Membrana celular

Microscopie
La

M.O. membrana celulara nu este vizibil deoarece grosimea sa , de ordinul zecilor de nm , este sub limita de rezolutie a acestuia. Examinate la M.E. cu o mrire de ordinul zecilor de mii , celula apare delimitat de o linie intunecat subire, continu.
2

Ultrastructur
Plasmalema Glicocalix Schelet asociat membranei

PLASMALEMA

La mriri de peste 50000 de ori, membrana celulara are o structura trilaminar , fiind alcatuit din dou benzi ntunecate si una clar , care le separ. Acest aspect trilaminat este clasic denumit PLASMALEMA substrat molecular: bistratul lipidic i proteinele asociate acestuia. Cele dou benzi electronodense ale plasmalemei se evideniaz datorit contrastrii cu CITRAT DE PLUMB, care se leag de gruprile fosfat ale fosfolipidelor.
6

GLICOCALIX
Pe versantul extern al plasmalemei exist o reea de filamente fine , ramificate ce alctuiesc GLICOCALIXUL sau GLICOLEMA substrat molecular: lanuri de oligozaharide.

CITOSCHELETUL ASOCIAT MEMBRANEI

reea alcatuit din microfilamente orientate neregulat, anastomozate ntre ele alcatuire proteic. Prin reeaua de proteine care l formeaz, citoscheletul este ancorat la plasmalem i se continu spre interiorul celulei cu CITOSCHELETUL ASOCIAT MaTRICEI

MODALITATI DE STUDIERE A MEMBRANEI CELULARE

1. STUDIUL ULTRASTRUCTURAL GENERAL a. Microscopie electronic de transmisie i. Pe seciuni ii. Pe preparate de ngheare- fracturare b. Microscopie electronic de baleiaj

TEHNICA DE INGHETARE FRACTURARE

Fracturare la nivelul poriunii hidrofobe a bistratului lipidic membranar. Se pot studia feele interne ale celor dou straturi lipidice ale membranei : faa extern E si cea intern P Proteinele membranare sunt mai bogate pe fata P fiind ancorate de citoschelet.

10

Inghetare - fracturare

Cutit

Fa ta P

Fa ta E

Fata P

Fara E

Se rea lizea za o replica in C si Pt

Fa ta externa

Fete de fra ctura

Fa ta citopla sma tica
11

STUDII SPECIFICE Citochimie ultrastructural

i. ii. iii. iv.
trasori electronodensi cu Feritina Peroxidaza de hrean Citocrom c ( hempeptizi) Aur coloidal

12

Metode biochimice
i. 1. 2. Marcare pe celule intacte radioactiv pentru interaciuni afine ( n sistem haptene/anticorp sau biotina/avidina ) Separare de fraciuni purificate de membrane
13

ii.

Metode biochimice

Haptenele sunt molecule mici , care inserate pe un lan polipeptidic devin puternic imunogene. mpotriva lor se pot astfel ridica anticorpi. Ei se pot utiliza apoi in cromatografia de afinitate pentru purificarea proteinelor de membrana pe care a fost inserat haptena.

14

Metode biochimice

Sistemul biotin/avidin are la baza afinitatea deosebit a avidinei, o protein , fa de biotin. Aceast interaciune specific este utilizat n separarea biochimic prin afinitate a unor proteine de membran pe care s-a inserat biotina. Acest sistem este folosit i n studii citochimice folosind trasori electronodeni cu avidin.

15

STUDIUL CITOCHIMIC AL LIPIDELOR

a. FILIPINA pentru colesterol, formnd agregate care dezorganizeaz membrana i se observ la M.E. b. POLIMIXINA B pentru fosfolipidele anionicePS i PI . se poate evidentia distribuia asimetric a lipidelor n cele dou straturi ale bistratului lipidic: 1. colesterolul este distribuit preferential pe fata E 2. fosfolipidele pe fata P 16

STUDIUL BIOCHIMIC AL LIPIDELOR

dup fracionarea membranelor i extragerea lipidelor a. Cromatografie n strat subire b. Cromatografie n faz lichid de nalt performan ( HPLC) i. Cu faze normale clase de lipide ii. Cu faze inversate tipuri de lipide dintro clas c. Cromatografie in faz gazoas
17

STUDIUL PROTEINELOR
- prin citochimie a. liganzi marcai cu feritin , peroxidaz de hrean etc. pentru receptori b. anticorpi marcai pentru orice protein - metodele biochimice a. electroforeza n una sau dou dimensiuni b. cromatografie n faz lichid clasic i /sau de nalt performan i. gel-filtrare ii. schimb ionic iii. prin afinitate

18

STUDIUL COMPONENTEI GLUCIDICE

LECTINELE sunt proteine sau glicoproteine ce interacioneaz specific cu anumite secvene glucidice, au cel puin dou situsuri de interaciune identice i nu sunt de origine imun se folosesc fie prin marcarea direct radioactiv sau prin compui electronodeni - n citochimie a. lectine marcate b. lectina + glicoproteina marcat c. (endo)glicozidaze + citochimie cu lectine

19

STUDIUL COMPONENTEI GLUCIDICE

Cele mai cunoscute lectine sunt a. Concanavalina A care leaga specific structuri ce conin manoz sau glucoz b. lectina din germeni de gru care recunoate anumite tipuri de acizi sialici c. lectina din arahide care recunoaste galactoza terminal - tehnici biochimice a. cromatografie de afinitate (pentru glicoproteine) b. cromatografie n strat subire (pentru glicolipide)dup fracionare i separarea lipidelor

20

MODELUL MOZAIC FLUID

Membrana celulara este o structura fluida alcatuita din proteine , lipide si glucide. lipidele alcatuiesc un bistrat continuu, proteinele sunt dispuse in mozaic fiind ataate de o parte i de alta a bistratului lipidic sau ptrund n acesta, strbtndu-l glucidele sunt situate pe versantul extern al membranei si sunt oligozaharide ataate la proteine sau lipide.
21

22

JONCTIUNI CELULARE
Structuri membranare cu rol n adezivitatea celulelor n cadrul unui esut Observabile doar la MET

Clasificare Simple spaii intercelulare denticulare digitiforme

Speciale strnse de ataare de comunicare

23

Jonciuni speciale - zonula occludens

Jonciunea strns = zonula occludens ME: nchiderea spaiului intercelular, prin apoziia membranelor a 2 celule adiacente

24

Jonciuni speciale - Desmozomii

2 tipuri: Desmozomi n band (zonula adherens) Desmozomi n spot (macula adherens) ME: condensare membranar care prezint pe versantul citoplasmatic placa desmozomal
25

Jonciuni speciale Hemidesmozomii

Implicai n ME: componenta celular adeziunea celulare acelai aspect ca matrice extracelular desmozomii, dar localizarea difer la polul bazal al celulei

26

Complexul joncional

Succesiunea de la polul apical spre cel bazal a urmtoarelor tipuri de jonciuni: Jonciunea strns Zonula adherens Macula adherens

27

Jonciuni speciale de comunicare

= jonciuni gap 2 membrane alturate strbatute de canale hidrofile = conexoni

28