Sunteți pe pagina 1din 16

Curs de Biofizic

V rugm: gndii!

4
Prof.dr. Cipriana tefnescu Disciplina de Biofizic i Fizic medical

Metode electrokinetice:
electroforeza, electrofocalizarea, imunoelectroforeza

I. Electroforeza i aplicaiile sale pentru diagnostic

10/8/2013

I.1.Principiul fizic al electroforezei

Metoda de separare prin migrarea particulelor ncrcate electric n cmp electric

Electrozi
-

- - - 10/8/2013

Fore care acioneaz asupra particulei n cmp electric:


+ + + + + Ff pH Ze + Fe _ _ _ _ _

Fe = Ff ZeE= 6rv

ZeE v= 6 r

Fe = ZeE Ff = 6rv

Explicarea termenilor: Fe = fora electric F = fora de frecare Ze = sarcina electric a particulei E = intensitea cmpului electric = viscositea mediului r = raza particulei v = viteza particulei

FACTORI DE DEPENDEN AI VITEZEI PARTICULEI :


sarcina electric (pH-ul mediului) raza particulei (deci dimensiunile) viscozitatea mediului intensitatea cmpului electric

10/8/2013

I.2.Dispozitivul

10/8/2013

pipet

deplasare tampon Electroforegrama:


l

Schema electroforezei

10/8/2013

11

II.3. Electroforeza proteinelor serice

10/8/2013

12

Electroforeza = migrare diferenial n cmp electric, deci posibilitate de separare a:


AMINOACIZILOR PEPTIDELOR PROTEINELOR ACIZILOR NUCLEICI

Electroforeza proteinelor serice


- separarea proteinelor n 5 fraciuni.

10/8/2013

14

Electroforegrama normal

10/8/2013

15

Benzile proteice separate pot fi cuantificate prin densitometrie sau fotocolorimetrie

Electroforegrama normal - valori:


Albumine Alfa-1 globuline Alfa-2 globuline Beta- globuline Gamma globuline 54-66 2-4 6-12 8-14 13-22

10/8/2013

17

Aplicaie: electroforegrama patologic (exemple):

10/8/2013

18

10/8/2013

19

Normal

Boala hepatic: pacient n vrst de 46 ani, diagnosticat cu ciroz hepatic, secundar abuzului cronic de alcool. Decedeaz 5 luni dup acest rezultat.

10

Normal Pattern inflamator acut: gamma diminuate, alfa2 mare

11

Electroforegram urinar

Electroforeza de urin este tehnica de electie pentru identificarea de proteinei Bence-Jones, la pacienii cu mielom multiplu. Acesta trebuie s fie ntotdeauna efectuata n lcomparatie cu electroforeza serica, astfel nct rezultatele sa poata fi comparate direct.

II. Alte tehnici electrokinetice:


Focalizarea

izoelectric Imunoelectroforeza
10/8/2013 24

12

Normal

Gammapatie policlonal Secundar unor boli cronice. Ex.: secundar sarcoidozei

13

Focalizarea izoelectric:

electroforez n gradient de pH, migrarea i separarea depinde doar de pI (punctul izoelelctric)

Principiul fizic: Dac un amestec de proteine este supus unei electroforeze n gradient de pH fiecare protein va migra pn n locul unde pH-ul mediului corespunde pH-ului su izoelectric (cnd proteina va avea sarcin global nul).

10/8/2013

27

10/8/2013

28

14

Imunoelectroforeza
Principiul fizic: 2 etape: 1. electroforeza 2. imunodifuzia.

10/8/2013

29

= ELECTROFOREZA + IMUNODIFUZIE = separarea unui amestec de antigeni elctroforeza n gel + amestec de anticorpi : Reacie Ag Ac +imunodifuzie

1) 2)

15

Imunoelectroforeza (rezultate)

Grosimea i poziia arcurilor de precipitare. Aplicaie frecvent: gamapatie monoclonal.

10/8/2013

31

16