Irina Manolescu i colab: Studiul cedrii metoprololului din forme orale. I.

Cercetri privind dezvoltarea

Studiu de farmacie
Studiul cedrii metoprololului din forme orale. I. Cercetri privind dezvoltarea de metode de dizolvare in vitro biorelevante

IRINA MANOLESCU(1), IONELA BELU(2), TEFANA-OANA PURCARU(2), VALENTINA ANUA(1), I. MIRCIOIU(3), ROXANA SANDULOVICI(3)
(1)

Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila, Bucureti; (2)Universitatea de Medicin i Farmacie din Craiova; (3)Biopharmacy & Pharmacol Res S.A., Bucureti

Study of metoprolol release from oral forms. I. Research on development of biorelevant in vitro dissolution methods REZUMAT Metoprololul este o substan ce aparine
clasei I BCS (solubilitate i permeabilitate crescute) i este considerat modelul clasic pentru realizarea de corelri in vitroin vivo. n unele ri se accept bioechivalena pentru produsele ce conin metoprolol doar pe baza rezultatelor obinute la testele de cedare in vitro. Din acest motiv, n studiul de fa s-au comparat profilele de cedare in vitro pentru un numr de apte produse comerciale coninnd 100 mg de metoprolol (tartrat de metoprolol pentru ase produse P1P6 i succinat de metoprolol la produsul P7) n trei medii de dizolvare diferite (suc gastric simulat fr enzime, tampon acetat pH 4.5 i tampon fosfat pH 6.8). Considerm, aa cum au mai artat i ali autori, c acceptarea includerii metoprololului ca un candidat model pentru exceptarea de la studii in vivo (biowaiwer) este discutabil i trebuie evaluat n continuare. ntruct metoprololul este un medicament activ cu safety problems, cercetri ulterioare sunt absolut necesare.

ABSTRACT The Metoprolol is a substance that

belongs to the Ist class BCS (high solubility and permeability) and it is considered the classical model to realize in vitroin vivo correlations. In some countries, bioequivalency is accepted for the products containing Metoprolol just based on results obtained from in vivo release tests. Therefore, this study has compared the profiles of in vitro release for a total of seven commercial products containing 100 mg Metoprolol (Metoprolol tartrate for six products P1P6 and Metoprolol succinate in the product P7) in three different dissolution media (non-enzyme simulated gastric juice, acetate buffer pH 4.5, and phosphate buffer pH 6.8). We consider, as other authors showed, that Metoprolols acceptance as a model candidate for exemption from in vivo studies (biowaiwer) is questionable and must further be evaluated. Because Metoprolol is an active drug with safety problems, further research is necessary.

CUVINTE CHEIE: metoprolol, corelri in vitro

in vivo (IVIVC), test de dizolvare, profil de dizolvare, aria de sub curb (ASC).

KEYWORDS: Metoprolol, in vitroin vivo correlations

(IVIVC), dissolution test, dissolution profile, under curve area (UCA).

Introducere
Pornind de la cauze posibile ale unei absorbii incomplete a formelor farmaceutice solide administrate pe cale oral, a fost elaborat sistemul de clasificare biofarmaceutic (Biopharmaceutical Classification System BCS) ce clasific produsele medicamentoase n patru clase, n conformitate cu solubilitatea lor n mediu gastrointestinal i permeabilitatea lor prin mucoasa gastrointestinal. Dou dintre aceste clase au relevat limitrile fizico-chimice ca o potenial cauz a unei eliberri incomplete a substanei din forma farmaceutic. Acest sistem a fost iniial propus pentru identificarea formelor solide orale cu cedare imediat pentru care testele de bioechivalen (in vivo) nu ar fi necesare, dar sistemul este util pentru clasificarea produselor [1] pentru predictibilitatea biodisponibilitii lor n diferite stadii pe care le parcurg dup administrarea oral [2], precum i pentru
194

formularea unor produse cu eficacitate terapeutic, att cu cedare imediat, ct i cu cedare modificat. Metoprololul este o substan ce aparine clasei I BCS [3] (solubilitate i permeabilitate crescute) i este considerat modelul clasic pentru realizarea de corelri in vitroin vivo. n unele ri se accept bioechivalena pentru produsele ce conin metoprolol doar pe baza rezultatelor obinute la testele de cedare in vitro. n scopul dezvoltrii unui test discriminatoriu dar i reproductibil, se impunea testarea i estimarea variabilitii produselor de pe pia n ceea ce privete viteza i gradul de dizolvare, tiut fiind c aceasta poate fi destul de mare , chiar dac se cerceteaz produse bioechivalente ntre ele [4]. Din acest motiv, n studiul de fa s-au comparat profilele de cedare in vitro pentru un numr de apte produse comerciale coninnd

Craiova Medical 100 mg de metoprolol (sub form de tartrat de metoprolol la produsele P1P6 i succinat la produsul P7), n trei medii diferite.

Vol 10, Nr 3, 2008 probe standard de metoprolol de concentraii: 150 g/ml, 100 g/ml, 50 g/ml, 25 g/ml, 10 g/ml, obinndu-se o bun corelare liniar (Figura 1b).

Metode experimentale
Studiul cedrii Studiul cedrii in vitro a metoprololului s-a realizat utiliznd aparatul 1 USP, n urmtoarele condiii de lucru: volum: 900 ml; agitare: 100 rpm; temperatura de lucru: 370C; timpi de prelevare: 5, 10, 15, 20, 30 min.; numr de tablete: 6; medii de dizolvare: suc gastric simulat, fr enzime (7.0 ml HCl 37% i 2.0 g NaCl la 1000 ml de ap), tampon acetat pH 4.5, tampon fosfat pH 6.8. Metoda analitic Determinarea cantitativ a metoprololului eliberat s-a realizat prin determinarea spectrofotometric a absorbanei probelor la lungimea de und corespunztoare absorbiei maxime a metoprololului care, dup cum se observ n Figura 1, n mediu gastric simulat a fost la 275 nm.

Rezultate
Evaluarea cedrii in vitro a metoprololului din tablete n mediu de HCl 0.1 N Viteza de dizolvare a fost mare pentru toate produsele: aproximativ 80% n primele 15 min., mai puin produsul P6 care, n acelai interval de timp, s-a dizolvat sub 10%. Produsul P4 s-a dizolvat chiar i mai repede (80% n circa 10 min.) (Figurile 28).
Metoprolol P1 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 120 100 80 60 40 20 0 0 20 Timp [min.] 40

Figura 2 Profilul cedrii metoprololului din produsul P1

Metoprolol P2 P ro c e n t e lib e r a t [ % ] 120 100 80 60 40 20 0 0 20 Timp [min.] 40

(a)

Figura 3 Profilul cedrii metoprololului din produsul P2

Metoprolol P3
120 100 80 60 40 20
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

(b) Figura 1 (a) Spectrul de absorbie n UV al metoprololului n mediu gastric simulat, fr enzime; (b) liniaritatea metodei

P r o c e n t e lib e r a t [% ]

0 0 5 10 15 20 25 30 35

Timp [min.]

Figura 4 Profilul cedrii metoprololului din produsul P3

Curba de calibrare a fost construit din cinci

Drd. Irina Manolescu, Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila, Bucureti 195

Irina Manolescu i colab: Studiul cedrii metoprololului din forme orale. I. Cercetri privind dezvoltarea
Metoprolol P4 120 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 100 80 60 40 20 0 0 20 Timp [min.] 40

Gradul de dizolvare a fost, de asemenea, foarte mare: practic 100% n 30 min., cu excepia produsului P6. Variabilitatea profilelor. Dei profilele au fost foarte asemntoare n ceea ce privete gradul i viteza de dizolvare, variabilitatea lor nu poate fi neglijat. Coeficientul de variaie merge de la 5% pn la 20% (produsul P5). Evaluarea cedrii in vitro a metoprololului din tablete n mediu de tampon acetat (pH 4.5) La pH 4.5 profilele nu au diferit prea mult de cele de la pH 1.2. Variabilitatea cea mai mare a aprut la produsul P1 (circa 20%), n timp ce produsul P5 a avut o variabilitate asemntoare celorlalte produse (circa 10%) (Figurile 915).
Metoprolol P1 tampon acetat pH 4.5 120 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 100 80 60 40 20 0 0
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

Figura 5 Profilul cedrii metoprololului din produsul P4

Metoprolol P5 120 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 100 80 60 40 20 0 0 20 Timp [min.] 40

Figura 6 Profilul cedrii metoprololului din produsul P5

Metoprolol P6 120 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 100

10

15 20 Timp [min.]

25

30

35

Figura 9 Profilul cedrii metoprololului din produsul P1

Metoprolol P2 tampon acetat pH 4.5 120

80 60 40 20 0 0 20 Timp [min.] 40
P r o c e n t e lib e r a t [% ]

100 80 60 40 20 0
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

10

15

20

25

30

35

Timp [min.]

Figura 7 Profilul cedrii metoprololului din produsul P6

Metoprolol P7 120 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 100 80 60 40 20 0

Figura 10 Profilul cedrii metoprololului din produsul P2

Metoprolol P3 tampon acetat pH 4.5 120 100 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 80 60 40 20 0 0
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

10

20 Timp [min.]

30

40

10

15

20

25

30

35

Timp [min.]

Figura 8 Profilul cedrii metoprololului din produsul P7

Figura 11 Profilul cedrii metoprololului din produsul P3

196

Craiova Medical
Metoprolol P4 tampon acetat pH 4.5 120 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 100 80 60 40 20 0
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

Vol 10, Nr 3, 2008 Evaluarea cedrii in vitro a metoprololului din tablete n mediu de tampon fosfat (pH 6.8) Profilele de dizolvare nu au diferit esenial de cele la pH-uri acide, n ceea ce privete viteza i gradul de dizolvare. n schimb, variabilitatea a fost cu mult mai mare. Produsele P1 i P2, care erau cele mai variabile la pH acid, au fost cu mult depite de produsul P4, produs care a prezentat cea mai mic variabilitate la pH-urile acide (Figurile 1618).
Metoprolol P1 tampon fosfat pH 6.8 120 100 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 80 60 40 20 0 0 5 10 15 20 25 30 35 Timp [min.]
Vas Vas Vas Vas Vas Vas 1 2 3 4 5 6

10

15

20

25

30

35

Timp [min.]

Figura 12 Profilul cedrii metoprololului din produsul P4

Metoprolol P5 tampon acetat pH 4.5 120 100 80 60 40 20 0
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

P r o c e n t e lib e r a t [% ]

10

15

20

25

30

35

Timp [min.]

Figura 13 Profilul cedrii metoprololului din produsul P5

Metoprolol P6 tampon acetat pH 4.5 120

Figura 16 Profilul cedrii metoprololului din produsul P1

Metoprolol P2 tampon fosfat pH 6.8 120

P r o c e n t e lib e r a t [% ]

100 80 60 40 20 0
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

P r o c e n t e lib e ra t [% ]

100 80 60 40 20 0 0 5 10 15 20 25 30
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

10

15

20

25

30

35

35

Timp [min.]

Timp [min.]

Figura 14 Profilul cedrii metoprololului din produsul P6

Metoprolol P7 tampon acetat pH 4.5 120 100

Figura 17 Profilul cedrii metoprololului din produsul P2

Metoprolol P4 tampon fosfat pH 6.8 120 100 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 80 60 40 20 0
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

P r o c e n t e lib e r a t [% ]

80 60 40 20 0
Vas 1 Vas 2 Vas 3 Vas 4 Vas 5 Vas 6

10

15 20 Timp [min.]

25

30

35

10

15

20

25

30

35

Timp [min.]

Figura 15 Profilul cedrii metoprololului din produsul P7

Figura 18 Profilul cedrii metoprololului din produsul P4

Drd. Irina Manolescu, Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila, Bucureti

197

Irina Manolescu i colab: Studiul cedrii metoprololului din forme orale. I. Cercetri privind dezvoltarea

Evaluri comparative
Compararea cedrii in vitro a metoprololului n mediu de fluid gastric simulat, fr enzime Toate testatele se dizolv ceva mai repede dect referina metoprolol tartrat. Dizolvarea este complet. Referina metoprolol succinat nu se dizolv n 30 min. mai mult de 10%. Ordinea Ariilor de sub Curb (ASC) este R < T1 < T2 < T5 < T3 < T4 (Figura 19).
Metoprolol profile de dizolvare 120 100 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 80 60 40 20 0

Metoprolol profile de dizolvare 120 P r o c e n t e lib e r a t [% ] 100 80 60 40 20 0 0 5 10 15 20 25 30 35 Timp [min.]

Figura 20 Compararea cedrii metoprololului din diferite produse comerciale, n mediu de tampon acetat (pH 4.5)
PI P II P III P IV PV P VI Ref VII

Compararea cedrii in vitro a metoprololului n mediu de tampon fosfat (pH 6.8) S-a studiat dizolvarea produselor T1T4. Ordinea ASC-urilor este T1 < T2 < T3 < T4 (Figura 21).
Metoprolol profile de dizolvare 120 P r o c e n t e lib e r a t [% ]
35

10

15

20

25

30

Timp [min.]

100 80 60 40 20 0 0 5 10 15 20 25 30 35 Timp [min.]

Figura 19 Compararea cedrii metoprololului din diferite produse comerciale, la pH 1.2 Tabelul 1 Valori ale factorului f2 n mediu gastric simulat
Comparare PIPVII PIIPVII PIIIPVII PIVPVII PVPVII PVIPVII Valoare factor f2 51.49 58.02 37.03 30.65 42.55 11.39

Figura 21 Compararea cedrii metoprololului din diferite produse comerciale, n mediu de tampon fosfat (pH 6.8)

Se observ diferene semnificative ntre curbele de dizolvare. Calculul factorului f2 arat c n fapt nu s-a ntmplat o similaritate semnificativ dect pentru perechea PIIPVII. n contextul n care dizolvarea este rapid, aceste diferene probabil c au o mai mic importan clinic, dar fenomenul rmne totui remarcabil. Compararea cedrii in vitro a metoprololului n mediu de tampon acetat (pH 4.5) Toate testatele se dizolv mai repede, dar mai puin complet dect referina tartrat de metoprolol. Succinatul practic nu se dizolv n 30 min. (dect circa 10%). Ordinea Ariilor de sub Curb (ASC) este R < T1 = T2 < T5 < T3 < T4 (se menine ordinea de la pH 1.2) (Figura 20).

Concluzii generale
Contrar a ceea ce susine literatura biofarmaceutic [58], metoprololul nu este prototipul bunei manifestri Clasa I BCS. Cercetri anterioare efectuate de Biopharmacy & Pharmacol RES (BPRES) au artat o contradicie ntre procentele in vitro i rezultatele in vivo: un produs care s-a dizolvat mai bine dect produsul de referin, a avut o biodisponibilitate mai mic i nu a fost bioechivalent cu referina. Cercetrile de fa au artat c toate produsele testate, la dou pH-uri diferite (1.2 i 4.5) se dizolv mai bine dect produsul de referin. ntruct la pH 6.8 s-a pstrat practic aceeai ierarhie ntre dizolvarea produselor testate, ca i la pH-urile 1.2 i 4.5, se poate presupune c i la pH 6.8 produsele testate se dizolv mai bine dect referina. n ceea ce privete produsul de referin

198

Craiova Medical metoprolol succinat, acesta se dizolv sub 10% la toate pH-urile testate. n final, se consider, aa cum au mai artat i ali autori [9] c acceptarea includerii metoprololului ca un candidat model pentru exceptarea de la studii in vivo (biowaiwer) este discutabil i trebuie evaluat n continuare. ntruct metoprololul este un medicament activ cu safety problems, cercetri ulterioare sunt absolut necesare. Not Experimentele au fost efectuate n cadrul contractului de cercetare nr. 55/2006, cu Agenia Naional pentru Cercetare tiinific. Bibliografie
1. Kasim NA, Whitehouse M, Ramachandran C, Bermejo M, Lennerns H, Hussain AS, Junginger HE, Stavchansky SA, Midha KK, Shah VP, Amidon GL (2004) Molecular properties of WHO essential drugs and provisional biopharmaceutical classification, Mol Pharmacol, 1(1):8596. 2. Dressman JB, Amidon GL, Reppas C, Shah VP (1998) Dissolution testing as a prognostic tool for oral drug absorption: immediate release dosage forms, Pharm Res, 15(1):1122.

Vol 10, Nr 3, 2008

3. Yang Y, Faustino PJ, Volpe DA, Ellison CD, Lyon RC, Yu LX (2007) Biopharmaceutics classification of selected beta-blockers: solubility and permeability class membership, Mol Pharmacol, 4(4):604614. 4. Pothast H, Mircioiu I, Moeller H (2001) Propranolol Preparate, Biopharmazeutische Charakterisirung, Pharmazie, 8(146):2832. 5. Rekhi GS, Eddington ND, Fossler MJ, Schwartz P, Lesko LJ, Augsburger LL (1997) Evaluation of in vitro release rate and in vivo absorption characteristics of four metoprolol tartrate immediate release tablet formulations, Pharm Dev Technol, 2(1):1124. 6. Eddington ND (2000) In vitro in vivo correlation with metoprolol extended release tablets using two different releasing formulations: an internal validation evaluation, Int J Generic Drugs, 417429. 7. Eddington ND, Marroum P, Uppoor R, Hussain A, Augsburger L (1998) Development and internal validation of an in vitroin vivo correlation for a hydrophilic metoprolol tartrate extended release tablet formulation, Pharm Res, 15(3):466473. 8. Mahayni H, Rekhi GS, Uppoor R, Marroum P, Hussain A, Augsburger LL, Eddington ND (2000) Evaluation of external predictability of an in vitro in vivo correlation for an extended-release formulation containing metoprolol tartrate, J Pharm Sci, 89(10):13541361. 9. Fagerholm U (2007) Evaluation and suggested improvements of the Biopharmaceutics Classification System (BCS), J Pharmacy Pharmacol, 59(6):751757.

Adresa pentru coresponden: Prof. dr. Constantin Mircioiu, Disciplina Biofarmacie, Facultatea de Farmacie, U.M.F. Carol Davila, Str. Traian Vuia nr. 6, 020956 Bucureti, Tel. 021318 07 50, e-mail: constantin.mircioiu@yahoo.com

Drd. Irina Manolescu, Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila, Bucureti

199