Sunteți pe pagina 1din 45

GENETICA MEDICINA DENTARA

CURS

14 octombrie 2013

AUTOR: PROF.DR. EMILIA SEVERIN UMF Carol Davila Bucuresti

ADN-ul din celula umana

NUCLEU

dublucatenare, liniare, neramificate, organizate in 22 crz. autozomi, X si Y.

- molecule

ADN NUCLEAR

MITOCONDRIE CELULA SOMATICA


Source: Getty Images, Dorling Kindersley

- molecule dublu-catenare, circulare, neramificate, organizate in crz. mitocondrial. - o mitocondrie are 2-10 molecule ADN.

ADN MITOCONDRIAL ADNmt

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul nuclear uman


B-ADN A-ADN;
1. Structural este reprezentata de forma B-ADN dar in anumite conditii fiziologice isi poate schimba conformatia (modificari conformationale):

B-ADN

Z-ADN;

2. Respecta regulile lui Chargaff ORGANISM


Homo sapiens

COMPOZITIA IN BAZE (%)

RAPORTUL BAZELOR

A
30,9

G
19,9

T
29,4

C
19,8

A/T
1,05

G/C
1,0

A+T/G+C
1,52

3.Se gaseste in cantitate constanta in:

celula GAMETICA: 3,5x 10-9mg ADN (C corespunde unui set haploid de cromozomi, adica 23 crz.)

celula SOMATICA: 7 x 10-9mg ADN (2C corespunde celor 2 seturi haploide de cromozomi, adica 46 crz.)

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

MITOZA
CENTRIOL

redistribuie in mod egal cantitatea de ADN nuclear in celulele fiice


CENTRIOL

ADN

4C

4.Cantitatea ADN per celula/nucleu este constanta: CADN= 3,5x10-9mg


MITOZA

2C 2C

ANAFAZA
Separarea cromatidelor

ADN

2C

ADN

2C

2C 4C

ANAFAZA
Migrarea cromatidelor spre polii fusului

INTERFAZA CANTITATEA ADN in timpul MITOZEI: PROFAZA 4C METAFAZA 4C ANAFAZA 2C / 2C TELOFAZA 2C / 2C

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul nuclear uman


- pe parcursul ciclului celular cantitatea de ADN este variabila dar mitoza repartizeaza in mod egal cantitatea 4C ADN in celulele fiice.

5. Cantitatea ADN per celula/nucleu este constanta:

MITOZA

Cantitatea de ADN

4C

2C

2C

4C

G1
GENETICA MD

G2 M

INTERFAZA

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul nuclear uman


Exprimata prin nr.de perechi de baze 6x109 p.b. pentru cele 46 molec. ADN nuclear

6. Dimensiunea:

Exprimata in mm este 106 mm / set haploid de cromozomi

0,34 x 10-9 m x 3 x 109 = 1,02 m

1nm= 10-9 m= 10-6 mm

7.Masa moleculara : 2x1012 daltoni / celula haploida.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul nuclear uman


- expunerea ADN nativ la temperaturi ridicate (peste 800C) produce ruperea leg. de H care unesc p.b. complementare generand doua catene.
ADN nativ

8.DENATURARE - RENATURARE:

ADN denaturat

ADN renaturat

Racire lenta

t0

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

DENATURAREA/RENATURAREA ADN

Prin denaturare (separarea catenelor) molecula ADN isi pierde capacitatea de transformare.

Daca racirea se face brusc, cele 2 catene disociate nu au la dispozitie un timp suficient pentru a-si putea gasi secventele complementare si raman separate.

Daca racirea se face lent catenele vor renatura.

Denaturarea / Renaturarea au loc in conditii naturale (replicare, transcriere) si experimentale.


GENETICA MD CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright 8

HIBRIDIZAREA MOLECULARA

HOMODUPLEX ADN /ADN

DENATURARE

RENATURARE

ARN
HETERODUPLEX ADN /ARN

DENATURARE; Adaugare de ARN

RENATURARE

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul celulei umane

ADN-ul mitocondrial provine numai de la mama.

ADN-ul nuclear provine de la ambii parinti.

CELULELE COPILULUI

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul mitocondrial uman (ADNmt)

1.Dimensiune: ~16,6Kb;

2.Numar molecule: 100 10.000 copii/celula;

3.Structura: dublu-catenar, cu diferente de densitate intre cele doua catene; catena grea (H=heavy) bogata in guanina si catena usoara (L=light) bogata in citozina.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

11

NUMARUL DE MITOCONDRII IN CELULA UMANA

TIPUL de CELULA !! Majoritatea celulelor somatice: 100-10.000 !! Limfocite: 1000 !! Ovocite: 100.000 !! Spermatozoid: cateva sute !! Hematia si celulele diferentiate terminale ale epidermei NU au mitocondrii.

ARN-acidul ribonucleic
ADN
Baza DEZOXIRIBOZA

ARN
Baza
RIBOZA

Grup fosfat

Grup fosfat

NUCLEOTIDE
Pirimidine Purine Pirimidine Purine

BAZE

POLINUCLEOTIDE
SURSA:http://www.phschool.com/science/biology_place/biocoach/bioprop/rna.html

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

13

ADN versus ARN


COMPONENTE STRUCTURALE ALE ADN si ARN
Exclusiv in ADN

ADN si ARN

Exclusiv in ARN

TIMINA

ADENINA

GUANINA

CITOZINA

URACIL

GRUP FOSFAT DEZOXIRIBOZA RIBOZA

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

14

TRANSCRIPTOM ARN-omul
ARN necodant (ARNnc)
DEFINITIE: setul de transcripte, molecule de ARN codante si necodante, produse intr-o celula / tesut / organ, intr-un anumit moment; reflecta genele care sunt exprimate in acel moment.
- molecule functionale netranslate in proteine - Reprezinta 4/5 din transcriptom

1. Implicat in sinteza de proteine


( ARNr, ARNt)

2. Implicat in procesarea post-

transcriptionala sau replicarea ADN (ARN-telomeraza)

3. Implicat in reglare genica

(microARN sau ARNmi, ARN interferent mic sau ARNsi, ARN antisens sau ARNa)
15

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ARN-urile CELULARE
LOCALIZARE SI FUNCTII IN CELULA EUCARIOTA
* Toate tipurile de ARN sunt transcrise in nucleu

TIPUL DE ARN
ARN mesager (ARNm)

unde isi indeplineste functia in celula


Nucleu si citoplasma

LOCUL

FUNCTIE
Transcriptie translatie Purtator al mesajului genetic al unei gene ADN din nucleu in citoplasma Translatie Component structural si functional al ribozomilor (sinteza proteica) Translatie Transportul aminoac. din citoplasma la ribozomi (sinteza proteica) Matisare Prelucrarea ARNm precursor Modificarea ARN-urilor Biogeneza si maturarea ARNr si ARNt Reglare genica Inhiba translatia ARNm sau degradeaza ARNm Reglare genica Degradarea ARN
16

ARN ribozomal (ARNr)

Citoplasma

ARN de transfer (ARNt)

Citoplasma

ARN nuclear mic (ARNsn) ARN nucleolar mic (ARNsno) micro ARN (ARNmi)

Nucleu Nucleu Citoplasma

ARN interferent mic (ARNsi)

Citoplasma

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

SINTEZA TIPURILOR MAJORE DE ARN CELULAR

ADN

GENE ARNr

GENE ARNt

GENE pt. sinteza proteinelor

ADN
T R A N S C R I P T I E T R A N S L A T I E
17

ARNr
NUCLEU CITOPLASMA

ARNt

ARNm

LANT POLIPEPTIDIC

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ARN-urile in celula eucariota


CITOPLASMA

ADN
Transcriptie

ARNm

NUCLEU

Proteine Translatie

ARNt

ARNm

RIBOZOM

Membrana celulara

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

18

SINTEZA ARN (transcriptie)


ARN polimeraza ADN-catena 5 3 Ribonucleotide

ARN
MATRITA ADN-catena 3 5

Directia transcriptiei

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

19

SINTEZA ARN (transcriptie)


ARN-polimeraza

ADN

ARN

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

20

ARNm-acidul ribonucleic mesager

PURTATOR DE MESAJ GENETIC :

- (transporta informatia genetica)

- se sintetizeaza in nucleu sub forma ARNhn.

- este prelucrat posttranscriptional, MATISARE.

- se formeaza ARNm matur

- trece din nucleu in citoplasma unde participa la sinteza proteica.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

21

ARNr-acidul ribonucleic ribozomal


Monocatenar, cu regiuni bicatenare.

Punti de hidrogen

Localizat in nucleol (locul de sinteza si asamblare al subunitatilor ).


Baze azotate Coloana fosfoglucidica

Rol in translatie.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

22

ARNr
P R O C A R I O T E

proteine

subunitate

Ribozomi asamblati

E U C A R I O T E
GENETICA MD CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright 23

ARNt-acidul ribonucleic de transfer


- micropolimer, monocatenar, cu regiuni bicatenare, adopta forma literei alpha.
Modelul molecular 3D al ARNt

- CCA loc de legare al aminoacizilor.

Diagrama structurii ARNt


Loc de legare al aac.

Brat acceptor Brat T!C"

Brat DHU

- anticodon: complem. unui codon ARNm, rol in translatie.

Regiuni bicatenare

Baze rare

Anticodon

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

24

ARNt-acidul ribonucleic de transfer

ARNm
GENETICA MD CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright 25

REPLICAREA moleculei ADN

Sinonime:

Biosinteza sau sinteza ADN

Duplicatia ADN
26

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

REPLICAREA moleculei ADN

DEFINITIE:

Procesul prin care este duplicata molecula de ADN bicatenara.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

27

REPLICAREA ADN si CICLUL CELULAR


Crestere celulara Pregatirea DIVIZIUNII celulare

4C ADN

Diviziune celulara

MITOZA

2C ADN

4C ADN

18 -24

ORE

2C ADN
REPLICAREA ADN

Crestere celulara Pregatirea REPLICARII ADN

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

28

MODELE TEORETICE DE REPLICARE A MOLECULEI ADN EK

Modelul CONSERVATIV

Modelul SEMICONSERVATIV
Modelul DISPERSIV

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

29

IPOTEZE (MODELE TEORETICE) DE REPLICARE A ! MOLECULEI ADN Ek

Molec.ADN inainte de REPLICARE

Model semiconservativ

Dupa prima REPLICARE

Model conservativ

Model dispersiv

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

30

IPOTEZE (MODELE TEORETICE) DE REPLICARE A ! MOLECULEI ADN Ek


Model conservativ Molec.ADN inainte de REPLICARE Model dispersiv Model semiconservativ

prima REPLICARE

a doua REPLICARE

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

31

EXPERIMENTUL LUI MESELSON & STAHL, 1958

Au experimentat pe Escherichia coli

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

32

EXPERIMENTUL LUI MESELSON & STAHL


Au crescut bacteriile pe un mediu de cultura cu NH4Cl in care azotul era marcat cu 15N (izotopul greu si stabil al azotului).

ETAPE:

Dupa mai multe generatii, bacteriile devin mai dense.

Prin centrifugare se separa 15N de 14N.

Extrag ADN-ul bacteriilor si il centrifugheaza.

Dupa mai multe generatii trec bacteriile pe un mediu cu azot normal (14N).

La intervale de timp, 20-30, se extrage ADN si se separa prin centrifugare.


CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright 33

GENETICA MD

EXPERIMENTUL LUI MESELSON & STAHL


Mediu de cultura cu 15N Transfer pe un mediu cu 14N si REPLICARE REPLICARE in mediu cu 14N

CENTRIFUGARE

CENTRIFUGARE

CENTRIFUGARE

14N 15N

INTERPRETAREA REZULTATELOR

ADN initial Catena VECHE Catena NOUA

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

34

EXPERIMENTUL LUI MESELSON & STAHL

ADN se replica semiconservativ sau prin alte modele?


METODA

REZULTATE
ADN usor ADN intermediar ADN greu

Extractie ADN

Extractie ADN dupa 20 dupa 40

ADN original

Prima replicare

A doua replicare

INTERPRETARE
!

Concluzie: ADN se replica SEMICONSERVATIV


GENETICA MD CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright 35

ADN usor
Solutie (clorura de cesiu)

1) Prin centrifugarea in solutie de CsCl2 a ADN nemarcat se formeaza o banda caracteristica la varful tubului de centrifuga.

ADN greu

2) Prin centrifugarea in solutie de CsCl2 a ADN marcat cu 15N se formeaza o banda caracteristica la baza tubului de centrifuga.

EXPERIMENTUL lui MESELSON&STAHL, 1958

intermediar

ADN

3) Prin centrifugarea in solutie de CsCl2 a ADN hibrid (o catana marcata si una nemarcata) se formeaza o banda cu pozitie intermediara, la mijlocul tubului de centrifuga.

Separarea moleculelor ADN prin centrifugare in functie de greutatea lor moleculara.

ADN usor
intermediar

ADN

4) Prin centrifugarea in solutie de CsCl2 a moleculelor ADN nemarcate si hibride se formeaza benzi distincte caracteristice fiecarui tip de molecula.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

36

SINTEZA ENZIMATICA A ACIZILOR NUCLEICI IN VITRO

Arthur KORNBERG, 1956


Izoleaza o enzima numita

ADN POLIMERAZA
din bacteria E.coli
ADN POLIMERAZA:
1) produce elongatia in directia 5-3 2) reduce frecventa erorilor (proofreading) 3) excizeaza primer-ul (actiune exonucleazica)

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

37

ADN POLIMERAZELE la Ek:


- familie de proteine cu activitati diferite: replicarea, repararea si recombinarea ADN.

FAMILIA ADN polimerazelor (Pol): -! Pol # are rol de ARN primaza; -! Pol $ intervine in repararea ADN; - Pol % si & realizeaza elongatia ADN. 1. Polimerizarea nucleotidelor extinzand catena ADN dar
nu pot initia sinteza unei catene. 2. Reduce frecventa erorilor de replicare (autocorectie sau proofreading) prin verificarea corectitudinii ultimului nucleotid inserat in timpul replicarii ( activitate exonucleazica 3-5).

3. Corectarea bazelor modificate sau alterate dupa


replicare prin activitate exonucleazica 5-3.
38

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

REPLICAREA ADN IN VITRO Kornberg,1956

Foloseste un sistem celular liber format din: 1.! Catena matrita (amorsa) ADN; 2.! toate cele 4 dezoxiribonucleozide trifosfate (dATP, dTTP, dGTP, dCTP); 3.! enzima ADN POLIMERAZA.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

39

SINTEZA ADN in vivo Modelul OKAZAKI (1968) foloseste E.coli

Reiji si Tsunako OKAZAKI

1) Enzima ADN polimeraza NU poate initia sinteza;

2) ADN polimeraza permite polimerizarea nucleotidelor numai in directia 5 3.

Modelul are in vedere caracteristicile ADN POLIMERAZEI:

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

40

MECANISMUL MOLECULAR AL REPLICARII ADN

De la ORI replicarea progreseaza in ambele directii pana cand ADN este complet duplicat; De la ORI cele doua catene se separa formand o structura in forma de Y sau furculita de replicare;

La nivelul ORI se fixeaza pe ADN proteinele de initiere a replicarii;

Replicarea este initiata prin aparitia unui PRIMER;

Procesul de replicare incepe din punctele de origine a replicarii numite ORI;

REPLICAREA ADN in vivo

ADN polimeraza adauga nucleotide la extremitatea 3 OH a primer-ului.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

41

MODELUL REPLICARII ADN

CATENA ADN AMORSA

FURCA DE REPLICARE

FRAGMENTE OKAZAKI formate pe CATENA INTARZIATA

CATENA AVANSATA

DIRECTIA REPLICARII ADN

CATENA ADN AMORSA

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

42

MECANISMUL REPLICARII ADN

a catena amorsa 3-5; b catena nou sintetizata continuu (CATENA AVANSATA); c catena nou sintetizata discontinuu (CATENA INTARZIATA); d furca de replicare; e primer; f fragment (piesa) OKAZAKI
GENETICA MD CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright 43

FRAGMENT (piesa) OKAZAKI

( la Ek are intre 100 200 nucleotide fiind de 10X mai scurta comparativ cu piesa Okazaki de la Pk).

- scurta secventa ADN sintetizata


pe catena intarziata in timpul replicarii ADN.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

44

NE REVEDEM PESTE DOU! S!PT!MNI , acela"i loc "i aceea"i or#

LUNI
28 octombrie