Sunteți pe pagina 1din 30

Preparatul microscopic permanent

Preparatul microscopic permanent


Reprezint modalitatea de examinare a unor celule , fragmente de esut sau organ , crora li s-au suprimat procesele vitale prin fixare - permite examinarea la microscopul optic a principalelor caracteristici ale celulelor si a modului lor de organizare.

Preparatul microscopic permanent


Un preparat microscopic este alctuit din: 1. obiect de examinat subire i transparent 2. mediu de fixare transparent 3. lama i lamela

Scopul relizarii unui preparat microscopic permanent este de a conserva structurile celulare i raporturile dintre ele pe un timp nelimitat.

Preparatul microscopic permanent

Este folosit n : clinic laborator de anatomie patologica medicina legala cercetare in scop didactic

Etapele obinerii preparatului microscopic permanent


1.

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Recoltare Fixare Splare Includere Secionare Colorare sau impregnare Montare Etichetare

1.RECOLTAREA
Este operaia prin care obiectul de examinat este prelevat de la om, animal viu sau de la cadavru.

Poate fi bioptic sau necroptic

Recoltarea bioptica
- se recolteaz de la om sau animalul viu

i se practic n scop diagnostic. Se realizeaz prin : 1. raclare 2. puncie bioptica 3. aspiraie 4. intervenie chirurgical

Recoltarea necroptic
- dup sacrificarea animalului; se practic

n laboratoare n scop de cercetare sau didactic. - recoltarea de la cadavrele umane se practic n laboratoarele de anatomie patologic i medicin legal n scopul de a confrunta datele de anatomie clinic i tanatogenetice.

Recoltarea
Condiiile unei bune recoltri: 1. ct mai aproape de momentul decesului pentru a evita procesele de autoliz. 2. dimensiunea pieselor s nu depaeasc 5 mm 3. calitatea instrumentelor bine ascuite pentru a evita zdrentuirea i pierderea paralelismului dintre planuri 4. adecvat n funcie de tipul organului ; se vor evita modificrile de volum, form i relief.

2. FIXAREA
- etapa decisiv n obinerea unui preparat

microscopic permanent. - un proces fizic sau chimic prin care sunt oprite cat mai rapid procesele vitale celulare pstrndu-se cu alterari minime volumul , forma , relieful i raporturile spaiale i moleculare .

FIXAREA
Prin fixare urmrim : 1. Conservarea esuturilor 2. Prevenirea pierderii de constitueni celulari 3. Creterea diferenierii optice a structurilor celulare 4. Mrirea consistenei esuturilor n scopul de a facilita trecerea lor prin celelalte etape ale tehnicii i mai ales pentru secionare

FIXATORII
Clasificare a. Dupa natura lor: 1. fizici 2. chimici b. Dupa reacia pe care o au cu proteinele solubile 1. coagulani 2. necoagulani

FIXATORII
Fixatorii chimici: 1. simpli 2. amestecuri fixatoare

FIXATORII CHIMICI
Fixatori simpli mai des utilizati : acetona , acid tricloracetic , formol , acidosmic , alcool metilic Amestecuri fixatoare: - introduse in practic datorit afinitii inegale pentru diversele elemente structurale

Amestecuri fixatoare:
1.
a. b. 2. a. b.

dup compoziia chimic apoase alcoolice Dup scopul urmrit Universale (topografice) Citologice

Mecanismul fixrii
insolubilizarea prin precipitare a unor constituenti celulari 2. formarea de compui de adiie ntre fixator i unii constitueni celulari 3. coagularea proteinelor
1.

CALITILE UNUI BUN FIXATOR


1. ptrunde bine n esuturi

2. stabilizeaz esuturile pstrnd nealterate caracterul i distribuia constituenilor celulari 3. nu provoac artefacte 4. nu deformeaz esutul 5. nu dizolv constituenii

CALITILE UNUI BUN FIXATOR


distruge microorganismele 7. extrage enzimele autolitice inactivate 8. confer consisten 9. produce difereniere optic 10. nu-i modific compoziia 11. ieftin , netoxic , neinflamabil , neiritant
6.

TRATAMENTE POSTFIXARE
decalcifierea 2. disocierea pieselor 3. mordansarea
1.

4.INCLUDEREA
Este procedeul prin care se realizeaz condiii optime care s permit secionarea piselor n seciuni subiri de ordinul m , transparente i cu fee plane astfel nct s poat fi examinate la microscop.

INCLUDEREA
Mase de incluziune : 1. Dupa modul de realizare al includerii : a. Penetreaz celula b. Rmne n spaiul intercelular 2.Dupa solubilitatea n ap a. anhidre , ex. parafina , celoidina , paraplastul b. apoase ,ex . gelatina , polietilenglicol

Incluziunea la parafina etape premergatoare


a. deshidratare alcool n concentraii crescnde ncepnd cu 50 fiecare n 3 bi succesive.

Incluziunea la parafina etape premergatoare


b. clarificare ndeprtarea alcoolului din pies cu ajutorul unor reactivi numii clarificatori , miscibili cu parafina , care fac ca piesa sa devin translucid. Se efectueaz cu alcool anilic sau cu hidrocarburi benzenice.

Incluziunea la parafina etape premergatoare


c. impregnarea ptrundere a piesei cu parafin topit i solidificarea n bloc prin rcire pentru a oferi o consisten omogen. d. turnarea blocurilor blocul nglobat se monteaz pe un port-obiect

5. SECTIONAREA
Piesa inclus sau ngheat se taie n felii subiri de ordinul micronilor cu ajutorul unui aparat numit microtom.

5. SECTIONAREA
Secionarea la microtomul ptr. parafin presupune urmtorii timpi pregtitori: 1. modelarea blocului pentru secionare 2. lipirea blocului pe portobiect 3. secionarea propriu-zis 4. etalarea i lipirea seciunilor

6. COLORAREA
- se urmrete creterea contrastului ntre elementele tisulare sau celulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul coloranilor. Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului i de esutul pe care se aplic.

7.MONTAREA
- protejarea seciunilor fragile de

eventualele deteriorri, conservarea coloraiei i asigurarea unui mediu optic omogen i transparent necesar examinrii microscopice.

Se face ntre lam i lamel n diferite medii de montare iniial fluide.

MONTAREA
Mediile de montare pot fi : 1. Apoase: glicerina, sirop Apathy 2. Anhidre: balsam de Canada, colofoniu

8. ETICHETAREA
Pe fiecare lam se noteaz tipul celular sursa de recoltare fixatorul metoda de colorare data efecturii