Sunteți pe pagina 1din 8

ENZIME

E+S

[ES]

E+P

H2N

HOOC
substrat
Situs catalitic Complex enzima-substrat Produi de reacie Enzima apt s reia actul catalitic

Situs allosteric Enzima allosteric, protein oligomer

Efector allosteric

Situs catalitic

Inhibiia competitiv are loc n cazul n care inhibitorul prezint analogie structural cu substratul, competiionnd cu acesta pentru ocuparea situsului catalitic
substrat

H2N

HOOC

Inhibitor competitiv

Enzima inhibat prin legarea inhibitorului competitiv

Exemplu: enzima succinatdehidrogenaza n care acidul malonic este inhibitorul competitiv: acid succinic HOOC CH2 CH2 COOH substrat acid malonic HOOC CH2 COOH inhibitor competitiv Inhibiia necompetitiv este realizat de ageni care afecteaz conformaia general a enzimei i implicit situsul catalitic.
Un exemplu l costituie aspirina care inactiveaz enzima ciclooxigenaza implicat n biosinteza prostaglandinelor. Aspirina funcioneaz ca agent de acilare, blocnd gruparea -OH a unui radical serina aflat la situsul catalitic al enzimei. n acest mod enzima este total inactivat

Efectori allosterici. Acioneaz asupra enzimelor allosterice prin ataarea la nivelul situsului allosteric. Ataarea efectorului allosteric la enzim induce de obicei tranziii conformaionale care pot avea ca rezultat fie activarea fie inhibarea enzimei:

Enzim inactiv

Efector activator

substrat

Enzim activ

Efectori allosterici
Enzim inactiv

substrat

Enzim activ

Efector inhibitor

Inhibiia allosteric intervine n procesul de reglare biochimic a unor ci metabolice: E1 E2 E3 A B C D Atunci cand concentratia produsului final D a atins valoarea necesara pentru celul, D devine inhibitor allosteric pentru E1, inchizand calea metabolica: [ E1D ] A B E2 C E3 D

Un asemenea mecanism de reglare se numete feed-back i este propriu celulelor vii.

SEMNIFICAIA CLINIC A ENZIMELOR

Sngele, care constituie o oglind metabolic a ntregului organism, conine n plasm numeroase enzime. Din punctul de vedere al diagnosticului clinic, enzimele din snge pot fi clasificate n urmtoarele categorii: a. enzime specifice plasmei, care ndeplinesc rol fiziologic n plasm (pseudocolinesteraza, lipoproteinlipaza, enzimele implicate n coagularea sngelui); b. enzime secretate de glande exocrine care difuzeaz pasiv n plasm, fr a avea vreun rol fiziologic la acest nivel; exemple: amilaza, lipaza, tripsinogenul, care sunt enzime pancreatice , precum i fosfataza alcalin de origine biliar; nivelul acestor enzime n plasm va scdea n cazul n care apare atrofia glandelor productoare i va crete atunci cnd apar obstrucii ale canaliculelor excretoare sau cnd este afectat permeabilitatea membranelor celulelor productoare; c. enzime celulare, care acioneaz exclusiv n interiorul celulelor, ale cror substrate i cofactori nu se gsesc n plasm; nivelul seric al acestor enzime este sczut la subiecii normali i crete numai atunci cnd integritatea celulelor este afectat; exemple: LDH, CPK, transaminazele AST i ALT.
LDH lactat dehidrogenaza; CPK creatinkinaza; AST aspartat aminotransferaza sau glutamatoxalilacetat transaminaza (GOT); ALT alanin aminotransferaza sau glutamat -piruvat transaminaza (GPT)

Diagnosticul enzimatic poate fi precizat prin : a. dozarea unor enzime specifice de organ; b. determinarea izoenzimelor; c. dozarea n paralel a mai multor enzime.

Determinarea n ser a unor enzime poate da informaii i despre localizarea intracelular a leziunii, anumite enzime fiind specifice unui anumit organit.

Determinarea activitii enzimatice se poate face pe mai multe ci: -dozarea unui substrat n prezena enzimei i n condiiile optime pentru activitatea acesteia; se urmrete scderea concentraiei substratului n unitatea de timp; -dozarea produsului unei reacii enzimatice; creterea concentraiei produsului de reacie este direct proporional cu activitatea enzimatic; -dozarea unei coenzime care particip la reacia enzimatic; cu ct viteza de reducere sau oxidare a coenzimei este mai mare, cu att concentraia enzimei este mai mare.
Analizoarele clinice folosesc enzimele ca reactivi. colesteroloxidaza Exemplu : colesterol + O2 H2O2 + colesterol oxidat

peroxidaza
substrat incolor redus substrat colorat oxidat

Dozare colorimetric

ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) folosete enzimele ca indicatori. Chimia clinic modern a avut enorm de ctigat din mariajul enzimologiei cu imunologia. Anticorpii specifici pentru o anumit proteinantigen sunt cuplai cu un indicator enzimatic (peroxidaza sau fosfataza alcalin). Dup legarea enzimei la anticorpul cuplat cu antigenul, enzima catalizeaz formarea unui produs colorat dozabil a crui concentraie este direct proporional cu a enzimei, deci implicit a antigenului i a anticorpului. Prezentarea schematic a tehnicii ELISA pentru determinarea proteinelor din capsida virusului HIV (imunodeficienei): 1. proteina din capsida viral, n ser:

2. se prepar anticorpi IgG de iepure fa de proteina HIV:

3. se prepar anticorpi de capr fa de anticorpii de iepure:

4. peroxidaza

se ataeaz la anticorpii de capr:

Substrat enzimatic incolor 5. dozarea Produs de reacie colorat Dozare fotocolorimetric