LP7 Dozarea proteinelor totale serice prin metoda biuretului Principiul metodei: Proteinele reacionez cu sulfatul de cupru n mediu

basic formnd combinaii complexe colorate n albastru-violet. Intensitatea culorii compusului format este direct proporional cu concentraia proteinelor din proba analizat. Reacia se datoreaz legturilor peptidice din moleculele proteinelor i este pozitiv n cazul compuilor cu cel puin dou legturi peptidice n structur. ste o reacie specific pentru oligopeptide! polipeptide i proteine! iar cel mai simplu compus organic care d aceast reacie este biuretul care se obine prin nclzirea a dou molecule de uree la "#$ $%! cu eliminarea unei molecule de &'(. )ozarea proteinelor prin metoda biuretului se face pe serul obinut prin recoltarea sngelui fr anticoagulant. Calcul: P x "( * g proteine totale+dl ser Valori normale: nou- nscui, -!.-/!$ g+dl ser0 copii sub ( ani: -!- 1 #!2 g+dl ser0 copii peste ( ani i aduli: 2!2-#!2 g+dl ser Variaii fiziologice ale proteinelor totale 1. Variaii intraindividuale a) date de diferena dintre s ngele arterial !i cel venos 1 la acelai pacient! proteinele plamatice au o valoare mai mare n sngele venos dect n cel arterial 3.-$--$$mg+"$$ml ser4! datorit 5emoconcentraiei din sngele venos. Proteinemia din sngele capilar este mai mare dect n cel venos. b) datorate anotimpului 1 vara proteinemia este mai mare dect n timpul iernii0 raportul albumine+globuline este mai mare primvara i toamna. c) diurne 1 acelai individ! n cursul aceleiai zile! poate prezenta valori diferite ale proteinemiei.! deoarece concentraia lor este influenat de sistemul endocrin i de sistemul nervos autonom. Variaii patologice: 1) "iperproteinemiile pot apare n, pierderi importante de ap ale organismului0 des5idratri prin stenoze pilorice i esofagiene0 stri febrile! diabet insipid! diaree0 inflamaii cornice! nefroz! tuberculoz! leucoz0 n creteri monoclonale 1 mielom multiplu! macroglobulinemie! crioglobulinemie0 n cretere policlonal 1 ciroz 5epatic! sarcoidoz! infecii cornice. #) "ipoproteinemiile apar n, aport sczut de proteine 3nfometare! inaniie40 tulburri de absorbie a aminoacizilor0 biosintez proteic deficitar 3insuficien 5epatic40 5ipercatabolism proteic0 anemii! 5emoragii acute0 pierderi proteice la nivelul 1 rinic5iului 3sindrom nefrotic40 - tractului digestive 3colite! enterite! fistule40 - tegumentului 1 arsuri extinse! dermatite exfoliante. pierderile mari de proteine caracterizeaz sindromul nefrotic cu etiologii diverse! glomerulonefritele! infeciile acute sau cornice! tulburrile circulatorii! intoxicaiile. $lectroforeza proteinelor plasmatice $lectroforeza este o metod analitic i preparativ de separare a proteinelor dintr-un amestec sub aciunea unui camp electric uniform aplicat din exterior. "

Principiul metodei: ntr-o soluie tampon cu p'*#!2-/!$! proteinele plasmtice sunt n stare ionizat! ncrcate electronegative. )ac ntr-o astfel de soluie se creeaz o diferen de potenial ntre doi electrozi dispui la o anumit distan! moleculele proteice se vor ndrepta spre polul pozitiv 3anod4. 6iteza de migrare a moleculelor n camp electric se numete mobilitate electroforetic i depinde! n special! de mrimea particulelor i de sarcina lor electric. 7uporturi de electroforez folosite in practic pot fi, 5rtia special de electroforez! gelurile de agar! agaroz! amidon! poliacrilamid! foliile de acetat de celuloz. Pe baza mobilitii lor electroforetice! proteinele plasmatice au fost separate n urmtoarele fraciuni, - albumine, -"!- 1 2"!-80 - globuline - 9" , .-28 - 9. , :-"$80 - ;, #-"280 - <, ":-.$8 - fibrinogen 1 migreaz ntre fraciunile ; i <. =spectul normal al electroforegramei proteinelor plasmatice este urmtorul,

%oncentraiile sau valorile normale ale diverselor fraciuni proteice se modific n numeroase stri patologice0 modificrile cantitative sunt cunoscute sub termenul de disproteinemii. %mportana electroforezei: &. Contribuie la precizarea diagnosticului de: mielom multiplu al oaselor 3maladia >='? R40 nefroz lipoidic 1 scad albuminele! cresc alfa"-globulinele40 colagenoze 3cresc gamma-globulinele40 reumatism articular acut 3R== 1 cresc alfa.-globulinele4. '. Permite urm(rirea evoluiei unor diverse maladii: tuberculoz! R== 3cresc alfa.-globulinele40 ciroze 3scad albuminele! cresc beta i gamma-globulinele40 infarct miocardic 3cresc alfa"-globulinele40 infecii 3cresc gamma-globulinele4. C. Permite diferenierea 1 ntr-o anumit proporie 1 a antigenelor )epatice prin asocierea ei cu alte probe de explorare 5epatic! ca de exemplu! n, ciroze 3scad albuminele! cresc gamma-globulinele40 ictere prin retenie 3cresc gamma-globulinele40 5epatite infecioase 3cresc alfa.- i gamma-globulinele4. Proteinele urinare @n mod normal! urina nu conine dect cantiti foarte mici! urme de proteine! n concentraii de .$:$mg8 i care nu pot fi decelate prin te5nicile uzuale. Proteinuriile sunt rezultatul, ".traversrii membranei filtrante glomerulare0 ..reabsorbiei tubulare .

(.secreiei de ctre celulele tubulare 3mai rar4 Proteinuriile crescute 3mai mult de *+mg,#-)4 sunt patologice i sunt de mai multe tipuri, a) proteinurii naturale .adev(rate) 1 sunt amestecuri de albumine i globuline0 apar n bolile infecioase circulatorii i n toate afeciunile care produc leziuni renale. b) proteinurii de transformare 1 precipitate de albumoze i peptone care apar n special n pneumonii0 c) proteinurii diverse. Procedeele utilizate pentru identificarea proteinelor n urin se bazeaz pe denaturare i pe modificarea solubilitii lor. %dentificarea proteinelor urinare prin metoda cu acid sulfosalicilic la rece Principiul metodei, n prezena proteinelor din urin! acidul sulfosalicilic determin apariia unei turbiditi sau c5iar a unui precipitat! n funcie de nivelul proteinuriei. Reacia este pozitiv i pentru albumoze! cu deosebirea c 1 prin nclzire- turbiditatea produs de albumoze dispare! pe cnd cea datorat proteinelor se intensific. Identificarea proteinelor urinare impune condiia ca urina s aib o reacie acid i s conin sruri. Interpretarea rezultatelor 1exist urmtoarele patru posibiliti, )ac urina rmne limpede 1 proteinele sunt absente. )ac urina prezint o uoar turbiditate 3nor foarte fin4 1 urme slabe de proteine 3$!$"-g+l40 )ac urina prezint o turbiditate pronunat! fr floculare 3nor fin4 1 urme de proteine 3$!$.g+l40 )ac urina prezint un precipitat abundant 3floculare4 1 proteinele sunt prezente n cantiti dozabile. Variaii fiziologice, proteinuriile pot apare n cursul efortului fizic! al strilor psi5o-emoionale i al ortostatismului. /emnificaia diagnostic( a proteinuriei, Proteinuriile patologice pot avea cauze, a4 renale cu afectarea primar a nefronului n, ". glomerulonefrite acute sau cronice0 .. glomerulonefroz lipidic! amiloidic! diabetic0 (. galactozemie! tubulopatii prin intoxicaie cu arsenic! c5inin! acid salicilic. b) prerenale 1 n caz de proteine incomplete digerate sau aprute prin deficit de sintez sau detoxifiere la nivel 5epatic0 - proteine Aence-Bones 3mielom multiplu4. c) postrenale 1 afeciuni sau inflamaii ale cilor urinare0 :. sngerri datorare litiazei! tumorilor benigne sau maligne0 -. n boli infecioase 3pneumonii! scarlatin etc4 d) alte tipuri de afeciuni 0 afeciuni extrarenale cu interesare secundar renal, - insuficien cardiac0 - tromboza venei cave sau a venelor renale0 - 5emoragie cerebral! traumatism cerebral. Din punct de vedere cantitativ! proteinuriile se clasific n, a)minime .discrete) 1 se elimin mai puin de $!-g+.:5 3nefropatii interstiiale! pielonefrite cornice! nefropatii congenitale40 b)medii - se elimin ntre $!- 1 (g+.:5 3glomerulonefrite acute i cornice! amiloidoz! boli de collagen! nefropatie diabetic sau de sarcin40 c)masive .severe) 1 se elimin mai mult de :--g+.:5 1 carecterizeaz sindromul nefrotic.

Proteina C reactiv1 .PC2) @n cursul proceselor inflamatorii 1 fie datorate infeciei! fie distrugerii tisulare - n snge apare o protein specific! anormal! proteina C reactiv( .3P%R4! care este o protein( de faz( acut(. =ceasta este absent din sngele persoanelor sntoase. Crice afeciune care presupune condiii inflamatorii n orice esut va determina apariia rapid a P%R n snge i lic5idele biologice 3de exemplu! n lic5idul sinovial sau peritoneal4. P%R este sintetizat n special n ficat i se gsete n cantiti mari n toate lic5idele biologice 3peritoneal! pleural! pericardic! sinovial4. a are o rat de sintez foarte rapid n prezena unui proces inflamator 3crete de peste ($$$ de ori n ".-.:54.7e consider c este o protein de transport pentru anumite poliglucide! iar n cercetri recente s-a artat c o funcie maDor a sa este aceea de a interaciona cu sistemul complementului. Proteinele de faz acut au n comun caracteristica de a crete n ser de mai multe ori sub influena unei distrucii tisulare asociate unui proces inflamator acut sau cronic. Alocarea sintezei P%R la scurt timp dup ndeprtarea stimulului inflamator face din P%R un important marEer de monitorizare a infeciei! n special atunci cnd datele clinice i 5ematologice ale unui astfel de proces sunt mascate. )ac dup o intervenie c5irurgical nivelul ei seric nu scade sau c5iar crete n primele zile de supraveg5ere! se poate bnui dezvoltarea unei infecii postoperatorii. Dozarea P%R este un test antigen3anticorp! o metod nespecific pentru aprecierea severitii i evoluiei afeciunii inflamatorii n condiii n care exist necroza tisular! ca de exemplu! n infarctul miocardic! cancer! artrita reumatoid. Prezena P%R poate fi detectat n #-3-4 de ore dup apariia distrugerii tisulare. /copul determin(rii: ". urmrirea evoluiei reumatismului articular acut sub tratament i interpretarea 67'. ..monitorizarea procesului de vindecare a plgilor operatorii! mai ales interne! a evoluiei arsurilor i transpantului renal. Valori de referin(: sub $!2 mg+dl ser %mplicaii clinice: 2eacia pozitiv( indic prezena unui proces inflamator activ! dar nu i cauza acestuia. P%R este prezent n reumatismul articular acut! artrita reumatoid 3testul devine negativ sub tratament! indicnd dispariia procesului inflamator! c5iar dac 67'-ul rmne ridicat4. 5ibrinogenul Fibrinogenul este o glicoproteid plasmatic constituit din dou pri identice0 fiecare parte este format din trei lanuri diferite 1 9!;!< 1 care! in proporie de :$8 - au structur alfa-5elical sau super5elical i conin o cantitate mare de cistein. =re o form molecular alungit i masa molecular de (:"$$$ )a. 7inteza lui are loc n ficat cercetrile asupra vitezei de ncorporare a metioninei marcate cu sulf.- n diferite proteine sanguine au artat c producerea fibrinogenului nceteaz complet dup 5epatectomie! dar c 1 la organismele sntoase 1 el este sintetizat de -$ de ori mai rapid dect albumina. Fibrinogenul migreaz electroforetic ntre subfraciunile ; i <0 el are un p'i * -!-0 la p'i stabilitatea proteinelor este minim! fapt care face posibil precipitarea acestora i apoi separarea cantitativ. Importana fibrinogenului n procesul de 5emostaz este abordat n dou procese 1 coagularea i fibrinoliza 1 ambele fiind reglate enzGmatic. Fibrinogenul este utilizat continuu0 s-a demonstrat c este util pentru reformarea unui nveli de fibrin care mbrac endoteliul vascular i c el este continuu degadat sub aciunea fibrinolizinei. Dozarea fibrinogenului prin metoda turbidimetric( :

Principiul metodei: Fibrinogenul are proprietatea de a precipita ntr-o soluie neutr 1 fr adugare de reactivi 1 la temperatura de ----2o%.7e obine o turbiditate direct proporional cu concentraia fibrinogenului din proba analizat. %elelalte proteine nu precipit la aceast temperatur. Calcul: P x F x :.!# * mg fibrinogen+dl plasm. F * factor de pant * H/ Valori de referin(: .$$-:$$mg fibrinogen+dl plasm. /emnificaie diagnostic(: 1. "ipofibrinogenemiile: a) apar 6ntr3o serie de boli congenitale , afibrinogenemia! 5ipofibrinogenemia! fibrinemie congenital 3foarte rar40 - disfibrinogenemia 1 fibrinogenul exist n cantitate normal n plasm! dar are funcie deficitar.%auzele ei pot fi 5epatit grav! ciroze ale ficatului cu fibrinoliz! prezena unor tumori 5epatice primare sau metastatice. b) apar ca secundare unei sinteze insuficiente a fibrinogenului de c(tre ficat3 exemple, insuficen 5epatic grav! ciroze! intoxicaii! scorbut! cancere ale tubului digestive! boli careniale. c) apar ca urmare a fibrinolizei crescute 6n: leucemii! neoplasm de prostat sau de pancreas! intervenii c5irurgicale cu circulaie extracorporal. #. "iperbirinogenemiile: a4 nsotesc o serie de procese inflamatorii pulmonare i cardiace0 b4 apar n infecii bacteriene! reumatism articular acut 3pn la "$$$mg+"$$ml40 c4 apar n traumatisme! coagulopatii! neoplazii! boli 5epatice! afeciuni coronariene i infarct! afeciuni renale! boli de collagen.