Difuziunea si osmoza

Membrana celulara

Transportul transmembranar
substantele liposolubile - O2, CO2, steroizi - pot trece liber prin membrana substantele hidrosolubile glucoza, aminoacizi, ioni, apa necesita sisteme de transport pasiv sau activ
difuziune osmoza exocitoza / endocitoza transport activ

Difuziunea
moleculele se afla in solutie intr-o continua miscare Browniana
difuziunea = miscarea moleculelor de la o zona de concentratie mare la o zona de concentratie mica datorita miscarii Browniene a moelculelor

rata de difuzie este cu atat mai mare cu cat

diferenta de concentratie este mai mare temperatura este mai ridicata moleculele sunt mai mici moleculele se misca mai repede

Difuziunea

Relatia rata de difuziune marimea celulara

suprafata celulara este o caracteristica esentiala pentru organismele unicelulare, dar si pentru celulele unui organism multicelular

reprezinta o interfata critica dintre organism si mediu

Relatia rata de difuziune marimea celulara Demonstrare experimentala 1

Principiu
fenolftaleina coninut de cuburile de agar reacioneaz cu NaOH, schimbnd culoarea cuburilor n roz dimensiunea schimbarii de culoare indic ct de adnc a difuzat NaOH metoda permite determinarea ratei de difuzie i a relaiei dintre aceasta si raportul suprafa/volum

Relatia rata de difuziune marimea celulara Demonstrare experimentala 1

Materiale necesare
agar-fenolftalein 3% soluie NaOH 4% liniar lam de bisturiu erveele de hrtie pahar de sticl o bucat de faian

Relatia rata de difuziune marimea celulara Demonstrare experimentala 1

Metoda de lucru Pasul 1
din bucata de agar-fenolftalein tiai cuburi:
1 cub cu latura de 1 cm 6 cuburi cu latura de 2 cm 1 cub cu latura de 3 cm

Relatia rata de difuziune marimea celulara Demonstrare experimentala 1

Metoda de lucru
Pasul 2
turnai soluie de NaOH n pahar astfel nct nlimea coloanei de lichid s fie de cel puin 4 cm introducei cubul cu latura de 1 cm n pahar dup 3 minute, scoatei cubul i plasai-o pe o bucat de faian cu o lam de bisturiu tiai cubul n trei, cu dou tieturi paralele pe bucata care provine din mijlocul cubului msurai distana pe care culoarea cubului nu s-a schimbat si notai valorile n tabel calculai suprafaa total i volumul fiecrui cub de agar i notai valorile n tabel repetai procedura i cu cte un cub cu latura de 2 respectiv 3 cm

Relatia rata de difuziune marimea celulara Demonstrare experimentala 1

SupraLatura fata unei cubului laturi (cm) (cm2) Suprafaa total (cm2) Raport supraVolum fa / (cm3) volum (cm-1) Mrimea poriunii necolorate (latura) (cm) Volumul poriunii necolorate (cm3) Volumul poriunii colorate (cm3) Raportul volumului colorat / volum total

Relatia rata de difuziune marimea celulara Demonstrare experimentala 1

Relatia rata de difuziune suprafata celulara Demonstrare experimentala 1

Cubul Suprafaa unei laturi (cm2) Durata experimentului (min) Limea poriunii colorate (mm) Rata de difuziune (mm/min)

Relatia rata de difuziune durata de difuziune Demonstrare experimentala 2

Metoda de lucru
introducei 5 cuburi cu latura de 2 cm n soluia de NaOH dup 1 minut scoatei un cub i plasai-l pe o bucat de faian cu o lam de bisturiu tiai n trei cubul cu dou tieturi paralele pe bucata care provine din mijlocul cubului msurai distana pe care culoarea cubului s-a schimbat (pe o parte) si notai valoarea repetai procedura cu cte un cub la 2, 4, 8 respectiv 16 minute de la introducerea lor n soluia de NaOH

Relatia rata de difuziune durata de difuziune Demonstrare experimentala

Metoda de lucru
calculati rata de difuziune pentru fiecare cub
rata de difuziune = adncimea de penetrare a NaOH / durata experimentului
Durata experimentului (min) 1 2 4 8 16 Limea poriunii colorate (mm) Rata de difuziune (mm/min)

Difuzia printr-o membran selectiv permeabil

Principiu
o membran semipermeabil permite difuzarea solventului i moleculelor mici prin membran, fiind impermeabil pentru molecule mari

Difuzia printr-o membran selectiv permeabil

Materiale necesare
pungi de plastic lingur amidon soluie de tinctur de iod pahar de sticl ap distilat pipet

Difuzia printr-o membran selectiv permeabil

Metoda de lucru
intr-o pung de plastic punei o lingur de amidon i dizolvai n 25 ml ap legai gura pungii umplei pana la jumtate paharul de sticl cu ap i adugai zece picturi de soluie de iod plasai punga n pahar astfel nct s fie complet imersata ateptai 60 minute i notai observaiile
Culoarea la nceput Soluia din pahar Culoarea dup 60 minute

Soluia din pung

Osmoza
este o forma de difuziune difuziunea apei printr-o membrana semipermeabila reprezinta miscarea moleculelor de apa dintr-o zona de concentratie mare spre o zona de concentratie mica printr-o membrana semipermeabila
rata de osmoza este proportionala cu concentratia solvitului
cu cat concentratia solvitului este mai mare cu atat rata de osmoza va fi mai mare

Osmoza
hematiile sunt un bun exemplu pentru a demonstra osmoza
apa se misca de o parte si de cealalta a membranei ca urmare a modificarii concentratiei in NaCl a fluidului in care se gasesc hematiile

concentratia in NaCl a hematiilor este de 0,9%

fluidele care au aceeasi concentratia de NaCl vor fi considerate izoosmotice/izotone cu hematiile fluidele care au concentratia de NaCl mai mare decat hematiile vor fi considerate hiperosmotice/hipertone fata de hematii

fluidele care au concentratia de NaCl mai mica decat hematiile vor fi considerate hipoosmotice/hipotone fata de hematii

Osmoza
daca concentratia de NaCl a fluidului in care se gasesc hematiile este > 0,9% apa va iesi din hematii in fluid hematiile se zbarcesc
daca concentratia de NaCl a fluidului in care se gasesc hematiile este < 0,9% apa va patrunde din fluid in hematii hematiile se umfla si se sparg = hemoliza

rezistenta osmotica = sensibilitatea hematiilor la modificarile presiunii osmotice

Masurarea rezistentei osmotice a hematiilor

Principiu
rezistena osmotic a hematiilor se determin prin expunerea acestora n soluii hipotone de NaCl de concentraie diferit hemoliza se poate observa sub forma colorrii n roz a supernatantului dupa centrifugare

Masurarea rezistentei osmotice a hematiilor

Materiale necesare
stativ cu 12 eprubete soluie de NaCl 0,5% (0,5 g NaCl n 100 ml ap) ap distilat snge de berbec defibrinat centrifug

Masurarea rezistentei osmotice a hematiilor

Metoda de lucru
se iau 12 eprubete serologice i se aeaz ntr-un stativ se numeroteaza eprubetele n ordine invers de la 25 pn la 14 se pune n fiecare eprubeta attea picturi de soluie NaCl 0,5% ct este cifra corespunztoare eprubetei (n prima 25, n a doua 24, etc.) se completeaz cu ap distilat astfel incat numrul de picturi de lichid din fiecare eprubeta s ajung la un total de 25 se amestec coninutul eprubetelor i apoi se adaug n fiecare cte o pictur de mas eritrocitar se amesteca din nou se centrifugheaz la 2000 turaii pe minut timp de 3 minute

Masurarea rezistentei osmotice a hematiilor

Metoda de lucru
calculai concentraia soluiilor din eprubete

Nr.
Conc. Hemoliza

25

24

23

22

21

20

19

18

17

16

15

14

Masurarea rezistentei osmotice a hematiilor

Metoda de lucru
notai prima eprubeta n care apare supernatant roz liza hematiilor cu rezistenta cea mai mica = rezistenta minima la concentraii mici de NaCl toate hematiile vor fi hemolizate
supernatant colorat intens, cu sedimentul in cantitate redus i de culoare glbuie
conine numai stroma hematiilor

notati eprubeta in care obtineti supernatantul descris anterior = rezistenta maxima a hematiilor

Masurarea rezistentei osmotice a hematiilor

Valori normale
rezisten osmotic minim: 0,44% rezisten osmotic maxim: 0,30-0,32%

Fragilitate osmotic crescut = rezisten osmotic sczut

scderea raportului dintre suprafa i volum (sferocitoz, ovalocitoz) modificarea structural a membranei hematiilor (anemie hemolitic autoimun, mbtrnirea hematiilor de ex. prin reducerea turnoverului)

Fragilitate osmotic sczut / rezisten osmotic crescut:

creterea raportului dintre suprafa i volum

Intrebari experiment 1
Cum depinde raportul suprafa/volum cuburilor de lungimea laturii? Cum depinde rata difuziei de suprafaa cubului?
De ce este limitat mrimea celulelor? De ce au multe organite celulare membrane cutate / plicaturate?

al

Intrebari experiment 2

Explicai relaia dintre distana de difuziune i durata experimentului!

Intrebari experiment 3
Bazat pe observaiile fcute, care dintre substane a difuzat, iodul sau amidonul?
Sacul de plastic este permeabil pentru aceste substane? Sacul de plastic are permeabilitate selectiv?

Intrebari experiment 5
Care este rezistenta osmotica minima a eritrocitelor studiate ?
Dar rezistenta osmotica maxima ?