Sunteți pe pagina 1din 34

Partea I

Capitolul X. BIODISPOZITIVE I BIOSENZORI

10.1. Introducere 10.1.1. Introducere n domeniul bio-engineering


ntr-o prim etap dorim s subliniem importana domeniului bioingineresc, n contextul actual. Vom porni de la cteva motive de ordin social i economic. Se tie c populaia globului este n cretere numeric. n diverse rapoarte sociologice se specific o cretere a mediei de vrst. n uropa, se progno!ea! c pn n anul "#"# peste $#% din populaie va avea o vrst mai mare de &# de ani, n timp ce procentul persoanelor cu 'andicap va tinde spre "#%, (&&). ste de la sine neles c rata bolilor cronice va fi n continu cretere. n sc'imb, numrul limitat de medici nu va mai putea satisface o cerere att de numeroas. Serviciile de sntate public au reacionat la acest fapt. n cadrul unui program de sntate public internaional (&&, &*), s-au lansat trei direcii principale de lucru n urmtorii !ece ani+ ,-. sporirea accesului individual la actul medical decizional, prin intermediul /telemedicinei0 i /internetului0. 1acientul se poate informa despre boala sa, se autourmrete n timpul tratamentului ,cu a2utorul unor biodispo!itive, biosen!ori. i poate fi monitori!at /de la distan0 de ctre medic. ,". creterea rolului geneticii n depistarea precoce, prevenirea i corectarea unor boli. ,$. Electronic healthcare sau orientarea noilor te'nologii electronice 3 micro i nano 3 spre ngri2irea sntii. n scopul ndeplinirii acestor trei de!iderate se va lucra intens n urmtoarele arii, (&4)+ a. 5elemedicina 3 se refer la crearea unei reele de comunicaii de tip 6nternet, ntre+ unitatea medical, unitatea farmaceutic i pacient. 7cest sistem poate servi la ngri2iri medicale la domiciliul pacientului, permite consultaii profesionale de la distan, ori re!olv ca!uri de urgen pentru

pacienii aflai n locuri i!olate. b. 7nali!e biologice. n acest sens, se dorete reali!area unor biosen!ori ce pot fi utili!ai direct de ctre pacient. 8omentan exist sisteme de monitori!are individual a glicemiei i ureei. 9in punct de vedere al plasrii biodispo!itivelor, exist dou metode de abordare+ ,-. metode invazive (in vivo), cnd biodispo!itivul este implantat n corpul pacientului ,aici elementul c'eie este gsirea de materiale biocompatibile.: ,". metode ne-invazive (in vitro), cnd se prelevea! snge sau alt biolic'id ,printr-o puncie spre exemplu., iar apoi anali!a se efectuea! n afara corpului. c. 8onitori!area pacienilor 3 are n vedere totalitatea metodelor de transmitere n timp util, a tuturor parametrilor msurai cu a2utorul biosen!orilor, spre un centru medical deci!ional ,fi!ic sau virtual.. 6nterpretarea anali!elor se va face fie de ctre o persoan fi!ic, fie de ctre un soft;are speciali!at. d. <rearea de dispo!itive implantabile pentru+ regenerarea funciei unor organe, tratamentul bolilor cronice, nregistrarea de semnale biologice, prote!e pentru diferite organe. e. <'irurgie cu inva!ie minim. 5e'nica laparoscopic a minimi!at mult inva!ia n actul c'irurgical. =inalul acestei curse ar fi intervenia c'irurgical la nivel celular. 7cest domeniu repre!int o cerere continu pentru industria de micro- i nano-componente electronice. f. Succesul geneticii, care este condiionat de existena unor nanoinstrumente i nano-dispo!itive, necesare manipulrii materialului genetic. 7cum cteva detalii de ordin economic. n ->>&, se estima valoarea desfacerilor de produse medicale pe plan internaional la -$#?@ (&4). 9intre acestea, microsistemele din aparatura medical valorau -"#8@ (&4). 7sta nseamn c microsistemele sunt pre!ente n ma2oritatea aparatelor medicale. 1entru produse n valoare de *$?@ a re!ultat urmtoarea repartiie, (&4)+ $*?@ pentru instrumentar medical i c'irurgical, ->?@ pentru anali!e de snge efectuate cu biosen!ori, -"?@ pentru sisteme furni!oare de medicamente, ".A?@ pentru aparate necesare bolilor cardiace, ".A?@ pentru prote!e auditive. Se observ c piaa biosen!orilor este o provocare pentru micro- i nanoelectronic. 7ici nu mai exist delimitri clare ntre domeniile+ electronic, biologic, c'imic, fi!ic. n final, toate elementele componente ale biosen!orului sunt integrate pe un singur cip sau pe un multicip 'ibrid (&4). n continuare se va descrie principiul sen!orial din lumea vie. nelegnd bine aceste mecanisme, proiectanii de biosen!ori au cutat s aduc ct mai aproape de natur principiul de funcionare al sen!orilor.

10.1.2. Principiul senzorial n lumea vie


?iosen!orii au fost reali!ai dup o atent observaie a receptrii substanelor n lumea vie. Ba scar microscopic, vorbim despre recepionarea substanelor la nivel celular. <uplarea unor substane de celule provoac sc'imburi de sarcini ionice, eliberare de substane semnali!atoare etc. 7ceste CimpresiiC sunt transmise mai departe pe cale bioc'imic. S vedem n continuare cum captea! o celul vie doar o anumit substan din mediul ncon2urtor. <elulele vii au posibilitatea s se adapte!e la modificrile mediului exterior cu a2utorul receptorilor. Deceptorul const dintr-o protein ce este legat la membrana celulei. l posed o nalt afinitate de a se cupla doar cu anumite substane ce pot fi+ 'ormoni, en!ime, anticorpi, produi de metabolism, ioni - denumite ligani. En receptor este speciali!at strict pe o substan. Spre exemplu, n sistemul nervos uman s-au evideniat dou tipuri de receptori pentru neuro'ormonul acetilcolin+ nicotinici - constau n proteine cu proprieti ionofore i muscarinici - receptori cuplai de proteina F i ba!ai pe sistemul mesagerilor secundari, (&>, *#).
8ediu extern celular Bigant ?iolic'id ,purttor de ligani.

Ga
H

1rotein - Deceptor

IH
8ediu intern celular 8embran celular Fig. 10.1. <aptarea unui ligant n receptorul celulei.

Begarea ligantului de proteina receptor cau!ea! sc'imbri structurale ale receptorului. 7ceste modificri permit desc'iderea temporar a unui canal prin membrana celulei, pentru ionii cu mobilitate mare+ Ga H, IH ,ve!i fig.-#.-.. 6nfluxul de ioni po!itivi GaH, IH, modific puternic potenialul membranei ,c'iar o singur legtur produce o cretere detectabil de

potenial.. Se obine astfel amplificarea substanial a semnalului incident. 9up transmiterea semnalului, cel mai adesea, complexul receptor-ligant se degradea! n interiorul celulei. 9e aceea, regenerarea unui nou receptor n membran necesit ceva timp. <ele mai simple proteine receptor utili!ate n domeniul biosen!orilor, au fost en!imele.

10.1.3. e la celula vie la biodispozitiv


9e multe ori /te'nicaC a mprumutat principii de funcionare din principii similare biologice. xist dispo!itive electronice ce pot fi considerate dualele unor simuri+ fototran!istorul CsimteC semnalul luminos i-l transmite amplificat, iar dispo!itivele acustice cu cristal pie!oelectric ec'ivalea! cu celulele receptoare de sunet, etc. ?iosen!orii sunt biodispo!itive sau pri ale acestora, care recepionea! substane. 9eci clasa biodispo!itivelor este o clas mai larg, care o include pe cea a biosen!orilor. 9efiniie+ Vom nelege prin biodispozitiv un ansamblu de pri electrice, biologice, mecanice, optice 3 ca elemente active 3 ,traductoare, amplificatoare, de caracteri!are, etc. i a unor elemente de interconectare, capsule, terminale, microcanale de alimentare cu biolic'id 3 ca elemente de conectare cu mediul extern. ?iodispo!itivul poate avea funcii complexe. 7tunci cnd el este construit doar pentru a detecta o anumit substan, poart numele de biosenzor. 9ar exist biodispo!itive create i n alte scopuri+ caracteri!area unor materiale biologice, furni!area unui medicament, sau detectarea multor substane ,biodispo!itiv de tip multisen!or. combinat cu furni!area de substane, ve'icularea i manipularea de substane, esuturi, etc. En exemplu de biodispo!itiv este cel utili!at pentru furni!area insulinei la diabetici. 7cest dispo!itiv conine ca elemente active+ structuri traductoare care detectea! nivelul glicemiei i o micropomp pentru insulin, (&4). n continuare ne vom focali!a atenia mai mult asupra biodispo!itivelor ce au ca unic funcie recepionarea de substane 3 biosen!orii.

10.2. !iosenzor - de"ini#ii$ clasi"ic%ri


9efiniie+ ?iosen!orul const n cuplarea spaial ntre un substrat biologic activ (receptorul) imobili!at pe un traductor de semnal (dispozitiv

electronic) i un circuit electronic de amplificare. 5oate aceste elemente integrate ntr-o singur capsul poart numele de biocip. n figura -#." este pre!entat sc'ematic structura bloc a unui biosen!or. J problem specific a biosen!orilor este imobilizarea receptorilor pe suprafeele dispo!itivelor electronice. 9oar cu titlu informativ, dm ca exemple cteva metode+ a. adsorbia biomoleculelor pe suprafee ,ce utili!ea! forele de ade!iune, iar alteori forele de atracie electrostatic.: b. captarea biomoleculelor n geluri din polimeri ,fixarea moleculelor este mai sigur.: c. crearea unor reacii c'imice prin care biomoleculele se leag covalent de elementele traductorului. J alt problem specific este refacerea substratului biologic ,dup consumarea complexului receptor-ligant. pentru o nou msurtoare. 5impul de regenerare al receptorului este un parametru important n alegerea unui biosen!or de ctre un utili!ator.

Fig. 10.2. 1re!entarea sc'ematic a unui biosen!or.

< 5D79E<5JD 1 5 ,96S1JK656V J B <5DJG6<. D

Semnal electric ,6, V.

<ircuit electronic de amplificare

Substane purttoare de diveri ligani

Substana purttoare a diverilor ligani, poate fi+ ser, limf, snge: generic o vom denumi biolichid. Spre exemplu n snge exist o multitudine de ligani. Deceptorii au rolul de a extrage din acel amestec o singur substan, pentru care au afinitate. 7ceast substan, pentru anali!a creia a fost conceput biosen!orul, o vom numi analit. Spre exemplu dac se dorete msurarea concentraiei de gluco! din snge, se folosete ca receptor en!ima FJ9 ,gluco!oxida!., iar analitul este gluco!a. 8odificrile ce au loc n biosen!or la reinerea analitului, pot fi+ modificarea grosimii unui strat, sc'imbarea indicelui de refracie, a temperaturii, modificri n absorbia luminii, creterea sarcinii electrice,

modificri de potenial electric sau de curent electric. <lasificarea biosen!orilor. -. iosenzori de afinitate. 7nalitul nu se modific c'imic n timpul msurtorii. l doar se leag de receptor. Ba sfrit el poate fi ndeprtat c'imic sau prin splare. ". iosenzori de metabolism. 7ici substratul biologic se consum printr-o reacie c'imic cu analitul. Se formea! un nou produs. Starea iniial se poate reface dup completa consumare a analitului. xemplu+ se dorete detectarea microorganismului LelMcobacter 1Mlor n substana purttoare suc gastric. n metabolismul su, acest microb produce GL $ ,amoniac.. 7adar, sen!orul nu va detecta microbul n sine, ci concentraia de amoniac. $. Imunosenzori. 9etectarea substanelor de tip antigen ,7g. se face cu a2utorul anticorpilor ,7c., pe principiul Clact-c'eieC. 7nticorpii sunt proteine cu molecule n form de N ,numite imunoglobuline.. n vrfurile N-ului sunt doar dou locuri, unde se poate leaga un singur tip de antigen. 7ceti anticorpi sunt produi de organism ca rspuns la o anumit substan strin ,antigen., pe care nu o poate elimina prin fagocito! i creia, n ultim instan, i Cncurc planurileC, legndu-se de ea+ 7cH7g 7c7g. xemplu+ n referina (") se descrie un biosen!or cu material pie!oelectric acoperit cu anticorpi pentru <andida 7lbicans ,microorganism din familia fungilor.. n timp de aproximativ o or celulele receptoare au captat ntre -#& i -#4 celule de <andida 7., avnd ca re!ultat scderea frecvenei de re!onan a cristalului pie!oelectric cu #,A...-,OPL!. O. !enzori biomimetici. <u a2utorul acestor sen!ori se detectea! semnale fi!ice ,sunet, stres mecanic, lumin. pe ba!a interaciunii lor cu substratul biologic activ ,receptorul..

10.3. &tructura 'i "unc#iile traductorilor


5raductorii trebuie s converteasc n mrimi electrice parametri generali ca+ entalpia de reacie ,termistorul., modificri ale masei depuse ,cristal pie!oelectric., grosimi ale unor straturi transparente ,dispo!itive optoelectronice., concentraii de substane sau ioni ,traductoare 6S ..

10.3.1. (raductori termici


Ba sen!orii de metabolism exist reacii c'imice ntre analii i anumii receptori en!imatici cu dega"are # absorbie de c$ldur$. n acest ca! nu se

msoar cantitatea analitului, ci variaia de temperatur, 5. 5abelul -#.pre!int entalpiile molare, L, a ctorva reacii catali!ate de en!ime.
(abelul 10.1. ntalpiile molare a ctorva reacii catali!ate de en!ime.

)nzima receptor <atala! <'olesterol-oxida! ,<J9. Fluco!-oxida! ,FJ9. Erea!

*nalit L"J" <'olesterol Fluco! Eree

- + ,-./mol0 -##.O A".> 4# &.&

n!ima-receptor se imobili!ea! pe sticl poroas pe suprafaa unui termistor. Se imersea! totul n soluia de msurat. 5ermistorul 2oac rolul traductorului i furni!ea! 5. 9e aici re!ult numrul de moli de analit, conform relaiei+
L = < 5

,-#.-.

unde Q este numrul de moli de analit, < este cldura molar a dispo!itivului ,ce se determin anterior prin msurtori calorimetrice.. 9e!avanta2ul principal este sc'imbul de cldur ce apare ntre diversele componente ale experimentului, ceea ce va induce erori mari n evaluarea lui 5. Jptimi!rile vi!ea! i!olarea calorimetric a biosen!orului ntr-un reactor.

10.3.2. (raductori optoelectronici


<u a2utorul traductorilor optici se poate indica variaia unor parametri precum+ coeficient de absorbie a luminii, lungime de und, indice de refracie, grosimi ale unor straturi transparente. <a exemplu, n figura -#.$, este pre!entat principiul de detectare a albuminei serice cu un sen!or optoelectronic, ("). ?iolic'id
purttor de analit 7 7 7 7 B 9

Dec.

8embrana de Dec. bromocresol

Dec. Dec. Dec. Dec.


=otodioda

Fig. 10.3. 1rincipiul de detectare a albuminei serice cu un sen!or optoelectronic.

Deceptorul a fost imobili!at pe o membran de bromocresol transparent. <urgerea biolic'idului purttor de albumin a determinat captarea ei pe receptori. <reterea grosimii stratului de analit se face ntre o surs de lumin ,led. i un detector de lumin ,fotodiod.. <urentul prin fotodiod scade pe msur ce crete grosimea stratului de albumin depus pe receptor.

10.3.3. (raductori piezoelectrici


1rincipiul pe care se lucrea! aici urmrete scderea frecvenei de re!onan a unui cristal pie!oelectric cnd se absoarbe un material strin la suprafaa sa i-l comprim, (*-). <ristalul este acoperit cu un material receptor. fectele !gomotului electric au putut fi nlturate prin utili!area de cristale perec'e. 7ceti traductori au fost utili!ai pentru detectarea+ GJx, <Jx, LH, microorganisme, (").

10.3.1. (raductori electroc2imici


Deaciile electroc'imice se produc la interfaa electrod 3 soluie, iar reaciile biologice cu transfer de electroni se produc la interfaa en!im 3 soluie. Se utili!ea! poteniometria, cnd se determin variaia potenialului electric al unui electrod receptor n funcie de concentraia ionilor de analit dintr-o soluie. 8etoda tradiional de detecie a unor ioni ntr-o substan purttoare folosete 6S ,Ion !elective Electrodes.. 9in punct de vedere electronic 6S poate fi privit ca o surs de tensiune electromotoare ,de sute de milivoli pentru biosen!ori. i cu o impedan de ieire mare ,pn la sute de 8., (*"). 8asa electric este soluia, iar ieirea sursei este electrodul de referin. 9ac concentraia ionilor de analit din soluie se modific, atunci potenialul electrodului sensibil la aceti ioni ,receptorul. se modific dup relaia lui %erst, ,>.4.. Spre exemplu, n ca!ul pL-ului ,concentraia ionilor de LH., o scdere a acestuia cu o unitate, determin creterea tensiunii furni!ate cu circa AAmV, (*"). 8uli biosen!ori electroc'imici folosesc amperometria& n acest ca! au loc reacii c'imice de oxido-reducere cu transfer de electroni n medii electrolitice. n domeniul biosen!orilor, aceast te'nic a nsemnat detectarea unui analit prin msurarea concentraiei unui produs de metabolism, mult mai uor de determinat. 1entru aceasta se folosesc electro!i cu en!ime receptor ae!ate n unul sau mai multe straturi. 1entru msurarea concentraiei de gluco! se folosete en!ima FJ9 care accelerea! foarte mult procesul de oxidare al gluco!ei, n urma cruia

re!ult i L"J". ste mult mai uor s se msoar concentraia de L "J", dup care se calculea! din reacie concentraia de gluco!. <urenii care se stabilesc n aceste straturi sunt de natura unor cureni de difu!ie, ("). <urentul, 6lim este proporional cu concentraia substanei care se determin mai uor, ci, ,iRL"J", n exemplul anterior cu gluco!a., conform modelului ,>.-O., ,>.-A..

10.3.3. (raductori biologic intac#i


1entru determinarea unui analit, aceste traductoare folosesc chemoreceptori direct din lumea vie. Spre exemplu, s-a reali!at un receptor de acetilcolin, utili!nd organul electric al petelui 5orpedo i un sen!or capacitiv, ("). <nd biolic'idul purttor coninea acetilcolin n concentraie mrit, cretea tensiunea electric furni!at de traductorul organic al petelui, ceea ce ncrca sen!orul capacitiv. S-au putut face msurtori n domeniul -....-##molSl concentraie de acetilcolin n biolic'idul purttor prin te'nici de <-V-metrie. 7lt direcie de lucru este cuplarea unor celule receptoare vii cu una sau mai multe fibre nervoase. Stimularea unor celule olfactive sau gustative cu un anumit analit conduce la generarea unui impuls nervos detectabil ctre neuronii din fibr. <a exemplu, s-a reali!at un sen!or pentru determinarea concentraiei de aminoaci!i, utili!nd drept traductor organul olfactiv din antenulele crabului <alinectes Sadipus. 7ntenulele, legate de o unic fibr nervoas, au fost conectate cu o sond de platin. Stimularea receptorilor olfactivi cu aminoacidul B-glutamat, n concentraia #,#-...-mmolSl, a creat impulsuri nervoase msurabile, cu valori cuprinse ntre -#--###V. n plus, s-a obinut o linearitate bun n aceast gam de msur, ("). Jbservaie+ 7u fost amintite i exemplificate o serie de substane ca+ acetilcolina, dopamina, ioni de GaH, <aH, IH. le particip ca neurotransmitori la propagarea impulsului nervos. 9e reinut, c transmiterea unui impuls nervos se face pur electric+ prin deplasare de sarcin electric. 9atorit acestei comportri CelectroniceC a sistemului nervos uman, s-a de!voltat o ramur nou n tiinele biologice+ neuroelectrofiziologia, (").

10.1. ispozitive !io-F)(

1rin ?io-= 5 vom nelege totalitatea dispo!itivelor biologice ce conin ca element traductor activ un tran!istor cu efect de cmp. le pot fi biosen!ori ,precum tran!istoarele 6S= 5, G= 5, etc. sau dispo!itive de testare i investigare a materialelor biologice, sau dispo!itive create n alte scopuri.

10.1.1. (ranzistoarele I&F)(


5ran!istoarele 6S= 5 ,Ion !ensitive 'ield Effect (ransistor. au derivat direct din 6S ,electro!ii sensibili la ioni.. 9in punct de vedere constructiv, dispo!itivul 6S= 5 este un 8JS= 5, pentru care receptorul - un electrod ce se!i!ea! doar anumii ioni ,de exemplu de <a H, IHT. - este un metal special ,1t, 1d, 6r.. Degiunea porii este imersat ntr-o soluie biologic cu analit. 8odelarea se face analog cu cea a 8JS-= 5-ului, doar c tensiunea de poart VF depinde de concentraia ionilor de analit conform relaiei lui Gerst. J categorie aparte o repre!int tran!istoarele 8 8-= 5 ,)E)brane-'E(., la care electrodul receptor este o membran organic depus n dreptul porii tran!istorului, i care captea! selectiv sarcina ionic. n figura -#.O. este pre!entat structura i simbolul ales pentru tran!istorul 6S= 5.
F ?iolic'id cu ioni de analit 6S

S nH

. . . . . ." . . .$ . O ..

SiJ S Si G

9 nH F 9

<anal de electroni S p-substrat S? ,Substrat.

S?

,a.

,b.
b. Simbol.

Fig. 10.1. a. Structura tran!istorului 6S= 5:

5ensiunile aplicate+ VSRVS?R#, VFU# i V9U# se menin constante. <nd concentraia ionilor de analit crete, se modific diferena de potenial metal-semiconductor, conform cu relaia ,>.4.. 9eci varia! V =? i n consecin potenialul porii. De!ult o mbogire a canalului n electroni,

iar n final o cretere a curentului de dren. =luctuaiile concentraiei de ioni de analit se traduc prin fluctuaii ale curentului 69. 7doptnd pentru curentul de dren al tran!istorului 6S= 5 modelul simplificat n regim cvasiliniar ,A.A"., plus efectul tensiunii de poart asupra mobilitii purttorilor din canal, ,A.&-., n care negli2m termenul V9S", la tensiuni V9S mici, avem+
69 = ( VFt V5 ) V9S - + F ( VFt V5 )

,-#.".

5ensiunea de poart total, VFt este suma tensiunii, VF, aplicat de la o surs extern i a potenialului de electrod VW8 , dat de relaia lui Gerst+
VFt = VF + # + D5 ln c 7 !=

,-#.$.

1rin nlocuirea relaiei ,-#.$. n relaia ,-#."., re!ult dependena curentului de dren, 69, de concentraia de analit, c7+
D5 VF V5 + # + ln c 7 V9S != 69 = D5 - + F VF V5 + # + ln c 7 !=

,-#.O.

Jbservaie+ Ge dorim o sensibilitate curent-concentraie de analit ct mai mare. Delaia ,-#.O. arat c este mai favorabil un regim de lucru la tensiuni VFt mici, astfel nct s se poat negli2a efectul atenurii mobilitii sub influena cmpului electric transversal. De!ult astfel, o dependen logaritmic curent-concentraie. n plus, dac s-ar lucra sub prag, unde 6 9 depinde exponenial de VF ,ve!i relaia A.>O., prin compunere cu relaia lui Gerst ar re!ulta o dependen polinomial curent-concentraie, net superioar funciei logaritmice. Jbservaie+ 6S= 5-urile care determin concentraia ionilor de L H se mai notea! prin pL-= 5-uri, innd cont c pLR-lg (cLH). J soluie apoas este neutr cnd pLR*, moment n care concentraia ionilor de LH o egalea! pe cea a ionilor negativi de JL-. Soluia apoas este acid pentru pLX* i ba!ic pentru pLU*. 1entru electrolitul complex al organismului uman neutralitatea are loc de asemenea cnd cLHRcJL-, dar aceasta se ntmpl la temperatura de $*#< pentru un pLR&,*A. Sngele are pLR*,$&, deci se comport slab ba!ic. <u acest gen de tran!istor s-au fcut experimente pentru determinarea concentraiei ionilor de LH i IH. Gational <ompanM Yapan a reali!at un

biosen!or integrat pe cip de tipul Silicon Jn Sapp'ire, coninnd un I H= 5 cu membran de FJ9 i dou LH-= 5 cu membran de urea!. <u acest biosen!or se pot face simultan anali!e de gluco! i uree n snge ("). 7lt exemplu. S-a reali!at un dispo!itiv 6S= 5, ca sen!or de metabolism, ce msoar concentraia de amoniac, ca n figura -#.A, ("). Deceptorul care sesi!ea! GLO- este 1aladiu ,1d.. l este depus peste oxidul de poart. Se constat o cretere ma2or a sensibilitii biosen!orului dac peste 1aladiu se depune un strat de 6ridiu ,6r.. Se obine o cretere a tensiunii V F de la "#mV n ca!ul electrodului de 1d, la O##mV n ca!ul acoperirii 1d cu 6r, cnd concentraia de GLO- este O##ppm. 9e reinut aceste dou materiale+ paladiu, iridiu, n construcia biosen!orilor.
VF biolic2id 6r 6r 6r 6r 6r S Fig. 10.3. 9ispo!itiv 8JS pentru detectarea ionului de amoniu. nH GL$

............

1d SiJ"

9 nH

p-substrat S?

En alt dispo!itiv specific msurtorilor de poteniometrie este pre!entat n figura -#.&. Scopul acestui ?io-= 5 este caracteri!area electric a unor biolic'ide, (").
VF VS Semiconductor organic 69,7. 4# &# Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Suport i!olator V9 O# "# # #,- #," #,$ #,O #,A

,a.

,b.

VF,V.

Fig. 10.4. a. 9ispo!itiv ?io-= 5 microelectroc'imic: b. <aracteristica 69-VF msurat.

1rimul dispo!itiv microelectroc'imic studiat deinea semiconductori organici ,polimeri. depui ntre surs i dren. Se obineau caracteristici ca de diod. 9ac n plus intervenea al treilea electrod - poarta, se obineau caracteristicile din figura -#.&.b., pentru semiconductorul organic din polianilin. <a i la tran!istoarele 8JS, s-a constatat c n vecintatea CpraguluiC, re!istena ntre surs i dren varia! cu peste & ordine de mrime la variaii foarte mici ale tensiunii V F ,cu #,-...#,$V.. Spre deosebire de tran!istoarele pe Siliciu, la tran!istoarele ?io-= 5 de acest gen, dup atingerea unei valori maxime curentul scade. 7cest dispo!itiv este potrivit pentru studierea proprietilor diverselor materiale biologice. 9ac se nlocuiete semiconductorul organic cu o soluie neutr, n care se crete concentraia unui neurotransmitor ,adrenalin, noradrenalin, acetilcolin, dopamin, serotonin etc. se pot obine caracteristici 6 9-VF, furni!oare de parametri de model. 8odelele tran!istoarelor 8JS pot fi extinse i aici, pe anumite subdomenii de msur. 7cest lucru permite extragerea unor parametri ec'ivaleni ,tensiune de prag - concentraie de prag, tensiune de nivel mare - concentraie de neurotransmitor de nivel ridicat.. 7ceti parametri ar putea fi deosebit de utili n stabilirea unor concentraii limit ntre care se face transmiterea impulsului nervos.

10.1.2. (ranzistoare )5-F)($ I6-F)($ 6icrobial-F)(


9enumirea de 6S= 5 este generic. 1rin tran!istoare 6S= 5 trebuie s se neleag doar acele = 5-uri care determin concentraia ionilor ntr-o soluie pe ba!a unui electrod selectiv prin metoda poteniometric. 9in aceast clas de tran!istoare au derivat i 68uno-= 5, G!ime-= 5, 8icrobial-= 5, a cror denumire sugerea! tipul relaiei analit-receptor. 9e aceea, termenul generic de C io-'E(C acoper orice tran!istor cu efect de cmp folosit ca element traductor n domeniul biosen!orilor. 8. Foto' i colaboratorii si, (*$) a reali!at un sen!or pentru acetilcolin cu un tran!istor 6S= 5. Deceptorii au fost fixai pe poarta tran!istorului cu a2utorul unei membrane de polivinilbutirat. Begarea acetilcolinei de receptori n concentraie de #,-....-#molSl a produs creteri detectabile ale potenialului porii ,!eci de mV.. 5amMa i colaboratorii, (*O) au reali!at un sen!or de metabolism cu tran!istor ?io-= 5 pentru determinarea alcoolului. 8icroorganismul Fluconobacter, care prin metabolismul su produce alcool, a fost prins ntro pelicul de arginat de calciu pe poarta tran!istorului. 7stfel de dispo!itive fac parte din categoria aa numitelor )icrobial-'E(-uri.

I)muno-'et-uri sunt tran!istoare cu efect de cmp, a cror poart este acoperit cu o membran ce conine anticorpi. n ->4*, 9. ?egreld, (*A) a reali!at o astfel de prob pentru detectarea imunoglobulinei umane 6gF cu a2utorul albuminei. S-au detectat concentraii de analit de ordinul -# ---..-#-* molSl, (", *A). 7vanta2ul ma2or al unor astfel de dispo!itive este recepionarea sigur doar a analitului dorit ,deoarece se lucrea! pe principiul lact-c'eie.. 9e!avanta2ele sunt legate de dificultatea reali!rii unei membrane receptoare perfect i!olatoare, dar i imuno-responsiv i suficient de subire pentru a transmite creterile de potenial cau!ate de cuplarea 7g-7c, la suprafaa semiconductorului. <ea mai consacrat aplicaie n medicin a metodei poteniometrice a fost msurarea ureei sangvine. Ereea, n pre!ena catali!atorului urea!, d anumii ioni ca produi de reacie+ GLOH, JL-, L<J$-. <oncentraia acestor substane ncrcate electric a fost uor de msurat cu 6S . 7ceast clas tran!istoarelor ?io-= 5, ce utili!ea! o membran en!imatic receptiv pentru ionii de analit ,amoniu, n ca!ul de fa. poart numele de E%-'E( (E%zime-'E()& n!ima receptoare - urea! - se depune fie pe capacitoare 8JS cu straturi de 6rS1d, fie n poarta tran!istorului peste un strat de Si $GO. Dspunsul neliniar al unui astfel de sen!or va fi studiat n paragraful -#.>. ntrebare+ <are este diferena ntre 6S= 5 i G= 5 [ D\spuns+ Ba tran!istorul 6S= 5, metalul porii ,1t, 1d, 6r. este elementul receptor. l reacionea!\ electroc'imic cu ionii ,de LH, IH, <aH. i formea!\ la ec'ilibru termic un ]^material cu un alt =^^, conform relaiei lui Gerst. Variaiile de concentraie de analit ,ioni n ca!ul nostru. se traduc n variaii ale 8S. Ba tran!istoarele G= 5, pe metalul porii se depune o en!im\ receptoare ,de exemplu acetilcolinestera! - 7c<' .. a va favori!a 'idroli!a acetilcolinei n colin, acetat i L H. n urma reaciei re!ult - mol de LH per - mol de reactant de acetilcolin. G-= 5-urile sunt n ma2oritate sen!ori de metabolism, iar n ca!ul de fa se msoar concentraia ionilor de LH. 7cesta este rolul en!imei specifice 3 c accelerea! foarte mult o reacie catalitic ,'idroli!a n exemplul nostru., i se obin ioni de LH cu preponderen din 'idroli!a doar a analitului ,acetilcolin n exemplul nostru.. <oncentraia de analit se traduce n concentraie de sarcin\ acumulat\ n poarta tran!istorului i deci n variaii de curent prin tran!istor.

10.1.3. 7ptimiz%ri ale tranzistoarelor !io-F)(


S considerm un tran!istor ?io-= 5 care msoar concentraia ionilor de IH captai de o membran permeabil. 9e fapt este vorba de un tran!istor

86S-= 5 care are, n locul oxidului de poart, biolic'id ce conine ioni. Deceptorii se pot depune fie lng metalul porii, fie lng suprafaa semiconductorului, fie sunt dispersai n volumul respectiv. <nd biolic'idul curge prin acest spaiu, receptorii captea! ionii de IH ,n aceeai manier n care celulele vii rein analiii din snge, cnd acesta curge prin capilare foarte nguste.. 6onii se vor aglomera lng receptor.
sa IH IH IH IH IH IH # xF
I

Deceptor

Deceptori Deceptor sb IH IH IH x
M

sc

IH IH IH I IH IH IH I IH IH IH I # xF
I

IH IH IH # xF
I

,a.

,b.
H

,c.

Fig. 10.8. 9istribuia sarcinii ionice de analit ,I . captat de receptori ,liniile punctate. ce au fost plasai+ ,a. superior, ,b. inferior, ,c. uniform n volum.

8etalul porii deine un 8S cunoscut. Sarcina ionilor de potasiu, captai din lic'idul purttor de ctre receptor, polari!ea! poarta tran!istorului. 7celai lucru l fceau ionii de sodiu i potasiu n ca!ul tran!istoarelor 8JS, atunci cnd calculam tensiunea de ben!i netede. Se studia! n continuare po!iia de amplasare optim a unei membrane cu receptori n spaiul porii tran!istorului ?io-= 5, astfel nct efectul ionilor s fie ct mai puternic resimit la suprafaa semiconductorului, (*&). n figura -#.* sunt pre!entate trei variante de distribuie a sarcinii electrice ionice n dreptul porii tran!istorului, cnd receptorii sunt plasai+ superior ,la xR#., inferior ,la xRxF. i dispersai uniform n volumul porii ,ve!i i fig. -#.4..
F receptor curgere S Fig. 10.9. Structura ?io-= 5. nH :; ?iolic'id cu ioni :; :; receptor :; Metal # I!ol. ,?iolic'id. xF Semic.

9 nH

p-substrat

1rin integrarea ecuaiei 1oisson n spaiul x ,#, x F . , se calculea! tensiunea ec'ivalent indus pe poart de ctre ionii IH. Se aproximea! distribuia de sarcin ca fiind liniar n cele $ situaii. 9ac se notea! cu <F R isSxF capacitatea specific a i!olatorului de deasupra porii i cu sa, sb, sc, densitile de sarcin de suprafa n cele $ ca!uri ,ve!i fig. -#.*.a, b, c., se deduc urmtoarele expresii pentru tensiunea indus pe poart+
- - VFa = sa : VFb = sb : VFc = sc & <F $ <F <F

,-#.A.

Se poate presupune c saRsbRsc pentru receptori identici, ce atrag aceeai cantitate de analit la suprafa, indiferent de po!iie. En rspuns maxim se obine n ca!ul c. 9ac nu este posibil plasarea receptorilor uniform n volum, atunci preferabil este situaia b, adic plasarea receptorilor ct mai aproape de suprafaa semiconductorului.

10.3. !iodispozitive de tip 6)6&


Sunt biodispo!itive care combin structuri mecanice ,micropompe, actuatori. cu structuri microelectronice. n ca!ul Sistemelor 8icro- lectr8ecanice ,8 8S. problemele sunt legate de ve'icularea biolic'idului n spaiul porii tran!istorului. n mod clasic, acest lucru se face cu o micropomp$ cu membran i valve, acionat de un actuator, figura -#.>.a.
7ctuator 7ctuator deformat membrana n repaus 9ifu!or deformat membrana n repaus

Valva V<amera de admisie

Valva V" <amera de refulare

<onfu!or

<amera de admisie

<amera de refulare

,a.

,b.

Fig. 10.<. 8etode de ve'iculare a biolic'idului+ a. micropomp cu membran i valve: b. micropomp cu membran i difu!or-confu!or.

1rin actuator se nelege dispo!itiv de acionare. 1roiectarea actuatorilor se studia! la automati!ri. 9e!avanta2ele acestei micropompe sunt+ fiabilitatea sc!ut ,deoarece valvele fiind elemente n micare se pot bloca, defecta uor., posibilitatea deteriorrii unor componente biologice prin nc'iderea S desc'iderea valvelor. 9e aceea este preferat micropompa cu difuzor-confuzor din fig.-#.>.b, fr pri n micare, (**). ste adevrat c atunci cnd actuatorul ridic membrana, se absoarbe lic'id att prin difu!or din camera de admisie ,un flux mare., ct i prin confu!or din camera de refulare - fapt nedorit - ,dar un flux mic.. Jricum, marele avanta2 vine din simplitatea te'nologic+ microstructurile difu!or-confu!or se reali!ea! uor prin corodare ani!otrop a siliciului: n plus nu au pri n micare.
7ctuator Ffront

S
nH

oxid poart fa Si-film, p R membrana micropompei R corp tran!istor canal de inversie Jxid ngropat 8embrana cu Deceptori

9
nH

Si

IH

Si

Si, p

Si, p

Si, p

<amera de admisie ?iolic'id

FbacP

<amera de refulare ?iolic'id

Fig. 10.10. Structur ?io-= 5 cu tran!istor SJ6-8JS= 5.

n figura -#.-# este pre!entat o variant constructiv de tran!istor ?io= 5 pe structur SJ6 i alimentare prin micropomp cu difu!or-confu!or. =ilmul de siliciu repre!int sediul tran!istorului, dar i membrana pe care o acionea! actuatorul. lementul traductor din fig. -#.-# este un tran!istor SJ6-8JS= 5 clasic. 1entru a avea canalul de inversie ct mai aproape de membrana cu receptori, se recomand polari!area porii din spate, F bacP. 1oarta din fa, Ffront, poate fi utili!at doar pentru conexiunea mecanic cu actuatorul. 7nali!a fcut cu formulele ,-#.A. recomand plasarea membranei cu receptori pe partea inferioar a filmului de siliciu ,ct mai aproape de !ona activ a tran!istorului.. 8icrocanalele difu!or-confu!or au o form n trunc'i de piramid i se obin uor prin corodare ,spre exemplu pentru Si X---U, ung'iul de corodare este AO,*O #.. 8embrana cu receptori poate fi depus sub stratul ngropat. 7cest i!olator ngropat repre!int un excelent strat de stopare a corodrii siliciului. S
Si-film, n R membrana micropompei R R corp tran!istor canal de acumulare 8embrana Si Jxid ngropat cu Deceptori IH Si

Si, p

Si, p

Si, p

=amera de admisie !iolic2id

FbacP

=amera de re"ulare !iolic2id

Fig. 10.11. Structur SJ6-?io= 5 optimi!at.

5e'nologiile SJ6 permit reali!area unor filme de siliciu de grosimi variabile. le trebuie astfel proiectate nct s re!iste din punct de vedere

mecanic. 7ceasta deoarece din punct de vedere electric, se dorete un film ct mai subire pentru o sensibilitate maxim a sen!orului. ste nevoie ca traductorul s fie sensibil la tensiuni foarte mici ,proporionale cu concentraii mici de analit.. 9e aceea, se poate utili!a aici tran!istorul pseudo-8JS ca element traductor, deoarece are avanta2ul fa de tran!istorul SJ6-8JS= 5, c CsimteC tensiuni de poart n orice regim de lucru. 7stfel, se elimin o gri2 suplimentar+ aducerea tran!istorului n regim de inversie. 7vem urmtoarele simplificri te'nologice+ nu mai sunt necesare difu!iile nH n filmul de siliciu, nici depunerile de oxid i metal pentru poarta din fa, Ffront. 8ai putem face nc un pas n optimi!area structurii+ eliminarea actuatorului. l avea rolul de a ridica i cobor membrana de siliciu. 7celai efect l poate avea poarta din spate ,care ea nsi nu este mobil., dar acionea! un film de siliciu /suspendat0, care se poate arcui. Se pot adapta aici principiile de la tran!istorul 8JS cu poart mobil, dar avnd gri2 ca deformarea filmului de siliciu s nu duc la spargerea sa. 9e fapt, nu este nevoie de o deformare prea ampl a filmului. 8ici pulsuri negativepo!itive ,de cca 4V., aplicate pe FbacP, pot produce ncovoieri suficiente ale filmului pentru a recircula biolic'idul prin dreptul membranei cu receptori. =igura -#.--. pre!int structura optimi!at a SJ6-?io= 5. 1entru recircularea biolic'idului este necesar s se fixe!e V SRV9R#V, iar pe terminalul FbacP s se aplice ntr-un timp tr, pulsuri de tensiune de H4V i respectiv 34V. 7ceast manevr arcuiete n 2os filmul de siliciu la tensiuni po!itive, iar prin confu!or se elimin vec'iul fluid: apoi, la tensiuni negative, filmul se arcuiete n sus i prin difu!or se absoarbe noul fluid. 9up timpul de recirculare, tr, ,calculat din considerente de microfluidic. se poate presupune c s-a mprosptat tot biolic'idul n spaiul porii. Ermea! msurtorile electrice. 1entru msurarea concentraiei de analit captat n spaiul porii de ctre receptor, se monitori!ea! curentul de dren, 6 9. Se procedea! astfel+ se aplic tensiuni constante, de referin pe cele $ terminale+ VSR#, V9U#, VFbacPU#. n acest mod, tran!istorul pseudo-8JS este n regim de acumulare, unde curenii sunt mai mari i deci mai uor de msurat. Se las dispo!itivul n repaus un timp de captare, tc, ,calculat din considerente biologice+ captarea analitului pe receptor.. Se citete curentul 69. <u a2utorul acestui curent, dintr-o relaie de tipul ,-#.O. se calculea! concentraia de analit, c7.

10. 4. !iodispozitive pentru caracterizare

Spre deosebire de biosen!ori, care sunt biodispo!itive destinate determinrii concentraiei unui analit ntr-un amestec de substane, biodispo!itivele concepute pentru caracteri!area proprietilor fi!icoc'imice ale unor compui biologici pot msura alte mrimi dect concentraiile ,cureni, capaciti electrice.. 1rin msurtori polarografice se determin curentul n funcie de tensiunea aplicat pe biodispo!itiv. 9iferena dintre polarografia clasic, utili!at n c'imie, i cea aplicat aici const n faptul c biodispo!itivul lucrea! cu o cantitate mult mai mic de substane. Spre exemplu, dac ntr-o instalaie c'imic de polarografie se utili!ea! -##-A## ml soluie ntre doi electro!i metalici, la biodispo!itive cantitatea de soluie a2unge la #,--#,A ml. Eneori aceast cantitate infim de biolic'id este ncapsulat n cadrul unei structuri complexe pentru a evita evaporarea sau reaciile c'imice secundare nedorite. 7lteori este nc'is ntr-o cavitate ce comunic cu exteriorul sau cu un microre!ervor prin intermediul unei membrane semipermeabile. n fig.-#.-".a este pre!entat un biodispo!itiv pentru caracteri!area soluiei de epinefrin ,adrenalin. de concentraie - mgSml, de u! farmaceutic. 7ceast substan este un neurotransmitor ,sau un neuro'ormon. din familia catecolaminelor. 7mbele denumiri provin fie din latinescul /adrenes0 fie din grecescul /epi-nep'ros0 i nseamn literal acelai lucru+ /pe rinic'i0, sugernd prin aceasta, glanda suprarenal care secret acest neurotransmitor. 9in punct de vedere c'imic adrenalina, <>L-$GJ$, conine un lan aromatic ,/catecol0., la care se leag un grup ce conine nitrogen ,/amina0., fig.-#.-".b.

,a.

,b.

Fig.10.12. Structura biodispo!itivului, ,b. formula c'imic a epinefrinei ca ion.

<ei doi electro!i metalici, 8et- i 8et", au fost denumii surs i dren ,notai S i 9., iar tensiunea pe biodispo!itiv a fost notat cu V 9S. Volumul de biolic'id utili!at a fost de aproximativ #," ml ,- pictur., iar distana dintre electro!i dR-mm. 6!olatorul - a fost plexiglassul, iar i!olatorul " aerul. <ei doi electro!i metalici au fost reali!ai din alia2ul Sn &# 1b$4 <u " 6SJ 3 >OA$ ,"A., (*4).

n figura -#.-$ sunt pre!entate re!ultatele experimentale. ?iodispo!itivul nseriat cu o re!isten de valoare mare, DR--# P_, a fost alimentat la o surs de tensiune ES. n figura -#.-$.a sunt pre!entate re!ultatele msurtorilor n curent continuu, sub forma caracteristicilor 6 9 3 V9S. 7pariia regiunilor cu re!isten diferenial negativ demonstrea! amorsarea unei surse interne de tensiune invers, ba!at pe reacia electroc'imic de reducere a adrenalin`uinonei n adrenalin, (*>)+

1e poriuni, caracteristica poate fi modelat cu relaia ?utler 3 Volmer, dac predominant este procesul de electrod sau cu legile de difu!ie ale lui =icP, dac predominant este procesul de difu!ie a ionilor de analit. Jricum ambele relaii descriu dependene neliniare, exponeniale pe poriuni ale caracteristicii statice a biodispo!itivului, care prin logaritmare dau relaia 5afel de legtur dintre curent i potenialul pe dispo!itiv+
ln 6 9 ln 6 # + ! ` V9S P5

,-#.&.

unde+ 69 este curentul prin biodispo!itiv, V9S 3 tensiunea ntre Surs i 9ren, a,#,-. este coeficientul de transfer, ` 3 sarcina electric elementar, ! 3 numrul de electroni sc'imbai n reacia de oxido 3 reducere ,! R " n ca!ul de fa., P 3 constanta lui ?olt!mann, 6 # 3 curentul de saturaie pentru reacia de oxido-reducere, sau curentul limit pentru procesul de difu!ie ,ce depinde de constanta de difu!ie a moleculei de epinefrin.. 1resupunnd procesul redox predominant, se poate determina rata reaciei de oxidare a adrenalinei, I7drH , din relaia, (&")+

350 NaCl 300 Curent [uA], (Adr1, NaCl) 250

Adr1

25 Adr2
!en iune ur a " ( V )

20

20 15 10 5 0 0 1 Potential, [ V ] 2

1500 1000
10

150 100 50 0

Curent [uA], (Adr2)

200

500 0
0

-500 400 timp ( ) 900

-100

Fig. 10.13. ,a. <aracteristicile 69 -V9S ale biodispo!itivului cu " terminale n curent continuu: ,b. <urbele de comutaie.
6 # = = ! I 7dr (c 7dr + )

,-#.*.

Ba nivelul sinapsei neuronale aceti neurotransmitori asigur transmiterea impulsului nervos ,care este o supratensiune de la -$#mV la *#mV.. 7adar, fi!iologic predomin un regim de comutaie. 9e aceea, n fig.-#.-$.b au fost studiate curbele V9S 3 timp n regim de comutaie pentru dou biolic'ide+ soluii apoase de adrenalin ,ca! n care V 9S s-a notat cu Eadren. i de Ga<l cu aceeai concentraie de -mgSml ,ca! n care V 9S s-a notat cu EGa<l n figura -#.-$.b.. 7drenalina este mult mai sensibil la variaii de tensiune electric dect clorura de sodiu. 7stfel, se observ n fig.-#.-$.b c atunci cnd tensiunea sursei externe ES a comutat de la #V la "V, tensiunea pe biodispo!itivul cu soluie de adrenalin a atins $"#mV, n timp ce tensiunea pe biodispo!itivul cu soluie de Ga<l a atins doar >#mV, (*>). Semiconductoarele organice tind s nlocuiasc clasicele 2onciuni pn pe Siliciu, n msura n care pre!int conducie electric neliniar. ?iolic'idele i n special cele utili!ate de sistemul nervos n propagarea influxului nervos pot fi candidai demni de luat n seam, aa cum re!ult experimental. ntruct n biodispo!itive conducia electric prin soluie este i ionic i electronic, se poate pune problema obinerii unor separri de sarcini prin aciunea unui al treilea electrod.

!en iune #iodi po$iti% ( m V )

" (V) " adren& " NaCl

2000

20 -20 0 * d ( u A. )

V)(V) 10 20
Vd+1V Vd+2V

30

-(0

-100

8et$

-140

-1'0

,a. ,b. Fig.10.11. ,a. Structura biodispo!itivului de test cu trei terminale: ,b. caracteristica 69 3 VFS n curent continuu.

n fig.-#.-O.a este pre!entat un biodispo!itiv de caracteri!are cu trei terminale ce utili!ea! aceleai materiale ca i cel anterior pre!entat. 8etalul de poart 8et $ a fost 7l plasat pe spatele i!olatorului-, iar biolic'idul soluie de epinefrin -mgSml. n fig. -#.-O.b sunt pre!entate curbe 69 3 VFS msurate la tensiunile V9SR -V, "V. Biniaritatea acestor curbe n gama de msur abordat, infirm instalarea unor canale de inversieSacumulare: dar de!alinierea lor pentru cele dou valori distincte ale lui V9S probea! experimental c al treilea terminal influenea! curentul prin biodispo!itiv, probabil datorit segregrii ionilor po!itivi i negativi care circul prin soluia lic'id.

10.8. !iodispozitive pentru "urnizarea de substan#e active


5oate biodispo!itivele utili!ate ca prote!e auditive, ca implant sub-retinal, biostimulatoare cardiace, detectoare de uree 3 declanatoare de diali!, detectoare de gluco! 3 declanatoare de insulin, micropompe de do!areSmicrodo!are de medicamente repre!int cteva exemple de biodispo!itive concepute n scopul substituirii unor deficiene organice. 9e cele mai multe ori ele includ un sistem de biosen!ori multifuncionali, integrat cu circuitul electronic de prelucrare ntr-un biocip, sau structuri 8 8S obinute prin micro ori nanote'nologii. n pre!ent, convergena dintre tiina materialelor biocompatibile i microte'nologii au direcionat aceste biodispo!itive spre aplicaii in vivo. 7a au aprut biodispo!itivele implantabile n esut, oferind platforme pentru terapeutic, precum livrare de substane active la momentul oportun.

n fig.-#.-A este pre!entat un biodispo!itiv implantabil pentru furni!area insulinei. l face parte dintr-o clasa mai larg, ba!at pe aa numitele biomicrocapsule, care au scopul de a asigura un spaiu sigur pentru o specie de celule nc'ise ntr-o cavitate i plasate n interiorul unui organism ga!d. Se creea! o camer imunoi!olant repre!entat de dou membrane semipermeabile, care s permit sc'imbul de nutrieni cu exteriorul. Ermea! nc'iderea camerei dup introducerea celulelor. 8aterialele membranei trebuie s asigure o funcionare normal a celulelor ncapsulate, fr s permit recunoaterea lor din partea corpului, deci evitarea funciilor de respingere. 9in punct de vedere te'nologic se pornete de la corodarea ani!otrop a dou plac'ete de siliciu pn la obinerea unor membrane subiri cu grosimi de circa -# bm. 7ceste membrane sunt poro!ificate astfel nct se obin microcanale cu lungimi ntre &-> bm i diametre nanometrice. Se creea! camera imunoi!olant. Se acoper marginile plac'etelor cu colagen sau albumin seric, se introduc celulele n cavitate i apoi se lipesc plac'etele de siliciu, nc'i!nd camera. 8embranele semipermeabile din Si poros permit celulelor s funcione!e normal ,absorb nutrieni din exterior i furni!ea! insulin prin membrana poroas., fig.-#.-A, (4#). S-a demonstrat c celulele productoare de insulin au o viabilitate de aproximativ 4 !ile pe substrat de Si poros, dar pre!int o proliferare superioar n aceste 4 !ile pe Si poros fa de substratul de latex, clasic utili!at n bioc'imie, (4-).

Fig.10.13. 9ispo!itiv de furni!are a insulinei prin ncapsularea celulelor secretoare de insulin ntre dou membrane de Si-poros.

10.9. !iodispozitive pentru prelevare individual% a celulelor vii


1rincipiile de funcionare ale acestor biodispo!itive sunt ba!ate pe legi fi!ice, c'imice i biologice n general. 9ar fabricaia lor este posibil doar prin utili!area micro i nanote'nologiilor. 7cesta a fost motivul esenial, pentru care de!voltarea acestor biodispo!itive a putut fi pus n practic mai mult de ctre ingineri microelectroniti dect de ctre biologi. 1. !iodispozitive pentru ncapsulare individual% a celulelor vii n acest domeniu s-a cutat un material suport, biocompatibil cu celulele vii, prelucrabil prin metode 8 8SSG 8S, pentru a furni!a locauri individuale pentru celule. J celul i!olat n aceast capsul poate fi alimentat cu nutrieni, iar n final i se pot msura unii parametri biologici precum+ ratele de asimilaieSde!asimilaie, timpul de via, proliferarea. Enul dintre mediile de implantare unicelular a fost siliciul nanoporos cu pori de dimensiuni cuprinse ntre * i O>nm, (4-, 4"). <elulele depuse pe acest substrat au fost celulele secretoare de insulin ,insulinome.. n paralel s-a studiat comportamentul acestor celule pe suporturi binecunoscute n biologie+ ,a. suport din latex i ,b. suport dintr-un material de referin ,/petri dis'es0.. 9up 4 !ile, procenta2ul de supravieiure al celulelor insulinome a fost cuprins ntre >#--##% pe materialul de referin, dar i pe membrana de siliciu poros, iar pe membrana de latex de doar *#%. 9up O !ile proliferarea celulelor insulinome a fost de acelai ordin de mrime, Ac-#AceluleSml, pe membranele de Si-poros i de /petri dis'es0 i mult mai mic pe suportul de latex, "c-#OceluleSml. 9up nc O !ile ,deci 4 !ile n total., proliferarea pe suportul de referin a a2uns la O,Ac-#&celuleSml, pe Si-poros a a2uns la "c-#&celuleSml, iar pe latex a a2uns doar la ","c-#OceluleSml, (4-). Ermtorul pas a fost cutarea unor substraturi cu microcapsule, cu a2utorul crora s se studie!e in vitro celulele vii, meninndu-le aceeai stare morfofuncional ca n mediul in vivo. 7u fost studiate trei tipuri de substraturi+ ,a. siliciu, ,b. strat de 7u depus peste Si, ,c. sticl, toate cu forme ce mimea! /cuiburile0 in vivo, n care cresc celulele eucariote. n cele $ substraturi s-au reali!at microcaviti de --O#bm prin te'nici de corodare ani!otrop, (4$).

8embrana <itoplasma Gucleu

Fig.10.14. <omportarea celulelor pe substrat de Siliciu.

S-au folosit mti 'exagonale, ptrate i circulare pentru creearea unor capsule cu diverse forme. <elulele au fost plasate n caviti i introduse ntr-un incubator, unde au fost alimentate cu nutrieni, astfel nct condiiile lor de via s fie ct mai apropiate de cele in vivo. <elulele depuse n aceste mirocaviti au fost celulele fibroblaste dermice, prelevate prin biopsia pielii, (4$). xperienele au demonstrat c+ - celulele fibroblaste ader bine la toate cele $ materiale utili!ate: - comportamentul celulelor nu depinde de forma capsulei ,'axagonal, circular, etc..: celulele caut s ia forma capsulei: - comportamentul celulelor n timp a dovedit ns o dependen de materialul substratului. <ultura de fibroblaste s-a nmulit i a supravieiut cel mai mult pe suportul de sticl: - prin microscopie optic s-a observat c 'istologia ,structura. membranar i citoplasmatic a celulei a fost identic cu cea observat la culturile aflate pe materialul de referin /petri dis'es0: - tendina general a celulelor a fost s ias puin din alveole pentru a genera un film coerent peste substrat: n special !ona celulei ce coninea nucleii se bomba deasupra substratului. 2. 6icro 'i nano instrumente de manevrare celular% n acest scop au fost mprumutate o serie de dispo!itive din diverse domenii i adaptate, miniaturi!ate pentru scopuri biologice+ micropompe cu difu!orSconfu!or (**), microdo!e, microgrippere mecanice (4O), micropipete (4A), pulsuri laser pentru aducereaSeliminarea celulelor din microcaviti (4&).

Fig. 10.18. Seciune transversal printr-un microgripper tactil.

Fripperele sunt instrumente de manevrare i asamblare utili!ate n te'nic. )icrogripperele utili!ate n domeniul biologic trebuie s manipule!e materiale de dimensiuni micronice sau submicronice. n aceste ca!uri actuarea se face utili!nd fore electrostatice sau pie!oelectrice, care erau inutili!abile la scar macroscopic. 7dugnd sistemului micromecanic un sen!or pie!oelectric, ce sesi!ea! /atingerea0 i eventual o microcamer de luat vederi, se poate obine un microgripper ca n figura -#.-*, care nu numai c manevrea! microelementele, dar i /pipie0 i /vede0, (4O). 1rincipiul de funcionare al actuatorului bio-termic se ba!ea! pe coeficienii de dilatare diferii ai aluminiului i siliciului. <nd structura este ncl!it consola se ncovoaie. 9atorit sen!orului pie!ore!istiv incorporat, re!istena electric a stratului de siliciu este puternic dependent de stresul mecanic. 7stfel, fora tactil mecanic este /citit0 cu uurin, graie unei puni d'eatstone integrat n consol. 9e asemenea au fost mprumutate din electroc'imie te'nici de separare a unor componente celulare+ electroforeza, electroosmoza, dielectroforeza, (4*). 1roteinele sunt formaiuni globulare aran2ate n aa manier nct !onele 'odrofobe sunt orientate spre interior, iar !onele 'idrofile sunt n contact direct cu mediul apos exterior. 9e asemenea, aran2amentul gruprilor acide i ba!ice ale proteinei este puternic influenat i de pL-ul mediului exterior, adic de concentraia ionilor de LH. 5oate aceste considerente duc la modelarea globular a proteinelor. Banul proteic are diverse dimensiuni i diverse ncrcturi electrice. lectrofore!a proteinelor este influenat de sarcina electric, de dimensiuni, de solubilitate i de activitatea biologic, fig.-#.-4.a, (4*). 8obilitatea b, se definete similar, ca fiind raportul dintre vite!a unui segment proteic v, per intensitatea cmpului electric aplicat din exterior, , deducndu-se formula+

e R vS R fSg&,. rh

,-#.4.

unde se poate constata c mobilitatea crete cu sarcina global f, i scade cu ra!a r a proteinei globulare, depin!nd de asemenea de coeficientul de vsco!itate i. <a aplicaie la acest studiu se poate observa electrofore!a 7cidului 9e!oxiribo Gucleic ,79G. n fig.-#.-4.b.

,a.

,b.

Fig. 10.19. ,a. lectrofore!a unui lan proteic este influenat i de ncrctura electric a segmentelor proteice, dar i de masa lor: ,b. exemplu 3 electrofore!a 79G-ului.

)icropipetele sunt alte intrumente clasice miniaturi!ate, fig.-#.->.

Fig. 10.1<. 8icropipete+ ,a. de dimensiunea firului de pr: ,b. pentru manevrri ale organitelor celulare

1entru a manevra membrana unei celule vii, se utili!ea! o micropipet ca n fig. -#.->.b. 9up o ncl!ire bine controlat a unui tub capilar de sticl sau cuar cu diametrul de aproximativ - bm se plasea! pe membran. 9up rcire, prin conracia aerului din capilar se poate trage de celul. 1entru a msura activitatea celular a celulelor miocite prelevate de la broasc, cercettorii au utili!at o micropipet ca n figura -#."#, (4*). ste necesar un contact foarte bun pipet-celul pentru msurtori corecte ,spre exemplu msurtori ale desc'iderii canalelor ionofore de pe pereii celulari.. 7cest contact este obinut prin suciune, cnd celula miocit ,pre!entat n stnga. este prins de pipet.

Fig. 10.20. 8icropipete ce acionea! asupra membranei unei celule miocite.

10.<. *naliza r%spunsurilor neliniare ale biosenzorilor


9eoarece biosen!orii conin elemente traductoare active n combinaie cu receptori biologici, este de ateptat ca rspunsul lor s fie neliniar. n figura -#."-. este pre!entat rspunsul tensiune - concentraie de uree a unui sen!or cu 6rS1d pe capacitor 8JS, raportat de din`uist n ->4A, (44). 7nalitul msurat aici este ureea sangvin. Se observ c rspunsul sen!orului pre!int o pant de aproximativ #,*mVSmolSl ntre -..."#molSl concentraie de analit. Ba concentraii mari de uree se constat o drastic scdere a sensibilitii sen!orului ,explicat prin creterea pL-ului n stratul de receptori en!imatici.. ntruct nsi productorii acestui sen!or constat comportri diferite la nivele CmariC i nivele CmiciC ale concentraiei de analit, ar fi de dorit+ -. modelarea acestui rspuns neliniar: ". stabilirea unei granie ,unei concentraii de prag. ntre cele dou nivele. 1entru a nu fi tributari nici unei convenii, cea mai general metod, pentru aflarea concentraiei de prag, ar fi aplicarea teoremei conduciei electrice neliniare.

35 Te ns iune ( m V ) 30 25 20 15 10 5 0 0 50 100 150 200 250 300 Conce ntratie ure e (um ol / l ) V,e-perim& V,analiti.

Fig. 10.21. 9ependena experimental tensiune-concentraie de uree ,dup din`uist (44).: alegerea unui model analitic prin metoda celor mai mici ptrate ,curba punctat..

n acest scop, pentru rspunsul experimental din fig. -#."-, a fost ales ca model de fitare relaia ,".4-.+
V , c. = a c - + c

, cU#

,-#.>.

unde V este tensiunea msurat, c - concentraia de analit ,uree., - are semnificaia unui factor de atenuare a sensibilitii la nivele mari ale concentraiei de analit, - un parametru ce caracteri!ea! neliniaritatea receptorului i a - un factor ce caracteri!ea! nivelele mici ale concentraiei de analit. Jbservaie+ <urba experimental din figura -#.-& a fost trasat prin interpolare ,cu funcii splain de gradul 6., iar curba analitic a fost trasat prin metoda curbelor de regresie, adoptnd criteriul celor mai mici ptrate. ntrebare+ n ce const interpolarea i n ce const metoda curbelor de regresie[ <nd se folosete fiecare metod pentru trasarea unei curbe[ 6ndicaie+ Interpolarea trasea! graficul funciei prin punctele date, dar ne /forea! mna0 la anumite forme standard pentru funcie. *egresia trasea! graficul printre punctele date i putem alege noi modelul funciei. 7legnd un criteriu de regresie ,spre exemplu metoda celor mai mici ptrate., obinem parametrii modelului ales de noi. 9in criteriile de regresie ale curbei analitice au re!ultat urmtoarele valori pentru parametrii de model+ aR#,>AmVS molSl, R#,#>4,molSl.-#,*4, R#,*4. 9eoarece modelul ,-#.>. ales pentru rspunsul biosen!orului se supune condiiilor 5< G ,ve!i clasa acestor funcii pre!entate n paragraful

".*. se poate aplica direct re!ultatul ,".4A. pentru determinarea concentraiei de prag+
- c5 =
-S

,-#.-#.

De!ult c5R->,#-*-*molSl. 7flarea unei granie c5, poate fi un avanta2 pentru descompunerea domeniului de msur n dou game+ una cu sensibiliti mari ,pentru cXc5. i una cu sensibiliti mici ,pentru cUc5.. n figura -#."" sunt pre!entate rspunsurile curent-concentraie de Jxigen nregistrate de un 8icrobial-= 5 ce conine microorganisme productoare de oxigen+ ?acillus Subtilis i 5ric'osporon <utaneum, (4>).
600 1400

500

1200

1000 400

Curent *d ( n A )

800

Curent *d ( nA )

I(nA) Bacillus Subtillis 300 I calc(nA) Bacillus Subtillis 200

600 Imas(nA) Trichosporon cutaneum 400 Icalc(nA) Trichosporon cutaneum

100 200

0 0 50 100 150 200 250

0 0 50 100 150 200 250

m)

/20l

m)

/20l

,b. ,a. Fig. 10.22. <urbe experimentale i analitice pentru rspunsul unui microbial-= 5+ ,a. necesar depistrii ?acillus S.: ,b. necesar depistrii 5ric'osporon <.

<elulele de ?acillus S. i 5ric'osporon <. au fost fixate cu un strat de nitrocelulo! n poarta tran!istorului. 7ceste microorganisme au fost puse n contact cu o soluie coninnd gluco!. 1rin metabolismul lor, ele au generat oxigen, a crui cantitate a fost msurat. S-a adoptat tot modelul analitic ,-#.>.. 7u re!ultat urmtorii parametri de model de fitare+ 1entru ?acillus S. + aR-4n7Smg, R",4j-#-",mgSl.--, R-. 1entru 5ric'osporon <.+ aR-An7Smg, R>,>j-#-$,mgSl.-#,>O, R#,>O.

1rin aplicarea re!ultatului ,".4A. au re!ultat conform 5< G urmtoarele concentraii de prag+ c5-?acillusSR$A,*-mgJ"Sl, c5-5ric'osporon<R-$A,&-mgJ"Sl. 7ceste exemple vor s arate c teorema conduciei electrice neliniare poate fi aplicat i n ca!ul biosen!orilor. Valorile concentraiilor de prag ce re!ult din aceast teorem pot repre!enta granie utile, ce despart domeniile de msur n dou game - cu sensibilitate mare i cu sensibilitate mic.

10.<. Perspective de cercetare n domeniul bioelectronicii


J direcie vi!ea! continuarea combinaiei de succes dintre biotehnologie +i microelectronic$. Se urmrete integrarea pe acelai cip a biosen!orului i a sistemului digital de prelucrare a semnalului. Scopul ar fi obinerea unor actuatoare integrate complet i controlate de nivelul analitului n snge. S-ar putea reali!a actuatoare, care s furni!e!e automat anumite medicamente n snge, sau micropompe de declanare a diali!ei, ("). J alt direcie de cercetare se ba!ea! pe observaia fcut de Sc'eller (") n legtur cu procesarea de semnal fcut la nivel en!imatic. xist dou tipuri distincte de en!ime ce pot reali!a suma matematic a semnalelor generate de doi sen!ori distinci ("). 9e asemenea, s-a reali!at diferena i produsul de convoluie a dou semnale cu a2utorul a dou en!ime distincte. 9ac acest lucru va fi fcut n viitor la o scal mic de integrare i cu o vite! de rspuns superioar circuitelor digitale, vom asista n viitor la de!voltarea biocalculatoarelor. )odelarea r$spunsurilor biosenzorilor pre!entat aici este doar o provocare. 9ac un biosen!or are un comportament neliniar, cu att mai mult un organism viu are. 8odelarea rspunsurilor n lumea biologic i n special n medicin este un teren neatins nc. Etilitatea lor ar fi imens. En exemplu+ medicul anali!ea! rspunsul unui electrocardiograf doar calitativ. 7cest rspuns s-ar putea modela cu parametri ce ar indica elasticitatea vaselor de snge, timpi de comutaie, amplitudini - parametri ce ar putea duce la un diagnostic optimi!at. ,plicaii ale (-E% sunt interesante mai ales n anali!a rspunsurilor lumii vii. Spre exemplu, do!area medicamentelor ar putea fi fcut pe ba!a stabilirii concentraiei de prag. Jrganismul uman pre!int o anumit reactivitate biologic la un medicament. 9ac se administrea! n concentraii prea mici, organismul nu CsimteC nimic. 1este o do! CpragC

reactivitatea ncepe s se fac simit. n viitor s-ar putea dovedi o reactivitate c'iar i sub prag. 1arial s-a demonstrat acest lucru. Sc!nd concentraia medicamentului foarte mult, s-a a2uns la stabilirea unor diluii foarte nalte ,'omeopatice., la care reactivitatea organismului crete din nou. 7ceste concentraii, sau n cellalt ca!, diluii prag, ale unor medicamente, ar putea fi extrase cu 5< G. 9e!voltri n direcia electrofiziologiei& 1roprietile fundamentale ale neuronilor constau n generarea i conducerea impulsurilor electrice nervoase. En stimul cu intensitatea sub prag nu se propag. 7semnarea conduciei electrice intraneuronale cu dispo!itivele 8JS este frapant. ntre doi neuroni conducia se face prin intermediul mediatorilor c'imici i a neurotransmitorilor ,substane ca acetilcolina, dopamina etc.. 6at de ce aceste substane sunt att de intens cercetate cu a2utorul biosen!orilor. 9ar nu numai neuronii, ci toate celulele au comportamente electrice+ conducia prin canalele ionofore, ncrctura electric a mediului micelar, electrofore!a proteinelor sunt doar cteva exemple. 9e asemenea, deosebit de interesant ar fi modelarea n domeniul electronicii celulare i a transmiterii semnalelor biologice. xist o transmisie la nivel intracelular ,prin mesagerii secun!i spre receptorii nucleari., o transmisie intercelular ,prin circulaia sangvin a analiilor. i apoi o transmisie global ntre organe. lectrofi!iologii au avansat mult n ultimele decenii, reuind prin observaii directe s explice unele fenomene electrice ce apar n funcionarea celulelor. ki instrumentele puse la dispo!iie de nanote'nologii i-au a2utat. ns ceea ce lipsete n acest domeniu este modelarea. J stpnire cantitativ$ a fenomenului la nivel celular i apoi global, ar fi c'eia unei medicini moderne. ste de ateptat ca aceast modelare s fie extrem de dificil, ntruct organismul are diverse metode de adaptare printr-un numr extrem de mare de feed-bacPuri. 9e aceea ele trebuie s debute!e treptat+ mai nti la nivel celular i n cele din urm la nivelul ansamblului organismului viu. 1rerea personal a autorului acestei cri este c n viitor vom asista la o convergen a tiinelor ntr-un mod surprin!tor. 9ac n trecut, materia acestei lumi a fost studiat din ung'iul c'imistului, al fi!icianului, al biologului, al electronistului, ast!i asistm la o superspeciali!are pe domenii extrem de nguste+ electroniti speciali!ai doar pe tran!istoare S 5, sau doar pe nanotuburi de carbon, ori biologi care studia! doar un anumit organit celular. 6ronia soartei este c electronistul care aprofundea! mult nanotuburile le redescoper printre proteinele din canalele ionofore celulare, iar biologii sunt forai s dea explicaii despre fenomene electrice

celulare. 1robabil c doar conlucrarea acestor cercettori va asigura succesul n viitor.