SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE

Diagnosticul etiologic al bolilor infecioase cuprinde: Metode de diagnostic direct sau bacteriologic; - izolarea i identificarea bacteriei responsabile de procesul infecios; - testarea sensibilitii acestei bacterii la antibiotice (chimioterapice), n vederea instituirii unui tratament corespunztor. Metode de diagnostic indirect serologice i biologice - evidenierea anticorpilor aprui n sngele bolnavului ca urmare a ptrunderii agenilor patogeni bacterii (antigene)

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE

Diagnosticul direct bacteriologic Etapele diagnosticului bacteriologic. prelevarea produsului biologic examenul microscopic direct nsmnarea prelevatelor i izolarea agentului patogen identificarea agentului patogen testarea sensibilitaii la antibiotice.

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE Diagnosticul direct bacteriologic

1. Prelevarea produsului biologic - respectarea regulilor generale: cnd?, de unde?, cum?, ct? 2. Examenul microscopic direct

efectuarea din produsul biologic de preparate native i frotiuri colorate simplu, Gram, Ziehl-Neelsen sau cu alte coloraii speciale;

- examinarea preparatelor
ofer informaii despre: numarul, forma, aezarea, dispozitia bacteriilor ( prezena/absena mobilitii pe preparate native), utile pentru alegerea n continuare a unor tehnici potrivite de diagnostic. n unele bili infecioase bacterioscopia direct este hotrtoare pentru stabilirea diagnosticului ex. sifilis primar, gonoree la brbai, tugerculoz.

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE

Diagnosticul direct bacteriologic

3. Insmnarea prelevatelor se realizeaz pe medii de cultur care au fost selectate n funcie de tipul bacteriilor evideniate n urma examenului microscopic. are ca scop izolarea bacteriilor n cultur pur.

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE Diagnosticul direct bacteriologic

4. Identificarea agentului patogen proprieti morfotinctoriale

studiate pe preparate microscopice efectuate din colonia bacterian suspect de a fi

patogen;

proprieti de cultur

- evideniate prin modificrile care apar n mediile de cultur lichide i aspectul coloniilor
pe medii solide; - permit de cele mai multe ori identificarea prezumtiv a agentului patogen

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE Diagnosticul direct bacteriologic

4. Identificarea agentului patogen proprieti metabolice (biochimice) evideniate prin:

- nsmnarea coloniilor bacteriene pe medii selective - exemplu Chapmann, M.I.U., T.S.I., etc - teste pe lam (ex. catalaza) sau aplicarea unor soluii direct pe cultur (ex. oxigenaza); - teste speciale exemplu testul API pentru identificarea enterobacteriilor.

Aceste teste permit ncadrarea unor bacterii n familii, genuri sau specii.

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE Diagnosticul direct bacteriologic

4. Identificarea agentului patogen proprieti antigenice - necesare pentru precizarea subspeciei (serotipului), nu ntotdeauna necesar pentru orientarea terapeutic, dar util n ancheta epidemiologic pentru stabilirea focarului de infecie; - efectuate predilect prin reacii de aglutinare pe lam sau n tuburi, dar i prin reacii de precipitare (ex. streptococ) utiliznd seruri imune standard. proprieti de patogenitate - constau n evidenierea eliberrii de ctre bacterii a unor toxine sau produi celulari netoxici (coagulaz, fibrinolizin, hialuronidaz, hemolizin, etc.) teste in vivo prin reproducerea infeciei experimentale la aninalele de laborator; teste in vitro

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE

Diagnosticul direct bacteriologic

5. Testarea sensibilitii la antibiotice = Antibiograma important din motive clinicoterapeutice; se realizeaz dup izolarea n cultur pur i identificarea bacteriei care a produs infecia.

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE

Diagnosticul indirect Diagnosticul serologic teste in vitro de evideniere a Ac utiliznd reacii Ag-Ac (aglutinare, precipitare, fixare a complementului, seroneutralizare, imunofluorescen, etc.) care depind de tipul Ag standard utilizat. reguli generale

- se lucreaz pe seruri duble pentru a urmri n dinamic titrul de Ac;

- dac exist doar o singur prob, rezultatul este pozitiv dac titrul Ac depete de cel puin 2 ori pragul de specificitate; - serul s fie limpede, nehemolizat, neinfectat, decomplementat (nclzire la 56C, 30 minute)

SCHEMA DIAGNOSTICULUI DE LABORATOR N BOLILE INFECIOASE Diagnosticul indirect Diagnosticul biologic teste in vivo de evideniere a Ac aprui in snge, prin inocularea intradermic a Ag. Exemplu reacii de neutalizare toxin-antitoxin reacia Shick n difterie, reacia Dick n scarlatin; - reacii pentru decelarea strii de hipersensibilitate tardiv ce nsoete unele infecii reaciia la tuberculin (Mantoux) n tuberculoz.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Cocii sunt bacterii de form rotund-ovalar aero-anaerobi facultativi sau strict anaerobi, asociai fecvent cu infecii umane. Genurile i speciile bacteriene implicate frecvent n patologia uman i care conin coci aero-anaerob facultativi sunt: - Genul Staphylococcus Staphylococcus aureus - Staphylococcus epidermidis - Genul Streptococcus Steptococcus beta-hemolitic de grup A - Streptococcus pneumoniae - Genul Neisseria Neisseria gonorrhoeae - Neisseria meningitidis

Infecii prin invazie

Coci Gram-pozitivi

Coci Gram-negativi

DIAGNOSTICUL PRODUSEmeningococi DE COCI stafilococi DE LABORATOR streptococi AL INFECIILOR gonococi GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI Infecii cutanate Foliculit Furuncul Impetigo
Acnee Orjelet Suprainfeciile plgilor Infecii ale esutului celular subcutanat Infecii respiratorii Mastit Hidrosadenit Abcese Faringite Bronite Pneumonii Empieme Erizipel Suprainfeciile plgilor

Abcese

Faringite Bronite Pneumonii Sinuzite Otite Mastoidite

Rinofaringite Bronite Pneumonii otite

Infecii ORL

Infecii ale scheletului Infecii genito-urinare

Artrite Osteomielite Cistite

artrite Cistite Uretrite- Epididimite, prostatite, orhite Vulvovaginite- cervicita Meningita cerebro-spinal Septicemii Pericardite

Infecii generalizate

Meningite Septicemii Endocardite cu diseminri secundare i formare de abcese n diferite organe

Meningite Septicemii Endocardite Peritonite Infecii digestive Complicaii tardive nesupurative: reumatismul articular acut, glomerulonefrita acut poststreptococic Oftalmia

Infecii digestive Alte infecii

conjunctivite

Toxiinfecii

Sindromul pielii oprite Toxiinfecia alimentar Sindromul de oc toxic

carlatina

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic 1. Prelevarea produsele biologice prelevate depind de localizarea infeciei: infecii cutanate i subcutanate, infecii ORL puroi infecii respiratorii exudat faringian, sputa, lichid pleural infecii genito-urinare secteie uretral, secreie vaginal, urin. Infecii digestive materii fecale Infecii de sistem nervos lichid cefalorahidian.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic 2. Examenul microscopic direct - al frotiurilor colorate Gram

STAFILOCOCI Coci G(+) rotunzi aezai n ciorchine, dispui extracelular, pe un fond colorat n rou (celule, detritusuri celulare, fibrin) STREPTOCOCI Coci G(+) rotunzi sau ovalari dispui n lanuri PNEUMOCOCI Coci G(+) lanceolai dispui n diplo, ncapsulai NEISSERII Coci G(-) reniformi, n diplo, intracelulari

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI Diagnosticul direct bacteriologic 2. Examenul microscopic direct
streptococi

stafilococi

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI Diagnosticul direct bacteriologic 2. Examenul microscopic direct
gonococi

pneumococi

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic

3. Izolarea
Geloza-snge

STAFILOCOCI

STREPTOCOCI

NEISSERII

Gelozsnge

Geloz-snge

Gelozsnge Muller-Hinton incubare 24-48 ore la 37C n atm de CO2

Chapman Mediul Chapmanmediu selectiv Mediul Pike mediu selectiv

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI Diagnosticul direct bacteriologic 4. Identificarea - proprieti morfotinctoriale - proprieti de cultur
STAFILOCOCI
Geloz-snge colonii de 2-3 mm rotunde, regulate, bombate, pigmentate alb, auriu sau citrin, cu hemoliz: -hemoliz (hemoliz la cald) Staphylococcus aureus -hemoliz (hemoliz cald-rece) Staphylococcus epidermidis.

STREPTOCOCI
colonii mici, cu diametru de 1-2 mm (colonii punctiforme pentru

NEISSERII
Gonococii - colonii opace, gri, granulare, convexe, strlucitoare, de 1-2 mm. Meningacocii translucide, lenticulare, de aspect cenuiu, asemntoare picturilor de rou

Streptococcus pyogenes de grup A),

cu zon de hemoliz:
clar, transparent, total = hemoliz

streptococi

hemolitici (streptococi de grup A, B, C, G, E); incomplet, de culoare verde = hemoliz hemolitici streptococi -

(streptococi

viridans,

pneumococi,enterococi).

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic 4. Identificarea - proprieti de cultur

Cultur de Staphylococcus aureus i Staphylococcus epidermidis pe agar-snge

Streptococ beta-hemolitic

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic 4. Identificarea - proprieti biochimice

Teste
Testul catalazei Testul oxidazei Alte teste

STAFILOCOCI
+ Fermentarea manitolului manitol pozitiv S. aureus manitol negativ S. epidermidis

STREPTOCOCI
-

NEISSERII
+ +

Testul la optochin difereniaz pneumococul de ceilali streptococi hemolitici Repicarea primare pe culturii ABE

Fermentarea glucozei gonococi glucozei i maltozei, far prod de gaz meningococi

(agar-bil-esculin).

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic 4. Identificarea - proprieti biochimice
Testul catalazei Testul oxidazei

Cultur de Staphylococcus aureus pe mediul Chapman

Teste biochimice pentru identificarea gonococilor

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic 4. Identificarea - proprieti antigenice

STAFILOCOCI
Lizotipia tipizarea ajutorul bacteriofagilor cu

STREPTOCOCI
Reacii de precipitare pentru identificarea de grup a streptococilor (19 grupe ale lui Lancefield) Testul la bacitracina difereniaz Steptococcus le grup A de ceilali streptococi hemolitici (B, C, G, E) Testul CAMP Streptococii de grup B Testul Neufeld (de umflare al capsulei) pentru identificarea serotipurilor pneumococice 1,2, i 3.

NEISSERII
Reacia de Vincent-Bellot identificarea meningococice. precipitare pentru serotipurilor

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI Diagnosticul direct bacteriologic 4. Identificarea - proprieti antigenice
Testul la bacitracin Testul CAMP

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic 4. Identificarea proprieti de patogenitate Utile n diagnosticul infeciilor stafilococice - teste in vitro evideniaz producerea de enzime: coagulaza, dezoxiribonucleaza i fibrinolizina. testul coagulazei pozitiv Staphylococcus aureus - negativ Staphylococcus epidermidis i saprophyticus

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul direct bacteriologic

5. Antibiograma obligatorie n infeciile stafilococice, testarea se realizeaz la penicilin, oxacilin, gentamicin, clindamicin, eriteomicin/claritromicin, cotrimoxazol, vancomicin, ciprofloxacin. pentru pneumococi antibioticele de elecie sunt: in infeciile cu streptococi piogeni i neisserii tratamentul se face cu penicilin.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR PRODUSE DE COCI GRAM-POZITIVI I GRAM-NEGATIVI

Diagnosticul indirect serologic al infeciilor cu Streptococcus beta-hemolitic de grup A reacia ASLO biologic reacia Schultz-Charlton n diagnosticul scarlatinei - reacia Dick - reacie pozitiv (eritem peste 10 mm) denot lipsa Ac i susceptibilitate fa de infecia scarlatinoas.