Sunteți pe pagina 1din 12

BIOTEHNOLOGIA - ISTORIC, PROCESE I PRODUSE BIOTEHNOLOGICE

MICROORGANISME - GENERALITI
METABOLISMUL MICROBIAN
CINETICA PROCESELOR DE BIOSINTEZ
ETAPELE UNUI PROCES BIOTEHNOLOGIC
BIOREACTOARE
PRELUCRAREA MEDIILOR DE CULTUR N SCOPUL IZOLRII I PURIFICRII
PRODUSELOR DE BIOSINTEZ

1.1. DEFINIIA BIOTEHNOLOGIEI; EVOLU1 N TIMP A BIOTEHNOLOGIEI CA TIIN


TEHNIC
Descoperirile spectaculoase din domeniile biologiei, biochimiei, biologiei, geneticii,
enzimologiei, precum i necesitatea aplicrii acestora n practic au condus la apariia unei noi
tiine denumit generic bioteh Caracterul interdisciplinar al biotehnologiei a creat nc de la
nceput | privind definirea i localizarea ei ca tiin de sine stttoare.
Cuvntul biotehnologie" este format din doi termeni: bio" ven grecescul bios",
nsemnnd via" i din care a derivat mai trziu biologie", i tehnologie" venind de la
grecescul technologia", n studiul tehnic al utilajelor, mainilor, materialelor". Dac biologia a
fost 1 o tiin a naturii, o tiin de laborator, biotehnologia este acum pluridisciplinar, tehnic tiina inginerului". Biotehnologia utilizeaz vie pentru degradarea, sinteza i producerea de
materiale (prin bioconv osintez) n scopul unei activiti agronomice sau industriale,
acompaniim un progres social i economic. Ea apeleaz pe scar larg la enzime li fixate, la
microorganisme, structuri celulare i subcelulare active (biocat anticorpi) la o inginerie
sofisticat.
Dintre toate definiiile, aceea dat biotehnologiei de ctre I European de Biologie (1978),
pare a fi satisfctoare:
Utilizarea integral a biochimiei, microbiologici i ingineriei i obinerii unei aplicaii
tehnologice (industriale), cu ajutorul microorgai culturilor de celule i a prtilor componente ale
acestora".
Deci, n esen, principalul scop al biotehnologiei este obinerea de sau servicii utile
activitii umane, cu ajutorul organismelor vii. Procesul de baz n biotehnologie este proces
biologic", di procesul de baz n tehnologia chimic este proces chimic".
1
2
3
Enzime
Bacillus sp.
mtf
Proteaze
Bacillus amyloliquefaciens
4 l()s 4 10'
a-Amilaze
Aspergillus niger
Glucoamilaze
Glucozizomeraz
Bacillus coagulans Aspergillus 1103 110''
Pectinaze
niger
HO1
Rennin
Mucor miehei sau drojdie
.VIO'1
Toate celelalte enzime
recombi-nant
Vitamine
Propionibacterium shermanii 1 -101

Riboflavin
Alealoide
Ergot
Pigmeni
Shikonin
P-Caroten
Vaccinuri mpotriva:
difteriei
tetanosului
pertussisului (tuea
convulsiv)
virusului
poliomielitei
rubeolei
hepatitei B

sau Pseudomonas denitrificans


Eremothecium ashbyii
Claviceps paspali
5 103
Lithosphermum erythrorhizon 60
(culturi de celule vegetale)

Corynebacterium diphtheriae <50


Clostridium tetani Bordetella
pertussis
Virui activi atenuai crescui
n rinichi de maimu sau n
celulele diploide umane Virui
activi atenuai crescui n
rinichi de hamster tnr
Antigen de suprafa evideniat
n drojdia recombinat
Proteine terapeutice
Escherichia coli recombinat <20
Insulina
Escherichia coli recombinat
Hormonul creterii
sau celule de mamifere
recombinate
Eritropoietina Factorul
Celule de mamifere
VIII-C Activatorul
recombinate Celule de
plasminogen de esut
mamifere recombinate Celule
Interferonul-a2
de mamifere recombinate
Recombinani de Escherichia
coli
Produie majore obinute pe cale biotehnologic
Produse de fermentaie
Tipul de organism utilizat
I Producie anual (n lume)
[kg/an]
1
2
3
Solveni organici
Sacharomyces cerevisiae
2-1010
Bttnol (nu pentru buturi) hi Clostridium acetobutylicum
2"106(butanol)
etonl/butanol
Blomaid
Bacterii lactice sau drojdii de 5- IO8 0,5-1- IO8
'ulturl starter i drojdii
panificaie
pentru Industria alimentar Pseudomonas methylotrophus
i agriculsau Candida utilis
llll.l
l'MMeine monocelulare
Arizi organici
Acid citric Acid gluconic
Aspergillus niger Aspergillus 2-3-IO8 5-IO7 2Acid lactic Acid ilaconic
niger Lactobacillus delbrueckii IO7

Aminoacizi
Acul L-glutamic
1 1 ysin
1 l'enilalanin
l.-Arginin
Al|i aminoacizi
transformri microbiene
Steroizi
1' Sorbitol la L-sorboz (n
producia de vitamina C)
l'olizaharide e\tr:ni>liiinv.
Xanlhan Dextran
Nucleotide
5'- Guanosin monofosfat
Iiimi Ih iritSpoii hneterieni Spoi i de
lungi
Antibiotice
Peniciline
< Vl.ilosporine
i itricicline
(exeinplu:7clortetraciclina)
Antibiotice macrolide
(exemplu: critromicina)
Antibiotice polipeptide
(exemplu: gramicidina)
Antibiotice
aminoglicoside (exemplu:
streptomicina) Antibiotice
aromatice (exemplu:
griseofulvina)
Anticorpi monoclonali

Aspergillus itaconicus
Corynebacterium glutamicum
Brevibacterium flavum
Corynebacterium glutamicum
Brevibacterium flavum
Corynebacterium spp.

3-108 3107 2IO6 2-IO6 HO6

Rhizopus arrhizus Acetobacter 4-IO7


suboxydans

Xanthomonas campestris
5-106
Leuconostoc mesenteroides
Brevibacterium ammoniagenes liO5

Bacillus thuringiensis
Hirsutella Thompsonii
Penicillium chrysogenum
Cephalosporium acremonium
Streptomyces aureofaciens
Streptomyces erythreus

3-4-IO7
MO7
MO7
2106

Bacillus brevis
Streptomyces griseus
Penicillium griseofulvum

HO6

Celule Hybridoma

<20

:>*
(biol*.'

DEZVOLTAREA INDUSTRIEI
BIOTEHNOLOGICE. ROLUL CERCETRII FUNDAMENTALE N BIOTEHNOLOGIE
Cunoaterea tiinific i strategia de dezvoltare economic actual se lin/caz pe o nou
abordare a fenomenelor, acestea conducnd la o adevrat revoluie biotehnologic. Se apreciaz
c n viitor cea mai mare parte a industriei se vit baza pe procedee de fermentaie, inginerie
biochimic, biologie molecular, aceasta din urm imprimnd un salt tehnologic corespunztor.
Pe aceste baze, industria biotehnologic va lua un avnt considerabil.
Ingineria genetic este considerat a fi tehnica ideal capabil s amelioreze cantitativ i
calitativ capacitatea de biosintez a celulelor de microorganisme, animale sau vegetale, n scopul
obinerii unor produse utile.
Natura interdisciplinar a biotehnologiei este evident dac se ine seama tic etapele unui.
proces biotehnologic complet. Dac se ia ca exemplu obinerea unui produs nou ADNrecombinant, cum ar fi insulina, hormonul de cretere sau inlcrferonul, atunci, de la idee pn la
obinerea unui produs comercial, se parcurg mai multe faze care implic cunotine aparinnd
unoi domenii tiinifice foarte diferite (llg. 1.1).

Fig. 1.1. Treptele unui proces biotehnologic complet de obinere a noi produse aplicam
tehnica ADN-recombinant: 1 - substane chimice; 2 - esut animal; 3 - cromozom animal; 4 gen tiat dini ui cromozom; 5 - microorganism, ca de exemplu E. coli; 6 - plasmid; 7 plasmid secionata 8 - plasmid recombinant; 9 - introducere n microorganism; 10 multiplicarea plasmidei expresia genei; 11 - diviziune celular; 12 - cultivare n laborator; 13 bioreactor din laborator; 14 - bioreactor pilot; 15 - operare la scar industrial; 16 - recuperarea
produsului;17 - condiionare i vnzare.
Prima treapt de dezvoltare a bioprocesului se refer la manipulare; genetic a
organismului gazd; n acest caz, o gen din ADN-ul animal este clonati ntr-o celul de

Escherichia coli. Aceste operaii aparinnd domeniului inginerie genetice sunt realizate n
laborator de ctre oameni de tiin instruii n domeniu biologiei moleculare i biochimiei.
Instrumentele utilizate n aceast faz constat n plci Petri, micropipete, microcentrifuge, enzime
de restricie n cantiti foarte mici de ordinul nano- ori microgramelor), goluri de electroforez
pentru separarea identificarea ADN-ului. Parametrii cei mai importani n acest stadiu al
cercetrii fundamentale sunt: stabilitatea tulpinii recombinam obinute i nivelul de expresie al
produsului dorit.
Dap donare, caracteristicile de cretere i producie ale celulelor trebuie msurate n
funcie de condiiile de cultivare. Este necesar s se aplice tehnicile de cultivare obinuite n
microbiologic n vederea stabilirii parametrilor optimi: nipoziia mediului, pH, temperatur,
concentraie de oxigen dizolvat, astfel nct |.Ki(luctivitatea n produsul urmrit s fie maxim. Se
pornete prin cultivarea microorganismului la scara mic, n flacoane agitate de 250 ml pn la
un litru capacitate. Performanele organismului sunt descrise prin calcularea ratei de cretere,
productivitatea specific, randamentul n produs finit.
Dup cunoaterea condiiilor de cultivare n laborator se pornete procesul de ridicare la
scar pilot i industrial. Prima treapt poate fi un bioreactor de 1; 2 sau 5 1 echipat cu
instrumente de msur i control al temperaturii, pH-ului, concentraiei oxigenului dizolvat,
vitezei de agitare. Culturile pot fi monitorizate mai bine n bioreactor dect n flacoane agitate.
Se pot culege mult mai multe informaii referitoare la necesarul de oxigen al
microorganismului sau la caracteristicile de spumare ale mediului sau ali parametri. De
asemenea, pot fi identificate limitrile impuse de tipul bioreactorului. De exemplu, dac acesta nu
poate asigura necesarul de oxigen, celulele sunt nfometate. In mod similar, dac agitarea
mediului de cultur nu este adecvat, aceasta poate conduce la spargerea celulelor i devierea
procesului de cultivare. n bioreactor se stabilesc condiiile pentru o anumit activitate a celulelor.
In aceast faz se calculeaz diferii parametrii cum ar fi: coeficienii de transfer de mas, timpul
de agitare, viteza de dizolvare a oxigenului, puterea de agitare i muli alii. Aici se decide dac
cultura de celule poate fi operat cel mai bine n sistem batch, semicontinuu sau continuu. De
asemenea, pot fi ncercate diferite tipuri de bioreactor. Se realizeaz, de asemenea, un calcul
economic de fezabilitate.
Urmtoarea treapt de ridicare la scar (notat cu 14 n fig. 1.1) este aceea de bioreactor
pilot. n aceast faz se implic specialitii instruii n ingineria bioproceselor i n ridicarea la
scar industrial a acestora. Acum se construiesc bioreactoare de 100-1000 1 dup specificaiile
prototipului de laborator. Scopul fazei pilot este acela de a examina rspunsul celulelor cultivate
la o scar mai mare. n aceast treapt de operare, rezultatele pot fi mai bune sau mai sczute fa
de cele obinute n bioreactorul-laborator. n funcie de aceste rezultate se hotrte dac se trece
la producia industrial sau nu (treapta 15). Aceast parte a procesului tehnologic aparine n
ntregime ingineriei bioproceselor. Acum se proiecteaz att bioreactorul industrial, ct i
facilitile auxiliare: echipamente de sterilizare aer i mediu, generator de abur, utilaje necesare
preparrii mediilor de cultur, sistem de ap de rcire, aparatur de automatizare i control. O
importan deosebit acord faptului c instalaia trebuie s asigure condiii aseptice pe ntreg
fluxul l producie. O parte important a unui proces biotehnologic o constituie faza recuperare a
produsului din mediul de producie i anume izolarea i purifli Bfl acestuia pn la produsul finit.
Aceast faz este adesea foarte dificila pini produsele ADN-recombinate, astfel nct costurile
reprezint 80-90% din COH total al bioprocesului. Procedeul aplicat pentru izolare i purificare
depinde i natura produsului i cuprinde metode fizice, chimice, biologice. Multe mctO ncercate
n laborator i care au dat rezultate bune nu pot fi aplicate la sea industrial. n aceast faz,
biochimitii, inginerii chimiti, tehnologii au contribuie important n recuperarea i

purificarea substanei active. Procedw elaborate includ: filtrri, centrifugri pentru


separarea celulelor de lichid, mctO mecanice de distrugere a membranei celulare, dac produsul
este intracelul; extracii cu solveni, metode cromatografice, separri prin membrane, crisUlizil |
uscri. Toate aceste procedee sunt testate mai nti la scara mic i apoi la Kl pilot i industrial.
Dup ce produsul a fost purificat pn la standardele cerute de noimi internaionale,
acesta poate fi ambalat i vndut (treapta 17). Pentru produi farmaceutice noi este necesar i
testarea eficacitii acestora, mai nti pe animi i apoi pe oameni. Pentru produsele de uz
alimentar sunt cerute alte teste specifll
Pentru toate produsele obinute pe cale biotehnologic se cer avize ofl< ll conforme cu
standardele existente pentru fiecare tip de produs. Din acest exem] se poate vedea c ntr-un
bioproces sunt implicate multe discipline diferite, i tehnice ct i fundamentale. Specialitii din
domeniul biotehnologiei se conlhii n mod constant cu probleme aparinnd domeniilor: biologie,
chimic, flzli inginerie i medicin.
1.3. APLICAII ALE BIOTEHNOLOGIEI N MEDICIN, AGRICULTURA,
INDUSTRIA ALIMENTAR, INDUSTRIA FARMACEUTIC
Sfera domeniilor de aplicabilitate a biotehnologiilor este foarte mare, d fiind varietatea
proceselor biotehnologice.
Principalele direcii de dezvoltare a biotehnologiilor moderne sunt det minate, n primul
rnd, de descoperirile recente din domeniul biologiei molecula iar n al doilea rnd de cerinele
societii fa de anumite aspecte cu care confrunt n prezent: criza energetic, epuizarea
rezervelor de hran de pe plani probleme ecologice i de bioremediere.
Incercnd o clasiilcnic ,i iii feritelor tipuri de biotehnologll, In funcie de domeniul tn care
se aplica sau dc tipul dc celule utilizate, observm c este greu s icnli/.ftm o delimitare. Orice
manipulare a viului n folosul societii nseamn biotfhnologie. Indiferent dac aceasta se
realizeaz la nivel de laborator, avnd un . .ii.u lei de cercetare fundamental, sau la nivel
industrial, avnd un caracter aplicativ, scopul final i n general tehnicile sunt asemntoare i
incluse n aceeai sfer larg a biotehnologiei.
In funcie de tipul de celule cu care se lucreaz, deosebim: biotehnologii: mu rob ie ne,
vegetale i animale.
In funcie de domeniul n care i gsesc aplicaii produsele obinute pe I ale
biotehnologic deosebim:
- biotehnologii industriale (farmaceutice, alimentare i de depoluare);
- biotehnologii agricole (vegetale i n zootehnie);
- biotehnologii medical-veterinare.
Biotehnologii le industriale cuprind procedee de obinere a unor produse de larg interes, la
nivel industrial, utiliznd microorganisme sau enzime. n categoria liidiehnologiilor farmaceutice
intr:
- producerea de biomas proteic;
- biosinteza antibioticelor;
- producia de acizi organici;
- producia de: aminoacizi, enzime, obinerea de probiotice, hormoni, vitamine,
polizaharide.
In funcie de gradul de puritate, produsele obinute pot fi utilizate att pentru consumul
uman ct i pentru cel animal.
Biotehnologiile alimentare cuprind procedee industriale de prelucrare a legumelor i

fructelor, a laptelui i produselor lactate, a crnii, viznd, n general, ispectele fermentative ale
acestora.
In cadrul biotehnologiilor de depoluare a mediului sunt incluse toate metodele i tehnicile
de epurare biologic a apelor uzate sau poluate, a aerului sau i solurilor degradate, extracia de
minereuri cu ajutorul microorganismelor.
Biotehnologiile agricole vizeaz un domeniu larg i anume acela referitor a manipularea
celulelor vegetale i n acest caz le denumim biotehnologii vegetale plant biotechnology) sau a
celor animale {animale biotechnology). n acest din irm caz deosebim: biotehnologii n
zootehnie i biotehnologii medical-veterinare, icestea putnd fi clasificate separat.
Biotehnologiile vegetale studiaz aspecte privind rezistena plantelor la ilacul factorilor
patogeni i ale toleranei fa de factori de mediu defavorabili, mplementarea de sisteme
simbiotice Ia diferite specii de plante, multiplicarea peciilor horticole i obinerea de noi hibrizi
sexuari.
Biotehnologiile din domeniul zootehniei se refer n special la nutriia animal; creterea
rezistenei animalelor la atacul factorilor patogeni; bioteliniei de reproducie artificial i de
predeterminare a sexului la animale; conservarea resurselor genetice animale.
Biotehnologiile medical-veterinare au ca scop, n principal, crearea unor sisteme de
diagnostic rapid i eficient al maladiilor sau dereglrilor funcionale la om i la animale,
producerea unor sisteme biologice de combatere a bolilor (anticorpi monoclonali, vaccinuri i
bacterii antagoniste).
Este necesar de remarcat faptul c saltul tiinific nregistrat n fiecare din domeniile
biotehnologiei, enunate anterior, nu ar fi fost posibil fr aplicarea tehnicilor noi de biologie
molecular, mai concret de inginerie genetic. Aceasta utilizeaz transferul de gene i donarea
molecular pentru obinerea unor noi tipuri de celule i organisme; astfel este posibil obinerea
de linii celulare noi, pentru medicin, agricultur, zootehnie, industria alimentar. ncorporarea
unor gene dorite, utile, conduce la obinerea unor produse noi de interes medical sau industrial.

Fig. 5.1. Instalaie de laborator cu flacoane agitate pentru obinerea


enzimelor prin fermentat

5 ETAPELE UNUI PROCES BIOTEHNOLOGIC


Elaborarea i industrializarea unei tehnologii de biosintez presupun* parcurgerea mai
multor faze constnd n cercetri la nivel de: laborator, pilot i industrial. Aceste cercetri permit
transpunerea procedeului de biosintez de la b faz la alta.
5.1. FAZA DE LABORATOR
Cercetrile de obinere a unui produs prin biosintez ncep cu lucrri dc laborator care
sunt prezentate n cele ce urmeaz.
Izolarea i selecia. Se izoleaz i se selecteaz un mare numr di microorganisme
cunoscute din literatura de specialitate ca productori a compusului ce urmeaz a fi biosintetizat.
Tehnicile utilizate n acest scop sun specifice pentru fiecare microorganism i sunt realizate de
microbiologi ci pregtire corespunztoare. Manualele de specialitate indic mai frecvent, pentn
izolarea i selecia microorganismelor, metode ca: tehnica diluiilor i tehnici granulelor de sol.
Microorganismele sunt preluate din diferite habitate cultivate pe medi solide sau lichide,
astfel nct s fie posibil punerea n eviden a uno caracteristici fiziologice. n prima etap se
urmrete realizarea unei culturi pun prin tehnici microbiologice specifice (epuizarea ansei,
diluii succesive etc). li continuare se stabilete o metod de triere (screening) adecvat scopului
urmrit.
De obicei, microorganismele sunt cultivate pe plci Petri, pe medii solidificate cu agaragar. Testele de identificare a compusului care intereseaz pot fi calitative sau cantitative. In
cazul enzimelor, de exemplu, se aplic, de obicei metode de identificare calitativ prin includerea
n mediul solid, pe care se cultiv
mk Toorgunismclc, a substratului speciile asupra cruia acioneaz cn/.ima ce se dorete a
se sintetiza (amidon n ca/ul aniilazclor, casciiiA in ca/ul piotea/cloi, celuloz n cazul
celulazelor). Dup dezvoltarea coloniilor izolate, enzimele di Iu/caz n gelul de agar-agar,
atacnd substratul inclus n mediu i, astfel, zona respectiv poate fi vizualizat, n cazul n care
devine transparent sau cu un reactiv specific.
In cazul altor enzime la care nu se poate aplica un test calitativ, coloniile i/.olatc se cultiv
pe medii specifice, iar extractul sau lichidul de biosintez este pttlual i prelucrat n scopul
dozrii cantitative a acesteia prin metode spec-trofbtometrice, fluorescent, titrimetrice,
polarimetrice. n urma acestor teste se rtln numai cteva tulpini care au dat cele mai bune
rezultate n ceea ce privete biosintez enzimei.
Intreinerea tulpinilor productoare. Dup faza de izolare i selecie, tulpinile
productoare se supun unor lucrri de caracterizare dup criterii moifblogice, biochimice,
fiziologice, imunologice, toxicologice. Tulpina astfel < ii k terizat se nregistreaz ntr-o colecie
de microorganisme sub un numr de Identificare. De obicei, aceste tulpini sunt supuse unor
lucrri de selecie natural i artificial (mutagenez) n scopul obinerii de tulpini mutante nalt
productoare.
Att tulpinile parentale ct i tulpinile mutante sunt conservate prin metode speciale i
pstrate la temperaturi sczute. Dintre metodele de conservare amintim: liolllizarea i
conservarea n azot lichid.
Tulpinile din colecie utilizate n lucrrile de biosintez curente se pstreaz sub diferite
forme, dup metode de ntreinere a culturilor, specifice fiecrui microorganism i formeaz aanumita cultur stoc" de la care se pornete procesul de biosintez.
De obicei, cultura stoc este pstrat la frigider, pe geloz nutritiv, n tub nclinat. Pentru
prepararea unei culturi inocul de laborator, se pornete de la o astfel de cultur vegetativ.

Cultura de inocul. Inoculul reprezint o cultur microbian n curs de multiplicare pe un


substrat nutritiv corespunztor i n anumite condiii specifice de dezvoltare (pH, temperatur,
agitare, aerare).
Inoculul constituie materialul de nsmnare al mediului de biosintez propriu-zis, din
etapa urmtoare.
Transvazarea culturii inocul n mediul de biosintez se realizeaz n condiii aseptice,
dup o perioad de dezvoltare bine stabilit de ctre microbiolog (vrst, cantitate, aspect
microscopic). n figura 5.1 poate fi urmrit o instalaie de laborator (shake-flask cultures) pentru
producerea de enzime existente n cadrul lacultii de Biotehnologii, Bucureti.
5.2. FAZA DE STAIE PILOT
Faza de biosintez propriu-zis se realizeaz n aparate speciale, numite bioreactoare de
diferite capaciti (10 1, 100 1, 1 m\ 10 m3, 100 m3), fiind precedat de operaii de sterilizare a
aparaturii utilizate i a mediului de cultur stabilit, la nivel de laborator, ca fiind optim. nceputul
fazei de biosintez este considerat momentul transvazrii culturii inocul n mediul de cultur
sterilizat i rcit la temperatura de cultivare a microorganismului productor. Cnd raportul ntre
capacitatea de inocul i cantitatea de mediu de fermentaie (numit raport de inoculare) nu permite
pregtirea culturii inocul n laborator, este necesar introducerea unei trepte intermediare de
cultivare, numite cultur intermediar".
n faza de staie pilot, tehnologia elaborat la nivel de laborator este verificat i
optimizat pe instalaii de biosintez de capacitate medie (pilot). n figura 5.2, se poate vedea un
echipament micropilot (bioreactor de tip Biotech Braun" de capacitate 5 1), utilizat pentru
producia de enzime (Facultatea dc
Biotehnologii, Bucureti).
Pe baza datelor de cercetare obinute Ia nivel pilot, se elaboreaz aa numitul proces
tehnologic pilot" care urmeaz o faz de experimentare industrial? i apoi producia propriu-zis
de enzim.

5.2. Bioreactor de laborator, pentru obinerea enzimelor prin


fermentaie.

5.3. MEDII DE CULTUR


In procesele biotehnologice, mediile de cultur sunt constituite din suporturi nutritive
sterilizate care permit dezvoltarea i studiul unui microorganism, m afara niei ecologice
naturale. Compoziia mediilor de cultur are o mare impor-tanfl asupra rcproductibilitii i
eficienei tehnologiei respective.
In funcie de consisten, compoziie, scopul utilizrii, mediile de cultur se clasific
astfel:
dup consisten: medii lichide, solide, semisolide;
dup compoziie:
medii naturale, care conin elemente nutritive, de origine vegetal sau animal;
medii sintetice, care conin numai compui cu structur chimic cunoscut, care pot fi
dozai;
dup tipul respirator al microorganismelor cultivate: medii pentru microorganisme
aerobe sau anaerobe;

dup scopul i frecvena ntrebuinrii:


medii de u/. curent:
medii speciale utilizate, n general, n studiile de izolare ;i mu moi ganismelor Ia
nivel de laborator. Acestea pot fi, la rndul lor: elective, selective, de mbogire, de conservare,
de identificare dup faza de biosintez la care este utilizat mediul de cultur poate li mediu
laborator, pilot sau mediu de cultur industrial;

dup destinaia final a culturii dezvoltate mediile pot fi:


sitfdTt aitaincnsini l993cnoQ)d n sjrsiIitu &'>itt\uo ih gHiib'AA iuluinz''t.iiiooui(n
pentru cultura inocul;
pentru cultura de regim, numite i medii de fermentaie sau medii de biosintez.
n biotehnologie se utilizeaz n mod curent mediile naturale avnd la bazfl subproduse
agroalimentare: rot de floarea-soarelui, de soia, fin de porumb, tre de gru, extract de
porumb. Aceste medii conin, n general, elemente nutritive necesare dezvoltrii
microorganismelor, completndu-se de obicei cu cantiti mici de sruri minerale.
Mediile naturale sunt, n general, mai ieftine, dar prezint dezavantajul variabilitii
compoziiei, ceea ce nu permite o standardizare corespunztoare i, n consecin, nu permite
reproducerea procesului de biosintez cu un randament constant.
Spre deosebire de mediile naturale, mediile sintetice sunt perfect repro ductibile la scar
industrial.
Un mediu de cultur utilizat pentru dezvoltarea microorganismelor trebuie s conin
ntotdeauna:
- o surs de carbon (n general glucide: glucoza, amidon, lactoz, zaharoz etc);
- o surs de azot, care poate fi organic (aminoacizi, proteine, uree) sau anorganic (NH3,
(NH4)2S04 etc);
- o surs de fosfor (H3PO4, (NH4)3P04, KH2P04 etc);
- oligoelemente: K (din KC1 sau K2HP04), Mg (din MgS04), Fe (dii
FeCl3);
microelemente: Mn, Ni, Co, W;
factori de cretere: aminoacizi, proteine, vitamine, coenzime. Corn poziia
mediului nutritiv specific pentru un microorganism se stabilete laborator, prin cultivarea

acestuia, alegndu-se astfel, n funcie de scopul urmri mediul optim de cultivare.


Uneori, pentru creterea randamentului n faza de biosintez, se adaug mediu precursori
care sunt substane avnd poriuni structurale ale molecul produsului de biosintez.
In procesele de biosintez, sursa principal de energie o constituie sursa < carbon,
respectiv glucidele. n procesele catabolice, prin oxidarea biochimic glucozei se elibereaz o
mare cantitate de energie, din care o parte este nmagazinat n compuii macroergici (ATP), iar
restul este preluat de mediul de cultur cu ajutorul sistemelor de termostatare ale bioreactoarelor.
Sursa de carbon furnizeaz, de asemenea, necesarul de oxigen i hidrogen n scopul dezvoltrii
microorganismului.
In 1970, Peppler i Harrison au demonstrat c exist o valoare minim a concentraiei
elementelor n mediul de cultur, necesar dezvoltrii nerestrictive a microorganismului. Mediile
de cultur utilizate n bioprocesele microbiene trebuie s conin elementele eseniale: carbon,
azot, sulf, oxigen, fosfor, magneziu, calciu i numeroase alte elemente n cantiti foarte mici
(urme): fier, cupru, cobalt, zinc, mangan, molibden, care sunt necesare funciilor celulare de baz
[Bridson i Brecker, 1970]. De cele mai multe ori este ns nevoie s se utilizeze un mediu de
cultur ct mai ieftin i posibil de reprodus o perioad ct mai lung de timp. Aceasta conduce Ia
utilizarea unor substraturi ct mai ieftine i mai accesibile n conjunctura economic respectiv;
nlocuirea unui component din compoziia mediului nutritiv conduce la variaii n randamentul de
producere, astfel nct studiul aprofundat al influenei diferitelor componente ale mediului de
cultur asupra biosintezei constituie un element important al cercetrilor n domeniul biotehnologiei.
Sursa de carbon utilizat n compoziia mediilor de cultur este suplinit n mod obinuit
de glucide de o anumit puritate sau de un material natural coninnd un amestec de glucide.
Astfel, melasa de sfecl sau de trestie este folosit n multe cazuri drept surs de zaharoz. Alte
surse de carbon utilizate: siropul de glucoza, amidonul de porumb sau de cartofi, hidrolizatul de
amidon de cereale (gru, orez, porumb) sunt n mod frecvent folosite ca surse de glucoza, iar
zerul ca surs de lactoz. Ratledge a fcut o trecere n revist a tuturor surselor de carbon posibil
de utilizat n industria fermentativ [Ratledge, 1977].
Sursa de azot poate fi reprezentat n diferite forme de surse anorganice (amoniacul,
srurile de amoniu) sau amestecuri complexe (extract de drojdie, extract de porumb, pepton,
fin de soia sau distilate solubile). Fosforul, sulful i cationii eseniali sunt, n general, suplinii
de srurile anorganice. Uneori se adaug elemente specifice n cantiti mici, dar de obicei
acestea sunt aduse de ap sau de alte componente ale mediului. Dintre factorii de cretere,
tiamina i biotina sunt necesare pentru creterea microorganismelor. Medii tipice utilizate n
producia de enzime bacteriene i fungice au fost descrise de Aunstrup i Lambert [Aunstrup,
1979; Lambert, 1983].