualquer reagente defeituoso. x Esperar 10 minutos, depois ler todas as reaces consultando o Quadro de Leitura. Se necessrio, colocar a galeria por baixo de uma lmpada potente (1000 W) 10 segundos para descolorar o reagente em excesso nos tubos PYRA a LAP.

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necessria uma reincubao nos casos seguintes: - fraca discriminao; - perfil inaceitvel; - se a nota seguinte for indicada para o perfil obtido : IDENTIFICAO NO VLIDA ANTES DE 24 H DE INCUBAO Ler novamente aps 24 horas as reaces ESC, ADH e RIB a GLYG sem ler novamente as reaces enzimticas (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) e VP. Anotar todas as reaces na ficha de resultados. Interpretao A identificao obtida a partir do perfil numrico. x Determinao do perfil numrico : Na ficha de resultados, os testes so separados por grupos de trs e um valor 1, 2 ou 4 indicado para cada um. Adicionando no interior de cada grupo os valores correspondentes s reaces positivas, obtmse 7 algarismos que constituem o perfil numrico.

x Identificao : A identificao pode obter-se a partir da base de dados (V7.0) * com o Catlogo Analtico : - Pesquisar o perfil numrico na lista dos perfis. TM * com o sistema de identificao apiweb : - Introduzir manualmente no teclado o perfil numrico com 7 algarismos.

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

NOTA : A reaco hemoltica constitui o 21 teste ; a -hemlise considerada positiva e o seu valor numrico 4. Qualquer outra reaco hemoltica considerada negativa e o seu valor numrico 0. Todavia, estes caracteres tm um valor indicativo para a identificao de certas espcies.

CONTROLO DE QUALIDADE Os meios, galerias e reagentes so sujeitos a controlos de qualidade sistemticos nas diferentes etapas do seu fabrico. Alm disso, o utilizador pode efectuar um controlo bacteriolgico dos testes da galeria, preferencialmente com a estirpe/cepa 1. Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 ou com uma das estirpes/cepas seguintes : 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

* Este resultado pode variar em funo do meio de cultura utilizado. x Inculo ajustado entre 4,5 e 5,5 McF com DENSIMAT. x Perfis obtidos aps : - 4 horas de incubao para os testes VP a LAP - 24 horas de incubao para os testes ADH a GLYG. x Estirpes/cepas cultivadas em gelose Columbia com sangue de carneiro. da responsabilidade do utilizador assegurar que o controlo de qualidade efectuado em conformidade com a legislao local em vigor. LIMITES DO TESTE x O sistema API 20 Strep destina-se identificao das espcies presentes na base de dados (consultar o Quadro de Identificao no final do folheto informativo), e apenas a estas. No pode ser utilizado para identificar outros microrganismos ou excluir a sua presena. x Algumas estirpes/cepas de Streptococcus porcinus podem ser identificadas como Streptococcus agalactiae. x Devem apenas ser utilizadas culturas puras contendo um nico tipo de microrganismo. RESULTADOS ESPERADOS Consultar o Quadro de Identificao no final deste folheto informativo para saber os resultados esperados para as diferentes reaces bioqumicas. COMPORTAMENTO FUNCIONAL x Aps 4 horas de incubao : Foram testadas 2336 estirpes/cepas de diversas origens e estirpes/cepas de coleco pertencentes s espcies da base de dados : - 87,9% das estirpes/cepas foram correctamente identificadas (com ou sem testes complementares). - 5,7% das estirpes/cepas no foram identificadas. - 6,4% das estirpes/cepas foram mal identificadas. x Aps 24 horas de incubao : Foram testadas 3782 estirpes/cepas de diversas origens e estirpes/cepas de coleco pertencentes s espcies da base de dados : - 93,4% das estirpes/cepas foram correctamente identificadas (com ou sem testes complementares). - 3,2% das estirpes/cepas no foram identificadas. - 3,4% das estirpes/cepas foram mal identificadas. ELIMINAO DE RESDUOS Eliminar os reagentes utilizados ou no utilizados assim como os materiais de utilizao nica contaminados em conformidade com os procedimentos relativos aos produtos infecciosos ou potencialmente infecciosos. da responsabilidade de cada laboratrio gerir os resduos e os efluentes que este produz consoante a sua natureza e o seu perigo, e assegurar (ou fazer assegurar) o tratamento e a eliminao em conformidade com as regulamentaes aplicveis.

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QUADRO DE LEITURA
TESTES COMPONENTES ACTIVOS Piruvato de sdio cido hiprico QTD (mg/cp.) 1,9 0,4 REACES/ENZIMAS Produco de acetona (Voges Proskauer) hidrlise (cido HIPrico) RESULTADOS NEGATIVO Incolor POSITIVO Rosa-Vermelho VP 1 + VP 2 / at 10 min (3) VP HIP NIN / at 10 min Incolor/Azul plido Azul escuro/Violeta Cinzento-azulado 4h 24 h 4h 24 h Incolor Incolor Negro Negro Amarelo Amarelo plido Cinzento plido Cinzento claro ZYM A + ZYM B / 10 min (PYRA a LAP) (1) se necessrio descolorado por exposio luz intensa Incolor ou Laranja Laranja muito plido Incolor Incolor Incolor ou Violeta muito plido Incolor ou Violeta muito plido Incolor Amarelo 4h Vermelho Violeta Azul Violeta Violeta Laranja Vermelho

ESC

esculina citrato de ferro

1,16 0,152

hidrlise -glucosidase (ESCulina)

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH RIB

cido piroglutmico-naftilamida 6-bromo-2-naftil-DDgalactopiranosido cido naftol-ASBIglucuronato 2-naftil-Dgalactopiranosido 2-naftil fosfato L-leucina--naftilamida L-arginina D-ribose

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9 1,4

PYRrolidonil Arilamidase D-GALactosidase -GlUcuRonidase -GALactosidase Fosfato Alcalina Leucina AminoPeptidase Arginina DiHidrolase Acidificao (RIBose)

24 h 4h 24 h Laranja/ Laranja/ Amarelo Vermelho Amarelo Laranja/ Laranja/ ARA L-arabinose 1,4 Acidification (ARAbinose) Vermelho Amarelo Vermelho Amarelo Laranja/ Laranja/ MAN D-manitol 1,36 Acidificao (MANitol) Vermelho Amarelo Vermelho Amarelo Laranja/ Laranja/ SOR D-sorbitol 1,36 Acidificao (SORbitol) Vermelho Amarelo Vermelho Amarelo D-lactose Laranja/ Laranja/ LAC 1,4 Acidificao (LACtose) Vermelho Amarelo (origem bovina) Vermelho Amarelo Laranja/ Laranja/ TRE D-trealose 1,32 Acidificao (TREalose) Vermelho Amarelo Vermelho Amarelo Laranja/ Laranja/ INU inulina 5,12 Acidificao (INUlina) Vermelho Amarelo Vermelho Amarelo Laranja/ Laranja/ RAF D-rafinose 3,12 Acidificao (RAFinose) Vermelho Amarelo Vermelho Amarelo Laranja/ Laranja/ AMD amido (2) 2,56 acidificao (AmiDo) Vermelho Amarelo Vermelho Amarelo GLYG glicognio 1,28 acidificao (GLIcoGnio) Vermelho ou Laranja Amarelo (1) Numa segunda leitura aps 24 horas de incubao, pode-se notar um depsito nos tubos onde foram adicionados os reagentes ZYM A e ZYM B. Este fenmeno normal e no deve ser levado em considerao. (2) A acidificao do amido frequentemente menor que a dos outros acares. (3) Uma colorao rosa plido obtida aps 10 minutos deve ser considerada negativa.

x As quantidades indicadas podem ser ajustadas em funo dos ttulos das matrias-primas. x Algumas cpulas contm componentes de origem animal, nomeadamente peptonas.
PROCEDIMENTO QUADRO DE IDENTIFICAO p. p. I II BIBLIOGRAFIA p. III

QUADRO DE SMBOLOS

p. IV

A bioMrieux, o logotipo azul, API e apiweb so marcas utilizadas, depositadas e/ou registadas, propriedade exclusiva da bioMrieux, SA ou de uma das suas filiais. As outras marcas e nomes de produtos mencionados neste documento so marcas comerciais dos respectivos proprietrios.
Brasil: Distribudo por bioMrieux Brasil, S.A. - Estrada do Mapu, 491 - Jacarepagu - R.J. - CEP 22710-261 CNPJ: 33.040.635/0001-71 Atendimento ao Consumidor Tel.: 0800-264848 Prazo de Validade, N de Lote, N de Registro de Ministrio da Sade e Responsvel Tcnico: VIDE EMBALAGEM

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Streptococcaceae PI 20 Strep 20 . , . . API 20 Strep 20 . , , . , , . . pH. . ( 25 ) : - 25 API 20 Strep - 25 - 25 API GP Medium - 25 - 1 API 20 Strep . API GP Medium 2 ml L- 0.5 g (/ ) 20 g 5g 0.5 g 0.17 g 1000 ml pH : 7.4 - 7.6 / - API Suspension Medium, 2 ml (. 70 700) - : NIN (. 70 491) VP 1 + VP 2 (. 70 422) ZYM A (. 70 494) ZYM B (. 70 493) - Mineral oil (. 70 100) - McFarland Standard (. 70 900) 4 DENSIMAT (. 99 234) - PI 20 Strep (. 20 690) apiweb TM (. 40 011) ( bioMrieux) - Columbia (. 43 041) - Schaedler () - - PSIpettes - - - - x in vitro . x . x . / . ( ). x , . . "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline ". , "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH ", . x . x , . x : , , . x ZYM B.

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x : - . - ( ). - . - . - . - . x . . x , , , , , . 2-8C . ( ) API 20 Strep . . Streptococcaceae (Gram, ) : x (21 ). x ( 1) 0.3 ml . . x Columbia ( 2) ( ). x 24 ( 2 ) 36C 2C . 1 : - 24 . , 48 . ( 48 ), : - 1 ml Schaedler 36C 2C 5 . - Columbia . .
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- 18-24 36C 2C . 2 : , 2 . x ( ) 5 ml [ (.. Cl2, CO2, .)] . x . ( , ). x . x . x API Suspension Medium (2 ml) " " 2 ml . x , . x 4 McFarland. . x ( VP ADH), , ( PSIpette ) : - VP LAP : 100 l . - ADH : . x ( RIB GLYG): - API GP Medium " " ( 0.5 ml). . - . x (ADH GLYG) . x . x 36C 2C 4 - 4 24 ( 2 ) , . 4 : x : - VP : 1 VP 1 VP 2. - HIP : 2 NIN. - PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL LAP : 1 ZYM A ZYM B (*). (*) ZYM B .
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: 21 . - 4. 0. , . , . , 1. Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 : 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

, ATCC 700400 . x 10 , . , (10 1000 W) PYRA LAP. : - x  -  - : 24 , 24 , ESC, ADH, RIB GLYG. (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) VP. .

. x : , 3 1, 2 4. , 7 . x : (V 7.0) * : - . * apiweb TM : - 7 .

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

* . x 4.5 5.5 McF DENSIMAT. x : - 4 VP LAP - 24 ADH GLYG. x Columbia . . x 24 : 3782 x API 20 Strep : ( - 93.4 % ( ). ). 3.2 % . 3.4 % . . x Streptococcus porcinus Streptococcus agalactiae. x . . , . ( x 4 : ) 2336 . : - 87.9 % ( ). - 5.7 % . - 6.4 % .
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(mg/.)

VP 1 + VP 2 / 10 (3) -

VP

1,9

(Voges Proskauer) ( )

NIN / 10
HIP 0,4 / / - 4 24 4 24 ZYM A + ZYM B / 10 (PYRA LAP) (1) , 4 24 / / / / / / / / / 4 24 / / / / / / / / /

ESC

1,16 0,152

- (E)

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG

- 6--2-DD- ASBI 2-D- 2-naphthyl phosphate L--- L- D- L- D- D- D- ( ) D- D- (2)

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9 1,4 1,4 1,36 1,36 1,4 1,32 5,12 3,12 2,56 1,28

D- - - () () () () () () () () (A) ()

(1) 24 , ZYM A ZYM B . . (2) . (3) 10 .

x . x , .
. I . II . III . IV

bioMrieux, , API apiweb , / bioMrieux SA . .

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Identifieringssystem fr Streptococcaceae och nrbeslktade organismer SAMMANFATTNING OCH FRKLARING API 20 Strep r ett standardiserat system som kombinerar 20 biokemiska tester som ger omfattande mjligheter. Det mjliggr grupp- eller artidentifiering av de flesta streptokocker och enterokocker, samt de vanligaste nrbeslktade organismerna. En fullstndig lista ver de organismer som r mjliga att identifiera med hjlp av detta system terfinns i Identifieringstabellen, i slutet av denna bipacksedel. METOD API 20 Strep-strips bestr av 20 mikrobrunnar innehllande dehydrerade substrat fr att pvisa enzymatisk aktivitet eller jsning av socker. De enzymatiska testerna inokuleras med en koncentrerad suspension av organismer, frn renkultur, vilken rekonstituerar enzymsubstraten. Under inkubationen frambringas metaboliska frgfrndringar som antingen upptrder spontant eller framkallas genom tillsats av reagenser. Jsningstesterna inokuleras med ett berikat medium som rehydrerar sockersubstraten. Jsning av kolhydrater detekteras genom omslag i pH-indikatorn. Reaktionerna avlses i enlighet med Avlsningstabellen och identifiering grs med hjlp av Analytical Profile Index, eller med hjlp av programvaran fr identifiering. KITETS INNEHLL (Kit fr 25 tester) - 25 API 20 Strep strips - 25 inkubationsboxar - 25 ampuller med API GP Medium - 25 rapportblad - 1 bipacksedel INNEHLLSDEKLARATION Stripset API 20 Strep-stripsets innehll framgr av Avlsningstabellen i denna bipacksedel. Medium API GP Medium 2 ml L-cystin Trypton (av nt/svin) Natriumklorid Natriumsulfit Fenolrtt Avmineraliserat vatten pH : 7,4 7,6 0,5 g 20 g 5g 0,5 g 0,17 g upp till 1000 ml REAGENSER OCH NDVNDIGT MATERIAL (SOM INTE MEDFLJER) Reagenser/Instrument - API Suspensionsmedium, 2 ml. (Art.nr. 70 700) - Reagenser: NIN (Art.nr. 70 491) VP 1 + VP 2 (Art.nr. 70 422) ZYM A (Art.nr. 70 494) ZYM B (Art.nr. 70 493) - Mineralolja (Art.nr. 70 100) - McFarland Standard (Art.nr. 70 900) nr 4 p skalan eller DENSIMAT (Art.nr. 99 234) - API 20 Strep Analytical Profile Index (Art.nr. 20 690) eller apiweb TM programvara fr identifiering (Art. nr. 40 011) (kontakta bioMrieux) - Columbia blodagar plattor (Art.nr. 43 041) - Schaedler buljong (valfritt) Material - Provtagningspinnar - Pipetter eller PSIpettes - Ampullstll - Ampullskydd - Anaerobt krl - Allmn utrustning fr mikrobiologiskt laboratorium FRSIKTIGHETSTGRDER x Anvnds fr in vitro-diagnostik och mikrobiologisk kontroll. x Endast fr professionell anvndning. x Detta kit innehller produkter av animaliskt ursprung. Certifierade data angende ursprunget och/eller hlsotillstndet hos djuren garanterar inte total frnvaro av verfrbara patogena agens. Vi rekommenderar drfr att dessa produkter behandlas som potentiellt infektisa och handhas enligt sedvanliga frsiktighetstgrder (ska inte frtras eller inandas). x Alla prover, odlingar av mikroorganismer och inokulerade produkter skall anses infektisa och behandlas p ett lmpligt stt. Sterilteknik och vanliga frsiktighetstgrder fr att handha den speciella gruppen av bakterier skall iakttas under hela proceduren. Se "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline Aktuell revidering". Fr ytterligare information angende frsiktighetstgrder vid hantering, se Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Senaste upplagan", eller de f.n. gllande reglerna i det aktuella landet. x Anvnd inte reagenser efter sista frbrukningsdatum. x Kontrollera fre anvndning att frpackning och komponenter r intakta. x Anvnd inte strips som har blivit skadade: med deformerade kupoler, ppen torkmedelspse etc. x D en ny ampull med ZYM B reagens ppnas rekommenderas att ett test fr kvalitetskontroll utfrs.

Den angivna mngden kan justeras beroende p titern hos de anvnda rmaterialen.

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xppna ampullerna frsiktigt enligt fljande: - Placera ampullen i ampullskyddet. - Hll den skyddade ampullen i vertikal position med en hand (det vita plastlocket uppt). - Tryck ner locket s lngt som mjligt. - Placera tumspetsen p den rfflade delen av locket och pressa framt fr att bryta av ampulltoppen. - Ta ut ampullen frn ampullskyddet och lgg skyddet t sidan fr senare anvndning. - Ta frsiktigt av locket. x Data angende prestanda som presenterats har erhllits med hjlp av den metod som anges i denna bipacksedel. Varje ndring i utfrandet kan pverka resultaten. x Tolkningen av testresultaten skall gras med hnsyn till patientens anamnes, provkllan, kolonial och mikroskopisk morfologi hos stammen och, om ndvndigt, resultaten av andra utfrda tester, speciellt antibiotikaknslighet. FRVARING Strips och medier br frvaras vid 2-8C fram till sista frbrukningsdatum som anges p frpackningen. PROVER (INSAMLING OCH PREPARERING) API 20 Strep r inte avsett fr direkt anvndning med kliniska eller andra prover. Mikroorganismerna som ska identifieras mste frst isoleras p ett lmpligt medium i enlighet med standardiserade mikrobiologiska tekniker. BRUKSANVISNING Val av kolonier Nr mikroorganismen som ska identifieras har isolerats och verifierats som medlem i familjen Streptococcaceae (Gram-, katalastest): x Anteckna typ av hemolys p rapportbladet (21:a testet). x Plocka en vlisolerad koloni (OBS 1) och suspendera den i 0,3 ml sterilt vatten. Homogenisera vl. x Flda en Columbia frblodsagarplatta (OBS 2) med denna lsning (eller gr ett sterilt utstryk p hela agarytan). x Inkubera plattan i 24 timmar ( 2 timmar) vid 36C 2C under anaeroba frhllanden. OBS 1: -hemolytiska streptokocker och enterokocker bildar tillrckligt stora kolonier efter 24 timmars inkubation. Fr andra streptokocker r det frdelaktigt att vlja ut en koloni efter 48 timmars inkubation. Fr krvande stammar (bildar minimala kolonier efter 48 timmars inkubation) rekommenderas fljande procedur: - Odla kolonin i 1 ml Schaedler buljong vid 36C 2C i 5 timmar. - Flda en Columbia frblodsagarplatta med hela kulturen. Avlgsna verfldig vtska. - Inkubera plattan i 18-24 timmar vid 36C 2C under anaeroba frhllanden. OBS 2: Vid misstanke om pneumokocker br 2 agarplattor prepareras fr att erhlla tillrcklig tillvxt.

Preparering av stripset x Gr i ordning en inkubationsbox (platta och lock) och frdela ca 5 ml destillerat vatten eller avmineraliserat vatten [eller annat vatten utan tillsatser och kemikalier som kan utveckla gaser (t.ex. Cl2, CO2, etc.)] till hligheterna p plattan fr att skapa en fuktig atmosfr. x Anteckna stambeteckningen p den frlngda fliken p plattan. (Anteckna inte beteckningen p locket eftersom det kan komma att frlggas under arbetet). x Ta ut stripset ur dess frpackning. x Placera stripset i inkubationsboxen. Preparering av inokulatet x ppna ampullen med API Suspension Medium (2 ml) som anvisat i avsnittet Frsiktighetstgrder eller anvnd ett annat rr innehllande 2 ml destillerat vatten utan tillsatser. x Anvnd en bomullstopp och skrda hela kulturen frn den tidigare preparerade subkulturplattan. x Bered en koncentrerad lsning med turbiditet hgre n 4 McFarland. Suspensionen mste anvndas direkt efter beredning. Inokulering av stripset x Frdela suspensionen p frsta halvan av stripset (VP till ADH testerna), undvik att det bildas bubblor (luta stripset lite framt och placera spetsen p pipetten eller PSIpetten mot sidan av kupolen): - Fr testerna VP till LAP: frdela ca 100 l till varje kupol. - Fr ADH testet: fyll endast brunnen. x Fr andra halvan av stripset (testerna RIB till GLYG): - ppna en ampull API GP Medium som anvisat i stycket Frsiktighetstgrder och verfr resten av lsningen till ampullen (ca 0,5 ml). Blanda vl. - Den nya suspensionen frdelas endast till brunnarna. x Fyll kupolerna till de understrukna testerna (ADH till GLYG) med mineralolja tills det att det bildas en konvex yta. x Placera locket p plattan. x Inkubera vid 36C 2C under aeroba frhllanden i 4 4 timmar fr att erhlla en frsta avlsning och i 24 timmar ( 2 timmar) fr att gra en andra avlsning, om det r ndvndigt. AVLSNING OCH TOLKNING Avlsning av stripset Efter 4 timmars inkubation: x Tillstt reagenserna: - VP test: 1 droppe av bde VP 1 och VP 2. - HIP test: 2 droppar NIN. - PYRA-, DGAL-, GUR-, GAL-, PAL- och LAP-tester: 1 droppe av bde ZYM A och ZYM B (*). (*) Det rekommenderas att varje ampull med ZYM B kontrolleras innan den anvnds fr frsta gngen. Fr att, i avsikt att eliminera eventuellt defekt reagens, gra denna kontroll r stammen ATCC 700400 att fredra enligt avsnittet Kvalitetskontroll. x Vnta 10 minuter och avls sedan reaktionerna enligt Avlsningstabellen. Om det r ndvndigt, utstt stripset fr starkt ljus (10 sekunder med 1000 W lampa) fr att avfrga eventuellt reagensverskott i brunnarna PYRA till LAP.

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terinkubera i fljande fall: - Lg diskriminering; - Oacceptabel eller osker profil; - Om profilen anges med fljande notering: IDENTIFIERING OGILTIG FRE 24 TIMMARS INKUBATION I s fall, ls om reaktionerna ESC, ADH, och RIB till GLYG efter 24 timmar. Avls inte de enzymatiska reaktionerna igen (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) och VP. Anteckna resultaten p rapportbladet. Tolkning Identifieringen grs med den numeriska profilen. x Bestmning av den numeriska profilen: P rapportbladet delas testet upp i grupper om tre, varp varje grupp tilldelas ett talvrde: 1, 2 eller 4. Genom att addera de vrden som motsvarar positiva reaktioner inom varje grupp, erhlls en 7-siffrig numerisk profil.

x Identifiering: Denna utfrs med hjlp av databasen (V7.0) * med Analytical Profile Index: - Leta upp den numeriska profilen i listan ver profiler. * med apiweb TM identifieringsprogrammet: - Skriv in den 7-siffriga numeriska profilen manuellt via tangentbordet.

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

OBS: Den hemolytiska reaktionen utgr det 21:a testet. -hemolys anses som positiv med ett numeriskt vrde p 4. Alla andra hemolytiska reaktioner anses som negativa med ett numeriskt vrde p 0. Inte desto mindre kan detta test vara srskiljande vid identifieringen av vissa arter.

KVALITETSKONTROLL Medier, strips och reagenser r systematiskt kvalitetskontrollerade vid olika steg i tillverkningen. Fr de anvndare som nskar utfra egna tester fr kvalitetskontroll av stripset r anvndning av stammen 1. Streptococcus equi spp zooepdemicus ATCC 700400 eller fljande stam att fredra: 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

* Detta resultat kan variera beroende p odlingsmediet som anvnds. x Inokulatet r anpassat till mellan 4,5 och 5,5 McF med hjlp av DENSIMAT. x Profiler som erhlls efter : - 4 timmars inkubation fr testerna VP till LAP - 24 timmars inkubation fr testerna ADH till GLYG. x Stammar odlade p Columbia frblodsagar. Det r anvndarens ansvar att utfra kvalitetskontroll i enlighet med de lokalt tillmpade bestmmelserna. METODENS BEGRNSNINGAR x API 20 Strep r ett system som endast r avsett fr identifieringen av de arter som ingr i databasen (se Identifieringstabellen i slutet av denna bipacksedel). Det kan inte anvndas fr identifiering av andra mikroorganism eller fr att utesluta deras nrvaro. x Vissa stammar av Streptococcus porcinus kan identifieras som Streptococcus agalactiae. x Endast rena kulturer frn en enda organism br anvndas. FRVNTADE RESULTAT Intervallet fr de frvntade resultaten fr de olika biokemiska reaktionerna framgr av Identifieringstabellen i slutet av denna bipacksedel. PRESTANDA x Efter 4 timmars inkubation : 2336 kommersiellt tillgngliga stammar och stammar av olika ursprung tillhrande arter inkluderade i databasen testades: - 87,9 % av stammarna blev korrekt identifierade (med eller utan kompletterande tester). - 5,7 % av stammarna identifierades inte. - 6,4 % av stammarna blev felidentifierade. x Efter 24 timmars inkubation : 3782 kommersiellt tillgngliga stammar och stammar av olika ursprung tillhrande arter inkluderade i databasen testades: - 93,4% av stammarna blev korrekt identifierade (med eller utan kompletterande tester). - 3,2% av stammarna identifierades inte. - 3,4% av stammarna blev felidentifierade. AVFALLSHANTERING Avfallshantering av anvnda eller oanvnda reagenser, liksom av andra kontaminerade engngsmaterial ska ske i enlighet med procedurer fr infektisa eller potentiellt infektisa produkter. Det r varje laboratoriums ansvar att handha avfalls- och avloppsprodukter efter typ och farlighetsgrad och behandla och avlgsna dem (eller f dem behandlade och avlgsnade) i enlighet med alla tillmpliga freskrifter.

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AVLSNINGSTABELL
TEST AKTIVA INGREDIENSER MGD (mg/kup.) REAKTIONER/ENZYMER acetoinbildning (Voges Proskauer) hydrolys (HIPpursyra) RESULTAT NEGATIVT POSITIVT VP 1 + VP 2 / vnta 10 min (3) Frgls Rosa-Rd

VP HIP

Natriumpyruvat

1,9 0,4

hippursyra

NIN / vnta 10 min Frgls/Svagt bl Mrkbl/Violett Blaktig-gr 4 timmar 24 timmar Frgls Svagt gul Ljusgr 4 timmar Svart Gr 24 timmar Svart Frgls Svagt gul

ESC

esculin jrncitrat

1,16 0,152

-glucosidashydrolys (ESCulin)

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG

pyroglutaminsyra-naftylamid 6-bromo-2-naftylDD-galaktopyranosid naftol ASBIglukuronsyra 2-naftylD-galaktopyranosid 2-naftylfosfat L-leucin--naftylamid L-arginin D-ribos L-arabinos D-mannitol D-sorbitol D-laktos (av nt) D-trehalos inulin D-raffinos strkelse (2) glykogen

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9 1,4 1,4 1,36 1,36 1,4 1,32 5,12 3,12 2,56 1,28

PYRrolidonylArylamidas D-GALaktosidas -GlUkuRonidas -GALaktosidas ALKalisk fosfatas Leucine AminoPeptidas Arginin DiHydrolas

ZYM A + ZYM B / 10 min (PYRA till LAP) (1) om ndvndigt, avfrga med starkt ljus Frgls eller Orange Mycket svagt orange Frgls Frgls Frgls eller Mycket svagt violett Frgls eller Mycket svagt violett Frgls Gul 4 timmar Rd Rd Rd Rd Rd Rd Rd Rd Rd 24 timmar Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd 4 timmar Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange /Gul Violett Bl Violett Violett Orange Rd 24 timmar Gul Gul Gul Gul Gul Gul Gul Gul Gul

surgrning (RIBos) surgrning (ARAbinos) surgrning (MANnitol) surgrning (SORbitol) surgrning (LAktos) surgrning (TREhalos) surgrning (INUlin) surgrning (RAFfinos) surgrning (RAFinos) surgrning (GLYkoGen)

Rd eller Orange

Klargul

(1) Under en andra avlsning efter 24 timmars inkubation kan en avlagring upptckas i brunnarna dr ZYM A och ZYM B reagenserna blivit tillsatta. Det r normalt och skall inte tas i beaktande. (2) Surgrningen av strkelse r ofta svagare n hos andra kolhydrater. (3) En svagt rosa frg som erhlls efter 10 minuter skall anses som negativ.

x Den angivna mngden kan justeras beroende p titern hos de anvnda rmaterialen. x Vissa kupoler innehller produkter av animaliskt ursprung, i synnerhet peptoner.
METOD IDENTIFIERINGSTABELL s. s. I II REFERENLITTERATUR SYMBOLER s. III s. IV

bioMrieux, den bl logotypen, API and apiweb r patentskta och/eller registrerade varumrken som tillhr och anvnds av bioMrieux SA eller ngot av dess dotterbolag. Alla vriga namn eller varumrken tillhr dess respektive gare.

bioMrieux SA au capital de 12 029 370 RCS LYON 673 620 399 69280 Marcy-l'Etoile / France Tel. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90
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Tryckt i Frankrike

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Identifikationssystem for Streptococcaceae og relaterede organismer RESUM OG FORKLARING API 20 Strep er et standardiseret system, som kombinerer 20 biokemiske tests med vidtrkkende muligheder. Det muliggr identifikation af grupper eller species for de fleste streptokokker og enterokokker og de mest almindeligt forekommende relaterede organismer. Den komplette fortegnelse over de organismer, som kan identificeres med dette system, findes i identifikationstabellen nederst p denne indlgsseddel. PRINCIP API 20 Strep strip'en bestr af 20 mikrorr, der indeholder dehydrerede substrater til pvisning af enzymatisk aktivitet eller fermentation af sukker. De enzymatiske tests inokuleres med en tt opslemning af organismer fremstillet af renkultur, som anvendes til at rekonstituere de enzymatiske substrater. Under inkubationen danner metabolismen farveforandringer, der enten sker spontant eller afslres ved tilstning af reagenser. Fermentationstests inokuleres med et beriget medium, som rehydrerer sukkersubstraterne. Fermentation af kulhydrater detekteres ved en ndring i pH-indikatoren. Reaktionerne aflses i henhold til aflsningstabellen, og identifikationen opns ved opslag i det analytiske profilindeks eller ved anvendelse af identifikationssoftwaren. KITTETS INDHOLD (KIT TIL 25 PRVER) - 25 API 20 Strep strips - 25 inkubationssker - 25 ampuller med API GP Medium - 25 resultatark - 1 indlgsseddel SAMMENSTNING Strip Sammenstningen af API 20 Strep stripen er angivet i aflsningstabellen p denne indlgsseddel. Medium API GP Medium 2 ml L-cystin 0,5 g Trypton (okse-/svine-oprindelse) 20 g Natriumklorid 5g Natriumsulfit 0,5 g Fenolrdt 0,17 g Demineraliseret vand til ialt 1000 ml pH : 7.4 - 7.6 NDVENDIGE MEN IKKE MEDFLGENDE REAGENSER OG MATERIALER Reagenser / instrumenter - API Suspension Medium, 2 ml (Ref. 70 700) - Reagenser: NIN (Ref. 70 491) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) ZYM A (Ref. 70 494) ZYM B (Ref. 70 493) - En mineralsk olie (Ref. 70 100) - McFarland Standard (Ref. 70 900) punkt 4 p skalaen eller DENSIMAT (Ref. 99 234) - API 20 Strep Analytisk ProfiliIndeks (Ref. 20 690) eller apiweb TM identifikationssoftware (Ref. 40 011) (sprg bioMrieux) - Columbia blodagarplader (Ref. 43 041) - Schaedler bouillon (valgfrit) Materiale - Vatpinde - Pipetter eller PSIpetter - Ampulstativ - Ampulbeskytter - Anaerob beholder - Almindeligt laboratorieudstyr til mikrobiologi ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER x Kun til in vitro diagnostisk anvendelse og mikrobiologisk kontrol. x Kun til professionel brug. x Dette kit indeholder produkter af animalsk oprindelse. Certificeret kendskab til dyrenes oprindelse og/eller sundhedstilstand er ikke nogen fuldgyldig garanti for, at der ikke er indeholdt nogen overfrbare patogene stoffer. Det anbefales derfor, at disse produkter behandles som potentielt smittefarlige og hndteres under iagttagelse af de normale sikkerhedsforanstaltninger (m ikke indtages eller indndes). x Alle prver, bakteriekulturer og podede produkter skal betragtes som smittefarlige og hndteres i overensstemmelse hermed. Der skal anvendes aseptisk teknik og sdvanlige forholdsregler for hndtering af den undersgte bakteriekultur gennem hele denne procedure. Se venligst "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Gldende revision". For yderligere forsigtighedsforanstaltninger ved hndtering henvises til "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories CDC/NIH Seneste udgivelse, eller de bestemmelser, der aktuelt anvendes i det enkelte land. x Reagenserne m ikke anvendes efter udlbsdatoen. x Kontrollr inden brug, at emballage og komponenter er intakte. x Brug ikke strips, der er beskadiget: deformerede brnde, pose med trremiddel bnet, osv. x Det anbefales at udfre en kvalitetskontroltest, nr en ny ampul ZYM B reagens bnes.

De angivne mngder kan justeres, afhngigt af titeren for de anvendte rmaterialer.

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x bn forsigtigt ampullerne som flger: - Anbring ampullen i ampulbeskytteren. - Hold den beskyttede ampul i den ene hnd i lodret stilling (med den hvide plasthtte verst). - Tryk htten s langt ned som muligt. - Anbring spidsen af tommelfingeren p httens rillede del og tryk udefter for at knkke toppen af ampullen. - Tag ampullen ud af ampulbeskytteren og lg beskytteren til side til senere brug. - Tag forsigtigt htten af. x De fremlagte prstationsdata blev fundet ved anvendelse af den procedure, der er angivet p denne indlgsseddel. Enhver ndring eller modifikation af denne procedure kan pvirke resultaterne. x Ved fortolkning af testresultaterne skal der tages hjde for patientens sygehistorie, prvens kilde, koloniens og mikroskopiens morfologi for stammen samt om ndvendigt resultaterne af eventuelle andre udfrte prver, specielt de antibakterielle flsomhedsmnstre. OPBEVARINGSFORHOLD Strips og medier skal opbevares ved 2-8C indtil den udlbsdato, der er angivet p emballagen. PRVER (OPSAMLING OG PRPARERING) API 20 Strep m ikke bruges direkte sammen med kliniske eller andre prver. De mikroorganismer, der skal identificeres, skal frst isoleres p et egnet dyrkningsmedium i overensstemmelse med mikrobiologiske standard teknikker. BRUGSANVISNING Udvlgelse af kolonier Nr den mikroorganisme, der skal identificeres, er blevet isoleret og verificeret som et medlem af familien Streptococcaceae (Gram, katalasetest) s : x Notr hmolysetypen p resultatarket (21. test). x Udtag en velisoleret koloni (note 1) og suspendr den i 0,3 ml sterilt vand. Homogenisr den omhyggeligt. x Overhld en Columbia-freblodsagarplade (note 2) med denne suspension (eller opsaml aseptisk hele agarens overflade). x Inkubr pladen i 24 timer ( 2 timer) ved 36C 2C under anaerobe betingelser. Note 1 : -hmolytiske streptokokker og enterokokker producerer tilstrkkeligt store kolonier efter 24 timers inkubation. For andre streptokokker er det tilrdeligt at selektere en koloni efter 48 timers inkubation. For krsne stammer (der producerer meget sm kolonier efter 48 timer) anbefales flgende fremgangsmde: - Dyrk kolonien i 1 ml Schaedler kdafkog ved 36C 2C i 5 timer. - Overhld en Columbia freblodsagarplade med hele kulturen. Fjern eventuel overskydende vske. - Inkubr pladen i 18-24 timer ved 36C 2C under anerobe betingelser.

Note 2 : I tilflde af mistanke om pneumokokker tilrdes det at prparere 2 agarplader for at opn tilstrkkelig vkst. Prparering af strip'en x Prparer en inkubationsske (skl og lg) og fordel cirka 5 ml destilleret eller demineraliseret vand [eller eventuelt vand uden tilstningsstoffer eller kemikalier, der kan frigive gasser (f.eks. Cl2, CO2, etc.)] i bakkens fordybninger for at skabe en fugtig atmosfre. x Notr stammereferencen p bakkens forlngede klap. (Notr ikke referencen p lget, da det kan blive flyttet under proceduren). x Fjern strip'en fra dens individuelle pakning. x Anbring strip'en i inkubationssken. Prparering af inokulum x bn en ampul med API Suspensionsmedium (2 ml) som angivet i afsnittet "Advarsler og forholdsregler" eller brug et andet rr med 2 ml destilleret vand uden tilstninger. x Benyt en vatpind til at hste hele kulturen fra den forprparerede subkulturplade. x Prparer en tt oplsning med en turbiditet p mere end 4 McFarland. Denne suspension skal anvendes umiddelbart efter prpareringen. Inokulation af strip'en x Fordel denne suspension i den frste halvdel af strip'en (test VP til ADH), og undg, at der dannes bobler (vip strip'en let fremad og anbring spidsen af pipetten eller PSIpetten mod siden af brnden) : - For tests VP til LAP : fordel cirka 100 l i hver brnd. - For ADH testen : fyld kun rret. x I den anden halvdel af strip'en (tests RIB til GLYG): - bn en ampul med API GP Medium som angivet i afsnittet "Advarsler og forholdsregler" og overfr resten af suspensionen til den (ca. 0,5 ml). Bland omhyggeligt. - Fordel denne nye suspension udelukkende i rrene. x Fyld brnden i de understregne tests (ADH til GLYG) med mineralsk olie for at danne en konveks menisk. x St lget p sklen. x Inkubr ved 36C 2C under aerobe betingelser i 4 - 4 time for at opn en frste aflsning og i 24 timer ( 2 timer) for at opn en ekstra aflsning om ndvendigt. AFLSNING OG FORTOLKNING Aflsning af strip Efter 4 timers inkubation: x tilst reagenserne: - VP-test : 1 drbe af hvert af reagenserne VP 1 og VP 2. - HIP-test : 2 drber NIN. - PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL og LAP tests : 1 drbe af hvert af reagenserne ZYM A og ZYM B (*) (*) Det anbefales at kontrollere hver ampul ZYM B, inden den bnes frste gang. Til udfrelse af en sdan kontrol anbefales det at bruge stammen ATCC 700400 nvnt i afsnittet om kvalitetskontrol for at eliminere defekte reagenser. x Vent 10 minutter og afls derefter reaktionerne ved at referere til Aflsningstabellen. Udst om ndvendigt strip'en for kraftigt lys (10 sekunder med en 1000 W lampe) for at affarve eventuelle overskydende reagenser i rrene PYRA til LAP.

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Reinkubation er ndvendig ved flgende forhold: - lav diskrimination, - uacceptabel eller tvivlsom profil, - eller hvis flgende bemrkning angives for profilen: IDENTIFIKATION IKKE GYLDIG FR EFTER 24 TIMERS INKUBATION I s fald genaflses reaktionerne ESC, ADH og RIB til GLYG efter 24 timer. Genafls ikke de enzymatiske reaktioner (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) og VP. Notr alle reaktioner p resultatarket. Fortolkning Identifikation opns med den numeriske profil. x Bestemmelse af den numeriske profil : P resultatarket er testene opdelt i grupper p 3, og en vrdi p 1,2 eller 4, er angivet for hver. Ved at addere de vrdier, der svarer til positive reaktioner inden for hver gruppe, opns et 7-cifret profilnummer.

x Identifikation : Denne udfres ved hjlp af databasen (V7.0) * med Analytisk Profilindeks : - Sl den numeriske profil op i fortegnelsen over profiler. * med apiweb identifikationssoftwaren: - Indtast den 7-cifrede numeriske profil manuelt via tastaturet.

5 240 550 / 5 240 770 Streptococcus mutans

BEMRK: Den hmolytiske reaktion udgr den 21. test: -hmolyse betragtes som positiv ved en numerisk vrdi p 4. Alle vrige hmolytiske reaktioner betragtes som negative med en numerisk vrdi p 0. Alligevel kan denne test vre af afgrende vrdi for identifikation af visse species.

KVALITETSKONTROL Medier, strips og reagenser kontrolleres systematisk p forskellige trin under fremstillingen. For de brugere, der nsker at udfre deres egne kvalitetskontroltests med strip'en er det bedst at anvende stammen 1. Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 eller flgende stamme: 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

* Dette resultat kan variere afhngigt af det anvendte dyrkningsmedium. x Inokulum justeret til mellem 4,5 og 5,5 McF med DENSIMAT. x Profiler opnet efter: - 4 timers inkubation for tests VP til LAP - 24 timers inkubation for tests ADH til GLYG. x Stammer dyrket p Columbia freblodsagar. Det er brugerens ansvar at foretage kvalitetskontrol i overensstemmelse med lokalt gldende bestemmelser. METODENS BEGRNSNINGER x API 20 Strep-systemet er udelukkende beregnet til identifikation af de species, der er medtaget i databasen (se Identifikationtabel nederst p denne indlgsseddel). Det kan ikke benyttes til at identificere nogen andre mikroorganismer eller til at udelukke, at de er til stede. x Visse stammer af Streptococcus porcinus kan identificeres som Streptococcus agalactiae. x Der br kun anvendes rene kulturer af en enkelt organisme. FORVENTEDE RESULTATER Se Identifikationsoversigten i slutningen af denne indlgsseddel for forventede resultater for de forskellige biokemiske reaktioner. PRSTATIONER x Efter 4 timers inkubation: 2336 kollektionsstammer og stammer af forskellig oprindelse, som hrer til species, der er inkluderet i databasen, blev testet: - 87,9 % af stammerne blev korrekt identificeret (med eller uden supplerende tests). - 5,7 % af stammerne blev ikke identificeret. - 6,4 % af stammerne blev fejlidentificeret. x Efter 24 timers inkubation: 3782 kollektionsstammer og stammer af forskellig oprindelse, som hrer til species, der er inkluderet i databasen, blev testet: - 93,4 % af stammerne blev korrekt identificeret (med eller uden supplerende tests). - 3,2 % af stammerne blev ikke identificeret. - 3,4 % af stammerne blev fejlidentificeret. BORTSKAFFELSE AF AFFALD Bortskaf alle brugte eller ubrugte komponenter samt eventuelle andre kontaminerede materialer efter procedurer for infektise eller potentielt infektise produkter. Det er ethvert laboratoriums ansvar at hndtere det affald og spildevand, der opstr, i overensstemmelse med dets type og grad af farlighed, og at behandle og bortskaffe det (eller f det behandlet og bortskaffet) i henhold til gldende forskrifter.

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Dansk - 3

api 20 Strep

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AFLSNINGSTABEL
TESTS AKTIVE INDHOLDSSTOFFER MNGDE (mg/brnd) REAKTIONER/ENZYMER RESULTATER NEGATIVE POSITIVE VP 1 + VP 2 / vent 10 min. (3) Farvels Lyserd-Rd NIN / vent 10 min. HIP hippursyre 0,4 hydrolyse (HIPpursyre) Farvels/Lysebl bl-gr 4 tim. Farvels Lysegul Mrkebl/Violet

VP

natriumpyruvat

1,9

acetoindannelse (Voges-Proskauer)

ESC

esculin ferricitrat

1,16 0,152

-glukosidase hydrolyse (ESCulin)

24 tim. 4 tim. 24 tim. Farvels Sort Sort Gr Lysegul Lysegr ZYM A + ZYM B / 10 min. (PYRA til LAP) (1) affarv om ndvendigt med intenst lys Farvelst eller meget lyst orange Farvels Farvels Farvelst eller meget lyst violet Farvelst eller meget lyst violet Farvels Gul Orange Violet Bl Violet Violet Orange Rd 24 tim. Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd Orange/ Rd 4 tim. Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul Orange/ Gul 24 tim. Gul Gul Gul Gul Gul Gul Gul Gul Gul

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG

pyroglutaminsyre-naftylamid 6-brom-2-naftylDD-galaktopyranosid naftol ASBIglukuronsyre 2-naftyl- Dgalaktopyranosid 2-nafthylfosfat L-leucin--naftylamid L-arginin D-ribose L-arabinose D-mannitol D-sorbitol D-LACtose (okse-oprindelse) D-trehalose inulin D-raffinose stivelse (2) glykogen

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9 1,4 1,4 1,36 1,36 1,4 1,32 5,12 3,12 2,56 1,28

PYRrolidonyl Arylamidase D-GALaktosidase -GlUkuRonidase -GALaktosidase ALkalisk fosfatase Leucin AminoPeptidase Arginin DiHydrolase

4 tim. acidifikation (RIBose) acidifikation (ARAbinose) acidifikation (MANnitol) acidification (SORbitol) acidifikation (LACtose) acidifikation (TREhalose) acidifikation (INUlin) acidifikation (RAFfinose) acidifikation (AmiDon) acidifikation (GLYcoGen) Rd Rd Rd Rd Rd Rd Rd Rd Rd

Rd eller Orange

Strk gul

(1) Under en ekstra aflsning efter 24 timers inkubation kan der observeres en bundfldning i de rr, hvor der er tilsat ZYM A og ZYM B-reagenser. Dette fnomen er helt normalt og krver ikke srlige foranstaltninger. (2) Acidifikationen af stivelse er ofte svagere end for andre sukkerstoffer. (3) En svagt lyserd opnet farve efter 10 minutter skal betragtes som negativ.

x De angivne mngder kan justeres, afhngigt af titeren for de anvendte rmaterialer. x Visse brnde indeholder produkter af animalsk oprindelse, specielt peptoner.
METODE IDENTIFIKATIONSTABEL p. p. I II LITTERATURHENVISNINGER SYMBOLFORTEGNELSE p. III p. IV

bioMrieux, det bl logo, API og apiweb er anvendte, under registrering og/eller registrerede varemrker tilhrende bioMrieux SA eller et af dettes datterselskaber. Alle andre navne eller varemrker er den respektive ejers ejendom.

bioMrieux SA au capital de 12 029 370 RCS LYON 673 620 399 69280 Marcy-l'Etoile / France Tel. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90
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Trykt I Frankrig

20 600

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20 Strep

IVD

System do identyfikacji Streptococcaceae i drobnoustrojw spokrewnionych WPROWADZENIE System API 20 Strep jest wystandaryzowanym zestawem zawierajcym 20 testw biochemicznych, ktry daje szerokie moliwoci. Umoliwia on identyfikacj grup lub gatunkw wikszoci paciorkowcw i enterokokw oraz najbardziej powszechnych spokrewnionych drobnoustrojw. Pena lista organizmw, ktre mona zidentyfikowa przy uyciu tego systemu jest podana na kocu niniejszej instrukcji w Tabeli Identyfikacyjnej. ZASADA DZIAANIA Pasek API 20 Strep skada si z 20 mikroprobwek zawierajcych odwodnione substraty umoliwiajce ocen aktywnoci enzymatycznej lub fermentacji cukrw. Testy enzymatyczne posiewa si gst zawiesin drobnoustrojw, odtwarzajc substraty enzymatyczne, przygotowan z czystej hodowli. Procesy metaboliczne zachodzce podczas inkubacji powoduj zmiany koloru, ktre s albo spontaniczne, lub wywoane przez dodanie odczynnikw. Testy fermentacyjne posiewa si podoem wzbogaconym, ktre uwadnia substraty cukrowe. Fermentacja wglowodanw jest wykrywana dziki zmianom barwy wskanikw pH. Po odczytaniu reakcji wedug Tabeli Odczytw, otrzymuje si identyfikacj przez porwnanie z Ksik Kodw lub stosujc program komputerowy. ZAWARTO ZESTAWU (Zestaw na 25 testw) - 25 paskw API 20 Strep - 25 komr inkubacyjnych - 25 ampuek API GP Medium - 25 kart wynikw - 1 instrukcja SKAD Pasek Skad paska API 20 Strep podano w tej instrukcji w Tabeli Odczytw. Podoe API GP Medium 2 ml L-cystyna Trypton (woowy/wieprzowy) Chlorek sodu Siarczyn sodu Czerwie fenolowa Woda demineralizowana pH : 7.4 - 7.6 0.5 g 20 g 5g 0.5 g 0.17 g do 1000 ml WYPOSAENIE WYMAGANE NIE NALECE DO ZESTAWU Odczynniki / Aparatura - API Suspension Medium, 2 ml (Ref. 70 700) - Odczynniki : NIN (Ref. 70 491) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) ZYM A (Ref. 70 494) ZYM B (Ref. 70 493) - Olej mineralny (Ref. 70 100) - Standard McFarlanda (Ref. 70 900) punkt 4 w/g skali lub w DENSIMACIE (Ref. 99 234) - Ksika Kodw dla API 20 Strep (Ref. 20 690) lub oprogramowanie komputerowe do identyfikacji apiweb TM (Ref. 40 011) (skontaktuj si z bioMrieux) - Pytki z agarem Columbia z krwi (Ref. 43 041) - bulion Schaedlera (nie obowizkowo) Materiay - Wymazwek - Pipety lub PSIpety - Osona na ampuk - Statyw do ampuek - Pojemnik do hodowli beztlenowcw - Wyposaenie zazwyczaj stosowane w laboratorium mikrobiologicznym RODKI OSTRONOCI x Do diagnostyki in vitro i kontroli mikrobiologicznej. x Do wykorzystania wycznie przez profesjonalistw. x Produkt zawiera materiay pochodzenia zwierzcego. wiadectwo pochodzenia i/lub stanu sanitarnego zwierzt nie gwarantuje w peni nieobecnoci czynnikw chorobotwrczych. Dlatego naley obchodzi si z nim zgodnie z zasadami postpowania z materiaem potencjalnie zakanym (nie spoywa i nie wdycha). x Wszystkie prbki pobrane od pacjentw, hodowle bakteryjne i wykorzystane produkty s potencjalnie zakane i powinny by traktowane zgodnie z zalecanymi rodkami ostronoci. Naley stosowa techniki aseptyczne i zwyke procedury obowizujce przy pracy ze szczepami bakteryjnymi zgodnie z "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline Bieca wersja". Dodatkowe rodki ostronoci zawarte s w "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories CDC/NIH Ostatnie wydanie", lub regulowane przepisami waciwymi dla poszczeglnych pastw. x Nie uywa odczynnikw przeterminowanych. x Przed uyciem sprawdzi, czy opakowania poszczeglnych skadnikw s nienaruszone. x Nie uywa paskw uszkodzonych : odksztacone studzienki, otwarta saszetka ze rodkiem odwadniajcym, itd. x Po otwarciu nowej ampuki odczynnika ZYM B naley przeprowadzi kontrol jakoci.

Wskazane stenia mog by regulowane w zalenoci od miana uytego surowego materiau.

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x Ampuki otwiera ostronie w nastpujcy sposb: - Umieci ampuk w osonie. - Trzyma osonit ampuk w jednej rce w pozycji pionowej (bia plastikow nasadk do gry). - Wcisn nasadk do dou tak daleko jak to moliwe. - Umieci kciuk na wyobionej czci nasadki i nacisn od siebie tak, aby odama kocwk ampuki znajdujc si wewntrz nasadki. - Wyj ampuk z osony, ktr naley odoy do kolejnego uycia. - Ostronie zdj nasadk. x W celu osignicia odpowiednich wynikw naley stosowa procedur zawart w opakowaniu. Kada modyfikacja procedury moe wpywa na wyniki. x W interpretacji wynikw testu naley wzi pod uwag histori choroby pacjenta, miejsce pobrania materiau, makro- i mikroskopow morfologi oraz jeli bdzie konieczne, wyniki innych przeprowadzonych testw, szczeglnie lekowraliwoci. PRZECHOWYWANIE Paski i podoa powinny by przechowywane w temperaturze 2-8C do koca daty wanoci podanej na opakowaniu. MATERIA DO BADA (POBIERANIE I OPRACOWANIE) Paski API 20 Strep nie s przeznaczone do bezporednich bada materiau klinicznego lub innych prbek. Identyfikowany mikroorganizm musi by najpierw wyizolowany na podoach hodowlanych zgodnie ze standardowymi technikami mikrobiologicznymi. SPOSB WYKONANIA Wybr kolonii bakteryjnych Po wyizolowaniu mikroorganizmu, ktry ma by identyfikowany sprawdzi, czy naley on do rodziny Streptococcaceae (barwienie metod Grama, test na katalaz): x Zanotowa typ hemolizy na karcie wynikw (21. test). x Pobra dobrze wyizolowan koloni (Uwaga 1) i zawiesi j w 0.3 ml jaowej wody. Dobrze wymiesza. x Zala t zawiesin pytk z agarem Columbia z krwi barani (Uwaga 2) (lub rozprowadzi jaow wymazwk po powierzchni agaru). x Inkubowa pytk przez 24 godziny ( 2 godziny) w 36C 2C w warunkach beztlenowych. UWAGA 1 : Paciorkowce -hemolizujce i enterokoki wytwarzaj wystarczajco due kolonie po 24 godzinach inkubacji. Dla innych paciorkowcw zaleca si, aby wybiera kolonie po 48 godzinach inkubacji. Dla szczepw o wysokich wymaganiach odywczych (wytwarzajcych drobne kolonie po 48 godzinach), zaleca si stosowanie nastpujcej procedury: - Nanie koloni do 1 ml bulionu Schaedlera i hodowa w 36C 2C przez 5 godzin. - Zala otrzyman hodowl pytk z agarem Columbia z krwi barani. Usun nadmiar pynu. - Inkubowa pytk przez 18-24 godzin w 36C 2C w warunkach beztlenowych. UWAGA 2: W przypadku podejrzenia wystpowania pneumokokw, zaleca si przygotowa 2 pytki agarowe, aby otrzyma wystarczajcy wzrost.
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Przygotowanie paska x Przygotowa komor inkubacyjn (podstawk i pokrywk) i nanie okoo 5 ml destylowanej lub demineralizowanej wody [lub jakiejkolwiek wody bez dodatkw lub zwizkw chemicznych, z ktrych mog wydziela si gazy (np. Cl2, CO2, itd.)] na podstawk w ksztacie plastra miodu, w celu wytworzenia komory wilgotnej. x Zanotowa numer szczepu na wyduonej czci podstawki. (Nie notowa numeru na pokrywce, poniewa moe ona ulec zamianie w trakcie bada). x Wyj pasek z indywidualnego opakowania. x Umieci pasek w komorze inkubacyjnej. Przygotowanie inokulum x Otworzy ampuk API Suspension Medium (2 ml) zgodnie z paragrafem "rodki ostronoci lub uy jakkolwiek probwk zawierajc 2 ml wody destylowanej bez dodatkw. x Uywajc wymazwk zebra wszystkie bakterie, ktre wyrosy na pytce z przygotowan hodowl wtrn. x Przygotowa gst zawiesin o zmtnieniu odpowiadajcym gstoci przekraczajcej 4 w skali McFarlanda. Zawiesin t uy natychmiast po sporzdzeniu. Napenianie paska x Zawiesin t nanie do pierwszej czci paska (testy od VP do ADH), unikajc tworzenia pcherzykw (nachyli lekko pasek do przodu i trzyma kocwk pipety lub PSIpety przy ciance wgbienia) : - Do testw od VP do LAP : nanie po okoo 100 l do kadej mikroprobwki. - Dla tetsu ADH: napeni wycznie probwk. x Dla drugiej czci paska (testy od RIB do GLYG): - Otworzy ampuk API GP Medium zgodnie z paragrafem "rodki ostronoci" i przenie do niej reszt zawiesiny (okoo 0.5 ml). Dobrze wymiesza. - Nanie t now zawiesin wycznie do probwek. x Napeni wgbienia podkrelonych testw (od ADH do GLYG) olejem mineralnym, aby utworzy si menisk wypuky. x Przykry podstawk pokrywk. x Inkubowa w 36C 2C w warunkach tlenowych przez 4 - 4 godziny, aby dokona pierwszego odczytu i przez 24 godziny ( 2 godziny), aby dokona drugiego odczytu, jeli jest to konieczne. ODCZYT I INTERPRETACJA Odczyt paska Po 4 godzinach inkubacji: x Doda odczynnikw: - Test VP : po 1 kropli VP 1 i VP 2. - Test HIP : 2 krople NIN. - Testy PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL i LAP : po 1 kropli ZYM A i ZYM B (*). (*) Zalecane jest przeprowadzenie kontroli kadej ampuki ZYM B przed pierwszym uyciem. W celu eliminacji wadliwych odczynnikw naley uy szczepu ATCC 700400 wskazanego w paragrafie Kontrola Jakoci. x Odczeka 10 minut, pniej odczyta wszystkie reakcje przez porwnanie z Tabel Odczytw. Jeli to konieczne, wystawi pasek na dziaanie silnego wiata (10 sekund pod lamp 1000 W), aby odbarwi nadmiar odczynnikw od PYRA do LAP.

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Dalsza inkubacja jest konieczna w nastpujcych przypadkach: - niskiego rozrnienia; - profilu nie do zaakceptowania lub wtpliwego; - jeli profil jest podany z nastpujc uwag: IDENTYFIKACJA NIE DO ZATWIERDZENIA PRZED UPYWEM 24 GODZIN INKUBACJI W tym przypadku, po 24 godzinach, powtrnie odczyta reakcje ESC, ADH i od RIB do GLYG. Nie odczytywa powtrnie reakcji enzymatycznych (HIP, PYRA, DGAL, GUR, GAL, PAL, LAP) i VP. Zapisa wyniki wszystkich reakcji na karcie wynikw. Interpretacja Identyfikacj otrzymuje si z profilu numerycznego. x Okrelanie profilu numerycznego: Na karcie wynikw testy podzielone s na grupy po 3, kady odpowiednio o wartoci 1, 2 lub 4. Przez dodanie do siebie wartoci odpowiadajcych pozytywnym reakcjom w obrbie kadej grupy otrzymuje si 7 cyfrowy profil numeryczny.

x Identyfikacja: Uzyskuje si j uywajc bazy danych (V7.0) * z Ksiki Kodowej: - Odszuka waciwy profil numeryczny na licie profili. * z oprogramowania komputerowego apiweb TM: - Wprowadzi 7 cyfrowy profil numeryczny manualnie przy uyciu klawiatury.

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UWAGA: Reakcja hemolizy stanowi 21. test; -hemoliza jest uwaana za wynik pozytywny z liczbow wartoci rwn 4. Inne wyniki reakcji hemolizy uwaa si za ujemne z wartoci liczbow 0. Niemniej jednak, test ten moe mie warto rozstrzygajc dla identyfikacji niektrych gatunkw.

KONTROLA JAKOCI Podoa, paski i odczynniki s systematycznie poddawane kontroli jakoci na rnym poziomie procesu produkcji. Dla tych uytkownikw, ktrzy chc prowadzi swoj wasn kontrol paskw zaleca si szczep 1. Streptococcus equi spp zooepidemicus ATCC 700400 lub jeden z nastpujcych szczepw: 2. Streptococcus uberis ATCC 700407
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. 1. 2. VP HIP ESC PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH + + + + + + + V V + + + * RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG + + + + + + + + + + + +

* Wynik ten moe si rni w zalenoci od uytego podoa. x Odpowiednia gsto inokulum wyznaczona przy uyciu DENSIMATU zawiera si midzy 4.5 a 5.5 McF. x Profile otrzymane po: - 4 godzinach inkubacji dla testw od VP do LAP - 24 godzinach inkubacji dla testw od ADH do GLYG. x Szczepy hodowane na agarze Columbia z krwi barani. Uytkownik jest zobowizany do prowadzenia kontroli jakoci zgodnie z lokalnymi przepisami. OGRANICZENIA METODY x System API 20 Strep suy jedynie do identyfikacji gatunkw zawartych w bazie danych (patrz Tabela Identyfikacyjna na kocu instrukcji). Nie moe by uywany do identyfikacji innych mikroorganizmw lub wykluczania ich obecnoci. x Niektre szczepy Streptococcus porcinus mog zosta zidentyfikowane jako Streptococcus agalactiae. x Naley uywa tylko czysto wyizolowanych bakterii. ZAKRES SPODZIEWANYCH WYNIKW W Tabeli Identyfikacyjnej na kocu instrukcji sprawdzi zakres spodziewanych wynikw dla rnych testw biochemicznych. OCENA TESTU x Po 4 godzinach inkubacji: Przebadano 2336 szczepw, z kolekcji i rnych rde, nalecych do gatunkw zawartych w bazie danych: - 87,9 % szczepw prawidowo zidentyfikowano (z lub bez testw uzupeniajcych). - 5,7 % szczepw nie zidentyfikowano. - 6,4 % zostao nieprawidowo zidentyfikowanych. x Po 24 godzinach inkubacji: Przebadano 3782 szczepw, z kolekcji i rnych rde, nalecych do gatunkw zawartych w bazie danych: - 93,4 % szczepw prawidowo zidentyfikowano (z lub bez testw uzupeniajcych). - 3,2 % szczepw nie zidentyfikowano. - 3,4 % zostao nieprawidowo zidentyfikowanych. POSTPOWANIE ZE ZUYTYMI TESTAMI Zuytych i niezuytych odczynnikw, jak rwnie zanieczyszczonych sprztw jadnorazowych, naley pozbywa si zgodnie z procedurami dla materiaw zakanych lub potencjalnie zakanych. Obowizkiem kadego laboratorium jest pozbywanie si zuytych testw i wytworzonych ciekw w zalenoci od typu i stopnia zabezpieczenia laboratorium oraz dezynfekowa je i usuwa (zleci dezynfekcj i usuwanie) zgodnie z zatwierdzonymi procedurami.

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TABELA ODCZYTW
TEST AKTYWNE SKADNIKI STENIE (mg/probwka) REAKCJE/ENZYMY WYNIKI NEGATYWNY POZYTYWNY VP 1 + VP 2 / odczeka 10 min (3) VP pirosiarczan sodu 1,9 wytwarzanie acetoiny (Voges Proskauer) hydroliza (kwas hipurowy) Bezbarwny Rowo-Czerwony

NIN / odczeka 10 min HIP kwas hipurowy 0,4 Bezbarwny /Blado niebieski Niebieskawo-szary 4 godz. Bezbarwny Blado ty Ciemno niebieski/Fioletowy

ESC

eskulina cytrynian sodu

1,16 0,152

-glukozydaza hydroliza (eskulina)

24 godz. 4 godz. 24 godz. Bezbarwny Czarny Czarny Blado ty Szary Jasno szary ZYM A + ZYM B / 10 min (od PYRA do LAP) (1) Jeli konieczne, odbarwi w silnym wietle Pomaraczowy Fioletowy Niebieski Fioletowy Fioletowy Pomaraczowy Czerwony 4 godz. 24 godz. Pomaraczowy/ ty ty Pomaraczowy/ ty ty Pomaraczowy/ ty ty Pomaraczowy/ ty ty Pomaraczowy/ ty ty Pomaraczowy/ ty ty Pomaraczowy/ ty ty Pomaraczowy/ ty ty Pomaraczowy/ ty ty Jasno ty

PYRA DGAL GUR GAL PAL LAP ADH RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG

-naftyloamid kwasu piroglutaminowego 6-bromo-2-naftyloDD-galaktopiranozyd naftol ASBI kwasu glukuronowego 2-naftyloD-galaktopiranozyd 2-naftylo fosforan L-leucyno-naftyloamid L-arginina D-ryboza L-arabinoza D-mannitol D-sorbitol D-laktoza (woowa) D-trehaloza inulina D-rafinoza skrobia (2) glikogen

0,0256 0,0376 0,0537 0,0306 0,0244 0,0256 1,9 1,4 1,4 1,36 1,36 1,4 1,32 5,12 3,12 2,56 1,28

arylamidaza pirolidonylu D-galaktozydaza -glukuronidaza -galaktozydaza fosfataza alkaliczna leucyno aminopeptydaza dihydrolaza argininy

Bezbarwny lub Bardzo blado pomaraczowy Bezbarwny Bezbarwny Bezbarwny lub Bardzo blado fioletowy Bezbarwny lub Bardzo blado fioletowy Bezbarwny ty 4 godz. Czerwony Czerwony Czerwony Czerwony Czerwony Czerwony Czerwony Czerwony Czerwony 24 godz. Pomaraczowy/ Czerwony Pomaraczowy/ Czerwony Pomaraczowy/ Czerwony Pomaraczowy/ Czerwony Pomaraczowy/ Czerwony Pomaraczowy/ Czerwony Pomaraczowy/ Czerwony Pomaraczowy/ Czerwony Pomaraczowy/ Czerwony

zakwaszenie (ryboza) zakwaszenie (arabinoza) zakwaszenie (mannitol) zakwaszenie (sorbitol) zakwaszenie (laktoza) zakwaszenie (trehaloza) zakwaszenie (inulina) zakwaszenie (rafinoza) zakwaszenie (skrobia) zakwaszenie (glikogen)

Czerwony lub Pomaraczowy

(1) W trakcie drugiego odczytu po 24 godzinach inkubacji, moe pojawia si w probwkach osad po dodaniu odczynnikw ZYM A i ZYM B. Jest to normalne zjawisko, ktre nie powinno by brane pod uwag. (2) Zakwaszenie skrobi jest czsto sabsze ni innych cukrw. (3) Blado rowy kolor pojawiajcy si po 10 minutach naley uwaa za wynik negatywny.

x Wskazane stenia mog by regulowane w zalenoci od miana uytego surowego materiau. x Niektre mikroprobwki zawieraj produkty pochodzenia zwierzcego,zwaszcza peptony.
METODYKA TABELA IDENTYFIKACYJNA str. I str. II PIMIENNICTWO TABELA SYMBOLI str. III str. IV

bioMrieux i jego niebieskie logo, API i apiweb s znakami towarowymi uywanymi, w trakcie rejestracji i/lub zastrzeonymi, nalecym do bioMrieux SA lub jednego z przedstawicielstw. Wszystkie pozostae nazwy i znaki towarowe s wasnoci ich posiadaczy.

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METHODOLOGIE / PROCEDURE / METHODIK / TECNICA / PROCEDIMENTO / / METOD / METODE / METODYKA

- Cocci / Kokken / Cocos / Cocchi / / Kocker / Kokker / Ziarniaki - Gram + - Catalase / Katalase / Catalasa / Catalasi / / Katalas / Katalase / Katalaza

Glose au sang / Blood agar / Blutagar / Agar con sangre / Agar al sangue / Gelose de sangue / / Blodagar / Agar krwawy

Glose Columbia au sang / Columbia blood agar / Columbia Blutagar / Agar Columbia con sangre / Agar Columbia al sangue / Gelose Columbia de sangue / Columbia / Columbia blodagar / Agar Columbia z krwi

24:00 2:00

02

36C 2C

> API Suspension Medium 2 ml

4 McF

~ 500 l

VP ADH

ADH

API GP Medium

RIB RIB

GLYG GLYG

4:00 4:30
24:00 2:00 36C 2C

36C 2C

API 20 Strep + - + - + -

VP HIP PYRA

: VP 1 + VP 2 : NIN LAP : ZYM A + ZYM B


bioMrieux SA I

api 20 Strep

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TABLEAU D'IDENTIFICATION / IDENTIFICATION TABLE / PROZENTTABELLE / TABLA DE IDENTIFICACION / TABELLA DI IDENTIFICAZIONE / QUADRO DE IDENTIFICAO / / IDENTIFIERINGSTABELL / IDENTIFIKATIONSTABEL / TABELA IDENTYFIKACYJNA
% de ractions positives aprs 4/24 h 36C 2C / % of reactions positive after 4/24 hrs. at 36C 2C / % der positiven Reaktionen nach 4/24 h bei 36C 2C / % de las reacciones positivas despus de 4/24 H a 36C 2C / % di reazioni positive dopo 4/24 ore a 36C 2C / % das reaces positivas aps 4/24 H a 36C 2C / % 4/24 36C 2C / % positiva reaktioner efter 4/24 timmar vid 36C 2C / % positive reaktioner efter 4/24 timer ved 36qC r 2qC/ % pozytywnych reakcji po 4/24 godzinach w 36C 2C

API 20 STREP Abiotrophia defectiva Aerococcus urinae Aerococcus viridans 1 Aerococcus viridans 2 Aerococcus viridans 3 Alloiococcus otitis Enterococcus avium Enterococcus durans Enterococcus faecalis Enterococcus faecium * Gardnerella vaginalis Gemella haemolysans Gemella morbillorum Globicatella sanguinis Granulicatella adiacens

V7.0

VP HIP ESC PYRA AGAL BGUR BGAL PAL LAP ADH RIB ARA MAN SOR LAC TRE INU RAF AMD GLYG HEM 25 3 0 15 99 12 54 76 40 100 94 97 97 95 1 70 35 40 80 1 35 5 0 1 0 1 0 0 0 0 4 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 1 1 60 1 98 1 0 53 41 35 100 0 33 10 85 0 15 32 1 42 0 0 0 52 0 23 3 55 0 4 44 34 58 89 99 97 95 0 1 1 0 0 28 0 0 21 31 64 50 70 19 0 8 63 80 91 10 0 52 16 20 48 3 0 2 0 1 1 0 0 16 25 0 0 0 0 79 0 2 0 97 0 2 1 0 99 99 100 100 0 100 0 0 0 0 0 3 99 15 0 0 94 91 86 100 41 37 25 14 100 24 76 21 89 53 1 10 100 0 18 35 65 0 1 1 1 0 99 6 10 80 5 0 1 0 1 1 1 44 25 35 1 46 79 1 0 70 1 76 52 5 0 50 1 1 14 1 1 1 4 1 0 84 35 0 0 4 3 2 0 96 0 0 0 0 0 92 92 5 5 1 90 99 99 97 99 40 86 9 99 88 96 70 85 99 100 100 100 100 100 0 28 1 5 1 0 0 92 93 0 1 4 0 0 0 95 10 0 99 0 0 0 0 1 0 28 83 25 8 0 99 98 85 46 1 5 76 0 27 95 37 6 98 0 0 0 0 0 1 0 97 0 85 0 0 14 1 0 1 3 0 0 0 0 0 99 0 0 33 1 2 0 15 1 70 6 0 0 95 0 0 15 35 0 0 0 1 0 0 0 32 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 32 85 35 82 0 2 98 78 1 20 1 71 0 17 45 29 0 1 33 97 0 0 0 1 0 0 1 1 0 0 30 0 0 0 1 99 1 0 88 8 5 1 7 3 99 0 13 70 2 5 0 0 92 18 0 10 0 47 0 0 1 4 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 50 1 0 0 0 0 1 0 90 0 0 88 1 1 48 0 1 98 98 100 5 56 83 70 91 0 95 84 84 1 5 1 0 97 72 35 49 50 99 90 100 98 99 10 45 0 25 99 94 100 99 99 83 99 86 83 99 99 64 89 20 99 76 1 1 0 1 0 92 1 5 0 40 0 1 0 0 1 0 15 5 42 1 1 44 97 72 99 40 70 24 14 0 15 56 96 60 73 10 16 0 25 90 11 72 35 97 98 97 31 99 99 12 99 98 99 17 100 99 67 84 1 96 84 50 61 74 67 100 99 50 0 0 33 1 1 0 0 0 2 3 53 5 5 90 0 0 3 0 0 4 0 98 97 5 0 97 0 0 30 40 99 10 98 0 5 0 0 0 10 0 22 1 0 89 96 20 0 0 1 5 1 0 1 18 1 1 0 1 0 0 0 0 1 0 26 75 37 1 0 0 0 0 100 61 2 94 99 0 94 40 0 0 1 0 1 100 98 1 0 0 2 0 99 24

13 50 96 15 70 50 22 88 99 0 25 0 99 60 99 100 43 100 99 46 99 94 43 99 0 25 3 4 0 95 0 0 0 0 0 0 10

99 33 41 99 37 99

40 100 95

91 100 99

92 100 0 0 2 11 0 30 87 65 92 87 88 0 6 1 72 99 1 0 7 99 7 1 32 99 98 0 0 3 0 0 4 0 1 0 0 0

98 15 10

40 98

76 100 71 95 100

Lactococcus lactis ssp cremoris Lactococcus lactis ssp lactis Leuconostoc spp Listeria spp Streptococcus agalactiae ** Streptococcus anginosus Streptococcus bovis I Streptococcus bovis II 1 Streptococcus bovis II 2 Streptococcus bovis II 3 Streptococcus bovis II 4 Streptococcus canis Streptococcus constellatus
Streptococcus dys.ssp dysgalactiae

98 25 41 90 40 99 91 1 60 1 97 79 98 100 99 99 100 0 100 1 100 1 100 0 99 98 0 0 0 1 0 1 1 0 99 0 0 0 85 0 0 0

99 100 100

100 100 65 98 100 100 0

100 2 100 1 100 1 100 1 0 1 0 1 75 0 0 0 0 0 1 0 1 1 1 25 27 1 25 1 15 95 1 87 3 3 99 1 39 99 5 98 42 82 70

6 100 93 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 3 26 31 72 0 1

40 84 99

100 100 100 100 99 100 100 99 100 97 100 100 100 99 100 99 1 100 0 100 99 100 99

100 1

86 100 0

Streptococcus dys.ssp equisimilis Streptococcus equi ssp equi

Streptococcus equi ssp zooepidemicus

100 100 100

99 100

Streptococcus equinus Streptococcus group L Streptococcus intermedius Streptococcus mitis 1 Streptococcus mitis 2 Streptococcus mutans Streptococcus oralis Streptococcus pneumoniae Streptococcus porcinus Streptococcus pyogenes Streptococcus salivarius Streptococcus sanguinis Streptococcus suis I Streptococcus suis II Streptococcus uberis

100 0 100 0

25 15 3 3 1 1 0 0

100 100 100 100 99 100 100 35 1 3 97 99 19 50 100 99 100 18 5 100 57 72 100

75 100 0

90 100 81 81 98 64 87

100 5

97 100 98 0

100 100 99 20 100 5 1 3 100 90 100 91 100 95

67 34 88 98 33 55 0 98 63 93 99 87 10

94 100 75

99 98 100

30 100 98

Enterococcus casseliflavus possible / mglich / posible / possibile / possvel / / * ou / or / od. / o / / eller / lub mjlig / mulig / moliwo. Enterococcus gallinarum ** Voir Limites du test / See Limitations of the method / Siehe Limitierungen / Ver Lmites del mtodo / Vedere Limiti del metodo / Consultar Limites do teste / B / Se avsnittet Metodens begrnsningar / Se Metodens begrnsninger / Patrz Ograniczenia testu si / if / wenn / se / / om / hvis / gdy : VancoR / VanR / VAN = R :

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BIBLIOGRAPHIE / LITERATURE REFERENCES / LITERATUR / BIBLIOGRAFIA / / REFERENSLITTERATUR / LITTERATURHENVISNINGER / PIMIENNICTWO

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TABLE DES SYMBOLES / INDEX OF SYMBOLS / SYMBOLE / CUADRO DE SIMBOLOS / TABELLA DEI SIMBOLI / QUADRO DOS SMBOLOS / / SYMBOLER / SYMBOLFORTEGNELSE / TABELA SYMBOLI
Symbole / Symbol Smbolo /Simbolo Signification / Meaning / Bedeutung Significado / Significato / Betydelse / Betydning / Znaczenie Rfrence du catalogue Catalogue number (GB) / Catalog number (US) Bestellnummer / Nmero de catlogo / Numero di catalogo Referncia de catlogo / Katalognummer / Katalognummer / Numer katalogowy Dispositif mdical de diagnostic in vitro In Vitro Diagnostic Medical Device In Vitro Diagnostikum Producto sanitario para diagnstico in vitro Dispositivo medico-diagnostico in vitro Dispositivo mdico para diagnstico in vitro In Vitro Medicintekniska produkter fr in vitro diagnostik Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik Wyrb do diagnostyki In Vitro Fabricant / Manufacturer / Hersteller / Fabricante Fabbricante / / Tillverkare / Producent Limites de temprature / Temperature limitation Temperaturbegrenzung / Lmite de temperatura Limiti di temperatura / Limites de temperatura / Temperaturbegrnsning Temperaturbegrnsning / Przestrzega zakresu temperatury Utiliser jusque / Use by / Verwendbar bis Fecha de caducidad / Utilizzare entro / Prazo de validade / Anvnd fre / Holdbar til / Uy przed Code du lot / Batch code Chargenbezeichnung / Cdigo de lote Codice del lotto / Cdigo do lote / Lot nummer / Lotnummer / Kod partii Consulter les instructions d'utilisation Consult Instructions for Use Gebrauchsanweisung beachten Consulte las instrucciones de uso Consultare le istruzioni per l'uso Consulte as instrues de utilizao Se handhavandebeskrivningen / Se brugsanvisning Sprawd w instrukcji obsugi Contenu suffisant pour "n" tests Contains sufficient for <n> tests Inhalt ausreichend fr <n> Prfungen Contenido suficiente para <n> ensayos Contenuto sufficiente per "n" saggi Contedo suficiente para n ensaios Rcker till "n" antal tester Indeholder tilstrkkeligt til "n" test Wystarczy na wykonanie <n> testw

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