Sunteți pe pagina 1din 0

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE GR. T.

POPA IAI
FACULTATEA DE FARMACIE




REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT







NOI METODE DE ANALIZ A
ANTIHISTAMINICELOR DIN A DOUA
GENERAIE (LORATADINA)






Conductor tiinific,
PROF. UNIV. DR. VASILE DORNEANU



Doctorand,
ASIST. UNIV. GEORGETA PAVALACHE









Iai
2010





2
CUPRINS
(se pstreaz numerotarea capitolelor din tez)
INTRODUCERE3
PARTEA GENERAL..................................................................................................4
CAPITOLUL 1 CARACTERIZAREA GENERAL A
ANTIHISTAMINICELOR............................................................................................4
CAPITOLUL 2 LORATADINA...................................................................................4
CAPITOLUL 3 DATE PRIVIND METODOLOGIA DE LUCRU..............................4
PARTEA EXPERIMENTAL.....................................................................................5
CAPITOLUL 4. METOD TURBIDIMETRIC PENTRU SEPARAREA I
DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI............................................5
4.1 Determinarea turbidimetric a loratadinei folosind reactivul tetraiodomercuriat de
potasiu............................................................................................................................5
4.2 Aplicaii ale metodei turbidimetrice de determinare a loratadinei din forme
farmaceutice...................................................................................................................8
4.3 Concluziile capitolului...........................................................................................10
CAPITOLUL 5. METODE HPLC PENTRU SEPARAREA I DETERMINAREA
CANTITATIV A LORATADINEI..........................................................................11
5.3 METODA I HPLC PENTRU SEPARAREA I DETERMINAREA
CANTITATIV A LORATADINEI..........................................................................11
5.3.9 APLICAII ALE METODEI I HPLC PENTRU SEPARAREA I
DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI..........................................14
5.3.9.1 Aplicaii ale Metodei I HPLC de dozare a loratadinei din forme
farmaceutice.................................................................................................................14
5.3.9.2 Aplicaii ale Metodei I HPLC de dozare a loratadinei din diferite medii
biologice......................................................................................................................17
5.3.10 Concluziile Metodei I HPLC pentru separarea i determinarea cantitativ a
loratadinei....................................................................................................................19
5.4 METODA a II-a HPLC PENTRU SEPARAREA I DETERMINAREA
CANTITATIV A LORATADINEI..........................................................................19
5.4.9 APLICAII ALE METODEI a II-a HPLC PENTRU SEPARAREA I
DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI..........................................24
5.4.9.1 Aplicaii ale Metodei a II-a HPLC de dozare a loratadinei din forme
farmaceutice.................................................................................................................24
5.4.9.2 Aplicaii ale Metodei a II-a HPLC de dozare a loratadinei din diferite medii
biologice.......................................................................................................................25
5.4.10 Concluziile Metodei a II-a HPLC pentru separarea i determinarea cantitativ a
loratadinei.....................................................................................................................26
5.5 STUDIU COMPARATIV AL APLICAIILOR METODEI I HPLC I METODEI
a II-a HPLC..................................................................................................................27
5.5.7 Concluziile studiului comparativ........................................................................30
CONCLUZII GENERALE..........................................................................................31
PERSPECTIVE DE CERCETARE.............................................................................35
BIBLIOGRAFIE SELECTIV...................................................................................35
LISTA LUCRRILOR DIN TEZA DE DOCTORAT PUBLICATE SAU N CURS
DE PUBLICARE.........................................................................................................422
CURRICULUM
VITAE..............................................................................................433

3



INTRODUCERE

Antihistaminicele sunt antagoniti competitivi ai histaminei. Nu mpiedic
eliberarea histaminei, nu inactiveaz histaminaza, ci blocheaz receptorii
histaminergici, datorit asemnrii structurale cu histamina, mpiedicnd fixarea
acesteia pe receptori. Corespunztor celor dou tipuri de receptori histaminergici
exist dou grupe de antihistaminice H
1
i H
2
.
n manifestrile alergice sunt importante mai ales efectele histaminei obinute prin
activarea receptorilor H
1
. Aceste efecte pot fi combtute cu ajutorul antagonitilor
receptorilor H
1
.
Industria farmaceutic are reglementri stricte cu privire la activitatea
laboratoarelor analitice de dezvoltare i control. Astfel, se acord o atenie deosebit
optimizrii i utilizrii metodelor de analiz i control a materiilor prime, a
produilor intermediari i produselor finite. [107, 108, 109, 126, 127]
Scopul acestei lucrri este de a realiza o serie de metode spectrofotometrice i
cromatografice pentru separarea i determinarea cantitativ a unui antihistaminic din
a doua generaie i anume loratadina, cu aplicaii att pe produse farmaceutice ct i
din medii biologice.
Obiectivele lucrrii sunt:
prezentarea datelor privind unele antihistaminice de ultim generaie
(loratadina, desloratadina), sinteza, proprietaile fizico-chimice i
farmacologice, metodele utilizate n analiza i controlul antihistaminicelor
studiate;
instituirea de noi metode de separare i determinare cantitativ prin
spectrofotometrie, respectiv cromatografie de lichide de nalt performan
pentru substana luat n studiu;
validarea acestor metode n conformitate cu prevederile ghidurilor
internaionale pentru produse farmaceutice, n ncercarea de a face un pas
nainte n cercetarea i optimizarea activitii de control a calitii n cazul
acestui grup important de medicamente;
folosirea metodelor pentru separarea i determinarea cantitativ a loratadinei
din produse farmaceutice;
folosirea metodelor pentru separarea i determinarea cantitativ a loratadinei
din unele medii biologice.






4
PARTEA GENERAL

Stadiul actual al cunoaterii este structurat astfel:

CAPITOLUL 1 CARACTERIZAREA GENERAL A
ANTIHISTAMINICELOR

n acest capitol sunt prezentate cele mai impotrante date privind alergia:
istoric, evoluia cercetrilor n domeniu, tipuri de alergie (Tipul I, denumit i
hipersensibilizare imediat este iniiat de alergeni (antigen) i este dependent de IgE;
Tipul II, reacia citotoxic sau citolitic; Tipul III, se prezint sub form de leziuni
tisulare care se dezvolt datorit depunerii complexelor antigen-anticorp circulante
capabile s acioneze complementul n peretele vaselor i esuturile perivasculare i
Tipul IV, reacia de hipersensibilizare mediat celular sau ntrziat apare tardiv dup
aciunea agresorului i induce un flux mare celular de limfocite sensibilizate ce
elibereaz limfokine). S-a prezentat detaliat tratamentul tulburrilor alergice.
Histamina, mediatorul chimic major n procesul alergic, este descris din
punct de vedere chimic, biochimic i farmacologic. Sunt prezentai receptorii de tip
H
1
, receptori de care se leag histamina n timpul procesului alergic.
De asemenea sunt prezentate antihistaminicele H
1
(antagoniti de receptori
H
1
): scurt istoric, structur chimic, clasificare, farmacocinetic, farmacodinamie,
farmacoterapie, farmacotoxicologie, contraindicaii.
CAPITOLUL 2 LORATADINA

Loratadina, antagonist al receptorilor H
1
din generaia a doua, este descris n
acest capitol, menionndu-se: denumirea tiinific, formula chimic i molecular,
masa molecular, sinteza loratadinei, proprietile fizice, metodele de identificare
conform European Pharmacopoeia i United States Pharmacopeia [25, 35],
substanele cu structuri asemntoare ce ar putea inpurifica loratadina, farmacologie
clinic, farmacocinetic, precauii la administrare, metabolizarea loratadinei,
interaciuni cu alte medicamente, reacii adverse, forme farmaceutice cu loratadin
(forma farmaceutic, coninut, denumiri comerciale, ambalare i pstrare, identificare
[35], excipieni).
CAPITOLUL 3 DATE PRIVIND METODOLOGIA DE LUCRU

n ceea ce privete bazele teoretice ale analizei substanelor medicamentoase
prin spectrometria de absorbie UV-VIS, se prezint informaii privind: prile
componente ale spectrofotometrului de absorbie, Legea lui Lambert-Beer, spectrele
de absorbie, analiza chimic, turbidimetria.
ntruct n Partea experimental sunt propuse i metode lichid-
cromatografice, capitolul 3 mai cuprinde descrierea cromatografiei de lichide de
nalt performan, prile componente ale unui dispozitiv HPLC, pompe pentru
5
HPLC, coloane n LC, faza staionar, faza mobil, tipuri de detectori, principalii
parametri cromatografici (factorul de ntrziere selectiv, timpul mort, timpul de
retenie, coeficientul de distribuie, factorul de capacitate, timpul de retenie ajustat,
volumul de retenie, volumul mort, volumul de retenie ajustat, factorul de asimetrie,
abaterea standard, nlimea echivalent a talerului teoretic, coeficientul de separare,
rezoluia, numrul de talere teoretice).
Validarea analitic este un subcapitol important al capitolului 3 n care se
regsete descrierea parametrilor de validare (liniaritatea, acurateea, precizia, limita
de detecie, limita de cuantificare, specificitatea/selectivitatea, domeniul de lucru,
rigiditatea, robusteea/stabilitatea).

PARTEA EXPERIMENTAL
(CONTRIBUII PERSONALE)

CAPITOLUL 4. METOD TURBIDIMETRIC PENTRU SEPARAREA I
DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI
4.1 Determinarea turbidimetric a loratadinei folosind reactivul
tetraiodomercuriat de potasiu

Scop: Ne-am propus elaborarea i validarea unei metode de separare i
determinare a loratadinei ca atare sau din amestec prin turbidimetrie.
Principiul metodei
Metoda de analiz dezvoltat n aceast lucrare are n vedere determinarea
loratadinei prin turbidimetrie folosind ca reactiv tetraiodomercuriatul de potasiu [90]
Loratadina (Etil 4 -(8 cloro -5, 6 dihidro -11H benzo [5, 6] ciclohepta [1,
2 -b] piridin -11 -ilidin) -1 -piperidincarboxilat), n soluie metanolic, formeaz cu
ionul complex tetraiodomercuriat [HgI
4
]
2-
, n prezen de acid clorhidric, un compus
ce prezint absorban maxim la 362 nm, proportional cu concentraia n
loratadin.
Reacia care are loc este urmatoarea:

O
O
Cl
+ K
2
[HgI
4
]
+ HCl
- 2 KCl
N
N N
N
Cl
O
O
[HgI
4
]
2-
2
2
H
+
+
LORATADINA


Figura nr. 37 Reacia de formare a compusului voluminos, greu solubil

6
S-au stabilit condiiile optime de lucru (mediul de reacie, cantitile optime
de reactiv, timpul dup care se efectueaz citirea, etc).
Metoda a fost validat, stabilindu-se urmtorii parametri: liniaritatea funciei
de rspuns, liniaritatea rezultatelor, limitele de detecie i de cuantificare, precizia
(precizia sistemului, precizia metodei, precizia intermediar), exactitatea.

Rezultate

S-a stabilit lungimea de und de detecie prin nregistrarea spectrului de
absorbie fa de un martor, a unei probe de loratadin de concentraie 40 g/mL (1
mL prob) la care s-a adugat 1 mL reactiv tetraiodomercuriat de potasiu (soluie
stoc) i 1 mL HCl 0,05N i s-a completat la 5 mL cu ap bidistilat (Figura nr. 38).
Rezultatul s-a comparat cu spectrul de absorbie a unei probe de loratadin n
metanol 10 g/mL (Figura nr.39)


Figura nr.38 - Spectrul de absorbie al
compusului loratadin-[HgI
4
]
2

-2
4
0
2
200 800 400 600
Abs
Wavelength [nm]
-

Figura nr. 39 - Spectrul de
absorbie al loratadinei n
metanol 10 g/mL;
max
=288nm

Se observ c la 362 nm absorbia specific a produsului de reacie este
de peste 3 ori mai mare dect absorbia specific a loratadinei n metanol la
288 nm, aadar lungimea de und de 362 nm a fost utilizat n toate
determinrile.
Concentraia optim a soluiei de tetraiodomercuriat de potasiu s-a
stabilit prin analizarea a dou probe de loratadin de concentraii 20 g/mL i
80 g/mL (cte 1 mL prob). Pentru fiecare prob s-a adugat 1 mL soluie
tetraiodomercuriat de potasiu n concentraii diferite i s-au comparat
absorbanele obinute. (Figura nr.40 i Figura nr. 41).

Soluie loratadin 20 g/mL
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0 0,001 0,002 0,003 0,004
Concentraia molar a soluiei de
tetraiodomercuriat de potasiu
A
b
s
o
r
b
a
n

a

Figura nr.40 - Absorbana
funcie de concentraia molar a
soluiei de tetraiodomercuriat de
potasiu pentru soluia de loratadin 20
g/mL

7
Soluie loratadin 80 g/mL
0
0,2
0,4
0,6
0,8
0 0,001 0,002 0,003 0,004
Concentraia molar a soluiei de
tetraiodomercuriat de potasiu
A
b
s
o
r
b
a
n

a

Figura nr.41 - Absorbana funcie de
concentraia molar a soluiei de
tetraiodomercuriat de potasiu pentru
soluia de loratadin 80 g/mL


Concentraia optim de tetraiodomercuriat de potasiu pentru
optimizarea metodei este 2 x 10
-3
M, aceast concentraie fiind folosit n toate
analizele ulterioare.
Pentru alegerea aciditii reaciei s-a procedat n mod similar (citirea
absorbanei la = 362 nm a unor probe de loratadin de concentraii 20 g/mL
i 80 g/mL la care s-au adugat diferite concentraii molare de HCl n volum
de 1 mL) i s-a constatat c de la concentraia acidului clorhidric de 0,05M
absorbana este practic constant, deci aciditatea necesar reaciei se realizeaz
prin adugarea unui volum de 1 mL soluie HCl 0,05 M.
S-a urmrit apoi stabilitatea produsului de reacie prin analizarea
spectrofotometric a probelor la momente diferite (ntre 5 i 90 minute) de la
preparare i s-a constatat c absorbana poate fi citit dup 10 minute de la
adugarea reactivilor, iar produsul de reacie este stabil nc 10 minute. Dup
acest interval particulele de precipitat aflate n suspensiese aglomereaz i se
depun.
Metoda a fost validat n domeniul de concentraie 10 100 g/mL.
Pentru studiul liniaritii s-au luat n lucru 10 concentraii diferite din
domeniul studiat. S-au preparat 4 seturi de soluii de lucru i s-a reprezentat
grafic variaia absorbantei medii n funcie de concentraie. n Figura nr.46 se
prezint curba de calibrare obinut n studiul liniaritii metodei de
determinare a loratadinei folosind ca reactiv tetraiodomercuriatul de potasiu.
y = 0,0076x - 0,0113
R
2
= 0,9997
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0 20 40 60 80 100 120
Concentraia (g/mL)
A
b
s
o
r
b
a
n

a

Figura nr.46 Dreapta de calibrare n studiul liniaritii metodei

Ecuaia dreptei de calibrare, calculat prin regresie matematic, este:
Absorbana =0,0076 x Concentraia 0,0113; coeficientul de corelaie r =
0,99984, eroarea standard a dreptei de regresie SE = 0,00427.
Pentru a evalua precizia sistemului s-au efectuat un numar de 10
determinri pentru aceeai concentraie de prob (80 g/mL loratadin), n
8
aceleai condiii experimentale, msurndu-se valorile absorbanelor. S-au
calculat apoi valoarea medie, deviaia standard i deviaia standard relativ.
Avnd n vedere valoarea deviaiei standard relative obinute, RSD =
0,280700%, se poate afirma c la determinarea turbidimetric a loratadinei,
folosind metoda descris, sistemul este precis.
Pentru determinarea preciziei metodei prezentate s-a ales varianta de
lucru cu un minim de 9 determinri acoperind domeniul specific de
concentraie: 3 determinri la 3 valori ale concentraiei. Conform datelor
experimentale obinute, deviaia standard relativ (RSD = 1,4354) are o
valoare mai mic de 5%, ceea ce demonstreaz c metoda de analiz propus
este precis.
Precizia intermediar s-a stabilit prin efectuarea ntregului
experiment a doua zi, cu reactivi nou preparai, procedeul fiind identic ca i n
cazul determinrii repetabilitii metodei. Deviaia standard relativ obinut n
acest caz este RSD = 1,238% .
Exactitea metodei de analiz a loratadinei s-a stabilit prin metoda
adaosului: ntr-o soluie ce conine o cantitate cunoscut de standard, se
introduc volume de soluie de loratadin astfel nct s se obin concentraii
de 75, 100 i 125% din concentraia soluiei ce va fi testat (60 g/mL).
Procedeul s-a repetat de trei ori utiliznd soluii etalon preparate separat.
Utiliznd ecuaia dreptei de calibrare i valorile absorbanelor corespunztoare
loratadinei s-a calculat concentraia (g/mL) pentru fiecare prob n parte. S-a
determinat apoi regsirea, calculat ca procent din valoarea concentraiei
teoretice, regsirea medie, precum i domeniul n care variaz regsirea. Bias-
ul n studiul exactitii metodei de determinare a loratadinei prin metoda
turbidimetric are valoarea 101,21% de pe intervalul 99,87 102,35%.
Pentru determinarea limitei de detecie (LD) i a limitei de
cuantificare (LC) am utilizat metoda de calcul n funcie de eroarea standard
i panta dreptei de regresie i am obinut urmtoarele rezultate:
LD =
3xSE
panta
= 1,7 g/mL LC =
10xSE
panta
= 5,6 g/mL
4.2 Aplicaii ale metodei turbidimetrice de determinare a loratadinei din
forme farmaceutice

Metoda de dozare instituit pentru determinarea loratadinei sub forma
asocierii ionice loratadin [HgI
4
]
2-
a fost aplicat pe diferite forme
farmaceutice (comprimate cu 10 mg loratadin, comprimate cu eliberare
modificat 5 mg/120 mg: loratadin/sulfat de pseudoefedrin i sirop 1
mg/mL).
La analiza comprimatelor cu 10 mg loratadin, concentraia probelor
analizate a fost calculat utiliznd ecuaia dreptei de calibrare, iar rezultatele,
reprezentate n Figura nr. 48, au fost exprimate n g/mL i ca procent din
valoarea concentraiei teoretice.
9
0
20
40
60
1 2 3 4 5 6 7 8 9
numrul probei
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

(

g
/
m
L
)
concentraia regsit concentraia calculat

Figura nr. 48 Variaia concentraiei regsite fa de concentraia calculat n
analiza comprimatelor cu loratadin

Pentru determinarea loratadinei din comprimate 10 mg, regsirea
medie este de 97,908 cu intervalul de ncredere = 97,908 3,38. Rezultatele
prezentate au confirmat faptul c regsirea este conform normelor, iar metoda
este valid i poate fi folosit n controlul calitii i evaluarea comprimatelor
cu loratadin.
Comprimatele cu eliberare modificat au fost analizate n mod similar
comprimatelor cu 10 mg loratadin, iar concentraia regsit i concentraia
calculat au fost comparate n Figura nr. 49.
0
20
40
60
1 2 3 4 5 6 7 8 9
numrul probei
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

(

g
/
m
L
)
concentraia regsit concentraia calculat

Figura nr. 49 Variaia concentraiei regsite fa de concentraia calculat n
analiza comprimatelor cu compoziie mixt

Regsirea medie obinut a fost de 100,7122, cu intervalul de ncredere
= 100,7122 2,57, aadar metoda poate fi aplicat n controlul calitii i
dozarea loratadinei din forme farmaceutice orale cu compoziie mixt.
O alt aplicaie a constat n dozarea loratadinei din sirop 1 mg/mL.
Prepararea probelor, procedeul i prelucrarea rezultatelor s-au efectuat similar
celorlalte forme farmaceutice.

10
0
20
40
60
80
1 2 3 4 5 6 7 8 9
numrul probei
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

(

g
/
m
L
)
concentraia regsit concentraia calculat

Figura nr. 50 Variaia concentraiei regsite fa de concentraia calculat n
analiza siropului cu loratadin

Rezultatele prezentate au confirmat faptul c regsirea este conform
normelor, iar metoda se preteaz i la controlul calitii i dozarea loratadinei
din soluii orale.

4.3 Concluziile capitolului

A fost pus la punct o metod de determinare turbidimetric a
loratadinei prin cuplare cu tetraiodomercuriatul de potasiu n mediu acid,
compus ce prezint un maxim de absorbie la 362 nm, comparativ cu
loratadina n metanol care prezint maxim de absorbie la 288 nm.
Au fost stabilii parametrii optimi ai metodei: lungimea de und de
detecie = 362 nm cnd absorbana este maxim, concentraia optim de
tetraiodomercuriat de potasiu, 2 x 10
-3
M, aciditatea necesar reaciei (se
adaug 1 mL HCl 0,05M la 5 mL prob de analizat), precum i stabilitatea
probelor (absorbana poate fi citit dup 10 minute de la adugarea reactivilor,
iar produsul de reacie este stabil nc 10 minute).
Dup cum reiese din rezultatele prezentate, toate criteriile de
admisibiliate setate pentru validarea metodei analitice de determinare a
loratadinei prin turbidimetrie au fost ndeplinite: liniaritate pe domeniul studiat
(10 100 g/mL), coeficientrul de corelaie fiind r = 0.99984, precizie (RSD
= 1,4354% are o valoare mai mic de 5%, limita de detecie (LD = 1,7 g/mL)
i limita de cuantificare (LC = 5,6 g/mL). Prin urmare, validarea se consider
corespunztoare, iar metoda de testare adecvat pentru scopul propus, adic
pentru determinarea concentraiilor sczute de loratadin n cadrul analizelor
de Controlul medicamentului pentru diverse preparate farmaceutice.
Pentru dozarea loratadinei din comprimate cu 10 mg loratadin s-a
obinut o regsire medie de 97,908, cu intervalul de ncredere 97,908 3,38,
pentru determinarea din comprimate cu eliberare modificat, s-a obinut
regsirea medie 100,712, cu intervalul de ncredere 100,712 2,57, iar pentru
determinarea din sirop s-a obinut o regsire medie de 100,481, cu intervalul
de ncredere 100,481 2,37. Metoda este facil, simplu de aplicat, nu necesit
aparatur complicat, iar timpul de citire spectrofotometric este redus, ceea ce
permite efectuarea unui numr mare de analize ntr-un timp relativ scurt.
11
CAPITOLUL 5. METODE HPLC PENTRU SEPARAREA I
DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI


Scop: ne-am propus elaborarea i validarea unor metode sensibile i
rapide de separare i determinare cantitativ a loratadinei ca atare sau din
amestec prin cromatografie de lichide de nalt performan.

5.3 METODA I HPLC PENTRU SEPARAREA I DETERMINAREA
CANTITATIV A LORATADINEI

Principiul metodei: separarea i determinarea cantitativ a loratadinei,
dintr-o soluie metanolic, prin metoda cromatografiei de lichide de nalt
performan, n condiii isocratice, i detectarea acesteia n domeniul UV, la
264 nm.
Condiii cromatografice:
HPLC Agilent 1200, cu pomp cuaternar, DAD, termostat, sistem de
degazare, autosampler.
coloan cromatografic tip C18 (250 x 4,6) 5m XDB - C18 Agilent
(Zorbax Eclipse XDB-18) ; mrime pori 80; suprafaa 180m
2
/g; t
limit
= 60, pH = 2 9; capete dublu legate; carbon legat 10%;
debit: 1 mL/min;
temperatura coloanei: 27C;
volum de injectare: 10 l;
faza mobil: soluie de trietilamin 0,01% ajustat la pH = 2,75 cu acid
ortofosforic / acetonitril (46/54, v/v)] isopropanol (90/10, v/v).
detecie: UV = 264 nm;

Rezultate

Pentru stabilirea condiiilor optime de lucru s-au avut n vedere
urmatoarele aspecte: stabilirea lungimii de und de detecie, domeniul optim
de concentraie a soluiei de loratadin i influena pH-ului fazei mobile.
Stabilirea lungimii de und de detecie s-a realizat prin analizarea
spectrofotometric a unei probe de soluie de loratadin n faza mobil, de
concentraie 0,04 mg/mL (2 mL prob). Dup 10 minute de la preparare, s-a
nregistrat spectrul de absorbie fa de martor (faza mobil), n cuv de 1 cm
(Figura nr.51) i s-a constat c acesta prezint un maxim la lungimea de und
264 nm, unde nu interfer cu absorbtia componentelor fazei mobile. Aceast
lungime de und a fost utilizat la determinrile ulterioare.
12
0.2
2.5
1
2
260 300 270 280 290
Abs
Wavelength [nm]
280 nm
264 nm

Figura nr. 51 - Spectrul de absorbie al loratadinei, soluie n faz
mobil 0,01mg/mL;
max
=264 nm

S-a verificat liniaritatea pe domeniul 0,05 15,0 g/mL i s-a constatat
c ea este respectat pe intervalul ales (Figura nr. 52).
0
5000
10000
15000
20000
0 5 10 15 20
Concentraia (g/mL)
A
r
i
a

p
i
c
u
l
u
i

(
m
A
U
*
s
e
c
.
)

Figura nr.52 Stabilirea domeniului de concentraie a soluiei de loratadin

Metoda a fost validat n domeniul 0,05 g/mL 10,0 g/mL.
A fost urmrit efectul pH-ului fazei mobile asupra reteniei, prin
analiza unei soluii standard de loratadin (6,0 g/mL), injectat de trei ori.
Considerand funcia bazic a loratadinei i pentru meninerea acesteia
n form protonat, pH-ul fazei mobile a fost ajustat potentiometric la 2,6
3,1. Se constat c o cretere a pH-ului componentei apoase a fazei mobile
determin creterea timpului de retenie (Figurile nr. 53, 54, 55).
min 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
mAU
0
25
50
75
100
125
150
175
200
DAD1 A, Sig=264,4 Ref=360,100 (LORATADINA 2009-11-02 12-30-23\001-0101.D)
1
.1
1
6
1
.2
6
6
1
.6
1
2
3
.3
7
5

Figura nr.53 Cromatogram a soluiei de loratadin la un volum de injectie
de 10 L, la pH-ul fazei mobile de 2,6

min 0 1 2 3 4 5 6
mAU
0
100
200
300
400
500
600
3
.7
9
3
loratadina

Figura nr.54 Cromatogram a soluiei de loratadin la un volum de injectie
de 10 L, la pH-ul fazei mobile de 2,75
13

min 0 1 2 3 4 5 6 7 8
mAU
0
20
40
60
80
100
5
.0
2
1

Figura nr.55 Cromatogram a soluiei de loratadin la un volum de injectie
de 10 L, la pH-ul fazei mobile de 3,1

Modificarea valorii pH-ului determin modificarea valorilor factorului
de capacitate i a timpului de analiz ct i aria picului. pH-ul de 2,75 pentru
care s-a obinut o arie maxim a picului i un timp de retenie pentru loratadin
de aproximativ 3,6- 3,9 minute este potrivit pentru metoda propus.
Pentru validarea Metodei I HPLC s-a verificat liniaritatea pe domeniul
0,05 g/mL 10,0 g/mL preparndu-se 10 soluii cu concentraii diferite
(ntre 0,05 i 10 g/mL). S-au efectuat 3 serii de determinri, s-au nregistrat
cromatogramele aferente i s-a calculat aria picului pentru fiecare determinare.
S-a reprezentat grafic aria picului corespunztor loratadinei n funcie de
concentraia n loratadin a soluiilor. (Figura nr. 60)

Seria 1, y = 1098,6x + 936,87
R
2
= 0,9979
Seria2, y = 1079,2x + 978,94
R
2
= 0,9971
Seria 3, y = 1095,7x + 944,54
R
2
= 0,9978
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
0 2 4 6 8 10 12
Series1
Series2
Series3

Figura nr. 60 Curbele corespunztoare fiecrei serii de determinri

Ecuaia dreptei de calibrare calculat prin regresie matematic este:
Aria = 1091,2 x Concentraia + 953,45 iar coeficientul de regresie r
2
= 0,9978,
deci liniaritatea este bun pe domeniul de concentraie studiat.
Precizia sistemului a fost demonstrat prin injectarea de ase ori a
soluiei de referin n volum de injecie de 10 L i determinarea ariilor
picurilor corespunztoare loratadinei. Datele obinute au fost prelucrate
statistic i s-au obinut urmtoarele rezultate: deviaia standard SD = 0,9043,
deviaia standard relativ RSD (%) = 0,3690, aadar sistemul este precis.
Selectivitatea metodei a fost determinat prin injectarea urmtoarelor
soluii: soluie-martor (metanol, solventul utilizat la prepararea soluiilor
prob) i soluie de referin (conine 6,0 g loratadin/mL metanol).
Cromatogramele solventului (Figura nr. 63) nu prezint rspunsuri care ar
putea interfera cu determinarea loratadinei n soluia de referin (Figura nr.
64), n concluzie metoda este selectiv.
14


Figura nr. 63 Cromatograma
solventului
min 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
mAU
0
100
200
300
400
500
600
3
.7
7
4
loratadina

Figura nr. 64 - Cromatograma soluiei
standard

Pentru a determina procentul de regsire s-au realizat ase probe de
control cu concentraia loratadinei de 6,0 g/mL. Probele s-au prelucrat n mod
identic i s-au efectuat injecii de 10 L. Utiliznd valorile ariilor picurilor
corespunztoare loratadinei, s-a calculat procentul de regsire a metodei
analitice. Datele obinute au fost prelucrate statistic i s-a constatat c metoda
se ncadreaz n exigenele normelor de validare, ntruct factorul de regsire
este 1,000614.
La stabilirea exactitii metodei de analiz a loratadinei, s-a lucrat prin
metoda adaosului: ntr-o soluie ce conine o cantitate cunoscut de standard,
se introduc volume de soluie de loratadin astfel nct s se obin concentraii
de 50, 100 i 150% din concentraia soluiei ce va fi testat (6,0 g/mL).
Procedeul s-a repetat de trei ori utiliznd soluii etalon preparate separat.
Utiliznd ecuaia dreptei de calibrare i valorile ariilor picurilor
corespunztoare loratadinei, s-a calculat concentraia (g/mL) pentru fiecare
prob n parte. S-a determinat regsirea (calculat ca procent din valoarea
concentraiei teoretice), regsirea medie, precum i domeniul n care variaz
regasirea i s-a constatat c, bias-ul n studiul exactitii Metodei I de
determinare a loratadinei prin HPLC, are valoarea 100,83%, iar domeniul n
care variaz regsirea se ncadreaz n intervalul 95 105%, ceea ce dovedete
c metoda este exact.
S-au calculat limita de detecie (LD = 0,01 g/mL) i limita de
cuantificare (LC = 0,033 g/mL) prin metoda de calcul n funcie de eroarea
standard i panta dreptei de regresie.

5.3.9 APLICAII ALE METODEI I HPLC PENTRU SEPARAREA I
DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI

5.3.9.1 Aplicaii ale Metodei I HPLC de dozare a loratadinei din forme
farmaceutice

Au fost analizate aceleai forme farmaceutice ca i n cazul metodei
turbidimetrice (vezi 4.2) i anume: comprimate cu 10 mg loratadin,
15
comprimate cu eliberare modificat 5 mg/120 mg: loratadin/sulfat de
pseudoefedrin i sirop 1 mg/mL.
Pentru analiza comprimatelor cu 10 mg loratadin s-a determinat
masa medie 0,1026 g prin cntrirea la balana analitic a 20 comprimate.
Comprimatele cntrite s-au adus ntr-un mojar i s-au triturat pn la
obinerea unei pulberi fine, omogene. S-a cntrit o cantitate de pulbere
echivalent cu 10 mg loratadin. Pulberea cntrit i 20 mL cloroform s-au
adus ntr-un balon de 100 mL. Dup agitare energic timp de 10 minute s-a
completat la semn cu acelai solvent. Suspensia obinut s-a filtrat prin hrtie
de filtru cantitativ, iar filtratul s-a adus n vaporizator pn la eliminarea
complet a solventului. Substana astfel separat s-a adus ntr-un balon cotat de
100 mL, s-a dizolvat n 20 mL metanol i s-a completat la semn cu acelai
solvent.
Un volum de 0,5 mL din aceast soluie s-a adus ntr-un balon de 100
mL i s-a completat la semn cu metanol. S-a obinut o concentraie teoretic de
0,5 g/mL.
Au fost preparate un numr de 6 astfel de soluii. Utiliznd procedeul
de lucru descris la capitolul 5.3.7, dup echilibrarea coloanei cromatografice
cu faza mobil timp de 60 de minute, s-au injectat 10 L din fiecare prob i s-
au nregistrat cromatogramele cu detecie n ultraviolet, la 264 nm. (Figura nr.
65)
min 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
mAU
0
20
40
60
80
100
120
140
160 3
.5
2
7
loratadina

Figura nr. 65 Cromatogram a probei de loratadin din comprimat

Din cromatogram se evideniaz selectivitatea metodei: picul
loratadinei este bine evideniat, iar eventualele urme de excipieni nu interfer
cu substana analizat.
S-a determinat coninutul n substan pe comprimat conform
prevederilor FRX. [27] Fa de coninutul declarat n substan activ pe
comprimat, s-a detectat o abatere de 1,48%, valoare ce se ncadreaz n
abaterea admis de 10%.
La dozarea loratadinei din comprimate cu eliberare modificar i
compoziie mixt s-a determinat masa medie 0,9365 g prin cntrirea la
balana analitic a 20 comprimate. Comprimatele cntrite s-au adus ntr-un
mojar i s-au triturat pn la obinerea unei pulberi fine, omogene. S-a cntrit
o cantitate de pulbere echivalent cu 5 mg loratadin (concentraia pentru un
comprimat). Pulberea cntrit s-a prelucrat similar probelor din comprimate
orale. S-a obinut o soluie cu concentraia teoretic de 0,5 g/mL.

16
min 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4
mAU
-20
0
20
40
60
80
100
A
rea: 631.654
3
.6
6
0

Figura nr. 66 Cromatogram a probei de loratadin din comprimat cu
eliberare modificat

Dup cum se poate vedea n figura nr. 66, n cromatograma obinut
dup injectarea soluiei prob, la 3,66 minute (timp de retenie la care elueaz
picul de loratadin) nu apar interferene ale altor compui. S-a determinat
coninutul n substan pe comprimat conform prevederilor FRX. [27] Fa de
coninutul declarat n substan activ pe comprimat, s-a detectat o abatere de
7,28%.
La dozarea loratadinei din sirop, un volum corespunztor cu 5 mg
loratadin (5 mL sirop, doza uzual pentru 24 ore, pentru copii cu vrste ntre
2 i 12 ani) i 10 mL cloroform s-au adus ntr-o plnie de extracie. Dup
agitare energic timp de 10 minute i repaus pn la separarea complet a celor
dou faze, componenta cloroformic s-a colectat ntr-un vas cu dop. Operaia
s-a repetat de 4 5 ori. Soluia de loratadin n cloroform s-a adus n
vaporizator pentru eliminarea complet a solventului. Substana astfel separat
s-a transferat ntr-un balon cotat de 100 mL, s-a dizolvat n 20 mL metanol, s-a
completat la semn cu acelai solvent i s-a omogenizat. 1 mL din aceast
soluie s-a adus ntr-un balon de 100 mL i s-a completat la semn cu metanol.
S-a obinut o soluie cu concentraia teoretic de 0,5 g/mL.

min 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
mAU
0
25
50
75
100
125
150
3
.5
3
5
loratadina

Figura nr. 67 Cromatogram a probei de loratadin din sirop

Dup cum se poate vedea n Figura nr. 67, n cromatograma obinut
dup injectarea soluiei prob, nu a fost identificat nici un pic parazit la 3,535
minute, timp de retenie la care elueaz picul de loratadin.
S-a determinat coninutul n substan activ i s-a comparat cu
valoarea declarat, conform prevederilor FRX. [27] S-a detectat o abatere de
2,49%, valoare ce se ncadreaz n abaterea admis de 5%.
n concluzie, metoda s-a dovedit a fi valid i uor de aplicat n
controlul calitii i evaluarea formelor farmaceutice cu loratadin.

17
5.3.9.2 Aplicaii ale Metodei I HPLC de dozare a loratadinei din diferite
medii biologice

Au fost luate n lucru probe de ser uman, urin i lapte matern.
Pentru studiul probelor de ser uman s-a prelevat snge de la 6
voluntari sntoi crora li s-a administrat loratadin pe cale oral n doze de
10 mg o singur dat pe zi, la aceeai or (9:00 AM). Voluntarii sunt aduli, de
sex masculin, care nu au prezentat niciodat alergie la produsul analizat.
Probele de snge au fost prelevate la 1 or, 2 ore, 5 ore, 12 ore i 24 ore dup
administrare. Dup prelevare, probele de snge au fost centrifugate n tuburi de
centrifug la 3000 rotaii/minut, timp de 10 minute. 1,0 mL ser a fost tratat cu
1,0 mL alcool isoamilic, n scopul precipitrii proteinelor serice. Dup 20
minute de repaus, amestecul a fost supus centrifugrii la 4000 rotaii/minut
timp de 10 minute. S-a luat n lucru supernatantul. [91, 92]
Loratadina este bine absorbit oral i prezint un pic plasmatic dup
aproximativ 2 ore de la ingestie. Este metabolizat n mare parte la metabolitul
su activ, descarboetoxiloratadin. Concentraia loratadinei nemetabolizate n
snge a fost detectat prin Metoda I HPLC, iar modificarea valorilor acesteia
s-a evideniat grafic (Figura nr. 72):

0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0,12
0,14
0,16
0 10 20 30
timpul de recoltare (ore)
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

n

l
o
r
a
t
a
d
i
n

g
/
m
L
)

Figura nr. 72 Modificarea n timp a concentraiei loratadinei (g/mL) din
probele de snge

Prin analiza probelor recoltate de la cei 6 voluntari s-a observat o
uoar cretere a concentraiei loratadinei nemetabolizate n primul interval de
timp (1 - 12 ore de la administrare), dup care o scdere datorat metabolizarii
i eliminrii pe cale renal a acesteia.
Conform literaturii de specialitate, loratadina nemetabolizat se elimin
pe cale renal.[1, 3, 6]. Pentru acest studiu s-au prelevat probe de urin de la 6
voluntari sntoi crora li s-a administrat loratadin pe cale oral n doze de
10 mg o singur dat pe zi, la aceeai or (9:00 AM). Voluntarii sunt aduli, de
sex masculin, care nu au prezentat niciodat alergie la produsul analizat.
Probele de urin au fost prelevate la 1 or, 2 ore, 12 ore i 24 ore dup
administrare. Dup prelevare, probele de urin au fost tratate cu alcool
isoamilic, n scopul precipitrii proteinelor (1 mL alcool isoamilic la 1 mL
urin). Dup mixare 10 minute, i 20 minute de repaus, amestecul a fost supus
centrifugrii la 4000 rotaii/minut timp de 10 minute. S-a luat n lucru
supernatantul.
18
Modificarea valorilor concentraiilor urmelor de loratadin n urin se
observ n Figura nr. 77:

0
0,05
0,1
0,15
0,2
0 10 20 30
timpul de recoltare (ore)
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

n

l
o
r
a
t
a
d
i
n

g
/
m
L
)

Figura nr. 77 Modificarea n timp a concentraiei loratadinei (g/mL) din
probele de urin

Metoda s-a dovedit a fi valid i uor de aplicat n dozarea urmelor de
loratadin nemetabolizat eliminate prin urin.
Loratadina se excret n laptele matern, realiznd concentraii egale cu
cele plasmatice [1, 3, 6]. Studiul a fost efectuat pe probe de lapte matern
prelevat de la o persoan diagnosticat cu urticarie, la 2 luni dup ce a nscut.
Probele de lapte au fost prelevate la 0 ore, 1 or, 2 ore, 3 ore, 6 ore i 8 ore
dup administrarea tratamentului antihistaminic (10 mg loratadin). Dup
prelevare, 4 mL lapte matern a fost mixat cu 1 mL acid tricloracetic 10%.
Amestecul a fost lsat n repaus 20 de minute, iar apoi s-a centrifugat la 5500
rotaii/minut, timp de 15 minute. O prob de 600 L supernatant s-a amestecat
cu 100 L soluie metanolic de cianaldehid 1% i s-a lsat n repaus 5
minute.
Probele pregtite dup procedeul descris mai sus s-au analizat prin
Metoda I HPLC, dup echilibrarea coloanei cromatografice cu faza mobil
timp de 30 de minute. S-au injectat 10 L din fiecare prob i s-au nregistrat
cromatogramele cu detecie n ultraviolet, la 264 nm.
n Figura nr. 80 sunt redate concentraiile loratadinei determinate n
lapte, pe ntreaga perioad de analiz:

0
0,001
0,002
0,003
0,004
0,005
0,006
0,007
0 2 4 6 8 10
timpul de recoltare (ore)
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n

g
/
m
L
)

Figura nr. 80 Modificarea concentraiei n loratadin (g/mL) din laptele
matern dup administrarea medicamentului

19
Concentraia n loratadin din laptele matern crete cu timpul scurs de
la administrare pn la aproximativ 6 ore, apoi ncepe s scad. Metoda I
HPLC este sensibil i poate detecta urmele de loratadin din laptele matern
ntruct, picul acesteia nu interfer cu picurile celorlalte componente din
prob.

5.3.10 Concluziile Metodei I HPLC pentru separarea i determinarea
cantitativ a loratadinei

Metoda de analiz propus a fost optimizat pe domeniul 0,05 10,0
g/mL. S-a stabilit lungimea de und de detecie (264 nm), compoziia fazei
mobile ([trietilamin 0,01% / acetonitril (46/54, v/v)] isopropanol (90/10,
v/v)), precum i pH-ul fazei mobile (2,75). Validarea acestei metode a dus la
concluzia c metoda de analiz propus este liniar, precis i exact.
S-au realizat aplicaii ale metodei pe diferite probe (forme
farmaceutice, medii biologice).
n analiza formelor farmaceutice s-au luat n lucru: comprimate orale
cu loratadin, comprimate cu eliberare modificat cu loratadin i sulfat de
pseudoefedrin, i sirop cu loratadin. Regsirea medie (%) a concentraiilor
calculate pentru fiecare form farmaceutic se afl n intervalul 92,71
102,49, ceea ce dovedete c metoda este valid i poate fi folosit n controlul
calitii i la evaluarea produselor farmaceutice cu loratadin.
S-au analizat probe biologice (ser, urin i lapte matern) dup
administrarea oral a 10 mg loratadin n 24 ore.
Metoda utilizat pentru efectuarea acestor determinri s-a dovedit a fi
simpl, selectiv, exact, precis i reproductibil pentru dozarea loratadinei.

5.4 METODA a II-a HPLC PENTRU SEPARAREA I
DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI

Principiul metodei: Separarea i determinarea cantitativ a loratadinei,
folosind o coloan XDB-C8 i faza mobil, amestec tampon fosfat pH = 2,9
cu acetonitril n raport 15:11 (v/v), cu detecie la 280 nm.
Condiii cromatografice:
HPLC Agilent 1200, cu pomp cuaternar, DAD, termostat, sistem de
degazare, autosampler.
coloan cromatografic tip C8 (Zorbax, Eclipse XDB-C8, capete dublu
legate, 4.6 mm x 150 mm, cu mrimea particulelor de 5 m, t
limit
=
60, pH = 2 9);
debit: 1,5 mL/min;
temperatura coloanei: 27C;
volum de injectare: 10 L;
20
faza mobil: acetonitril / (soluie apoas de NH
4
H
2
PO
4
10 g/L n care s-
au adugat 5 mL H
3
PO
4
) : 11/15 (v/v)
detecie: 280 nm;

Rezultate

S-au stabilit condiiile optime de lucru avndu-se n vedere urmtoarele
aspecte: lungimea de und de detecie, domeniul de concentraie a soluiei de
loratadin, efectul compoziiei fazei mobile, influena pH-ului fazei mobile i
influena temperaturii coloanei cromatografice.
Pentru a stabili lungimea de und de detecie s-a luat n lucru o prob
de soluie standard de loratadin. Dup echilibrarea coloanei cromatografice cu
faz mobil timp de 60 de minute s-au efectuat injecii de 10 L la diferite
lungimi de und att din domeniul UV ct i din domeniul vizibil i s-a constat
c la lungimea de und = 280 nm, loratadina prezint nlimea i aria picului
optime pentru analizele propuse.
Domeniul de concentraie s-a ales prin analiza a 10 diluii ale soluiei
standard de loratadin cu concentraii ntre 0,5 i 12 g/mL (Figura nr. 83).

0,0000
2000,0000
4000,0000
6000,0000
8000,0000
10000,0000
12000,0000
0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 14,00

Figura nr. 83 Stabilirea domeniului de concentraie a soluiei de loratadin

S-a verificat liniaritatea i s-a constatat c ea este respectat pn la
concentraia de 9,0 g/mL, deci metoda a fost validat n domeniul 0,5 g/mL
9,0 g/mL.
A fost studiat efectul compoziiei fazei mobile prin nregistrarea
cromatogramelor unor soluii standard de loratadin, utiliznd ca faz mobil
un amestec de solvent A (soluie apoas de fosfat monobazic de amoniu 10
mg/mL cu pH-ul ajustat la 2,9 cu acid fosforic) i solvent B (acetonitril) n
diferite rapoarte. S-a reprezint grafic variaia timpului de retenie (Figura nr.
85) i variaia factorului de capacitate (Figura nr. 86) n funcie de procentul de
solvent B din compoziia fazei mobile.

21
0
1
2
3
4
5
6
7
0 20 40 60
Procentul de solvent B
T
i
m
p
u
l

d
e

r
e
t
e
n

i
e

(
m
i
n
u
t
e
)

Figura nr. 85 Reprezentarea
grafic a timpului de retenie n
funcie de procentul de acetonitril
din compoziia fazei mobile
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
0 20 40 60
Procentul de solvent B
F
a
c
t
o
r
u
l

d
e

c
a
p
a
c
i
t
a
t
e
,

k
'

Figura nr. 86 Reprezentarea
grafic a factorului de capacitate n
funcie de procentul de acetonitril
din compoziia fazei mobile

Se observ c modificarea cantitii de acetonitril din compoziia fazei
mobile are o influen semnificativ asupra reteniei loratadinei. Raportul de
amestecare solvent A / solvent B, ales pentru determinrile ulterioare este de
15/11 (v/v) ntruct astfel se obine un factor de capacitate optim i un timp de
retenie al loratadinei de aproximativ 4 minute care asigur evitarea
interferenei unor excipieni prezeni n produsele farmaceutice sau n probele
biologice analizate.
A fost urmrit efectul pH-ului fazei mobile asupra reteniei, prin
analiza unei solutii standard de loratadina (6 g/mL), injectat de trei ori. S-au
efectuat trei serii de determinri. Pentru fiecare serie s-a preparat cte o faz
mobil conform indicaiilor de la capitolul 5.4.5, modificndu-se pH-ul soluiei
apoase ntre 2,0 i 3,5. Modificarea valorii pH-ului a determinat modificarea
valorilor factorului de capacitate, a ariei picului loratadinei i a timpului de
analiz. pH-ul de 2,9 pentru care s-a obinut aria maxima si un timp de retenie
pentru loratadin de aproximativ 4 minute este potrivit pentru metoda aleas.
Temperatura de lucru a fost aleas prin nregistrarea unei serii de
cromatograme pentru o soluie standard de loratadin, utiliznd ca faz mobil,
amestecul: acetonitril / (soluie apoas de NH
4
H
2
PO
4
10 g/L n care s-au
adugat 5 mL H
3
PO
4
): 11/15 (v/v). Temperatura coloanei a fost variat ntre
27 45 C. (Figura nr. 89)

22
min 0 1 2 3 4 5 6
mAU
0
100
200
300
400
500
600
700

3
.
8
0
6
loratadina
(temp. coloana = 27 grade celsius)
min 0 1 2 3 4 5 6
mAU
0
100
200
300
400
500
600

4
.
5
2
2
loratadina
(temp. coloana = 35 grade celsius)
min 0 1 2 3 4 5 6
mAU
0
100
200
300
400
500
600

5
.
2
7
9
loratadina
(temp coloana = 45 grade celsius)

Figura nr. 89 - Cromatogram comparativ a soluiei standard de loratadin la
diferite temperaturi

Pentru analiza loratadinei prin HPLC, s-a ales temperatura de lucru de
27 C, cnd loratadina prezint un timp de retenie de aproximativ 4 minute,
iar picul su este simetric.
Metoda a II-a HPLC a fost validat. S-a verificat liniaritatea pe
domeniul 0,12 g/mL 0,60 g/mL. S-au nregistrat cromatogramele aferente
i s-a calculat aria picului pentru fiecare determinare. S-a reprezintat grafic
variaia ariei medii n funcie de concentraie i s-a determin domeniul pentru
care aceast variaie este liniar.(Figura nr. 96)

Linear Regression with
95% Mean Prediction Interval and
95% Individual Prediction Interval
aria = 956,68*conc. - 59,427
R-Square = 0,9985
0
2000
4000
6000
8000
10000
0 2 4 6 8 10
concentraia

a
r
i
a

m
e
d
i
e

Figura nr. 96 Curba de etalonare pentru determinarea loratadinei prin HPLC
Metoda este liniar n domeniul de concentraie ales (0,5 9,0 g/mL).
Ecuaia dreptei este: Aria = 956,68 x Concentraia 59,428. Pe acest
interval, coeficientul de regsire are valoarea r =0,9992 iar eroarea standard a
curbei de regresie are valoarea SE= 95,668.
Precizia sistemului a fost demonstrat prin injectarea de ase ori a
soluiei de referin n volum de injecie de 10 L i determinarea ariilor
23
picurilor corespunztoare loratadinei. Datele obinute au fost prelucrate
statistic i s-au obinut urmtoarele rezultate: deviaia standard SD = 4,702229
i deviaia standard relativ RSD(%) = 1,919677.
Selectivitatea metodei a fost determinat prin injectarea urmtoarelor
soluii: soluie-martor (metanol, solventul utilizat la prepararea soluiilor
prob) i soluie de referin (conine 6,0 g loratadin/mL metanol).
Cromatograma solventului (Figura nr. 98) nu prezint rspunsuri care ar putea
interfera cu determinarea loratadinei n soluia de referin (Figura nr. 99), deci
metoda este selectiv.


Figura nr. 98 Cromatograma
solventului

min 0 1 2 3 4
mAU
0
100
200
300
400
500
600
700
800 3
.8
1
0
loratadina

Figura nr. 99 - Cromatograma soluiei
standard de loratadin 6 g/mL

Pentru a determina procentul de regsire n cazul Metodei a II-a
HPLC, s-au realizat ase probe de control cu concentraia loratadinei de 6,0
g/mL. Probele s-au prelucrat n mod identic i s-au efectuat injecii de 10 L.
Utiliznd valorile ariilor picurilor corespunztoare loratadinei, s-a calculat
factorul de regsire a metodei analitice. Metoda se ncadreaz n exigenele
normelor de validare, ntruct Factorul de regsire este 0,9977.
Pentru determinarea exactitii Metodei a II-a de analiz a loratadinei,
s-a lucrat prin metoda adaosului. Utiliznd ecuaia dreptei de calibrare i
valorile ariilor picurilor corespunztoare loratadinei, s-a calculat concentraia
(g/mL) pentru fiecare prob n parte. S-a reprezentat grafic concentraia
regsit n funcie de concentraia teoretic (Figura nr. 100).

0
2
4
6
8
1 2 3 4 5 6 7 8 9
nr. prob
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a
(

g
/
m
L
)
concentraia teoretic concentraia calculat

Figura nr. 100 Graficul concentraiilor pentru determinarea exactitii
metodei

24
S-a determinat regsirea (calculat ca procent din valoarea
concentraiei teoretice), regsirea medie, precum i domeniul n care variaz
regasirea i s-a constatat c bias-ul are valoarea 100,20%, iar domeniul n care
variaz regsirea se ncadreaz n intervalul 95 105%, ceea ce dovedete c
metoda este exact.
S-au calculat limita de detecie (LD = 0,3 g/mL) i limita de
cuantificare (LC = 1,0 g/mL). n concluzie, metoda se poate extinde la
concentraii mai mici de loratadin dect cele din domeniul studiat.

5.4.9 APLICAII ALE METODEI a II-a HPLC PENTRU SEPARAREA
I DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI

5.4.9.1 Aplicaii ale Metodei a II-a HPLC de dozare a loratadinei din
forme farmaceutice

Aa cum am procedat la Metoda I HPLC, i n acest caz au fost
analizate urmtoarele forme farmaceutice: comprimate cu 10 mg loratadin,
comprimate cu eliberare modificat 5 mg/120 mg: loratadin/sulfat de
pseudoefedrin i sirop 1 mg/mL. Toate probele obinute din forme
farmaceutice au fost prelucrate n mod identic ca la Metoda I HPLC, dar citite
n condiiile cromatografice ale metodei de fa.
Au fost preparate un numr de 6 probe din comprimate cu 10 mg
loratadin. Utiliznd procedeul de lucru descris la capitolul 5.4.7, dup
echilibrarea coloanei cromatografice cu faza mobil timp de 60 de minute, s-au
injectat 10 L din fiecare prob i s-au nregistrat cromatogramele cu detecie
n ultraviolet, la 280 nm. (Figura nr. 101)

min 0 1 2 3 4 5
mAU
0
20
40
60
80
100
3
.8
3
9
loratadina

Figura nr. 101 Cromatogram a probei de loratadin din comprimat

Din cromatogram se evideniaz selectivitatea metodei: picul
loratadinei este bine evideniat, iar eventualele urme de excipieni nu interfer
cu substana analizat. S-a determinat coninutul n substan pe comprimat
conform prevederilor FRX. [27] Fa de coninutul declarat n substan activ
25
pe comprimat, s-a detectat o abatere de 0,49%, valoare ce se ncadreaz n
abaterea admis de 10%.
La analiza comprimatelor cu compoziie mixt, dup injectarea
soluiei prob, nu a fost identificat nici un pic la 3,841 minute, timp de retenie
la care elueaz loratadina. Fa de coninutul declarat n substan activ pe
comprimat, s-a detectat o abatere de 3,08%.
Probele obinute din soluia oral s-a detectat o abatere de 1,74%,
valoare ce se ncadreaz n abaterea admis de 5%.
n concluzie, Metoda a II-a HPLC s-a dovedit a fi valid i uor de
aplicat n controlul calitii i evaluarea formelor farmaceutice cu loratadin.
5.4.9.2 Aplicaii ale Metodei a II-a HPLC de dozare a loratadinei din
diferite medii biologice

Au fost luate n lucru probe de ser uman, urin i lapte matern.
Prelevarea lichidului biologic, momentul prelevrii precum i voluntarii de la
care s-au efectuat recoltrile coincid cu cei de la Metoda I HPLC. Prelucrarea
probelor (deproteinizarea, separarea loratadinei din lichid, prepararea soluiilor
de analizat) este de asemenea identic cu cea de la prima metod
cromatografic.
S-au nregistrat cromatogramele corespunztoare probelor obinute din
ser uman i s-au calculat ariile picurilor loratadinei observndu-se o cretere
mai rapid a concentraiei loratadinei nemetabolizate n primul interval de timp
(1 - 2 ore de la administrare), o cretere mai lent a acesteia n a doua parte (2
12 ore), dup care o scdere datorat metabolizarii i eliminrii pe cale
renal a substanei active. (Figura nr. 108)

0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0,12
0,14
0,16
0 10 20 30
timpul de recoltare (ore)
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

n

l
o
r
a
t
a
d
i
n

g
/
m
L
)

Figura nr. 108 Modificarea concentraiei loratadinei (g/mL) din probele de
snge recoltate n timp de la 1 la 24 ore

La aplicarea Metodei a II-a HPLC pe probele de urin au fost
nregistrate cromatogramele corespunztoare probelor, s-au calculat ariile
picurilor loratadinei i s-a observat c picurile celorlalte componente din prob
nu interfer cu picul loratadinei, ceea ce face ca metoda s fie sensibil pentru
loratadin n mediul analizat. Evoluia concentraiei de loratadin n urin a
fost reprezentat grafic (Figura nr. 113)

26
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0 10 20 30
timpul de recoltare (ore)
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

n

l
o
r
a
t
a
d
i
n

g
/
m
L
)

Figura nr. 113 Modificarea concentraiei loratadinei (g/mL) n urin, n
funcie de timp de la 1 la 24 ore

Loratadina este excretat n laptele matern dup aproximativ 1,5 2
ore de la administrare. n Figura nr. 117 sunt consemnate concentraiile
loratadinei determinate n lapte, pe ntreaga perioad de analiz:

0
0,001
0,002
0,003
0,004
0,005
0,006
0,007
0 2 4 6 8 10
timpul de recoltare (ore)
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n

g
/
m
L
)

Figura nr. 117 Modificarea n timp a concentraiei loratadinei (g/mL) din
laptele matern dup administrarea medicamentului

Concentraia n loratadin din laptele matern crete cu timpul scurs de
la administrare (pn la 6 ore) apoi ncepe s scad. Metoda a II-a HPLC este
sensibil i poate detecta urmele de loratadin ntruct, picul acesteia nu
interfer cu picurile celorlalte componente din prob.

5.4.10 Concluziile Metodei a II-a HPLC pentru separarea i determinarea
cantitativ a loratadinei

S-a descris i validat o nou metod HPLC pentru identificarea i
determinarea cantitativ a loratadinei n condiii isocratice prin detectarea
acesteia n domeniul ultraviolet, la 280 nm. Metoda de analiz a fost
optimizat pe domeniul 0,5 9,0 g/mL. S-a stabilit lungimea de und de
detecie (280 nm), compoziia fazei mobile acetonitril / (soluie apoas de
NH
4
H
2
PO
4
10 g/L n care s-au adugat 5 mL H
3
PO
4
): 11/15 (v/v), temperatura
de lucru (27C), precum i pH-ul fazei mobile (2,9).
Metoda este liniar pe domeniul studiat ntruct este respectat criteriul
de admisibilitate R
2
0,0995 (n cazul metodei de fa, R
2
= 0,9985); ecuaia
27
dreptei de regresie este: Aria = 956,68 x concentraie 59,428; eroarea
standard a curbei de regresie este SE = 95,668. Sistemul este precis pentru c
RSD
(n = 6)
= 1,92%, adic mai mic dect 5%. Cromatograma solventului sau a
soluiei martor nu prezint rspunsuri care ar putea interfera cu determinarea
loratadinei n soluia de referin, aadar metoda este selectiv. S-a analizat
exactitatea metodei i s-a calculat bias-ul 100,20%, care se ncadreaz n
intervalul 95 105%, deci metoda este exact. S-au calculat limita de detecie
(LD = 0,3 g/mL) i limita de cuantificare (LC = 1,0 g/mL).
n concluzie, metoda de analiz propus este liniar, precis, selectiv
i exact.
Verificarea acestor parametri s-a efectuat prin aplicarea metodei pe
diferite probe (forme farmaceutice, medii biologice).
Ca i n cazul Metodei I HPLC, n analiza formelor farmaceutice s-au
luat n lucru: comprimate orale cu loratadin, comprimate cu eliberare
modificat cu loratadin i sulfat de pseudoefedrin, i sirop cu loratadin.
Regsirea medie (%) pentru fiecare form farmaceutic analizat s-a regsit n
intervalul 96,91 101,74 %, aadar metoda este valid i poate fi folosit n
controlul calitii i la evaluarea produselor farmaceutice cu loratadin.
S-au analizat probe biologice (ser, urin i lapte matern) dup
administrarea oral a 10 mg loratadin n 24 ore.
Metoda stabilit s-a dovedit a fi sensibil, cu o bun acuratee i simpl
pentru determinarea nivelului de loratadin din diferite probe (de sintez sau
biologice), n concluzie este potrivit pentru studii farmacocinetice i de
biodisponibilitate ale loratadinei.

5.5 STUDIU COMPARATIV AL APLICAIILOR METODEI I HPLC
I METODEI a II-a HPLC

S-a realizat o analiz comparativ a rezultatelor obinute la dozarea
loratadinei din forme farmaceutice i medii biologice prin metoda descris la
capitolul 5.3 METODA I HPLC PENTRU SEPARAREA I
DETERMINAREA CANTITATIV A LORATADINEI, cu rezultatele
obinute la dozarea loratadinei prin metoda descris la capitolul 5.4 METODA
a II-a HPLC PENTRU SEPARAREA I DETERMINAREA CANTITATIV
A LORATADINEI i s-au obinut urmtoarele rezultate:
La determinarea loratadinei din comprimate orale, diferena dintre
media obinut prin Metoda I (98,51) i cea obinut prin cea de-a doua metod
(99,50) este nesemnificativ. Valorile SD i RSD n ambele cazuri sunt
comparabile. (Figura nr. 118 i Tabelul nr. 94)

28
90
100
110
1 2 3 4 5 6
Proba analizat
C
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n


r
e
g

s
i
t


(
%
)
Metoda I Metoda II

Figura nr. 118 Coninutul procentual de loratadin obinut comparativ pe un
numr de 6 probe prin cele dou metode

Tabelul nr. 94 Date statistice privind determinarea coninutului n loratadin
a comprimatelor orale prin ambele metode
Parametrul statistic Metoda I Metoda II
Media 98,51316 99,50795
Deviaia standard (SD) 1,217906 1,211622
Deviaia standard relativ (RSD%) 0,4972 0,4946

La analiza comprimatelor cu compoziie mixt, media concentraiei
regsite este mai mic prin Metoda I (92,71) dect prin Metoda a II-a (96,91).
(Figura nr. 119 i Tabelul nr. 96)

80
90
100
110
1 2 3 4 5 6
Proba analizat
C
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n


r
e
g

s
i
t


(
%
)
Metoda I Metoda II

Figura nr. 119 Coninutul procentual de loratadin obinut comparativ pe un
numr de 6 probe prin cele dou metode

Tabelul nr. 96 Date statistice privind determinarea coninutului n loratadin
a comprimatelor cu eliberare modificat prin ambele metode
Parametrul statistic Metoda I Metoda II
Media 102,4917 96,91266
Deviaia standard (SD) 0,878801 1,405741
Deviaia standard relativ
(RSD%)
0,3587 0,57389

Determinarea loratadinei din sirop a dus la concluzia c mediile
concentraiilor regsite prin ambele metode sunt apropiate. (Figura nr. 120 i
Tabelul nr. 98)
29

90
100
110
1 2 3 4 5 6
Proba analizat
C
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n


r
e
g

s
i
t


(
%
)
Metoda I Metoda II

Figura nr. 120 Coninutul procentual de loratadin obinut comparativ pe un
numr de 6 probe prin cele dou metode

Tabelul nr. 98 Date statistice privind determinarea coninutului siropului n
loratadin, prin ambele metode
Parametrul statistic Metoda I Metoda II
Media 104,2409 101,7412
Deviaia standard (SD) 0,750301 0,886604
Deviaia standard relativ
(RSD%)
0,306309 0,36195

Conform ambelor metode, concentraiile loratadinei regsite n probele
de ser uman au valori apropiate i sunt detectabile dup 2 ore de la
administrarea medicamentului. (Figura nr. 121)

0
0,05
0,1
0,15
0,2
1 2 3 4 5 6 7
Probele analizate (1 - 6) i media acestora (7)
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n

g
/
m
L
)
Metoda I Metoda II

Figura nr. 121 Coninutul n loratadin a sngelui prelevat la 2 ore dup
administrarea medicamentului, determinat prin cele dou metode

Concentraiile loratadinei regsite n probele de urin prin Metoda I au
valori apropiate cu cele regsite prin metoda a II-a i sunt detectabile tot dup
2 ore de la administrarea medicamentului. (Figura nr. 125)

30
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0,07
1 2 3 4 5 6 7
Probele analizate (1 - 6) i media acestora (7)
c
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n

g
/
m
L
)
Metoda I Metoda II

Figura nr. 125 Coninutul n loratadin al urinei prelevate dup 2 ore de la
administrarea medicamentului, determinat prin cele dou metode

Urmele de loratadin ce trec n laptele matern pot fi detectate att prin
Metoda I HPLC ct i prin Metoda a II-a, rezultatele fiind apropiate. (Figurile
nr. 128, 129, 130)

0,004
0,006
1 2
Metoda
C
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n


(
g
/
m
L
)

Figura nr. 128 Coninutul n
loratadin al laptelui matern
prelevat la 3 ore dup administrarea
medicamentului, determinat prin
cele dou metode
0,004
0,008
1 2
Metoda
C
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n


(
g
/
m
L
)

Figura nr. 129
Coninutul n loratadin
al laptelui matern
prelevat la 6 ore dup
administrarea
medicamentului,
determinat prin cele dou
metode

0
0,01
1 2
Metoda
C
o
n
c
e
n
t
r
a

i
a

d
e

l
o
r
a
t
a
d
i
n


(
g
/
m
L
)

Figura nr. 130 Coninutul n loratadin al
laptelui matern prelevat la 8 ore dup
administrarea medicamentului, determinat
prin cele dou metode

5.5.7 Concluziile studiului comparativ

ntruct ambele metode se doresc a fi utile n studiile de analiza i
controlul medicamentului, n studii de bioechivalen i de farmacocinetic, n
lucrarea de fa s-au realizat aplicaii ale metodelor att pe forme farmaceutice
(comprimate, comprimate cu eliberare modificat, soluie oral), ct i n
medii biologice (ser uman, urin, lapte matern).
Media obinut la analiza comprimatului cu 10 mg loratadin, prin
Metoda I (98,51) are valoare aproape egal cu media obinut prin cea de-a
doua metod (99,50). Valorile SD i RSD n ambele cazuri sunt comparabile.
Pentru comprimatul cu compoziie mixt media concentraiei regsite este mai
mic prin Metoda I (92,71) dect prin Metoda a II-a (96,91). i n cazul
siropului cu loratadin mediile concentraiilor regsite sunt aproape egale, cea
obinut prin Metoda I (102,49) fiind uor mai crescut dect valoarea obinut
prin Metoda a II-a (101,74).
Concentraiile loratadinei regsite n probele de ser uman i n probele
de urin au valori apropiate i sunt detectabile dup 2 ore de la administrarea
31
medicamentului. Urmele de loratadin ce trec n laptele matern pot fi detectate
att prin Metoda I HPLC ct i prin Metoda a II-a, rezultatele fiind apropiate.
Rezultatele primei metode sunt, deci comparabile cu cele ale metodei a
doua, nregistrndu-se o variaie a rezultatelor de 0,99%.
Trebuie menionat i faptul c metodele sunt uor de realizat, aparatura
este simpl, iar timpul de citire pentru o prob este scurt (aproximativ 4
minute), ceea ce permite analiza unui numr considerabil de probe ntr-un timp
rezonabil.

CONCLUZII GENERALE

Lucrarea de doctorat intitulat Noi metode de analiz a
antihistaminicelor din a doua generaie este structurat n dou pri: partea
teoretic (Stadiul cunoaterii) i partea personal (partea experimental).

Partea teoretic a lucrarii cuprinde trei capitole.
n CAPITOLUL 1 sunt prezentate o serie de aspecte generale
referitoare la medicamentele antihistaminice, cum ar fi:
afeciunile pe care le trateaz, modul de aciune, structura
chimic, clasificarea, precum i date farmacologice ale acestora.

CAPITOLUL 2 cuprinde o serie de proprieti fizico-chimice
i farmacologice ale loratadinei, antihistaminic din generaia a
doua, substan analizat n lucrarea de fa.

n CAPITOLUL 3 sunt prezentate date teoretice privind
metodologia de lucru: tehnici de analiz, noiuni de validare i
reglementri privind studiile de stabilitate.

Partea personal a lucrrii are, la rndul su, dou capitole:
CAPITOLUL 4: Metod spectrofotometric pentru separarea
i determinarea cantitativ a loratadinei i,

CAPITOLUL 5: Metode HPLC pentru separarea i
determinarea cantitativ a loratadinei

Metoda spectrofotometric din CAPITOLUL 4 const n determinarea
turbidimetric a loratadinei folosind reactivul tetraiodomercuriat de potasiu. Se
formeaz un compus greu solubil n mediul de reacie care induce opalescena
probei. Complexul nou format este analizat spectrofotometric n domeniul
ultraviolet.

Metoda a fost elaborat, stabilindu-se condiiile optime de lucru:
Lungimea de und de detecie: = 362 nm;
32
Concentraia soluiei de K
2
[HgI
4
]: un volum de 1 mL K
2
[HgI
4
]
2 x 10
-3
M pentru 5 mL prob;
Aciditatea necesar reaciei: 1 mL soluie HCl 0,05M pentru 5
mL prob;
Stabilitatea reaciei: absorbana poate fi citit dup 10 minute
de la adugarea reactivilor, iar produsul de reacie este stabil
nc 10 minute.

S-a realizat, de asemenea, validarea metodei de analiz, verificnd
parametrii: liniaritatea funciei de rspuns, liniaritatea rezultatelor, precizia
(repetabilitatea deteciei, repetabilitatea metodei, precizia intermediar),
exactitatea, limita de detecie, limita de cuantificare. n urma efecturii
analizelor i a evalurii rezultatelor, putem declara c toate criteriile de
admisibilitate setate au fost ndeplinite, iar validarea se consider
corespunztoare. Metoda analitic este rapid, are limitele de detecie i de
cuantificare mici, mult sub limita de admisibilitate stabilit pentru analiza i
controlul medicamentelor.

Parametrii obinui n urma validrii sunt:
Domeniul de liniaritate: 10 100 g/mL
Coeficientul de corelaie r = 0,99984
Precizia sistemului: RSD = ntre 0,28 i 1,43% (<5%)
Exactitatea metodei: bias = 101,21%
Limita de detecie: 1,7 mg/mL
Limita de cuantificare: 5,6 mg/mL

Prelucrarea probelor este simpl, nu necesit aparatur sau tehnici de
lucru laborioase. Prin urmare metoda se preteaz la studii de analiza i
controlul medicamentelor. S-au realizat aplicaii ale metodei turbidimetrice de
determinare a loratadinei din diferite forme farmaceutice: comprimate orale,
comprimate cu eliberare modificat i compoziie mixt (5 mg loratadin, 120
mg pseudoefedrin, excipieni) i sirop. n toate cele trei cazuri regsirea
medie se ncadreaz n normele Farmacopeei Romne ed. X i n cele ale
Farmacopeei Europene ed. 6.0.
Metoda este facil, iar timpul de citire spectrofotometric este redus,
ceea ce permite efectuarea unui numr mare de analize ntr-un timp relativ
scurt, aadar, se poate aplica n studii de bioechivalen.

CAPITOLUL 5 este cel mai amplu capitol al lucrrii. El cuprinde
elaborarea i validarea a dou metode lichid-cromatografice de nalt
performan pentru separarea i determinarea cantitativ a loratadinei.
Aplicabilitatea celor dou metode a fost dovedit prin numeroase analize ale
formelor farmaceutice cu loratadin i ale diferitelor medii biologice ce pot
conine loratadin (snge, urin, lapte matern).

33
Prima metod HPLC pentru separarea i determinarea cantitativ a
loratadinei a fost elaborat i validat, obinndu-se urmtoarele rezultate:

Condiii cromatografice stabilite:
o HPLC Agilent 1200, cu pomp cuaternar, DAD, termostat,
sistem de degazare, autosampler;
o coloan cromatografic tip C18 (250 x 4,6) 5 m XDB - C18
Agilent (Zorbax Eclipse XDB-18); mrime pori 80; suprafaa
180 m
2
/g; t
limit
=60, pH = 2 9; capete dublu legate; carbon
legat 10%.
o debit: 1 mL/min;
o temperatura coloanei: 27C;
o volum de injectare: 10 L;
o faza mobil: soluie de trietilamin 0,01% (v/v) ajustat la pH =
2,75 cu acid ortofosforic / acetonitril (46/54, v/v)] isopropanol
(90/10, v/v);
o detecie: 264 nm.

Parametrii obinui n urma validrii:
o Liniaritatea pe domeniul 0,05 10 g/mL
o Coeficientul de corelaie r = 0,9988
o Precizia sistemului RSD = 0,3690%
o Exactitatea metodei bias = 100,228%
o Limita de detecie LD = 0,010 g/mL
o Limita de cuantificare LC = 0,033 g/mL

Avnd n vedere criteriile de admisibilitate pentru fiecare parametru de
validare n parte, considerm c validarea este corespunztoare, astfel:
conformitatea sistemului este corespunztoare pentru metoda aleas, precizia
metodei este optim, cromatogramele fazei mobile sau ale solventului nu
prezint rspunsuri care ar putea interfera cu determinarea loratadinei din
soluia standard, deci metoda poate fi considerat selectiv.
Metoda a fost aplicat pentru determinarea cantitativ a loratadinei din
comprimate, comprimate cu eliberare modificat, soluie oral, precum i din
ser uman, urin i lapte matern.

n a doua parte a CAPITOLULUI 5 este prezentat dezvoltarea i
validarea celei de-a doua metode HPLC pentru separarea i determinarea
cantitativ a loratadinei, obinndu-se urmtoarele rezultate:

Condiii cromatografice stabilite:
o HPLC Agilent 1200, cu pomp cuaternar, DAD, termostat,
sistem de degazare, autosampler;
34
o coloan cromatografic tip C8 (Zorbax, Eclipse XDB-C8,
capete dublu legate, 4.6 mm x 150 mm, cu mrimea particulelor
de 5 m, t
limit
= 60, pH = 2 9);
o debit: 1,5 mL/min;
o temperatura coloanei: 27C;
o volum de injectare: 10 L;
o faza mobil: acetonitril / (soluie apoas de NH
4
H
2
PO
4
10 g/L
n care s-au adugat 5 mL H
3
PO
4
) : 11/15 (v/v);
o detecie: 280 nm.

Parametrii obinui n urma validrii:
o Liniaritatea pe domeniul 0,5 9,0 g/mL
o Coeficientul de corelaie r = 0,9992
o Precizia sistemului RSD = 1,92%
o Exactitatea metodei bias = 100,20%
o Limita de detecie LD = 0,03 g/mL
o Limita de cuantificare LC = 1,0 g/mL

Studiul parametrilor de validare au dus la concluzia c metoda este
corespunztoare, i a fost aplicat la determinarea loratadinei din forme
farmaceutice orale (comprimat, soluie oral) precum i din medii biologice
(snge, urin, lapte matern).

n ultima parte s-a realizat un studiu comparativ al celor dou metode
HPLC prin confruntarea rezultatelor aplicaiilor realizate pe forme
farmaceutice i n medii biologice.
Probele realizate din medicamente au avut aceleai concentraii,
aceleai condiii de lucru, aceiai reactivi i aceeai aparatur utilizat pentru
ambele metode. Rezultatele obinute sunt foarte apropiate, semn c metodele
sunt precise i selective.
Pentru studiul mediilor biologice (snge, urin, lapte matern) s-au
recoltat probe de la aceiai voluntari, n aceleai condiii i n acelai timp.
Probele au fost prelucrate identic pentru ambele metode. Rezultatele obinute
prin Metoda I HPLC sunt aproape identice cu cele obinute prin Metoda a II-a
HPLC.
Ambele metode pot fi utilizate pentru analiza cantitativ a loratadinei
din forme farmaceutice orale sau din lichide biologice, cu rezultate foarte bune
i comparabile (limitele admise de specificaiile de calitate = 95 105%).
Rezultatele obinute vin s confirme faptul c metodele elaborate sunt
exacte, precise i ndeplinesc toate rigorile procesului de validare analitic.
n elaborarea prezentei lucrri am utilizat o bibliografie divers,
selectnd din multitudinea datelor de literatur de specialitate un numr redus
de referine (128), i anume doar pe cele considerate semnificative scopului
propus n prezenta lucrare: elaborarea, validarea i aplicarea n practica
35
analitic a unor metode de determinare cantitativ pentru loratadin,
medicament cu efect antihistaminic H
1
.

PERSPECTIVE DE CERCETARE

Folosirea metodelor spectrofotomotrice i cromatografice instituite i
validate pentru detectarea loratadinei att din produse farmaceutice ct
i din probe biologice (snge, ser, plasm, urin, lapte matern, etc.)
Folosirea metodelor propuse pentru determinarea cantitativ a
loratadinei n testele de stabilitate a comprimatelor i soluiilor orale

BIBLIOGRAFIE SELECTIV
(se pstreaz numerotarea din tez)


1. Cristea, A. N., Tratat de farmacologie, Editura Medical, Bucureti
2005, 639-659
3. Baer, C. L., Williams, B. R., Clinical Pharmacology and Nursing,
Third Edition, Springhouse, Pennsylvania 1996, 943-954
6. Stroescu, V., Farmacologie, Editura ALL, Bucuresti 1999, 138-142
12. David, A.W., Thomas, L.L., Foyes Principles of Medicinal Chemistry,
Fifth Edition, Lippincott Williams &Wilkins, 2002, 805
13. *** The Pharmacopeia of the United States of America,
Eighteenth Revision, 1050
18. Nettis, E; Colanardi, MC; Barra, L; Ferrannini, A; Vacca, A;
Tursi, A, Levocetirizine in the treatment of chronic idiopathic urticaria: a
randomized, double-blind, placebo-controlled study, The British journal of
dermatology 154 (3), March 2006, 5338.
19. Howell, G, III; West, L; Jenkins, C; Lineberry, B; Yokum, D;
Rockhold, R, In vivo antimuscarinic actions of the third generation
antihistaminergic agent, desloratadine (Free full text), BMC pharmacology
5, August 2005, 13.
25. *** European Pharmacopoeia 6.0, Strassbourg, 2286-2288
27. *** Farmacopeea Romn, Ediia a X-a, Editura Medical,
Bucureti, 1998, 73, 132, 447, 604, 664, 801, 834, 836
30. SU Yi-dong, WU Fan-hong, Synthesis of 8-Chloro-10,11-
dihydro-4-aza-5H-dibenzo [a,d] cyclohepten-5-one, Journal oh East China
University of Science and Technology, 2002-06
31. Cerrada, V., Paz Mata-Martn, M., Luis Novella, J., Alvarez-
Builla, J., Synthesis of 2- and 4-hydroxymethyl Loratadine, usual
impurities in Loratadine syrup formulations, Issue in Honor of Prof. J.
Elguero and P. Molina, ARKIVOC 2005 (ix), 200-206
36
32. The Merck Index, 12th ed., Merck KgaA D-64271 Darmstadt,
Germany, 1996, 953
35. *** United States Pharmacopeia and National Formulary (USP
30-NF 25). Vol 2. Rockville, MD: United States Pharmacopeia
Convention; 2007, 2492-2497
36. *** Nomenclatorul medicamentelor de uz uman 2008, Volumul
I, Editura Medical, Bucureti 2008, 1341-1342
37. Munayyer, F. J., Guazzo, F., Stupak, E. I., Chaudry, I. A.,
Sequeira, J. A., US Patent 2000, 6,132,758, Chem. Abstr. 2000, 133,
301192w.
41. Dorneanu, V., Stan, M., Mustea, M. F., Chimie Analitic,
Editura Gr. T Popa, UMF Iai, 2003
42. Skoog D. A., Leary J. J., Principles of Instrumental Analysis,
Saunders College Publishing, Fort Worth, 1992, 135-147
43. Crc, G., Gheorghi, I., Chimie analitic-Instrumente si
principii de baz, Ed. Fundaiei Universitare Dunrea de Jos Galai,
2005, 226-246
46. Jantschi, L., Nacu, H. I., Chimie Analitic i Instrumental,
Academic Pres & AcademicDirect 2009
47. Gazy, A. A., Mahgoub, H., El-Yazbi, F. A., El-Sayed, M. A.,
Youssef, R. M., Determination of some histamine H1-receptor antagonists
in dosage forms. Journal: Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis Volume: 30 Issue: 3, Publication Date: 15 Oct 2002, 859-867
48. Rajput, S. J., Vyas, A. G., New analytical method for
determination of loratadine in bulk drug and dosage forms, Journal:
Indian Drugs Volume: 35 Issue: 6 Publication Date: Jun 1998, 352-355
49. Kanumula, G. V., Bhanu, R., Simultaneous determination of
pseudoephedrine hydrochloride and loratadine hydrochloride in
pharmaceutical dosage by reverse-phase high-performance liquid, Journal:
Indian Drugs Volume: 37 Issue: 12 Publication Date: Dec 2000, 574-576
50. Vasudevan, M., Ravisankar, S., Sathiyanarayanan, A.,
Chandan, R. S., Simultaneous estimation of loratadine and
pseudoephedrine by RP-HPLC method, Journal: Indian Drugs Volume: 38
Issue: 5, Publication Date: May 2001, 276-278
51. Abounassif, M. A., El-Obeid, H. A., Gadkariem, E. A., Stability
studies on some benzocycloheptane antihistaminic agents, Journal: Journal
of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume: 36 Issue: 5,
Publication Date: 4 Jan 2005, 1011-1018
52. Johnson, R., Christensen, J., Lin, C.-C., Sensitive gas-liquid-
chromatographic method for the determination of loratadine and its major
active metabolite, descarboethoxyloratadine, in human plasma using a
nitrogen-phosphorus detector, Journal: J. Chromatogr. B, Biomed. Appl.
Volume: 657 Issue: 1 Publication Date: 1 Jul 1994, 125-131
53. Kunicki, P. K., Determination of loratadine in human plasma by
high-performance liquid chromatographic method with ultraviolet
37
detection, Journal: Journal of Chromatography, B: Biomedical
Applications Volume: 755 Issue: 1-2 Publication Date: 5 May 2001, 331-
335
54. Sane, R. T., Francis, M., Khedkar, S., Pawar, S.; Moghe, A.,
Simultaneous HPTLC determination of pseudoephedrine sulphate and
loratadine from their combined dosage form, Journal: Indian Drugs
Volume: 38 Issue: 8, Publication Date: Aug 2001, 436-438
55. Radhakrishna, T., Satyanarayana, J., Satyanarayan, A.,
Determination of loratadine and its related impurities by high performance
liquid chromatography, Journal: Indian Drugs Volume: 39 Issue: 6,
Publication Date: Jun 2002, 342-347
56. Krishna Reddy, K. V. S. R., Moses Babu, J., Ravindra Kumar,
Y., Vardhan Reddy, S., Kishore Kumar, M., Eswaraiah, S., Rama Subba
Reddy, K., Sayanarayana Reddy, M., Vijaya Bhaskar, B., Dubey, P. K.,
Vyas, K., Impurity profile study of loratadine, Journal: Journal of
Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume: 32 Issue: 1 Publication
Date: 24 Apr 2003, 29-39
57. Cui, J., Huang, J., Huo, L. R., Qi, B., Determination of
loratadine and its related substances in tablets by HPLC, Journal:
Zhongguo Yiyao Gongye Zazhi Volume: 33 Issue: 6 Publication Date:
Jun 2002, 294-295
58. Li, W., Chi, Y. M., Zhang, Z. X, HPLC method for evaluation
of desloratadine fumarat bioequivalence in canine plasma, Journal: Journal
of Chromatographic Science Volume: 42 Issue: 5 Publication Date: May-
Jun 2004, 164-169
59. Lu, Y. H., Wen, H. M., Li, W., Chi, Y. M., Zhang, Z. X.,
Determination of donepezil hydrochloride (E2020) in plasma by liquid
chromatography-mass spectrometry and its application to pharmacokinetic
studies in healthy, young, Chinese subjects, Journal: Journal of
Chromatographic Science Volume: 42 Issue: 5 Publication Date: May-Jun
2004, 234-237
60. Chen, J., Zha, Y. Z., Gao, K. P., Shi, Z. Q., Jiang, X. G., Jiang,
W., A validated HPLC-ESI-MS method for the determination of loratadine
in human plasma and its application to pharmacokinetic studies, Journal:
Pharmazie Volume: 59 Issue: 8 Publication Date: Aug 2004, 600-603
61. Song, M., Hang, T. J., Shen, J. P., Tao, P., Zhang, Y. D., Zhang,
Z. X., Study of pharmacokinetics and relative bioavailability of loratadine
tablets by HPLC-MS method, Journal: Yaowu Fenxi Zazhi Volume: 24
Issue: 4 Publication Date: 31 Jul 2004, 374-377
62. Sun, J. G., Wang, G. J., Wang, W., Zhao, S. A., Gu, Y., Zhang,
J. W., Simultaneous determination of loratadine and pseudoephedrine
sulphate in human plasma by liquid chromatography-electrospray mass
spectrometry for pharmacokinetic studies, Journal: Journal of
Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume: 39 Issue: 1-2
Publication Date: 1 Sep 2005, 217-224
38
63. Nirogi, R. V. S., Kandikere, V. N., Shukla, M., Mudigonda, K.,
Maurya, S., Boosi, R., Yerramilli, A., Development and validation of a
sensitive liquid chromatography / electrospray tandem mass spectrometry
assay for the quantification of olanzapine in human plasma, Journal:
Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume: 41 Issue: 3
Publication Date: 7 Jun 2006, 935-942
64. Gergov, M., Robson, J. N., Ojanpera, I., Heinonen. O. P.,
Vuori, E., Simultaneous screening and quantitation of 18 antihistamine
drugs in blood by liquid chromatography-ionspray tandem mass
spectrometry, Journal: Forensic Science International Volume: 121 Issue:
1-2 Publication Date: 15 Sep 2001, 108-115
65. Naidong, W., Bu, H. Z., Chen, Y. L., Shou, W. Z., Jiang, X. Y.,
Halls, T. D. J., Simultaneous development of six LC-MS-MS methods for
the determination of multiple analytes in human plasma, Journal: Journal
of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume: 28 Issue: 6,
Publication Date: 15 Jun 2002, 1115-1126
66. El Ragehy, N. A., Badawey, A. M., El-Khateeb, S. Z., Stability-
indicating methods for the determination of loratadine in the presence of its
degradation products, Journal: Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis Volume: 28 Issue: 6, Publication Date: 15 Jun 2002, 1041-1053
67. Radhakrishna, T., Narasaraju, A., Ramakrishna, M.,
Satyanarayana, A., Simultaneous determination of montelukast and
loratadine by HPLC and derivative spectrophotometric methods, Journal:
Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume: 31 Issue: 2
Publication Date: 26 Feb 2003, 359-368
68. Zhong, D., Blume, H., HPLC determination of loratadine and
its active metabolite descarboethoxyloratadine in human plasma, Journal:
Pharmazie Volume: 49 Issue: 10, Publication Date: Oct 1994, 736-739
69. He, H. X., Liu, Q., Yang, Y. H., Zhou, Y. D., Simultaneous
HPLC determination of naftifine and ketoconazole in vitro percutaneous
solution, Yaowu Fenxi Zazhi Volume: 24 Issue: 3, Publication Date: 31
May 2004, 264-267
70. Srivatsan, V., Dasgupta, A. K., Kale, P., Datla, R. R., Soni, D.,
Patel, M., Patel, R., Mavadhiya, C., Simultaneous determination of
itraconazole and hydroxyitraconazole in human plasma by high-
performance liquid chromatography, Journal: Journal of Chromatography,
A Volume: 1031 Issue: 1-2, Publication Date: 27 Mar 2004, 307-313
71. Ruan, Z. R., Yuan, H., Sun, L., Determination of loratadine in
human plasma by RP-HPLC with fluorescence detection, Journal: Yaowu
Fenxi Zazhi Volume: 22 Issue: 4, Publication Date: 31 Jul 2002, 296-298
72. Oprean, R., Rozet, E., Dewe, W., Boulanger, B., Hubert, P.,
Ghid de validare a procedurilor analitice cantitative, Editura Medical
Universitar Iuliu Haieganu, 2007, 50-61, 85-90
39
73. Boji, M., Roman, L., Sndulescu, R., Oprean, R., Analiza i
controlul medicamentelor, Volumul 2, Metode instrumentale n analiza i
controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 65-96
77. Onur F, Ycesoy C, Dermi S, Kartal M, Kkdil G.,
Simultaneous determination of pseudoephedrine sulfate,
dexbrompheniramine maleate and loratadine in pharmaceutical
preparations using derivative spectrophotometry and ratio spectra
derivative spectrophotometry, Talanta. 2000 Feb 7;51(2):269-79
78. Alsarra, I., Khalil, N. Y., Sultan, M., Al-Ashban, R., Belal, F,
Spectrofluorometric determination of montelukast in dosage forms and
spiked human plasma, Journal: Pharmazie Volume: 60 Issue: 11,
Publication Date: Nov 2005, 823-826
79. Mabrouk, M. M., El-Fatatry, H. M., Hammad, S., Aziz, A.,
Wahbi, A. A. M., Simultaneous determination of loratadine and
pseudoephedrine sulfate in pharmaceutical formulation by RP-LC and
derivative spectrophotometry, Journal: Journal of Pharmaceutical and
Biomedical Analysis Volume: 33 Issue: 4, Publication Date: 24 Nov
2003, 597-604
80. Radhakrishna, T., Narasaraju, A., Ramakrishna, M.,
Satyanarayana, A., Simultaneous determination of montelukast and
loratadine by HPLC and derivative spectrophotometric methods, Journal:
Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume: 31 Issue:
2, Publication Date: 26 Feb 2003, 359-368
81. Mahgoub, H., Gazy, A. A., El-Yazbi, F. A., El-Sayed, M. A.,
Youssef, R. M., Spectrophotometric determination of binary mixtures of
pseudoephedrine with some histamine H1-receptor antagonists using
derivative ratio spectrum method, Journal: Journal of Pharmaceutical and
Biomedical Analysis Volume: 31 Issue: 4, Publication Date: 26 Mar
2003, 801-809
82. El Ragehy, N. A., Badawey, A. M., El-Khateeb, S. Z., Stability-
indicating methods for the determination of loratadine in the presence of its
degradation products, Journal: Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis Volume: 28 Issue: 6, Publication Date: 15 Jun 2002, 1041-
1053
83. Nogowska, M., Zajac, M., Muszalska, I., Spectrophotometric
(UV) and chromatographic (HPLC) methods for determination of
loratadine hydrochloride in pharmaceutical preparations. Validation of the
methods, Journal: Chemia Analityczna (Warsaw) Volume: 45 Issue: 5,
Publication Date: 2000, 681-688
84. El-Kousy, N. M., Bebawy, L. I., Determination of some
antihistamine drugs by atomic-absorption spectrometry and colorimetric
methods, Journal: Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis
Volume: 20 Issue: 4, Publication Date: Aug 1999, 671-679
40
85. Lin, Z. H., Determination of loratadine tablets and its content
homogeneity by ultra-violet spectrophotometry, Journal: Yaowu Fenxi
Zazhi Volume: 16 Issue: 1, Publication Date: 1996, 53
86. El Ragehy, N. A., Badawy, A. M., Khateeb, S. Z., Utility of p-
chloranilic acid for spectrophotometric determination of some
antihistaminic drugs, Journal: Anal. Lett., Volume: 28, Issue: 13,
Publication Date: Oct 1995, 2363-2378
87. Ivanovic D, Medenica M, Markovic S, Mandic G., Second -
derivative spectro-photometric assay of pseudoephedrine, ibuprofen and
loratadine in pharmaceuticals, Arzneimittelforschung. 2000
Nov;50(11):1004-8
88. El-Enany N, El-Sherbiny D, Belal F., Spectrophotometric,
spectrofluorometric and HPLC determination of desloratadine in dosage
forms and human plasma, Chem Pharm Bull (Tokyo). 2007
Dec;55(12):1662-70
90. Pavalache, G., Dorneanu, V., Popescu, A., Determination of
loratadine by UV molecular absorption spectrometry, Annals of Chemistry,
Volume XXI, no. 1, 2010, 83-86
91. Michele, D., Biochimie clinic-Metode de laborator, Ediia a II-
a, Editura Medical, Bucureti, 2002, 24-68, 259-285
92. Olinescu, R., Metode biochimice de laborator clinic, Editura
Cerma, Bucureti, 2001, 93-107
104. Ferreira, M. B., Dos Santos, M. C., Palma-Carlos, M. L.,
Palma-Carlos, A. G.: Effect of specific immunotherapy versus loratadine
on serum adhesion molecules. Allerg Immunol (Paris), 2001, 33,319-322.
106. *** Validation on Analytical Procedures: Text and
Methodology ICH Q2 (R1) International Conference on
Harmonisation, Geneva, Switzerland, 2005
107. Luca, C., Duca, Al., Crian ,Al., Chimie Analitic i Analiz
Instrumental, EDP, Bucureti, 1983, 101-150.
108. Pietrzyk , D. J., Frank, C. W., Chimie Analitic, Ed. Tehnic,
Bucureti, 1989, 86-130.
109. Cordo, E., Analiz Instrumental, Univ. Babes-Bolyai, Cluj-
Napoca, 1988, 59-88.
110. Rouessac, F., Rouessac, A., Analyse Chimique, Methodes et
techniques instrumentals modernes, 3e edition, Masson, Paris, 1997, 110-
159.
111. Nacu, H., Metode i Tehnici de Analiz Instrumental, Ed.
U.T.PRES, Cluj-Napoca, 2003, 32-81.
112. Snyder, L, Practical HPLC Method Development, John Wiley
and Sons, Incorporated, 1997, 359-460
116. krabkov, Z., O'Halloran, J., Frank N.A.M. van Pelt, James,
K. J., Rapid Communications in Mass Spectrometry 2010, 24 (20), 2966-
2974
41
120. Leucua, S. E., Biofarmacie i farmacocinetic, Editura Dacia,
Cluj Napoca, 2002, 20-37, 105-151
121. Roman, L., Boji, M., Sndulescu, R., Muntean, D. L.,
Validarea metodelor analitice, Editura Medical, Bucureti 2007, 201-355
126. Boji, M., Roman, L., Sndulescu, R., Oprean, R., Analiza i
controlul medicamentelor. Volumul I, Bazele teoretice i practice, Editura
Intelcredo, 2003, 89-148
127. Boji, M., Roman, L., Sndulescu, R., Oprean, R., Analiza i
controlul medicamentelor. Volumul II, Metode instrumentale n analiza i
control, Editura Intelcredo, 2003, 173-217
128. Cristea, A. N., Farmacie clinic, volumul I, Editura Medical,
Bucureti, 2010, 49-54






























42
LISTA LUCRRILOR DIN TEZA DE DOCTORAT
PUBLICATE SAU N CURS DE PUBLICARE



1. G. PAVALACHE, V. DORNEANU, A. POPESCU, DETERMINATION OF
LORATADINE BY UV MOLECULAR ABSORPTION SPECTROMETRY, Analele
Universitii Ovidius, Seria Chimie, B +, volumul 21, nr. 1, 2010.

2. G. PAVALACHE, V. DORNEANU, A. POPESCU, VALIDATION OF UV
MELOCULAR ABSORPTION SPECTROMETRIC METHOD FOR LORATADINE
DETERMINATION , Analele Universitii Ovidius, Seria Chimie, B +, volumul 21,
nr. 2, 2010

3. G. PAVALACHE, V. DORNEANU, A. POPESCU, DEZVOLTAREA UNEI METODE
ANALITICE BAZAT PE CROMATOGRAFIA DE LICHIDE DE NALT
PERFORMAN PENTRU DETERMINAREA LORATADINEI, Acta Medica
Transilvanica, B+, Anul XV, nr. 4, Decembrie 2010

4. G. PAVALACHE, V. DORNEANU, VALIDATION OF AN ANALYTICAL METHOD
BASED ON HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY FOR
DETERMINATION OF LORATADINE, Revista Farmacia, A, nr. 6, 2010, n curs de
publicare

5. G. PAVALACHE, V. DORNEANU, A. POPESCU, VALIDATION AND
OPTIMIZATION OF UV MELOCULAR ABSORPTION SPECTROMETRIC
METHOD FOR LORATADINE, INTERNATIONAL WORKSHOP:
CHALLENGES IN FOOD CHEMISTRY, CONSTANTA, MAI 28-29,
2010, Abstract no. P48, 98, Session Info: Poster Session

6. G. PAVALACHE, V. DORNEANU, A. POPESCU, DETERMINATION OF
LORATADINE BY UV MOLECULAR ABSORPTION SPECTROMETRY,
INTERNATIONAL WORKSHOP: CHALLENGES IN FOOD
CHEMISTRY, CONSTANTA, MAI 28-29, 2010, Abstract no. P50, 100,
Session Info: Poster Session








43
CURRICULUM VITAE
Informatii personale

Nume/Prenume

Pavalache, Georgeta
Adresa

Mamaia nr. 300, Constanta,Romania
Telefon

0241 605 050
E-mail

georgiana_pavalache@yahoo.com

Cetatenia
romana

Data nasterii
11.06.1977

Sex feminin

Locul de munca vizat /
Aria ocupationala
Asistent universitar, doctorand
Experienta profesionala

Perioda

01.04.2008 pana in prezent
Functia sau postul ocupat Asistent universitar
Numele si adresa
angajatorului
Universitatea Ovidius Constanta, Facultatea de
Famacie
Tipul activitatii sau sectorul
de activitate
Catedra I, Discipline Farmaceutice, disciplina
Chimie generala si anorganica
Perioda

25.02.2002 01.04.2008
Functia sau postul ocupat Preparator universitar
Numele si adresa
angajatorului
Universitatea Ovidius Constanta, Facultatea de
Farmacie
Tipul activitatii sau sectorul
de activitate
Catedra I, Discipline Farmaceutice, disciplina
Chimie generala si anorganica
Perioda

01.09.2001 pana in prezent
Functia sau postul ocupat Farmacist supervizor
Numele si adresa
angajatorului
SC Sensiblu SRL, Bdul 1 Dec 1918, nr. 42,
Constanta
Tipul activitatii sau sectorul
de activitate
Farmacist in farmacie cominutara
Perioda 01.06.2007 30.09.2008
Functia sau postul ocupat Farmacist manager
Numele si adresa SC Sensiblu SRL, Bdul 1 Dec 1918, nr. 42,
44
angajatorului Constanta, Sensiblu Neptun
Tipul activitatii sau sectorul
de activitate
Coordonarea unei farmacii comunitare

Educatie si formare

Perioda

01.12.2005 pana in prezent
Calificarea / diploma
obtinuta
Doctorand in Stiinte farmaceutice
Domenii principale studiate
/ competente dobindite
Chimie analitica
Numele si tipul institutiei de
invatamint / furnizorului de
formare
Universitatea de Medicina si Farmacie
Gr. T. Popa Iasi, Facultatea de Farmacie

Nivelul de clasificare a
formei de invatamint /
formare
Postuniversitar


Perioda
August 2004 decembrie 2007
Calificarea / diploma
obtinuta
Farmacist specialist
Domenii principale studiate
/ competente dobindite
Industrie Farmaceutica si Cosmetica
Numele si tipul institutiei de
invatamint / furnizorului de
formare
Universitatea de Medicina si Farmacie
Carol Davila Bucuresti, Facultatea de Farmacie

Nivelul de clasificare a
formei de invatamint /
formare
postuniversitar
Perioda
01.10.1996 30.09.2001
Calificarea / diploma
obtinuta
Licentiat in Farmacie
Domenii principale studiate
/ competente dobindite
Stiinte medicale. Farmacie
Numele si tipul institutiei de
invatamint / furnizorului de
formare
Universitatea Ovidius Constanta, Facultatea de
Farmacie

Nivelul de clasificare a
formei de invatamint /
formare
universitar
45

Aptitudini si competente
personale

Limba materna

Linba romana

Limbi straine cunoscute
Autoevaluare

Comprehensiune
Vorbit Scris
Nivel european
(*)

Abilitati de
ascultare
Abilitati de
citire
InteractiuneExprimare

Limba engleza

B1 B2 B1 B1 B1
Limba franceza

B1 B2 B1 B1 B1
(*)
Cadrului european de referin pentru limbi



Competente si aptitudini
tehnice

Descrieti competentele si indicati contextul in care au fos
Eliminati rindul daca este cazul (vezi instructiunile)

Competente si cunostinte de
utilizare a calculatorului

Utilizare PC: word, excel, powerpoint, corel

Permis de conducere

Permis auto categoria B din decembrie 1997


Lista lucrarilor stiintifice publicate (Anexa)



















46
ANEXA

ACTIVITATE TIINIFIC

I. Abstracte publicate n reviste specialitate cotate ISI sau indexate n baze internaionale
de date i cotate CNCSIS la categoriile A i B+:

7. G. Pavalache, V. Dorneanu, A. Popescu, Validation and optimization of
UV melocular absorption spectrometric method for loratadine,
international workshop: Challenges In Food Chemistry, Constanta, Mai
28-29, 2010, Abstract no. P48, 98
8. G. Pavalache, V. Dorneanu, A. Popescu, Determination of loratadine by
UV molecular absorption spectrometry, international workshop:
Challenges In Food Chemistry, Constanta, Mai 28-29, 2010, Abstract
no. P50, 100
9. Popescu A., Negreanu-Prjol T., Pavalache Georgeta., Istudor V.
Antioxidant comparative activity and total phenolic content of Scirpus
holoschoenus L. (Holoschoenus vulgaris Link) depending on extraction
condition and the solvent used, European Journal of Drug Metabolism
and Pharmacokinetics", Volume 14 Special Issue ISBN 0378-7966
(containing Abstracts of Posters and Oral Presentations, given at the 14
th

Pan-Hellenic Pharmaceutical Congress, Athens Hellas, May 9 -11,
2009), Medecine et Hygiene, Publishers Geneva, Published Quarterly, p. 9
, lucrarea 010

II. Articole publicate in extenso n reviste de specialitate - Naionale - cotate
CNCSIS la categoriile ISI, A i B+:

1. G. Pavalache, V. Dorneanu, A. Popescu, Determination of loratadine by
UV molecular absorption spectrometry, Analele Universitii Ovidius
Constana, Seria Chimie, B +, volumul 21, nr. 1, 2010.
2. G. Pavalache, v. Dorneanu, A. Popescu, Validation of UV melocular
absorption spectrometric method for loratadine determination , Analele
Universitii Ovidius Constana, Seria Chimie, B +, volumul 21, nr. 2,
2010
3. G. Pavalache, V. Dorneanu, A. Popescu, Dezvoltarea unei metode
analitice bazat pe cromatografia de lichide de nalt performan pentru
determinarea loratadinei, Acta Medica Transilvanica Sibiu, B+, Anul XV,
nr. 4, Decembrie 2010
4. G. Pavalache, V. Dorneanu, Validation of an analytical method based on
high performance liquid chromatography for determination of loratadine,
Revista Farmacia, A, nr. 6, 2010, n curs de publicare

III. Articole publicate in extenso n reviste de specialitate - Naionale - cotate
CNCSIS la categoriile B i C:
47

1. T. Negreanu-Prjol, Georgeta Pavalache, M. erban, E. tefnescu, B. Stnescu
Physical-chemical and microbiological analysis of some lakeswater like therapeutic
potential in Constantza county and marchlands, Analele Universitii Ovidius
Constana, Seria tiine medicale-Farmacie, vol. II, nr. I, 2004, p. 192-198 (ISSN
1583-896X);
2. T. Negreanu-Prjol, M. erban, Georgeta. Pavalache, A. Rus
The risk of daily strong additivated juices consumption-Preliminary data, Analele
Universitii Ovidius Constana, Seria tiine medicale-Farmacie, vol. II, nr. I,
2004, p. 198-203 (ISSN 1583-896X);
3. T. Negreanu-Prjol, Georgeta Pavalache, Teodora Maria Onciu
The physical-chemical characterization of Borcea fountain waters,
Clrai county after an accidental polution and the implications on
human body, Analele Universitii Ovidius Constana, Seria tiine
medicale-Farmacie, vol. IV, nr.1, 2006 (ISSN 1583-896X)
4. . T. Negreanu-Prjol, Georgiana Pavalache
The quality of some mineral waters commercialized in Romania
market and their therapeutic effects, Analele Universitii Ovidius
Constana, Seria tiine medicale-Farmacie, vol. IV, nr.1, 2006 (ISSN
1583-896X)
5. T. Negreanu-Prjol, R. Srbu, Georgeta. Pavalache, I. Pegalinschi, B.
Negreanu-Prjol
Magnesium important therapeutical active principle of some green
marine algae from Romanian Black Sea Coast Analele Universitii
Ovidius Constana, Seria tiine medicale-Farmacie, vol.6, nr. 1,
2008 (ISSN 1583-896X)

IV. Articole publicate in extenso n volumele unor manifestri tiinifice cu comitet
tiinific
Internaionale - n ar -:

1. Pavalache Georgeta., Bratu M., Negreanu-Prjol T., Coatu V.
Modification enzymatiques chez les mollusques de lespece Mytilus
galloprovincialis a la suite de leur contamination avec des ions de metaux lourds,
Actes du Deuxieme Colloque Franco-Roumain de Chimie Appliquee, 10-12 Octobre
2002, Bacu, Roumanie, CoFrRoCA-2002, p. 373-374, (ISBN 973-8392-04-7,
ISBN 9975-63-140-1);


V. Lucrri comunicate cu rezumat publicat n volumele unor conferine, congrese,
simpozioane
n strintate- :
1. Negreanu-Prjol T., Stoica E., Srbu R. Crpu C., Pavalache Georgeta.
48
The effect of some La(III) and Ce(III) complexes with difunctional ligands on the
bacterian metabolism, 5
th
International Conference of the Balkan Environmental
Association Transboundary pollution, 7-10 November 2002, Belgrad, Jugoslavia,
Abstracts, PV-35, p.157;
2. T. Negreanu-Prjol, R. Srbu, I. Pegalinschi, Georgeta Pavalache, B. Negreanu-Prjol
Magnesium Important therapeutical active principle of some green marine algae
from Romanian Black Sea Coast , European Magnesium Meeting - 2008,
Paris Cordeliers, France, 15-17 May 2008, Abstacts, P8, p. 6;
3. Popescu A., Negreanu-Prjol T., Pavalache Georgeta, Istudor V.
Antioxidant comparative activity and total phenolic content of Scirpus
holoschoenus L. (Holoschoenus vulgaris Link) depending on
extraction condition and the solvent used, 14
th
Pan-Hellenic
Pharmaceutical Congress, Athens Hellas, May 9 -11, 2009, CD
Book of abstracts

VI. Lucrri comunicate cu rezumat publicat n volumele unor conferine, congrese,
simpozioane
Internaionale-n ar-:

1. T. Negreanu-Prjol, Georgeta. Pavalache, M. erban, E. tefnescu, F. Rusu, B. Stnescu
Physical-chemical and microbiological analysis of some lakeswater like therapeutic
potential in Constantza county and marchlands, Second International Symposium
New resources in pharmaceutical industry, 27-30 May 2004, Constana, Romania,
Rezumate, I.P.16, p.50-51;
2. T. Negreanu-Prjol, M. erban, Georgeta. Pavalache, A. Rus, M. Suditu, A. Blan, A.
Dnu
The risk of daily strong additivated juices consumption-Preliminary data, Second
International Symposium New resources in pharmaceutical industry, 27-30 May
2004, Constana, Romania, Rezumate, I.P.17, p.52-53;

VII. Lucrri comunicate cu rezumat publicat n volumele unor conferine,
congrese, simpozioane
- Naionale :

1. Ticua Negreanu-Prjol, G. Pavalache, M.erban, B.Stnescu
New researches regarding physical-chemical and microbiological parameters of
Nuntai-Duingi lakes water in Constana county, Lucrrile celui de-al III-lea
Congres al Academiei Oamenilor de tiin din Romnia Apa-Un Miracol, 1-4
iunie 2004, Constana, Romania, Rezumate, Vol. II, poster 12, p.14-15.
2. F. Buruiana, M. Mititelu, G. Pavalache, C. Mititelu, C. Chelu OTC
consumption study on pharmaceutical market from Constanta - THE FIRST
INTERNATIONAL SYMPOSIUM New Resources in Pharmaceutical
Industry , 5 - 8 iunie 2003, Constanta poster


49
VIII. Lucrri comunicate fr rezumat publicat i/sau cu program publicat-n
strintate:

1. Negreanu-Prjol T., Stoica E., Srbu R. Crpu C., Pavalache Georgeta
The effect of some La(III) and Ce(III) complexes with difunctional ligands on the
bacterian metabolism, 5
th
International Conference of the Balkan Environmental
Association Transboundary pollution, 7-10 November 2002, Belgrad, Jugoslavia,
comunicare, programme, p.32, lucrarea I-82;

IX. Lucrri comunicate fr rezumat publicat i/sau cu program publicat-
Internaionale n ar:

1. T. Negreanu-Prjol, Georgeta Pavalache, M. erban, E. tefnescu, F. Rusu, B. Stnescu
Physical-chemical and microbiological analysis of some lakeswater like therapeutic
potential in Constantza county and marchlands, Second International Symposium
New Resources in pharmaceutical industry, 27-30 May 2004, Constana, Romania,
program, I.P.16, p.15;
2. T. Negreanu-Prjol, M. erban, Georgeta Pavalache, A. Rus, M. Suditu, A. Blan
The risk of daily strong additivated juices consumption-Preliminary data, Second
International Symposium New Resources in pharmaceutical industry, 27-30 May
2004, Constanta, Romania, program, I.P.17, p.15;
3. Pavalache Georgeta., Bratu M., Negreanu-Prjol T., Coatu V.
Modification enzymatiques chez les mollusques de lespece Mytilus
galloprovincialis a la suite de leur contamination avec des ions de metaux lourds,
Actes du Deuxieme Colloque Franco-Roumain de Chimie Appliquee, 10-12 Octobre
2002, Bacu, Roumanie, CoFrRoCA-2002, programme, Seance posters, V30;


X. Lucrri comunicate fr rezumat publicat i/sau cu program publicat-
Naionale:

1. Negreanu-Prjol T., Pavalache Georgeta, erban M., Stnescu B.
New researches regarding physical-chemical and microbiological parameters of
Nuntai-Duingi lakes water in Constana county, Al III-lea Congres al Academiei
Oamenilor de tiin din Romnia Apa-Un Miracol, 1-4 iunie 2004, Constana,
Romania, program, p.43
2. T. Negreanu-Prjol, Georgeta Pavalache, R. Srbu, V. Badea
Sinteza, caracterizarea i activitatea antimicrobian a combinaiilor complexe ale
unor metale de tip 3d cu acizi dicarboxilici, Simpozionul Naional Medicamentul-
de la concepere pn la utilizare, Ediia I, Iai, 30 mai - 1 iunie 2007, Program,
lucrarea P50, p. 17
3. Georgeta. Pavalache, M. Bratu, T. Negreanu-Prjol, V. Coatu
Efectul contaminrii cu ioni de Pb
2+
i Cd
2+
asupra unor parametri biochimici la
bivalvele marine din specia Mytilus galoprovincialis, A XII-a Sesiune de
50
Comunicri tiinifice a Cadrelor Didactice i Studenilor, Facultatea de Medicin i
Farmacie, 5-6 aprilie 2002, Constana, program, lucrarea nr. 3, p.57;

ACTIVITI CU STUDENII

I. Lucrri comunicate cu rezumat publicat n volumele unor manifestri tiinifice

- Naionale-


1. Studeni anul I: Mdlina Macri, Andrei Brnz, Elena Oatu, Daniel Rducu
ndrumtori: . L. Ticua Negreanu-Prjol, Prep. Georgeta Pavalache
Caracteristici fizico-chimice i microbiologice ale lacului cu potenial
terapeutic Nuntai-Duingi-din judeul Constana, Sesiunea de
comunicri tiinifice a studenilor, 23-28 mai 2004, Iai, Carte de
rezumate, p.9.

II. Lucrri comunicate la manifestri tiinifice fr rezumat
publicat i/sau cu program publicat
- Naionale-


1. Climente A., Cazanlu C., Tinescu A. (studeni anul I), T. Negreanu-Prjol, Pavalache
Georgeta
Combinaii complexe ale unor lantanide cu implicaii biomedicale, A XII-a Sesiune
de Comunicri tiinifice a Cadrelor Didactice i Studenilor, Facultatea de Medicin
i Farmacie, 5-6 aprilie 2002, Constana, program, lucrarea nr. 8, p.55
2. Autor: Mihaela Petrencu, student , anul V
Indrumatori stiintifici: Conf. Dr. Ticua NegreanuPrjol, Prep. drd. Georgeta
Pavalache
Analiza fizico-chimica si microbiologica a apelor Dunarii din zone cu grad ridicat de
poluare din judetul Tulcea, Sesiunea de Comunicri tiinifice a Studenilor,
Universitatea Maritima Constanta, 2 iunie 2007, Constana, program, lucrarea nr. 1,
p.7
3. Autor: Elis Mustafa, student , anul II
Indrumatori stiintifici: Conf. Dr. Ticua NegreanuPrjol, Prep. drd. Georgeta
Pavalache
Studiu privind calitatea apelor de profunzime din comuna Borcea-Judetul Constanta,
in urma unor dezastre naturale, Sesiunea de Comunicri tiinifice a Studenilor,
Universitatea Maritima Constanta, 2 iunie 2007, Constana, program, lucrarea nr. 2,
p.7

CRI PUBLICATE

51
1. Elena Haieganu, Georgeta Pavalache, Roxana Pepi, CHIMIE
FARMACEUTIC ndrumar pentru lucrri practice (Sinteze de
medicamente), Editura Medical, Bucureti, 2010, 250 pagini
2. Elena Haieganu, Roxana Pepi, Georgeta Pavalache, CHIMIE
FARMACEUTIC ndrumar pentru lucrri practice (Analiza
substanelor medicamentoase), Editura Medical, Bucureti, 2010, 259
pagini