Sunteți pe pagina 1din 3

TEHNICA FISH

Tehnica FISH ( Fluorescence in situ hybridization) este una din cele mai utilizate n laboratoarele de diagnostic citogenetic, permind evidenierea anomaliilor cromozomale, att numerice cat si structurale, chiar i n nucleii interfazici. Principiul tehnicii FISH const in hibridare (formare de legturi de hidrogen) ntre o sond specifica de ADN (marcat fluoresccent sau imunohistochimic) si secvena complementar prezent intr-un anumit segment cromosomic. Hibridarea se bazeaz pe legea complementaritatii bazelor azotate, conform creia in moleculele ADN se formeaz urmatoarele perechi: A-T, C-G.

Aplicabilitatea tehnicii FISH n anomalii cromosomice bnuite: Depistarea de microdeleii sau microduplicaii cromosomice Depistarea translocaiilor Identificarea cromosomilor marker Fuziuni genice n dragnostic prenatal: Depistarea aneuploidiilor Avantajele tehnicii FISH: Timpul scurt de obinere a rezultatelor definitive Posibilitatea analizei de celule in diviziune sau interfaza Rezoluie mare Dezavantajele tehnicii FISH:

Costul ridicat al sondelor i al reactivilor Costul ridicat al aparatelor de folosire Gradul nalt de tehnicitate

Indicaiile efecturii screening-ului prenatal prin FISH Varsta materna avansata (peste 35 de ani) fiind cunoscut frecvena crescut a trisomiilor 21, 13, 18 si X la embrionii femeilor n varst, n corelatie cu incidena crescut a nedisjunctiei meiotice in gametogeneza feminin. Depistarea ecografic a unor anomalii concenitale viscerale (cardiace, renale, digestive) ce pot fi asociate cu existena la ft a unei trisomii autosomale (21, 18 sau 13) sau a monosomiei X. Existena unor rezultate alarmante prin aplicarea screening-ului biochimic prin testul triplu: alfa-fetoprotenia, gonadotrofina corionica uman i estriolul conjugat. Existena n descendena femeii investigate a unuia sau mai multor copii cu aneuploidie. Condiii pentru standardizarea analizei prin FISH Celulele analizabile sunt considerate cele care 1, 2, 3 sau 4 semnale fluorescente i care nu prezint superpoziii sau o cantitate mare de citoplasm. Numrul celulelor analizate trebuie s fie de minim 30/caz, n cazurile n care rezultatul este inconcludent trebuie analizate chiar 100-200 de celule pentru a limita marja de eroare. O prob este considerat normal (disomic) n condiiile n care mai mult de 80 % din celule prezint cte dou semnale fluorescente pentru cromosomii 13, 18, 21 i X (pentru embrionii de sex feminin) respectiv un semnal corespunztor cromosomului X i unul cromosomului Y (pentru embrionii de sex masculin). O proba este considerat anormal (aneuploid) n condiiile n care mai mult de 70% dintre celule prezint cte 3 semnale fluorescente corespunztoare autosomilor 13, 18 i 21, respectiv suma semnalelor fluorescente corespunztoare cromosomilor X i Y este mai mare sau egal cu 3. O prob este considerant neconcludent n condiiile n care 20-60% din celulele analizate prezint cte 3 semnale fluorescente corespunztoare autosomilor 13, 18 i 21, respectiv suma semnalelor fluorescente corespunztoare cromosomilor X i Y este mai mare sau egal cu 3. n aceste cazuri trebuie bnuit existena unui mozaic cromosomic cu dou linii celulare: una normal i una trisomic. Motivele eecului tehnicii FISH Contaminarea lichidului amniotic cu snge- testul FISH trebuie fcut doar n condiiile n care lichidul amniotic este clar. Cantitate insuficient de lichid amniotic- volumul optim de lichid amniotic necesar pentru efectuarea testului FISH este considerat a fi 10-14 mL. Anomalii de hibridare care conduc la depistarea unui numr insuficient de celule analizabile. Bibliografie www.i-medic.ro www.obstetrics.ro Genetica Medicala Progrese Recente. Dragos T. Stefanescu, George A. Calin, Fulvia C. Stefanescu, Editura Tehnica Bucuresti, 1998