Activity based probe

Protemica baseada em actividades , ou de perfis de protenas com base em actividades ( ABPP ) um funcional protemica tecnologia que utiliza sondas qumicas especialmente concebidos que reagem com aulas mecanicamente relacionados de enzimas. [ 1 ] A unidade bsica da ABPP a sonda que normalmente consiste em dois elementos : um grupo reativo (RG) e uma tag. Alm disso, algumas sondas podem conter um grupo de ligao que aumenta a selectividade. O grupo reactivo normalmente contm um electrfilo que fica covalentemente ligado a um nuclefilo resduo no local activo de um activo da enzima . Uma enzima que inibida por inibidores da enzima ou modificaes ps-traducionais no reagir com uma sonda de actividade. A marcao pode ser um reprter tal como um fluorforo , ou um marcador de afinidade tal como biotina ou um alcino ou azida para uso com o Huisgen cicloadio 1,3-dipolar (tambm conhecido como qumica do clique ). [ 2 ] Uma grande vantagem da ABPP a capacidade de controlar a disponibilidade do stio activo da enzima directamente, em vez de ser limitado a protena ou a abundncia de mRNA. Com as classes de enzimas tais como as proteases de serina [ 3 ] e metaloproteases [ 4 ] , que podem interagir com os inibidores endgenos ou que existem como inactivos zimognios , esta tcnica oferece uma importante vantagem em relao s tcnicas tradicionais, que se baseiam em abundncia em vez de actividade. Finalmente, nos ltimos anos, ABPP foi combinada com espectrometria de massa em tandem que permita a identificao de centenas de enzimas activas a partir de uma nica amostra. Esta tcnica, conhecida como ABPP-mudpit (tecnologia de identificao de protenas multidimensional) especialmente til para perfilar selectividade inibidor como a potncia de um inibidor pode ser testada contra centenas de alvos simultaneamente. ABPP foi originalmente inventado por James C. Powers (Georgia Tech, Atlanta) [ 5 ] [ 6 ] no incio de 1990 e, posteriormente, adotada e desenvolvida pelos outros laboratrios, por exemplo Benjamin Cravatt III no The Scripps Research Institute , Matthew Bogyo em Stanford , e outros.