DETERMINACIN DE VITAMINA C POR METODO COLORIMETRICO DE 2 NITROANILINA DEL (LIMN, NARANJA, GUAYABA Y KIWI)

RICARDO HERRERA MENDEZ DANIEL ALEJANDRO PEREZ C.

UNIVERSIDAD LA GRAN COLOMBIA, ARMENIA FACULTAD DE INGENIERIA PROGRAMA ACADEMICO DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL ARMENIA QUINDIO 27 DE SEPTIEMBRE DEL 2013

DETERMINACIN DE VITAMINA C POR METODO COLORIMETRICO DE 2 NITROANILINA DEL (LIMN, NARANJA, GUAYABA Y KIWI)

RICARDO HERRERA MENDEZ DANIEL ALEJANDRO PEREZ C.

PRESENTADO A: ING. LAURA SOFIA TORRES VALENZUELA, M.SC

UNIVERSIDAD LA GRAN COLOMBIA, ARMENIA FACULTAD DE INGENIERIA PROGRAMA ACADEMICO DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL ARMENIA QUINDIO 27 DE SEPTIEMBRE DEL 2013

TABLA DE CONTENIDO 1. 2. INTRODUCCIN ......................................................................................................................... 5 METODOLOGIA .......................................................................................................................... 6 2.1 DETERMINACIN DE VITAMINA C. MTODO COLORIMTRICO DE LA 2NITROANILINA (C6H6N2O2)............................................................................................................ 6 2.2 3. 4. 5. 6. ANLISIS ESTADSTICO ................................................................................................... 8 RESULTADOS ............................................................................................................................ 8 CONCLUSIONES ........................................................................................................................ 9 BIBLIOGRAFIA ......................................................................................................................... 10 ANEXOS.................................................................................................................................... 11 NDICE DE GRAFICAS GRAFICA 1. CURVA PATRN Y REGRESIN LINEAL .................................................................... 6 GRAFICA 2. CONCENTRACIN VITAMINA C ................................................................................... 8 NDICE DE TABLA TABLA 1. CONCENTRACIONES PARA LA PREPARACIN DE LA CURVA PATRN Y RESULTADOS DE ABSORBANCIA ................................................................................................... 7 NDICE DE ECUACIONES ECUACIN 1. RECTA ......................................................................................................................... 7 ECUACIN 2. VITAMINA C................................................................................................................. 7 ECUACIN 3. DENSIDAD................................................................................................................... 7 NDICE DE ANEXOS ANEXO 1. VALORES DE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIN ................................................... 11 ANEXO 2. ANLISIS DE VARIANZA PARA CONCENTRACIN DE VITAMINA C ......................... 11

RESUMEN Se llev acabo la determinacin de Vitamina C por mtodo colorimtrico de la 2 Nitroanilina de cuatro frutos (limn, naranja, guayaba y kiwi) mediante espectrofotometra a 540 nm. Se encontr diferencias altamente significativas con respecto al limn, Naranja, Kiwi y guayaba con un valor P=0,0000. Las muestras de Limon, Naranja y Kiwi concuerdan con el contenido de Vitamina C de otras investigaciones realizadas, pero el contenido de Vitamina C de la guayaba no tiene ninguna relacin, esto pudo ocurrir debido a procesamiento de la fruta antes de realizar la determinacin del contenido de la vitamina en el fruto. Se encontr que la Vitamina C en procesos tanto fsicos como qumicos se pierde con facilidad por ese motivo hay que tener en cuenta que antes de realizar esta determinacin la fruta no debe ser expuesta a procesamiento de ningn tipo. Palabras Clave: Vitamina C, Espectrofotometra, 2 Nitroanilina, Mtodo Colorimtrico ABSTRACT It took place the determination of vitamin C by colorimetric method 2 nitroaniline four fruits (lemon, orange, guava and kiwi) by spectrophotometry at 540 nm. Highly significant differences were found with respect to the lemon, orange, kiwi and guava with a value P = 0.0000. Samples of Limon, Orange and Kiwi match the content of vitamin C of other investigations, but the Vitamin C content of guava has no relationship, this may occur due to fruit processing before determining the content of the vitamin in the fruit. It was found that vitamin C in both physical and chemical processes is easily lost on this ground must be taken into account before making this determination the fruit should not be exposed to any processing. Keywords: Vitamin C, spectrophotometry, 2 nitroaniline Colorimetric Method

1. INTRODUCCIN Las vitaminas pertenecen a uno de los grupos constituyentes de los alimentos que provocan ms controversias, debido en gran medida al desconocimiento de su funcin. Las vitaminas empezaron a adquirir importancia cuando se observ que la carencia de estas sustancias de estas sustancias en la dieta provocan cuadros clnicos dramticos (Salvador, 1990). El cido ascrbico (AA) es una vitamina esencial en la dieta humana, y su determinacin por tcnicas sensibles y rpidas, es importante para evaluar su estabilidad en diferentes alimentos. Actualmente la bsqueda de fuentes naturales de AA, reviste gran inters por las caractersticas antioxidantes de la vitamina (Gutirrez, 2007). El AA es muy sensible a la oxidacin, especialmente cuando la reaccin est catalizada por iones metlicos, como Cu2+ y Fe3+. Asimismo, el calor y la luz aceleran el proceso. En tanto que factores como el pH, la concentracin de oxgeno y la actividad del agua, influyen poderosamente en la velocidad de la reaccin. Como la hidrlisis del DHAA se produce muy fcilmente, la oxidacin del DHAA constituye un aspecto esencial y frecuentemente limitante de la velocidad de degradacin oxidativa de la vitamina C (Fennema, 2000). El mtodo oficial de anlisis de la vitamina C para determinacin de zumos es el 2, 6dicloroindofenol que es un mtodo de titulacin (mtodo AOAC 967.21). Si bien este mtodo no es oficial para otros tipos de productos alimenticios, se utiliza a veces como una prueba de control rpido, para determinar la calidad para una variedad de productos alimenticios, en lugar de la que consume ms tiempo que es el mtodo microfluoromtrico (AOAC Mtodo 984.26) (Nielsen, 2010). La determinacin de Vitamina C para el Limn, Naranja, Guayaba y Kiwi se llev a cabo por Mtodo colorimtrico de la 2-Nitroanilina (Bernal, 1994). El objetivo de esta investigacin es determinar el contenido de Vitamina C (mg/ml) de las frutas anteriormente mencionadas.

2. METODOLOGIA Se estableci usar para la prctica 4 tipos de frutas, las cuales fueron: Limn, Guayaba, Naranja, Kiwi. Se determin que su uso era adecuado para el anlisis de vitamina C por sus caractersticas sensoriales: como la textura, olor y color, siendo estas un fruto fresco y aceptable a su consumo.

2.1 Determinacin de Vitamina C. Mtodo colorimtrico de la 2-Nitroanilina (C6H6N2O2)

Para determinar el contenido de Vitamina C se llev a cabo con el espectrofotmetro (Thermo Scientific GENESYS 10S Series UV-Visible Spectrophotometers), el cual es una herramienta indispensable para hallar la absorbancia y poder desarrollar posteriormente la curva patrn como se observa en la Grafica 1.

0.8 0.7 Absorvancia 540nm 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 0.01 0.02 0.03 Concentracion Vitamina C

y = 34,783x + 0,0276 R = 0,9805

Curva Patron

Grafica 1. Curva Patrn Y Regresin Lineal

Con la solucin compuesta de las siguientes sustancias (Nitrito de sodio, 2-Nitroanilina, solucin patrn de cido ascrbico, etanol absoluto, agua destilada, hidrxido de sodio y cido oxlico). Lo cual se hicieron dichas soluciones, preestablecidas las combinaciones en la (tabla 1).

TABLA 1. CONCENTRACIONES PARA LA PREPARACIN DE LA CURVA PATRN Y RESULTADOS DE ABSORBANCIA

TUBO 2-NITROANILINA A NITRITO DE SODIO CM3 CM3 CM3 0 0,1 0,1 3,8 0 0 1 1,2 3,8 0 1 0,1 0,1 3,8 0,1 0 0,9 1,2 3,8 0,09 2 0,1 0,1 3,8 0,2 0 0,8 1,2 3,8 0,152 3 0,1 0,1 3,8 0,3 0 0,7 1,2 3,8 0,245 4 0,1 0,1 3,8 0,4 0 0,6 1,2 3,8 0,343 5 0,1 0,1 3,8 0,5 0 0,5 1,2 3,8 0,382 6 0,1 0,1 3,8 0,7 0 0,3 1,2 3,8 0,562 7 0,1 0,1 3,8 1 0 0 1,2 3,8 0,673 X 0,1 0,1 3,8 0 0,5 0,5 1,2 3,8 X

ETANOL ABSOLUTO

SOLUCIN PATRN DE VITAMINA C (CIDO ASCRBICO) EXTRACTO PROBLEMA CM3 CIDO OXLICO NAOH 10% CM3

CM3 CM3

H2O DESTILADA

ABSORBANCIA (540NM)

Donde a dicha curva patrn se le hizo una regresin lineal (Grafico 1), para as mismo establecer su ecuacin lineal (ecuacin 1) y dar soporte a los clculos posteriores de la concentracin, con el despeje de la concentracin de la (ecuacin 1), obteniendo as la (ecuacin 2).
ECUACIN 1. RECTA ECUACIN 2. VITAMINA C ECUACIN 3. DENSIDAD

Dnde: Y= Absorbancia. m1= Pendiente. X= Concentracin. b= Intercepto. D= Densidad. m2=Masa. v= Volumen. Las concentraciones se obtuvieron de la aplicacin de la (ecuacin 2), ya que se tenan los valores de absorbancia (Anexo 1. Valores de absorbancia y concentracin de las frutas). 7

El procedimiento se llev acabo de la siguiente manera, se exprimi el zumo a las frutas seleccionadas (Limn, Guayaba, Naranja, Kiwi), dichos zumos se tamizaron con un lienzo de algodn, sobre un beaker de 500 ml, sacando as muestra de cada una, en una cantidad suficiente, para hacer las pruebas que se llevaron a cabo como: 1) Se tom muestra de 5 ml de cada zumo de fruta, para obtener la densidad de cada tipo de zumo de las frutas anterior mente nombradas con la (ecuacin 3). 2) se tom 1 ml de cada zumo en un tubo de ensayo, se le adiciono 4 ml de cido oxlico al 15%, se dej en reposo medido por cronometro 3 minutos, y se filtr dicha solucin homogenizada. Se hizo un muestreo por triplicado de esa solucin resultante, y se llevaron a espectrofotmetro (Thermo Scientific GENESYS 10S Series UV-Visible Spectrophotometers). Donde se obtuvo la absorbancia para as mismo hallar la concentracin que se expondr en los resultados de este informe.

2.2 Anlisis estadstico

Se llev a cabo un anlisis de varianza en el software estadstico STATGRAPHICS con el fin de determinar diferencias en contenido de vitamina C, de las frutas analizadas.

3. RESULTADOS Realizados los clculos para determinar la concentracin de vitamina C, se graficaron en Excel lo cual podemos ver en la Grafica 2.

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 1

Concentracion Vitamina C (mg/100)

Kiwi Naranja

Limon

Guayaba

2 3 Frutas Analizadas

Grafica 2. Concentracin Vitamina C

Se observa en la grfica que la muestra de guayaba contiene 30,21 mg/100g es la segunda ms baja en contenido de vitamina C, donde tericamente debera tener un contenido de Vitamina C mas elevado, pero esto pudo haber ocurrido por su proceso de licuado y descongelamiento de la fruta madura, y almacenamiento de la pulpa en el refrigerador, donde segn (Ordez-Santos & VzquezRiascos, 2010) la influencia de procesamiento y almacenamiento altera el contenido de vitamina C, donde se hace una reduccin de manera vertiginosa, y se ha demostrado datos de prdida de un 92% de vitamina C en la pulpa de guayaba en almacenamiento y cambios de temperatura. Segn (Rojas-Barquera, Narvez-Cuenca, & Restrepo Snches, 2008) Los frutos muy maduros pierden Vitamina C. y teniendo en cuenta el estado de madures de la guayaba, podramos apoyarnos en la acotacin anterior. En cuanto las dems muestras manifiestan un factor de concentracin elevado lo que son la naranja con un contenido de Vitamina C de 59,8 mg/100g, el kiwi con 82,44 mg/100g y por ltimo el limn con un contenido de 25,7 mg/100g, como se observa en la Grafica 2, donde cumple los estndares establecidos segn la tabla de composicin de alimentos para Centroamrica del INCAP (INCAP & OPS, 2012). El contenido de vitamina C en las frutas evaluadas present diferencias altamente significativas con un valor (P<0,0000) como se puede ver en el Anexo 2.

4. CONCLUSIONES Se observ que el contenido de Vitamina C de la (Naranja, Limn y Kiwi), muestran diferencias altamente significativas y que los contenidos de esta son similares a los encontrados por otras investigaciones. Pudimos determinar que la Vitamina C se pierde con facilidad por diferentes fenmenos fsicos y qumicos arrojando valores incorrectos que no tienen ninguna relacin con otras investigaciones. Esto sucedi con la guayaba ya que el da anterior a la determinacin de Vitamina C, se licuo y congelo afectando el contenido de la Vitamina en el fruto.

5. BIBLIOGRAFIA Bernal, Ins. (1994). ANALISIS DE ALIMENTOS. Santaf de Bogot, D.C.: Universidad Nacional de Colombia. Fennema, Owen. (2000). Quimica de los Alimentos (2 ed.). Zaragoza, Espaa: Editorial Acribia. Gutirrez, Tatiana; Hoyos, Olga; Pez, Martha. (2007, Febrero 5 de 2007). DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CIDO ASCRBICO EN UCHUVA (Physalis peruviana L.), POR CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN (CLAR). BIOTECNOLOGA EN EL SECTOR AGROPECUARIO Y AGROINDUSTRIAL, 5, 10. INCAP, & OPS. (2012). TABLA DE COMPOSICIN DE ALIMENTOS DE CENTROAMRICA (2 ed.). Guatemala: INCAP/OPS. Nielsen, Suzanne. (2010). Food Analysis Laboratory Manual (Springer ed. Vol. 2). West Lafayette IN EE.UU. Ordez-Santos, Lus E, & Vzquez-Riascos, Andrea. (2010). Effect of processing and storage time on the vitamin C and lycopene contents of nectar of pink guava (Psidium guajava L.). Archivos Latinoamericanos de Nutricin, 60, 280-284. Rojas-Barquera, D, Narvez-Cuenca, E, & Restrepo Snches, L. (2008). EVALUACIN DEL CONTENIDO DE VITAMINA C, FENOLES TOTALES Y ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE EN PULPA DE GUAYABA (Psidium guajava L.) DE LAS VARIEDADES PERA, REGIONAL ROJA Y REGIONAL BLANCA. Memorias Red-Alfa Lagrotech Comunidad Europea, 49-70. Salvador, Badui Dergal. (1990). Quimica de los alimentos. MEXICO D.F: ALHAMBRA MEXICANA.

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6. ANEXOS
Anexo 1. Valores De Absorbancia Y Concentracin
promedio de Tipo de fruta Absorbancia concentracion (mg/100g) concentracion mg/ 100g limon 0,124 25,76232063 25,77523274 limon 0,125 25,94944288 limon 0,124 25,61393472 naranja 0,232 55,19793207 59,81837702 naranja 0,262 63,69385438 naranja 0,253 60,56334463 kiwi 0,345 86,82058157 82,4439927 kiwi 0,313 78,06740384 kiwi 0,204 48,25189221 guayaba 0,044 4,644088568 30,21778604 guayaba 0,124 27,57113194 guayaba 0,14 32,86444014

Anexo 2. Anlisis De Varianza Para Concentracin De Vitamina C Anlisis de Varianza para Concentracin de vitamina C - Suma de Cuadrados Tipo III Fuente EFECTOS PRINCIPALES A:Tipo de fruta RESIDUOS TOTAL (CORREGIDO) 6379,29 89,3015 6468,59 3 8 11 2126,43 11,1627 190,49 0,0000 Suma de Cuadrados Gl Cuadrado Medio Razn-F Valor-P

Todas las razones-F se basan en el cuadrado medio del error residual

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