Pag |1

FROTIUL DE SNGE METODA ETALRII MATERIALULUI BIOLOGIC N MONOSTRAT

1. Obiective ........................................................................................................................................... 2 2. Tehnica efecturii frotiului de snge ................................................................................................ 2 2.1. Prelevarea sngelui prin puncie capilar .................................................................................. 3 2.2. Etalarea efectuarea frotiului propriu-zis ................................................................................. 3 2.3. Fixarea frotiului ......................................................................................................................... 7 3. Colorarea frotiului de snge ............................................................................................................. 7 3.1. Coloraia Leihsman.................................................................................................................... 7 3.2. Coloraia May Grunwald Giemsa .............................................................................................. 7 3.3. Protocoale de lucru .................................................................................................................... 8 3.3.1. Metoda Leihsman ............................................................................................................... 8 3.3.2. Metoda May-Grunwald Giemsa ......................................................................................... 9 4. Examinarea frotiului de snge ........................................................................................................ 11 5. Variaii fiziologice ale numrului elementelor sngelui periferic .................................................. 11 5.1. Hemoleucograma ..................................................................................................................... 11 6. Hematopoieza ................................................................................................................................. 12 7. Morfologia elementelor figurate din sngele periferic ................................................................... 12 7.1. Eritrocitul ................................................................................................................................. 12 7.1.1. Morfologia eritrocitului .................................................................................................... 13 7.1.2. Anomaliile de form ale eritrocitelor ............................................................................... 13 7.1.3. Morfologia leucocitelor .................................................................................................... 16 7.1.4. Morfologia trombocitelor (plachete sangvine) ................................................................. 17

Pag |2
FROTIUL DE SNGE METODA ETALRII MATERIALULUI BIOLOGIC N MONOSTRAT Aceast metod cuprinde tehnica frotiului i amprentelor de organe. Prin tehnica frotiului, se realizeaz ntinderea celulelor n monostrat pe lame de sticl, putnd fi examinate celulele sanguine (periferice i medulare) celulele epiteliale descuamate sau exfoliate (din piele, cavitate bucal, faringe, ci respiratorii extra i intrapulmonare, vagin, col uterin, endometru, ci galactofore, lichid cefalo-rahidian, lichid pleural, lichid de ascit), amprente de organe. Metoda este mult utilizat n citologie, devenind prioritar att n domeniul cercetrii biologice ct i ca procedeu de diagnostic n practica medical.

1. Obiective
- definirea optim a substratului recoltat pentru efectuarea unui frotiu (n spe un frotiu de snge periferic); - deprinderea tehnicii corecte de efectuare a unui frotiu de snge; - evaluarea calitilor unui frotiu acceptabil ntr-un laborator clinic; - definirea principiilor de colorare la nivelul frotiului de snge cu referire special la afinitatea coloranilor pentru diferitele componente i tipuri celulare; - colorarea frotiului printr-o tehnic de tip Romanowsky - evaluarea elementelor celulare pe frotiul de snge, numrtoarea elementelor figurate, date de morfologie a acestora.

2. Tehnica efecturii frotiului de snge

Etapele realizrii i colorrii frotiului de snge presupun o ordine similar cu celelalte tehnici prezentate (seciunile fine la ghea sau parafin) dar cu anumite particulariti. Deoarece sngele este un esut fluid, etapa de recoltare este urmat imediat de cea de etalare pe lam, urmnd apoi fixarea i colorarea. n cazul frotiului de snge nu se pune problema includerii sau secionrii, implicit numrul de etape fiind mai redus. Dup etapa de colorare este posibil reluarea etapelor de postcolorare pentru montare n mediu anhidru, dar aceasta este o opiune rar apelat. Executarea unui frotiu de snge constituie o tehnic de baz a microscopiei clinice, cci dup principiile executrii sale se execut i frotiurile de mduv osoas, suc gastric, sedimente de lichide seroase etc. Sngele din care se poate efectua frotiul se poate proveni din recoltatul venos pe anticoagulant sau din recoltatul capilar, obinut prin puncie direct, fr s necesite anticoagulant. Cele mai bune rezultate sunt obinute dac frotiul este etalat la maxim 2 ore de la recoltare (n cazul recoltrii n tub pe anticoagulant). Sngele astfel recoltat poate fi stocat pe termen scurt (sub 8 ore la 4C). nainte de folosire, tubul trebuie rotit cu 180 de cel puin 10 ori. Lamele folosite, murdare, pot fi refolosite pentru efectuarea frotiurilor (dei nu este o metod recomandat). Curarea acestor lame se face prin imersie n soluie de detergent la 60C pentru 15-20 min i splare n ap fierbinte, nainte de uscare. Pentru lamele noi, nefolosite, este necesar imersia n dicromat de potasiu (20 g Cr2K2O7 n 100 ml ap cu 900 ml H2SO4) timp de 48 de ore. Dup aceast perioad, lamele se spal cu ap curent Lamele sunt pstrate n metanol 95% iar nainte de utilizare trebuie bine terse i uscate.

Pag |3

2.1. Prelevarea sngelui prin puncie capilar

Se realizeaz la adult prin puncionarea prii laterale a pulpei degetului inelar sau medius, iar la nou nscut i sugar din lobul urechii, partea lateral a halucelui sau din clci. Locul puncionrii se dezinfecteaz i se degreseaz cu ajutorul unui tampon mbibat n alcool sau eter. Se prinde degetul subiectului cu mna stng, fixndu-l ntre index i police i printr-o micare rapid se puncioneaz locul dezinfectat cu un ac pentru injecii subcutanate, sterilizat. Primele dou picturi se terg cu ajutorul unei comprese uscate deoarece conin prea mult lichid interstiial sau impuriti de pe piele.

2.2. Etalarea efectuarea frotiului propriu-zis

Const n ntinderea pe o lam portobiect curat a unei picturi de snge ntr-un strat subire i uniform. Dac recoltarea s-a realizat prin puncie capilar, pictura de snge care apare pe pulpa degetului se preia cu marginea mic (sau mare) a unei lame lefuite. Se prefer ns absorbia picturii cu tuburi capilare de plastic. Dac sngele provine din tuburi cu recoltat venos pe anticoagulant, preluarea acestuia se face cu pipete de unic folosin de plastic, cu tuburi capilare de preferat de plastic i nu de sticl (risc de rupere/spargere). Tuburile nu trebuie s fie heparinate. Un dispozitiv interesant pentru realizarea picturii de snge preluate din tubul de recoltare a sngelui venos este DIFF-SAFE.

Acest dispozitiv elimin formarea de micropicturi de snge (aerosoli) n timpul efecturii frotiului, iar tubul de recoltare nu trebuie deschis. De asemenea, elimin necesitatea utilizrii de pipete i poate regla volumul picturii de snge aplicate. Tehnica de utilizare este prezentat mai jos.

Dispozitivul DIFF-SAFE se aplic prin puncionarea dopului cauciucat al tubului de recoltare Tubul se ine cu dopul n sus, nu n jos

Se aplic tubul cu DIFF-SAFE pe lam i se apas. n funcie de presiunea exercitat, se obin picturi mai mici sau mai mari

Nu uitai! Toate manevrele referitoare la frotiul de snge se efectueaz cu mnui.

Pag |4
Pictura de snge trebuie s aib circa 30 l pentru a realiza un frotiu de o grosime potrivit i cu o lungime de 2,5-4 cm. Pictura trebuie amplasat cam la 1 cm de captul destinat marcrii scriptice sau la circa 2 cm de marginea unei lame simple, fr spaiu de marcaj scriptic.

Se preia lama de ntindere ntre police i index. Cu cealalt mn se nclin uor lama suport, cu pictura de snge depus.

Se aplic lama de ntindere, cu marginea lung pe lame suport, n vecintatea picturii, dar dincolo de aceasta, nspre captul liber al lamei suport.

Pag |5
n momentul contactului cu lama suport, lama de ntindere, nclinat la circa 30-45 grade, este deplasat spre captul unde este depus pictura. Astfel, marginea lamei de ntindere intr n contact cu pictura de snge iar aceasta se va ntinde pe lungimea zonei de contact dintre lame.

Lama de ntindere este apoi mpins spre captul liber al lamei suport, realiznd frotiul.

Etalarea se poate face i cu marginea scurt a lamei de ntindere, dar tehnica este mai dificil. Frotiul este bine executat dac are: - dou margini laterale i un capt spre zona liber a lamei suport, care se termin n franjuri; - o grosime potrivit: elementele figurate s nu fie suprapuse i totodat suficient de dese. Grosimea frotiului de snge depinde de: - mrimea picturii de snge (pictur mic = frotiu scurt/subire; pictur mare = frotiu lung/gros); - unghiul dintre lama de ntindere i lama suport (unghi mic = frotiu lung/subire);

Pag |6
viteza de ntindere (vitez mare frotiu scurt).

Pag |7

2.3. Fixarea frotiului

Se poate face prin: - uscare sau desicare la temperatura laboratorului prin agitarea lamei pentru a obine o uscare rapid; uscarea lent duce la ratatinarea celulelor; - soluii fixatoare frotiu umed; alcoolul etilic absolut timp de 15 min., alcool etilic absolut i eter n pri egale timp de 5-15 min., alcool metilic timp de 2 min. sau prin vapori de OsO4 (soluie 2%). Dup fixare se execut colorarea preparatului.

3. Colorarea frotiului de snge

Prima tehnic de colorare a frotiului de snge a fost brevetat de Paul Ehrlich n 1879. Erlich a propus un amestec de colorani acizi i bazici pentru aceast tehnic: fucsin (colorant acid) i albastru metil (colorant bazic). n 1891, Ernst Malachowski i Dmitry Leonidovich Romanowsky au dezvoltat tehnici de colorare independente, folosind un amestec de eozin Y i albastru de metil modificat, obinnd o nuan distinctiv purpurie. William Boog Leishman i James Homer Wright au introdus metanolul ca fixator util nainte de etapa de colorare. Gustav Giemsa a ameliorat tehnica prin standardizarea soluiilor de colorare i prin adugarea glicerolului pentru a ameliora stabilitatea soluiilor. Numele de coloraie Romanowsky reprezint orice combinaie de colorani care include eozina Y sau eozina B alturi de albastrul de metil i oricare dintre produii si de oxidare (oxidarea albastrului de metil produce un amestec de Azur A, Azur B, violet de metil). Combinaiile de colorani de tip Romanowsky determin colorarea nucleilor leucocitelor sau a granulaiilor neutrofilelor n violet n timp ce proteinele citoplasmatice sunt colorate n nuane de roz. Mai exact toate componentele bazice din celul (hemoglobin, incluziuni, unele granulaii) se cupleaz la regiunea acid a colorantului eozin, fiind astfel denumite structuri eozinofile; structurile eozinofile sunt colorate n nuane de roz pn la rou. Componentele acide ale celulelor (acizi nucleici, granulaii cu coninut acid n neutrofile, citoplasm reactiv) cupleaz componenta bazic a coloranilor (implicit albastrul de metil sau derivaii si de oxidare menionai mai sus) colorndu-se n nuane de albastru sau violet. pH-ul trebuie atent controlat n timpul etapelor de colorare, la un nivel de 6,4-7,2. Dac pH-ul este prea acid, coloraia va suferi o nuanare accentuat spre roz iar nucleii vor fi slab colorai. Dac pH-ul este prea bazic, nucleii i structurile bazofile se vor colora albastru foarte nchis, cu o structur slab definit. Coloraia Wright (descris de James Homer Wright, n 1902) este o variant de coloraie Romanowky, utilizat pentru colorarea frotiului de snge.

3.1. Coloraia Leihsman

n unele laboratoare se folosete o variant rapid de colorare a frotiului bazat pe coloraia Wright, numit uneori coloraie Leishman. Se folosete un kit hematologic de colorare format din: - metanol pentru fixarea frotiului; - eozin colorant acid va determina colorarea structurilor bazice din citoplasm (hemoglobin, granulaii eozinofile), n nuane de roz-rou; - albastru de metil colorant bazic - va determina colorarea structurilor acide din celule (acizi nucleici, granulaii bazofile), n nuane de albastru-violet. Soluiile sunt de obicei condiionate n urocultoare i lamele cu frotiul efectuat sunt scufundate repetat n acestea. Tehnica este detaliat mai jos, n cadrul protocolului de lucru.

3.2. Coloraia May Grunwald Giemsa

Coloraia dubl cu soluie May-Grunwald-Giemsa combin efectul eozinei acide alturi de cel al albastrului de metil bazic din compoziia colorantului May-Grunwald cu efectul azurului din colorantul Giemsa (reamintim c azurii reprezint compui de ai demetilrii albastrului de metil). Compoziia coloranilor utilizai: - soluia May-Grunwald conine: o Methanol 99 % o (Eozin + albastru de metil) 0,2 % (cu Eozin G, albastru de metil) - Soluia Giemsa conine: o Metanol 73 % o Glicerol 26 % o (Azur + Eozin + Albastru de metil) 0,6 % (cu Azur I, Eozin G, Albastru de metil)

Pag |8
Materiale necesare Soluia May-Grunwald, concentrat. Unii autori susin prepararea extemporanee i a soluiei MayGrunwald diluate, care acioneaz ca i colorant. Se prefer ns diluarea soluiei concentrate direct pe lam, deoarece altfel se poate afecta gradul de colorare a unor granulaii intracelulare. - Soluia Giemsa, concentrat. Pentru utilizarea ca i colorant, se va realiza o diluie 5% (pentru 1 ml soluie de lucru 50 l soluie Giemsa + 950 l ap tamponat (pH=7) - ap distilat neutr; pipete Pasteur, pipete gradate; pH-ul apei distilate trebuie s fie 6,8-7,2. Apa distilat este de obicei acid. Neutralizarea ei se obine adugnd cteva picturi dintr-o soluie alcalin de hidroxid de sodiu, ncercndu-se pH-ul cu un indicator universal de hrtie sau de preferat cu un pH-metru digital; -

3.3. Protocoale de lucru

3.3.1. Metoda Leihsman 1. Recoltarea i etalarea frotiului de snge, aa cum s-a prezentat anterior 2. Uscare (fixare temporar) prin agitare n aer la temperatura laboratorului. Nu se sufl asupra frotiului. 3. Fixarea chimic a frotiului, cu metanol pentru completarea fixrii fizice; Fixarea cu metanol scufundri succesive ale lamei timp de 10 secunde

4. Colorarea cu eozin colorant acid va determina colorarea structurilor bazice din citoplasm (hemoglobin, granulaii eozinofile), n nuane de roz-rou; Colorarea cu eozin scufundri succesive ale lamei timp de 20 secunde

5. Contracolorarea cu albastru de metil colorant bazic - va determina colorarea structurilor acide din celule (acizi nucleici, granulaii bazofile), n nuane de albastru-violet. Colorarea se poate face cu derivai de albastru de metil, rezultai prin demetilarea acestuia ntr-o soluie apoas, alcalin cu nclzire. Rezult un amestec de Azur A, B violet i albastru metil. Colorarea cu albastru de metil sau azur metil scufundri succesive ale lamei timp de 30 secunde

Pag |9
La final, frotiul colorat se spal la jet redus de ap de robinet. Se aeaz n suportul de uscare, iar dup uscare se poate examina. 3.3.2. Metoda May-Grunwald Giemsa 1. Recoltarea i etalarea frotiului de snge, aa cum s-a prezentat anterior 2. Uscare (fixare temporar) prin agitare n aer la temperatura laboratorului. Nu se sufl asupra frotiului. 3. Fixarea chimic a frotiului - Se poate realiza ca i mai sus, cu metanol pentru completarea fixrii fizice; - Fixarea direct, cu soluia May-Grunwald concentrat, care conine metanol 99%; fixarea cu metanol pur se poate ignora. Aceast tehnic presupune acoperirea frotiului cu soluiile de fixare/colorare, prin picurare cu o pipet simpl sau automat. Un volum de circa 1 ml este de obicei suficient pentru a acoperi frotiul Durata fixrii chimice cu soluia May-Grunwald concentrat este de 2 min:30sec. 4. Colorarea cu soluia May-Grunwald diluat. Practic, fr a arunca soluia concentrat utilizat n etapa (3) pentru fixare, peste aceast soluie se adaug un volum egal de ap distilat tamponat cu pH=7. Atenie! Este important ca volumul iniial de soluie May-Grunwald s nu fie prea mare, pentru ca adugarea unui volum similar de ap distilat tamponat s nu duc la deversarea soluiei care trebuie s acioneze ca i colorant. Astfel, volumul propus iniial pentru fixare (May-Grunwald concentrat) este de 1 ml, urmnd ca pentru obinerea colorantului s se adauge 1 ml de ap distilat tamponat. Timpul de colorare este de 2min:30sec; se poate prelungi dac se remarc o subcolorare a frotiului. 5. Colorarea cu soluia Giemsa. Se ndeprteaz colorantul May-Grunwald, fr splare, apoi se acoper frotiul cu soluie de lucru Giemsa. Soluia de lucru Giemsa se prepar din soluia stoc Giemsa concentrat, diluat cu ap distilat (AD) tamponat la pH=7 pentru a obine o soluie 5% (exemplu - 50l Giemsa concentrat + 950 l AD, pentru 1 ml colorant Giemsa de lucru); pentru acoperirea unui frotiu este suficient un volum de colorant de lucru Giemsa de 1 ml; dup ce frotiul este complet i corect acoperit, se ateapt 25-30 min. 6. Se spal lam sub jet redus de ap; 7. Se efectueaz o sugativare uoar, fr a atinge suprafaa colorat; 8. Se aeaz n stativ pentru uscare. Frotiul trebuie colorat ct mai curnd dup realizare. Clasa unui element sau gradul lui de maturare se stabilesc pe baza unor criterii ce privesc bazofilia citoplasmei elementelor tinere, afinitatea tinctorial a granulaiilor granulocitelor i acidofilia eritrocitelor mature. Cu ct o celul este mai tnr cu att citoplasma ei este bazofil, dat fiind concentraia mare de acid ribonucleic. Pe msur maturrii, celula devine tot mai acidofil deoarece scade concentraia n acid ribonucleic (ex: evoluia eritroblatilor). Termenii de eozinofil, bazofil, acidofil, indic afinitatea fa de coloranii acizi. Afinitile pentru diferiii colorani utilizai pentru frotiul de snge sunt: bazofilia afinitatea pentru albastrul de metil

P a g | 10
azurofilia afinitatea pentru produii de oxidare ai albastrului de metil numii azuri care determin o coloraie roiatic-violet acidofilia afinitatea pentru eozin neutrofilia afinitatea pentru un complex de colorani n amestec (aa cum este soluia Wright gata preparat) care induce o coloraie lila-palid. Pentru frotiul de snge eritrocitele vor cupla eozina datorit hemoglobinei i vor aprea roz-portocalii, nucleii leucocitelor apar albastru-violei, granulaiile bazofile sunt colorate albastru-violet nchis, granulaiile eozinofile sunt colorate rou-portocaliu, granulaiile neutrofile sunt colorate rou-maroniu spre lila, trombocitele sunt colorate violet, citoplasma limfocitelor este colorat albastru palid.

P a g | 11

4. Examinarea frotiului de snge

Se ncepe cu obiectivul de 10x pentru verificarea calitii tehnice a frotiului. Apoi se pune la punct cu obiectivul cu imersie i se examineaz pe rnd: - morfologia eritrocitelor; - frecvena i morfologia trombocitelor; - frecvena i morfologia leucocitelor, eventual cu ntocmirea formulei leucocitare (exprimarea procentual a diferitelor forme de leucocite). Pentru ntocmirea formulei leucocitare, se examineaz frotiul de snge pe margine, lama deplasnduse ntr-o singur direcie, notndu-se fiecare tip de leucocit din 100 de leucocite numrate.

5. Variaii fiziologice ale numrului elementelor sngelui periferic

5.1. Hemoleucograma
Minim Eritrocite/ Globule roii (RBC n literatura anglosaxon = red blood cells) Masculin Feminin Copii Valori medii Reticulocite Hematii imature, Hematii nucleate
http://en.wikipedia.org/wiki/Reticulocyte

Maxim 5.7 5.1 5.5 130 1.5 4.5 3.1 400

Uniti de msur x1012/L sau milioane/mm3 sau per l x109/L % of RBC % of RBC % of RBC x103/mm3 sau per l

4.2 3.5 3.8 26 0.5 1.1 0.5 140

Adult Nou-nscut <7 ani (prescolar)

Trombocite (plachete sangvine) 5.2. Formula leucocitar Tip celular Leucocite totale (WBC = white blood cells) Granulocite neutrofile (PMN + polimorfonucleare neutrofile, sau neutrofile segmentate) Granulocite neutrofile immature (nesegmentate) Granulocite eozinofile

Granulocite bazofile

Limfocite

Monocite

Minim Maxim Uniti de msur Adult 4 9 Nou-nscut 9 30 x109/L sau x103/mm3 sau x103/L 1 an 6 18 1,8 5 x109/L sau x103/mm3 sau x103/L Adult 50 70 % din WBC Nou-nscut 6 26 x109/L 0,7 x109/L Adult 3 5 % din WBC 0,04 0.5 x109/L Adult 1 6 % of WBC Nou-nscut 0.02 0.85 x109/L 40 300 x106/L Adult 0.5 1 % of WBC Nou-nscut 0.64 x109/L 1 3,5 x109/L Adult 20 35 % din WBC Nou-nscut 2 11 x109/L 0,1 0,8 x109/L Adult 4 8 % din WBC Nou-nscut 0,4 3,1 x109/L

P a g | 12
NU UITAI! Exprimarea numeric a elementelor figurate se realizeaz astfel: nr. celule /L sau nr. celule /mm3 sau /l nr. celule /cm3 sau /ml

6. Hematopoieza
Este un proces normal de rennoire a celulelor sngelui periferic. Prezint dou etape etapa embrionar - sac vitelin - z14-z19 intrauterine (IU) hematopoiez mezoblastic RBC nucleate - ficat S6 IU + splin S12 IU - centri de osificare cartilaj L4-5 IU mduv osoas hematogen etapa postnatal - 4-25 ani - mduv osoas hematogen - Adult - oasele craniului, coastelor, sternului, scapulelor, claviculelor, vertebrelor, femurului si humerusului Sediul Tipul predominant al Tipurile principale de Celula final eritropoiezei eritropoiezei hemoglobin Sac vitelin Ficat fetal Mduv osoas fetal Megaloblastic Normoblastic Normoblastic Nucleat Macrocit anucleat Macrocit anucleat Gower I (2 2) Gower II (2 2) Portland (2 2) Hemoglobina fetala (Hb. F. 2 2) HbF si HbA (2 2)

7. Morfologia elementelor figurate din sngele periferic

Numit i hematie sau globul rou, are un diametru de aproximativ 6 m la celula uscat i 8 m la hematia proaspt circulant. Eritropoieza dureaz 25 ore i are urmtoarea secven

7.1. Eritrocitul

P a g | 13
Reticulocitele rezultate, prsesc mduva i trec n circulaie unde se matureaz dup aproximativ 48 ore trecnd n eritrocite mature. Eritrocitele umane produse n cadrul procesului de eritropoiez se dezvolt pornind de la celulele stem ntr-o perioad de 7 zile. Durata de via a eritrocitelor circulante este de 120 zile. Funcia principal este de transport al gazelor respiratorii (oxigen de la plmni la esuturi i CO2 n sens invers). 7.1.1. Morfologia eritrocitului Eritrocitul adult este o celul anucleat, discoidal i biconcav. Este alctuit din citoplasm i membran celular. n citoplasm se gsesc n special macromolecule proteice structurale i protein-enzime precum i cantiti mici de lipide, vitamine (mai ales din grupul B) i elementul principal hemoglobina. Membrana eritrocitului prezint pe suprafaa sa antigeni numii aglutinogeni dup a cror prezen sau absen, se pot identifica grupele sanguine, de care se ine seama n practica medical cnd se efectueaz transfuzia de snge. n afara acestora, pe suprafaa extern a membranei eritrocitare s-a evideniat i factorul Rh. Eritrocitele au o culoare rou crmiziu pe frotiul de snge colorat cu soluia May-Grumwald Giemsa i o form rotunjit, vzute din fa i de disc biconcav vzute din profil (discocite). 7.1.2. Anomaliile de form ale eritrocitelor Anomaliile de form ale eritrocitelor sunt regrupate sub numele de poikilocitoz. Poikilocitele sunt eritrocite cu forme variate, dar anormale. Aceste forme anormale pot fi permanente sau temporare. Cauzele apariiei acestor forme anormale in de structura membranei eritrocitare sau de traume ale ntregii celule. Anomalii de membran eritrocitar 1. Acantocite form ireversibil (engl. spurr/spike cells). Sunt eritrocite ale cror membrane prezint prelungiri de dimensiuni variabile. Acantocitoza reprezint situaia n care acantocitele domin n sngele periferic. Acantocitoza se ntlnete n stri patologice precum abetalipoproteinemia, diferite afeciuni hepatice, unele boli neurologice. Exist forme congenitale ct i dobndite de acantocitoz. Cauza apariiei acestor deformri este reprezentat de defecte n unele proteine componente structurale ale citoscheletului cortical.

P a g | 14
2. Codocite form ireversibil (target cells, Mexican hat cells). Sunt eritrocite care apar nite inte. Celulele prezint un centru ntunecat nconjurat de un inel decolorat i nc un inel exterior ntunecat. In vivo, aceste celule au form de clopot i numai pe frotiu apar n form de int. Celulele de acest tip prezint o disproporie ntre suprafaa i volumul celular. Cauza apariiei acestor celule poate fi determinat de: - Creteri ale suprafeei membranare, de obicei datorate unor tulburri ale metabolismului lipidic - Reducerea volumului citoplasmatic este asociat cu reducerea produciei de hemoglobin, n deficitul de fier sau n diferite hemoglobinopatii, cum este talasemia (sinteza de hemoglobine genetic defecte). - Mai apar n disfuncii splenice

3. Echinocitele form reversibil (burr cells). Reprezint o variant de acantocite la care prelungirile (epii) sunt regulate i egale. Apar n - Expunerea eritrocitelor la acizi grai, lizolecitin, pH crescut. - Dup administrarea de heparin, - n sindromul hemolitic uremic, - Stri de malabsorbie care induc hipomagneziemie, hipofosfatemie - Depleie de ATP, acumulare de Ca

P a g | 15
4. Eliptocite/ovalocite form reversibil se gsesc n sngele periferic n proporie de 10-15% din globulele roii, putnd fi ntlnite i n unele boli sanguine (eliptocitoz ereditar, talasemie, deficit de Fe, anemie megaloblastic).

5. Stomatocitele hematii rotunde ce reprezint ntr-o anumit zon o nfundtur ca o gur (stom); ele apar la un pH uor sczut sub 7; revenirea pH-ului la normal determin transformarea lor n discocite; n hemoglobinopatii apar forme ireversibile de stomatocite

6. Drepanocitele hematii n corn sau secer; se ntlnesc n hemoglobinopatii, (hemoglobinoza Sdrepanocitoza), talasemie i deficit de fier n organism.

P a g | 16
Creterea hematiei determin apariia macrocitelor; cnd diametrul depete 10 m, vorbim de megalocite (acestea apar de obicei n boli sanguine-anemii). Scderea diametrului eritrocitului sub 7 m determin apariia n snge a microcitelor. Variaiile de diametru eritrocitar poart denumirea de anizocitoz. Culoarea eritrocitelor se poate modifica, celulele aprnd fie palide (hipocromie) n anemii, fie diferit colorate, n tulburrile eritropoiezei. 7.1.3. Morfologia leucocitelor Leucocitele se mpart n dou clase majore: a. granulocite (prezint numeroase granule n citoplasm) b. agranulocite sau leucocite agranulare

P a g | 17
Tipul de celula Eritrocite Granulocite Neutrofile Eozinofile Funciile principale Transportul de O2 de la plamani la esuturi, transportul de CO2 de la tesuturi la plamani Chemotaxie, fagocitoza, distrugerea bacteriilor fagocitate Functii identice cu ale neutrofilelor; celule efectoare in distrugerea mediata prin anticorpi a metazoarelor, regleaza reactiile de hipersensibilitate imediata (inactiveaza histamina si substanta cu actiune lenta a anafilaxiei SRS-A eliberate de bazofile si mastocite) Intervine in reactia de hipersensibilitate imediata (bazofilele purtatoare de receptori lgE reactioneaza cu antigenul specific si elibereaz histamina si substana cu actiune lenta a anafilaxiei (SRS-A); moduleaza raspunsurile inflamatorii prin eliberarea de heparina si proteaze Chemotaxie, fagocitoza, distrugerea unor microorganisme, devin active cand se transforma in macrofage Adera la zona subendoteliala, participand in procesul de hemostaza Implicate in rspunsurile imune

Bazofilul

Monocitele Trombocitele Limfocitele

7.1.4. Morfologia trombocitelor (plachete sangvine) Trombocitele iau natere n mduva osoas hematogen prin fragmentarea citoplasmei elementelor seriei megacariocitare (megacarioblastul, celula cap de serie, megacariocitul bazofil sau promegacariocitul, megacariocitul granulat netrombocitogen, megacariocitul granulat trombocitogen, trombocitul). Trombocitele se formeaz deci din citoplasma megacariocitului, prin diferenierea acesteia, la un anumit stadiu de maturaie a celulei. Desprinse din megacariocit, trombocitele trec n stadiu de maturaie, avnd dimensiuni care variaz ntre 2-5 m i o durat de via de circa 7-10 zile. n sngele periferic ele se gsesc n proporie de 150000-400000/mm3. Trombocitul este o celul elipsoid, cu form de lentil biconvex cnd se afl n stare proaspt, n vasele sanguine. Trombocitul este anucleat, fiind alctuit din membran i citoplasm. Membrana trombocitelor este lipoproteic, acoperit de un strat de glicoproteine care permite absorbia unor proteine plasmatice, n special fibrinogen i factorul 8, jucnd un rol n interaciunea dintre trombocit i peretele vascular sau alte suprafee strine (adeziune) i cu alte plachete (agregare). Pe suprafaa extern a membranei celulare se gsesc diferite lucruri specifice antigenice, ca i receptori pentru agenii stimulatori sau inhibitori ai procesului de agregare plachetar. Membrana trombocitului mai prezint i mici ondulaii i prelungiri dendritiforme rare. Citoplasma se prezint la examenul microscopic alctuit din dou zone: una extern, ectoplasmic, clar, numit hialomer i alta central, ntunecat numit granulomer. Hialomerul conine microtubi, microfilamente i diferite proteine implicate n procesul de coagulare sangvin. Granulomerul este un ansamblu de granule i vacuole de mrimi diferite; el este alctuit din mitocondrii mici; civa lizozomi ce apar pe frotiu ca granulaii azurofile, civa peroxizomi ce conin catalaz, microvezicule golgiene, puine profiluri de reticol endoplasmatic i granule dense ce conin serotonin, epinefrin (adrenalin), ioni de calciu. Trombocitul este o celul direct implicat n procesul de coagulare a sngelui, intervenind i n procesele inflamatorii, n reaciile imune, n vindecarea rnilor; poate endocita, particule foarte mici.