CUANTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIN

los carbohidratos constituyen la mayor parte de los componentes vegetales (azcares, almidones, celulosa, hemicelulosas, pectinas) Para cuantificarse se utilizan diferentes mtodos:

La cromatografa de papel, Los volumtricos de ferricianuro (NTC 926) o de Eynon Lane. El gravimtrico de Allihn Los espectrofotomtricos de Somogyi-Nelson DNS y DNS - Fenol. Los de cromatografa HPLC.

MTODO DE SOMOGYI-NELSON

Se basa en la capacidad de los azcares para reducir agentes oxidantes suaves como el Cu2+.

Se utiliza para la valoracin de azucares reductores,

presentes protenas. en las soluciones que contienen

MTODO SOMOGY I-NELSON

Muestra (Azcar reductor +)

Reactivo de Somogyi Cu+2

Calor

Azcar Oxidante + CU+ (Cu2O) CU+1(red

)

AsMo (ox) AsMo (red) Es de un fuerte color azul

CU+1(oxi)

Se le la absorbancia a 500 nm. Se cuantifica con la curva estndar

REACTIVOS PARA EL MTODO DE SOMOGY I NELSON PARA AZCARES REDUCTORES

Reactivo de Somogy i NaCO3 - Carbonato de sodio NaHCO3 Bicarbonato de Sodio KaNaC4H4O6 Tartrato de Sodio Potasio CuSO45H2O Sulfato de Cobre Reactivo de Nelson (NH4)6Mo7O24 - Molibdato de amonio Na2HAsO7H2O Arsenato de Sodio H2SO4 cido Sulfrico

REACTIVO DE SOMOGYI
El carbonato de sodio es un slido blanco, bastante soluble en agua, cuyas disoluciones tienen reaccin alcalina por efecto de la gran hidrlisis que experimenta: Na2CO3 + H2O NaHCO3 + NaOH

En solucin acuosa, el CuSO4 puede reaccionar en fro con el carbonato de sodio para producir el hidrocarbonato azurita, insoluble en agua 3CuSO4 + 3Na2CO3 + H2O

3Na2SO4 + Cu3(OH)2(CO3)2 + CO2

El bicarbonato de sodio, slido blancuzco soluble en agua, presenta reaccin dbilmente alcalina, se une con el carbonato de sodio para dar origen a una solucin buffer que impide el cambio en la concentracin de iones hidrgeno cuando se producen pequeas cantidades de cidos o bases en el medio, asegurando l mismo un pH alcalino.

REACTIVO DE NELSON
El sulfato de sodio es un cuerpo slido e incoloro, cuya mxima solubilidad se presenta a los 33 C, y sus disoluciones saturadas en caliente ofrecen en fro el fenmeno de la sobresaturacin: en este estado, cuando por agitacin u otra causa cristalizan, lo hacen con siete molculas de agua. El molibdato de amonio en presencia de cido sulfrico y de arsenato de sodio da origen al cido molibdoars nico, complejo de color amarillo: 27H+ + AsO4(-3) 12MoO4 (-2) H3 [As (Mo3O10)4 ] + 12H2O

REACTIVO DE COBRE EN MEDIO ALCALINO

Solucin A: Disolver en 600ml de agua destilada 25 g de carbonato de sodio anhidro 25g de tartrato doble de sodio y potasio 20g de bicarbonato de sodio 200g de sulfato de sodio anhidro. Aforar a 1L con agua destilada. Solucin B: Disolver en 900ml de agua destilada: 150g de sulfato de cobre pentahidratad 0.5ml de cido sulfrico concentrado Aforar a 1L, mezclar y envasar en frasco mbar.

NOTA: Inmediatamente antes de usarlo, mezclar 24 partes de la solucin A con una parte de la solucin B.

REACTIVO ARSENOMOLIBDICO O REACTIVO DE NELSON:

Est compuesto por Molibdato de Amonio, Arsnico disdico 7 H2O, cido Sulfrico y agua destilada. Los iones cuprosos, formados por la accin reductora de los glcidos, al reaccionar con el reactivo Arsenomolibdico, el Molibdeno hexavalente se reduce y toma un intenso color azul que es proporcional a la concentracin inicial de azcar reductor y que se compara en fotocolormetro con el color que produce un patrn del mismo azcar en iguales condiciones de trabajo.

Disolver en 900ml de agua destilada: 50g de molibdato de amonio, 42ml de cido sulfrico agitando 50ml de una solucin de ortoarseniato disdico al 12%, Incubar a 37C durante 24 a 48 horas.

MATERIAL Y REACTIVOS
Material de laboratorio: Tubos de ensaye Pipetas graduadas de 5ml Pipetas graduadas de 10ml Bao Maria Canicas Mortero Gradilla

Material biolgico:
Espinacas secas

Reactivos:
cido sulfrico 2N Hidrxido de sodio 4N. Solucin de sacarosa 50mg/100ml

PROCEDIMIENTO:
1.-Poner a secar las hojas de espinacas das antes de la prctica, 50g aproximadamente. 2.-Pesar 1g de las hojas de espinacas secas y macerarlas en un mortero con un poco de agua. 3.-Transferir a un matraz volumtrico de 100ml y aforar con agua. Dejar reposar por 5 minutos.

5.- Preparar una gradilla con los tubos numerndolos de acuerdo a la tabla

4.- Filtrar el extracto de hojas.

Tubo No

Solucin patrn

0.2

0.4

0.6

0.8

Extracto de hoja

H2SO4 2N

Colocar los tubos 5 minutos en bao de ebullicin

NaOH 4N

Mezcla de soluciones Ay B

Colocar en bao a ebullicin por 20 minutos tapados con canicas. Transcurrido el tiempo enfriar los tubos.

Reactivo de arsenomolibdato

Agua

4.8

4.6

4.4

4.2

Esperar 20 a 30 minutos y leer en el espectrofotmetro a 520nm ajustando a cero con el blanco.

CLCULOS
Trazar una grfica con las lecturas obtenidas de la curva estndar, colocando la absorbancia en el eje de las abscisas y la concentracin de sacarosa en el eje de las ordenadas. Interpolar en la grfica las lecturas obtenidas de los tubos problema. Expresar los resultados en moles de sacarosa/g.