LP. 7 Reaciile antigen-anticorp n laboratorul de microbiologie. Obiective: 1.

De a defini noiunile de antigen i anticorp, zona de echivalen, fenomen de prozon i de a prezenta aplicaiile practice ale reaciilor antigen-anticorp. 2. De a defini noiunile de titru, diagnostic serologic, criteriile de diagnostic serologic al unei infecii acute. 3. De a discuta principalele tipuri de reacii antigen-anticorp utilizate n la oratorul de micro iologie! clasificare, principiu, indicaii, e"emple. 1. Antigen = su stan strin care, ptruns ntr-un organism competent, determin rspuns imun #imunogenitate$ i reacioneaz specific cu efectorii imunitari aprui ca rezultat al acestui rspuns #specificitate$. Anticorp = imunoglo ulin produs n organism su aciunea unui antigen i care are proprietatea de a reaciona specific cu antigenul corespondent. %eacia antigen-anticorp este sta il n zona de echivalen #cantitile celor doi reactivi sunt apro"imativ egale$. enomen de prozon & a sena reaciei n prezena unui e"ces de anticorpi rezultat fals negativ. Aplicaiile practice ale reaciei antigen-anticorp = se azeaz pe specificitatea cuplrii celor dou elemente 'e pot urmri! - identificarea unui antigen necunoscut #n produse patologice sau tulpini izolate n la orator$ prin anticorpul omolog prezent n seruri imune de referin - identificarea unui anticorp necunoscut prin antigenul omolog #diagnostic serologic$ 'e pot o ine! - relaii calitative simpla identificare a unui reactiv - relaii cantitative determinarea titrului reactivului cercetat 2. !itru = inversul diluiei ma"ime a unui reactiv, la care mai este vizi il reacia cu cantiti constante i definite ale reactivului omolog. "iagno#tic #erologic = urmrirea rspunsului imun al pacienilor la antigene ale microorganismului infectant prin teste in vitro. $riteriile de diagno#tic #erologic al unei in%ecii acute: pro e de ser prelevate n dinamic #serul ( ) acut i serul (( ) de convalescent, recoltate la interval de 1*-1+ zile$ seroconversia = a sena anticorpilor n prima pro i apariia lor n cea de a doua dinamica semnificativ = creterea de cel puin patru ori a titrului anticorpilor n a doua pro de ser fa de prima o singur pro de ser titrul semnificativ dozarea anticorpilor IgM #anticorpii rspunsului imun primar$ diagnosticul unei infecii acute

 diagnosticul precoce al unor infecii congenitale &. Principalele tipuri de reacii antigen-anticorp: A. Reacii de precipitare- sensi ilitate sczut Principiu: un antigen solu il formeaz cu anticorpul omolog un comple" insolu il. $la#i%icare dup mediul n care se desfoar reacia! a. %eacii n mediu lichid! reacia de precipitare inelar la interfaa reactivilor , rezultate calitative , identificarea unor antigene e.g., gruparea streptococilor #-ancefield$ reacia de floculare n amestecul reactivilor , rezultate cantitative , dozarea proteinelor . %eacii n mediu gelificat! Imunodifuzia radial simpl #tehnica .ancini$ , antigenul difuzeaz radial dintr-un godeu n stratul de gel care conine ser imun monospecific , n /urul godeului se formeaz un halou de precipitat al crui diametru este direct proporional cu concentraia antigenului. , folosit pentru determinarea concentraiei proteinelor plasmatice Imunodifuzia dubl radial #tehnica 0uchterlon1$ , antigenul i anticorpul difuzeaz radial din godeuri practicate la distan convena il n stratul de gel. , n zona dintre godeuri, unde reactivii au realizat proporii echivalente, apare o linie de precipitare , utilizat pentru caracterizarea antigenelor n amestec !e#tul 'lec( , demonstrarea to"igenezei acilului difteric Imunoelectroforeza Contraimunoelectroforeza ). Reacii de aglutinare - %eacii sensi ile Principiu = cuplarea unui antigen n suspensie cu anticorpul omolog determin apariia unui aglutinat su form de mase vizi ile, care se depun i las supernatantul limpede $la#i%icare dup modul de prezentare a antigenului n reacie a. %eacii de aglutinare direct 2ntigen = o suspensie acterian 3alitative = reacii de aglutinare pe lam , identificarea unui antigen acterian 3antitative = reacii de aglutinare n tuburi , cuantificarea anticorpilor n serul pacienilor #e.g., reacia 4idal pentru diagnosticul fe relor enterice$ , confirmarea rezultatelor aglutinrii pe lam . 5estul 3oom s c. %eacii de aglutinare pasiv = se utilizeaz particule pe suprafaa crora a fost adsor it un antigen acterian #e.g., hematii reacia de hemaglutinare$ d. %eacia de late"aglutinare & anticorpi specifici fi"ai pe suprafaa particulelor de late" , identificarea antigenelor direct n prelevate patologice. e. %eacia de coaglutinare = anticorpul este fi"at prin fragmentul 6c pe proteina 2 din nveliul stafilococilor aurii.

$. Reacia de %i*are a complementului Principiu = dou comple"e antigen-anticorp i disput complementul

2g de referin : 2c necunoscut 2g necunoscut : 'er imun 3uplu hemolitic ;ematii de oaie : 'er antihematii

= comple"ul format n prima reacie fi"eaz complementul, nc7t a doua reacie nu mai are loc i hematiile rm7n intacte.

reacie #+ - & lipsa hemolizei reacie . - & hemoliz

". Reacii de neutralizare Principiu & sunt implicate antigene virale sau to"ine a cror legare de receptori celulari este urmat de efecte definite & dup reacia cu anticorpii omologi, aceste antigene nu se mai pot fi"a pe receptorii celulari, sunt neutralizate. $la#i%icare: 8eutralizri & supravieuirea animalelor receptive dup in/ectarea amestecului imunoser-virus ) to"in. %eacii de inhi are a hemaglutinrii , identificarea virusurilor hemaglutinante , serodiagnosticul infeciilor determinate de virusuri hemaglutinante hemaglutinine + hematii hemaglutinare . hemaglutinine + 2c omologi + hematii sedimentare #+ '. Reacii cu anticorpi marcai: Imunofluorescena - tehnica direct & folosete anticorpi marcai fluorescent, specifici pentru fiecare antigen - tehnica indirect & folosete anticorpi marcai anti-imunoglo uline & elementele de identificat pot fi at7t antigenele, c7t i anticorpii Reaciile imunoenzimatice (EIA) Principiu: anticorpul poate fi marcat cu o enzim9 dup formarea comple"ului cu antigenul i ndeprtarea reactivului necuplat, pentru estimarea activitii enzimatice, se adaug su stratul cromogen al enzimei , reacia de culoare dezvoltat este apreciat vizual sau spectrofotometric. - 'L+,A a. pentru detectarea antigenului : direct 2c specific adsor it pe suport insolu il + proba n care urmrim Ag + 2c marcat cu enzim . pentru detectarea anticorpului : indirect 2g adsor it pe suport insolu il + #er n care urmrim Ac anti-2g + 2c anti-(g marcat cu enzim

c. competitiv +mmunoblotting ./e#tern blot- 0 confirmarea infeciei cu ;(< antigene diferite fi"ate pe enzi de nitroceluloz

+
pro a de ser testat #2c$ splare

+
2c anti-(g uman marcat enzimatic splare %eacie colorimetric

=n sal se gsesc! - fotografie testul >lec? - ser imun anti- ersinia enterocolitica pentru reacia de aglutinare pe lam i cultur pur a tulpinii de testat - reacia 4idal #aglutinare n tu uri$ - plan prezentare reacia >-('2 - lame curate - oglind concav - pipet i v7rfuri sterile