1

ORGANITE GENERATOARE DE ENERGIE LA EUCARIOTE

MITOCONDRIILE
Mitocondriile sunt organite prezente n toate celulele vegetale i animale, ocupnd un volum important n citoplasm. Dei sunt destul de mari ca dimensiuni pentru a fi observate n microscopia fotonic, fiind identificate nc din secolul XIX, funcia lor a fost elucidat abia dup 1948, dup dezvoltarea procedurilor de fracionare celular. Form, numr, dimensiuni - aspecte de microscopie fotonic Mitocondriile au form cilindric, sunt alungite, bastoniforme, cu un diametru de 0,51m.

Numrul mitocondriilor variaz cu necesitile energetice ale celulei; de exemplu, la nivelul hepatocitelor fiecare celul conine 1000-2000 mitocondrii, 1/5 din volumul celular fiind ocupat de aceste organite. n adipocite, limfocite, numrul mitocondriilor este redus. Dimensiunile mitocondriilor variaz n diferite tipuri de celule: n hepatocite i nefrocite au lungimi de pn la 3 m i diametru de 0,5-1m; n celulele musculare lungimea lor atinge 8 m iar n celulele pancreasului exocrin ajung la 10-12 m. Mitocondriile sunt structuri dinamice: observaiile pe celule vii, n microscopia n contrast de faz relev o mobilitate i o plasticitate deosebite. Micarea mitocondriilor este raportat la elementele citoscheletului. Mitocondriile se deplaseaz n salturi prin celul, aprnd asociate microtubulilor. n final ele se localizeaz n compartimentele celulare unde este necesar o cantitate crescut de ATP. De exemplu, n nefrocitele din tubul contort distal, mitocondriile ocup labirintul bazal, energia eliberat fiind utilizat n procesele de transport. n celulele ciliare, mitocondriile se gsesc n vecintatea corpusculului bazal centrul cinetic al cililor).

2
Ultrastructura aspecte de microscopie electronic Mitocondria prezint o membran dubl. Fiecare membran are o grosime de 6-8 nm i are o structur clasic de bistrat lipidic cu proteine integrale i ataate, specifice. Se definesc astfel dou spaii n mitocondrie, unul intern denumit matrice mitocondrial i unul extern, intermembranar, cu compoziii biochimice diferite.

Membrana intern formeaz o serie de pliuri, denumite creste mitocondriale, care proemin n matricea mitocondrial, mrind suprafaa acestei membrane. Numrul crestelor mitocondriale este de 3 ori mai mare n celulele musculare miocardice fa de celulele hepatice. Compoziie molecular Membrana extern este mai bogat n lipide dect membrana intern (40% n membrana extern i 20% n cea intern) i mai srac n proteine (60% n membrana extern i 80% n cea intern). Fosfolipidele membranei externe: - fosfatidilinozitolul deine o concentraie crescut lipid marker - Alte fosfolipide: fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerolul i cardiolipina n cantitate sczut. Caracteristica membranei externe - prezint rigiditate mai mare dect cea intern datorit prezenei n cantiti mai mari a acizilor grai saturai i a acidului galacturonic. Proteinele membranei externe: - porine canale de ap i pentru molecule sub 5000 Da - enzime importante pentru metabolismul mitocondrial o enzima marker monoaminoxidaza catalizeaz oxidarea aminelor biogene ca dopamina, serotonina, epinefrina i norepinefrina) o colinfosfotransferaza, acil CoA sintetaza, cit.b5.reductaza Camera extern este asemntoare ca i compoziie cu citoplasma. Enzima marker este nucleotidfosfokinaza care transfer nucleotide din citoplasm n mitocondrie Membrana intern este un bistrat lipidic cu pliuri denumite creste mitocondriale care proemin n matricea mitocondrial. Fosfolipidul marker cardiolipina

3
Proteine marker implicate n metabolismul energetic celular: F0F1ATPaza, enzimele lanului respirator i carnitin-acid-gras-transferaza care transport acizii grai spre matricea mitocondrial. Matricea mitocondrial are o colecie de enzime din care fac parte cele ale ciclului acidului citric, ale -oxidrii acizilor grai i acid gras-CoA-sintetaza. Tot n matrice se gsesc ADN mitocondrial (ADNmt), ARNr, ARNt, ribozomi i granule cu cationi bivaleni de Ca2+ i Mg2+. FOSFORILAREA OXIDATIV I LANUL TRANSPORTOR DE ELECTRONI Fosforilarea oxidativ reprezint etapa final a metabolismului aerob. La eucariote, fosforilarea oxidativ are loc la nivelul mitocondriilor. Fosforilarea oxidativ implic reducerea O2 la H2O datorit electronilor donai de NADH i FADH2. Fosforilarea oxidativ se desfoar n 3 etape: - flux de electroni prin intermediul unui lan de transportori specifici cuplai la membrana mitocondrial - energia liber eliberat prin acest proces exergonic este utilizat pentru transportul protonilor, mpotriva gradientului de concentraie n camera extern mitocondrial; se transform astfel energia liber, rezultat al oxidrii n potenial electrochimic transmembranar - fluxul transmembranar de protoni n sensul gradientului de concentraie prin canale proteice specifice determin energia necesar sintezei ATP, catalizat de un complex proteic (ATP-sintetaz) La nivelul matricei mitocondriale, produii rezultai din metabolismul glucidic i lipidic (piruvat i acizi grai) sunt descompui n grupri acetilCoA.

Atomul de S din AcCoA formeaz o legtur de nalt energie cu acetatul (tioesteric). Ruperea acestei legturi prin hidroliz elibereaz o mare cantitate de energie n momentul transferului grupului acetat unei alte molecule (n cadrul ciclului oxidrii acizilor grai sau n cadrul ciclului Krebs).

n cadrul ciclului Krebs, care se desfoar n matricea mitocondrial, are loc oxidarea a 2/3 din produii cu atomi de carbon rezultnd n final CO2 i electroni de nalt energie ce vor alimenta ATP-sintetazele din membrana intern mitocondrial n vederea sintezei de ATP. Energia rezultat din reacia 2H + 2e- + 1/2O2 = H2O poate fi pierdut brusc (proces de combustie) sau poate fi eliberat lent, pas cu pas, i transformat - stocat n alte forme de energie.

O serie de produi sunt dehidrogenai n cadrul ciclului Krebs iar atomii de hidrogen sunt preluai de NAD, NADP sau FMN i FAD care sunt asociai dehidrogenazelor. Dehidrogenazele desprind cte 2 atomi de hidrogen. Unul este transferat ca ion hidrid (H- cu 2 electroni) la NAD+ iar cellalt este eliberat ca proton n soluie (H +). Asocierea dintre NADH i NADPH cu dehidrogenazele este temporar i reversibil. Acceptorul final, o necesitate a metabolismului oxidativ, este oxigenul. Procesul de transport al electronilor se realizeaz printr-o serie de complexe enzimatice respiratorii localizate la nivelul membranei mitocondriale interne; acestea formeaz lanul respirator mitocondrial. Reaciile de reducere sunt necesare pentru a crea o disociere a protonilor din atomii de H de electroni. Protonii rmn liberi n soluie i vor fi expulzai activ de ctre complexele enzimatice respiratorii. Electronii nu pot exista liberi n soluie i de aceea trebuie transportai de complexele enzimatice care posed centri metalici care se pot reduce/oxida. Transferul electronilor de la un complex enzimatic la altul are ca rezultat generarea unei fore motrice datorit creia protonii sunt pompai n spaiul intermembranar mitocondrial. Aici ei se acumuleaz i creeaz un gradient electrochimic ce va determina funcionarea ATP-sintetazei n sensul sintezei ATP. Marii acceptori de electroni din ciclul Krebs, glicoliz i oxidarea acizilor grai sunt NAD care se reduce la NADH2 i FAD care se reduce la FADH2. Iniierea lanului respirator se face prin delivrarea acestor electroni unor perechi redox cu un potenial mai mic. NADH2 livreaz 2 electroni lanului respirator iar n final aceti electroni reduc oxigenul atomic la ap. Oxidarea succinatului la fumarat determin desprinderea a doi electroni care sunt transmii lanului respirator de FADH 2. Enzima care catalizeaz

6
reacia este succinatDH, o parte din complexul succinatCoQ reductaz. FADH 2 livreaz tot doi electroni dar nu odat ci seriat, intermediarul fiind o semiquinon. Oxidarea NADH la NAD determin eliberarea a 2e- i a unui H+. Protonii se regsesc n soluie sub form de ion hidroniu (H3O). Transferul de electroni de la NADH la O2 este un proces favorabil dpdv termodinamic; deplasarea electronilor determin o scdere de potenial de 1,14V, echivalentul a 26,2 kcalmol pentru 1 electron i 56 kcal/mol pentru o pereche de electroni. Energia eliberat este conservat i folosit pentru pomparea protonilor din soluie n spaiul intermembranar. Elemente ale lanului respirator - Conin grupri prostetice (flavine, FeS, Cu, hem) cuplate la particule proteice n membrana mitocondrial intern. CoQ este o excepie. - Exist cca 12 transportori de electroni grupai n 4 complexe multiproteice. Centrii cu Fe-S

sunt FeS4, Fe2S2 i Fe4S4 sunt clustere care conin Fe legat la S anorganic i la 4 S din reziduuri cisteinice unii atomi de Fe sunt ferici (Fe3+) alii sunt feroi dispoziia ciclic permite punerea n comun a electronilor de pe ultimul orbital. De aceea, captarea electronilor i eliberarea lor este un proces facil. Este captat cte un electron adiional care este distribuit n reeaua clusterului.

7
Citocromii

conin un grup prostetic de tip hem similar cu cel din hemoglobin sau mioglobin Fe din centrul hemului este transportorul de electroni Sunt n ordinea intrrii n lan: b566, b562, c1, c, a, a3 Structura lor difer uor ceea ce determin diferene n ceea ce privete tendina de acceptare de electroni. n inelul hemului exist simple i duble legturi alternate, ceea ce face ca electronul acceptat s fie dislocat la Fe, C sau N din inel.

Ubiquinona - denumit i coenzima Q - este un transportor de electroni - poate difuza liber n membrana mitocondrial - colecteaz electroni de la NADH-dehidrogenaz i de la succinat-dehidrogenaz pentru electronii de la FADH2 - doneaz electronii citocrom c reductazei

8
Complexul NADH-dehidrogenaza (Complexul I)

transport 2 electroni de la NADH la CoQ reacia este termodinamic favorabil dG=-16,6 kcal/mol energia este folosit la transportul a 4 protoni n spaiul intermembranar transport exclusiv 2 electroni odat, i transmit FMN i apoi unui FeS. FMN poate accepta cte un singur electron odat.

Complexul succinat-dehidrogenaz (Complexul II)

conine succinatDH care descompune succinatul la fumarat cu eliberarea a 2 electroni preluai de FAD i transmii direct la CoQ nu transfer protoni

9
Citocrom c-CoQ-reductaza (complexul b-c1 sau Complexul III)

preia 2 electroni de la CoQ, i transfer unui centru FeS i la 2 citocromi din categoria b i apoi la cit c1

determin transferul a 4 protoni n spaiul intermembranar

Citocromul c - se reduce prin preluarea celor 2 electroni de la complexul b-c1 i i transmite complexului IV

10
Citocrom c oxidaza (complexul IV)

Preia electronii de la cit c i i transfer O2 - este cel mai bine caracterizat - este format dintr-un dimer cu GM 300.000 Da - include 2 citocromi i 2 centri cu Cu n rezumat

Electroni ajung la CoQ prin complexele I i II. CoQH 2 este un transportor mobil de protoni i electroni. Ea transfer electronii ctre complexul III care i transfer altui element mobil, citocromul c. Complexul IV transfer electronii de la citocromul c redus la O2.

11
SINTEZA ATP SAU MODELUL CHEMIOSMOTIC (PETER MITCHELL)

Fluxul de electroni este asociat cu un transfer de protoni prin membran, ceea ce determin un gradient chimic i unul electric. Membrana mitocondrial intern este impermeabil la protoni, acetia ptrunznd napoi n matricea mitocondrial numai prin canale specifice F0. Fora generat de micarea protonilor napoi n matrice furnizeaz energia pentru sinteza ATP, catalizat de complexul F1 n asociere cu F0 Sinteza mitocondrial a ATP-ului este realizat de ctre un complex proteic, ATPsintetaza, denumit i F0-F1-ATP-aza, situat la nivelul membranei mitocondriale interne din 10 n 10 nm. F0-F1-ATP-aza sau unitatea tripartit, este format din trei regiuni cu roluri i structuri diferite: Baza(F0) este format din subuniti de tip a, b, c realiznd un sistem de transport al protonilor. Protonii sunt preluai prin polul P al canalului (polul P reprezint polul corespunztor feei pozitive a membranei interne mitocondriale adic faa dinspre camera extern) i sunt cuplai la subunitile c determinnd rotaia acestora n ansamblu n bistratul lipidic al membranei interne. Astfel, energia potenial a protonilor este transformat n energie cinetic de rotaie a proteinei F0. Unitatea F0 este ncastrat n bistratul lipidic al membranei mitocondriale interne i prezint 10-12 subuniti c care realizeaz rotorul acestei subuniti. La subunitile c este ataat subunitatea a i 2 subuniti b care se extind pn n zona subunitilor i , acionnd ca o cremalier. Capul ATP-sintetazei (subunitatea F1) proemin n matricea mitocondrial i are, la rndul su, 3 subuniti , 3 i alturi de subunitile , , care reprezint sistemul de conectare la subunitii F0 la F1. Subunitatea conine situsul catalitic al formrii ATP din ADP i Pi.

12

n timpul sintezei ATP, subunitile F0 i F1 sunt cuplate prin intermediul subunitilor , , , H+ ajung la nivelul subunitilor c prin tunelul protoni, determin rotaia F0 n planul membranei i angrenarea subunitii care este prghia modificrilor conformaionale ale subunitii F1. Modificrile secveniale de conformaie ale F1 induse de modificarea rotaional a poziiei subunitii determin sinteza secvenial a moleculelor ATP din ADP i Pi.

13
Dup formare, ATP-ul este eliberat de la nivelul situsului n momentul contactului cu subunitatea , iar situsul urmtor din structura F1 va fi ocupat de un nou ADP i un Pi care formeaz urmtoarea molecul de ATP. Sinteza ATP-ului se desfoar n prezena Mg2+. n cazul n care producia de ATP depete necesitile celulei, se oprete sinteza acestuia i este iniiat hidroliza lui tot la nivelul unitii F 1, doar cnd aceasta este separat de F0.