UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE FILOSOFA, LETRAS Y CIENCIAS DE LA EDUCACIN CARRERA DE CIENCIAS NATURALES Y DEL AMBIENTE, BIOLOGA

Y QUMICA MICROBIOLOGA GENERAL Nombre: Janneth Caiza Curso: 7 semestre A Fecha: 10-12-2013 PRCTICA N 1 TEMA: Normas de comportamiento en el laboratorio Objetivo general Garantizar un desempeo adecuado de los estudiantes en el laboratorio de Microbiologa. Objetivos especficos Evitar accidentes o errores en las prcticas de laboratorio realizadas. Mejorar la actitud de los estudiantes para lograr el xito de todas las prcticas. Materiales Mandil Vasos de precipitacin Pipetas de seguridad Cpsula de Petri Descripcin de normas El mandil es personal y se debe esterilizar.

Calificacin

Se debe usar mascarilla, guantes y cofia en la manipulacin de microorganismos infecciosos, estos deben ser esterilizados para luego desecharlos.

Se utiliza peras de seguridad para succionar lquidos custicos, corrosivos o txicos. Se suele utilizar en las pipetas.

Para trasvasar una sustancia lquida de un recipiente a otro se procura correr el lquido por las paredes del recipiente al que queremos trasvasa, o mediante el uso de una varilla.

Se debe lavar las manos despus de cada prctica y cuando se trabaja con microorganismos y no se debe colocar las manos en la boca, ojos y mucosas.

Los objetos contaminados se colocan un recipiente adecuado que contenga una sustancia desinfectante.

Antes de desechar los objetos contaminados primero se deben esterilizar.

Si se riega una sustancia contaminada en cualquier superficie se debe colocar abundante desinfectante apropiado durante 30 min y luego se procede a secar.

Cualquier material que se procede a esterilizar debe estar envuelto en papel y se lo manipula con las manos previamente lavadas y esterilizadas.

Evitar correr dentro del laboratorio para impedir el levamiento de partculas de polvo u otros microorganismos.

Cuestionario 1. De qu depende el xito de trabajo en el laboratorio? El xito de trabajo en el laboratorio depende de la responsabilidad de los estudiantes a cumplir las normas de laboratorio previamente dichas. Tambin se debe leer la gua de laboratorio, para realizar la prctica de forma ordenada y eficiente, teniendo cuidado al momento de manipular los materiales de laboratorio. (es.scribd.com/doc/395622/Manual-de-laboratorio)

2. Qu objeto tiene someter a esterilizacin tanto las mascarillas como el mandil antes y despus de su uso? El objetivo de toda esterilizacin de materiales es para destruir todos los grmenes y restos de elementos contaminantes que puedan tener estos materiales, y as evitar enfermedades, adems si no estn esterilizados, una sustancia puede contaminar las muestras a estudiar y los resultados se alteraran. (www.slideshare.net/HAROLDECH/bioseguridad-8073057) 3. Si tuviera que manipular microorganismos patgenos, qu tipo de proteccin bsica usara? Se debera utilizar primeramente mandil, que es un protector para el cuerpo; evita la posibilidad de que contamine la ropa; tambin se puede utilizar mascarillas para prevenir la exposicin de mucosas de boca, nariz y ojos, evitando que se reciban inculos infectados. Uso de guantes que reducen el riesgo de contaminacin por fluidos en las manos. Cofia la cual se usa con el fin de evitar en los estudiantes el contacto por salpicaduras por material contaminado y adems evita la contaminacin de los cabellos con la muestra. (www.monografias.com/trabajos13/manubio/manubio.shtml#ixzz2mjxBJ4pO) 4. Qu riesgos se evitan con el empleo de la pera de seguridad? Se utilizan para evitar que los lquidos custicos, corrosivos o txicos se derramen o causen dao al experimentador. 5. Si se requiere esterilizar tanto material limpio como contaminado, es correcto introducir en el autoclave simultneamente los dos tipos de materiales? Argumente su respuesta. No es recomendable mezclar material limpio y contaminado en el autoclave, es preferible esterilizarlos por separado, ya que el material limpio debe ser envuelto en papel antes de introducirlo en el autoclave, adems se debe esperar 15 min al contrario del material contaminado que primero debe estar limpio y luego se lo coloca en la autoclave por lo menos 30 min. 6. Cite una medida para evitar la contaminacin del material esterilizado. El material esterilizado debe estar envuelto en papel y debe ser manipulado con las manos previamente lavadas y esterilizadas. 7. Consulte sobre las alternativas empleadas para descartar los guantes segn el tipo de material manipulado. Los guantes siempre sern desechados antes de salir del rea de trabajo, ponindolos en un recipiente que contenga solucin descontaminante y luego se los desecha. Lvese las manos inmediatamente despus de quitarse los guantes. (www.taringa.net/comunidades/mentesanaencuerposano/2793678/El-Uso-de-losguantes-de-latex.html) Fuente de consulta http://es.scribd.com/doc/395622/Manual-de-laboratorio http://www.slideshare.net/HAROLDECH/bioseguridad-8073057 www.monografias.com/trabajos13/manubio/manubio.shtml#ixzz2mjxBJ4pO http://www.taringa.net/comunidades/mentesanaencuerposano/2793678/El-Uso-delos-guantes-de-latex.html .. Firma de responsabilidad

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE FILOSOFA, LETRAS Y CIENCIAS DE LA EDUCACIN CARRERA DE CIENCIAS NATURALES Y DEL AMBIENTE, BIOLOGA Y QUMICA MICROBIOLOGA GENERAL Nombre: Janneth Caiza Curso: 7 semestre A Calificacin Fecha: 10-12-2013 PRCTICA N 2 TEMA: Equipos y materiales de laboratorio Objetivo general Manipular equipos y materiales de manera eficiente, garantizando el mantenimiento de los materiales. Objetivo especfico Lograr un cambio positivo en los estudiantes sobre el correcto uso de los materiales de laboratorio. Materiales: Tubos de ensayo Asa de platino Tubos de centrifugacin Balanza Pipetas de Pasteur Autoclave Baln Refrigerador Matraz Centrifugadora Cpsulas de Petri Microscopio Esptulas
Soportes de tubos

Descripcin de los equipos y materiales Materiales de laboratorio Tubos de ensayo: se emplean para el cultivo de microorganismos.

Tubos de centrifugacin: tubos desechables de fondo cnico, son muy verstiles y se pueden usar tanto para las tareas rutinarias como para la centrifugacin a alta velocidad. Son tiles para recolectar y transportar muestras biolgicas.

Pipetas de Pasteur: tubos de vidrio o de plstico, que por uno de sus extremos son muy estrechos (tubo capilar) y en el otro extremo se suele colocar un cuentagotas. Se utilizan para coger pequeas cantidades de cualquier disolucin. http://www.100ciaquimica.net/

Baln: frasco de vidrio, de cuello largo y cuerpo esfrico. Se utiliza para calentar sustancias y prepara medios de cultivo.

Matraz: recipientes de forma cnica y cuello corto, volumtricos tiles para la preparacin y almacenamiento de soluciones, colorantes, reactivos, medios de cultivos, etc.

Cpsulas de Petri: cajas cilndricas de vidrio o plstico, se emplean como recipientes para el cultivo y aislamiento medios de cultivo slidos. Esptulas: se utilizan para la diseminacin de las siembras sobre medios slidos, cuyo extremo es destinado para pesar muestras o medios de cultivo.

Soportes de tubos: llamado tambin gradilla se utiliza como soporte de los tubos de ensayo. Asa de platino: pueden ser metlicas o de plstico, curvas o rectas. Se utilizan para la siembra bacteriana. Equipos de laboratorio Balanza analtica: es un instrumento utilizado en el laboratorio, que sirve para realizar mediciones de masa muy precisas. Las balanzas analticas generalmente son digitales, y algunas pueden desplegar la informacin en distintos sistemas de unidades. Las balanzas analticas modernas, que pueden ofrecer valores de precisin de lectura de 0,1 g a 0,1 mg. http://es.wikipedia.org/wiki/Balanza#Balanza_anal.C3.ADtica Autoclave: es un procedimiento de esterilizacin mediante calor hmedo. Se realiza en al autoclave durante 15 20 min, segn el volumen, a 115 C 121 C, segn la naturaleza del material que se desee esterilizar.

Refrigerador: se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos. Generalmente estn a una temperatura fija de 4 C. Centrifugadora: aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrfuga lo que permite la separacin de los distintos componentes de la muestra mediante la precipitacin en el fondo del tubo de las partculas en suspensin.

Estufa de aire caliente: es utilizado en la esterilizacin por el calor seco. Tienen solo dos paredes y son de forma cbica

Bao mara: tienen salida de aire, presentan un termostato que regula la temperatura del agua presenta un piso para colocar los materiales que se desea. Cmara de flujo laminar: pueden ser usadas para una amplia variedad de aplicaciones que incluyen: laboratorios de fertilidad, cultivo celular, biologa molecular, etc.

Agitador magntico: consiste de una pequea barra magntica (llamada barra de agitacin) tiene un magneto rotatoria o una serie de electromagnetos dispuestos en forma circular a fin de crear un campo magntico rotatorio. Microscopio: es un instrumento ptico que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio

Incubadora: es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiolgicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene la temperatura, la humedad y otras condiciones en grados ptimos. http://es.wikipedia.org/wiki/Incubadora_(aparato_de_la boratorio)

I.

Cuestionario Frente a cada funcin escriba el material o equipo que se emplea: Tubos de ensayo, cpsula de Petri Baln, matraz Autoclave Refrigeradora Incubadora Centrifugadora Cmara de flujo laminar

Siembra de microorganismos. Elaboracin de medios de cultivo. Esterilizacin de material. Retardo del crecimiento de microorganismos. Control de la proliferacin de de microorganismos. Separacin de mezclas homogneas por densidad. Control de condiciones de asepsia por aire filtrado y luz ultravioleta.

II. Consulte y responda: Los tubos de ensayo presentan un dimetro limitado, en qu posicin colocara el tubo para ampliar su superficie de siembra en los cultivos slidos o agares? Medios de cultivo slidos o lquidos en tubo: la muestra se colocar en el tubo, que ocupara un volumen que oscila entre los 5-10 ml, pero para aumentar la superficie se suelen colocar de forma inclinada, se tapa con un tapn metlico y se cubre con papel y cinta adhesiva. Cite 1 caso concreto en el que se emplea las cajas de Petri que presentan compartimentos y las micropipetas. La caja Petri con compartimientos se utiliza generalmente en los laboratorios de bacteriologa para diferentes cultivos de microorganismos como el cultivo del agar para aislarlos e identificarlos y as poder estudiarlos con mayor facilidad. La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir pequeos volmenes de lquidos Cul es la ventaja que presentan las cajas de Petri frente a los tubos de ensayo respecto al cultivo de microorganismos? La ventaja que ofrece realizar un cultivo en la caja Petri frente a realizarla en un tubo de ensayo es que le la caja Petri es mayor espacio para la proliferacin de los microorganismos. Fuente de consulta http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicro/pr actica1.html http://es.scribd.com/doc/17102226/2-LABORATORIO-DE-MICROBIOLOGIA-I http://es.wikipedia.org/wiki/ .. Firma de responsabilidad

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE FILOSOFA, LETRAS Y CIENCIAS DE LA EDUCACIN CARRERA DE CIENCIAS NATURALES Y DEL AMBIENTE, BIOLOGA Y QUMICA MICROBIOLOGA GENERAL Nombre: Janneth Caiza Curso: 7 semestre A Fecha: 10-12-2013 PRCTICA N 3 TEMA: Conocimientos bsicos de asepsia: esterilizacin y limpieza Objetivo general Aplicar los procedimientos adecuados de asepsia, esterilizacin y limpieza. Objetivo especfico Reducir la proliferacin microbiana, removiendo restos de tejidos, sangre u otra materia orgnica. Evitar la presencia de grmenes gramnegativos y pirgenos. Materiales: Mechero Cpsulas de Petri Tubos de ensayo Marmita Material en polvo y lquido Incubadora Malla metlica Formol Vaso de precipitacin Cloro Tijeras Alcohol Estilete Descripcin de los procedimientos Asepsia: ausencia de microorganismos. 1. Esterilizacin: destruccin de microorganismos. Los procesos de esterilizacin se dividen en procesos fsicos y qumicos: 1.1 Procesos fsicos: a estos procesos se les aplica calor y radiaciones, pero en el laboratorio se utiliza calor. 1.1.1. Calor seco: se realiza por dos mtodos: por calor directo, flameado o llameado y por aire caliente. 1.1.1.1 Calor directo: mediante este mtodo se esterilizan materiales de vidrio y metlicos. A estas materiales se les somete a la llama del mechero hasta cuando adquiera coloracin roja. Los materiales de vidrio solo se flamean 4 o 5 veces. 1.1.1.2 Aire caliente: mediante este mtodo se esterilizan materiales de vidrio y metlicos cortantes, material en polvo, y lquidos. Se utiliza el horno y se somete a temperatura de 170 a 300 C por 45 min u 1 hora. La incubadora sirve para esterilizar material de vidrio, plstico y sustancias lquidas, es principalmente til para estilizar cultivos.

Calificacin

1.1.2. Calor hmedo: se utilizan tres mtodos: por ebullicin, vapor de agua y tindalizacin. 1.1.2.1. Ebullicin: mediante un mechero se hierve el agua contenida en un recipiente donde se colocan materiales de plstico, metlicos, cortantes, gomas, durante 5 min.

1.1.2.2. Vapor de agua saturado a presin: se utiliza la marmita o autoclaves, donde se ubican materiales de vidrio envueltos en funda o papel. Se someten al calor y a presiones altas. 1.1.2.3. Tindalizacin: los microorganismos son sometidos a tres procesos. El primer da se somete a los microorganismos a 100 C durante 1 hora, donde los microorganismo susceptibles morirn, el segundo da los microorganismo tolerantes sern sometidos a 100 C durante 1 hora, para finalmente el tercer da los microorganismos resistentes morirn.

1.2. Procesos qumicos: a este proceso las bacterias son sometidas a sustancias qumicas para ser eliminada. 1.2.1. Desinfectante: Son sustancias fuertes que tienen accin bactericida (mata las bacterias), y se aplican en objetos inanimados.

1.2.2. Antispticos: Son sustancias suaves que tienen accin bacteriosttica (detiene la proliferacin de las bacterias), y se aplican en tejidos vivos.

2. Limpieza: eliminacin de residuos orgnicos (grasas), e inorgnicos (agua, polvo), provocando dificultad para la adherencia de microorganismos. Se utiliza: detergente, jabn lquido y en barra.

Cuestionario 1. Elabore un organizador grfico sobre los procedimientos de esterilizacin. Calor directo, flameado o llameado Aire caliente Procesos fsicos Ebullicin Calor hmedo ESTERILIZACIN Vapor de agua Tindalizacin Accin bactericida Desinfectantes Sustancias fuertes Aplicacin en objetos inertes Accin bacteriosttica Antispticos Sustancias suaves Aplicacin en tejidos vivos 2. Establezca una diferencia entre desinfectantes y antispticos segn su mbito de aplicacin. La diferencia es que los antispticos se aplican sobre la piel o tejidos vivos para prevenir la infeccin; mientras que los desinfectantes se aplican a las superficies, equipos u otros objetos inanimados, no a los tejidos vivos.

Calor seco

Procesos qumicos

3. Establezca una diferencia entre limpio y estril. La diferencia es que limpio quiere decir que se ha eliminado la suciedad visible de una superficie y los restos orgnicos; mientras que estril quiere decir que se han destruido todos los microorganismos. 4. Qu efecto puede tener la materia orgnica sobre la efectividad de un desinfectante? La materia orgnica (suero, sangre, pus o materia fecal) puede interferir con la actividad antimicrobiana de los desinfectantes de dos maneras; por un lado puede comportarse como una barrera que protege a los microorganismos del ataque de los desinfectantes. Por otro algunos desinfectantes, como los derivados clorados y yodados, reaccionan qumicamente con la materia orgnica dando complejos con menor actividad. De ah la importancia de limpiar cuidadosamente los objetos antes de la desinfeccin, ya que adems de eliminar la materia orgnica presente, se eliminan por arrastre gran parte de los microorganismos. (http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part3/332.pdf) 5. Consulte y cite 4 substancias empleadas en la limpieza. Detergentes Aceite mineral Sanitizante Shampoo (http://www.productosquimicosmexico.com.mx/productos_de_limpieza.aspx) Fuentes de consulta http://www.ehowenespanol.com/antiseptico-versus-desinfectante-sobre_111094/ http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part3/332.pdf http://www.productosquimicosmexico.com.mx/productos_de_limpieza.aspx

.. Firma de responsabilidad

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE FILOSOFA, LETRAS Y CIENCIAS DE LA EDUCACIN CARRERA DE CIENCIAS NATURALES Y DEL AMBIENTE, BIOLOGA Y QUMICA MICROBIOLOGA GENERAL Nombre: Janneth Caiza Curso: 7 semestre A Fecha: 10-12-2013 PRCTICA N 4 TEMA: El microscopio compuesto Objetivo general Usar correctamente el microscopio para poder observar microorganismos. Objetivo especfico Materiales Microscopio compuesto Limpiador lquido Cotonetes Mondadientes

Calificacin

Etanol Papel absorbente lavable Aceite

Descripcin de las partes del microscopio El microscopio es un instrumento ptico que muestra una imagen aumentada, real e invertida de un objeto pequeo.

El microscopio est compuesto por dos partes: parte mecnica y la parte ptica. Parte mecnica BASE O PIE.- es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio.

BRAZO.- es la parte de donde se sujetan: las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revlver. Adems sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro. Iluminador: porta filtros que cambia el tono de la luz. PLATINA.-dispositivo de movimientos en cruz (nonio o vernier), es de forma cuadrada, tiene en su centro una abertura circular por la que pasar la luz del sistema de iluminacin. Aqu se coloca el portaobjetos con la muestra a observar. Pinzas de sujecin.- parte mecnica que sirve para sujetar la preparacin. Revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los tres lentes objetivos en seco y el cuarto lente objetivo que es el de inmersin. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo. Tubo.- parte mecnica que proporciona sostn a los oculares y objetivos. Tornillo macromtrico: permite hacer un movimiento rpido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar. Tornillo micromtrico.- parte mecnica de movimiento giratorio que nos permite colocar en posicin cualquiera de los objetivos que se encuentran en l. Parte ptica Condensador.- es una lente de gran abertura que permite dirigir o condensar la mayor parte de los rayos luminosos en la preparacin. Diafragma.- existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminacin del objeto a observar Fuente de luz.- para observar la muestra microscpica es necesario que sta se ilumine con un foco que da energa elctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador. Objetivos: son tres lentes que se encuentran incrustados en el revlver, que proporciona el poder de resolucin del microscopio y determinan la cantidad total de aumento. Ocular.- se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que captan la imagen formada en los objetivos. (http://micropartes.blogspot.com/) Descripcin del manejo 1. Limpiar el porta y cubre objetos, trabajar en el centro del portaobjetos, es decir aplicar una gota de cultivo en el centro.

2. Colocar el cubre objetos, para evitar burbujas se pega el cubre a la muestra en un ngulo de 45 grados y con una aguja de diseccin se le sostiene el otro extremo, dejndolo caer de golpe, se seca el exceso de muestra de los filos.

3. Se realiza una previa revisin del microscopio, antes conectarlo revisar el volumen, los lentes oculares deben estar ubicados a la distancia de los ojos, y el cabezal debe estar ajustado.

4. Se inicia a observar con el lente de menor aumento 3,2 y se ajusta el macro y micromtrico, luego se pasa al objetivo mediano 10 y se procede a ajustar el macro y micromtrico. Finalmente se observa con el objetivo de mayor aumento 40.

5. Para observar con el objetivo de inmersin se enfoca con el lente de mayor aumento de 40 se hace a un lado el objetivo y se coloca el aceite de inmersin sobre la placa y se pasa el objetivo de inmersin de 100, se espera, se aumenta el volumen de luz, se utiliza solo micromtrico y se observa.

Descripcin del mantenimiento Para el mantenimiento del microscopio se realiza una limpieza general del equipo. Para la limpieza del microscopio se procede a colocar jabn lquido al equipo, y mediante un papel absorbente lavable o una franela se refriega. Para retirar las etiquetas o cintas adhesivas se coloca aceite, se espera unos segundos y se limpia con el papel absorbente. Para limpiar las marcas de marcador se puede colocar alcohol, etanol, diesel, pero no gasolina.

Para la limpieza de los lentes del microscopio se utiliza cotonetes, mondadientes o espuma flex, una franela y jabn lquido.

Fuentes de consulta http://micropartes.blogspot.com/)

.. Firma de responsabilidad