Sunteți pe pagina 1din 4

Lp.

6 Coloraia Gram i controlul de calitate;microscopia cu imersie; identificarea bacteriilor dup afinitatea tinctorial (categorii microscopice)

Obiective: La sfritul acestei lucrri practice studenii trebuie: 1. S identifice corect prile unui microscop i s manipuleze corect microscopul n copul efecturii unui examen microscopic. 2. S poat efectua corect un preparat microscopic n laboratorul de microbiologie (preparat umed, frotiu). 3.S precizeze etapele coloraiei Gram i s execute corect aceast tehnic. S efectueze corect controlul de calitate al coloraiei Gram. S cunoasc avantajele i dezavantajele examenului microscopic. 4. S cunoasc importana medical a coloraiei Gram. 5. S examineze i s descrie un frotiu. 1.Microscopul este format din: -o parte mecanic ( piciorul, corpul ansamblului micrilor, braul, masa port obiect);
- o parte optic ( sistem de lentile: obiective, oculare); - sistem de iluminare.

Puterea de mrire a unui microscop =produsul dintre puterea de mrire a obiectivului, a ocularului i a capului binocular. 2. Preparate microscopice 2.a Preparate microscopice umede Indicaii: - evidenierea motilitii microorganismelor; - observarea fungilor, protozoarelor, spirochetelor microscopia cu fond ntunecat este metoda de elecie pentru evidenierea spirochetelor - depistarea i identificarea rapid a unor elemente celulare i necelulare n produse patologice. Se va descrie tehnica efecturii i examinrii unui preparat microscopic umed.

2.b Preparate microscopice colorate Indicaii: evidenierea caracterelor morfologie ale bacteriilor ( mrime, form, aezarea, unele structuri speciale) i afinitatea tinctorial ( n coloraii difereniale). Frotiul: Definiie: Frotiul este materialul microbian (produs patologic, cultur microbian) etalat n strat ct mai subire i uniform pe suprafaa unei lame de microscop. Etapele efecturii frotiului. 1. Etalarea. 2. Uscarea. 3. Fixarea prin caldur. Coloraii: - simple: albastru de metilen- evideniaz morfologia bacteriilor - difereniale: Gram Ziehl Neelsen -coloraii speciale (flageli, spori) 3. Coloraia Gram Principiu: Peretele bacterian nu este colorabil, dar prin structura sa chimic condiioneaz colorabilitatea protoplastului n coloraiile difereniale. Pentru a explica comportarea diferit a bacteriilor n coloraia Gram exist dou ipoteze ( ambele bazate pe diferena de structur a peretelui bacterian) 1. Peretele bacteriilor gram - negative conine pn la 20% lipide i este mai subire dect cel al bacteriilor gram - pozitive. Alcoolul solubilizeaz lipidele i face, astfel, peretele permeabil pentru complexul violet iod care se ndeprteaz . 2. Peretele bacteriilor gram pozitive nu conine lipide. Alcoolul deshidrateaz peretele i, astfel, reduce diametrul porilor prin care ar putea difuza la exterior complexul colorant violet-iod. Etapele coloraiei difereniale Gram: Nr. crt 1 2 3 4 Etapa Colorarea Mordanarea Diferenierea Recolorarea Descrierea etapei Bacterii gram pozitive Violet Violet Bacterii gram negative Violet Violet Incolor Rou

violet de metil, un minut, se spal Lugol, dou minute, se vars . Nu se spal! amestec alcool aceton, 5-10 secunde, spal. Violet soluie de fucsin fenicat Ziehl diluat Violet 1/10, 30 secunde, se spal.

Rezultat: bacterii gram pozitive=violet bacterii gram negative=roii Controlul de calitate - frotiu martor - suspensie care conine un amestec de bacterii gram pozitive i bacterii gram negative ( ex: coci gram pozitivi i bacili gram negativi) -pe frotiurile efectuate din produs patologic, leucocitele sunt ntotdeauna roii. Leucocite roii i bacterii gram pozitive = coloraie Gram bine efectuat Leucocite roii i bacterii gram negative= trebuie s examinm frotiul martor Surse de eroare: -subdecolorarea -supradecolorarea 4. Importana medical a coloraiei Gram Prima etap n identificarea bacteriilor Orienteaz antibioterapia de prim intenie

5. Microscopia cu imersie i descrierea unui frotiu Examinarea : -se calculeaz puterea de mrire a microscopului - se descrie tehnica examinrii corecte Descrierea: -forma coci -bacili -variaia formei- coci rotunzi ( stafilococi,streptococi), ovali (streptococi), lanceolai ( pneumococi), reniformi ( neisserii). - bacili cu capetele rotunde, cu capetele tiate drept (Genul Bacillus), cu capetele mciucate (bacilii difterici) -aezarea: n grmezi (stafilococii), n lanuri (streptococii), n diplo (pneumococii, neisserii), n litere chinezeti (bacilii difterici) -mrime relativ: mic, mare -afinitatea tinctorial : gram pozitiv, gram negativ -prezena capsulei: pneumococii

- prezena sporului: forma: oval (clostridii), sferic (C.tetani; Genul Bacillus) aezare: central (Genul Bacillus), terminal (C.tetani), subterminal (clostridii) dimensiune: mare, mic Avantajele microscopiei: - rapid; - cost redus; -uor de efectuat; -orienteaz urmtoarele etape de diagnostic microbiologic; -putem evidenia bacterii necultivabile sau pe cele cu cretere lent; -informaii cantitative ( 1 bacterie/cmp~ 105 UFC/ ml) Dezavantajele microscopiei: -sensibilitatea redus.

S-ar putea să vă placă și